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Laboratorio de Inmunologa General

Semestre 2017-1
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EJERCICIO EXPERIMENTAL No 2

Identificacin de la estructura de los rganos linfoides primarios y secundarios


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OBJETIVO

Identificar la estructura y localizacin de los diferentes rganos linfoides primarios y


secundarios a travs de sus caractersticas morfolgicas y de afinidad por colorantes.
CMO?

A travs de la diseccin en ratones y la tincin tipo Romanowsky.


MATERIALES
Microscopio ptico
Portaobjetos

Agujas
Guantes
Jeringa de 1mL
Tela de organza
Tabla de diseccin
Cronmetro
Aceite de inmersin
Colorantes de DADE Diff-Quik .
Solucin fijadora: 1.8 g/L Triarilmetano en alcohol metlico
Solucin I: 1 g/L Xanteno
Solucin II: 1.25 g/L Thiazine (Mezcla de 0.625 g/L de azur A y 0.625 g/L de azul
de metileno)

Ver video de youtube: https://www.youtube.com/watch?v=errQlZ28Q9k

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
SESIN No1

Localizacin de los rganos linfoides.


Sacrificar al ratn por dislocacin cervical o utilizando camara de CO2
Fijar el ratn a la tabla de diseccin utilizando agujas
Rociar alcohol sobre el ratn para facilitar el manejo del mismo y evitar el
desprendimiento de pelo
Realizar una incisin en V en la piel del ratn en regin abdominal del mismo,
retirar con cuidado la piel del ratn hacia los lados y comenzar la extraccin de los
ganglios linfticos y posteriormente el timo. (Apoyarse con el esquema y el video)
Depositar 3 ganglios en 0.5 mL de PBS en una placa de 6 pozos.
Disgregar el tejo con ayuda de una aguja.
Depositar el timo en 0.5 mL de PBS en una placa de 6 pozos.
Obtener el bazo y cortar una seccin de alrededor de 0.04 g.
Colocar el tejido en 0.5mL de PBS y disgregar con la ayuda del embolo de una
jeringa de 1 mL y tela de organza.
Una vez obtenidas las suspensiones celulares.
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Colocar una gota de la suspensin celular en un portaobjetos limpio y
desengrasado.
Cubrir con 100 L de Diff-Quik Fixative (solucin fijadora) dejar actuar durante 1
minuto.
Escurrir la solucin e inmediatamente colocar 100 L de Diff-Quik Solucin I
(Colorante acido) y dejar actuar 30 segundos.
Escurrir la solucin e inmediatamente colocar 100 L de Diff-Quik Solucin II
(Colorante Bsico) y dejar actuar 60 segundos.
Lavar con agua.
Dejar secar aireando el portaobjetos
Observar al microscopio ptico con el objetivo de 40X y posteriormente a
100X utilizando aceite de inmersin o aceite de blsamo de Canad.
2. Observar al microscopio las preparaciones de bazo, ganglios, timo y placas de
sller,
ayudarse del Anexo 3 para la identificacin de los diversos componentes.
Sesin No 2
1. Observar al microscopio ptico con el objetivo de 40X y posteriormente a 100X
utilizando aceite de inmersin o aceite de blsamo de Canad.
2. Observar al microscopio las preparaciones de bazo, ganglios y timo, ayudarse del
Anexo 2 para la identificacin de las poblaciones celulares
3. Observar al microscopio las preparaciones de cortes histolgicos de bazo,
ganglios y timo, ayudarse del Anexo 3 para la identificacin de las diferenets
estructuras.

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ANEXO1.
Esquema de los rganos linfoide primarios y secundarios de ratn

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ANEXO 2
Caractersticas de los rganos linfoide primarios y secundarios
Bazo:
Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que
ocupa casi toda la clula.
Macrfagos: son los leucocitos de mayor tamao, poco frecuente, ncleo grande, laxo y
redondo.
Clulas dendrticas: Mayores que los linfocitos muy poco frecuentes, con una gran
cantidad de prolongaciones citoplasmticas.
Ganglio:
Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que
ocupa casi toda la clula.
Macrfagos: son los leucocitos de mayor tamao, poco frecuente, ncleo grande, laxo y
redondo.
Clulas dendrticas: Mayores que los linfocitos muy poco frecuentes, con una gran
cantidad de prolongaciones citoplasmticas.
Timo:
Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que
ocupa casi toda la clula.

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Anexo 3.
Cortes histolgicos de Timo, Bazo, Ganglios y Placas de Peyer.
TIMO
El timo est rodeado de una delgada cpsula de tejido conectivo que se proyecta hacia el interior
como septos dividiendo al rgano en lobulillos. En cada lobulillo se aprecia una corteza de linfocitos
densamente agrupados y una mdula ms clara. El timo carece de ndulos linfoides y est
sostenido por clulas reticulares epiteliales. Los corpsculos de Hassall son exclusivos del timo y
se localizan en la mdula. Son estructuras redondeadas y acidfilas constituidas por clulas
epiteliales aplanadas dispuestas en forma concntrica, que pueden sufrir queratinizacin y
calcificacin en la zona central.

PLACAS DE PEYER
Las placas de Peyer estn formadas por agregados de ndulos linfoides situados en la lmina
propia y submucosa de intestino delgado, particularmente leon. Se pueden apreciar en ocasiones
los centros germinales. El tejido linfoide difuso entre dichos folculos linfoides est formado por
linfocitos T.

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GANGLIOS LINFTICOS
En periferia se distingue el tejido conjuntivo capsular fibroso por debajo del cual aparece el seno
subcapsular como un espacio vascular que en determinados puntos es difcil de apreciar, en la
parte cortical se observan folculos secundarios y tejido linfoide difuso quedando una porcin
central correspondiente a la zona medular rica en vasos sanguneos y senos linfticos.

BAZO
La seccin esplnica muestra una cpsula fibrosa de la que se desprenden trabculas o septos
que dividen parcialmente al parnquima esplnico. El bazo consta de una porcin conocida como
pulpa blanca o pupa roja. La pulpa blanca esta situada periarteriolarmente (alrededor de las ramas
de la arteria esplnica central) formando estructuras envolventes o vainas cilndricas conocidas
como vaina linfoide periarteriolar que se mantienen parcialmente separadas de la pulpa roja por
una capa de tejido linfoide laxo conocida como zona marginal. Dentro de la pulpa blanca las clulas
linfoides se distribuyen tanto de forma dispersa como agrupadas en folculos. La pulpa roja
formado por senos venososo y cordones celulares (cordones de Billroth).

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