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Universidad de Panam

Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Tecnologa


Escuela de Biologa

Informe de Laboratorio: Extraccin de ADN


Integrantes:

Carlos Murillo
Lineth Bolvar

8-922-995
8-936- 1464

Prof. Edwin Domnguez (Laboratorio)


Prof. Daniel Emmen (Teora)

Fecha de Entrega: Mircoles, 08 de junio de 2016.

Contenido
Introduccin............................................................................................................................3
Objetivo...................................................................................................................................4
Materiales y Mtodos..............................................................................................................4
1.

Las clulas se rompen abierta para liberar el ADN......................................................4

2.

Filtrado.........................................................................................................................4

3.

La separacin de ADN de las protenas y otros residuos celulares..............................5

4.

Precipitacin de ADN con Alcohol..............................................................................5

5.

Observacin en el Microscopio....................................................................................5

Resultados y Discusin...........................................................................................................6
Figuras y Cuadro...................................................................................................................12
Conclusin............................................................................................................................16
Infografa...............................................................................................................................17

Introduccin
Extraccin de ADN es la tcnica utilizada para aislar el ADN en una muestra biolgica.
ADN (cido desoxirribonucleico) es una molcula larga fibrosa que se puede extraer a
partir de cualquier material biolgico tales como la vida o conservados tejidos, clulas y
partculas de virus. Una serie de procedimientos bsicos se llevan a cabo para aislar y
purificar el ADN. En primer lugar la clula se rompe abierta para exponer su ADN. Esto se
consigue mediante la mezcla o la molienda de la clula. El siguiente paso consiste en
romper y emulsionar la grasa y las protenas que componen la membrana de la clula. Esto
se logra mediante la adicin de ambas soluciones de sal y detergentes. Despus de esto, el
ADN se separa de la solucin lquida mediante la adicin de un alcohol y centrifugacin.
Esto proporciona el ADN purificado listo para su uso en diferentes aplicaciones.
Como se muestra en esta foto (FIGURA 1), ADN, una molcula fibrosa larga, se puede
levantar de una solucin mediante el uso de una varilla de vidrio o palo de madera que,
naturalmente, se envuelve alrededor.

La extraccin de DNA es fundamental para la biotecnologa. Es el punto de partida para


numerosas aplicaciones, que van desde la investigacin fundamental para la toma de
decisiones diagnstico y teraputico de rutina. Extraccin y purificacin son tambin
esenciales para la determinacin de las caractersticas nicas de ADN, incluyendo su
tamao, forma y funcin.
La capacidad de extraer el ADN es de importancia primaria para el estudio de las causas
genticas de la enfermedad y para el desarrollo de diagnsticos y drogas. Tambin es
esencial para la realizacin de la ciencia forense, la secuenciacin de genomas, la deteccin
de bacterias y virus en el medio ambiente y para la determinacin de la paternidad.
(Biotecnology, 2016).

Objetivo

Extraer el ADN de diferentes organismos, mientras que al mismo tiempo aprender

el proceso de extraccin de ADN.


Entender el comportamiento qumico de la molcula de ADN.

Materiales y Mtodos
NOTA: Los instrumentos usados despus del paso 3 han sido colocados en hielo
previamente.
1. Las clulas se rompen abierta para liberar el ADN
a) Fuente de ADN (ms o menos 2500 g de Espinaca)
b) Un pellizco grande de sal de mesa (menos de un ml o 1/8 de cucharadita)
c) El aadir agua fra doble de la cantidad de tu fuente de ADN (ms o menos 300
ml)
Licuar todo a alta velocidad por hasta que se haya triturado.
El licuado separa las clulas de espinaca unas de otras, por lo que se obtuvo una muy
diluida sopa de clulas de espinaca. Debido a que este paso es un revoltijo, ciertas fuentes
de ADN no deben ser usadas.

2. Filtrado
a) Verter el homogneo de clulas de espinaca a travs de un colador dentro de otro
contenedor.
b) Obtener aproximadamente 40 ml del extracto. (Figura 2)

3. La separacin de ADN de las protenas y otros residuos celulares


a) Mezclar alrededor de 1/6 de cantidad de detergente, con respecto a la muestra y
jugo de pia.
b) Verter el extracto de espinaca en tubos de ensayo de vidrio, cada uno ha de 1/3
lleno.
c) Aade la mezcla de detergente lquido y jugo de pia a la muestra y agitar
suavemente. Ser cuidadoso! Si se agita demasiado fuerte se romper el ADN
hacindolo ms difcil de ver. (Figura 3)
d) Verter en los tubos de ensayo la mezcla hasta la mitad. (Figura 4)

Opcional: se puede utilizar como enzima el ablandador de carne en polvo.

4. Precipitacin de ADN con Alcohol


a) Ladea tu tubo de ensayo y lentamente vierte el alcohol (isoproplico al 70-95% o
alcohol etlico) sobre la pared del tubo de manera que forme una capa sobre la mezcla
de Espinaca. Sigue vertiendo hasta que tengas en el tubo aproximadamente la misma
cantidad de alcohol que de mezcla de muestra.

El ADN se elevar desde la mezcla de espinaca hasta la capa de alcohol. Se puede usar un
palito de madera o un gotero, con mucho cuidado, para extraer el ADN que est en el la
capa de alcohol. (Figura 5)

5. Observacin en el Microscopio
a)
b)
c)
d)

Preparar una placa de la muestra. (Figura 8)


Colocar una pequesima porcin de extracto de ADN.
Agregar 2 gotas de azul de metileno.
Observar y hacer indagaciones del resultado.

Resultados y Discusin
1.Por qu se de filtrar la muestra despus de licuarla?
El proceso de filtrado se utiliza para recoger el lquido rico en ADN y separarlo de los
restos celulares y de los otros tejidos de la muestra que se desechan.

2. Cul es el objetivo de usar los instrumentos y el agua previamente enfriados?


El agua fra ayuda a mantener intacto el ADN durante el proceso de extraccin. Cmo?
El enfriamiento ralentiza reacciones enzimticas. Por lo que esto protege el ADN de
enzimas que pueden destruirlo.
Por qu una clula contiene enzimas que destruyen el ADN? Estas enzimas estn
presentes en el citoplasma de la clula (no el ncleo) para destruir el ADN de los virus
que pueden entrar en nuestras clulas y enfermarnos. El ADN de una clula est
generalmente protegida de tales enzimas (llamados DNasas) por la membrana nuclear,
pero la adicin de detergente destruye esa membrana.

3. Cmo se puede obtener un extracto de ADN ms puro?


Con la separacin adicional de protena es posible obtener un extracto de ADN ms puro,
pero no es esencial si se quiere observar el ADN. Ya que el ADN est envuelto en protenas
llamadas histonas ser necesario quitar estas protenas para obtener un extracto de ADN de
mayor pureza. Para eliminar estas histonas, puede utilizar las enzimas proteolticas como la
proteasa. Se pueden comprar las proteasa en una tienda de productos qumicos, tambin se
puede sustituir con una sustancia que es mucho ms fcil de encontrar; se encuentra en el
jugo de la pia, contiene bromelina (proteasa), una sustancia capaz de degradar las
protenas de los aminocidos de los cuales estn compuestos.

4. Qu otras opciones ms hay como fuentes de proteasa, a parte del jugo de


pia?
Los jugos de pia (bromelina) y papaya (papana) contienen un enzima, la papana, que
contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el ADN.

5. Por qu se aadi Jabn lavavajillas (Vel)? Por qu detergente? Cmo


funciona el detergente?
Piense por qu se utiliza jabn para lavar platos o las manos. Para eliminar la grasa y la
suciedad, verdad?
Las molculas de jabn y las molculas de grasa estn hechas de dos partes:

Cabezas, que se adhieren el agua. Colas, que repelen el agua. Ambas molculas de jabn y
grasa se organizan en burbujas (esferas) con la cabeza fuera para hacer frente al agua y sus
colas en el interior de ocultar al agua.

Cuando el jabn se acerca a la grasa, sus

estructuras

similares hacen que se combinan, formando

una bola de jabn

grasienta

membranas de la

clula

tienen dos capas de


molculas de lpidos

(grasa) con
Cuando

las protenas a travs de ellos.


el

detergente se acerca a la clula, captura los lpidos y las

protenas.

Resumen: FIGURA 11

6. Qu funcin tiene la sal de mesa?


Ayuda a eliminar las protenas que se unen al ADN. Tambin ayuda a mantener las
protenas disueltas en la fase acuosa de manera que no precipiten en el alcohol junto con el
ADN.
La sal estabiliza los grupos fosfato cargado negativamente y permite que las hebras de
ADN se agrupen.
El ADN tiene una carga elctrica negativa debido a los grupos fosfato en la cadena
principal, y la carga elctrica hace que sea soluble. Cuando la sal se aade a la muestra, los
iones de sodio cargados positivamente de la sal son atrados por las cargas negativas del

ADN, la neutralizacin de la carga elctrica del ADN. Esto permite que las molculas de
ADN se unan en lugar de repelerse entre s.

7. Qu papel juega el alcohol en el experimento?


El ADN es bastante soluble en agua e invisible, mientras que es insoluble en el alcohol, en
el que se precipita y se hace visible. Mediante la adicin de alcohol a la solucin de
filtrado de ADN en el tubo, el ADN se hace visible.

8.

Cmo estoy perfectamente seguro de que no estoy viendo el ADN? Qu pude


haber hecho mal?

Primero, revisa una vez ms si hay ADN. Busca cuidadosamente burbujas pequeitas cerca
de la capa de alcohol. Comnmente grumos de ADN se unen suavemente a las burbujas.
Si ests seguro de que no ves ADN, entonces el primer paso es estar seguro de que
empezaste con suficiente ADN desde el principio. Muchas fuentes de ADN, como por
ejemplo las uvas, tambin contienen mucha agua. Si la sopa de clulas molidas est muy
aguada, no habr suficiente ADN visible. Para arreglar esto regresa al primer paso y aade
menos agua. La sopa de clulas debe ser opaca, lo que significa que no debes poder ver a
travs de ella.
Otra posibilidad por la cual no puedes ver ADN es por no dar suficiente tiempo para que
cada reaccin ocurra. Asegrate de que la mezcla con el detergente est bien hecha y que
repose por al menos 5 minutos. Si las membranas de las clulas y del ncleo estn an
intactas, el ADN estar sumergido en la capa del fondo. Regularmente, si se dela reposar el
tubo de ensayo con la mezcla de espinacas y alcohol por 30-60 minutos, el ADN se
precipitar dentro la capa de alcohol.

9.

Por qu se forman los grumos de ADN?

Las molculas de ADN, cuando estn separadas, son largas y fibrosas. Cada clula de tu
cuerpo contiene seis pies de ADN, pero el mismo tiene slo una millonsima de pulgada de
ancho. Para poder meter todo este ADN dentro de tus clulas debe estar empacado
eficientemente. Para resolver este problema, el ADN se enrolla de manera muy apretada
formando grumos dentro de las clulas. Aun cuando se extrae el ADN de las clulas, ste se
agrupa en grumos pero no tan ajustados como los que estaran dentro de la clula.
Imagnate esto: el cuerpo humano contiene un trilln de clulas, cada una de las cuales
contiene seis pies de ADN. Si haces los clculos, te dars cuenta que nuestros cuerpos
contienen ms de un billn de millas de ADN!

10.

Puedo usar este ADN como muestra para realizar una electroforesis en gel?

S, pero todo lo que veras ser una mancha. El ADN que extrajiste es genmico, lo que
significa que tienes todo el ADN de cada clula. Amenos que cortes el ADN con enzimas
de restriccin, este es demasiado largo y pegajoso para que se mueva a travs de los poros
del gel. O sea que, en vez de ver los grumos, todo lo que veras ser una mancha.

11.

El precipitado blanco y pegajoso no es de hecho una mezcla de ADN y ARN?

Es correcto. El procedimiento para extraer ADN es en realidad un procedimiento para


extraer cidos nucleicos. De cualquier modo mucho del ARN es cortado por ribo nucleasas
(enzimas que cortan ARN) las cuales son liberadas cuando la clula se rompe y abre
completamente.

12. Puedo usar un microscopio para determinar el ADN que extraigo?


Por desgracia, el microscopio no permitir que le permite ver la estructura de doble hlice
de la molcula de ADN. Slo ver un desastre masivo de muchas, muchas molculas de
ADN agrupadas (Figura 9). De hecho, la anchura de la doble hlice de ADN es de
aproximadamente una mil millonsima parte de un metro. Esto es mucho demasiado
pequea para ver, incluso con el microscopio ms potente. En su lugar, una tcnica llamada
cristalografa de rayos X se puede usar para producir una imagen de la molcula de ADN.
Fue examinado tal cuadro (tomada por Rosalind Franklin) que James Watson y Francis
Crick fueron capaces de averiguar lo que la molcula de ADN se parece.

13. Hay diferencias entre fuentes de ADN y las cantidades de ADN que producen?
Diferentes fuentes de ADN producidos diferentes cantidades de ADN. Las molculas
pueden interferir con la extraccin de ADN, que se unen al ADN y evitan que se precipite.
Cuando se extrae una gran cantidad, hay menos sustancias interferentes. La misma fuente
de ADN producidos diferentes cantidades en cada tubo de ensayo. La cantidad de ADN
extrado depende de la fuente: nmero de clulas, la edad, la frescura y el contenido de
agua. El exceso de agua aadida a la fuente, o si la fuente tiene un alto contenido de agua
produce menos DNA.

Ilustracin 1

Figuras y Cuadros

FIGURA 1

FIGURA 3

FIGURA 2
FIGURA 4

FIGURA 7

Comparacin ADN de
hgado (izq.) espinaca (der.)

FIGURA 6

FIGURA 8

FIGURA 5
FIGURA 9

FIGURA 10

FIGURA 21

Conclusin
La tcnica utilizada para aislar el ADN de una muestra biolgica, es un proceso muy
sencillo, que se puede realizar con cualquier cosa viviente. Porque todo ser viviente
contiene su ADN.
La extraccin del ADN, se puede resumir en tres fases:
Liberacin del ADN del ncleo de la clula
Limpieza de Residuos
Precipitacin.
EL ADN como molcula tiene su propio comportamiento. Por tanto es necesario conocerlo
para poder extraerlo con xito. Primero que todo saber dnde se encuentra, en ncleo.
Cmo sacarlo de dnde se encuentra? rompiendo la bicapas de fosfato del ncleo. Una vez
liberado, cmo se hara el ADN insoluble, de forma visible? Se logra estabilizando las
cargas de los grupos fosfatos de la molcula. Esto permitir que se agrupe. Cmo puedo
hacer el extracto ms puro? Rompiendo las protenas llamadas Histonas que hacen que la
molcula de ADN se condense. Si estas protenas siguen presentes la molcula de ADN
tiende a convertirse en una molcula ms pequea invisible, porque esa es la funcin de las
histonas, condensar el ADN.
Cmo se puede extraer? Mediante la precipitacin, lograda al agregar alcohol al 90%, que
es menos denso que la muestra, pero tambin porque el ADN es insoluble en alcohol.
Lo que se observa ser ms ni menos que cmulos de cromtidas, teidas con azul de
metileno. Porque ser imposible observar la doble hlice como tal con un microscopio.
Los resultados de extraccin se vern afectado a un cien por ciento del protocolo seguido.
Siendo factores a afectarse como la pureza y cantidad del ADN extrado. De importancia
primaria para el estudio de las causas genticas de la enfermedad y para el desarrollo de
diagnsticos y drogas. Y otras ms utilidades como lo fue la codificacin del genoma
humano.

Infografa

WhatIsBiotechnology.org, 2001. DNA Extraction. Recuperado de:


http://www.whatisbiotechnology.org/science/extraction . (Fecha de consulta:

29/5/2016).
University of Utah, Genetics Science Learning Center, 2008. How to Extract DNA
from Anything Living. Recuperado de:
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/ howto/ . (Fecha de Consulta:
5/6/2016).
The University of Waikato, Biotecnology Learning Hub. DNA Extraction.
Recuperado de: http://biotechlearn.org.nz/themes/dna_lab/dna_extraction (Fecha de
consulta: (8/6/2016).