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cidos nucleicos

DOCENTE

:
MSc. Muoz Vilchez, Guadalupe

ALUMNAS

:
CERVERA YAUCE katy
DAS DAVILA Dayani
HUANCAS MONTALVAL Mariela
JAVE ZAPATA Diana Raquel
PRADA CHONTO Mixi Lizbeth
TAFUR MUOZ Rebeca
VSQUEZ SUAREZ Nataly

CICLO

: 2011 I

INTRODUCCIN

Todas las clulas contienen la informacin necesaria para realizar


distintas reacciones qumicas mediante las cuales las clulas
crecen, obtienen energa y sintetizan sus componentes. Est
informacin est almacenada en el material gentico, el cual puede
copiarse con exactitud para transmitir dicha informacin a las
clulas hijas. Sin embargo estas instrucciones pueden ser
modificadas levemente, es por eso que hay variaciones
individuales y un individuo no es exactamente igual a otro de su
misma especie (distinto color de ojos, piel, etc.). De este modo,
podemos decir que el material gentico es lo suficientemente
maleable como para hacer posible la evolucin.
La informacin gentica o genoma, est contenida en unas
molculas llamadas cidos nucleicos. Existen dos tipos de cidos
nucleicos: ADN y ARN. El ADN guarda la informacin gentica en
todos los organismos celulares, el ARN es necesario para que se
exprese la informacin contenida en el ADN; en los virus podemos
encontrar tanto ADN como ARN conteniendo la informacin (uno u
otro nunca ambos).

OBJETIVOS

Con el presente trabajo se quiere llegar a los presentes lectores a


entender la composicin bioqumica de los cidos nuclecos,
llegando a detallarles ante cada aspecto con su respectivo dibujo
as se podr tener mas que un anlisis terico un anlisis grafico
el cual es nuestro objetivo, por que se desea que se llegue a
saber ms que un concepto tener una idea de lo que habla
identificando cada punto en su respectivo lugar.

cidos nucleicos
Definicin

Los cidos nucleicos son polinucletidos, es decir, polmeros lineales


resultantes de la unin mediante enlace fosfodister de un nmero
variable de unidades monomricas bsicas, denominadas nucletidos.
Un nucletido est formado por tres componentes; una pentosa (la
ribosa o
la
desoxirribosa),
un compuesto
heterocclico
nitrogenado (base nitrogenada purina o pirimidina) que junto con la
pentosa forma un nuclesido, y una molcula de cido fosfrico. Los
nucletidos tienen papeles muy variados dentro del metabolismo celular.
Son la moneda energtica en el metabolismo (ej. ATP), son mensajeros
qumicos secundarios en la respuesta celular a los estmulos inducidos
por hormonas o agentes externos (ej.: AMPc), constituyen una serie de
importantes cofactores enzimticos y, por supuesto, son los
constituyentes de los cidos nucleicos: ribonucleicos (ARN) y
Desoxirribonucleicos (ADN). Los cidos nucleicos son macromolculas
polimricas formadas por subunidades llamadas nucletidos.

Composicin
Los cidos nucleicos estn formados por la condensacin de unidades
bsicas estructurales llamadas:
NUCLEOTIDOS
Unidos por enlace fosfodiester. Un nucletido est constituido por:

Bases pirimidnicas, derivadas de la pirimidinas. Son


la citosina (C), que se encuentra tanto en el ADN como en el ARN;
la timina (T), que
se
presenta
slo
en
el
ADN;
y
el uracilo (U), componente del ARN.

Bases pricas, derivadas de la purina. Las ms importantes son


la adenina (A) y la guanina (G). Las dos en ambos tipos de cidos
nucleicos.

Pentosa, ribosa en el ARN y desoxirribosa en el ADN.


cido orto fosfrico (H3 PO4) se encuentran en forma de ion
fosfato.

Nuclesido
La unin de una pentosa con una base nitrogenada forma
un nuclesido. El enlace se forma entre el carbono anomrico del azcar y
uno de los nitrgenos de la base nitrogenada. En la unin se forma una
molcula de agua. Este enlace recibe el nombre de
Enlace N-glucosdico. Si la pentosa es una ribosa, tenemos
un ribonuclesido. Estos tienen como bases nitrogenadas la adenina,
guanina, citosina y uracilo. Si la pentosa es un desoxirribosa, tenemos
un desoxirribonuclesido. Estos tienen como bases nitrogenadas la
adenina, citosina, guanina y timina. Se nombra aadiendo la terminacin osina, si derivan de una base prica, o -idina, se sta es pirimidnica, al
nombre de la base que lo forma: adenosina, guanina, citidina, timidina,
etc. Si la pentosa es la desoxirribosa se antepone el prefijo desoxi-; por
ejemplo, desoxiaguanosina, desoxicitidina, etc.
Los nucletidos se forma por la unin de un nuclesido con el cido
fosfrico, esta se produce mediante la esterificacin del azcar por el
cido fosfrico. Es una unin fosfoster entre un OH del cido fosfrico y
el OH situado en el carbono 5 del azcar, con formacin de una molcula
de agua. Segn el azcar sea la ribosa o la desoxirribosa,
tendremos ribonucletidos odesoxirribonucletidos.
La nomenclatura de los nucletidos es compleja. Los nucletidos se
nombran como el nuclesido del que proceden eliminando la a final y
aadiendo la terminacin monofosfato, por ejemplo, adenosin monofosfato
(AMP). Llevan el prefijo desoxi-, en el caso de estar formadas por la
pentosa desoxirribosa. (dAMP)

PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LOS CIDOS


NUCLEICOS
Las principales propiedades fsico-qumicas de los cidos nucleicos que vamos a
considerar son las siguientes:

DENSIDAD DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Densidad: existe una relacin lineal entre el contenido en G+C y la densidad


del ADN determinada en un gradiente de densidad. A mayor contenido en
G+C mayor densidad posee el ADN.
Meselson y col. (1957) desarrollaron una tcnica de centrifugacin en
gradiente de densidad. Cuando se centrifuga a alta velocidad un solucin
densa (saturada) de un soluto de bajo peso molecular (ClCs 7,7 M, sucrosa,
etc.) se produce un equilibrio entre dos fuerzas opuestas, la de difusin del
soluto y la fuerza de sedimentacin, como consecuencia se produce un
gradiente de densidad que aumenta en la direccin de la fuerza centrifuga
(aumenta a medida que avanzamos hacia el fondo del tubo de centrifuga). Si
aadimos al centrifugar una molcula de ADN, est migrar hacia el fondo del
tubo hasta llegar al punto en que la densidad del soluto de bajo peso
molecular (la densidad del ClCs) coincide con la densidad del ADN
centrifugado (densidad de flotacin). Posteriormente, es posible aislar las
molculas de ADN de diferente densidad practicando un orificio en el fondo
del tubo y sacando varias fracciones diferentes. Tambin es posible pinchar el
tubo con una jeringa, justo en la posicin de la banda y extraer el ADN
contenido de esa zona del tubo.

Centrifugacin en gradiente de CsCl

Basndose en mltiples estudios de la densidad de los ADNs de diferentes


organismos y de su composicin en bases nitrogenadas, se ha establecido
una frmula emprica que relaciona la densidad de flotacin () con el
contenido en G+C expresado en moles por ciento. Est frmula es la
siguiente: = 1,660 + 0,00098(G+C).

DESNATURALIZACIN: TEMPERATURA DE FUSIN

Desnaturalizacin: la proporcin A+T/C+G est relacionada en primer lugar


con la estabilidad de la molcula de ADN de doble hlice. Cuanto mayor es el
contenido en G+C de una molcula, mayor cantidad de pares G-C presentar,
como consecuencia tendr una mayor cantidad de triples enlaces y, por
consiguiente, ser necesario suministrar una mayor cantidad de energa a esa
doble hlice para separar sus dos hebras (desnaturalizacin o fusin del
ADN). Cuanto mayor es el contenido en G+C mayor cantidad de calor que hay
que suministrar a un ADN de doble hlice para desnaturalizarlo. La
temperatura de fusin (Tm) necesaria para desnaturalizar la mitad del ADN de
una mezcla (punto medio de la reaccin ADN doble hlice ADN hlice
sencilla) est directamente relacionada con el contenido en G+C, a mayor
contenido en G+C mayor temperatura de fusin (Tm).

ABSORBANCIA A 260 nm

Absorbancia a 2.600 : El estado fsico de los cidos nucleicos est


relacionado con su capacidad de absorcin de la luz ultravioleta (UV) a
2.600 . El menor grado de absorcin se produce en estado de doble hlice,
la absorcin aumenta cuando se produce la desnaturalizacin pasando a
estado de hlice sencilla (efecto hipercrmico, aumento de la absorbancia) y,

por ltimo, si degradamos este ADN de hlice sencilla a nivel de nucletidos


libres, de nuevo aumenta la absorbancia.

Esquema efecto hipercrmico

Por tanto, la absorbancia a 2.600 se puede utilizar como una medida del
estado fsico de la molcula de ADN. Las curvas de fusin tienen forma de S
observndose un aumento brusco de la absorbancia al llegar a una
temperatura determinada, la temperatura de fusin.

CINTICA DE RENATURALIZACIN: CURVAS CoT

Velocidad de renaturalizacin: la velocidad de renaturalizacin del ADN de


un organismo est relacionada con su complejidad. La complejidad se define
como la suma del nmero de nucletidos que tiene cada tipo de secuencia sin
tener en cuenta el nmero de veces que esta repetida. El ADN de los virus y
las bacterias en su mayora slo tiene secuencias que estn una sola vez en
el genoma (secuencias nicas). Sin embargo, el organismo ms complejo,
como los eucariontes, presentan distintos tipos de secuencias en su genoma.
Los eucariontes tienen secuencias nicas (SU), secuencias de bajo nmero
de copias (SBNC, 2-10 copias), secuencias repetidas (SR, alrededor de
102 copias) y altamente repetidas (SAR, 103 a 106 copias).

Tipo de Secuencia

N de repeticiones

N de nucletidos

A (SU)

5.700

B (SU)

7.530

C (SBNC)

3.720

D (SBNC)

4.350

E (SR)

200

500

F (SAR)

10.000

300

G (SAR)

1.000.000

200

Complejidad

22.300

Si imaginamos un organismo eucarionte con los tipos de secuencias indicados


en la tabla anterior, su complejidad sera la suma del nmero de nucletidos
de cada tipo de secuencia (22.300) sin tener en cuenta el nmero de veces
que est repetida cada una de ellas.
No es difcil imaginar que la velocidad de renaturalizacin del ADN (paso de
dos hlices sencillas a una doble hlice) est relacionada con el nmero de
veces que esta repetida una determinada secuencia.

Las curvas de renaturalizacin o curvas Cot, de organismos que carecen de


secuencias repetidas como virus y bacterias, tienen forma de S, tienen un slo
punto de inflexin o punto medio de la reaccin. Todas las secuencias son
nicas y tienen la misma probabilidad de encontrar a su complementaria para
formar la doble hlice.

Curvas Cot de virus y bacterias

Curvas Cot de un eucarionte

Las curvas Cot de organismos eucariontes con diferentes tipos de secuencias,


poseen varios puntos de inflexin. Cada uno de ellos correspondiente a un
tipo de secuencias (nicas, moderadamente repetidas, y altamente repetidas).
Como en el caso de las curvas de fusin, tambin se utiliza como medida el
punto medio de la reaccin de renaturalizacin, es decir, el Cot o tiempo al
que se ha re asociado la mitad del ADN. El Cot es directamente
proporcional a la complejidad del ADN del organismo. Valores de Cot bajos
(10-4 a 10-1) corresponden a secuencias altamente repetidas, valores de Cot
comprendidos entre 10 y 102 corresponden a secuencias moderadamente
repetidas y las secuencias nicas o de bajo nmero de copias dan lugar a
valores de Cot altos (mayores de 103).

HIBRIDACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Las tcnicas de desnaturalizacin y posterior Re naturalizacin se utilizan


para conseguir la hibridacin de cidos nucleicos, es decir, una vez separadas
las dos hebras del ADN doble hlice, es posible volver a formar una doble
hlice con una hebra de ADN que sea complementaria (hibridacin de ADN
con ADN) o volver a formar una doble hlice con un segmento de ARN que
contenga la secuencia complementaria (hibridacin de ADN con ARN).
Endonucleasas de restriccin
Las tcnicas de hibridacin (desnaturalizacin y posterior renaturalizacin)
permiten, por ejemplo, identificar el gen que ha dado lugar a un determinado
ARN-mensajero. Si se asla un mensajero determinado en una clula, es
posible hibridar este ARN con el ADN de la clula previamente fragmentado
mediante el uso de endonucleasas de restriccin.

Las endonucleasas de restriccin de tipo II son enzimas que reconocen


secuencias cortas de ADN (de 4 a 6 pares de bases) de tipo palindrmico y
cortan por el interior de la secuencia diana a la misma altura en las dos
hlices de ADN (corte simtrico) o a distinto nivel en cada hlice (corte
asimtrico).

Eco RI

Hae III

Dichas endonucleasas de restriccin fueron descubiertas por Werner Arber,


Hamilton O. Smith y Daniel Nathans en la bacteria E.coli, trabajos por los que
recibieron el premio Nobel. Estas enzimas forman parte del sistema de
defensa (sistema de modificacin-restriccin) de las bacterias frente a la
entrada de ADN exgeno en su interior. Existen cientos de endonucleasas
diferentes que reconocen distintas secuencias cortas de tipo palndrmico. En
la siguiente tabla se indican algunas de las endonucleasas ms frecuentes:

Endonucleasa
de restriccin

Bacteria de la que
procede

Secuencia que reconoce


(5' 3') y lugar de corte
()

Eco RI

Escherichia coli

5' GAATTC 3' (asimtrico)

Eco RII

Escherichia coli

5' CCTGG 3' (asimtrico)

Hae III

Haemophilus aegyptus

5' GGCC 3' (simtrico)

Hin dII

Haemophilus influenzae

5' GTPiPu AC 3'


(simtrico)

Hin dIII

Haemophilus influenzae

5' AAGCTT 3' (asimtrico)

Hpa I

Haemophilus
parainfluenzae

5' GTTAAC 3' (simtrico)

Hpa II

Haemophilus
parainfluenzae

5' CCGG 3' (asimtrico)

Ava I

Anabaena variabilis

5' CGPuPiCG 3'


(simtrico)

La utilizacin de diferentes endonucleasas y la separacin por tamaos de los


fragmentos producidos mediante electroforesis permite construir lo que se
denomina Mapas de restriccin.
Cuando el ADN de un organismo eucarionte se fragmenta con una
endonucleasa de restriccin, se producen cientos de miles o incluso hasta
millones de fragmentos. Dichos fragmentos se separan por tamaos mediante
electroforesis en geles de agarosa, una vez se parados por tamaos se
transfieren los fragmentos a una membrana de nylon en condiciones
desnaturalizantes y de forma que permanezcan en la misma posicin. Los
fragmentos desnaturalizados y pegados a la membrana se pueden
renaturalizar o hibridar utilizando un segmento de ADN o de ARN
(habitualmente denominado sonda) marcado radiactivamente. Dicha sonda,
hibridar solamente con aquellos fragmentos de ADN que contengan la
secuencia complementaria. La tcnica que permite transferir los fragmentos
de ADN desnaturalizados a una membrana de nylon y posteriormente hibridar
con una sonda de ADN marcada se denomina Tcnica Southern (hibridacin
ADN-ADN), cuando la hibridacin se realiza con una sonda de ARN marcada
se denomina Northern (hibridacin ADN-ARN).
El empleo combinado de endonucleasas de restriccin y de diferentes sondas
de ADN de secuencia nica marcadas permite obtener Polimorfismos para
Longitudes de Fragmentos de Restriccin (RFLPs), muy utilizados en la
construccin de mapas de ligamiento.

Propiedades biolgicas de los cidos nucleicos


Del ADN: Almacenar la informacin gentica, codificada en una
secuencia de nucletidos y facilitar su transmisin de una
generacin a otra.
Del ARNm: Llevar la informacin gentica codificada (obtenida por
transcripcin del ADN) desde el ncleo hasta los ribosomas donde es
traducida en una secuencia de AA.
Del ARNr: Asociado a protenas constituye los ribosomas y su
funcin est relacionada con la traslacin de stos a lo largo del
ARNm durante la traduccin (sntesis de proteica).
Del ARNt: posee un triple papel:
-captar AA activados del citoplasma (forma los 'complejos de
transferencia' AA-ARTt).
-transferir tales AA a los ribosomas en sntesis.
-colocarlos en el lugar que les corresponde en la protena de
acuerdo con la informacin codificada en el ARNm (por
complementariedad entre el triplete anti codn del ARNt y el triplete
codn del ARNm)
En el ADN es la de contener la informacin hereditaria.

Almacenamiento, replicacin, recombinacin, y transmisin de la


informacin gentica
(Son las molculas que determinan lo que es y hace cada una de
las clulas vivas).

Clasificacin

ADN
El ADN, cido desoxirribonucleico, o en ingls DNA, se define como un
biopolmero (compuesto qumico formado por unidades estructurales que se
repiten) que constituye el material gentico de las clulas. Est formado por
unidades que estn ordenadas segn una secuencia y es ah donde se
encuentra la informacin para la sntesis de protenas. Es el responsable del
cdigo gentico, que determina en gran medida las caractersticas de los
seres vivos al nacer.
La molcula de ADN est formada por dos cadenas formada por compuestos
qumicos llamados nucletidos. Existen cuatro tipos de nucletidos
diferenciados por sus bases nitrogenadas; adenina, timina, citosina y guanina.
Las cadenas forman una especie de cadena retorcida, lo que permite que el
ADN se pueda desenrollar y hacer una lectura de ste. Cada nucletido posee
una afinidad qumica con aquel que se encuentra en paralelo en la otra
cadena; adenina tiene afinidad con la timina, y la citosina con la guanina. Esta
afinidad qumica se ve empricamente con la unin de un enlace de hidrgeno.
Los nucletidos estn formados por un cido fosfrico, una desoxirribosa y
una base nitrogenada.
La estructura del ADN es tridimensional, por lo tanto posee tres niveles de
distintas caractersticas:

Estructura primaria:
Cadena de nucletidos encadenados seguidos por una secuencia. Aqu
se encuentra la informacin gentica de la clula
Estructura secundaria:
Doble hlice. Mecanismo de duplicacin del ADN. Complementos en
las bases nitrogenadas.
Estructura terciaria:
Almacenamiento del ADN en un volumen reducido. Esto vara
dependiendo la clula si es procarionte (disperso en el citoplasma) o
eucarionte (almacenado complejamente en el ncleo).

El ADN posee diversas propiedades y funciones de las cuales destaca: El


control de la actividad celular. Lleva la informacin gentica de la clula la que
determina las caractersticas de sta y que puedan ser transmitidas en el

proceso de divisin celular. Puede duplicarse en la divisin celular, formando


clulas idnticas a la original. Tiene la capacidad de mutacin (alteracin en la
informacin gentica) entendido por un proceso evolutivo.
La secuencia de las bases nitrogenadas del ADN cumple un papel
fundamental en lo que se llama la sntesis de protenas. La secuencia de
nucletidos es transmitida a un ARN mensajero (ARNm) en forma de codones
(tripletes que contienen el cdigo gentico). El ARNm acta sobre las
molculas del ARN de transferencia (ARNt) que contiene a los anti codones
(tripletes complementarios), copiando el material gentico. A cada anti codn
le corresponde un aminocido (unidad bsica de la protena), de esta manera
la clula sabr cmo ordenar la secuencia de aminocido para formar la
protena que le sea til. En consecuencia, la secuencia de las bases
nitrogenadas es una receta que la clula debe seguir para formar la protena
necesaria.
En la actualidad, para la biotecnologa el ADN cumple un papel fundamental.
Por el conocimiento de su estructura, funciones y propiedades se ha llevado a
cabo el fenmeno de la clonacin. La famosa oveja Dolly fue el primer
experimento, en el que se extrajo el material gentico de una oveja y se
almacen en la clula de otra. De esta manera la oveja obtenida, Dolly, fue
exactamente igual a la que le extrajeron el material gentico (un ejemplo
prctico que demuestra como el ADN porta lo que llamamos el cdigo
gentico.

ESTRUCTURA

Existen cuatro bases: dos pricas denominadas adenina (A) y guanina (G) y
dos pirimidnicas denominadas citosina (C) y timina (T). Para formar el ADN,
se unen largas cadenas de estas bases mediante molculas de fosfato y
azcar. La estructura de doble hlice (ver figura) del ADN no fue descubierta
hasta 1953 por James Watson y Francis Crick (el artculo A Structure for
Deoxyribose Nucleic Acid fue publicado el 25 de abril, 1953) en Nature), que
dejaba claro el modo en que el ADN se poda "desenrollar" para que fuera
posible su lectura o copia. Una larga hebra de cido nucleico est enrollada
alrededor de otra hebra formando un par entrelazado. Dicha hlice mide 3,4
nm de paso de rosca y 2,37 nm de dimetro, y est formada, en cada vuelta,
por 10,4 pares de nucletidos enfrentados entre s por sus bases
nitrogenadas. El rasgo fundamental es que las bases de nucletidos de una
hebra "casan" con la especie de nucletidos de la otra, en el sentido de que la
adenina siempre casa con la timina (lo que se denomina A....T) y la guanina
siempre casa con la citosina (G...C). Este emparejamiento corresponde a la
observacin ya realizada por Chargaff (1905-2002) de que en todas las
muestras la cantidad de adenina es siempre la misma que la timina, como
ocurre con la guanina y la citosina, as se aseguran cantidades iguales. As
una pequea purina (adenina y guanina) est siempre emparejada con una
mayor pirimidina (timina y citosina), siendo de este modo uniforme la doble
hlice (no hay "bultos" ni "pellizcos"). La cantidad de purina (A+G) es siempre
igual a la cantidad de pirimidina (T+C). Se estima que el genoma humano
tiene alrededor de 3.000 millones de pares de bases. Dos unidades de medida
muy utilizadas son la kilo base (kb) que equivale a 1.000 pares de bases, y la
mega base (Mb) que equivale a un milln de pares de bases
El modelo de doble hlice permite explicar las propiedades que se esperan del
ADN:

Capacidad para contener informacin: lenguaje codificado en la


secuencia de pares nucletidos
Capacidad de replicacin: dar origen a dos copias iguales
Capacidad de mutacin: justificando los cambios evolutivos

Enlace de hidrgeno
La adhesin de las dos hebras de cido nucleico se debe a un tipo especial de
unin qumica conocido como puente de hidrgeno. Los puentes de hidrgeno
son uniones ms dbiles que los tpicos enlaces qumicos, esto significa que
las dos hebras de la hlice pueden separarse con facilidad, quedando
intactas.
A--T

C---G

Papel de la secuencia
En un gen, la secuencia de los nucletidos a lo largo de la cadena de ADN
define una protena que un organismo es capaz de sintetizar o "expresar" en
uno o varios momentos de su vida, usando la informacin de dicha secuencia.
La relacin entre la secuencia de nucletidos y la secuencia
de aminocidos de la protena es determinada por un mecanismo celular
de transcripcin, conocido de forma general como cdigo gentico.
En muchas especies de organismos, slo una pequea fraccin del total de la
secuencia del genoma codifica protenas. La funcin del resto es especulativa.
La secuencia tambin determina la susceptibilidad del ADN para
ser cortado por restriccin enzimtica, la quintaesencia de la ingeniera
gentica. La posicin en la que es secuenciada en un genoma individual
determina la huella de ADN. (Por completar)

EL ADN como almacn de informacin


En realidad se puede considerar as, como un almacn de informacin
(mensaje) que se trasmite de generacin en generacin, conteniendo toda la
informacin necesaria para construir y sostener el organismo en el que habita.
Se puede considerar que las obreras de este mecanismo son las protenas.
Estas
pueden
ser estructurales como
las
protenas
de
los msculos, cartlagos, pelo, etc., o bien funcionales como las de
la hemoglobina o las innumerables enzimas del organismo. La funcin
principal de la herencia es la especificacin de las protenas, siendo el ADN
una especie de plano o receta para nuestras protenas. Unas veces la
modificacin
del
ADN
que
provoca
disfuncin
proteica
lo
llamamos enfermedad, otras veces, en sentido beneficioso, dar lugar a lo
que conocemos como evolucin.
Las alrededor de treinta mil protenas diferentes en el cuerpo humano estn
hechas de veinte aminocidos diferentes, y una molcula de ADN debe
especificar la secuencia en que se unan dichos aminocidos,
El ADN en el genoma de un organismo podra dividirse conceptualmente en
dos, el que codifica las protenas y el que no codifica. En el proceso de
elaborar una protena, el ADN de un gen se lee y se transcribe a ARN. Este
ARN sirve como mensajero entre el ADN y la maquinaria que elaborar las
protenas y por eso recibe el nombre de ARN mensajero. El ARN mensajero
instruye a la maquinaria que elabora las protenas, para que ensamble los
aminocidos en el orden preciso para armar la protena.

El dogma central de la gentica es que el flujo de actividad y de informacin


es:
ADN ARN protena
Slo muy raras veces la informacin fluye del ARN al ADN.
ADN LIGASA
ADN ligasa es una enzima que forma enlaces covalentes entre el extremo 5
de una cadena polinucleotdica y el extremo 3 de otra cadena
polinucleotdica. Tambin se denomina enzima de unin de poli nucletidos.
La reparacin por escisin puede ser realizada por 3 enzimas: la
correndonucleasa U.V., iniciadora del proceso, la ADN polimerasa I, que
elimina y reconstruye el fragmento de ADN, y la ADN ligasa, que realiza la
unin de los fragmentos nuevos y antiguos.
ADN POLIMERASA
ADN polimerasa es una enzima que cataliza la sntesis de ADN a partir de
desoxirribonucletidos y de una molcula de ADN plantilla o molde.
Tras la accin de la ADN polimerasa I y una vez que se han eliminado y
aadido alrededor de unas 10 bases, interviene la enzima ADN ligasa que une
los extremos libres del fragmento recin formado con el resto de la cadena,
recuperando as el ADN su estructura normal

ADN FSIL
El estudio del ADN fsil, se usa en paleo gentica, utiliza la reaccin en
cadena de la polimerasa PCR, permitiendo estudiar registros moleculares de
ADN que sean lo suficientemente antiguos, pudiendo realizar secuenciaciones
y estudiar su composicin. Los restos de ADN del fsil ms antiguo que se
conoce (que han podido ser recuperados y ledos) pertenecen a
losneanderthales no sobrepasando los 50.000 aos.
Uno de sus usos ha sido los anlisis comparativos de ADN que concluyen que
en nuestro genoma no hay herencia neandertal

ADN GIRASA

Una de las ADN topoisomerasas que acta durante la replicacin del ADN
para reducir la tensin molecular causada por el supe enrollamiento. La ADN
girasa produce cortes de doble cadena y despus los une.
La ADN girasa, como topoisomerasas, juega un papel muy importante en la
modulacin del estado topolgico del ADN, regulando la estructura supe
helicoidal del mismo.
ADN MITOCONDRIAL
En las clulas eucariotas la mayor parte del cdigo gentico est dentro del
ncleo celular, pero tambin hay orgnulos dentro del citoplasma que
contienen ADN, que es llamado mADN o ADN mitocondrial para diferenciarlo
del ADN nuclear.
El cdigo con el que las mitocondrias representan las protenas es parecido al
nuclear, pero no es igual, hay algunas diferencias.

ADN RECOMBINANTE
ADN recombinante: variedad de tcnicas que los bilogos moleculares utilizan
para manipular las molculas de ADN. El proceso consiste en tomar una
molcula de ADN de un organismo, sea un virus, planta o una bacteria y
llevarla al laboratorio para manipularla y ponerla de nuevo dentro de otro
organismo. Esto se puede hacer para estudiar la expresin de ungen e incluso
en algunos casos, para tratar una enfermedad gentica humana.

Caractersticas e importancia de la replicacin del ADN


El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que permite al ADN
duplicarse (es decir, sintetizar una copia idntica). De esta manera de una
molcula de ADN nica, se obtienen dos o ms "clones" de la primera. Esta
duplicacin del material gentico se produce de acuerdo con un mecanismo
semiconservador, lo que indica que las dos cadenas complementarias del
ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la sntesis de una
nueva cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva
doble hlice contiene una de las cadenas del ADN original. Gracias a la
complementariedad entre las bases que forman la secuencia de cada una de
las cadenas, el ADN tiene la importante propiedad de reproducirse
idnticamente, lo que permite que la informacin gentica se transmita de una
clula madre a las clulas hijas y es la base de la herencia del material
gentico.

La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes
de hidrgeno entre las bases complementarias liberndose dos hebras y la
ADN polimerasa sintetiza la mitad complementaria aadiendo nucletidos que
se encuentran dispersos en el ncleo. De esta forma, cada nueva molcula es
idntica a la molcula de ADN inicial.
La replicacin empieza en puntos determinados: los orgenes de replicacin.
Las protenas iniciadoras reconocen secuencias de nucletidos especficas en
esos puntos y facilitan la fijacin de otras protenas que permitirn la
separacin de las dos hebras de ADN formndose una horquilla de
replicacin. Un gran nmero de enzimas y protenas intervienen en el
mecanismo molecular de la replicacin, formando el llamado complejo de
replicacin o replicona. Estas protenas y enzimas son homlogas en
eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias

Modo de operacin
En cada horquilla de replicacin, la ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan
dos nuevas cadenas de ADN que son complementarias respecto a las 2
cadenas originales. Durante este proceso, la ADN polimerasa reconoce una
base nucleotdica no apareada de la cadena original y la combina con un
nucletido libre que tiene la base complementaria correcta. Luego, la ADN
polimerasa cataliza la formacin de nuevos enlaces covalentes que ligan el
fosfato del nucletido libre entrante con el azcar del nucletido previamente
agregado en la cadena hija en crecimiento. De esta forma, la ADN polimerasa
sintetiza el esqueleto de azcar-fosfato de la cadena hija.
Las ADN polimerasas tambin realizan otras funciones durante el proceso de
replicacin. Adems de participar en la elongacin, desempean una funcin
correctora y reparadora gracias a su actividad exonucleasa 3', que les confiere
la capacidad de degradar el ADN partiendo de un extremo de ste. Es
importante que existan estos mecanismos de correccin ya que de lo contrario
los errores producidos durante la copia del ADN daran lugar a mutaciones.

Punto de origen
Un origen de replicacin es el lugar del cromosoma donde se inicia la
replicacin de la cadena de ADN. Se trata, por lo tanto, de una determinada
secuencia de nucletidos a partir de la cual se desarrolla una horquilla de
replicacin que dar lugar a las dos cadenas idnticas de ADN resultantes.
En los organismos procariotas suele encontrarse un nico origen de
replicacin en su ADN, mientras que en los eucariotas se encuentran
normalmente mltiples orgenes en cada cromosoma, lo que permite una
velocidad razonable de replicacin de las largas cadenas de ADN de estos
organismos. Esta multiplicidad de orgenes en una cadena conforma las
denominadas burbujas de replicacin.

Caractersticas generales
En cada una de las molculas hijas se conserva una de las cadenas
originales, y por eso se dice que la replicacin del ADN es
semiconservadora. Hasta que finalmente se pudo demostrar que la
replicacin es semiconservadora, se consideraron tres posibles modelos
para el mecanismo de la replicacin

Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las molculas


hijas se conserva una de las cadenas originales.

Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva, copia de la


original.

Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de


la cadena antigua y fragmentos de la nueva.

Importancia de la replicacin del ADN


La importancia de la Replicacin del ADN es originar molculas de ADN
hijas cada una de ellas posee la misma informacin biolgica (fenotipogenotipo) otorgada por el ADN progenitor para Transmitir toda la
informacin biolgica desde los progenitores hacia la descendencia.
Como el ADN se replica de manera Semiconservativa, en las molculas
de ADN hijas habr siempre una cadena vieja y otra nueva de
Nucletidos que contienen toda la informacin biolgica del organismo.

Caracterstica e importancia de la transcripcin del ADN


La transcripcin del ADN es el primer proceso de la expresin gnica,
mediante el cual se transfiere la informacin contenida en la secuencia del
ADN hacia la secuencia de protena utilizando diversos ARN como
intermediarios. Durante la transcripcin gentica, las secuencias de ADN
son copiadas a ARN mediante una enzima llamada ARN polimerasa que
sintetiza un ARN mensajero que mantiene la informacin de la secuencia
del ADN. De esta manera, la transcripcin del ADN tambin podra
llamarse sntesis del ARN mensajero.

Etapas de la transcripcin

Pre iniciacin

Al contrario de la replicacin de ADN, durante el inicio de la transcripcin no


se requiere la presencia de un cebador para sintetizar la nueva cadena, de
ARN en este caso. Antes del inicio de la transcripcin se necesitan toda una
serie de factores de transcripcin que ejercen de factores de iniciacin, que se
unen a secuencias especficas de ADN para reconocer el sitio donde la
transcripcin ha de comenzar y se sintetice el ARN cebador. Esta secuencia
de ADN en la que se ensamblan los complejos de transcripcin se llama
promotor. Los promotores se localizan en los extremos 5'-terminales de los
genes, antes del comienzo del gen, y a ellos se unen los factores de
transcripcin mediante fuerzas de Van der Waals y enlaces de hidrgeno. Los
promotores tienen secuencias reguladoras definidas, muy conservadas en
cada especie, donde las ms conocidas son la caja TATA (situada sobre la
regin -10), con la secuencia consenso TATA(A/T) A(A/T); y la caja TTGACA
(situada en el punto -35). La formacin del complejo de transcripcin se
realiza sobre el promotor TATA, all se forma el ncleo del complejo de
iniciacin. Sobre la caja TATA se fija una protena de unin (TBP) junto con el
factor de transcripcin TFII D (TF proviene del ingls: transcription factor).
Despus, a ellos se unen otros factores de transcripcin especficos: TF II A,

que estabiliza el complejo TFII D-ADN; los factores TFII B y TFII E se unen al ADN
y el TFII F (una helicasa dependiente de ATP) y al final la ARN polimerasa.
Todo ello forma un complejo que se llama complejo de pre iniciacin cerrada.
Cuando la estructura se abre por mediacin del factor de transcripcin TF II H,
da comienzo la iniciacin.

Iniciacin

Primero, una Helicasa separa las hebras de ADN en estas denominadas cajas
TATA, ya que la adenina y timina poseen un doble enlace, mientras que la
citosina y guanina poseen uno triple. Posteriormente se unen las protenas de
transcripcin (TBP, TF2D, TF2B) permitiendo, de esta manera, el acceso de la
ARN polimerasa al molde de ADN de cadena simple, siendo esta la ultima en
posicionarse. Aunque la bsqueda del promotor por la ARN polimerasa es
muy rpida, la formacin de la burbuja de transcripcin o apertura del ADN y
la sntesis del cebador es muy lenta. La burbuja de transcripcin es una
apertura de ADN desnaturalizado de 18 pares de bases, donde empieza a
sintetizarse el ARN cebador a partir del nucletido nmero 10 del ADN molde
de la burbuja de transcripcin. La burbuja de transcripcin se llama complejo
abierto. La ARN polimerasa es una enzima formada por 5 subunidades: 2
subunidades , 1 subunidad , 1 subunidad ' y 1 subunidad que tiene
como funcin la unin de ribo nucletidos trifosfato. Cuando se forma el
complejo abierto, la ARN polimerasa comienza a unir ribonucletidos mediante
enlaces fosfodister, y una vez que se forma el primer enlace fosfodister,
acaba la etapa de iniciacin. Y comienza as comienza la siguiente etapa.

Disgregacin del promotor

Una vez sintetizado el primer enlace fosfodister, se debe deshacer el


complejo del promotor para que quede limpio para volver a funcionar de
nuevo. Durante esta fase hay una tendencia a desprenderse el transcrito
inicial de ARN y producir transcritos truncados, dando lugar a una iniciacin
abortada, comn tanto en procariontes como eucariontes. Una vez que la
cadena transcrita alcanza una longitud de unos 23 nucletidos, el complejo ya
no se desliza y da lugar a la siguiente fase, la elongacin.
La disgregacin del promotor coincide con una fosforilacin de la serina 5 del
dominio carboxilo terminal de la ARN polimerasa, que es fosforilado por el TF II
H (que es una protena quinasa dependiente de ATP)

Elongacin

La ARN polimerasa cataliza la elongacin de cadena del ARN. Una cadena de


ARN se une por apareamiento de bases a la cadena de ADN, y para que se
formen correctamente los enlaces de hidrgeno que determina el siguiente
nucletido del molde de ADN, el centro activo de la ARN polimerasa reconoce
a los ribonucletidos trifosfato entrantes. Cuando el nucletido entrante forma
los enlaces de hidrgeno idneos, entonces la ARN polimerasa cataliza la
formacin del enlace fosfodister que corresponde. A esto se le llama
elongacin, la segunda etapa de la transcripcin del ARN.

Terminacin

Al finalizar la sntesis de ARNm, esta molcula ya se ha separado


completamente del ADN (que recupera su forma original) y tambin de la ARN
polimerasa, terminando la transcripcin. La terminacin es otra etapa distinta
de la transcripcin, porque justo cuando el complejo de transcripcin se ha
ensamblado activamente debe desensamblarse una vez que la elongacin se
ha completado. La terminacin est sealizada por la informacin contenida
en sitios de la secuencia del ADN que se est transcribiendo, por lo que la
ARN polimerasa se detiene al transcribir algunas secuencias especiales del
ADN. Estas secuencias son ricas en guanina y citosina, situadas en el
extremo de los genes, seguidas de secuencias ricas en timina, formando
secuencias palindrmicas, que cuando se transcriben el ARN recin
sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo
ARN-ADN, obligando a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizndose la
burbuja de transcripcin. Algunas secuencias de ADN carecen de la secuencia
de terminacin, sino que poseen otra secuencia a la que se unen una serie de
protenas reguladoras especficas de la terminacin de la transcripcin como
rho.

Importancia de la transcripcin del ADN


El ADN por TRANSCRIPCIN codifica (enva mensajes en forma de cdigos)
a partir de una de sus cadenas de nucletidos dentro del Ncleo al ARN
mensajero para que se ejecute la orden en el Citoplasma por Traduccin e
iniciar
la
Sntesis
de
Protenas
celulares.
El ADN tiene un papel importante en la Transcripcin porque inicia o acta
como un Disparador para la Sntesis de Protenas Celulares, por eso el
Dogma
de
la
Biologa
Celular
y
Molecular
es:
ADN
+
ARN
------->
Protenas.

ARN
El ARN es un polmero de ribonucletidos uracilo, citosina, guanina y adenina,
organizado en una banda simple, como la mitad de una escalera con la misma

estructura del ADN: los laterales estn formados por los grupos fosfatos y
azcares de los cuales parte una base nitrogenada.
Para traducir de un idioma a otro se necesitan un diccionario y unas reglas
gramaticales; igualmente, para traducir el ADN a las protenas se necesita una
clave o cdigo gentico de equivalencia, que se denomina Cdigo Gentico.

No todos los genes que existen en una clula se expresan todo el tiempo. A lo
largo del desarrollo y dependiendo de las necesidades celulares, una veces se
expresan unos genes y otras veces otros del cual se origina.
El gen o los genes que se van a expresar se copian primero mediante un
proceso que se denomina transcripcin, y que consiste en que la secuencia
de nucletidos correspondiente al gen en cuestin se transcribe a una
molcula de ARN mensajero (ARNm), que se separa del ADN y viaja desde el

ncleo al citoplasma (si se trata de una clula eucariota). Es como si de toda


la informacin que existe en una norme biblioteca (el ncleo con su inmensa
cantidad de ADN) y se sacara una fotocopia de una sola pgina o de unas
pocas pginas, de un libro.
Por lo tanto la funcin del ARNm es sealar la secuencia de acuerdo con la
cual los aminocidos son incorporados del ADN a los ribosomas para dirigir la
sntesis de protena.
El ARNm posee una sola banda, es lineal complementaria a la del ADN del
cual se origina.
Es metablicamente muy activo; en la clula existen tantos ARN como genes
deben ser transcrito el mensaje escrito en nucletidos tiene que traducirse en
aminocidos.

Biosntesis
La biosntesis de ARN est catalizada normalmente por la enzima ARN
polimerasa que usa una hebra de ADN como molde, proceso conocido con el
nombre de transcripcin. Por tanto, todos los ARN celulares provienen de
copias de genes presentes en el ADN.
La transcripcin comienza con el reconocimiento por parte de la enzima de un
promotor, una secuencia caracterstica de nucletidos en el ADN situada antes
del segmento que va a transcribirse; la doble hlice del ADN es abierta por la
actividad helicasa de la propia enzima. A continuacin, la ARN polimerasa
progresa a lo largo de la hebra de ADN en sentido 3' 5', sintetizando una
molcula complementaria de ARN; este proceso se conoce como elongacin,
y el crecimiento de la molcula de ARN se produce en sentido 5' 3'. La
secuencia de nucletidos del ADN determina tambin dnde acaba la sntesis
del ARN, gracias a que posee secuencias caractersticas que la ARN
polimerasa reconoce como seales de terminacin.18
Tras la transcripcin, la mayora de los ARN son modificados por enzimas. Por
ejemplo, al pre-ARN mensajero eucariota recin transcrito se le aade un
nucletido de guanina modificado (7-Metilguanosina) en el extremo 5' por
medio de un puente de trifosfato formando un enlace 5' 5' nico, tambin
conocido como "capucha" o "caperuza", y una larga secuencia de nucletidos
de adenina en el extremo 3' (cola poli-A); posteriormente se le eliminan los
intrones (segmentos no codificantes) en un proceso conocido como splicing.
En virus, hay tambin varias ARN polimerasas ARN-dependientes que usan
ARN como molde para la sntesis de nuevas molculas de ARN. Por ejemplo,

varios virus ARN, como el polio virus, usan este tipo de enzimas para replicar
su genoma.

Hiptesis del mundo de ARN


La hiptesis del mundo de ARN propone que el ARN fue la primera forma de
vida en la Tierra, desarrollando posteriormente una membrana celular a su
alrededor y convirtindose as en la primera clula. Se basa en la
comprobacin de que el ARN puede contener informacin gentica, de un
modo anlogo a como lo hace el ADN, y que algunos tipos son capaces de
llevar a cabo reacciones metablicas, como auto corte o formacin de enlaces
peptdicos.
Durante aos se especul en qu fue primero, el ADN o las enzimas, ya que
las enzimas se sintetizan a partir del ADN y la sntesis de ADN es llevada a
cabo por enzimas. Si se supone que las primeras formas de vida usaron el
ARN tanto para almacenar su informacin gentica como realizar su
metabolismo, se supera este escollo. Experimentos con los ribosomas
bsicos, como el ARN viral Q-beta, han demostrado que las estructuras de
ARN autor replicantes sencillas pueden resistir incluso a fuertes presiones
selectivas (como los terminadores de cadena de quiralidad opuesta)
Genomas de ARN
El ADN es la molcula portadora de la informacin gentica en todos los
organismos celulares, pero, al igual que el ADN, el ARN puede guardar
informacin gentica. Los virus ARN carecen por completo de ADN y su
genoma est formado por ARN, el cual codifica las protenas del virus, como
las de la cpside y algunos enzimas. Dichos enzimas realizan la replicacin
del genoma vrico. Los viroides son otro tipo de patgenos que consisten
exclusivamente en una molcula de ARN que no codifica ninguna protena y
que es replicado por la maquinaria de la clula hospedadora.

Estructura

ESTRUCTURA PRIMARIA DEL ARN

Al igual que el ADN, se refiere a la secuencia de las bases nitrogenadas que


constituyen sus nucletidos

ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ARN

Alguna vez, en una misma cadena, existen regiones con secuencias


complementarias capaces de aparearse

ESTRUCTURA TERCIARIA DE ARN

Es un plegamiento, complicado, sobre la estructura secundaria.

Tipos de ARN

El ARN mensajero (ARNm) es el tipo de ARN que lleva la informacin del ADN
a los ribosomas, el lugar de la sntesis de protenas. La secuencia de
nucletidos del ARNm determina la secuencia de aminocidos de la
protena.21 Por ello, el ARNm es denominado ARN codificante.
No obstante, muchos ARN no codifican protenas, y reciben el nombre de ARN
no codificantes; se originan a partir de genes propios (genes ARN), o son los
intrones rechazados durante el proceso de splicing. Son ARN no codificantes
el ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr), que son
elementos fundamentales en el proceso de traduccin, y diversos tipos de
ARN reguladores.22
Ciertos ARN no codificantes, denominados ribozimas, son capaces de
catalizar reacciones qumicas como cortar y unir otras molculas de ARN, 23 o
formar enlaces peptdicos entre aminocidos en el ribosoma durante la
sntesis de protenas.

ARN implicados en la sntesis de protenas


Ribosoma 50S mostrando el ARNr (amarillo), las protenas (azul) y el centro
activo, la adenina 2486 (rojo).

ARN mensajero. El ARN mensajero (ARNm o RNAm) lleva la


informacin sobre la secuencia de aminocidos de la protena desde el
ADN, lugar en que est inscrita, hasta el ribosoma, lugar en que se
sintetizan las protenas de la clula. Es, por tanto, una molcula
intermediaria entre el ADN y la protena y el apelativo de "mensajero"
es del todo descriptivo. En eucariotas, el ARNm se sintetiza en el
nucleoplasma del ncleo celular y de all accede al citosol, donde se
hallan los ribosomas, a travs de los poros de la envoltura nuclear.
ARN de transferencia. Los ARN de transferencia (ARNt o tRNA) son
cortos polmeros de unos 80 nucletidos que transfiere un aminocido
especfico al polipptido en crecimiento; se unen a lugares especficos
del ribosoma durante la traduccin. Tienen un sitio especfico para la
fijacin del aminocido (extremo 3') y un anticodn formado por un
triplete de nucletidos que se une al codn complementario del ARNm
mediante puentes de hidrgeno.22
ARN ribosmico. El ARN ribosmico (ARNr o RNAr) se halla
combinado con protenas para formar los ribosomas, donde representa
unas 2/3 partes de los mismos. En procariotas, la subunidad mayor del
ribosoma contiene dos molculas de ARNr y la subunidad menor, una.
En los eucariotas, la subunidad mayor contiene tres molculas de ARNr
y la menor, una. En ambos casos, sobre el armazn constituido por los
ARNr se asocian protenas especficas. El ARNr es muy abundante y
representa el 80% del ARN hallado en el citoplasma de las clulas
eucariotas.25 Los ARN ribosmicos son el componente cataltico de los
ribosomas; se encargan de crear los enlaces peptdicos entre los
aminocidos del polipptido en formacin durante la sntesis de
protenas; actan, pues, como ribozimas.

ARN reguladores
Muchos tipos de ARN regulan la expresin gnica gracias a que son
complementarios de regiones especficas del ARNm o de genes del ADN. .

ARN de interferencia. Los ARN interferentes (ARNi o iRNA) son


molculas de ARN que suprimen la expresin de genes especficos
mediante mecanismos conocidos globalmente como ribo interferencia o
interferencia por ARN. Los ARN interferentes son molculas pequeas
(de 20 a 25 nucletidos) que se generan por fragmentacin de
precursores ms largos. Se pueden clasificar en tres grandes
grupos:26
Micro ARN. Los micro ARN (miARN o RNAmi) son cadenas cortas de
21 22 nucletidos hallados en clulas eucariotas que se generan a
partir de precursores especficos codificados en el genoma. Al

transcribirse, se pliegan en horquillas intramoleculares y luego se unen


a enzimas formando un complejo efector que puede bloquear la
traduccin del ARNm o acelerar su degradacin comenzando por la
eliminacin enzimtica de la cola poli A.27 28
ARN interferente pequeo. Los ARN interferentes pequeo (ARNip o
siARN), formados por 20-25 nucletidos, se producen con frecuencia
por rotura de ARN virales, pero pueden ser tambin de origen
endgeno.29 30 Tras la transcripcin se ensambla en un complejo
proteico denominado RISC (RNA-inducedsilencingcomplex) que
identifica el ARNm complementario que es cortado en dos mitades que
son degradadas por la maquinaria celular, bloquean as la expresin del
gen.31 32 33
ARN asociados a Piwi.34 Los ARN asociados a Piwi son cadenas de
29-30 nucletidos, propias de animales; se generan a partir de
precursores largos monocatenarios, en un proceso que es
independiente de Drosha y Dicer. Estos ARN pequeos se asocian con
una subfamilia de las protenas "Argonauta" denominada protenas
Piwi. Son activos las clulas de la lnea germinal; se cree que son un
sistema defensivo contra los transposones y que juegan algn papel en
la gametognesis.35 36
ARN anti sentido. Un ARN anti sentido es la hebra complementaria (no
codificadora) de un hebra ARNm (codificadora). La mayora inhiben
genes, pero unos pocos activan la transcripcin.37 El ARN anti sentido
se aparea con su ARNm complementario formando una molcula de
doble hebra que no puede traducirse y es degradada
enzimticamente.38 La introduccin de un transgen codificante para un
ARNmantisentido es una tcnica usada para bloquear la expresin de
un gen de inters. Un mARNantisentido marcado radioactivamente
puede usarse para mostrar el nivel de transcripcin de genes en varios
tipos de clulas. Algunos tipos estructurales antisentidos son
experimentales, ya que se usan como terapia antisentido.
ARN largo no codificante. Muchos ARN largos no codificantes (ARNnc
largo o longncARN) regulan la expresin gnica en eucariotas;39 uno
de ellos es el Xist que recubre uno de los dos cromosomas X en las
hembras de los mamferos inactivndolo (corpsculo de Barr).40
Riboswitch. Un riboswitch es una parte del ARNm (cido ribonucleico
mensajero) al cual pueden unirse pequeas molculas que afectan la
actividad del gen.41 42 43 Por tanto, un ARNm que contenga un
riboswitch est directamente implicado en la regulacin de su propia
actividad que depende de la presencia o ausencia de la molcula
sealizadora. Tales riboswitchs se hallan en la regin no traducida 5'
(5'-UTR), situada antes del codn de inicio (AUG), y/o en la regin no
traducida 3' (3'-UTR), tambin llamada secuencia de arrastre,14 situada
entre el codn de terminacin (UAG, UAA o UGA) y la cola poli A

ARN con actividad cataltica


Transformacin de uridina en pseudouridina, una modificacin comn del
ARN.

Ribozimas. El ARN puede actuar como biocatalizador. Ciertos ARN se


asocian a protenas formando ribo nucleoprotenas y se ha comprobado
que es la subunidad de ARN la que lleva a cabo las reacciones
catalticas; estos ARN realizan las reacciones in vitro en ausencia de
protena. Se conocen cinco tipos de ribozimas; tres de ellos llevan a
cabo reacciones de auto modificacin, como eliminacin de intrones o
auto corte, mientras que los otros (ribonucleasa P y ARN ribosmico)
actan sobre substratos distintos.14 As, la ribonucleasa P corta un
ARN precursor en molculas de ARNt, 44 mientras que el ARN
ribosmico realiza el enlace peptdico durante la sntesis proteica
ribosomal.
Espliceosoma. Los intrones son separados del pre-ARNm durante el
proceso conocido como splicing por los espliceosomas, que contienen
numerosos ARN pequeos nucleares (ARNpn o snRNA).45 En otros
casos, los propios intrones actan como ribozimas y se separan a s
mismos de los exones.46
ARN pequeo nuclear. Los ARN pequeos nucleolares (ARNpno o
snoRNA), hallados en el nuclolo y en los cuerpos de Cajal, dirigen la
modificacin de nucletidos de otros ARN; 22 el proceso consiste en
transformar alguna de las cuatro bases nitrogenadas tpicas (A, C, U,
G) en otras. Los ARNpno se asocian con enzimas y los guan
aparendose con secuencias especficas del ARN al que modificarn.
Los ARNr y los ARNt contienen muchos nucletidos modificados.

ARN mitocondrial
La mitocondrias tienen su propio aparato de sntesis proteica, que incluye
ARNr (en los ribosomas), ARNt y ARNm. Los ARN mitocondriales (ARNmt o
mtARN) representan el 4% del ARN celular total. Son transcritos por una ARN
polimerasa mitocondrial especfica

SINTESIS Y LOCALIZACIN DE LOS ARN

En la clula eucarionte los ARN se sintetizan gracias a tres tipos de enzimas:


- ARN polimerasa I, localizada en el nuclolo y se encarga de la sintiese los
ARNr 18 S, 5,8 S y 28 S.
- ARN polimerasa II, localizada en el nucleoplasma y se encarga de la sntesis
de los ARNhn, es decir de los precursores de los ARNm
- ARN polimerasa III, localizada en el nucleoplasma y se encarga de sintetizar
los ARNr 5 S y los ARNm

Funcin del ARN:

ARN mensajero
El ARN mensajero es el cido ribonucleico que contiene la informacin
gentica procedente del ADN para utilizarse en la sntesis de protenas, es
decir, determina el orden en que se unirn los aminocidos.
El ARN mensajero es un cido nucleico monocatenario, al contrario que el
ADN que es bicatenario.
Procesamiento del ARN mensajero en clulas eucariotas
Inicialmente el ARN se conoce como transcrito primario o ARN precursor (preARN), que en la mayora de los casos no se libera del complejo de
transcripcin en forma totalmente activa, sino que ha de sufrir modificaciones
antes de ejercer su funcin (procesamiento o maduracin del ARN). Entre
esas modificaciones se encuentran la eliminacin de fragmentos (splicing), la
adicin de otros no codificados en el DNA y la modificacin covalente de
ciertas bases nitrogenadas. Concretamente, el procesamiento del ARN en
eucariotas comprende diferentes fases:
Adicin al extremo 5' de la estructura denominada caperuza (o CAP, su
nombre en ingls) que es un nucletido modificado de guanina, la 7metilguanosina, que se aade al extremo 5' de la cadena del ARNm transcrito
primario (ubicado an en el ncleo celular). Esta caperuza es necesaria para
el proceso normal de traduccin del ARN y para mantener su estabilidad; esto
es crtico para el reconocimiento y el acceso apropiado del ribosoma.
Poliadenilacin: es la adicin al extremo 3' de una cola poli-A, una secuencia
larga de poliadenilato, es decir, un tramo de RNA cuyas bases son todas
adenina. Su adicin est mediada por una secuencia o seal de
poliadenilacin (AAUAAA), situada unos 20-30 nucletidos antes del extremo
3' original. Esta cola protege al ARNm frente a la degradacin, aumentando su

vida media en el citosol, de modo que se puede sintetizar mayor cantidad de


protena.
En la mayora de los casos, el ARN mensajero sufre la eliminacin de
secuencias internas, no codificantes, llamadas intrones. Esto no ocurre en
clulas procariontes, ya que estas no poseen intrones en su DNA. El proceso
de retirada de los intrones y conexin o empalme de los exones se llama
ayuste, o corte y empalme (en ingls, splicing). A veces un mismo transcrito
primario o pre-ARNm se puede ayustar de diversas maneras, permitiendo que
con un solo gen se obtengan varias protenas diferentes; a este fenmeno se
le llama ayuste alternativo. Ciertas enzimas parecen estar involucrados en
editar el RNA antes de su exportacin fuera del ncleo, intercambiando o
eliminando nucletidos errneos.
El ARN mensajero maduro es trasladado al citoplasma de la clula, en el caso
de los seres eucariontes, a travs de poros de la membrana nuclear.
Al ARN mensajero en el citoplasma se acoplan los ribosomas, que son la
maquinaria encargada de la sntesis proteica. En procariontes, la unin de los
ribosomas ocurre mientras la cadena de ARNmesta siendo sintetizada.
Despus de cierta cantidad de tiempo el ARNm se degrada en sus nucletidos
componentes, generalmente con la ayuda de ribonucleasas.
ARN mensajero en clulas procariotas
El proceso de transcripcin y el de traduccin se realizan de manera similar
que en las clulas eucariotas. La diferencia fundamental est en que, en las
procariotas, el ARN mensajero no pasa por un proceso de maduracin y, por
lo tanto, no se le aade caperuza ni cola, ni se le quitan intrones. Adems no
tiene que salir del ncleo como en las eucariotas, porque en las clulas
procariotas no hay un ncleo definido.-

M TODOS DE ROTUR A DE ACIDOS NUCLEICOS

Existe una gran variedad de procedimientos para conseguir la fragmentacin


De cidos nucleicos.
a) Los mtodos fsicos estn basados en:
- Las fuerzas de cizalla que se originan cuando se obliga a la disolucin que
Contiene a la (macro) molcula nucleica a pasar a travs de una seccin mucho
Menor; para ello se utilizan prensas, agujas unidas a jeringuillas hipodrmicas o
Incluso pipetas normales. Fuerzas anlogas producidas con una batidora o
Agitador de aspas consiguen una rotura semejante (quiz algo ms controlada)
De las largas molculas de DNA. Se produce una mezcla heterognea de
Fragmentos, cuyos tamaos dependen de las fuerzas provocadas, que a su vez
Son funcin de la presin aplicada, la reduccin de la seccin, la velocidad de
Las aspas, el tiempo de agitacin, etc.
- Las ondas de presin producidas por los ultrasonidos. Los sonicadores son
Los equipos que se utilizan para este propsito, y modulan tanto la frecuencia
Como la intensidad de la onda; permiten por lo tanto trabajar en condiciones
Ms controladas y conseguir resultados bastante ms reproducibles. Los
Fragmentos producidos presentan tamaos que se aproximan ms a una
Distribucin gaussiana; la mezcla conseguida es tambin, por supuesto, heteRognea. El tamao medio depende de las condiciones y del tiempo del
Tratamiento.
b) Los mtodos qumicos:
dirigidos a la rotura, en este caso por
Hidrlisis, de enlaces ster fosfrico de la cadena polinucleotdica.
Esta hidrlisis puede ser:

Hidrlisis cida, donde el catalizador de la reaccin son los protones


de
Un cido fuerte (clorhdrico, por ejemplo). El mecanismo de la reaccin
Comienza por la rotura de los enlaces que unen los restos de azcar
(Ribosa o desoxirribosa) y las bases nitrogenadas pricas (A y G),
Provocando la despurinizacin de la molcula, que queda as
Inestabilidad. La continuacin del tratamiento cido conduce a la rotura
De los enlaces fosfodister de la cadena por los puntos que precisamente
Perdieron la base nitrogenada. Este proceso se sigue en algunos casos
Para facilitar la transferencia de grandes molculas de DNA o RNA desde
Geles de agarosa a soportes slidos; es tambin la base de alguna de las
Reacciones utilizadas en el mtodo de secuenciacin de DNA por rotura
Qumica (mtodo de Maxam y Gilbert).
Resulta una mezcla heterognea de mono-, di- y oligonucletidos, en
Concentraciones relativas que dependen de la intensidad de la reaccin.

Hidrlisis bsica, catalizada por los iones OH- de una base fuerte
(Hidrxido sdico, por ejemplo). Es importante sealar que la hidrlisis
Bsica slo acta sobre la cadena del RNA, ya que el mecanismo de esta

Reaccin requiere un OH en 2, tan slo presente en la ribosa de las


Molculas de RNA. Esto permite utilizar este tipo de hidrlisis para
Degradar especficamente el RNA en una mezcla con DNA sin que se afecte
Este ltimo. Es una forma de eliminar el RNA contaminante de una
Preparacin de DNA.
La rotura del enlace fosfoster libera mono-, di- u oligorribonucletidos;
Su concentracin relativa es funcin de la severidad de la hidrlisis.

Hidrlisis
total o parcial, en funcin de las condiciones. Con poca
Concentracin del catalizador (H' o OH-), a una temperatura inferior la
ptima o limitando el tiempo de incubacin se puede conseguir que la
Reaccin de hidrlisis no se realice en su totalidad, es decir que tan slo se
Rompan al azar algunos enlaces ster fosfrico, pero no todos.
El resultado de una hidrlisis parcial es una mezcla heterognea de
Fragmentos oligonucleotdicos, cuyo tamao responde a una curva de
Distribucin de Gauss y donde el tamao medio es funcin de la
Severidad de la reaccin.
c) Los mtodos enzimticos, que, como los anteriores, producen la rotura
De enlaces fosfodister de la cadena polinucleotdica mediante su hidrlisis,
Aunque en este caso
La reaccin est catalizada enzimticamente. A
Travs del control de las condiciones (unidades de la enzima, temperatura,
etc.) Puede conseguirse una hidrlisis total o parcial. Estos mtodos utilizan
Dos tipos de enzimas:
E ndonucleasas inespecficas(RNasas, DNasas), que rompen aleatoriamente los
puentes fosfato de la cadena. No presentan ninguna especificidad de sitio, aun que s
de sustrato. Las DNasas slo hidrolizan enlaces que implican a restos de desoxirribosa;
son dependientes del catin Mg2+ por lo que su accin resulta inhibida en presencia de
agentes quelantes de este tipo de cationes (EDTA, por ejemplo), lo que es explotado en
los procedimientos preparativos de DNA.
Las RNasas son especficas de cadenas de RNA; son enzimas muy activasy difciles de
desnaturalizar de manera irreversible, por lo que se convierten en un riesgo importante
en el aislamiento de RNA. Las nucleasas inespecficas, tanto unas como otras, son muy
tiles a la horade eliminar contaminaciones por alguna de estas dos macromolculas.
Endonucleasas de restriccin (E R), que rompen la doble hebra del DNA por
enlaces especficos. Son nicas en este tipo de accin y, por tanto, herramientas
insustituibles en el anlisis de DNA.

Los fragmentos que se consiguen tras la incubacin con alguna de estas enzimas son
fragmentos especficos (fragmentos de restriccin), resultado de la rotura del
DNA por sitios especficos.
SEPAR ACIN Y PURIFICACIN
Una vez superada la fase de rotura de estructuras, la molcula objetivo del
proceso se encontrar en una solucin/suspensin ms o menos compleja,
mezclada con una gran variedad de otras molculas. La segunda fase del mtodo de
preparacin, la ms complicada, supone el fraccionamiento de esa mezcla mediante
una o, generalmente, varias etapas en las que se hace uso de tcnicas bioqumicas
clsicas de separacin y purificacin. Estas tcnicas aprovechan generalmente el gran
tamao y la naturaleza cida y, por lo tanto, hidroflica de los cidos nucleicos para
lograr su separacin del resto de los componentes de esa mezcla. En su estado
natural, in vivo, las molculas de cidos nucleicos se encuentran asociadas a
protenas (en su mayora bsicas); este hecho, unido a la semejanza en cuanto a
tamao de ambos tipos de molculas(macromolculas) convierte a las protenas en
los contaminantes naturales de los cidos nucleicos. Un segundo acompaante
universal es el otro tipo de cido nucleico: ambos, DNA y RNA, presentan una
enorme semejanza estructural, lo que, en principio, hace difcil su separacin.
Algunas de las tcnicas bioqumicas empleadas son de uso muy general, como:
La sedimentacin; se utilizan distintas variantes de esta tcnica, aunque
destaca por la calidad de sus resultados la sedimentacin en gradientes de
sacarosa, glicerol o, sobre todo, de sales de cesio (cloruro, trifluoroacetato,
etc.); en este ltimo medio se pueden separar, en condiciones adecuadas, las
Molculas de protenas, el RNA, el DNA circular plasmdico y el DNA lineal
Cromosmico; en presencia de bromuro de etidio, las molculas de DNA
Intercalan ese catin entre sus bases nitrogenadas, lo que puede afectar a su
Topologa y a su densidad, permitiendo la separacin de las molculas
Plasmdicas, circulares y covalentemente cerradas

Adems, se utilizan otras tcnicas no tan extendidas, tales como:


La dilisis a travs de membranas: con el fin de eliminar pequeas molculas
(Sales, nucletidos, etc.) Presentes en la disolucin del cido nucleico y que
Puedan afectar a procesos subsiguientes.

La extraccin con disolventes orgnicos.. El fenol, solo o mezclado con


Cloroformo, es muy eficaz en la extraccin de protenas presentes en una

Disolucin de cidos nucleicos; la omnipresencia de stas hace que la


Extraccin con fenol sea una etapa casi indispensable en los procedimientos
Preparativos. El fenol ha de prepararse previamente mediante saturacin con
Una disolucin 0'1 M de Tris-HO a pH 8'0 (para evitar que capte agua de la
Fase acuosa que va a ser extrada) y adicin de algn compuesto reductor, como
El -mercaptoetanol o la hidroxiquinolina (para evitar que se oxide). La
Extraccin posterior de la disolucin del cido nucleico con cloroformo o ter
Permite eliminar totalmente los restos de fenol que puedan haber quedado
En la fase acuosa.
La precipitacin de cidos nucleicos con alcoholes: en presencia de una
cantidad
Suficiente de sal (acetato o cloruro sdico, potsico, amnico, etc.) muchos
Alcoholes provocan esta precipitacin; el etanol o el isopropanol son los de
Uso ms frecuente.
La digestin enzimtica: como ya se ha sealado, las protenas son los
Contaminantes universales en el aislamiento de los cidos nucleicos; adems,
Algunas de ellas presentan actividades enzimticas degradativas (DNasas,
RNasas), capaces de estropear todo un largo proceso de obtencin. Por ese
Motivo, el mtodo preparativo suele incluir una etapa de incubacin con
Proteasas de amplia especificidad (protenas K, pronasa, etc.).Por otro lado,
La separacin de un tipo de cido nucleico del otro, se resuelve simplemente
Con el uso de actividades nucleolticas especficas: la incubacin con RNasa
Elimina la contaminacin por RNA de una preparacin de DNA, y viceversa;
Obviamente, se requiere que la actividad usada se encuentre libre de conTerminacin por la contraria