UNIDADDEINVESTIGACINYDESARROLLODEALIMENTOS

Maestra en Ciencias en Ingeniera Bioqumica

3er Congreso Nacional de Investigacin del Cambio Climtico en Mxico

AislamientoySeleccin
deLevadurasparalaProduccindeEtanoldurante
laFermentacinEspontneadeJugodeSorgoDulce
Presenta:
Dra.Ma.GuadalupeAguilarUscanga
Colaboradores:
DazNavaL.E.,PartidaSedasG.,
UribeGmezS.,RebolledoGarcaR.E.,
GmezRodrguezJ.,MontesGarcaN.

Sitan a los biocombustibles lquidos

como una alternativa energtica renovable

Fuente alternativa de energa por contribuir a la

reduccin del efecto invernadero

Almodares etal.,2008

Bioetanol, alcohol derivado de materiales

biolgicos, actualmente empleado directamente
como combustible o como un aadido a la gasolina
en distintas concentraciones.

Nmero de octanos
y promueve una mejor
combustin
Emisiones
contaminantes

El bioetanol constituye alrededor del 90% del

biocombustible producido a escala mundial.
Almodares etal.,2008;SAGARPA,2011

2ADP

Glucosa

2ATP

2Piruvato

Glicolisis

2NAD+

2NADH +H+

2CO2

2Piruvato

2Acetaldehdo

Piruvato
Descarboxilasa

Alcohol
Deshidrogenasa

2Etanol

Y P/S = 0.51 g/g

Bioqumica 3Edicin.(2002)C.K. Mathews,K.E.vanHolde,K.G.Ahern. Pearson EducacinS.A.

Diferentes materias primas ricas en:

Azcares (caa de azcar, remolacha azucarera, sorgo dulce)
Almidones (trigo, maz, cebada, yuca)
Celulosa (desechos agrcolas, forestales y municipales)

Buenoetal.,2009

Familia Gramneas
Altura aprox. De 1 a 3 metros
(dependiendo subespecie)
Cultivo Comparable con la Caa de
Azcar
Alto contenido de azcares
Cosechar varias veces al ao
Ms resistentes a la sequa, salinidad
e inundaciones
Almodares etal.2009

Sorgo

Uso

Sorgo grano

Alimento para humanos

y animales domsticos

Sorgo forrajero

Forraje para Ganado

Sorgo Dulce
(Jugo)

Produccin de etanol,
azcar, jarabes

Sorgo de alta biomasa

Biomasa lignocelulsica
para la produccin de
etanol

Sacarosa
Glucosa
Fructosa

6-21%
9-33 %

53-85%

Tallo rico en azcares fermentables

(16-23%)
Tiene un periodo corto de crecimiento
de alrededor 4-5 meses
Crece en zonas templadas
Toda la planta se puede utilizar
(grano, tallo y jugo de biomasa
lignocelulsica)

Composicin de azcares
simples en el jugo de
sorgo dulce
Buenoetal.2009;Mamma etal.,1996yPhowchinda etal.,1997

Material Biolgico

Medio de Cultivo

Bacterias
Hongos
Levaduras

Fuente de Carbono
Fuente de Nitrgeno
P,S,K,Mg

Condiciones Ambientales

Modo de Operacin

Temperatura
pH
Aireacin
Agitacin

Lote
Lote Alimentado
Continuos

Y P/S
Productividad

Productos Secundarios

Inhibicin por Sustrato (altas concentraciones de azcar)

Inhibe el crecimiento celular y la actividad fermentativa
Incremento de la presin osmtica , disminuye la produccin de Etanol

[ Glucosa ] 160 g/L

OrtizZamora,2006;Martinetal,2008;OrtizMuiz,2010

Son capaces de utilizar una gran variedad

de sustratos (glucosa, fructosa, sacarosa)
Son mas resistentes al etanol y presentan
mayores rendimientos.
Ricas en esteroles, por lo que mantienen
por ms tiempo su actividad fermentativa
Menos probable la contaminacin por
bacterias acido lcticas

Kyyper,2006

Fcil propagacin

Acido Tolerantes

Genticamente estables

Tolerantes a Etanol

Resistentes a compuestos Txicos

Osmotolerantes

Capaz de utilizar varios sustratos

Termotolerantes

Resistentes a bajos pH

Actividad killer

Deficiencia Respiratoria

Panchal,1990yHutter yOliver,1998

Osmotolerancia
Capacidad que tienen las levaduras para crecer en un
medio con altas concentraciones de azcares
[ Azcares ] 250 g/L

Vel. De Produccin de Etanol

Reedetal.1998;Walker,1998

Aislamiento y Seleccin
Levaduras Aisladas de Melaza de Caa de Azcar
Salcedo, 2008

Ortiz-Zamora, 2006

Criterios de Seleccin
Velocidad de Crecimiento
Osmotolerancia
Tolerancia Etanol
Produccin de Etanol

Osmotolerancia
Tolerancia Etanol
Produccin de Etanol
Actividad Killer

9 Cepas

5 Cepas

[ Etanol ] 5-10 % v/v

[ glucosa ] 24 % p/v

[ Etanol ] 5-7 % v/v

[ glucosa ] >20% p/v

Aislamiento e Identificacin

Fuente de
Aislamiento

Mtodo de Identificacin de
Levaduras

Microorganismos

Referencia

Cacao

Amplificacin de las regiones

ITS1-5.8S-ITS2

Saccharomyces spp.
Pichia spp.
Candida spp.

Modad en curso

Agave

Amplificacin de las regiones

ITS1-5.8S-ITS2

Saccharomyces cerevisiae

Segura et al. 2010

Vinos austriacos

Secuenciacin de la regin D1/D2 del

gen 26 S rRNA

Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces bayanus

Lopandic et al. 2008

Cerveza de sorgo

Secuenciacin de la regin D1/D2 del

gen 26 S rRNA

Saccharomyces
cereviseiae
Kluyveromyces maxianus

Maoura et al. 2005

Taxonoma convencional

Schizosaccharomyces pombe
Saccharomyces cerevisiae
Kluyveromyces maxianus

Fundora et al. 2005

Caa de azcar

Produccin de etanol a partir de jugo de

sorgo dulce
Microorganismo usado en la
Fermentacin

Rendimiento de Etanol
(g/g )

Eficiencia
(%)

Referencia

Saccharomyces cerevisiae CFTR 01 y

SG

0.39-0.48

76-94

Ratnavathi et
al. 2010

Saccharomyces cerevisiae

0.42-0.45

82-90

Balint Sipos et
al. 2009

Saccharomyces cerevisiae TISTR

5048

0.42-0.48

82-94

Laopaiboon et
al. 2007

Saccharomyces cerevisiae (Nanyang)

0.43-0.46

84-91

Liu et al. 2008

Rendimiento Terico

Y P/S = 0.51 g/g

 Fermentaciones alcohlicas espontneas no se deben a una nica cepa de

levadura, sino que es el resultado de la accin combinada de diversas especies de

estas.
Se sabe que es mas efectivo el uso de cultivos autctonos de levaduras ya que se
encuentran adaptadas a las condiciones climticas de la zona y a la materia prima a
fermentar
Debido a la problemtica que existe en el proceso de fermentacin alcohlica : la
inhibicin por sustrato; aislar y seleccionar levaduras procedentes de la
fermentacin del jugo de sorgo dulce que contrarresten estos efectos, permitir
optimizar e impulsar a una mejora progresiva en el rendimiento y productividad del
proceso.

Aislar y Seleccionar Cepas de Levaduras

Productoras de Etanol Durante la Fermentacin
Espontnea del Jugo de Sorgo Dulce

Caracterizar el jugo, obtenido a partir de las diferentes

variedades de sorgo dulce

Aislar cepas de levaduras productoras de etanol durante la

fermentacin espontnea de jugo de sorgo dulce

Seleccionar las cepas de levaduras que presenten

osmotolerancia para la produccin de etanol

21 variedades de Sorgo dulce de

ALTA y BAJA densidad
poblacional

Volumen de jugo
pH
Brix
Azcares totales

1ml
Diferentes
variedades de
sorgo dulce

1ml

1ml

1ml 1ml

36 h
30C
250 rpm

1x 10 -4 mL
1x 10 -5 mL
Componente

g/L

Extracto de Levadura

10

Glucosa

20

Agar

25

Antibitico

0.1

9 ml H2O
Medio Cultivo Sinttico
de Aislamiento

Seleccin Primaria
Etanol Y P/S > 0.35 g/g
Eficiencia 70%

Osmotolerantes ( 100,150, 200, g/L )

Glucosa

Seleccin Secundaria
Componente

g/L

Extracto de Levadura

Glucosa

50

KH2PO4 (fosfato monobsico)

(NH4)2SO4 (sulfato de amoniaco)

MgSO47H2O (sulfato de
magnesio)

0.6

Medio Cultivo Sinttico

Caracterizacin
Tratamiento

Variedades de
Sorgo dulce

Volumen de Jugo
(mL) Alta Densidad

Azcares
totales (g/L)

Volumen de Jugo
(mL) Baja Densidad

Azcares
totales
(g/L)

T2

RB- CAERO

378.3

27.3

303.3

26.9

T3

ETANOL-1

926.7

87.2

686.7

85.1

T4

ETANOL-2

933.3

96.7

730.0

66.2

T5

DALE

893.3

138.5

620.0

78.8

T9

SBA-25

610.0

81.2

546.7

48.3

T10

SBA-22

390.0

51.0

240.0

31.7

T11

SBA-25XURJA

670.0

79.4

660.0

56.6

T12

SBA-25XSUREO

800.0

61.4

593.3

27.2

T13

SBA-25XTAN-1

686.7

92.3

495.0

41.9

T14

SBA-25XCAERO

566.7

24.5

450.0

15.4

T15

SBA-25XDALE

596.7

73.8

765.0

39.0

T16

SBA-25XTOPPER

793.3

74.9

576.7

41.6

T17

SBA-25XTHEIS

770.0

56.8

615.0

63.5

T19

SBA-22XTAN-1

970.0

85.6

536.7

105.6

T20

SBA-22XDALE

725.0

89.4

590.0

81.8

T21

SBA-22XCAERO

766.7

32.7

466.7

29.8

T22

SBA-22XTAN-2

760.0

57.3

570.0

50.5

T23

SBA-22XDULCE

560.0

47.6

373.5

30.5

T24

SBA-22XSUREO

695.0

20.9

405.0

67.7

T25

NORTEO

390.0

25.7

480.0

13.4

T26

HUASTECO

575.0

47.6

470.0

56.0

21 Variedades De
Alta Densidad

Azcares Totales 50-140 g/L

Volumen 600-900 mL
pH 5.45-5.55

AISLAMIENTO
Fermentacin Espontnea
De Jugo De Sorgo Dulce

60 CEPAS
[Etanol] 6 g/L
a partir de 20g/L de glucosa

SELECCIN
60 CEPAS

22 CEPAS

Etanol Y P/S > 0.35 g/g

Eficiencia 70%

SELECCIN
0.6

Y P/S (g/g)

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
S1

S2

S5

S6

S8

S11 S16 S17 S18 S19 S23 S26 S27 S30 S35 S41 S42 S43 S44 S49 S51 S64

CEPAS PRODUCTORAS DE ETANOL

Etanol Y P/S = 0.35-0.38 g/g

6 CEPAS
Etanol Y P/S = 0.4 g/g

OSMOTOLERANCIA
% Conversin de Glucosa
CEPA

% Conversin de Glucosa
CEPA

100g/L

150 g/L

200 g/L

100g/L

150 g/L

200 g/L

S1

74.28

52.62

32.85

S26

71.49

49.65

32.41

S2

95.49

49.76

32.20

S27

74.20

50.18

30.02

S5

75.31

52.46

31.09

S30

74.01

50.19

32.56

S6

70.61

53.92

31.47

S35

71.37

49.81

31.90

S8

73.25

53.26

29.50

S41

75.87

51.27

33.45

S11

71.64

51.47

29.67

S42

76.04

52.53

36.36

S16

74.14

51.14

34.94

S43

72.10

51.22

32.33

S17

72.93

49.98

31.51

S44

71.51

50.62

29.97

S18

75.55

54.41

33.03

S49

27.47

18.77

21.65

S19

73.09

53.06

29.50

S51

24.35

29.27

17.31

S23

38.51

46.92

16.29

S64

54.77

35.13

22.08

18 CEPAS

OSMOTOLERANCIA

1.2

1.2

0.8

0.8

QP (g/Lh)

QP (g/Lh)

Efecto de la concentracin inicial de glucosa sobre la productividad de etanol

0.6
0.4

0.6
0.4
0.2

0.2

0
S1

S2

S5

S6
S8 S11 S16 S17 S18
CEPAS PRODUCTORAS DE ETANOL

S19

S23

S26

S27

S30

S35

S41

S42

S43

S44

S49

S51

S64

CEPAS PRODUCTORAS DE ETANOL

Glucosa (g/L): 100 (), 150 (), 200 ()

QP (g/Lh) 0.8 g/g

[GLUCOSA]

QP
Ortiz-Zamora et al. (2007)

El jugo de las variedades de alta densidad de sorgo dulce evaluado, contiene altas
concentraciones de azcares fermentables (50-140 g/L), pH que se encuentran entre los
5.45-5.55 los cuales favorecen el proceso de fermentacin alcohlica adems de poseer
una gran fuente de cepas con potencial para utilizarse en la produccin de bioetanol
60 cepas se aislaron ,de las cuales 22 de ellas obtuvieron rendimientos por arriba del
0.35 g/g en cuanto a la produccin de etanol
Se evalu la osmotolerancia en las 22 cepas seleccionadas a diferentes concentraciones
de glucosa, 18 cepas presentaron caractersticas osmotolerantes hasta los 200 g/L de
sustrato inicial, lo cual resulta de gran inters para la produccin biotecnolgica de
bioetanol, sin embargo se deben realizar otros trabajos para el mejoramiento del proceso.