Está en la página 1de 30

Comparación

microbiológica

PROYECTO
DE
INVESTIGACI
ÓN
CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

Estudio de la calidad del
agua en dos muestras
procedentes de facultades
de la Universidad Nacional
de Ingeniería (UNI).

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
TEMA:
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

TÍTULO:
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE LA CALIDAD DEL AGUA – ESTUDIO Y
COMPARACIÓN DE CALIDAD DE AGUA EN DOS MUESTRAS PROCEDENTES DE LA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA (UNI)

CURSO:
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

CÓDIGO:
BBO-112

INTEGRANTES:


CAHUANA JURO JOSÉ ANTONIO
DE LA CRUZ MENDOZA JUAN PABLO
PERALTA HUASASQUICHE MARÍA CAROLINA

DOCENTE:
MARTIN MARTÍNEZ

Control de calidad
Microbiológico del Agua

Contenido .

....................................................4 Introducción:........................................................................ 6 Materiales.............................. 7 Discusiones:.......................................... 7 Anexos:.......... 4 ¿Qué es la filtración por membrana?..............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................4 Queso.................................................................................................................................................................................. 7 Bibliografía:.............................................................. 7 Recomendaciones:................................................................ 7 Conclusiones:..........................9 ............................... 5 Objetivos:................................................................................................................................................................ 5 Numerosas ventajas.................................................................... 6 Fundamento Teórico:........................................................................... 6 Procedimiento Experimental:..................................................................................................................................................................................................................... 5 Leche microfiltrada............................................................................................................................ 6 Objetivos específicos:.................................4 Principales aplicaciones en alimentación.... 6 Objetivos generales:......................... Medios y Equipos:................................................................................... 6 Observaciones:.. 7 Resultados:..........Antecedentes: ………………………………………………………………………………………………………… ………………............................................ 7 Tablas: ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………8 Gráficos: ………………………………………………………………………………………………………… ………………………….............................

Con el fin de contribuir con los procesos de Mejoramiento de la Calidad del Laboratorio de Salud Pública en Huila y con el objetivo de iniciar un proceso de acreditación. Bogotá D. esta validación se denomina . Carrera de Microbiología Industrial. se realizó una validación secundaria de tipo concurrente del método de filtración por membrana para la detección de coliformes totales y Escherichia Coli en muestras de agua para consumo humano. ANTECEDENTES: VALIDACIÓN SECUNDARIA DEL MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA PARA LA DETECCIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y ESCHERICHIA COLI EN MUESTRAS DE AGUAS PARA CONSUMO HUMANO ANALIZADAS EN EL LABORATORIO DE SALUD PÚBLICA DEL HUILA. correspondiente al 5% de la concentración de la gran media y la exactitud se evaluó mediante la recuperación de una concentración conocida de Escherichia Coli en las dos muestras naturales. en donde cada lote era un día. analizando las siguientes soluciones en cada lote: 2 blancos. Al finalizar el estudio se comprobó que mediante la validación realizada se cumplieron con los dos parámetros evaluados.4C y 0.C. generando un alto grado de confianza en los resultados finales arrojados por el método válido. las cuales debían estar en el rango de meta a alcanzar.7C y 2 soluciones estándares. Con ella se determinan las posibles variaciones que se presentan entre diferentes números de ensayo y de esta manera disminuir las posibilidades de error dentro del método. Pontificia Universidad Javeriana. Al inicio del proceso de validación se revisó el historial de mantenimiento y calibración de los equipos para garantizar los procedimientos y resultados obtenidos siguiendo un diseño experimental establecido por el Instituto Nacional de Salud de Bogotá. Noviembre del 2008. en donde la cantidad de soluciones analizadas que conformaron el diseño experimental fue de 48. Facultad de Ciencias. La precisión del método fue evaluada con la aceptabilidad de las desviaciones estándares de cada solución. siendo su principal objetivo confirmar y documentar la confiabilidad de los resultados obtenidos.  VALIDACIÓN SECUNDARIA: Demostración por experimento que un método funciona de acuerdo con las especificaciones en las manos del usuario. la precisión y la exactitud. distribuidas en 6 lotes. 2 muestras naturales. de 8 soluciones cada una. El estudio se procesó durante seis días. 2 muestras más adición de 0. La validación de una técnica es el proceso por el cual se establece mediante estudios de requerimientos la aplicación analítica propuesta.

hasta su llegada al servicio domiciliario. 21-30. 2 No. de contaminación con organismos patógenos. Mauricio3. por tanto. los procesos realizados en esta. En Colombia el Decreto 1575 de 2007 del Ministerio de Protección Social. Bogotá D.C. 1. . Elincer1. establece el Sistema para la Protección y Control de la Calidad del Agua para Consumo Humano.P. Muñoz P. Vol. Corporación Universitaria Rafael Núñez. El agua para el consumo humano debe ser de excelente calidad. Elles N. La normativa colombiana a través de la resolución 2115 de 2007 estipula que al agua potable se debe investigar bacteriológicamente Coliformes totales y Escherichia Coli como indicadores de la calidad sanitaria. diciembre de 2010 pp. a través de la Resolución 2115 de 2007 estipula que en el agua potable se debe investigar bacteriológicamente Coliformes totales y Escherichia Coli como indicadores de la calidad sanitaria ya que su presencia en el agua se considera un índice evidente de la ocurrencia de polución fecal y. Coli por el método filtración de membrana. además. aplicando parámetros estadísticos (precisión e incertidumbre) con el fin de generar confiabilidad en los resultados que se emitan. por lo que los estudios de la bacteriología del agua se han orientado en su mayor parte hacia el aspecto sanitario de la misma. Mayra2.A E. el recorrido hasta la planta de tratamiento. VALIDACIÓN CONCURRENTE: La información requerida en este tipo de validación se obtiene durante la implementación del mismo. Raúl3. Mendoza A. antes de desarrollar una validación deberá evaluarse qué tipo de validación pueda dar mejor información sobre la seguridad y la estabilidad del proceso. las enfermedades de origen hídrico son frecuentes en los países en desarrollo.. Salcedo O. se debe tener en cuenta el monitoreo de en proceso de las variables críticas que demuestre que el proceso está bajo control y registro de datos sobre la marcha del proceso está en estado crítico.verificación la cual es la confirmación mediante el aporte de pruebas objetivas de que se han cumplido los requisitos establecidos. A pesar de ello. la cual inicia desde su origen natural. y por lo tanto. sin embrago cada aproximación tiene sus limitaciones.S. El objetivo de este trabajo es validar la técnica de recuento de coliformes totales y E. 1. VALIDACIÓN DE LA TÉCNICA DE RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES Y ESCHERICHIA COLI POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN DE MEMBRANA EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE AGUAS DE CARTAGENA S.

la separación precisa de partículas es cada vez más importante en la producción de cerveza. el procedimiento se realizó a partir de ensayos normalizados y protocolos de validación. los helados. la cerveza. la filtración por membrana es la tecnología más moderna para la clarificación. el procedimiento se realizó a partir de ensayos normalizados y protocolos de validación. La . la filtración por membrana es un buen ejemplo de tecnología simple y eficaz que se emplea para mejorar la calidad alimentaria y que tiene unas perspectivas de futuro excelentes. aplicar los diferentes parámetros estadísticos. Durante el proceso de fabricación del queso. etc.El estudio fue de tipo analítico. Asimismo. QUESO La ultrafiltración de la leche representa la primera innovación real en la historia de la elaboración del queso y ofrece ventajas considerables a fabricantes y consumidores. la mantequilla o algunas leches fermentadas.  INTRODUCCIÓN:  EL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA: En la industria de la alimentación y la bebida. algunos de los nutrientes presentes en la leche se pierden en el suero (carbohidratos. fraccionación (separación de componentes). Algunos ejemplos de productos finales en cuya elaboración se utiliza esta técnica son los zumos de fruta y verdura. concentración. El estudio fue de tipo analítico. como el de manzana o zanahoria. vitaminas solubles y minerales). los quesos (como el ricotta). el vino y la sidra sin alcohol. donde se estudiaron los factores que pudieran influir en los resultados y con base en ellos. PRINCIPALES APLICACIONES EN ALIMENTACIÓN En la industria de la alimentación y la bebida. la leche microfiltrada. Estas pérdidas tienen consecuencias económicas considerables que encarecen la operación de procesado. sin tener que recurrir a tratamientos térmicos. se aplica para aumentar la seguridad de algunos productos alimentarios. donde se estudiaron los factores que pudieran influir en los resultados y con base en ellos. desalación y purificación de toda una serie de bebidas. zumo de manzana y muchos productos lácteos. los productos lácteos desnatados o bajos en lactosa. aplicar los diferentes parámetros estadísticos.

mejora el control del proceso de producción y sus costes energéticos son reducidos. Dichas técnicas modifican algunas propiedades sensoriales de la leche como. Existe un desarrollo continuo de nuevas aplicaciones basadas en esta técnica. la tecnología de la filtración constituye un modo eficaz de lograr una calidad y seguridad superiores. sin mermar las características sensoriales fundamentales del producto. El desarrollo de técnicas de filtración y su distribución sigue adelante. que tienen un efecto negativo en la calidad del producto. se obtienen unos quesos de mayor valor nutricional y mejor precio. Al mismo tiempo. que podrá conservarse a temperatura ambiente durante seis meses y tendrá un sabor similar al de la leche fresca pasteurizada. existe una novedad en la tecnología de las membranas aplicada a la fabricación que garantiza una seguridad higiénica similar a la “termización” de la leche desnatada a 50°C. Otra aplicación en el caso del queso es el uso de la microfiltración para eliminar microorganismos no deseados de la leche fresca utilizada para elaborar quesos a base de leche cruda. Por otra parte. su sabor. permite un elevado grado de selectividad. Este proceso permitirá la comercialización de una leche nueva. Elimina los ingredientes no deseados.ultrafiltración es un medio eficaz de recuperar estos subproductos que pueden utilizarse subsecuentemente para elaborar otros productos. Por otro lado. especialmente el desarrollo de membranas mejores y más duraderas. La leche fresca microfiltrada se conserva durante más tiempo que la leche fresca pasteurizada tradicionalmente. como microorganismos o sedimentos. por ejemplo. La microfiltración constituye una alternativa a los tratamientos térmicos cada vez más empleada para reducir la presencia de bacterias y mejorar la seguridad microbiológica de los productos lácteos. Por una parte. puede acortar las etapas de producción y aumentar el rendimiento. preservando su sabor. ofrecen nuevas perspectivas. . LECHE MICROFILTRADA Las técnicas clásicas empleadas para incrementar la conservación y la seguridad de la leche se basan en los tratamientos térmicos. tales como la pasteurización y la esterilización. mejorando la textura del producto final e incrementando su duración. NUMEROSAS VENTAJAS La aplicación de la filtración por membrana ofrece una amplia gama de ventajas tanto para el consumidor como para el productor. Los nuevos métodos.

ya que en uno de ellos se recurre con más frecuencia que el otro debido a la suposición que tienen los estudiantes sobre la higiene de los servicios higiénicos en dicha facultad. culturales y económicos resultan las regiones más afectadas por el consumo directo del agua contaminada. . bien porque no está adecuadamente clorada o porque la red de saneamiento es deficiente en general. OBJETIVOS: OBJETIVOS ESPECÍFICOS:  Indagar. que logra la eliminación de patógenos (bacterias y virus) que se transmiten mediante el agua. este método es muy importante ya que es más preciso. rápido y cómodo para un análisis microbiológico del agua. conocer y explicar adecuadamente las diferencias existentes sobre la calidad de agua presentes en dos muestras distintas de 2 facultades de la Universidad Nacional de Ingeniería. Las zonas rurales con insuficientes recursos sanitarios. AGUA: Existen muchas regiones del mundo donde el agua del grifo no tiene garantías de potabilidad.  MARCO TEÓRICO: 1. energéticos. por lo que se hace imprescindible elegir alternativas de tratamiento que garanticen la obtención de buenos resultados para la salud con la mínima inversión posible. El método más antiguo y universal para la desinfección del agua a escala domiciliaria es el de la ebullición.  Evaluar la precisión y exactitud del método de filtración por membrana para la detección de Coliformes Totales y Coliformes fecales en los dos tipos de muestras. OBJETIVOS GENERALES:  Entender el método empleado sobre la filtración por membrana para determinar la calidad microbiológica del agua de las dos muestras requeridas.  Determinar la cantidad presente de coliformes fecales y coliformes totales.

antes de que el agua llegue a nuestras casas.0001mg/L. El agua potable no debe contener sustancias o microorganismos que puedan provocar enfermedades o perjudicar nuestra salud. En el caso de plaguicidas la concentración máxima aceptable presente en el agua deberá ser de 0. inodora. Las bacterias del grupo coniforme están ligadas a los organismos patogénicos y muestran un buen índice del grado de seguridad bacteriológica del agua.La filtración se utiliza desde el siglo XIX para eliminar la turbiedad. No debe contener substancias o cuerpos extraños de origen biológico. 2. el agua es enviada hacia nuestras casas a través de una red de tuberías que llamamos red de abastecimiento o red de distribución de agua. así como la ausencia de dicho grupo genera un indicativo de que el agua es bacteriológicamente apta para el consumo humano. Desde las plantas potabilizadoras. 1997). pero no es eficaz para suprimir las bacterias o los virus. ellas habitan generalmente en la flora del intestino humano y la de algunos animales pero también pueden estar presentes en algunas muestras de agua y cabe la posibilidad que exista otra clase de microorganismos capaces de causar enfermedades. En estos lugares se limpia el agua y se trata hasta que está en condiciones adecuadas para el consumo humano. es necesario que sea tratado en una planta potabilizadora. inorgánico o radioactivo en cantidades tales que la hagan peligrosa para la salud. los quistes y los protozoos. límpida y transparente. El análisis microbiológico del agua no tiene como objetivo principal buscar en forma directa las bacterias.  AGUA POTABLE: Llamamos agua potable al agua que podemos consumir o beber sin que exista peligro para nuestra salud. Por eso. Entonces el agua potable no debería tener en ningún caso microorganismos considerados patógenos y debe estar libre de bacterias indicadoras de contaminación fecal (OPS. virus o cualquier clase de microorganismos patógenos sino está abocado a la búsqueda de algunas bacterias . ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA: El agua inadecuadamente tratada puede contener en su estructura microorganismos patógenos asociados a causar diversas enfermedades e incluso la muerte. Deberá presentar sabor agradable y ser prácticamente incolora. orgánico.

indicadoras de contaminación por heces fecales y que sin querer ser patógenas residen en el intestino humano y el de algunos animales. la Técnica del NMP (Número Más Probable) o la Fermentación en Tubos Múltiples. no formadores de esporas y son capaces de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas. son oxidasa negativa. y por tanto. de calidad sanitaria. 4. entre los cuales se destaca el Escherichia Coli como representante de . además. aerobios o anaerobios facultativos. industriales o de otra índole resultando así que la densidad del grupo de los coliformes es un indicador de contaminación. TOMA DE MUESTRAS EN GRIFOS O LLAVES: Se debe limpiar cuidadosamente la superficie del grifo o tubo. 3. Existen diversas técnicas de análisis microbiológico del agua que permiten detectar la presencia de ciertos microorganismos indicadores de contaminación tales como el Método de filtración por membrana. la abertura de salida debe flamearse con un mechero de alcohol. agua y suelo. El grupo de bacterias coliformes es el principal indicador de la adecuación del agua para usos domésticos. BACTERIAS COLIFORMES:  COLIFORMES TOTALES: Los coliformes totales son un grupo de microorganismos que comprende varios géneros de familia enterobacteriaceae. se caracterizan por soportar temperaturas de hasta 45°C. también denominados coliformes termotolerantes. Se caracterizan por ser bacilos Gram positivos. se deja fluir el agua lo más intensamente posible para quitar las impurezas adheridas.  COLIFORMES FECALES: Los coliformes fecales. es habitante natural del tracto intestinal del hombre y animales de sangre caliente. posteriormente se debe regular la presión del agua para llenar con la cantidad necesaria el recipiente que albergará la muestra evitando salpicaduras. este grupo de microorganismos se encuentra ampliamente difundido en la naturaleza. los cuales son utilizados como control de calidad en industrias donde se requiere procesar un gran número de muestras. comprenden un grupo muy reducido de microorganismos.

contaminación de alimentos por origen fecal. 5. el cual es un método altamente reproducible puede usarse para analizar volúmenes de muestras relativamente grandes y se obtienen resultados en menor tiempo que con el método de NMP (Número Más Probable). capaz de fermentara la lactosa a una temperatura de 44°C y 45°C. La presencia de Escherichia Coli en muestras de agua potable. Se sabe que los organismos de grupo coliforme son indicador microbiano de la calidad del agua. es indol positivo y tiene un origen específicamente fecal. por tanto es el principal indicador de higiene de los alimentos. El filtro es colocado en un medio de cultivo específico para lo que se desea determinar en la muestra (coliformes totales. superficie de agua dulce y tracto digestivo.5°C. coliformes fecales y . pues está siempre presente en grandes cantidades de las heces de los seres vivos de sangre caliente pero también pueden situarse en aguas y suelos. que dan colonias oscuras con brillo metálico en medio Endo luego de 24 horas de incubación a 35°C ± 2°C. La Escherichia Coli se caracteriza por ser una bacteria Gram negativa.45 micras de tamaño de poro.  FUNDAMENTO DEL MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA: La muestra se hace pasar mediante vació por un filtro de celulosa de 0. indica la existencia de fallas en la eficacia del tratamiento de aguas. en la integridad del sistema de distribución y por tanto evidencia contaminación de diferentes orígenes: suelo. debido principalmente a que son de fácil detección y se pueden enumerar en el agua. MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA: Para la detección de Coliformes Totales y Coliformes fecales (Escherichia Coli) es utilizado el método de filtración por membrana. aerobios o anaerobios facultativos. A los efectos de la filtración por membrana debe replantearse la definición de coliformes: bastón Gram (-). La determinación de coliformes fecales por filtración puede hacerse a partir de las colonias desarrolladas en Endo o directamente incubando a la membrana en medio m-FC e incubando a 44. sin embargo no puede aplicarse a cualquier tipo de muestra y presenta limitaciones. para que queden retenidas en él las bacterias de tipo coliforme y mesofílicas.

además se puede utilizar en pruebas de campo. G) Adicionar nuevamente 100 ml de agua destilada estéril y dejar filtrar. K) Filtrar 100 ml de cada muestra a analizar. I) Con pinzas estériles colocar un filtro de celulosa en cada porta filtros. Medio m-FC: 44. dejar el alcohol encendido durante 3 minutos.5°C en baño María. . F) Abrir las llaves de manifold y dejar filtrar. se debe tener en cuenta que estos filtros están libres de químicos susceptibles de inhibir el crecimiento y desarrollo bacteriano.  CARACTERÍSTICAS DEL FILTRO DE MEMBRANA: Se debe utilizar un filtro de membrana con un diámetro de poro que permita una completa retención de bacterias coliformes. N) Realizar el recuento de colonias características Medio Endo: colonias rojas. Medio m-FC: colonias azules. La lectura de resultados se da en menor tiempo (24 horas) a comparación de método NMP. El análisis se dificulta en muestras de agua muy turbias o haciendo inóculos muy pequeños de acuerdo con el tipo de muestra a analizar.microorganismos mesofílicos). empleando accesorios adecuados. que posean una velocidad de filtración satisfactoria. H) Cerrar las llaves de manifold y retirar el embudo. L) Cuando finalice el filtrado de cada una de las muestras cerrar las llaves de manifold. D) Dejar filtrar aplicando el vacío. B) Colocar el embudo estéril sobre el receptáculo y fijarlo con la pinzas del equipo. M) Incubar a temperatura adecuada Medio Endo: 37°C ± 2°C en incubadora. incubando a 35°C ± 2°C durante 18 a 20 horas.  VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL MÉTODO: El método de filtración por membrana es un método ágil y poco dispendioso. retirar el embudo. E) Pasar el mechero por cada filtro para encender el alcohol. J) Colocar el embudo y adicionar la muestra a analizar. tomar el filtro con pinzas estériles y colocarlo sobre la superficie del medio Endo y m-FC. con la cuadrícula hacia arriba sobre la parte porosa del receptáculo.  USO DEL EQUIPO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA: A) Colocar el porta filtros estéril sobre la base de manifold. C) Llenar el embudo con 80 a 100 ml de agua destilada estéril.

MEDIOS Y EQUIPOS: MATERIALES:  FRASCO KITASATO: CANTIDAD 1  PINZAS ESTÉILES: CANTIDAD 1  UTILIDAD Receptor de agua filtrada UTILIDAD Colocación de la membrana filtrante TUBOS DE ENSAYO: CANTIDAD UTILIDAD . MATERIALES.

12  ERLENMEYER: CANTIDAD 3  Dilución del Agua Peptonada UTILIDAD Preparación de los medios PIPETAS ESTÉRILES: CANTIDAD 2 UTILIDAD Extracción de las muestras .

 PERA SUCCIONADORA: CANTIDAD 1  UTILIDAD Complementario a la pipeta FILTROS DE MEMBRANA: CANTIDAD 12 UTILIDAD Receptor de organismos coliformes .

 PLACAS PETRI: CANTIDAD 12  MUESTRA DE AGUA DE LA FACULTAD DE ARQUITECTURA: CANTIDAD 100ml  UTILIDAD Colocación del medio a utilizar UTILIDAD Muestra a analizar (1) MUESTRA DE AGUA DE LA FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL: CANTIDAD 100ml UTILIDAD Muestra a analizar (2) .

 MECHERO DE ALCOHOL: CANTIDAD 1  UTILIDAD Esterilización en el proceso ALGODÓN: CANTIDAD Cantidad necesaria MEDIOS: UTILIDAD Complemento .

 AGAR ENDO: CANTIDAD 100ml  AGAR m-FC: CANTIDAD 100ml  UTILIDAD Utilización para el recuento de coliformes UTILIDAD Utilización para el recuento de coliformes AGUA PEPTONADA: CANTIDAD 100ml UTILIDAD Dilución de las muestras .

EQUIPOS:  BOMBA DE VACÍO: CANTIDAD 1  UTILIDAD Complementario a la Unidad de Filtración UNIDAD DE FILTRACIÓN: CANTIDAD 1 UTILIDAD Filtración de las muestras .

 REFRIGERADORA: CANTIDAD 1  BAÑO MARÍA: CANTIDAD 1  UTILIDAD Conservación de los medios UTILIDAD Incubación de los medios INCUBADORA: CANTIDAD 1 UTILIDAD Incubación de los medios .

Agar m-FC. Incubación de las muestras (1) y (2). Pesar la cantidad requerida (5. PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS: MEDIO AGAR ENDO-LES AGAR m-FC AGUA PEPTONADA  VOLÚMEN 100ml 100ml 200ml AGAR ENDO-LES: CONCENTRACIÓN 52g/L    CANTIDAD REQUERIDA 5. . Procedimiento por el método de filtración por membrana. Adicionar la cantidad pesada anterior al Erlenmeyer para la preparación del medio. Observación de los resultados para el recuento y la comparación necesaria.2g En un Erlenmeyer de capacidad de 300ml agregar 100ml de agua destilada. Agua Peptonada). Toma de muestras requeridas (1) y (2).2g) en una balanza electrónica. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: El procedimiento experimental llevado a cabo consta de cinco partes:       Preparación de los medios de cultivo (Agar ENDO.

Colocar una cantidad necesaria del medio preparado en las placas Petri. AGAR m-FC: CONCENTRACIÓN 52. Pesar la cantidad requerida (0. Pesar la cantidad requerida (5.2g aprox. Adicionar la cantidad pesada anterior al Erlenmeyer para la preparación del medio.) en una balanza electrónica. AGUA PEPTONADA: CONCENTRACIÓN 1g/L   CANTIDAD REQUERIDA 0. Cuando el medio se halla licuado agregar 1ml de ácido rosálico y dejar ebullir por 1 minuto más.2g) en una balanza electrónica. No autoclavar.      Mover suavemente. Colocar en la estufa la preparación y dejar ebullir moviendo constantemente. Cuando el medio se halla licuado agregar 1ml de alcohol etílico y dejar ebullir por 1 minuto más. . Colocar en la estufa la preparación y dejar ebullir moviendo constantemente.0g/L          CANTIDAD REQUERIDA 5.2g En un Erlenmeyer de capacidad de 300ml agregar 200ml de agua destilada.2g En un Erlenmeyer de capacidad de 300ml agregar 100ml de agua destilada. Mover suavemente. No autoclavar Colocar una cantidad necesaria del medio preparado en las placas Petri.

(10ml). (Agar m-FC). Incubación para Coliformes Fecales: Medio m-FC. Mover suavemente. luego cubrirlas con dos globos y por último introducirlas en un guante y todo esto se hace en precaución de que ingrese agua a la placa. Verter el embudo de filtración en volumen de agua de muestra. desconectar el vacío. Autoclavar en el autoclave por 1 hora 15 minutos aproximadamente. Realizar las diluciones respectivas (1ml). Incubación para Coliformes Totales: Medio Endo-Les.  MUESTRA (2): Muestra de agua de la Facultad de Ingeniería Ambiental. Adicionar la cantidad pesada anterior al Erlenmeyer para la preparación del medio. Al incubar las placas con m-FC en baño maría se recomienda sellar los bordes con parafilm. Colocar la membrana en la superficie de las placas en los medios de cultivo apropiados (Agar Endo-Les). Aplicar el vacío para filtrar la muestra. Ensamblar todo el equipo de filtración colocando la membrana filtrante estéril sobre el soporte poroso y mediante pinzas previamente esterilizadas en alcohol más fuego. Incubar las muestras.     TOMA DE MUESTRAS: MUESTRA MUESTRA (1) MUESTRA (2) VOLÚMEN 100ml 100ml  MUESTRA (1): Muestra de agua de la Facultad de Arquitectura. . Retirar la membrana filtrante del soporte poroso con pinza previamente esterilizada. en caso de que la muestra presentara menos de 20ml añadir agua en dilución estéril hasta completar más de 20ml. Cuando haya pasado toda la muestra a través del filtro. (100ml).  PROCEDIMIENTO POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA:           Conectar Kitasato a fuente de vacío y colocar en su sitio el soporte poroso y embudo de filtración. INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS (1) Y (2).

tanto la muestra (1) como la muestra (2) MUESTRA (1): ANÁLISIS DE LA MUESTRA DEL AGUA DE LA FACULTAD DE ARQUITECTURA: DILUCIÓN 1ml 10ml 100ml MEDIO ENDO-LES MEDIO m-FC .MUESTRA (1) Incubadora Baño María AGAR ENDO-LES AGAR m-FC  OBSERVACIÓN DE LOS RESULTADOS COMPARACIÓN NECESARIA: MUESTRA (2) Incubadora Baño María PARA EL RECUENTO Y LA  OBSERVACIONES:  Se procederá a realizar las respectivas observaciones de los dos tipos de muestras analizadas.

MUESTRA (2): ANÁLISIS DE LA MUESTRA DEL AGUA DE LA FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL: DILUCIÓN MEDIO ENDO-LES MEDIO m-FC 1ml 10ml 100ml  RESULTADOS: MUESTRA (1): ANÁLISIS DE LA MUESTRA DEL AGUA DE LA FACULTAD DE ARQUITECTURA: .

MUESTRA: AGUA EN LA FIA EVIDENCIA DE MEDIO VOLUMEN DE MUESTRA (ml) 100 10 1 COLIFORMES ENDO-LES excesi excesi 133 TOTALES vas vas COLIFORMES m-FC 0 0 3 FECALES Nº colonias de CT contadas∗100 UFC =133∗100 ml Volumen ( ml ) de muestra original filtrada MUESTRA (2): ANÁLISIS DE LA MUESTRA DEL AGUA DE LA FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL: MUESTRA: AGUA EN LA FAUA EVIDENCIA DE MEDIO VOLUMEN DE MUESTRA (ml) 100 10 1 COLIFORMES ENDO-LES excesi excesi 65 TOTALES vas vas COLIFORMES m-FC 0 0 0 FECALES Nº colonias de CT contadas∗100 UFC =65∗100 ml Volumen ( ml ) de muestra original filtrada .

el cual contenía la muestra (1). lo cual pudo comprometer el desarrollo de las incubaciones de las muestras (1) y (2). en los materiales utilizados con los equipos como el embudo de filtración no hubo este inconveniente. así mismo las muestras y las diluciones no se encontraban tapados.  Los resultados hallados no fueron del todo convincentes ya que ambos medios de agar se encontraron dos diferentes tipos de bacterias.  Durante el proceso de incubación la incubadora se encontró apagada por un tiempo aproximado de 8 horas. presentaba una cantidad pequeña de agua derivada del agua del baño María en su interior.  La muestra (2) es más favorable para el consumo humano. DISCUSIONES:  Uno de los factores por el cual el número establecido de coliformes resultó elevado fue que se sufrió un descuido en cuanto a la preparación del medio de Agua Peptonada. esto conllevó a que en el momento de las observaciones de las muestras se notara que uno de los guantes.  Con respecto al medio de agar m-FC a la hora de envolver las muestras (1) y (2) dentro del guante en la finalización del procedimiento experimental se procedió de forma inadecuada.  CONCLUSIONES:  Se concluyó la efectividad del procedimiento del método de filtración por membrana para el análisis de las muestras establecidas [(1) y (2)].  Los tubos de ensayo (12 unidades) y las pipetas (2 unidades) que nos proporcionó el laboratorio no se encontraban esterilizados. solamente lavados con lo cual hubo presencia de contaminación. pues presente menor cantidad de Coliformes Totales y Coliformes Fecales. sin embargo las muestras en sí no presentaban este problema. esto pudo comprometer los resultados obtenidos. por lo tanto presentaban contaminación en un rango desconocido.  Se determinó que la muestra (2) cuya procedencia fue de la Facultad de Ingeniería Ambiental resultó ser más eficaz en cuanto a control bacteriano que la muestra (1) cuya procedencia fue de la Facultad de Arquitectura. .

H.org/article/es/artid/filtracion-membrana-calidadalimentaria/  http://www. RECOMENDACIONES:  Para obtener una mayor eficacia las muestras a analizar [(1) y (2)] deben hacerse en un periodo de tiempo de 30 horas aproximadamente.  Es recomendable utilizar Etanol de 95% en el medio Endo.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT-009.pdf  CAPÍTULOS: RECUENTO DE MICROORGANISMOS (P. C.  BIBLIOGRAFÍA:   PP.eufic.  Realizar el apropiado control de esterilidad tanto como para los medios (Agares) como para la unidad de filtros y materiales a utilizar (pipetas y probetas). MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS. sin fallas como el incidente que se sufrió al momento de la incubación.ispch. alcohol desnaturalizado. EDITORIAL ACRIBIA. COLLINS.  No guardar los agares por periodos de duración de más de dos semanas. ANEXOS: . MADIGAN / JOHN M. 927-928 BROCK BIOLOGÍA DE LOS MICROORGANISMOS DÉCIMA EDICIÓN MICHAEL T.  http://www. 301). MARTINKO / JACK PARKER. 149) Y AGUA (P.  Es recomendable tener todos los equipos necesarios para la evaluación del proyecto en buen estado.