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Fosforilacin oxidativa

Dr. Octavio Loera Corral

Membrana externa
Poros no especficos
Permeable (10 KDa)
Membrana interna
75% Protenas (p/p)
Impermeable
(Excepto a O2, CO2 y H2O)
Transportadores de:
ATP, ADP, Piruvato,Ca2+, Pi

4 Complejos
Multi-unidades
Al menos 10 centros redox unidos a protenas

FOSFORILACIN OXIDATIVA
Hiptesis del acoplamiento

Acoplamiento Qumico (Edward Slater, 1953)


Intermediarios con alta energa
Acoplamiento Conformacional (Paul Boyer, 1964)
Edos. Energticos de las protenas mitocondriales
Acoplamiento por Quimiosmsis (Peter Mitchell, 1961)
G del transporte de e- usada para expulsar H+
Formacin de un gradiente electroqumico
Gradiente
sntesis de ATP

Acoplamiento Qumico (Edward Slater, 1953)


Intermediarios con alta energa
Basado en la estrategia Qumica de la Gluclisis
1.
Adicin de P a la glucosa
2.
Conversin a intermediarios fosforilados por qu?
3.
Acoplamiento de estas transferencias a la formacin de ATP
Go de la hidrlisis de fosfatos orgnicos
COMPUESTO

Go (kJ/mol)

Fosfo-enol-piruvato

-61.9

1,3-Bifosfo-glicerato

-49.4

Fosfato de acetilo

-43.1

Fosfato de creatina

-43.1

Pirofosfato (PPi)

-33.5

ATP

AMP + PPi

-32.2

ATP

ADP + Pi

-30.5

Fosfato-1-de Glucosilo

-20.9

Fosfato-6-de Fructosilo

-13.8

Fosfato-6-de Glucosilo

-13.8

Fosfato-3-de Glicerilo

-9.2

*
*

*
*
*
* Intermediarios de la gluclisis

Dos etapas:
I. Utilizacin de ATP para generar
2 triosas fosfatadas (2 GAP).
Rxs 1 a 5
II. Conversin del GAP a Piruvato,
formando ATP.
Rxs 6 a 10
Balance Global:
Glucosa + 2ADP + 2Pi + 2NAD+

2Piruvato + 2ATP + 2NADH + 2H+


+ 2H2O

Reaccin 1
Para otras reacciones

Enzima Hexoquinasa (HK)


Las HKs trasfieren grupos fosforilo entre el ATP y un metabolito

La misma HK puede hacer la transferencia a otras hexosas


El Mg2+ tambin es sustrato
Debido al Go, [G6P] puede inhibir la Rx

Grupo acil-fosfato de alta energa

Reaccin 6

Qu tomo de C cambi el edo. de oxidacin?

Enzima Gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH)

In vivo la Rx se favorece por la relacin alta:


NAD+ / NADH

[NAD+ ] elevada

El 1,3-BPG es el primer intermediario capaz de transferir el P al ADP


Para 1,3-BPG, Go de transferencia del P = -49.4 kJ/mol

Reaccin 7

Enzima Fosfogliceratoquinasa (PGK)


La Rx es libre de agua en el sitio cataltico, como la HK

Estructuras similares, pero secuencias distintas entre HK y PGK


1,3-BPG transfiere el P al ADP
Fosforilacin a nivel sustrato

Reaccin 10

De Rx 1

Enzima: Piruvatoquinasa (PK)

Sin embargo, no se han identificado intermediarios de alta energa en la


Cadena de electrones

Se descarta la hiptesis de Edward Slater.

Acoplamiento por Quimiosmsis (Peter Mitchell, 1961)


Evidencias de la Hiptesis Quimiosmtica

La fosforilacin oxidativa requiere membranas


internas ntegras
Estas membranas son impermeables a iones como H+,
OH-, K+ y Cl-, cuyo difusin libre rompera el
gradiente electrqumico

El transporte de e- transloca H+ fuera de la


mitocondria
Hay desacoplantes del gradiente, que no interrumpen
el flujo de e-

El incremento de la acidez fuera de la membrana interna, estimula la sntesis de ATP

Complejo V = ATP sintasa

El pH de la matriz mitocondrial es casi 1 unidad ms alto


El Complejo V requiere 3 H+ para cada ATP

Complejo V : F0 y F1

Analoga con una presa

Qu mueve a la turbina (Complejo V) en la mitocondria?

Estructura de F1

Vista Lateral

Vista Superior

La energa es cedida por el paso favorable de H+ a travs de F0

Los cambios comformacionales modifican


AFINIDADES de LIGANDOS

Paul Boyer tena razn, pero la energa para el cambio proviene


del gradiente electroqumico

Control de la Produccin de ATP


Las Rxs en el transporte de e- tiene G ~ O
Desde el Complejo I hasta Cit c

La Rx en el Complejo IV es irreversible
Sitio de control
El mayor efecto lo tiene su sustrato: Cit c Reducido (c2+)

Desde el Complejo I hasta Cit c

El Complejo V requiere 3 H+ para cada ATP

El Cit c Reducido est en equilibrio con el resto de los intermediarios

En el Complejo IV el mayor efecto lo tiene su sustrato:


Cit c Reducido (c2+), en equilibrio con la relacin :
Y con la ley de accin de masas:

Situacin de una clula en crecimiento rpido sin limitacin de nutrientes:


[ Cit c Reducido] ALTA

ALTA
y

BAJA
AUMENTA

[ Cit c Reducido] ALTA

LA ACTIVIDAD

DEL COMPLEJO IV

El ATP se produce en las clulas mayormente por:


GLUCLISIS (GLUC)
CICLO DE KREBS (TCA)
FOSFORILACIN OXIDATIVA (FO)
Se mantiene alta por GLUC y
TCA .
Estos e-, aumentan
Hasta que haya efecto inhibitorio
GLUC y TCA se regulan coordinadamente para
producir NADH y FADH2 a la velocidad requerida
segn la demanda de ATP

Dos etapas:
I. Utilizacin de ATP para generar
2 triosas fosfatadas (2 GAP).
Rxs 1 a 5
II. Conversin del GAP a Piruvato,
formando ATP.
Rxs 6 a 10
Balance Global:
Glucosa + 2ADP + 2Pi + 2NAD+

2Piruvato + 2ATP + 2NADH + 2H+


+ 2H2O

NAD+
Es el agente oxidante ms importante de la Gluclisis

2H
+ H+

Debe ser reoxidado para su uso continuo por estas vas:


1. Fosforilacin oxidativa

ATP

2. Reduccin de piruvato a lactato


3. Fermentacin alcohlica
Por qu se recicla?

Vista de la Gluclisis
Glucosa
Gluclisis
Glucosa

Piruvato

Tryptophan
ATP

Entrada de ATP
2 3 ATPs por NAD+
3 4 ATPs por NADP+
ATP

Solo en la parte final de la ruta


PROBLEMA
Para una levadura. Cmo sera el
rendimiento de ATP de la Gluclisis hasta
piruvato sin reciclar el NADH+?
Considerando 2 NAD+ por Glucosa:
a) A partir de Nicotinato

b) Suponiendo que el medio de cultivo


tiene NMN suficiente

Conversin de Piruvato a Lactato


por la Lactato Deshidrogenasa

Qu tomo modifica su nmero de oxidacin?

Conversin de Piruvato a Etanol


por la Alcohol Deshidrogenasa

Qu tomo modifica su nmero de oxidacin?

Fermentacin Homolctica
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi

2 lactato + 2 ATP + 2 H2O

Go = - 196 kJ/mol
Formacin de 2 ATP, Go = + 61 kJ/mol
31% de eficiencia

Fermentacin Alcohlica
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi

2 Etanol + 2 ATP + 2 CO2

Go = - 235 kJ/mol
26% de eficiencia
En condiciones fisiolgicas la eficiencia se aproxima al 50%,
Disipacin por calor proceso irreversible

Efecto Pasteur con Levaduras:


Cultivo anaerobio

Consumo Alto de Glucosa + Etanol

Cultivo aerobio

Consumo Bajo de Glucosa (no hay Etanol)

Cmo se explica este cambio rpido?


Qu enzimas se inhiben?
Por qu efectores?
Las enzimas de la GLUCLISIS no se inhiben por [NADH],
Funcionan en anaerobiosis.

Aplicaciones del Conocimiento de la Regulacin


Homeostsis vs. Ing. Metablica
Uso Industrial

Sntesis Qumica
Mezclas Racmicas

?
$$$

Redireccin del Flujo de C


Glucosa extracelular
X

G6P

Mediado por ATP

Desregulacin del alosterismo

Cepa Silvestre
(Y p/s) = 30 % (Y p/s) mx
Cepa Modificada
(Y p/s) = 60 % (Y

p/s)

Bez et al., 2006

mx

ENZIMA: 2.7.1.69
Enzima II del sistema de transferencia de fosfato (PTS, en ingls)
El aceptor es un grupo OH (en C6 de Glucosa C1 de Fructosa)
Funciona en muchas bacterias.
PEP + Pa

Piruvato + Pa-P

PEP, Fosfoenolpiruvato
Pa, Pptidos acarreadores
PTS, Enzima 2.7.1.69

Pa-P

PTS-P

Glucosa

Pa

PTS

Glucosa-6-P
Hay una translocacin de la Glucosa