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PRODUCCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DE JUGO DE CAÑA DE

AZUCAR MEDIANTE FERMENTACION CON Saccharomyces cerevisiae

Mayerlis Inés Arias Tarco1, Luis Fernando Díaz Cuadro2, Iván David Galván
Rincón3, José Alberto García Camargo4, Jeisson García Ospina5, Geraldin García
Vega6, Carlos Javier Iseda Yerena7, Francisco Mendoza Amaya8

DOCENTE: Juan Guillermo Reales Alfaro*
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 Estudiantes de Ingeniería Agroindustrial
* Ingeniero Agroindustrial. Msc. Ciencias Farmacéuticas.

1. RESUMEN
Se desarrolló un procedimiento para efectuar la fermentación alcohólica de azucares
derivados del jugo de caña de azúcar filtrado , utilizando la levadura Saccharomyces
Cerevisiae, Se establecieron las condiciones iniciales de operación a nivel de
laboratorio donde el análisis de regresión aplicado a la eficiencia del proceso mostro
que una concentración en el entorno de 0.751g/l de azucares reductores, pH 4.48,
12.3ºBrix, 38ºC de temperatura, concentración de levadura 1g/L, 400rpm; en un
intervalo de 45 horas, suplementado con pequeñas cantidades de fosfato diácico de
potasio (KH2PO4), 1g/L, sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4*7H20), 0,5 g/L y
glucosa (C6H1206) 10g/L, se obtuvo un jugo de caña fermentado con un grado
alcohólico de 5%v/v.
Palabras Clave: Bioetanol, caña de azúcar, Saccharomyces Cerevisiae, azucares
reductores, fermentación.

ABSTRACT
A procedure was developed to make the alcoholic fermentation of sugars derived from
cane juice sugar filtering using yeast Saccharomyces cerevisiae, the initial conditions
of operation were established in the laboratory where the regression analysis applied to
the efficiency of the process showed that a concentration in the environment 0.751g / l
of reducing sugars, pH 4.48, 12.3ºBrix, temperature 38°C, yeast concentration 1g / L,
400rpm; at an interval of 45 hours, supplemented with diacid small amounts of
potassium phosphate (KH2PO4), 1g/L, magnesium heptahydrate (MgSO4*7H20) sulfate,
0.5g/L and glucose (C6H1206) 10g/L, is obtained a fermented cane juice with an alcohol
content of 5%v/v.
Keywords: bioethanol, sugar cane, Saccharomyces cerevisiae, reducing sugars,
fermentation.

el desarrollo de Clústers Energéticos orientados hacia el desarrollo sostenible. Es justamente por esta situación que el debate ha sobrepasado el ámbito ambiental y científico y ha llegado a contextos políticos. que sea una Hexosa. es hoy una razón primordial para que el mundo moderno se oriente al desarrollo de métodos y prácticas mucho más amigables con el medio ambiente y. con reemplazo de un 20% para el 2010 (Rodríguez. dióxido de carbono (CO2) en forma de gas y unas moléculas de ATP que consumen los propios microorganismos en su metabolismo celular energético anaeróbico. el cava. como es el caso del bioetanol. 2009). Vázquez. sociales. que permiten superar los desajustes provocados por los métodos tradicionales y generar ventajas competitivas de la forma como lo plantea Porter (1998) en la industria de los combustibles. mientras que para otros es el . en diversos países. y mediante la ley 939 de 2004 la producción de biodiesel y bioetanol. 2010). Hooper & Li. la sidra.. El etanol resultante se emplea en la elaboración de algunas bebidas alcohólicas. es posible determinar qué tan competitiva y comercialmente atractiva puede llegar a ser esta industria. como el que plantea Michael Porter (1979). los cuales deben ser usados en una mezcla con gasolina. Ecuación de fermentación alcohólica de glucosa (Ward. J. el aumento de la demanda y la posibilidad de una oferta futura con menor producción (REN21. Orjuela. económicos y empresariales. está sujeto a una fuerte polémica: para unos se perfila como un recurso energético potencialmente sostenible que puede ofrecer ventajas medioambientales y económicas a largo plazo en contraposición a los combustibles fósiles. del rendimiento entre el combustible consumido y el generado en dicho proceso. Aunque en la actualidad se empieza a sintetizar también etanol mediante la fermentación a nivel industrial a gran escala para ser empleado como biocombustible (eBIO. et al. I. la cerveza. es decir.2.J. Este etanol. sirve con cualquier sustancia que tenga la forma empírica de la glucosa. tales como el vino. Figura 1. la fructosa. que se refleja en los altos costos del petróleo. INTRODUCCION La evidente incapacidad de un sistema energético basado en la energía fósil.P. la sacarosa. originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de carbono (por regla general azúcares: como por ejemplo la glucosa. Los logros y alcances que se han presentado en esos contextos han impulsado. para biodiesel y bioetanol respectivamente. 1996). 2006).1991) ???????? ?6 ?12 ?6 → 2?2 ?5 ?? + 2??2 El etanol es un combustible que puede producirse a partir de un gran número de plantas. etc. (H. 2006. 2007). Colombia regula a partir de la ley 693 de 2001 la producción de alcoholes carburantes y bioetanol. A través de modelos de análisis competitivo para sectores económicos o industriales específicos. a su vez. O. según el producto agrícola. Debido a ello se han creado varias plantas productoras de combustible usando como materias primas productos agrícolas. tales como palma africana y caña de azúcar.) para obtener como productos finales: un alcohol en forma de etanol (cuya fórmula química es: CH3-CH2-OH). con una variación. más flexibles y compatibles con las políticas de crecimiento industrial y económico de cada nación (Girard & Fallot. conocido como bioetanol. La fermentación alcohólica es un proceso biológico de fermentación en ausencia de oxígeno (figura 1).

Sistema de reacciones en la Glucólisis (Nielsen 2003) . mono y di sacáridos en su mayoría. es un proceso anaeróbico realizado por levaduras y algunas clases de bacterias. son transformados principalmente en alcohol etílico y dióxido de carbono. dudando además de su rentabilidad energética. La diferencia radica en su proceso de producción. La fermentación alcohólica. El bioetanol tiene las mismas características y composición química que el etanol ya que se trata del mismo compuesto. al suplantar selvas y terrenos agrícolas para su producción. no pudiendo obtenerse del petróleo. ATP (figura 2). Donde el sustrato celular.responsable de grandes deforestaciones y del aumento del precio de los alimentos. con la generación de equivalentes de reducción de los compuestos NADH/NAD+ y NADHP/NADP+ y enlaces de alta energía de fosfato. De este modo la fermentación complementa la glucólisis y hace posible producir energía en ausencia de oxígeno (Nielsen 2003) Figura 2. El bioetanol ha de ser obtenido desde biomasa. La energía se sintetiza como ATP a partir de un proceso de glicólisis al que sigue el metabolismo del piruvato.

et al. 0. Diaz.16.656 lts) del jugo se vertió en dos erlenmeyer de 1 lts c/u para su posterior esterilización.5 con HCL a 0.24. luego se inoculó 1g/L de levadura. 3. 2006) Imagen 1 adicionándose a este un enriquecimiento de fosfato diácico de potasio (KH2PO4). (Imagen 2) Imagen 2 3. Carrera. D. seguidamente enfriamos y transferimos el contenido de cada tubo a una celdilla por separado. 24.5 Fermentación Se vertió el contenido total del jugo al bioreactor donde se mantuvo la reacción fermentativa a 38ºC.36 y 0.28. 36 y 45 horas.4 Activacion de la levadura Saccharomyces cerevisiae Se calentó a 38ºC el contenido del erlenmeyer donde estaba el 10% del jugo. Y... 101ºC por 20 minutos. finalmente con el espectrofotómetro leímos las absorbancias de las muestras a 540 nm (Gil. pH 5.32. 0. 3.0. utilizando una bomba de vacío para una filtración eficiente. Se filtró el jugo con papel filtro. 0.20. 1g/L. en ausencia de oxígeno. luego se agregó el 10% (0. Se tomaron muestras en los siguientes intervalos: 1. se agitaron los tubos en el vortex.3. 0.1N. 0. E. el otro 90% (1. MATERIALES Y MÉTODOS 3.12. 0.40. comercializado en la ciudad de Valledupar con condiciones iniciales de °Brix 12. con agitación constante a 120rpm por 3 horas. 0. sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4*7H20).5 g/L y glucosa (C6H1206) 10g/L.1 Curva patrón de glucosa Se elaboró la solución patrón de glucosa a las siguientes concentraciones: 0. 0.2 Tratamiento del jugo de caña de azúcar Se utilizó jugo de caña de azúcar.04. 400rpm por 45 horas. los °Brix se mantuvieron igual.5 dinitrosalicílico). Luego se ajustó el pH a 4.08. 0.184 L) del volumen del jugo en un erlenmeyer. a los que se les midieron absorbancia con el espectrofotómetro para calcular el contenido de azucares reductores presentes (imagen 4).3%. a cada tubo se le agrego 1ml de reactivo DNS (ácido 3.3 Esterilización Se llevaron los erlenmeyers que contenían el jugo de caña herméticamente cerrados al autoclave donde se realizó la esterilización a 15 psi. después se llevaron a baño maría a una temperatura de 90ºC por 5 minutos (imagen 1). 3. Se dejó enfriar a temperatura ambiente. 0. Cuando el contenido de los azúcares reductores . luego se tomó 1ml de cada concentración en un tubo diferente.56.

2006) se observa que presentan el mismo comportamiento lineal ascendente de la absorbancia y la concentración de glucosa.2754x .05 0 -0. se suspendió el proceso de fermentación.15 0.2 0.0.4 0.9869 0. Datos para la construcción de la curva patrón Grafica 1. luego se introdujo el alcoholímetro.5 Absorbancia Confrontando la curva patrón de glucosa obtenida (Gráfica 1) con la curva patrón de glucosa en frio que presenta (Bello. .45 0. (Tabla 1). Imagen 4 3. 4.disminuyeron a casi cero. y = 0.35 [ ] glucosa (g/l) Se obtuvieron los siguientes datos de absorbancia para cada una de las diluciones de glucosa. con el cual se logró cuantificar el porcentaje de alcohol presente.05 0 0.6 Evaluación del grado de alcohol Se vertió un contenido final del jugo de caña fermentado en una probeta. Curva patrón de glucosa 0.5 1 1. 0002 R² = 0.1 Curva patrón Tabla 1.3 0.1 0. ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS 4.25 0.

(Ecuación 1) Utilizando la ecuación de la recta obtenida por la tendencia lineal de la curva de calibración observada en la (gráfica 1) y el valor de las absorbancias que se encuentran en la (Tabla 2) se llega a el valor de la concentración de azucares reductores (g/l) de la muestra del jugo de caña en la (Tabla 3): Ecuación 1. Datos de concentración de azucares reductores en g/l de las muestras de jugo de caña de azúcar.7 7.035 Tabla 3.4 Variación de los grados °Brix en función del tiempo para el proceso fermentativo Muestra Horas °Brix 1 2 3 4 5 0 1 24 36 45 12.2 La curva muestra que a través del tiempo los grados °Brix disminuyeron.21%. (Grafica 2) Absorbancia leída nm 1. ?? = ??. 4. g/l Grafica 2. Para determinar la conversión sustrato se tomaron de la (Tabla 3) datos de concentración inicial azucares reductores (S0) y la La conversión de sustrato obtenida a las 45 horas del proceso fue de 99.74702 11.3 Conversión de sustrato.3 11.4.9 5. Datos de absorbancia tomados para la muestra. Muestra de S0  S  100 S0 de los de la Concentración de azucares reductores en g/L Muestra Cs  azucares 140 120 100 80 60 40 20 0 0 20 40 60 tiempo (horas) 4.32648 10. S0 = [ ] Inicial de azucares reductores. Velocidad del consumo de sustrato Concentración de azucares reductores en g/L 121. ??% 1 2 3 4 5 Tiempo (hora) 0 1 24 36 45 1 2 3 4 5 Tiempo (hora) 0 1 24 36 45 Donde.2 Determinación de azúcares reductores en jugo de caña.334 93. g/l S = [ ] final de azucares reductores. concentración final de reductores (S). .47274 0.3 5.118 0.381 0.412 0.863 0.9539 Apartir de los datos obtenidos (tabla 3) podemos observar el descenso de la concentración de sustrato (azucares reductores) mediante la fermentación anaerobia causado por la Saccharomyces cerevisiae. % al final de una fermentación de 23 horas. Rendimiento conversión de sustrato Tabla 2.

es preferible conducir la propagación en un ambiente con exceso de azúcares de manera que las enzimas estén siempre presentes. 4 días después se descongelo y se midieron sus solidos solubles totales. A escala industrial afectará la explotación eficiente de los equipos instalados. Kargi F. et al. algunas de las enzimas involucradas en la ruta fermentativa son del tipo inducible y por tanto. . valor que se encuentra debajo de lo establecido estequiométricamente 0. La inoculación de la fermentación alcohólica requiere un paso previo de propagación celular bajo condiciones anaeróbicas. En otro estudio se obtuvieron rendimientos de 0. et al. esto pudo deberse a la presencia de alguna cepa de microorganismo capaz de degradar los sólidos solubles a bajas temperaturas.334 g/L. Sin embargo. Al iniciar el proceso el jugo de caña tuvo unos obrix de 20. 4. este se filtró y congelo sin pasteurizar. (Grafica 3) Grafica 3. estos descendieron a 12.. notamos que el mayor consumo de azucares reductores se presentó en el intervalo de 1-24 horas.5 Propagación de la levadura La inoculación de la fermentación alcohólica requiere un paso previo de propagación celular bajo condiciones anaeróbicas. Se obtuvo jugo de caña fermentado con 5%v/v de bioetanol.debido a la conversión de sustratos (azucares) a bioetanol. 5. 2014) ??/? = ? ???????? ? ???????? ??/? = 39.3. 4 2 0 0 20 40 60 Tiempo (horas) Los ºBrix iniciales del jugo antes de iniciar la fermentación fueron 20. 2001).45 = 0. 2001). se notó que hubo una disminución bastantemente notable con °Brix de 12. 4. Kargi F.3 en un peridodo de 96 horas cuando se dejó almacenado el jugo a 0ºC.32.. los cuales utilizo el microorganismo para su propagación y realizar el proceso fermentativo.32 121.5. 2014). por tanto. el cual se vio reflejado en el proceso de la obtención de bioetanol.02%v/v (Rocha J.5. 14 12 ºBrix 10 condiciones de anaerobiosis. el rendimiento del etanol fue bajo en comparación a otro estudio donde se reportan rendimientos de bioetanol de 10. esto pudo deberse a que en el jugo se encontraba .51 (Shuler M. El jugo de caña con el cual trabajamos tenía una concentración de azucares reductores de 121. su activación requerirá de cierto tiempo antes de alcanzar la concentración necesaria para una bioconversión eficiente de los azúcares en etanol bajo Ecuación 2.6 Rendimiento de bioetanol respecto a los azucares reductores 8 6 Para determinar el rendimiento del producto (yps) utilizamos la ecuación 2.334 El rendimiento fue del producto con base al contenido de sustratos fue de 0. Rendimiento del producto con respecto al sustrato (Shuler M.43 (Rocha J. CONCLUSIÓN En la realización de esta práctica se tuvieron algunos errores en la elaboración del proceso para obtener bioetanol.

8. Hooper. 10 2. Número 6. Global Status Report. Plenum Publishers. . Villadsen. A. DÍAZ Y.. 2Mayo-Agosto.21%. XL. marzo/abril. 9-11.5 dinitrosalicílico. REN21. Determinación de azúcares reductores totales en jugos mezclados de caña de azúcar utilizando el método del ácido 3.oa?id=2 23120664006 European Bioethanol Fuel Association (eBIO): World Biofuels 2006 . Porter. Girard.  Realizar las pruebas por duplicado para tener un mayor grado de confianza y aceptación en los datos. Free Press. H. M. los cuales consumieron parte del sustrato presente en el jugo.. 2009. M. 87 – 94. Fermentación alcohólica: Una opción para la producción de energía renovable a partir de desechos agrícolas". J. Review of existing and emerging technologies for the production of biofuels in developing countries.. Vázquez (2007). En: ICIDCA.J. The Competitive Advantage of Nations. a MSc. núm. Consultado en: abril 22-2015.org/articulo. Mayo 2006. El porcentaje de alcohol obtenido del jugo de caña durante el proceso de fermentación fue de 5%. CARRERA E.Seville. FUENTE BIBLIOGRAFICAS BELLO D. J. Determinación de azúcares reductores totales en jugos mezclados de caña de azúcar utilizando el método del ácido 3. 1996. Sobre los Derivados de la Caña de Azúcar. Carrera Bocourt.Biomass and Bioenergy. 469–474. & Fallot.  En caso de realizar destilación usar un método que ofrezca obtener etanol anhidro si su uso será como alcohol carburante. 98-108. G. P. Daniel.  Revisar fuentes bibliográficas donde se obtengan mejores rendimientos de bioetanol. 249-259.  Realizar la fermentación con un microorganismo que ofrezca mejor rendimiento y que consuma menos energía en su mantenimiento y propagación. & Li.. Juan Guillermo Reales por la colaboración y a los auxiliares del laboratorio de química. INGENIERÍA Investigación y Tecnología VIII.CIDI. 4. How competitive forces shape strategy. 1979. RECOMENDACIONES  Optimizar el proceso con cada una de las variables que intervienes que ofrezcan una mayor productividad. Díaz Maqueira. obtuvimos una muy buena degradación de los azucares reductores presentes. vol. de la Universidad Popular del Cesar. Renewable Energy Policy Network for the 21st Century. R. AGRADECIMIENTOS CENTRO DE INVESTIGACION PARA EL DESARROLLO DE LA INGENIERÍA.. Porter. Nielsen. Harvard Business Review. (2003). La conversión de sustrato a bioetanol en el jugo de caña fue del 99. 45-50. Energy for Sustainable Development. EUA.5 dinitrosalicílico.redalyc.. Volumen 2. Emilia.. Bioreaction engineering principles. Yuset (2006). 2006 Bello Gil. J. with a new introduction. Lidén.. Accessed June 2009. 2006. Summary of the factors critical to the commercial application of bioenergy technologies. 6. Disponible en: http://www. New York. 1998.alguna cepa de microorganismo resistentes a temperaturas muy bajas. para comparar luego con los resultados obtenidos. 7.

. Pearson Education.A... Panorama de las Políticas y leyes del gobierno frente a la producción de alimentos agropecuarios y de producción de agrocombustibles.P. S. 135 Ward. Vol. Edit. (2010). Acribia. Orjuela. Shuler Michael L. Zaragoza. 2. O. I. Kargi Fikret (2014) Bioprocess Engineering: Basic Concepts. Biotecnología de la fermentación. No 2. 84-98. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS. (1991). Rodríguez. Universidad Católica de Colombia.Rocha Trejo Juana Esther (2011). J. Pp. Producción de biocombustibles utilizando Spirulina sp como fuente de carbono. Estudios en derecho y gobierno.