Incluso los pulmones infectados, tienen una piscina de tamao considerable de

los neutrfilos, tanto marginados(Es decir, adyacente a la superficie endotelial

luminal) y tambin en los tejidos(Es decir, despus de haber atravesado el
revestimiento endotelial en los pulmones). Durante la infeccin, los monocitos
en el parnquima pulmonar promueven la redistribucin de los neutrfilos,
estimulando a la extravasacin en los pulmones y el enjambre para formar
grupos de neutrfilos, como se ha mostrado en los tejidos perifricos, como se
discuti arriba (28). En la ausencia de monocitos, los neutrfilos se adhieren,
pero no atraviesan el endotelio.
Los neutrfilos en los rganos linfoides
Se ha hecho evidente que los neutrfilos entran en los rganos linfoides, donde
pueden modular la respuesta inmune adaptativa. Las quimiocinas, CCL19 y
CCL21 liberadas de los ganglios linfticos atraen a sus receptores CCR7 en los
neutrfilos para estimular la migracin a los ganglios linfticos 65.
Considerando que el conjunto de receptor-ligando gua a las clulas dendrticas
a los ganglios linfticos, los neutrfilos parecen inhibir en lugar de aumentar la
respuesta de las clulas T CD4 + y las clulas B a la inmunizacin. 66
Los neutrfilos infiltrados de los ganglios linfticos producen el factor
protrombtico de tromboxano A2 y ambos reducen el contacto entre las clulas
dendrticas y las clulas T e inhiben la lejana migracin de las clulas T a los
ganglios linfticos ms centrales, posiblemente por el tromboxano A2
-constriccin vascular mediada. 67.
Mieloperoxidasa (MPO), una protena importante de grnulos de neutrfilos
azurfilos que es esencial para la produccin de cido hipocloroso microbicida
(HOCl) 68, inhibe la proliferacin y la activacin de las DC, disminuyendo de
ese modo sus nmeros en el drenaje de ganglios linfticos.
En consecuencia, las clulas T CD4 + en los ganglios linfticos exhiben
actividad reducida y la disminucin de las respuestas a antgeno. En apoyo del
concepto de que MPO influye en la actividad de las clulas T CD4 +, los ratones
con deficiencia de MPO se desarrollan ms inflamacin de las articulaciones en
un modelo de artritis inflamatoria autoinmune dependiente de la activacin de
las clulas T CD4 +. 69. Tales efectos supresores de los neutrfilos en el
sistema inmune adaptativo puede ser visto como un freno de avance para
reducir la destruccin de tejidos.
Los neutrfilos mejoran la inmunidad adaptativa local durante la infeccin
pulmonar por Mycobacterium tuberculosis. Las primeras clulas que acumulan
y fagocitan M. tuberculosis durante la infeccin, los neutrfilos secretan ambas
CCL19 y CCL21, posiblemente, para atraer DC que podran ingerir M.
tuberculosis -neutrfilos cargados y primeras clulas dendrticas para expresar
CCR7 para la migracin ms rpida de los ganglios linfticos y la activacin de
las clulas CD4 + que drenan Las clulas T. 70
En la zona del manto del bazo reside una poblacin especializada de los
neutrfilos condicionadas por IL-10 a partir de clulas endoteliales locales y

macrfagos expuestos a la endotoxina. Llamados 'B' ayudante de clulas de

neutrfilos, estas clulas secretan la activacin de clulas B y factores de
supervivencia BAFF, ABRIL e IL-21, induce el cambio de clase de
inmunoglobulina de las clulas B y extender las protuberancias de la
membrana que contactan directamente las clulas B. 71.
Aunque no es un rgano linfoide en s, la mdula sea contiene clulas CD8 +
T de memoria y, en determinadas circunstancias, los neutrfilos pueden
participar ms directamente en la presentacin de antgenos. Un elegante
estudio ha demostrado que los neutrfilos pueden adquirir antgeno de la
dermis y transportarlo a la mdula sea, por encima de ganglios linfticos de
drenaje, como parte del buscador de blancos CXCR4 dependiente descrito
anteriormente. El retorno de los neutrfilos cargadas con antgeno de la dermis
a la mdula sea depende estrictamente de la CCR1 receptor de quimioquinas.
macrfagos residentes en la mdula sea ingieren de neutrfilos antgeno
cargado y antgeno presente en las clulas T CD8 + para la generacin de
clulas T de memoria. 72

Los neutrfilos pueden adoptar directamente las caractersticas estructurales y

funcionales de las DCs, incluyendo proyecciones citoplasmticas, ncleos
redondos, y la expresin de CD11c y las molculas presentadoras de antgeno
de mayor complejo de histocompatibilidad clase II y clulas estimuladoras de
molculas T CD80 y CD86, mientras que el mantenimiento de los atributos
caractersticos de neutrfilos de ratn, tales como la expresin de L-selectina y
Ly6G y la capacidad de fagocitar microorganismos que supera con creces la de
cluas dendrticas normales. 73,74. Esta transicin fenotpica afecta slo una
minora de neutrfilos infiltrantes de tejidos y requiere la estimulacin por
GMCSF, que se conoce para transformar los monocitos en Cl. Dendr. 75. En
ciertas configuraciones, algunos neutrfilos humanos se recuperaron a partir
de tejido expresar la CD83 marcador de DC, as como de molculas de mayor
complejo de histocompatibilidad clase II, 76., lo que indica que la misma
plasticidad reportado en sistemas de ratn existe en los seres humanos.
Los neutrfilos tambin regulan la maduracin de las clulas asesinas naturales
(NK), como un estudio de mutagnesis de ratn, se ha identificado una
mutacin en el gen que codifica Gfi-1, un factor de transcripcin que se sabe
estn involucrados en la granulopoyesis, que resulta en una cepa con la
disminucin de clulas NK actividad. 77 (Fig. 2). Estos llamados ratones
'Genista' tambin son neutropnicos, y la hiptesis de que los neutrfilos son
esenciales para el desarrollo normal de las clulas NK ha sido confirmado por el
anlisis del repertorio de clulas NK de ambos ratones de tipo salvaje con
neutropenia inducida y los pacientes con neutropenia congnita grave. 77
Neutrfilos actividades microbicidas
La acumulacin de datos ha proporcionado nuevos conocimientos sobre
eventos crticos para efectuar la accin antimicrobiana ptima en fagosomas

neutrfilos. Ahora centramos nuestra atencin en nuevos conocimientos sobre

los eventos que modulan las respuestas de neutrfilos a los microbios ingeridos
atrapados dentro de fagosomas.
El montaje y la actividad de la NADPH oxidasa en los fagocitos, esencial para la
actividad microbicida de los neutrfilos. 78, requiere la translocacin de un
complejo citoplasmtico que contiene p47phox, p67phox y p40phox. A pesar
de su pertenencia a este complejo ternario esencial (79,80), la funcin de
p40phox ha eludido una definicin firme. Como p47phox, p40phox contiene un
dominio de PX, un motivo especfico que apoya la unin de protenas a
fosfoinostidos en la cara interna de las membranas. 81. Los estudios con una
variedad de sistemas experimentales han identificado fosfatidilinositol 3fosfato, un producto de clase III quinasa fosfatidilinositol-3-fosfato, como el
objetivo para el dominio PX de p40phox en las membranas fagosomales. 82-86.
Al igual que el flujo de protones, el transporte de cloruro en fagosomas apoya
la bioqumica integral a la actividad antimicrobiana ptima de los neutrfilos.
La matanza eficiente por el sistema de MPO-H2O2-haluro requiere una fuente
de iones cloruro, como el poco de cloruro de paso internalizado durante la
fagocitosis se consume rpidamente por la generacin de HOCl. 68. El
regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qustica (CFTR)
media la mayor parte de cloruro de transporte en los fagosomas de neutrfilos
(102,103), aprovechando la relativamente gran reservorio de iones cloruro en
el citoplasma de neutrfilos (104). Situado en las vesculas secretoras de
neutrfilos en reposo, CFTR se incorpora en las membranas phagosomal
durante la fagocitosis. Los neutrfilos que carecen de CFTR exhiben matanza
defectuosa de ingerido Pseudomonas aeruginosa (104), que hace hincapi en
la relevancia clnica de la produccin de HOCl y el transporte de cloruro CFTR
dependiente de los neutrfilos. Dos transportadores adicionales, CLC-3 (Ref.
105) y KCC3 (ref. 106), contribuyen a la redistribucin de cloruro en los
neutrfilos, aunque en mucha menor medida de que lo hace CFTR.
la funcin anormal de los neutrfilos en la fibrosis qustica se extiende ms all
de la accin antimicrobiana defectuoso, como neutrfilos afectados exhiben la
apoptosis retrasada (107), lo que podra ser la base de la inflamacin
prolongada observada visto en pacientes con fibrosis qustica. La identificacin
de la gama de trastornos de neutrfilos en fibrosis (108) qustica puede inducir
nuevas intervenciones teraputicas que se dirigen a la inmunomodulacin de
los neutrfilos en este trastorno hereditario comn.
Los aumentos en la concentracin intracelular de calcio (Ca2 +) manejan
varios procesos de neutrfilos pertinentes a las actividades en el fagosoma,
incluyendo la activacin de la oxidasa NADPH (109) y la fusin de grnulos con
fagosomas (110). El trabajo publicado ha dilucidado el mecanismo y la
importancia de la observacin de muchos aos de aumentos localizados de
Ca2 + cerca de los fagosomas (111). El sensor de Ca2 + STIM1 desempea un
papel esencial en la regulacin de los canales de tienda que funciona con la
entrada de calcio y de liberacin de calcio en las clulas humanas (112,113).

En los neutrfilos de ratn, STIM1 promueve interacciones de las cisternas del

retculo endoplasmtico con canales de Ca2 + en los fagosomas nacientes, lo
que permite la sealizacin de Ca2 + -dependiente y la liberacin de actina
perifagosomal para apoyar la fagocitosis eficaz (114). Orai1, una entrada de
calcio channel113 la tienda que funciona, promueve el flujo de Ca2 + a travs
de las membranas fagosomales y por lo tanto promueve la fagocitosis
(114,115), degranulacin (115) y la activacin de la NADPH oxidasa (115,116).
La medida en que las actividades STIM1 dependiente de los neutrfilos
contribuyen a la respuesta inmune innata normales espera una mayor
investigacin, ya que los estudios publicados han centrado la atencin en la
importancia de STIM1 y otros canales de Ca2 + tienda que funciona en funcin
de los linfocitos (117).
La heterogeneidad de los fagosomas
Mientras escriba sobre los macrfagos, un autor opin que existe una
heterogeneidad estructural y funcional entre los fagosomas dentro de una
celda individual (118). El autor observ que la misma heterogeneidad de los
fagosomas, se aplica a otras clulas fagocticas. Por ejemplo, la prdida de
fluorescencia de la protena fluorescente verde que expresa S. aureus ingerido
por los neutrfilos humanos, un indicador de la produccin de HOCl en
fagosomas individuales, demuestra la variabilidad de los fagosomas en los
mismos neutrfilos (119). En tales estudios, a una multiplicidad de infeccin de
1: 1 (es decir, una unidad de formacin de colonias (o cuatro cocos) para cada
neutrfilos), un neutrfilo dada contiene fagosomas con bacterias blanqueados,
as como bacterias fluorescentes (119). La heterogeneidad de los fagosomas
neutrfilos, podran reflejar, en parte, la variabilidad en el ensamblaje y la
activacin de la NADPH oxidasa en los fagosomas, la entrega de MPO por
fusin de grnulos azurfilos y la produccin de HOCl, o ambos esta
variabilidad y la entrega. Mientras que estos eventos se producen en cierta
medida estocsticamente, eventos bioqumicos especficos probablemente
contribuyen a la variabilidad observada.
Tal diversidad fagosoma podra reflejar la variabilidad entre los fagosomas
individuales en la composicin de lpidos y protenas de sus membranas, las
enzimas citoplasmticas a la que los objetivos abluminal en el fagosoma seran
sometidos (por ejemplo, quinasas, fosfatasas y GTPasas), y las colisiones con
otros orgnulos intracelulares (por ejemplo, endosomas, lisosomas, retculo
endoplasmtico y vesculas derivadas de Golgi). En consecuencia, los lpidos y
las protenas en la membrana fagosomal podran prever como una red
organizada definida por sus constituyentes individuales, su especfia
modificacin post-traduccional y las consecuencias funcionales descendentes
de su presencia o estado de activacin.
En los macrfagos, un fagocito experimental ms manejable que los
neutrfilos, la actividad de NADPH oxidasa y la distribucin de fosfatidilinositol
en fagosomas demuestran la heterogeneidad de los fagosomas (120). La
produccin de anin superxido se diferencia en fagosomas individuales, no

slo entre las clulas, sino tambin entre fagosomas en la misma clula.
Aunque las especies de inters del fosfatidilinositol son las mismas, la actividad
de la diacilglicerol quinasa y la abundancia de diacilglicerol difieren entre los
fagosomas, y esto se correlaciona directamente con la produccin de anin
superxido. El diseo y aplicacin de biosensores sensibles que informan
cambios bioqumicos de una manera dinmica y cuantitativa promete expandir
apreciacin de la base mecnica y las consecuencias funcionales de la
heterogeneidad del fagosoma.
Ms all de los fagosomas: Redes y ectosomes
La mayor actividad antimicrobiana directa por los neutrfilos se produce dentro
de los fagosomas, pero la participacin de los neutrfilos en la respuesta
inmune innata a la infeccin se extiende a las respuestas extracelulares y las
contribuciones de las vesculas de membrana bioactivos liberados por los
neutrfilos activados. Desde la primera descripcin del fenmeno de la NET
(hebras de ADN extracelular obligados a derivados de neutrfilos a los
antimicrobianos pptidos y protenas) (121), esto se ha considerado una
alternativa a la muerte ya sea por apoptosis (un proceso que apoya la
resolucin de la inflamacin) o por pyroptosis, necrosis secundaria o
necroptosis (122) (eventos que puede promover la liberacin de citoquinas
proinflamatorias a partir de macrfagos) (123). Aunque todava no se han
caracterizado completamente, los mecanismos que subyacen 'NETosis'
(nombre de esta va de muerte) se han definido parcialmente in vitro,
tpicamente mediante el anlisis de los neutrfilos estimulados durante 1-3
horas con acetato de forbol miristato, un potente activador de protena quinasa
C, en condiciones sin o con concentraciones muy bajas de protenas de suero
(124). La citrulinacin de histona que depende de la PAD4 peptidylarginine
deiminasa parece ser esencial para la preparacin de la cromatina para la
liberacin de ADN a travs de NETosis (125126). La NETosis bajo tales
condiciones experimentales depende de la presencia de los principales
elastasa de los neutrfilos de la serina proteasa (80), MPO (127) y NADPH
oxidasa activa, montado a travs de una va de las quinasas Raf, MEK y ERK
(128). En consecuencia, no se espera que la NETosis ocurra en pacientes con
deficiencia de MPO, un trastorno hereditario relativamente comn con un
compromiso de menor importancia en la capacidad para combatir infecciones
microbianas (68), o en el CGD se ha descrito anteriormente, que es una
inmunodeficiencia ms grave (129 ) caracterizada por la incapacidad de los
neutrfilos para producir especies reactivas de oxgeno (130).
Dada la naturaleza perjudicial limitada del fenotipo clnico de la deficiencia de
MPO, parece que NETosis, como se define anteriormente, tiene un menor (si lo
hay) papel en la defensa inmunolgica. Del mismo modo, los pacientes con
sndrome de Papillon-Lefvre, cuyos neutrfilos no tienen ni elastasa ni otras
proteasas de serina y por consiguiente no puede apoyar a la NETosis
(Srensen, OE et al. Datos no publicados), falta una mayor susceptibilidad a las
infecciones sistmicas y, en general sufren enfermedad periodontal nica
grave (131) .Las NETs se han demostrado para atrapar bacterias (132), hongos

(133) e incluso virus (63) y pueden ofrecer algo de proteccin a las clulas T
frente a la infeccin por el virus de la inmunodeficiencia humana (134). Dos
estudios independientes han cuestionado la observacin inicial de que las NETs
matan a las bacterias atrapadas y sugieren en cambio que la incapacidad para
liberar las bacterias de las redes es la base de la falta de recuperacin de
bacterias viables (135,136). No obstante, atrapando bacterias viables se
pueden contener microbios y por lo tanto seran tiles para prevenir las
metstasis generalizadas de infeccin. Hasta cierto punto, las NETs parecen
contribuir a las enfermedades autoinmunes en las que los antgenos diana con
frecuencia que sean componentes de NET (Fig. 2), incluyendo ADN, as como
MPO y proteinasa 3, como se ve en el lupus eritematoso sistmico y la
granulomatosis de Wegener (137138). Clnicamente las bengalas pertinentes
de las enfermedades autoinmunes asociadas a menudo con las infecciones
bacterianas pueden reflejar las consecuencias de la activacin aguda de
neutrfilos y la generacin de ms redes y, por tanto, los antgenos (139). Sin
embargo, otros estmulos provocan un proceso celular que comparte
caractersticas de NETosis y puede tener consecuencias biolgicas. plaquetas
de endotoxina activada pueden inducir NETosis (es decir, la presencia de ADN
extracelular y las histonas asociado con elastasa de los neutrfilos y MPO),
posiblemente con la participacin ADN mitocondrial (140), y puede ser
particularmente relevante durante la sepsis, que a menudo se asocia con la
activacin de las plaquetas. Adems, las redes de intravasculares pueden
daar el endotelio y por lo tanto contribuir a la fuga capilar a menudo asociada
con la sepsis (141) y con lesin pulmonar aguda (142).
Se ha demostrado que los neutrfilos sometidos a fagocitosis activa pueden
extruir su ADN, pero an as mantener su integridad y continuar a migrar,
aunque con menos eficiencia. La dependencia de este proceso, llamado
'NETosis vital "(143,144), en MPO, elastasa o NADPH oxidasa no se ha
demostrado, a pesar de que no se basan en la sealizacin a travs TLRs,
como neutrfilos deficientes ya sea en el adaptador MyD88 o TLR2 no inicia la
respuesta despus de la exposicin microbiana (143). Los neutrfilos sometidos
a NETosis vitales carecen de ncleos y pueden ser observadas como
cytoplastas anucleadas. Vital NETosis difiere de otras formas del fenmeno
descrito originalmente como NET: con objetivos slo de complementaropsonizados provocar la respuesta, y se produce principalmente en neutrfilos
extravasados, ambas caractersticas de relevancia biolgica considerable
(143).
Adems, esta respuesta celular se produce en cuestin de minutos y limita la
diseminacin bacteriana in vivo. Tales citoplastos anucleares, que se asemejan
a los citoplastos generados por centrifugacin a alta velocidad de la
citocalasina B neutrfilos tratados en un gradiente de densidad (145) y
cytokinetoplasts neutrfilos inducidos trmicamente (146), se pueden
recuperar de abscesos humanos. El destino posterior de tales cytoplastos
anucleadas sigue siendo desconocido (Fig. 2). Una variedad de nombres se ha
aplicado a las microvesculas derivadas de membranas, tanto endosomal
(referido como 'exosomas') y plasma (denominado 'ectosomes'), de clulas

intactas (147,148). En los neutrfilos humanos, microvesculas ectosomales

son generadas por estimulacin con agentes tales como
methionylleucylphenylalanine formilo y complementan C5a (149). En respuesta
a los agonistas especficos, los neutrfilos humanos generan vesculas de
membrana 50 a 200 nm de dimetro que surgen por gemacin de la
membrana de plasma (150) y expresan en su superficie fosfatidilserina, as
como diversas protenas de la membrana, incluyendo CD15, CD64, CD66b y
CD66c, y contener la MMP9 metaloproteinasa de la matriz, MPO, la PRTN3
proteinasa y la elastasa de neutrfilos (151,152) (Fig. 3). El repertorio de
protenas y en los ectosomas vara dependiendo de las condiciones en las que
son generados (153). Al igual que las protenas expresadas en la superficie de
los neutrfilos, los ectosomas varan de acuerdo con el estmulo inicial, y las
consecuencias de sus interacciones con las clulas intactas reflejan la clula
diana especfica y su gama de receptores de la superficie. Por ejemplo,
ectosomas derivados de neutrfilos exhiben propiedades proinflamatorias en
las interacciones con las clulas endoteliales (154) y las propiedades
pretrombticas con plaquetas (155,156) pero actan como partculas antiinflamatorias cuando se involucran los neutrfilos o macrfagos (147,157,158).
Los ectosomas neutrfilos, participan en la biologa en general relacionados
con la respuesta inmune innata, incluyendo eventos importantes para la
homeostasis vascular (151), y contribuyen a la fisiopatologa del sndrome de
dificultad respiratoria aguda y lesin pulmonar aguda (159). Los ectosomas
neutrfilos pueden modular la actividad de otros fagocitos presentes durante la
inflamacin (macrfagos y DCS) y de ese modo influir en la presentacin de
antgenos y la respuesta inmune adaptativa. La fosfatidilserina en ectosomas
neutrfilos se une al receptor de la tirosin quinasa Mer y por lo tanto aumenta
la sealizacin a travs de la fosfatidilinositol-3-OH quinasa y la quinasa Akt y
disminuye la actividad transcripcional del factor de transcripcin NF-B147. Por
consiguiente, TNF disminuye abajo de la modulacin de la actividad de los
pases en desarrollo, pero factor de crecimiento transformante-1 (TGF-1)
aumenta este. interacciones fosfatidilserina dependiente con IL-2 y IL-12trataron clulas NK cambiar su perfil de citoquinas proinflamatorias de a antiinflamatoria y proporcionan un medio por el cual los ectosomas neutrfilos
pueden modular el medio ambiente local durante la inflamacin (160).
Presentes en el plasma de los pacientes spticos, los ectosomas contienen 2macroglobulina que ejerce efectos inmunomoduladores, la promocin de la
accin antimicrobiana de neutrfilos y contrarrestar la regulacin a la baja de
endotoxina mediada por la expresin CXCR2, mejorando de este modo, en
parte, las consecuencias fisiopatolgicas de endotoxemia (161).
Adems de la modulacin del microambiente inflamatorio, los ectosomas
neutrfilos ejercen accin antimicrobiana directa (162). Los ectosomas
suscitaron a partir de neutrfilos estimulados con cualquiera S. aureus
opsonizado o zymosan agregado en la superficie de los microbios especficos y,
en algunos casos, mataron las bacterias diana (162). Por ejemplo, los
ectosomas de neutrfilos inducidos por partculas retardaron el crecimiento de
S. aureus y Escherichia coli, pero no la de Proteus mirabilis. La actividad

antimicrobiana de tales ectosomas bacteriostticos neutrfilos, no requiere ni

la internalizacin de las bacterias ni la generacin de oxidantes por la NADPH
oxidasa en los fagocitos. En el caso de S. aureus, la adherencia de ectosomas a
la diana depende de la absorcin de la glucosa, la integrina 2 funcional en la
superficie ectosomal y reorganizacin de actina dentro de los neutrfilos. La
agregacin de neutrfilos ectosomales bacteriostticos se puede recuperar de
los pacientes con bacteriemia, lo que demuestra que su generacin y las
actividades tienen relevancia biolgica (162). Aunque tales ectosomas
proporcionan un vehculo con el que extender espacialmente el
inmunomodulador, y atributos antimicrobianos de neutrfilos, la comprensin
de la medida en que los ectosomas neutrfilos contribuyen a la defensa del
husped mediada por fagositosis espera una investigacin adicional.