Manual de Microbiología II, 2016

UNIVERSIDAD MARIANO GLVEZ
FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS Y DE LA SALUD

MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA II
Universidad Mariano Glvez
Facultad de Ciencias Mdicas y de la Salud
Carrera de Mdico y Cirujano
Medicina
2016
MANUAL DE LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA II
Elaboracin: Licda. Claudia Luca Mata Asifuina (QB); Lic. Eldin Josu Reyes Estrada (QB).
Revisin: Licda. Isabel Cristina Gaitn Fernndez (QB, MA); Licda. Swuannny Valeska Villagrn Herrarte (QB).
Adaptacin Campus Huehuetenango

Licda. Cynthia Olivia Rivas Batres (QB)

REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIO DE

MICROBIOLOGA II
1. El alumno deber ingresar al laboratorio con equipo de seguridad:
Bata blanca hasta la rodilla y de manga larga (con su respectivo nombre y
el logo de la universidad bordado).
Gafas de seguridad.
2. Para tener derecho a ingresar al laboratorio, el alumno debe entregar al inicio
de cada prctica:
- Cuaderno completo de laboratorio con los aspectos solicitados para la
prctica.
- Reporte de la prctica anterior.
El laboratorio inicia puntualmente, no se permitir el ingreso tarde bajo
ninguna excusa. NO SE REPONDR LABORATORIO POR NINGN MOTIVO.
3. El alumno no podr ingresar al laboratorio si:
-
Si tiene el cuaderno incompleto o hay evidencia de copia entre dos o ms

compaeros de laboratorio, de lo contrario tendr inasistencia aunque
haya firmado la lista de asistencia.
4. En el laboratorio est prohibido el ingreso de:

- Celulares, localizadores, reproductores de msica o cualquier otro
artefacto (iPod, iPad, Laptops, tablets etc.) que pueda interferir con la
atencin del estudiante.
- Comida y bebidas.
- Gorras, suteres o chumpas que no sean del uniforme.
- Mochilas, bolsos u otro accesorio que no sea requerido por el docente.
Todas las pertenencias deber dejarlas en el los casilleros de la entrada
del rea de laboratorio.
5. En las prcticas no se puede ingresar al laboratorio con uas acrlicas, uas
gelish y joyera.
6. Las personas con cabello largo deben recogerlo con una cola o gancho (no
fleco).
7. El alumno es responsable del material que recibe, mantenindolo limpio y en
perfecto estado a lo largo de cada prctica. Deber realizar una requisicin
del material antes de iniciar la prctica y al finalizar ser revisado por los
licenciados a cargo.

8. En caso de que el estudiante dae parcial o totalmente un material, deber

firmar un vale con su nombre, nmero de puesto, descripcin del material
daado, fecha y firma, comprometindose a reponer el material durante las
dos prcticas siguientes, de no hacerlo perder el derecho a ingresar al
laboratorio. NOTA: El estudiante deber estar solvente al momento de
realizar los exmenes parciales y el final de laboratorio.
9. Los alumnos sern responsables de dejar los reactivos cerrados y sin
contaminar por otros, las mesas limpias y en orden, lo mismo que el equipo
que sea utilizado durante la prctica.
10. Es necesario que cualquier persona que se encuentre dentro de las
instalaciones del laboratorio se comporte de forma adecuada, cumpliendo con
el reglamento y las normas de seguridad requeridas (Prctica 1).

ASPECTOS A EVALUAR
1. PLANIFICACIN
Generalidades para presentar el cuaderno
El cuaderno debe ser:
De pasta dura, tamao media carta de 80 hojas con lneas (no
Forrado con plstico y papel de color
Rojo Seccin A
Amarillo Seccin B
espiral).
Identificado en la primera hoja y al frente.
El cuaderno de laboratorio est diseado para cumplir como evidencia del trabajo
que se ha realizado durante cada prctica de laboratorio. Lo ms valioso de su
cuaderno de laboratorio es el contenido. Aunque su presentacin es

importante, no es lo principal en un cuaderno de laboratorio, por lo que el estudiante
no debe temer a hacer cualquier anotacin dentro de su cuaderno en cualquier
momento.
Cada estudiante debe poseer un cuaderno de laboratorio que cumpla con ciertas
especificaciones establecidas. Si alguna persona desea usar el cuaderno de
laboratorio de otro curso que haya llevado previamente, puede hacerlo siempre y
cuando se identifique claramente el cuaderno (vuelto a forrar si hay cambio en el
color a usarse) y la seccin que se utiliza. No puede usarse el mismo cuaderno de
laboratorio para dos cursos simultneos en un mismo ciclo.
Un trabajo que no puede leerse simplemente no tiene validez alguna, por lo que se
espera que el estudiante tenga un cuaderno tan ordenado como sea posible, y sobre
todo, legible.
No se permitir el uso de lpiz o de corrector en el mismo.

El cuaderno de laboratorio contiene las siguientes secciones:
Seccin
Contenido
Valor (pts)
Indicar claramente el nmero, ttulo y la fecha en que se
Encabezado
--llevar a cabo la prctica de laboratorio.
Enumerar de dos a tres objetivos a conseguir durante la
Objetivos
prctica. Incluir los presentados en la gua y dos personales
10
ms, distintos
Realizar una representacin grfica del procedimiento que
Diagrama de flujo se llevar a cabo en el laboratorio en forma clara y
10
resumida.
Definicin del medio. Tipo de agar (selectivo, nutritivo,
diferencial, etc.)
Medios de cultivo Composicin
10
Fundamento
Tipo de muestra
Apariencia de las colonias e interpretacin
deber incluir:
- Revisin Bibliogrfica acerca de la prctica (No ms de
una pgina)
20
Prelaboratorio - La importancia Clnica-medica que tiene la prctica
- Cuestionario (si se solicita)
- Referencias Bibliogrficas
Se realizarn las tablas que contengan la informacin
Tablas
de
generada durante la prctica, as como los dibujos que se
resultados y
consideren necesarios. Estos resultados servirn para
20
dibujo
de
realizar el informe de laboratorio. Para poderse retirar el
observaciones
alumno deber presentarlos, y sern sellados por el
instructor
Se calificar el orden, legibilidad de la escritura, limpieza y
Presentacin
10
que el cuaderno est al da.
Se evaluar que cada practica este firmada y sellada por la
Firma
20
catedrtica
Nota total del cuaderno de laboratorio
100 pts
NOTA: No puede usarse el mismo cuaderno de laboratorio para dos cursos
simultneos. Debe escribir con lapicero azul o negro y con letra legible, los dibujos
deben de pintarse y describirse segn se indique en cada prctica.
El cuaderno se calificar al iniciar cada prctica de laboratorio.

2. DESARROLLO DE LA PRCTICA DE LABORATORIO

Antes de poder realizar cualquier trabajo dentro del laboratorio, el estudiante
deber demostrar fehacientemente que tiene el conocimiento necesario para poder
llevar a cabo la prctica. Para ello se realizar un examen corto al inicio de cada
prctica.
Durante el desarrollo de la prctica el docente evaluar los siguientes aspectos:
atencin, orden, limpieza, capacidad y disposicin para seguir instrucciones. Las
faltas graves, especialmente las que puedan poner en riesgo la salud y seguridad de
los dems, puede ameritar el retiro temporal o definitivo de un estudiante, teniendo
cero en la prctica completa.
Toda expulsin del laboratorio es contada como inasistencia, aunque el
estudiante ya haya firmado la lista de asistencia. El examen corto ser sobre el
contenido de la prctica y tendr un valor de 30 puntos.
3. REPORTE DE LABORATORIO
La principal forma de evaluacin del trabajo hecho durante el laboratorio, as
como la comprensin obtenida despus de realizada la prctica, es el reporte de
laboratorio. En l se evidencia el nivel de comprensin y la calidad de trabajo
realizado por el estudiante.
Es necesario que muestre tanto una buena redaccin como una buena
ortografa. Como futuros profesionales de las ciencias mdicas, es importante que
los estudiantes ejerciten y mejoren su habilidad de redaccin de informes, ya que es
parte de la formacin de todo profesional.
Generalidades para presentar el Reporte:
En Formato virtual
Letra tipo Arial, tamao 12 a espacio cerrado (1,0)

El reporte de laboratorio incluye las siguientes secciones

Seccin
Contenido
Valor
(pts)
Debe mostrar toda la informacin de identificacin del

estudiante y de la prctica.
Encabezado
Resumen
Marco Terico
Resultados
Discusin de
Resultados
Conclusiones
---
Debe expresar en forma clara y breve los objetivos, as como

los resultados y conclusiones ms importantes de la prctica,
deber redactarse en tiempo pasado e impersonal. Mximo 10
lneas.
Se deber buscar informacin relacionada al tema de la
prctica, el cual servir tambin para reforzar el conocimiento
adquirido durante la misma.
Deber de tener por lo menos dos pginas y no exceder de 3
Se solicita que esta seccin se presente en cuadros tabulados
de fcil lectura, a manera que la interpretacin sea de fcil
entendimiento para cualquier otra persona que no haya estado
en el desarrollo de la prctica. Cada cuadro debe tener nmero,
ttulo que lo describa y fuente de donde se obtuvo la
informacin.
NO se aceptan datos, clculos y resultados escritos a mano.
De presentarlos as, se calificar con un cero esa seccin.
En el caso de realizar dibujos estos deben de estar descritos,
pintados y sealados en caso de que en cada uno hayan
distintas estructuras
Es un anlisis e interpretacin de los resultados obtenidos,
contrastando con lo descrito en la teora. El estudiante puede
poner en prctica el aprendizaje que haya obtenido. Debe
explicar su experimento en base al principio qumico estudiado,
utilizando un lenguaje tcnico-cientfico y redaccin adecuada.
Adems, debe discutir sobre las posibles fuentes de error
involucradas en la prctica y posibles formas de mejorar la
ejecucin y rendimiento de la misma.
Responden a los objetivos y se derivan de los resultados
obtenidos, no deben ser muy extensas.
Como regla, no se puede concluir teora ni aspectos que no
hayan sido incluidos en la discusin.
Debern colocar por lo menos 3 conclusiones
7
10
10
20
20
20

Responder las interrogantes planteadas al final de cada prctica

en el manual de laboratorio.
Referencias
Presentar segn los lineamientos del curso de Metodologa de
la Investigacin. (Formato APA)
Nota total del reporte de laboratorio
Cuestionario
10
10
100
NOTA: Algunas secciones no tienen valor asignado, ya que su presencia no agrega

puntos, sin embargo, su ausencia s resta puntos de la nota del reporte de laboratorio.
Los estudiantes que no lleguen al da de la lectura de los cultivos, NO podrn entregar
reporte, aunque hayan elaborado otras partes de la prctica.
OBSERVACIONES IMPORTANTES
El reporte de laboratorio deber ser subido a la plataforma si exeder tomando

en cuenta las fechas estipuladas en la plataforma.
El reporte ser evaluado siguiendo la rbrica anterior.
Toda aquella persona que se haya ausentado o haya sido retirada por
cualquier motivo de una prctica, NO TIENE DERECHO a entregar el informe
respectivo, sin importar si la falta haya sido justificada. Sin embargo, esto no
quiere decir que el alumno se libere de la evaluacin del tema de la prctica
durante las pruebas parciales y final del laboratorio.
Si algn alumno tiene cualquier duda o reclamo sobre la forma en que se ha

calificado su reporte, debe hablar con su instructor DENTRO DE
LA
PRIMERA SEMANA despus de haberlo recibido corregido NO AL FINAL

DEL SEMESTRE. No se aceptarn reclamos posteriores.
IMPORTANTE:
Se tomar como falta grave (nota 0) cualquier indicio de plagio:
Reproduccin no autorizada de una publicacin, palabra por palabra,

incluyendo internet),
Copia total o parcial del contenido del reporte por parte de dos o ms
alumnos (la sancin aplica a todos los estudiantes involucrados). Todo caso
quedar documentado, y una reincidencia puede significar el retiro definitivo
del laboratorio.

DISTRIBUCIN DE LA ZONA DE LABORATORIO

Rubro a evaluar por prctica
Punteo neto
Reportes
Cortos
Guas de estudio
Parcial de Laboratorio
Final de Laboratorio
Cuaderno
Texto paralelo
Actividad Terico practica
Caso Clnico
3
Total,
nota de Laboratorio
25

CALENDARIZACIN DE PRCTICAS
No.
Nombre de la Practica
Fecha
Informacin general
Normas del laboratorio
Julio 18
Bioseguridad.
Uso del microscopio y estereoscopio
Julio15
Identificacin de Nemtodos
Ficha tcnica de nemtodos
Julio 25
Examen de heces en fresco

Nemtodos Intestinales.
Agosto 01
Tinciones de Giemsa para quistes de amebas

Protozoos intestinales, flagelados y del grupo Apicomplexa.
Agosto 08
Correlacin de casos clnicos con resultados de

laboratorio de Microbiologa
Agosto 08
PRIMERA ENTREGA TEXTO PARALELO

Presentacin de Trabajo terico practico
Agosto 08
Agosto 15
Agosto 22-26
PRIMER PARCIAL DE TEORIA

6
Tincin de Giemsa para protozoos sanguneos y tisulares
Agosto 29
Extraccin e identificacin de caros en polvo domstico

Artrpodos.
Examen directo, tincin y cultivo para hongos
Agosto 29
PARCIAL DE LABORATORIO
Septiembre 05
Septiembre 12
Observacin y cultivo de hongos levaduriformes

Micosis Sistmicas y Oportunistas.
Septiembre 19
Micosis
Ficha tcnica de hongos causales de micosis
Septiembre 26
Cultivo, aislamiento e identificacin de virus

Hoja de trabajo
Septiembre 26
Virus hepatotxicos Hoja de trabajo
Octubre 3
Correlacin de casos clnicos con resultados de

laboratorio de Microbiologa
Segunda entrega Texto paralelo
Presentacin de trabajo terico practico
Octubre 3
Octubre 10
Octubre 17-21
SEGUNDO PARCIAL DE TEORIA

Diagnstico rpido in vitro para la deteccin
cualitativa de anticuerpos IgM contra virus
Repaso
Octubre 24
Octubre 31
Noviembre 5
Examen final de laboratorio
10

NDICE
Pgina
Prctica 1. Bioseguridad.
Uso del microscopio y estereoscopio
11
Prctica 2. Microfilarias y Nemtodos tisulares.

Identificacin de Nemtodos adultos
17
Prctica 3. Nemtodos Intestinales.

Examen de heces en fresco
Prctica 4. Protozoos intestinales, flagelados y del grupo Apicomplexa.
Tinciones especiales para quistes de amebas
Prctica 5. Anlisis de casos clnicos
21
Prctica 6. Protozoos sanguneos y tisulares.

Tincin de Giemsa para protozoos sanguneos y tisulares.
Prctica 7. Artrpodos.
Extraccin e identificacin de caros en polvo domstico
Prctica 8. Micotoxinas, Micotoxicosis, Micosis superficiales, Micosis
cutneas y subcutneas
Identificacin de Hongos de polvo domstico
41
Prctica 10. Micosis Sistmicas y Oportunistas.

Observacin y cultivo de hongos levaduriformes
Prctica 11. Micosis
Hongos causales de micosis
Prctica 12. Cultivo de virus en tejido
67
Prctica 13. Hepatitis viral

Virus hepatotxicos
Prctica 14. Virus de Hepatitis A, B, C, D, E y G.
Diagnstico rpido in Vitro para Deteccin cualitativa de
anticuerpos IgM contra El virus de hepatitis A
Prctica 15. Anlisis de casos clnicos
80
31
37
47
51
73
76
81
87
11

NORMAS DE BIOSEGURIDAD, BUENAS PRCTICAS DE

LABORATORIO Y USO ADECUADO DE EQUIPO PTICO
Prctica 1
1. Introduccin
Bioseguridad
Es el conjunto de medidas preventivas destinadas a reducir o eliminar los
riesgos por agentes biolgicos, fsicos o qumicos a que se expone el personal as
como a proteger la comunidad y al medio ambiente.
Buenas Prcticas de Laboratorio o GPL (Good laboratory practices)
Son una buena herramienta de apoyo para la ejecucin del trabajo rutinario en el
laboratorio.
El Microscopio
Es un instrumento hecho a base de lentes que ha permitido a los hombres
poder llevar a cabo estudios en aquellos individuos y clulas que no pueden verse
a simple vista. La microscopia data del siglo XVI, aunque antes de esa fecha se
sospechaba de la existencia de criaturas que no podan ser observadas a simple
vista.
Es imprescindible adems familiarizarse con los equipos e insumos de trabajo,
para el cumplimiento de las Normas de bioseguridad y para la implementacin de
las buenas normas de trabajo.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
Conozca las normas de bioseguridad y sus implicaciones en el desempeo del

trabajo del laboratorio.
Se familiarice con el desarrollo y cumplimiento de las normas de bioseguridad, y

as garantizar y la de sus compaeros.
Aprenda a trabajar en forma disciplinada, ordenada y con mucha limpieza dentro

del laboratorio.
Se familiarice con el uso de microscopio y estereoscopio.
3.
Alcance
En esta prctica el estudiante aprender los conceptos fundamentales del

sistema de bioseguridad y la importancia que tiene dentro del trabajo del
laboratorio adems de su aplicacin en el que hacer del trabajo profesional.
12

El estudiante se familiarizara con la ejecucin y cumplimiento de buenas

prcticas de laboratorio y aprenda con propiedad la ejecucin de buenas prcticas,
especialmente en el rea de microbiologa.
En esta prctica el estudiante aprender el uso adecuado del microscopio y
estereoscopio su importancia dentro del campo de la investigacin.
4.
Antecedentes
Los laboratorios de Microbiologa constituyen un medio ambiente de trabajo

especial, generalmente nico, que puede presentar riesgo de enfermedades
infecciosas identificables para las personas que se encuentran en o cerca de ellos.
Durante todo el transcurso de la historia de la Microbiologa, las infecciones
se han contrado en el laboratorio. Las GPL surgieron con el objetivo de disminuir
los accidentes e incidentes en el laboratorio y de mejorar el manejo de los datos
generados en el rea de trabajo.
5.
6.
Materiales y equipo
Bolsas plsticas rojas y blancas
Pizetas con Alcohol al 70%
Computadoras
Pizetas con cloro al 5%
Estereoscopio
Torundas de algodn
Microscopio
Procedimiento
PARTE A Normas de Bioseguridad
Escuche con atencin la presentacin de normas de bioseguridad, dentro del

laboratorio de Microbiologa.
Anote la informacin que crea necesario

NORMAS GENERALES
Las siguientes normas sern observadas dentro de los laboratorios de enseanza o

investigacin segn apliquen:
No se permite:
Fumar, comer o ingerir bebidas, manipular lentes de contacto y aplicarse

cosmticos.
Uso de beepers, celulares y walkman.
Presencia de personas ajenas al laboratorio.
Juegos de mano ni el uso de vocabulario indebido.
13

Salir del laboratorio sin autorizacin una vez haya comenzado el trabajo.
Presencia de bolsones o mochilas.
REGLAS DE SEGURIDAD EN LOS LABORATORIOS

Las siguientes reglas de seguridad se observan en todos los laboratorios:
Es obligatorio el uso de una bata de laboratorio para prevenir contaminacin y

para protegerlo de algn tipo de accidente como: salpicaduras de tintes o
reactivos qumicos. Mantenerla abotonada. Ningn estudiante con bata ser
admitido en el laboratorio. Se usarn gafas de seguridad y guantes cuando sern
requeridos.
Por razones de seguridad se prohbe el uso de pantalones cortos y/o faldas

cortas. Tampoco se permitir el uso de camisitas o blusas de manguillos o blusas
que muestren en abdomen. Los zapatos se usarn cerrados, no se permiten
sandalias.
El pelo largo debe mantenerlo recogido siempre. No se permite el uso de gorras.
Debern conocer la ubicacin y uso de los equipos de seguridad tales como:

manta, extinguidores, botiqun de primeros auxilios, etc. De igual forma, debern
conocer la ubicacin de las salidas de emergencia y escaleras.
Deber rotular e identificar debidamente todos los materiales o cultivos que

utilice en los laboratorios.
No deber manipular ninguna cristalera mojada, excepto cuando se est

ayudando a lavar la misma.
Al colocar pipetas en los pipeteadores, recuerde no forzarlas para evitar que se

rompan.
No se debe abrir las llaves de gas, vaco o de agua si no las va a utilizar.
Tome todas las precauciones necesarias para evitar accidentes. En caso de que
estos ocurran, infrmelo inmediatamente al instructor.
De surgir alguna emergencia (fuego, escape de gas, etc.) deber abandonar el
laboratorio a la mayor brevedad posible en estricto orden.
Todo desperdicio slido o lquido (materiales insolubles, trozos de vidrio, etc.),

debern desecharse en los envases apropiados. El instructor le indicara que se
considera material biohazard y como se desechara.
Mantener despejadas las mesas de trabajo y pasillos entre las mesas. El

laboratorio tendr un rea designada para dejar mochilas.
Deben lavarse las manos con agua y jabn antes de comenzar el laboratorio y
despus de terminar el mismo.
No se permite la permanencia de ningn estudiante trabajando sin la supervisin

en el laboratorio y fuera de horas laborales. Si tuviese que hacerlo, asegrese
de que un instructor, profesor o personal tcnico lo acompae.
14

Todos los laboratorios debern tener en un lugar visible y accesible las hojas de
seguridad (Material Safety Data Sheet)
Si posee alguna condicin de salud, impedimento y/o embarazo, favor notificarlo

al profesor o instructor desde el primer da
Ser responsabilidad del estudiante, el leer con anterioridad los laboratorios para
que se informe sobre el manejo del equipo, substancias y procedimientos que
se utilizara. Una vez comenzado el laboratorio, mantenerse atento a los
procedimientos y seguir instrucciones.
En aquellos laboratorios donde se utilizan bacterias, hongos o virus deben

observarse las siguientes reglas:
Todos los cultivos sern manejados como patgenos potenciales, entindase

organismos causantes de enfermedades.
Los cultivos deben cargarse y mantenerse en gradillas.
Si se derrama algn cultivo en la mesa, piso o encima de su ropa, deber

notificarlo inmediatamente a su instructor, profesor o tcnico de laboratorio.
Nunca deber pipetear con la boca.
Al terminar el laboratorio deber limpiar su rea de trabajo (con desinfectante si

ha trabajado con algn microorganismo).
PARTE B. Buenas prcticas de laboratorio
Practique la ejecucin de buenas prcticas de laboratorio, con los materiales

proporcionados para el efecto.
Anote en su cuaderno detalladamente cada una de las buenas prcticas.

BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO
Acceso al laboratorio limitado
Manejo seguro de objetos punzo cortantes.
Procedimiento realizado con precaucin, para minimizar la creacin de

salpicaduras o aerosoles.
La superficie de trabajo se descontamina como mnimo dos veces. (al inicio y al

final de la jornada de trabajo).
Todos los cultivos, muestras, y otros materiales ya utilizados, que se consideren

como desecho, deben ser descontaminados antes de ser desechados fuera del
laboratorio.
15

USO DEL MICROSCOPIO PARTE

B
Para transportar el microscopio de un lugar a otro, utilice ambas manos, sujtelo

por el soporte con una mano y sostenga la base con la palma de la otra mano,
llevndolo siempre en posicin vertical.
Verifique que el microscopio este en el lugar correcto.
Asegrese que el objetivo de menor aumento, este en posicin para observar

sobre la platina.
Si no est haga girar el revlver, haga descender la platina hasta el mximo y

mueva el tornillo micromtrico, para bajar el tubo del microscopio hacia la platina
lentamente.
Conecte la fuente de luz, observe a travs del ocular, hasta observar el circulo
de luz sin sobra (abra y cierre el diafragma si es necesario)
Anote las partes del microscopio y su funcin (en el cuaderno de trabajo ayudado
con un dibujo).
PARTE C
Con sus compaeros de mesa, prepare una presentacin de mximo 5

diapositivas donde describa segn el tema que se le asigne.
Tendr 45 minutos para realizar el trabajo y 5 minutos para presentarlo:
Tema 1: Mencione por lo menos tres materiales que se descartan en:
Bolsas rojas
Bolsas blancas
Bolsas negras
Descartados de punzocortantes
Tema 2 al 5: Defina:
Laboratorio de Bioseguridad 1
Tema 6 Explique, Qu hacer en caso de contacto de la piel, mucosas y ojos con material
infeccioso?
7.
Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad

Procure dejar el microscopio en el mismo sitio.
16

Economice la vida de la lmpara, asegurndose de ejecutar la iluminacin

correcta.
No permita que cidos, lquidos o aceites ensucien el microscopio.
Nunca utilice lentes de mayor aumento, sin cubrir la preparacin con un cubre
objeto.
Nunca deje el objetivo de inmersin lleno de aceite. Use papel limpia lentes, con
movimientos suaves y circulares para limpiarlos luego de usarlo.
8.
Formato de presentacin de resultados
Realice la presentacin en PowerPoint de los tipos de laboratorio y las

especificaciones de cada uno.
9.
Bibliografa de referencia
Richmond J (s.) Seguridad en el laboratorio de Microbiologa y Biomdica. CDC Atlanta

Georgia.
Lobos, R & Garca, J. (1983) Procedimientos y Tcnicas de Laboratorio. Microbiologa
general. Editorial Universitaria. San Francisco. Santiago de Chile.
17

IDENTIFICACIN DE NEMTODOS
Prctica 2
1.
Introduccin
Los helmintos comnmente llamados gusanos o lombrices, son seres multicelulares

o metazoarios, ampliamente distribuidos en la naturaleza. Muchos de ellos viven
libremente y otros se han adaptado a llevar vida parasitaria en vegetales, animales o en
el hombre.
El parasitismo, se estableci de manera progresiva, cuando diferentes helmintos
encontraban huspedes apropiados en los que podan alimentarse y alojarse.
Esta adaptacin fue dando origen a cambios en los agentes invasores, hasta llegar
a constituir especies diferentes, morfolgicas y fisiolgicamente distintas de sus
predecesores.
Se dividen en
Platelmintos: planos, acelomados (sin cavidad oral):
Cstodes
Tremtodes
Nematelmintos: redondos, con organizacin interna propia

2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Aprenda de forma prctica, la clasificacin correcta de los parsitos.
Que aprenda a reconocer la morfologa de los helmintos adultos.
Que aprenda la diferencia que existe entre cada uno de los gneros o
especies de un mismo Phylum.
Alcance
En esta prctica el estudiante obtendr una formacin completa sobre la clasificacin

de los parsitos, especialmente sobre los Helmintos, su conocimiento del ciclo de vida y
su diferenciacin con los diferentes hospederos.
4.
Antecedentes
Los Helmintos parsitos, tienen tal grado de especializacin que algunos no pueden
vivir sino en ciertos huspedes y en ellos presentan localizaciones determinadas. Otros
no son tan especficos en la seleccin de sus huspedes y el hombre puede adquirirlos
de los animales.
18

5.
6.
Materiales y equipo
Cloro
al
5%
ml/muestra
desconocida)
(25
Estereoscopio
Computadora
Papel mayordomo
Sistema de Internet
Hojas de trabajo
Torundas de algodn
(1/A)
Papel limpia lentes
Alcohol al 70% (5
ml/A)
Bolsas para descarte de

basura (dos / prctica)
Procedimiento
PARTE I. Observacin directa de los adultos

Para este punto trabaje con la Ficha Tcnica de parasicologa:
Helmintos y cestodos:
Ascaris lumbricoides
Trichuris trichiura
Enterobius vermiculares
Hymenolepsis nana
Taenia saginata o Taenia solium
Ancylostoma duodenale
Necator americanus
PARTE II. Complemento de la Ficha Tcnica

Para complementar toda la informacin que se solicita en la Ficha Tcnica:
Atienda las instrucciones de su catedrtico
Trabaje con ayuda de internet.
Llene las casillas solicitadas.
Y haga los esquemas correspondientes.
Debe de llevar CINCO (5) fichas tcnicas para trabajar en el laboratorio, de lo

contrario no podr ingresar a la prctica
No destape los frascos que contiene los gusanos.
Despus de la observacin y anlisis de los adultos, LVESE muy bien las manos
antes de realizar otro tipo de procedimiento en el laboratorio.
Descarte todo material contaminado que no sea residuo anatmico en las bolsas
rojas.
19

No dejar por ningn motivo material contaminado en lugares que no

correspondan al rea de trabajo.
NINGN EQUIPO DE PROTECCIN SUSTITUYE EL CUIDADO, ORDEN

Y PRECAUCIN QUE DEBE TENER CADA ESTUDIATE AL REALIZAR
SU TRABAJO.
7.
8.
Trabaje ton la Ficha Tcnica de Parasitologa (Anexo).
Bibliografa de Referencia
Macalup, S. (1997). Procedimientos de laboratorio. Editorial impresora Amarilys e.i.r.l Lima,

Per.
Kaminisky, R. (1996) Manual de Parasitologa. 2da. Edicin. Editorial Rossany Auceda
Tegucigalpa Honduras.
20

FICHA TCNICA DE PARASITOLOGA

Nombre:
Carn:
Distribucin geogrfica:
Descripcin del adulto:
Cuadro clnico:
Diagnstico:
Tratamiento:
Prevencin y control:
Philum:
Hospederos definitivos:
Imagen del huevo
Clase:
Orden:
Gnero y especie:
Ubicacin preferente en el
hospedero:
Hospedero intermediario:
Nombre vulgar:
Ciclo biolgico (descripcin):
Ciclo biolgico (Imagen):
21

EXAMEN EN FRESCO DE HECES Y PRESENCIA DE HUEVOS

Prctica 3
1. Introduccin
El estudio en el laboratorio de muestras fecales de origen humano permite obtener datos
con los cuales determinar:
Situacin del funcionalismo digestivo.
Infecciones intestinales causadas por bacterias, virus y hongos.
Infecciones por parsitos intestinales o de rganos anejos.
El anlisis coprolgico parasitario se basa en la deteccin de la existencia de

parasitismo intestinal o de glndulas anejas, pudindose revelar tambin parasitismos
localizados en rganos y sistemas muy alejados del intestino, siempre que los parsitos
productores de los mismos empleen la va fecal del hospedador para eliminar los
elementos que le sirven para su diseminacin por la naturaleza.
El examen consta de:
Examen macroscpico
Es importante determinar la consistencia de las heces fecales y clasificarlas en

lquidas, blandas o duras, as como el color puede tener un significado patolgico
(Ejemplo: negro en melena). Debe observarse la presencia de moco, sangre, restos
alimenticios o parsitos adultos. Para la identificacin de estos ltimos, puede ser
necesario utilizar coloraciones o reactivos especiales.
Examen microscpico
En este tipo de examen, se trata especialmente de identificar ciertas estructuras:
Leucocitos
Eritrocitos
Cristales de Charcot-Leyden
Restos alimenticios de origen vegetal y de origen animal
Levaduras
Bacterias
Huevos de helmintos
22

2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Comprenda las ventajas que aporta un adecuado examen de heces y su aporte

para la confirmacin diagnstica del paciente.
Desarrolle habilidad en la identificacin de los diferentes huevos de helmintos.
Complete la informacin terica con la prctica con el apoyo del laboratorio.
Alcance
En esta prctica el estudiante obtendr una idea completa de la morfologa de los

diferentes huevos de helmintos, para su correcta identificacin.
4.
Antecedentes
Las enfermedades parasitarias contribuyen en forma importante a los problemas

mdicos, econmicos y sociales en el mbito mundial. Su transmisin est condicionada
con frecuencia por las condiciones sanitarias, socio-culturales, factores ambientales
(altitud, temperatura, humedad), al igual que el suministro de agua segura, desempean
un rol importante en la transmisin de parsitos, convirtiendo esto en un problema de salud
pblica.
Se debe de tomar en cuenta que un resultado negativo en un examen
coproparasitolgico no descarta la posibilidad de parasitismo, ya que el propio mtodo
analtico conlleva a la obtencin de resultados negativos. Esto se puede deber a:
Muestra inadecuadamente recogida y conservada: esto hace que la inadecuada

conservacin de la muestra deforme o destruya los diferentes estados del
parsito, haciendo imposible su observacin microscpica.
Escasez de parsitos en la muestra: la sensibilidad de los mtodos coprolgicos

es relativamente baja, por lo que cuando el nmero de parsitos es muy bajo no
es posible su deteccin.
Biologa del parsito: Existen especies de parsitos que no eliminan sus estados
normalmente en las heces por lo que el examen de una muestra fecal dara casi
siempre un resultado falsamente negativo.
Periodo de invasin parasitaria: En aquellas especies parsitas que requieran

madurar sexualmente en otros rganos antes de alcanzar su localizacin final en
el intestino humano no sern fcilmente detectables con este tipo de examen.
Periodos negativos. En muchos parasitismos intestinales existen perodos

durante los cuales existe emisin, intercalados con otros, perodos negativos.
Para disminuir estas causas de error se debe:
Emplear tcnicas de concentracin parasitaria.
Realizar toma especial de muestra para parsitos de biologa peculiar.

23

Repetir la toma de muestra y su examen microscpico al menos tres veces a

intervalos de unos 5-7 das, antes de desechar la posibilidad de parasitismo
intestinal.
Antes de descartar parasitismo, y ante la posibilidad de un periodo negativo debe

recurrirse a la reactivacin, forzando la eliminacin de elementos parsitos
mediante la administracin de purgantes de tipo salino.
El examen microscpico para la deteccin de las diferentes estructuras de los parsitos

en heces se puede realizar mediante distintas tcnicas:
-
Mtodo directo
Mtodo de concentracin
Existen muchos mtodos de concentracin, cada uno con sus ventajas e

inconvenientes, debiendo ser la prctica individual y, sobre todo, el tipo de parasitismo
sospechado, los que determinen en cada momento le eleccin del procedimiento a utilizar.
Tcnica de Kato kat
En 1954, Kato y Miura introdujeron el frote grueso para examen de heces. Fue
mejorado, evaluado y adoptado en programas de control de parsitos intestinales en
Japn.
Es un mtodo el cual fue dado a conocer en 1963 por la Organizacin Mundial de la
Salud en reunin de expertos para el control de geohelmintiasis.
Fundamento: El mtodo se basa en aclarar con una solucin de glicerina un frote grueso
de heces sin diluir. Los huevos de algunos helmintos se aclaran ms lentamente, por lo
que se destacan fcilmente en las heces aclaradas.
Ventajas del mtodo:
Las heces no estn diluidas.
Con la cantidad de heces conocida, las cuentas de huevos son estandarizadas y

comparables.
Facilita la observacin de grandes cantidades de muestra
Facilita su transporte
Permite una fcil observacin. Desventajas
No se pueden utilizar heces lquidas
No permite observar larvas
No permite observar protozoos
24

Ascaris
Enterobius
Trichuris
trichura
lumbricoides
vermicularis
Uncinaria
Taenia
sp
Huevos de helmintos:
Otras estructuras que pueden evidenciarse con el examen microscpico son:
Leucocitos: estas clulas en materia fecal generalmente se encuentran asociadas

a moco y se encuentran en diferentes enfermedades intestinales. Predominan en
infecciones bacterianas (shigelosis, salmonelosis, excepto fiebre tifoidea y colitis
invasiva por Escherichia coli). Estas clulas pueden ser
identificadas con la coloracin de azul de metileno.
Lecucocitos
Tincin Azul de metileno
Aumento 100x
25

Eritrocitos: se observan cuando hay hemorragias de colon, hemorroides y

fisuras sangrantes.
Eritrocitos
Preparacin en fresco
Aumento 100x
Cristales de Charcot-Leyden: se originan de productos de la degradacin de los

eosinfilos y se asocian a procesos como parasitosis de tipo helmntico.
Cristales de Charcot-Leyden
Tincin: Lugol
Aumento de 40x
Restos alimenticios de origen vegetal: los almidones son frecuentes y se

observan como grnulos de forma y tamao irregular. Son fcilmente identificables,
porque en las preparaciones de Lugol toman color rojo, azul violeta, segn el grado
de digestin que hayan sufrido.
Restos alimenticios de origen animal: son principalmente fibras y grasas

musculares. Las primeras se observan como rectngulos amarillos con estras
transversales y las segundas en forma de gota de diferentes tamaos, transparentes
o amarillentas.
Clulas de descamacin y cristales: Se pueden observar en el examen

coprolgico, pero no tienen significado especial.
26

Cristales de Restos alimenticios vegetales,

animales y clulas de descamacin
Preparacin en fresco
Aumento de 40x
Papel mayordomo
5. Materiales y equipo
Alcohol al 70%
Papel tornasol
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur estriles
Beaker con cloro para descarte
Bolsas para descarte de basura
Portaobjetos limpios
desgrasados
Cloro al 5%
Solucin de Lugol
Cubreobjetos limpios
Frascos
con
desconocida
muestra
Guantes
Lentes de proteccin
Marcador indeleble para vidrio
6.
Microscopio compuesto
Papel limpia lentes
Solucin salina al 0.85%

Torundas de algodn
Tubos con tapa de rosca con
solucin salina estril (2 ml)
Solucin de Kato:
(Glicerina 500 ml, H20
destilada 450 ml, verde de
malaquita 3%
6 ml de H 20 destilada)
Papel celofn
Baja lenguas o esptulas
Procedimiento
PARTE I. Observacin directa de la muestra
Tome nota de las siguientes caractersticas de las heces:
Forma (formada, semi formada, pastosa, lquida)
Color (caf, marrn, amarilla, verde, pardo, etc.)
Presencia de restos alimenticios, moco o sangre
27

PARTE II. Determinacin de pH
Rotule una lmina o portaobjetos limpio, con el nmero correspondiente a la

muestra.
Tome un trozo de papel tornasol (pH), y colquelo sobre el portaobjetos.
Extraiga una pequea porcin de muestra con un aplicador de madera y depostela

sobre un trozo de papel pH, espere unos 20 segundos y observe el cambio de color
en la superficie del papel.
Anote el pH dependiendo de la lectura en la escala de colores.
Reporte:
pH cidorango de 1-6.9
pH neutro.7.0 (EXACTO)
pH alcalinorango de 7.1-14.0
PARTE III. Preparacin de frotis
Prepare otra lmina portaobjetos con la numeracin que corresponde, respecto a

su muestra de trabajo.
Prepare una cmara hmeda (caja de Petri, con algodn humedecido con agua
destilada).
Deposite una gota de la solucin salina en la izquierda parte central de la lmina ya

numerada.
Destape con precaucin el recipiente que contiene la muestra.
Extraiga una pequesima parte o porcin de la muestra con la ayuda de un

aplicador de madera y depostela sobre la gota solucin salina que contiene la
lmina, previamente preparada.
Posteriormente, haga unos crculos sobre la lmina, con la ayuda del aplicador que
contiene la muestra.
Coloque con cuidado el cubre objetos, procurando no dejar burbujas de aire.
Coloque la preparacin dentro de la cmara hmeda.
Prepare una segunda lmina desde el punto 1 al 7, utilizando colorante de Lugol.
PARTE IV. Conteo de huevos (Tcnica de Kato Kat)
Se corta el papel celofn en pequeos rectngulos de 25X40mm.
En un frasco mbar se coloca la solucin de Kato, se introducen los cortes de

celofn.
Se depositan por un tiempo mnimo de 24 horas antes de ser usados.
28

Colocar en porta-objeto 60-70 mg de heces (grano de arroz) o se utiliza el molde

que mide aproximadamente esta cantidad.
Tomar un trozo de papel celofn humedecido en solucin de Kato y se escurre en

papel absorbente para quitar el exceso.
Invertir la preparacin sobre la superficie plana y hacerle presin con el dedo, hasta
que la muestra se extienda hasta 20-25 mm que no salga de los bordes del papel.
Secar y clarificar a temperatura ambiente 30-45 minutos o con una lmpara de 50W
a una distancia de 20-30 cm por 15 minutos.
Examinar y reportar sus resultados.
PARTE V. Observacin al microscopio
Coloque la lmina preparada con solucin salina en la platina del microscopio,

observe en seco dbil (10x) y luego en seco fuerte (40x) buscando huevos de los
parsitos.
Esquematice las observaciones.
Con la segunda lmina, proceda de la misma forma que con la anterior.
Vea al microscopio y esquematice.
Reporte otras estructuras cuando estn presentes.
Vea detenidamente los gusanos y anote la descripcin completa del mismo, en el

espacio creado para el efecto, en su ficha tcnica de parasicologa.
Tome en cuenta los siguientes aspectos para sus observaciones o
Forma,
cuerpo, cola y cabeza.
7.
Color
Grosor
Longitud
Lvese las manos despus de realizar cualquier tarea dentro de laboratorio de

microbiologa.
Todo el material empleado en las prcticas microbiolgicas se descarta en las

bolsas rojas.
No dejar por ningn motivo cajas, tubos o cualquier otro material contaminado, en
lugares que no corresponda al rea de trabajo.
29

NINGN EQUIPO DE PROTECCIN SUSTITUYE EL CUIDADO,

ORDEN Y PRECAUCIN QUE DEBE TENER CADA ESTUDIATE AL
REALIZAR SU TRABAJO.
Esquematice las observaciones realizadas de cada una de las lminas indicando la

descripcin correspondiente
Conteste el cuestionario y elabore su reporte.
10. Bibliografa de referencia

Macalupu, S. (1997) Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora
Amarilys e.i.r.l. Lima, Per.
30

Kaminsky, R. (1996) Manual de Parasitologa. 2 Edicin. Editorial Rossany Auceda

Tegucigalpa, Honduras.
Uribarren, T. (2014) Recursos en parasitologa. Departamento de microbiologa y
parasitologa. UNAM
Komiya, Y & Kobayashi, A. (1966) Evaluation of Katos thick smear technic with a cellophane
cover for helminth eggs in feces. Jap Jorunal of Parasitology; 19:59-64.
Martin, LK & Beaver, PC. (1968) Evaluation of Kato thick smear technique for quantitative
diagnosis of helminth infections. The American Journal of Tropical Medicine and
Hygiene; 17:382-391.
Examen coproparasitolgico (2014). Universidad de Sevilla. Recuperado de
http://personal.us.es/cutillas/para/practicas/analisis-coprologico-parasitario.pdf.
Fecha de consulta 6 de junio de 2014
Leucocitos
en
heces Recuperado de
http://www.newshub.es/2013/01/leucocitosfecales_26.html. Fecha de consulta 16 de
junio de 2014
31

TINCIONES ESPECIALES PARA QUISTES DE AMEBAS

Prctica 4
1.
Introduccin
Los protozoos son organismos unicelulares del reino animal, unos son de vida libre y
otros son parsitos de animales y plantas. Son microscpicos y se localizan en diferentes
tejidos. Algunos son inofensivos, otros producen daos importantes que trastornan las
funciones vitales causando enfermedad y en ciertos casos la muerte del husped.
Algunos gneros de importancia mdica son Entamoeba, Naegleria, Acanthamoeba,
Giardia, Leishmania, Trypanosoma, Tricomonas, Cyclospora, Isospora, Plasmodium,
Toxoplasma, Cryptosporidium y Balantidium
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Comprenda la importancia de la realizacin de un adecuado diagnstico.
Desarrolle habilidad en la identificacin de los quistes de diferentes amebas.
Obtenga una informacin integral del tema de los protozoos.
Alcance
En esta prctica el estudiante obtendr una idea completa de la morfologa de los quistes
de las diferentes amebas humanas y su correcta identificacin.
4.
Antecedentes
Los protozoos de importancia mdica poseen las siguientes caractersticas
Son organismos unicelulares eucariticos.
El tamao oscila entre 2 - 200 m.
Presentan
ncleo(s),
diversos
La mayor parte son mviles y hetertrofos.
El alimento es digerido en vacuolas alimenticias.
El agua excedente es eliminada por medio de vacuolas contrctiles.
Su reproduccin, asexual o sexual, puede ser sencilla (divisin binaria) o compleja

(esquizogonia, merogonia, gametogonia, esporogonia).
organelos
citoesqueleto.
La amebiasis es una infeccin producida por Entamoeba histolytica, especie

parasitaria del hombre, que puede vivir como comensal en el intestino grueso, invadir la
mucosa intestinal produciendo ulceraciones y tener localizacin extraintestinales.
32

Esta afeccin, se conoce desde hace ms de cien aos. Lambel en 1859, descubri
en un nio de Praga, quien muri con un cuadro diarreico, la presencia de un protozoo
con seudpodos y no se le dio importancia.
No fue hasta en 1875, cuando Losch en San Petersburgo, descubri, que la diarrea
de un campesino era a causa de un microorganismo mvil, que posea ecto y endoplasma
y contena glbulos rojos y le llamo Amoeba coli y as, con el paso del tiempo, se ha
llegado a 1,924 cuando se logr cultivar con xito E. histolytica en un medio artificial a
base de huevo.
Se contemplan dentro del gnero Entamoeba las amibas intestinales Entamoeba
histolytica, E. dispar, E. moshkovskii, E. polecki, E. coli y E. hartmanni.
Morfologa
Los trofozotos, forma invasiva (vegetativa), tienen un dimetro de 10 - 60 m (rango
ms frecuente 12-15 m), forma alargada, un ncleo con endosoma central y cromatina
perifrica fina, distribuida regularmente. Presentan movilidad direccional, progresiva,
mediante la emisin de seudpodos digitiformes explosivos (lobpodos).
Los quistes, infectantes, son esfricos y miden 10 - 15 m. Presentan, segn su grado
de madurez, 1 - 4 ncleos con las mismas caractersticas del trofozoto, cuerpos
cromatoidales de bordes curvos y una masa de glucgeno cuando son inmaduros.
Quistes y trofozotos son eliminados en las heces fecales. Los vehculos principales de
transmisin son el agua y alimentos contaminados con quistes.
Trofozoito
Quistes
33

Ciclo de vida de Entamoeba hystolitica
En la mayora de los casos los protozoarios intestinales se pueden observar bien con
tinciones temporales, como es el caso de los exmenes directos con Lugol o solucin
salina
En algunas ocasiones es necesario teir los parsitos en forma definitiva, para
obtener preparaciones permanentes; otras veces estas tinciones son necesarias porque
se necesita distinguir algunas de sus estructuras celulares, usando tinciones especiales
permanentes. Algunos parsitos requieren tinciones especiales, para poder observarse.
Las preparaciones fecales permanentes son hechas por diferentes razones:
Proporcionan informacin sobre el material estudiado. (ej: tincin de Romanowsky).
tiles en la identificacin exacta de flagelados (eJ: tincin de Romanowsky, tincin

de hierro-hematoxilina)
Cuando el parsito no puede ser detectado en preparaciones en fresco o por

tcnicas de concentracin, la tincin permanente de material fecal fresco puede
revelar la presencia de parsitos intestinales (ej: tincin de Romanowsky, tincin
tricrmica, Tincin de Ziehl Neelsen modificada)
34

5.
6.
Son tiles en la demostracin de patrones nucleares de quistes, facilitando la

identificacin (Tincin de hierro-hematoxilina, tincin tricrmica).
Materiales y equipo
Alcohol al 70% (5.0 ml/A)
Lentes de proteccin
Alcohol-acido
Mechero de alcohol
Azul de metileno
Beackers con cloro (1 por mesa)

Papel limpia lentes
Muestra de agua desconocida
Papel mayordomo
Caja de Petri de vidrio
Perilla pequea, de goma
Carbol fucsina
Colorantes: Lugol y MIF
Portaobjetos limpios
Formalina (Fijador)
Torundas de algodn
Frascos con
desconocida
Varillas
Goteros
Guantes de ltex
desgrasados (4 / A)
muestra
colocacin
de
vidrio para
Procedimiento
PARTE I. Preparacin de Frotis de Muestra De Agua
Limpie una lmina porta objetos y rotlela como muestra.
Tomo un 1ml de agua y trasldela a un tubo ependorf.
Centrifugue por dos minutos
Descarte el sobrenadante
Con ayuda de una pipeta Pasteur, tome una gota del sedimento y depostelo en la
lmina ya rotulada.
Tape la muestra con un cubre objetos
Llvela al microscopio y observe tanto en 10 X como en 40 X
Vea al microscopio y esquematice

35

Reporte las estructuras
PARTE II. Preparacin de Frotis coloreado con MIF (mertiolate iodo y fenol)
Tome la segunda lamina (1b) ya numerada en la Parte I de este trabajo.
En el centro de la lmina, coloque una gota del colorante MIF.
Agite suavemente uno de los tubos que contienen muestras ya fijadas y destape con
precaucin.
Extraiga una gota de la muestra, con ayuda de una pipeta Pasteur y depostela sobre
la gota del colorante.
Descarte la pipeta de Pasteur, en el Beacker que contiene cloro (pero no en la perilla

de goma).
Coloque un cubre objetos sobre la preparacin y djela en la cmara hmeda, por

trmino de dos minutos.
PARTE III. Tincin de Ziehl Neelsen
Con las lminas ya preparadas, realice la coloracin para BAAR (bacilos alcohol
acido resistente).
Cubra el frotis con Fucsina Fenicada y caliente suavemente por debajo de la lmina,
con la llama de un mechero (de alcohol) hasta que se produzca emisin de vapores
blanquecinos visibles.
Espere 5 minutos y luego llave con agua de chorro, para eliminar el exceso de
colorante
Cubra el extendido con alcohol acido al 3 %, esperar 30 segundos o hasta que la

coloracin del extendido alcance un rosado plido.
Lave con agua de chorro, para eliminar el Alcohol Acido.
Cubra el extendido con el colorante azul de metileno y espere 30 segundos.
Lave con agua corriente, escurra y deje secar el extendido al aire, NO frotar.
PARTE IV. Observacin al Microscopio
7.
Llvela al microscopio y observe tanto en 10 X como en 40 X.
Vea al microscopio y esquematice.
Reporte las estructuras.

microbiologa.
36


8.
Cuestionario
a. Mencione tres tcnicas de tincin existen para parsitos intestinales

las utilizadas en la prctica.
distintas a
b. Cules son las dos formas o estados en las que se puede encontrar
Entamoeba hystolitica?. Dibjelas e indique cul en la forma infectante.
c. Nombre caractersticas de E. hystolitica en un preparado coloreado.
d. Describa que son los quistes y los trofozoitos de las amebas.
e. De un ejemplo de una a meba de vida libre que pueda producir enfermedad e
indique, Qu patologa produce?
Todo el material empleado en las prcticas microbiolgicas se descarta en las bolsas

rojas.
9.
Esquematice las observaciones realizadas de cada una de las lminas
Conteste el cuestionario y realice la investigacin.

Macalup S. 1997. Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora
Kaminsky R. 1996. Manual de Parasitologa. 2 Edicin. Editorial Rossany Auceda
Botero D. 1992. Parasitosis Humana
Colombia.
2da Edicin. Carvajal S.A Impreso en Medelln
Uribarren, T. (2014) Recursos en parasitologa. Departamento de microbiologa y
parasitologa. UNAM
Ciclo
de
Entamoeba hystolitica.
Recuperado de
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Entamoeba_histolytica_life_cycle-ru.svg.
Fecha de consulta 12 de junio de 2014
37

CORRELACIN DE CASOS CLNICOS CON RESULTADOS DE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Prctica 5
1.
Introduccin
El medico se vale del laboratorio de microbiologa como una valiosa herramienta que
le permite confirmar la presencia de determinado agente etiolgico cuando la clnica le ha
hecho considerar su presencia. Es por ello indispensable que, desde el inicio de la
enfermedad, el medico considere la realizacin de ciertas pruebas bsicas de laboratorio,
para correlacionar los datos clnicos, teniendo siempre especial importancia la historia del
paciente.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
Correlacione la historia clnica y los resultados de laboratorio para lograr un adecuado

diagnstico.
Aprenda a elegir muestra ideal, para la realizacin de las pruebas de laboratorio.
Haga uso adecuado de la informacin disponible en Internet para la colaboracin del

diagnstico final.
3.
Alcance
En esta prctica, estudiante utilizara todos los criterios diagnsticos, para llegar a una
definicin del caso, identificando al final el agente causal de la patologa y darle nombre a
la afeccin patolgica.
4.
Antecedentes
Las parasitosis intestinales son afecciones producidas por organismos cuyo hbitat
es el aparato digestivo del hombre. Algunos de ellos pueden observarse en heces aun
estando alojados fuera de la luz intestinal, por ejemplo, en el hgado (Fasciola heptica) o
en el pulmn (Paragonimus spp.)
Pertenecen a este grupo de enfermedades algunas de las ms prevalentes a nivel
mundial. Contrariamente a lo que podemos pensar, todos los protozoos intestinales
patgenos tienen una distribucin mundial, al igual que la mayora de los helmintos,
aunque por las diferentes condiciones higinico-sanitarias se han asociado siempre a
pases tropicales o en vas de desarrollo. De all que una buena parte del diagnstico se
lograra analizando detalladamente la historia clnica; en particular la procedencia y
aspectos socioculturales del paciente.
38

5.
Materiales y equipo
Sistema de Internet
Guantes de ltex
Libros de texto
Cloro al 5%
Computadoras
Alcohol al 70%
Torundas
algodn
6.
Procedimiento
de
PARTE I. Lectura del caso clnico
Lea detenidamente el caso

Consulte con los protocolos de las practicas anteriores, su libro de texto o internet.
PARTE II.
Tome los dibujos que sean necesarios para ilustrar sus casos clnicos.
Escriba la bibliografa como corresponde de acuerdo con las instrucciones del Manual
de Laboratorio.
PARTE III. Resolucin del cuestionario

Responda todas las preguntas de cada uno de los casos clnicos.
CASOS CLNICOS
Caso clnico No. 1
Paciente de 33 aos asiste al hospital por
presentar una diarrea de 5 das de evolucin con
ms de 8 deposiciones por da, con calambres y
dolor abdominal. Indica que desde hace varios
meses indica prdida de peso sin razn aparente.
Se le ingresa al hospital por presentar un cuadro
de deshidratacin y se le realizan varias pruebas
de laboratorio, entre los cuales se incluy una
prueba rpida de VIH la cual dio un resultado
positivo. Se le realiza tambin un coprocultivo el
cual dio negativo y un examen en fresco de heces
en donde se pudo observar la siguiente estructura:
1. Qu microorganismo est afectado al paciente?
2. Qu tincin recomendara para observar mejor este microorganismo? Cmo se realiza
esta tincin?
3. Cul es el ciclo de vida de este microorganismo?
4. Qu relacin existe entre los pacientes con VIH y este tipo de infeccin por este
microorganismo?
5. Qu tratamiento recomienda para el paciente?
39

Caso clnico No. 2

Investigue acerca de un brote en 1996 en Estados Unidos por frambuesas y fresas contaminadas,
cosechadas en Guatemala.
1. Qu tipo de pacientes fueron afectados por este brote?
2. Qu sntomas tenan los pacientes?
3. Qu microorganismo se logr identificar como responsable del brote?
4. Cul es el diagnstico de laboratorio para
este
microorganismo?
5. Qu tratamiento se les dio a estos
pacientes?
Caso clnico No. 3
Nio de 7 aos de edad es llevado por sus padres
a un centro de salud por presentar dolor
abdominal, fatiga, nuseas, prdida de peso, y
heces que parece de consistencia normal
pastosa, pero son de coloracin verdosa y tienen un olor ms ftido de lo normal. Se le
realiz un examen de heces en fresco y se observ lo siguiente:
1. Qu microorganismo est afectando al paciente?

2. Cules son las dos morfologas que pueden presentar este microorganismo y cul es la
forma que se observ en el examen en fresco del paciente?
3. Cul es el ciclo de vida de este microorganismo?
4. Cul es el modo de trasmisin de este microorganismo?
5. Cul es el tratamiento?
6. Cules son las complicaciones para este tipo de infeccin intestinal en nios?
Caso clnico No. 4
Paciente de 16 aos se presenta al hospital general por presentar fiebre de 39C desde
el da anterior y el joven menciona que los sntomas inician un da despus de que fue de
paseo a un parque acutico con sus amigos. Los sntomas han aumentado en las ltimas
12 horas, ahora con intensa cefalea, nuseas, vmitos, fotofobia. Al examinarlo se
observ una rigidez en la nuca y signos de irritacin menngea, Al paciente se le realiza
una puncin lumbar para obtener una muestra de LCR. En el laboratorio se report el LCR
con aumento de leucocitos, aumento de protenas y disminucin de glucosa y el cultivo
negativo.
1.
2.
3.
4.
5.
Cul es el diagnstico del paciente?

Qu prueba de laboratorio ayuda al diagnstico?
Qu tratamiento administrara al paciente?
Cul es el pronstico del paciente?
Cul es el modo de prevencin?
40

7. Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad

microbiologa.
Descarte los materiales descartables en los contenedores para el efecto.


8. Formato de presentacin de resultados

Resolucin de casos clnicos en hojas en blanco. Copie
pregunta y respuesta de cada caso.
Incluya las referencias bibliogrficas consultadas
Macalup S. 1997. Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora Amarilys
e.i.r.l. Lima, Per.
Kaminsky R. 1996. Manual de Parasitologa. 2 Edicin. Editorial Rossany Auceda Tegucigalpa,
Honduras.
41

TINCIN DE GIEMSA PARA PROTOZOOS SANGUNEOS Y

TISULARES
Prctica 6
1.
Introduccin
Los protozoos sanguneos y titulares, estn ntimamente relacionados con los

parsitos intestinales, en prcticamente todos los aspectos, excepto en lo que se refiere
a la localizacin de la infeccin.
Con respecto a la identificacin de los parsitos de mayor trascendencia a nivel del pas
(Plasmodium sp. y/o Leishmania sp.), pueden ser identificados por varios mtodos.
La microscopia es un mtodo sensible, especfico para la identificaron de especies y
estadios de los protozoos sanguneos y titulares, puede adems proporcionar informacin
sobre la viabilidad de los parsitos y esto sumado al conteo de parasite ma, es til para
evaluar la respuesta al tratamiento.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Aprenda a realizar una correcta toma de muestra, especialmente para aquellos

pacientes sospechoso de paludismo.
Desarrolle la habilidad en la identificacin de los protozoos sangunea y tisular en

sus diferentes estadios.
Alcance
Conocer la morfologa de los diferentes protozoos en los diferentes estadios adems

de los elementos que conforman la sangre, que se observa en los diferentes tipos de
muestras (leucocitos polimorfos nucleares, linfocitos, monolitos, plaquetas y eritrocitos
normales)
4.
Antecedentes
Diagnstico de Malaria
Para el diagnostico de Plasmodium sp, la sangre circulante de los pacientes
infectados, enfermos portadores, es la muestra de eleccin, para la realizacin de un
diagnstico de laboratorio oportuno, rpido y confiable.
Para el diagnostico de Malaria, existen dos tipos de preparaciones una de ellas es la
Gota Gruesa y la otra Frotis o extendido de sangre completa, debe hacerse en el
momento que se presenta la fiebre y antes de la administracin de medicamentos.
Se pueden identificar distintos estados en una preparacin con sangre perifrica:
42

trofozoitos, esquizontes, gametocitos, cada uno con morfologa caracterstica de las cuatro
especies de Plasmodium (P. vivax, P. malarie, P. falciparum y P. ovale)
Especie de mayor incidencia en Guatemala
Especie que produce mayor mortalidad
Diagnstico de Leishmaniais
Para la identificacin de Leishmania sp, donde el diagnostico de certeza es evidenciar
la presencia directa o indirecta del parsito, puede realizarse por diferentes tipos de
material humano, segn la localizacin de la enfermedad: aspirado de medula sea, para
Leishmaniasis visceral, raspado de ulcera para leishmaniasis cutnea y se puede utilizar
varios mtodos como: frotis, cultivo y biopsia.
El mtodo del Frotis, es rpido de bajo costo, alta sensibilidad y especifico, es el
mtodo de eleccin para el diagnstico confirmatorio de la Leishmaniasis cutnea, por la
facilidad de la toma de muestra (raspado de lesin cutnea), la coloracin y su anlisis en
la observacin microscpica.
Amastigotes en macrofago
Promastigote en cultivo y en el vector

(fase infectiva)
43

Diagnstico de la Enfermedad de Chagas

La identificacin de Trypanozoma cruzi requiere el conocimiento de la morfologa del
parsito, el cual por su ciclo de vida complejo posee ciertos estados que se encuentran
nicamente en el vector o en el hospedero definitivo.
Tripomastigote metacclico, forma infectante. Es fusiforme. Posee un flagelo que

inicia en la parte posterior del parsito, y emerge libre en el extremo anterior,
formando en su trayecto submembranal una membrana ondulante. Amastigote
intracelular, replicativo. Es redondeado u ovoide.
Tripomastigote sanguneo, diagnstico. Es una forma de transicin.
Epimastigote, en cultivos y en el insecto vector. Tambin puede encontrarse en
vertebrados, como forma de transicin. El cinetoplasto se encuentra entre el ncleo
y el flagelo libre. La membrana ondulante es pequea
Ciclo de vida de Plasmodium sp
44

5.
Materiales y equipo
Portaobjetos
limpios
desgrasados (4 / A)
Papel mayordomo
Torundas de algodn (1/A)
Beackers con cloro ( 1 por

mesa con 20 ml de cloro)
Lanceta
Beacker con metanol
Bolsas para descarte de

basura
Colorantes: Giemsa y solucin

amortiguadora
Papel limpia lentes
Goteros
Lentes de proteccin
Perilla pequea, de goma
Pizeta de alcohol al 70% (5.0

ml/A)
Laminas
ya
preparadas
coloreadas
Pizeta de cloro al 5% (5ml/A)
Guantes de ltex
6.
Aceite de inmersin.
Procedimiento
PARTE I. Preparacin de frotis o extendido sanguneo
Tenga a la mano todos los materiales necesarios para la toma de la muestra.
Frote enrgicamente con un algodn humedecido con alcohol al 70%. La yema

del dedo de su compaero de trabajo (paciente) de preferencia el tercer dedo de
la mano izquierda.
Detenga la mitad de la lanceta estril que va a utilizar con el paciente.
Detenga firmemente el dedo del paciente, con ayuda de su mano izquierda.
Pinche de forma rpida, la parte lateral de la yema del dedo de eleccin.
Limpie la primera gota de sangre, con un algodn seco.
Con la mano derecha, tome el portaobjeto, extienda la sangre a manera de formar

un rectngulo de grosor uniforme (forme una banderita), de la siguiente forma:
coloque delante de la gota de sangre, el borde angosto del segundo portaobjeto,
sobre el primero, formando un ngulo de 30 grados, dejando la gota a su lado
derecho. Mueva hacia atrs el segundo portaobjeto hasta que toque la gota de
sangre, y entonces se desliza hacia delante, para que la sangre que esta atrs se
extienda. La gota debe ser pequea, de tal manera que sea totalmente extendida
antes de llegar al final del portaobjeto, ese extremo del extendido debe tener el grosor
de una sola capa de eritrocitos.
45

PARTE II. Preparacin de la Gota Gruesa
Con la mano derecha, tome el portaobjeto, sostenindolo por los bordes.
Con la mano izquierda oprima levemente el dedo para extraer la tercera gota, la
cual deber caer en el centro del portaobjeto sostenido con la derecha.
Extendida la sangre con la esquina de otro portaobjeto, hasta lograr un circulo

de aproximadamente 1 cm. de dimetro y haga que el espesor de la capa sea
uniforme.
Deje secar a temperatura ambiente.
PARTE III. Coloracin para identificacin de Protozoos
Cubra el extendido seco, con 2 o 3 gotas de alcohol metlico, por 2 minutos,

escurra y deje secar a temperatura ambiente.
Agregue 3 o 4 gotas de Colorante Giemsa, hasta cubrir la preparacin, por

trmino de 5 a 7 minutos.
Escurra el colorante
Lave la lmina con solucin amortiguadora o agua de chorro.
Escurra y deje secar al aire.
Nota: Tanto el Frotis o extendido, como la Gota Gruesa, para Malaria y los frotis o
extendidos para Leishmania, se colorean de la misma forma.
PARTE IV. Observacin al Microscopio
Lleve al microscopio lminas ya preparadas y coloreadas.
Agregue una gota de aceite de inmersin y observe en 100X.
Esquematice
Reporte las estructuras
7.

microbiologa.
46

8.
Cuestionario
Resuelva las siguientes preguntas:

a. Elabore un cuadro comparativo de los estados de las cuatro especies de
Plasmodium e ilustre cada uno.
b. Esquematice el ciclo biolgico de la infeccin por Plasmodium indicando cada
uno de sus estados presentes en los diferentes hospederos.
c. Cules es o son los rganos en los que T. cruzi produce hiperplasia?
d. Esquematice y describa cada estadio de Leishmania.
9.
No dejar por ningn motivo cajas, tubos o cualquier otro material contaminado,
en lugares que no corresponda al rea de trabajo.

Esquematice las observaciones realizadas de cada una de las lminas
Conteste el cuestionario y realice su reporte.
10. Informe final

Elabore su informe final con los resultados obtenidos de la prctica.
Macalup S. 1997. Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora
Kaminsky R. 1996. Manual de Parasitologa. 2 Edicin. Editorial Rossany Auceda
Botero D. 1992. Parasitosis Humana 2 Edicin. Carvajal S.A Impreso en Medelln
Colombia.
Ciclo de
vida Trypanozoma cruzi. Recuperado de
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/parasitologia/images/chagas_cicl
ob.jpg. Fecha de consulta 17 de junio de 2014
47

EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE CAROS EN POLVO

DOMSTICO
Prctica 7
1.
Introduccin
Los caros forman parte del grupo ms antiguo, diverso y numeroso de animales que
han existido desde que apareci la vida en el planeta. Conviene por lo mismo sealar
algunas de las ms importantes caractersticas de estos animales, antes de entrar al tema
concreto de los caros.
Los caros son pequeos arcnidos no visibles a simple vista (200-500 micras) que
viven habitualmente en nuestro hogar, concentrndose en gran nmero en los lugares
donde encuentran las condiciones ptimas de alimentacin, calor y humedad
(temperatura de 20-30C y una humedad relativa de entre el 70%-80%, siendo la
humedad el factor ms importante que determina el grado de infestacin acarina).
Se encuentran principalmente en alfombras y moquetas, tapiceras, colchones,
almohadas y sillones o sofs. Tambin pueden encontrarse en productos alimenticios
almacenados en el interior de la vivienda.
Las hembras producen de 25 a 50 huevos y una nueva generacin de adultos
aparece cada tres semanas.
En los colchones y almohadas es donde se encuentran en mayor nmero. En estos
sitios tienen el grado de calor y humedad necesarios, al igual que su alimento principal:
los queratinocitos (escamas drmicas humanas) que se desprenden mientras dormimos.
Esto puede explicar porque muchos pacientes presentan sintomatologa alrgica ms
acusada o agudas.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Aprenda a realizar tcnicas bsicas, para el aislamiento e identificacin de

caros.
Desarrolle la habilidad en la realizacin de pruebas in vitro.
Alcance
Conocer y comprender la utilidad que tienen los diagnsticos in vitro.
4.
Antecedentes
Como son los caros: se trata de animales sumamente pequeos, muchos de ellos
microscpicos; algunas larvas miden menos de 100 micrones; las formas ms grandes
son las garrapatas que, cuando estn repletas por la sangre ingerida, llegan a alcanzar
hasta 3 cm de longitud. Una de las especies de mayores dimensiones en el mundo es
48

Amblyomma longirostre koch, que en Mxico es parsita del puercoespn. La mayor parte
de los caros adultos miden entre medio y dos milmetros.
Del 5 al 10% de la poblacin padece algn tipo de alergia, ya sea al polvo casero,
diversos tipos de polen, alimentos y medicamentos principalmente, este tipo de alrgeno
est indicado en el asma ocupacional puede ser considerado como el agente etiolgico
causante de la afeccin, por lo que es importante, su aislamiento e identificacin. La forma
de combatirla es a travs de vacunas que se preparan con las sustancias a las que el
enfermo es alrgico.
El paciente alrgico responde de manera exagerada a sustancias que son
inofensivas para los dems, pues nace con una predisposicin gentica para desarrollar
estas enfermedades. Desde muy temprana edad se enfrenta al medio ambiente, donde
estn los elementos que van a producirle una alergia principalmente de tipo respiratorio.
La alergia en la nariz es la ms frecuente, ocupa solo o acompaada de asma un 91 %
de todas las alergias.
En estos casos los pacientes presentan, muy frecuentemente cuadros parecidos a
gripas con estornudos, moco muy fluido, nariz congestionada con comezn, ojos llorosos,
infecciones frecuentes en los odos que los pueden llevar a sordera total cuando son muy
repetidas. El doctor Aguilar hace hincapi en que la alergia nasal cuando es atendida a
tiempo evita que se desarrolle asma y lo ms grave, es que se ha encontrado nios de
hasta ocho meses de edad.
El principal alrgeno del polvo domstico est formado por caros pertenecientes al
gnero Dermatophagoides. Las partculas fecales producidas por estos caros son su
principal fuente de alergenos. Cada caro produce unas 20 partculas fecales cada da.
Estas partculas continan ocasionando sntomas alrgicos incluso tras la muerte del
caro.
De esta forma, cuando una persona es alrgica requiere tomar medidas preventivas,
como evitar el hacinamiento, los juguetes de peluche, alfombras y cortinas pesadas, ya
que en ellas se adhiere el polvo y son como una incubadora que favorece el desarrollo
de los caros.
Dado que no es posible erradicar a los caros por ser elementos del medio ambiente,
hay que recurrir a vacunas para inmunizar a los pacientes alrgicos. El 80% de los
tratamientos para las alergias son aplicados con base en vacunas. Para indicar la
vacuna, se realizan pruebas en la piel del enfermo donde se identifican las sustancias
causantes de la alergia y se prepara una especfica para cada enfermo.
Medidas de control
Mantener la casa limpia
Limpiar cuidadosamente con aspiradores con filtros HEPA (filtros de alta

captacin) una vez por semana.
Lavar las fundas de almohada y las sbanas una vez por semana.
Mantener los niveles de humedad relativa por debajo del 50%to.
Colocar los objetos pequeos que acumulan polvo en armarios cerrados o

cajones. Colocar la ropa en armarios cerrados.
49

5.
Limpiar, sin levantar polvo, con un trapo hmedo.
Se puede utilizar peridicamente un acaricida cada 3 meses en el caso de

continuar con alfombras.
Materiales y equipo
Microscopio ptico
Beacker con solucin salina

saturada
Papel mayordomo
Perilla de goma
Beacker de alcohol al 70% (5.0

mL/A)
Pipetas Pasteur
Bolsas
para
de basura
Pizeta con alcohol al 70%
Pizeta de cloro al 5%
(5mL/A)
Porta objetos limpios
Trozo de gasa
Vaso cnico
encerado
descarte
Caja de Petri de vidrio
Cubre objetos limpios
Estereoscopio
Guantes de ltex
Laminas
preparadas
muestras de caros
con
de
papel
Polvo recogido mediante la tcnica de aspirado, con un aspirador convencional,

utilizando una bolsa nueva, aspirando durante 2 minutos por cada metro cuadrado.
6.
Procedimiento
Muestra
PARTE I. Preparacin de la muestra:
Remueva las partculas grandes que pudiera contener la muestra.
Re suspenda la muestra en un Beacker que contenga 150 mL de etanol al 70

por trmino de 10 minutos.
Posteriormente, extraiga el alcohol por decantacin, evitando remover mucho el

sedimento.
A continuacin, aada la solucin salina saturada (150mL) y deje reposar por

otros 10 minutos.
Decante la solucin en varias cajas de Petri, pasando la solucin a travs de una

capa de gasa colada dentro del vaso de cartn.
Por ltimo, con ayuda del estereoscopio, observe cuidadosamente, la solucin

salina depositada en las cajas de Petri y extraiga los caros que flotan en la
superficie de la solucin, con ayuda de una pipeta Pasteur.
50

PARTE II. Aclaracin de las estructuras de los caros
Los caros extrados, se colocan en una caja de Petri, que contenga solucin
aclararte (solucin de lacto fenol) por termino de media a 24 horas.
Despus procesa a montar los caros entre una porta y cubre objetos.
PARTE III. Identificacin de caros
8.
Proceda a su identificacin, utilizando para ello un microscopio ptico.

Haga un dibujo representativo de los resultados obtenidos y elabore su reporte.
9.
Cuestionario
a.
b.
c.
d.
Cules son las especies de Dermatophagoides ms comunes?

Qu otras familias de caros son importantes fuentes alergnicas?
Describa el ciclo vital de los caros.
Cul es el tratamiento farmacolgico para un paciente con alergia a los caros?
Dibuje y esquematice.
7.

microbiologa.

Manual I de Enfermedad Prioritarias en Amrica Latina. OPS/OMS, Tegucigalpa
Honduras, 1994.
National Heart Lung and Blood Institute (2000). Guidelines for the diagnosis and
management of asthma. National Institute of Health (Instituto Nacional del Corazn,
Pulmn y la Sangre. Pautas para el diagnstico y tratamiento del asma. Instituto
Nacional de Salud);
51

EXAMEN DIRECTO, TINCIONES Y CULTIVO PARA HONGOS

Prctica 8
1.
Introduccin
Los hongos que son los organismos del reino Fungi, incluyen mohos y levaduras. El
ambiente est cargado de esporas de diversos hongos y, por lo general, estas flotan en
el aire. Entre la amplia variedad de esporas que caen sobre la piel o son inhaladas hacia
los pulmones solo algunos producen infecciones menores, y solo rara vez se extienden
hacia otras partes del organismo. Algunos pocos tipos de hongos, como las variedades
de Candida, pueden vivir normalmente sobre la superficie del cuerpo o dentro del
intestino. Estos habitantes habituales del organismo solo ocasionalmente pueden causar
infecciones locales de la piel, la vagina o la boca, pero muy rara vez producen ms dao.
En ciertos casos, no obstante, determinadas variedades de hongos pueden producir
infecciones graves de los pulmones, el hgado y el resto del cuerpo.
2.
Objetivos
Que el estudiante
3.
Aprenda a realizar las tcnicas bsicas, para la identificacin de hongos.
Desarrolle la habilidad en la realizacin de pruebas in vitro.

Alcance
Conocer y comprender la utilidad que tienen los diagnsticos in Vitro.
4.
Antecedentes
Los hongos tienen una tendencia especial a causar infecciones en individuos con un
sistema inmunolgico deficiente. Por ejemplo, los pacientes enfermos de SIDA o que
reciben tratamiento contra el cncer tienen ms probabilidades de desarrollar infecciones
nicticas graves. En algunos casos, las personas con inmunidad deficiente desarrollan
infecciones causadas por tipos de hongos que, muy rara vez, por no decir nunca, causan
dao a los individuos cuyos sistemas de inmunidad funcionan normalmente. Entre estas
infecciones se encuentran las mucormicosis y la aspergilosis.
Algunas infecciones fngicas son ms frecuentes en ciertas reas geogrficas. Por
ejemplo, la blastomicosis se produce solo en Norteamrica y frica. Debido a que
muchas infecciones fngicas se desarrollan lentamente, pueden pasar meses o aos
antes de que una persona se d cuenta de que necesita atencin mdica. Estas
infecciones pueden ser difciles de tratar y el tratamiento suele efectuarse durante mucho
tiempo. En la actualidad existen varios frmacos antimicticos.
52

Las infecciones invasoras causadas por hongos son cuadros difciles de reconocer,
ya que tanto los sntomas como los signos clnicos son, a menudo inespecficos.
Recientemente la NIAID (Nacional Institute of Allergy an Infectious Diseases) han
considerado tres pilares para el diagnstico de las infecciones fngicas invasoras en
pacientes con cncer y trasplante de precursores hematopoyticos:
Factores predisponentes en el hospedero.
Elementos clnico-radiolgicos
Hallazgos de laboratorio
FACTORES DE RIESGO PARA DESARROLLAR INFECCIONES MICTICAS

Terapia que suprime el sistema inmunolgico
Frmacos anticancerosos
Corticoesteroides y otros frmacos inmunodepresores
Enfermedades y situaciones
SIDA
Insuficiencia renal
Diabetes
Enfermedad pulmonar, por ejemplo enfisema
Enfermedad de Hodgkin y otros linfomas
Leucemia
Quemaduras extensas
Microscopa: La observacin microscpica puede dar informacin preliminar sobre

la presencia o ausencia de hongos en la muestra y tambin orientar sobre la especie
causante de la infeccin debido a la observacin de elementos micticos caractersticos.
Algunos elementos que podremos observar al microscopio son levaduras, hiemaciones,
hifas septadas o aseptadas, pseudohifas.
Examen directo: el examen al fresco entre lmina y laminilla es un mtodo de bajo
costo, rpido y que no requiere equipamiento especial; sin embargo, deber ser realizado
por personal entrenado. Su sensibilidad depende del tipo y cantidad de muestra y del
nmero de microorganismos presentes en ella. Cuando la muestra tiene detritus celulares
se utiliza hidrxido de potasio al 10%, el cual clarifica de material orgnico y deja intactas
las estructuras fngicas.
Tincin de Gram: tambin es una tcnica barata y rpida, que nos permita observar
levaduras gemantes o formando pseudohifas con mayor claridad que el examen directo,
sin embargo; debe tenerse presente que los hongos filamentosos no se tien o lo hacen
muy dbilmente con tincin de Gram, por lo que, si se sospecha la presencia de un hongo
filamentoso, no debe utilizarse.
53

Cultivos: La siembra microbiolgica es necesaria para lograr la identificacin de

especie de los diversos hongos comprometidos en infecciones fngicas y permite adems
realizar estudio de susceptibilidad en caso de ser necesario. En general, si no hay
suficiente material para realizar el examen directo y el cultivo, este ltimo tiene prioridad
por su mayor sensibilidad.
Cultivos en medio slido: se pueden utilizar medios no inhibitorios como agar
Sabouraud o agar cerebro-corazn para muestras provenientes de sitios estriles y
medios inhibitorios que, por contener antimicrobianos, evitan un crecimiento bacteriano
excesivo para muestras provenientes de sitios no estriles. En estas muestras en que el
cultivo es mixto, est demostrando que la siembra en medios corrientes deja de recuperar
hasta el 50% de los cultivos positivos para hongos 14.
Tabla 1. Condiciones de recoleccin y transporte para muestras frecuentes recibidas en
el laboratorio de micologa.
Tipo de
muestra
Recoleccin
Transporte
Sangre
2
Limpie la piel con alcohol <
a
70%. Luego desinfecte con
temperatura
providota
yodada,
ambiente.
aplicando
concntricamente
hacia
fuera. Deje secar y realice
la puncin venosa.
Tome el mximo de sangre
recomendada para la
botella que se est
utilizando.
Lquido
cefalorraqudeo
Procedimiento medico
Obtengo 1-2 ml en tubo
estril.
Enve de inmediato
al laboratorio (ideal
<15 minutos) a
temperatura
ambiente.
Lquidos de
cavidades
estriles
(asctico,
pleural,
pericrdico y
articular)
Procedimiento mdico, ya
sea por aspiracin
percutneo o ciruga.
Enve la mayor cantidad
de muestra posible.
Enve de inmediato
al laboratorio (ideal
<15 minutos) a
temperatura
ambiente.
54
horas
Observaciones
Idealmente obtenga dos

botellas separadas al
menos por 30 minutos
de sitios de puncin
diferentes.

Muestras
respiratorias
En caso de
expectoracin, debe
preferirse la primera de la
maana, 2-3 ml en frasco
estril. Lavado bronco
alveolar de resorte
medico
< 2 horas a
temperatura
ambiente
Se prefiere lavado
bronco alveolar o
biopsia s existe
sospecha de infeccin
pulmonar invasora.
Orina
Recolecte entre 50-200ml

de orina matinal en frasco
estril.
< 2 hrs. a
temperatura
ambiente
No se recomienda
recoleccin de 24
horas.
Tejidos
Procedimiento medico
< 2 hrs. a
temperatura
ambiente
Heridas,
abscesos
Se prefiere aspirado o < 2 hrs. A

biopsia.
Cuando sea temperatura
posible tome trozo de la ambiente
pared del absceso. Si no
es posible, use rotulado de
la zona.
Glosario
Micologa: estudio de los hongos y su biologa.
Hongos: Reino constituido por organismos eucariontes hetertrofos absortitos que
poseen quitina en su pared y carecen de clorofila. Pueden ser unicelulares o
multicelulares, macro o microscpicos. Por sus caractersticas de crecimiento, en el
laboratorio se dividen en lavaduras y hongos filamentosos.
Levaduras: son hongos unicelulares ovoideos, que pueden estar aislados o
formando cadenas, con colonias similares a las de bacterias y que se dividen por
gemacin.
Filamentosos: son hongos multinucleados, con colonias algodonosas o vellosas.
Forman estructuras filamentosas o hifas, las cuales pueden ser septadas o aseptadas y
que crecen por elongacin de los extremos.
Hifa: estructura filamentosa de los hongos, y que en conjunto forma el micelio.
Pueden tener tabique o septo (hifa septada) o carecer de l (hifa aseptada o sifonda).
Pseudohifa: cadena de clulas, formada por levaduras gemantes y que semejan una
hifa, pero que presentan constricciones a nivel del septo y que en el sitio de ramificacin
parten con un tabique.
Gemacin: proceso de reproduccin asexual caracterstico de las levaduras, en el
cual una nueva clula se genera a partir de una elongacin de la clula madre.
55

Materiales y Equipo:
Estereoscopio
Beacker con alcohol al 70%
Goteros con solucin de KOH al 10%
Caja de Petri
Goteros con
Lactofenol
Cubre objetos (2/A)
solucin
Laminas porta objetos (2/A)

Lentes de proteccin
Perilla de goma
Pipetas Pasteur
Microscopio ptico
Pizeta con alcohol al 70%
Muestra desconocida
Pizeta con cloro al 5%
Papel filtro
Pizetas con agua destilada
Papel mayordomo
6.
Procedimiento
de
Muestra
Muestra de hongos saprofitos, provenientes de frutas y verduras del ambiente y del
rea de trabajo.
PARTE I. Inoculacin o siembra de la muestra:
Muestra representativa del ambiente.
Rotule la caja indicando el tipo de muestra y la fecha.
Quite la tapa superior de la caja y djela expuesta al aire del laboratorio durante
15 minutos.
Cbrala de nuevo e incbela a temperatura ambiente por trmino de 8 das.
Muestra de superficies
Rotule la caja indicando el tipo de muestra y la fecha.
Remueva el forro de un hispo estril y frote la superficie de la mesa de trabajo.
Con la mano izquierda, tome la parte inferior de la caja que contiene el medio de
cultivo.
Con la mano derecha, tome el hisopo e inocule la muestra.

instrucciones del catedrtico).
Tape la caja e incbela a temperatura ambiente por termino de 8 das.
56
(siga las

PARTE II. Observacin de cultivos
Utilice dos de las cajas con cultivo de hongos para la observacin en el

estereoscopio.
Describa forma, color, apariencia tanto del micelio como del revs de la caja.
Dibuje y haga su descripcin
PARTE III. Frotis con azul de lactofenol
Coloque las lminas preparadas y teidas con azul de lactofenol que se les
proporcionan.
Enfoque en objetivo de seco dbil, con cuidado de no romper la lmina y

observe.
Traslade a objetivo de 40X.
Anote a continuacin los resultados obtenidos, acompaado de ilustraciones

esquemticas.
PARTE V. Resultados
Se realizar la lectura e cajas, despus de una semana de la siembra.

microbiologa.

8.
9.
Haga un dibujo representativo de los resultados obtenidos, utilice crayones

para el efecto.
Cuestionario
a. Defina que es un micelio septado.
b. Cul es la funcin del hidrxido de potasio que se agrega a muestras de
escamas obtenidas de pacientes para el anlisis microscpico de hongos?
c. Qu gneros de hongos se encuentran comnmente como contaminantes de
los alimentos?
d. Qu gneros fngicos se encuentran principalmente que el aire?

57

Ostrosky-Zeichner L, Rex J, Bennet J, Kullberg B J. Deeply invasive candidiasis. Infect

Dis Clin North Am 2002; 16: 821-35 (medline)
Marr K, Patterson T, Denninh D. Aspergillosis: pathogeniesis, clinical manifestations an
therapy. Infect Dis Clin North Am 2002; 16:875-94. (medline)
Walsh TJ, Groll A H. Emerging fungal pathogens: envolving challenges to
inmunocompromised patients for the twenty-first century. Transpl Infect Dis 1999,
1:247-61.
Donnely JP. Symptoms and diagnosis of nosocomial fungal infections- State of the Art.
Eur J Med Res 2002, 7:192-9. (medlline).
58

OBSERVACION Y CULTIVO DE HONGOS LEVADURIFORMES

Prctica 9
1.
Introduccin
Los hongos constituyen un conjunto de seres vivos que incluye desde organismos
unicelulares hasta organismo pluricelulares macroscpicos. Estn formados por clulas
eucariotas con una pared rgida, y se caracterizan por ser inmviles, presentar nutricin
hetertrofa por absorcin y reproduccin sexual y asexual. Los hongos unicelulares son
microscpicos, poseen forma redondeada y se denominan levaduras. La mayora de los
hongos poseen un papel importante en la naturaleza, en la que se hallan ampliamente
distribuidos, degradando y reciclando materia orgnica muerta.
Algunos hongos
microscpicos
pueden
causar
diversas
enfermedades denominadas micosis; sin embargo, son escasas las especies
adaptadas estrictamente al hombre y la mayora de las que producen enfermedad
tienen su reservorio natural en el medio ambiente.
En general las clulas micticas se observan bien por microscopia convencional,
aunque pueden requerir tinciones especiales para facilitar su visualizacin. Crecen
fcilmente en los medios de cultivo convencionales dando lugar a colonias visibles
macroscpicamente, con morfologa bien diferenciada segn estn formadas por
levaduras y hongos filamentosos. Candida albicans es la levadura ms frecuente en
Guatemala y se caracteriza porque crece en agar sangre y agar nutritivo de forma similar
a bacterias, pero tambin en agar Sabouraud.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Explique la importancia de la realizacin de un adecuado diagnstico.
Diferencie levaduras de bacterias, en medios de cultivo utilizados en anlisis de

rutina.
Identifique la especie Candida albicans.
Alcance
En esta prctica el estudiante diferenciara macroscpica y microscpicamente

bacterias y hongos levaduriformes e identificar a Candida albicans.
4.
Antecedentes
Entre los hongos levaduriformes los gneros ms importantes en patologa son

Candida albicans y Cryptococcus, ambos de distribucin universal. Las infecciones por
Candida son, junto con las causadas por dermatofitos, las infecciones fngicas ms
frecuentes en nuestro medio y prcticamente las nicas que se producen en personas
sanas.
59

El gnero Candida est formado por diversas especies (C. albicans, C. tropicalis, C.
krusei, C. parapsilosis, C. guillermondi y otras) que se hayan ampliamente distribuidas
como saprofitas en la naturaleza, y como comensales en la piel, tubo digestivo y vagina.
Presentan una forma ligeramente ovalada y un tamao de 5 a 7 micrmetros, claramente
observables con tincin de gram. Las especies de Candida crecen bien en medios
bacteriolgicos usuales y en el medio de Sabouraud. Entre las 48-72 horas dan lugar a
colonias macroscpicamente visibles. La especie C. albicans se identifica por su
capacidad para producir tubos germinales en poco tiempo al inocularla en suero
sanguneo. Las diversas especies de Candida pueden producir infecciones por un factor
predisponerte o general, por lo que puede considerarse a Candida como un gnero
oportunista. Los procesos localizados afectan a las mucosas oral y vaginal, piel en las
zonas hmedas y de roce, va urinaria en pacientes con sondas y tratados con
antibacterianos. Es muy caracterstica la candidiasis esofgica en los enfermos con
sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA).
Durante muchos aos, la especie ms frecuente ha sido C. albicans, sin embargo,
debido al creciente nmero de pacientes inmunodeprimidos, se ha identificado muchas
especies ms como agentes etiolgicos de diversas infecciones.
Candida albicans puede asumir patogenicidad provocando la candidiasis; en ese
caso se presenta como una afeccin vaginal (vaginitis), de la cavidad oral (muguet), del
intestino de la piel.
En un fsico debilitado, inmunodeprimido o convaleciente de una larga cura
antibitica, la Candida se multiplica en modo anmalo y, atraviesa el intestino, para entrar
al torrente sanguneo, donde libera sus propias toxinas provocando la candidemia.
Los tubos germinales son una prueba til para diferenciar entre C. albicans de otras
especies de Candida. Se realiza a partir de una colonia fresca (24-48 h de crecimiento)
utilizando plasma fresco o suero humano con glucosa incubando a 37 C por mximo 2
horas. El tubo germinal es una extensin filamentosa de la levadura, sin estrechamiento
en su sitio de unin con la blastoconidia, que da lugar a hifas verdaderas. Slo C. albicans
es capaz de producir verdaderos tubos germinales; sin embargo, otras especies como C.
tropicalis pueden producir seudohifas de aspecto similar a los tubos germinales pero con
blastoconidias ms grandes que las de C.albicans. Para considerar una prueba como
positiva deben observarse ms de 5 tubos germinales.
Figura. Tubos germinales

60

5.
6.
Materiales y equipo
Pizeta con alcohol al
Microscopio ptico
70%
Porta
cloro al 5%
Cubre objetos limpios
Varillas
coloracin
Colorantes para gram
Cajas de Staphylococcus sp. y

Candida sp.
identificados
nicamente con nmeros.
objetos
limpio y desgrasado
de
vidrio para
Pizeta
con
Pizeta
con
destilada
Gotero
violeta
Gotero con Lugol
Gotero con
acetona
Gotero
safranina
agua
con
cristal
alcohol-
con
de
Cajas de agar sangre, agar

nutritivo y agar sabouraud.
Tubos con 1.0 ml de suero

sanguneo
Gotero con aceite de

inmersin
Guantes de latex
Papel limpia lentes
Papel mayordomo
Torundas de algodn
(1/A)
Beackers con cloro
Asas en argolla
Procedimiento
Lentes de proteccin
Identificar las lminas portaobjetos a utilizar.
Con un marcador trazar una lnea dividiendo en dos partes iguales cada una de las
cajas de medios de cultivo e identificarlas.
PARTE I. Prueba de tubos germinales
Trabajar frente al mechero.
Escoger una colonia bien aislada de la caja de aislamiento sospechosa de Candida.
Rozar la colonia por arriba con un asa en argolla e inocular en un tubo de rosca con
1 ml de suero sanguneo.
Incubar el suero a 37 C durante dos horas.
PARTE II. Inoculacin de medios de cultivo

En cada mesa encontrara cajas con dos tipos diferentes de microorganismos (bacterias
y levaduras).
61

Elija una colonia, muy bien aislada d la caja de un tipo de microorganismo. Destape
con cuidado la caja de Petri, roce la colonia elegida con la punta del asa en argolla
estril e inocule en la mitad correspondiente del agar nutritivo.
Estriando como se indica en el dibujo.
Elija una colonia, muy bien aislada de la caja del otro tipo de microorganismo. Repita
el procedimiento anterior, inoculando en la otra mitad del agar nutritivo.
Repetir los incisos b y c en el agar sangre.
Repetir los incisos b y c en el agar sabouraud.
PARTE III. Preparacin del frotis y tincin de Gram
Colocar una gota de agua en un portaobjetos previamente identificado.
Elegir una colonia de una de las cajas con crecimiento y rozarla suavemente.
Preparar con mucha precaucin un frotis.
Elegir una colonia de la otro caja con crecimiento y rozarla suavemente y agregar el
frotis del paso anterior, procurando dejarlo homogneo y finalmente extendido.
Dejarlo secar a temperatura ambiente.
Fijar a la llama del mechero.
Cubrir los frotis con solucin de Cristal Violeta y dejar por un minuto.
Lavar con agua d chorro y escurrir.
Cubrir con solucin de Lugol durante un minuto.
Lavar suavemente con agua de chorro y escurrir.
Gotear alcohol acetona sobre la preparacin hasta que deje de soltar color violeta.
Cubrir la lmina con solucin de Safranina, durante un minuto.
Escurrir el colorante y lavar suavemente la lmina con agua de chorro.
Colocar una hoja de papel mayordomo doblada en dos sobre la mesa de trabajo y
colocar all las lminas, ligeramente inclinadas para que terminen de escurrir y
sequen a temperatura ambiente.
PARTE IV. Preparacin de tubos germinales
Limpie y desgrase 1 lmina portaobjetos.
Prepare una cmara hmeda (caja de Petri, con algodn, humedecido con agua
destilada)
Agite suavemente el tubo que contiene el suero inoculado con Candida sp.
Extraiga una gota de la muestra, con ayuda de una pipeta Pasteur y depostela sobre
la lmina ya numerada.
Descarte la pipeta Pasteur, en el Beacker que contiene cloro (pero no la perilla de

goma).
62

Coloque un cubre objetos sobre la preparacin.
PARTE V. Observacin al Microscopio
Lleve al microscopio las preparaciones y observe. (tubos germinales con objetivo de

10X y 40X, Gram con objetivo de 100X).
Fotografe o dibuje.
Reporte las estructuras observadas
PARTE VI. Lectura de cajas.
Leer las cajas 48 horas despus de inoculadas.
Observar y describir la morfologa, superficie, bordes, color y apariencia de las

colonias en cada tipo de medio de cultivo.
7.

microbiologa.
Todo material empleado en las prcticas microbiolgicas, se descarta en las

bolsas de color rojo.

8.
Formato de presentacin de resultados Incluya las fotografas realizadas de
cada una de las lminas de acuerdo con formato de laboratorio.
Conteste el cuestionario.
9.
Cuestionario
a. Haga un cuadro comparativo de al menos 3 pruebas microbiolgicas para la
identificacin de Candida albicans y C. dubliniensis, ya que ambas son positivas
para la prueba de tubos germinales
b. Qu patologas puede producir C. albicans a nivel cutneo, mucocutneo y
sistmico? Mencione el tratamiento para cada caso.
c. Defina que es un hongo oportunista.
63

10.
Campollo E. Prcticas de Microbiologa I. Universidad Mariano Glvez. Facultad de Ciencias

Mdicas. 2005.
Torres M. 1999 Manual prctico de Bacteriologa Medica. 2da Edicin. Editorial Serviprensa
C.A Guatemala, Guatemala.
Bernard, John. 1991 Todd- Sandford-Davidsohn Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el
Laboratorio. 8 Edicin. Editorial Salvat. Barcelona Espaa.
Koneman y Col. 1992 Diagnostico Microbiologico. 3 Edicin. Editorial Mdica
Panamericana. Buenos Aires, Argentina.
Tangarife V. (s.n) Tubos germinales. Escuela de Microbiologa
Universidad de
Antioquia.
Recuperado de
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/resource/view.php?inpopup=tru
e&id=100778. Fecha de consulta 18 de junio de 2014
64

HONGOS CAUSALES DE MICOSIS

Prctica 10
1.
Instrucciones
Desarrolle la siguiente gua de estudio, como mximo UNA PGINA por cada micosis.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
El estudiante conozca la forma prctica, la clasificacin correcta de los hongos

causales de micosis
Reconozca la morfologa macro y microscpica de los hongos de importancia

mdica.
Diferencie cada uno de los gneros o especies de un mismo Phylum.
Procedimiento
Contenido a desarrollar
Agente etiolgico
Descripcin macro y microscpica
Epidemiologa y factores de riesgo
Tipos (si los hay)
Cuadro clnico
Diagnstico
Tratamiento
Esquema (foto) del hongo macroscopico (colonia), microscpico (hifas, conidias, esporas,
etc.) y la lesin que producen (piel, ojos, mucosas, etc.)
Micosis a investigar: Micosis
superficiales
1. Ptiriasis versicolor
2. Tinea negra
3. Piedra blanca
Micosis cutneas
4. Dermatomicosis
65

a. Trichophyton rubrum
b. Trichophyton mentagrophytes
c. Microsporum canis
d. Microsoorum gypseum
e. Epidermophyton flocosusm
5. Candidiasis cutnea (piel, mucosa y uas) Micosis subcutneas
6. Esporotricosis
7. Cromoblastomicosis
8. Micetomas (Eumicetoma) Micosis profundas
9. Histoplasmosis
10. Coccidiodomicosis
11. Blastomicosis
12. Paracoccidiomicosis Micosis oportunistas
13. Criptococosis
14. Aspergilosis
15. Mucormicosis
4. Referencias
Logemann H. (1995) Manual prctico de micologa Mdica. Bayer. Guatemala.
66

FICHA TCNICA DE MICOLOGA

Nombre:
Philum:
Carn:
Imagen (colonia)
Clase:
Orden:
Gnero y especie:
Distribucin geogrfica
Tipo de micosis
Epidemiologa
Cuadro clnico
Diagnstico:
- Examen en microscpico (descripcin)
Cultivo (descripcin)
Otras pruebas de identificacin
Tratamiento
67
Imagen
(hongo microscpico)

CULTIVO, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE VIRUS

Prctica 11
1.
Introduccin
Los virus son entidades biolgicas formadas bsicamente por

una cpside de protenas que envuelve al cido nucleico (ADN o
ARN) y necesita de una clula husped para replicarse. Pueden
infectar clulas eucariotas (plantas, animales, hongos o protistas)
o clulas procariotas (bacterias).
Las infecciones virales en humanos y animales producen
enfermedades como, gripe, varicela, sarampin, hepatitis B, fiebre
amarilla, rabia, SIDA, etc., desencadenando una respuesta inmune
en el organismo.
Muchos virus pueden crecer en cultivos celulares o en huevos fertilizados (que
contienen embrin viable) en condiciones estrictamente controladas. El laboratorio de
diagnstico intenta recuperar los virus a partir de muestras clnicas para establecer la
etiologa de las enfermedades. Los laboratorios de investigacin cultivan virus como base
para los anlisis detallados de expresin y multiplicacin viral.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Reconozca las diferentes tcnicas microbiolgicas para el cultivo, aislamiento e

identificacin de virus.
Haga uso adecuado de la informacin disponible en Internet para completar la

informacin sobre el cultivo de virus.
Alcance
En esta prctica, estudiante realizar una investigacin sobre los mtodos utilizados
para el aislamiento y cultivo de virus en muestras de pacientes. Con el fin de conocer los
mtodos que actualmente se utilizan en distintos procedimientos de identificacin viral.
4.
Antecedentes
Los virus son los agentes infecciosos ms pequeos que existen (20-300 nm de
dimetro) y contienen solo un tipo de cido nuclico como genoma (ADN o ARN). Son
parsitos intracelulares obligados (necesitan un husped, ya que en vida libre no
sobreviven), utilizando las enzimas y estructura de la clula husped. El ciclo de
reproduccin dentro de la clula incluye las fases de adsorcin, penetracin,
desnudamiento, multiplicacin, ensamblaje y liberacin.
68

Para la visualizacin de las estructuras virales se utilizan microscopios electrnicos para

visualizar las partculas de virus combinndolos con tintes de alto contraste a los
electrones.
GLOSARIO
Adsorcin: unin entre la cpside viral de protenas y los receptores especficos en la
superficie celular del husped.
Cpside: cubierta protenica o envoltura que encierra el genoma de cido nucleico.
Desnudamiento: proceso en el cual el cido nucleico del virus es liberado dentro de la
clula.
Ensamblaje: etapa de formacin de la cpside viral y se asociacin con el genoma viral.
Envoltura: membrana que contienen los lpidos y rodea algunas partculas virales.
Liberacin. Los virus salen de la clula husped por lisis o por gemacin.
Multiplicacin. Es la biosntesis de los elementos necesarios para la formacin de
nuevos virus.
Nucelocpside: complejo protena-cido nucleico que representa la forma empacada
del genoma viral.
Penetracin: La forma en la que el virus entra en la clula husped vara dependiendo
de la especie.
Subunidad: cada polmero viral con un solo plegamiento.
Unidades estructurales: protena de los elementos que constituyen la cubierta.
Tambin se conocen como protmeros. Virn: partcula viral completa
5.
Materiales y equipo
Sistema de Internet
Libros de texto
Computadoras
Alcohol al 70%
Guantes de ltex
Cloro al 5%
Torundas de algodn
69

6.
7.
Procedimiento PARTE I. Apoyo de Internet
Consulte en Internet para realizar una investigacin de las tcnicas de cultivo,

aislamiento e identificacin de virus.
Realice un breve resumen de los antecedentes y los mtodos actuales

utilizados.
Tome los dibujos que sean necesarios para ilustrar su revisin bibliogrfica.
Realice un cuadro comparativo Escriba la bibliografa como corresponde de

acuerdo con las instrucciones del Manual de Laboratorio.

microbiologa.

8.

Realice un breve resumen donde explique de forma clara lo siguiente:
Cuadro en el que se incluya por lo menos tres diferentes tcnicas para el

cultivo, tres para el aislamiento y tres para la identificacin viral. Debe incluir
la descripcin de la prueba (principio), ventajas y desventajas
Complete el reporte con sumario, marco terico, discusin, conclusiones y

referencias.
70

TCNICAS DE CULTIVO, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN VIRAL

Nombre de la
prueba
Descripcin de la
prueba
Ventajas
Desventaja
Ilustracin
Brooks G. Butel J. Morse S. Microbiologa mdica de Jawetx, Melnick y Adelberg.
Editorial El Manual Moderno 17 Ed. Mxico 2002.844 p.
71

VIRUS HEPATOTXICOS
Prctica 12
HOJA DE TRABAJO
Complete el siguiente cuadro de forma resumida pero concreta, colocando cada una de las especificaciones para los distintos tipos
de Hepatitis que
Hepatitis
Genoma
Simetra viral
(ADN o
y envoltura
ARN)
+/-
Forma de
transmisin
Periodo de
incubacin
Sntomas
Pruebas de
diagnstico de
laboratorio*
Complicaciones
Tratamiento
A
B
C
D
E
F
G
* En las pruebas de laboratorios especificar sobretodo en la serologa si se trata de antgeno de superficie, antgeno del ncleo o
core, anticuerpos IgG o IgM 69

DIAGNSTICO RPIDO in vitro PARA LA DETECCIN

CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM CONTRA VIRUS
Prctica 13
1.
Introduccin
La hepatitis es una enfermedad frecuente en la poblacin humana, causada por gran

diversidad de virus. Un gran porcentaje de los casos de hepatitis son causados por el
virus de la hepatitis A (HAV). Luego de un periodo de incubacin de 14 a 40 das, la
infeccin de HAV se manifiesta comnmente por la ictericia, debido a una inflamacin
aguda del hgado y del subsiguiente incremento de la concentracin de bilirrubina en la
sangre.
La hepatitis A es endmica en todas las partes del mundo. Su epidemiologa esta
marcadamente influenciada por el nivel local de sanidad e higiene. La trasmisin se
produce por va fecal-oral. Una alta cantidad de virus son excretados en las heces, unos
cuantos das antes de que aparezcan los sntomas clnicos o la ictericia. La diseminacin
del virus se realiza a travs del contacto directo o el consumo de alimentos o de aguas
contaminadas.
Los anticuerpos de IgM al HAV son producidos en la etapa temprana de la infeccin,
y persisten durante la fase aguda de la enfermedad (IgM anti HAV).
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Aprenda a realizar pruebas de ensayo inmunoenzimtico de fase slida.
Desarrolle habilidad en la realizacin de pruebas rpidas en el diagnostico in

vitro.
Alcance
Conocer y comprender la utilidad que tienen los diagnsticos in vitro, como pruebas
de tamizaje.
4.
Antecedentes
El comienzo de la enfermedad en adultos en zonas no endmicas por lo general es

repentino. En casi todos los pases en vas de desarrollo, la infeccin se produce en la
niez de manera asintomtica y leve, la enfermedad vara desde la forma leve, que dura
de una a dos semanas, hasta una forma grave e incapacitante de varios meses de
duracin. En trminos generales la gravedad de la enfermedad aumenta con la edad y
se considera que tiene una tasa de letalidad baja.
El diagnostico se confirma por la demostracin de anticuerpos de IgM contra el virus
de la hepatitis A (IgM anti HAV), en el suero de los pacientes con la forma aguda o que
73

en fecha reciente estuvieron enfermos. Estos anticuerpos logran ser detectados de 5 a

diez das despus de la exposicin al virus.
Principio de la prueba
Es un ensayo inmunoenzimtico de fase slida basado en el principio de la
inmunocaptura. La fase slida es un peine el cual esta sensibilizado en dos reas
activas:
Punto superior: Anticuerpo monoclonal contra el virus de hepatitis A (control

interno).
Punto inferior: anticuerpo de conejo anti IgM humano.
La bandeja de desarrollo contiene:
Fila A: diluyente de la muestra
Fila B: solucin de lavado
Fila C: antgeno HAV
Fila D: anticuerpo anti HAV monoclonal marcado con fosfatasa alcalina.
Fila E: solucin de lavado
Fila F: solucin de sustrato cromognico, conteniendo 5 bromo 4 cloro 3 indolil

fosfato (BCIP) y nitro azul tetrazolio (NBT)
Control positivo: plasma humano inactivado con calor, conteniendo anticuerpos IgM
anti HAV.
Control negativo: plasma humano inactivado con calor, negativo para anticuerpos
anti HAV diluyente de la muestra: diluyente.
5. Materiales y Equipo
Controles positivo y negativo
Cronometro
Guantes de ltex
Incubadora a 37 C
Lentes de proteccin
Pipetas automticas
Pizeta con cloro al 5%
Pizeta de alcohol al 70%
Puntas desechables
Reactivos del Kit: bandeja y

peine
Tijeras
Muestras desconocidas
Torundas de algodn
Papel mayordomo
Tubos ependrof
6. Procedimiento Muestra:
Muestra puede ser suero o plasma humano.
74

PARTE I. Preparacin de la prueba:
Ponga todos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
Realice las pruebas a temperatura ambiente.
PARTE II. Preparacin de la bandeja de desarrollo:
Incube la bandeja en una incubadora a 37 C, por 45 minutos.
Mezcle los reactivos, sacudiendo la bandeja de desarrollo.
PARTE III. Preparacin del peine
Abra el empaque de aluminio, por el borde perforado. Retire el peine.
Es posible utilizar todo el peine y la bandeja o una parte.
Determine el nmero de dientes que va a utilizar.
Corte los que va a utilizar.
Devuelva la porcin no utilizada al forro de papel aluminio y cierre bien.
PARTE IV. Predilucin de la muestra y controles.
Para cada muestra y control, vierta 490 L de diluyente de la muestra en un tubo

ependorf.
A cada ependorf agregue 10 L de diluyente de la muestra o control.
Mezcle el contenido de los tubos ependorf.
PARTE V. Realizacin de la prueba.
Perfore la cubierta de aluminio, de un pocillo de la fila A.
Pipetee 2 L de la muestra prediluida.
Vace la muestra en el fondo del pocillo.
Mezcle la solucin rellenando y vaciando el pocillo.
Deseche la punta de la pipeta.
Repita los pasos anteriores con cada muestra y control.
Inserte el peine (con el lado impreso hacia usted) en os pocillos de la fila A.
Mezcle, retirando e insertando el peine varias veces dentro de los pocillos.
75

Deje el peine en la fila A e incube por dos horas a 37 C.
Programe el cronometro.
Al finalizar las dos horas, perfore la cubierta de la fila B, nicamente los pozos
necesarios.
Saque el peine de la fila A.
Absorba el lquido adherido a las puntas de los dientes, apoyndolo sobre un

papel absorbente limpio.
NOTA: no toque la superficie frontal del diente.
Primer lavado: inserte el peine en los pocillos de la fila B.
Agite: retire e inserte vigorosamente el peine en los pocillos por lo menos 10

segundos.
Repita el lavado varias veces, agitando, hasta transcurrir 2 minutos.
Perfore el papel aluminio de la fila C.
Despus de los dos minutos, retire el peine y absorba el lquido, como en el punto
13.
Reaccin anfgeno-anticuerpo Fila C:
Inserte el peine en los pocillos de la fila C.
Mezcle como en el paso 8.
Incube la bandeja como a 30 minutos a 37 C.
Perfore el papel aluminio de la fila D.
Despus de los 30 minutos retire el peine y absorba el lquido, como en el punto

13.
Unin del conjugado, Fila D.
Inserte el peine en la fila D.
Mezcle como en el paso 8.
Incube la bandeja 20 minutos a 37 C.
Perfore el papel aluminio de la fila E.
Despus de los 20 minutos retire el peine y absorba el lquido,
Segundo lavado fila E
Inserte el peine en la fila E.
Mezcle por dos minutos como en el paso 8.
Incube la bandeja por 2 minutos a 37 C.

76

Perfore el papel aluminio de la fila F.
Despus de los 2 minutos retire el peine y absorba el lquido, como en el punto

13
1. Reaccin de color Fila F.
Inserte el peine en la fila F.
Mezcle por 10 minutos como en el paso 8.
Incube la bandeja por 10 minutos a 37 C.
Retire el peine.
Detencin de la reaccin Fila E.
Inserte el peine de nuevo en la fila E.
Despus de 1 minuto, retire el peine y djelo secar al aire.
PARTE VI. Lectura de Resultados
El control positivo debe producir dos puntos en el diente del peine.
El control negativo debe producir un punto superior (control interno). El punto

inferior puede no aparecer o aparecer tenuemente, sin afectar la interpretacin
de los resultados.
Cada muestra analizada debe producir un punto superior (control interno).
Si cualquiera de las condiciones no se cumplen, los resultados no son vlidos y

las muestras y controles deben ser examinados.
77

Un punto con intensidad mayor que o igual a la del control positivo indica la
presencia de anticuerpos IgM anti HAV.
La ausencia del punto o su presencia con mayor intensidad que la del control
Haga un dibujo representativo de los resultados obtenidos, describa e interprete
8.
Cuestionario
Del virus relacionado con los anticuerpos determinados en la prctica indique:
a.
b.
c.
d.
e.
9.
Cul es la forma de transmisin?

Cul es el perodo de incubacin?
Tipo de genoma del virus.
Patologas que produce.
Tratamiento y pronstico.
positivo deber ser considerada como un resultado negativo.
7.

microbiologa.
en lugares que no corresponda al rea de trabajo

7.
OPS/OMS (1994). Manual I de Enfermedad Prioritarias en Amrica Latina. Tegucigalpa,

Honduras,
Inmunocomb
.
Recuperado de
http://biogal.co.il/technology/?gclid=CjkKEQjw8YSdBRChhPXJvPvMztABEiQAkn89
3vGThXFYDW3odAnPnp1045BzzoIJIBkshxjJetLTP0bw_wcB. Fecha de consulta 18
de junio de 2014
78

CORRELACIN DE CASOS CLNICOS CON RESULTADOS DE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Prctica 14
1.
Introduccin
El medico se vale del laboratorio de microbiologa como una valiosa herramienta que
le permite confirmar la presencia de determinado agente etiolgico cuando la clnica le ha
hecho considerar su presencia. Es por ello indispensable que desde el inicio de la
enfermedad, el medico considere la realizacin de ciertas pruebas bsicas de laboratorio,
para correlacionar los datos clnicos, teniendo siempre especial importancia la historia del
paciente.
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Correlacione la historia clnica y los resultados de laboratorio para lograr un

adecuado diagnstico.
Aprenda a elegir muestra ideal, para la realizacin de las pruebas de laboratorio.
Haga uso adecuado de la informacin disponible en Internet para la colaboracin

del diagnstico final.
Alcance
En esta prctica, estudiante utilizara todos los criterios diagnsticos, para llegar a
una definicin del caso, identificando al final el agente causal de la patologa y darle
nombre a la afeccin patolgica.
4.
Antecedentes
Muchos son los microorganismos patgenos al humano, los cuales pueden producir
cuadros clnicos diversos.
Los hongos generalmente son oportunistas que colonizan la piel y mucosas de
sujetos susceptibles, sin embargo tambin existen hongos patgenos verdaderos los
cuales tienen la capacidad de infectar y colonizar an si se trata de pacientes sanos.
Los virus por su parte poseen caractersticas genmicas y estructurales que los
clasifican en distintas familias, pudiendo producir los miembros de una misma
patologas totalmente diferentes en el humano.
Computad
oras
5.
Materiales y equipo
Sistema de Internet
Libros de texto
Guantes de ltex
79
Alcohol
70%
al

6.
Cloro al 5%
Procedimiento
PARTE I. Lectura del caso clnico
Lea detenidamente el caso
Torundas
algodn
Consulte con los protocolos de las practicas anteriores
de
Consulte su libro de texto o internet.
Tome los dibujos que sean necesarios para ilustrar sus casos clnicos.
Escriba la bibliografa como corresponde de acuerdo con las instrucciones del

Manual de Laboratorio.
PARTE III. Resolucin del cuestionario

Responda todas las preguntas de cada uno de los casos clnicos.
CASOS CLNICOS
CASO CLNICO 1
Paciente masculino de 43 aos de edad procedente de Santa Rosa consulta por aparicin
de lesiones gomosas que siguen el trayecto de los vasos linfticos del miembro inferior
izquierdo. La Refiere un traumatismo con una estaca mientras limpiaba un terreno baldo
hace unos meses en el lugar de la lesin; tambin padece de dolor punzante ocasional y
prurito. Al realizar el examen micolgico de la muestra procedente de la lesin usted
observa levaduras con irradiacin en forma de estrella
a. Como se llaman estas estructuras caractersticas del hongo
b. Describa la fase miceliar del hongo
c. Cul es el diagnstico?
d. Cul es el agente causal?
e. Cul es el tratamiento de eleccin?
CASO CLNICO 2
Nio de 6 aos de edad, originario de Jalisco, Mxico. Es llevado por sus padres por una
dermatosis localizada en el cuero cabelludo donde se observa una zona de alopecia y
descamacin, acompaada pstulas con costras y secrecin sanguinopurulenta. En el
estudio micolgico, mediante examen directo con KOH al 20% de las lesiones, se
encontraron abundantes macroconidios de doble pared y el cultivo revela una colonia
blanca de aspecto algodonosa con pigmento reverso de color amarillo
a. Cul es el agente causal?
b. Cul es el reservorio del agente causal (el hombre, animales o tierra)
c. Como se denomina a este tipo de tinea:
d. Qu otros dermatofitos pueden producir esta afeccin (gnero y especie)?
80

e. Mencione dos formas de transmisin de esta micosis

CASO CLNICO 3
Paciente de 42 aos de edad consulta a la emergencia del Hospital Nacional de Cobn
por presentar tos productiva, dolor torcico falta de apetito y prdida de peso de varios
meses de evolucin. La radiografa de trax presenta un infiltrado difuso en ambos
pulmones. En el perfil social del paciente indica que trabaja como guardia en las cuevas
de Lanqun desde hace 4 aos
a. Cul es el diagnstico presuntivo?
b. Cul es el diagnstico definitivo?
c. Cul es el agente causal?
d. Describa la fase saproftica y parastica del hongo
e. En qu medio de cultivo y cules son las condiciones de incubacin para cultivar
el hongo
CASO CLNICO 4
Se asil el agente causal de una micosis superficial que produce la siguiente patogenia:
el hongo filtra los rayos de sol y por accin de sus cidos dicarboxlicos causan una
disminucin en la produccin de melanina, lo que evita el bronceado normal en la piel,
formando de esta manera lesiones de color ms claro que el resto de piel. En el examen
microscpico de las estructuras presenta una forma miceliar con fragmentos cortos
angulados y otros largos septados.
b. Describa la forma levaduriforme del agente causal
c. Describa la fluorescencia que se produce al observar las lesiones con la Luz de
Wood
d. Cul es la epidemiologa de esta patologa en Guatemala?
e. Qu otras patologas puede producir el agente causal
CASO CLNICO 5
Paciente de 53 aos de edad ingresa a la unidad de cuidados intensivos por presentar
fiebre de 40C, alucinaciones, nusea, vmitos y fotofobia. El paciente es diabtico con
un diagnstico desde hace cinco aos. La puncin lumbar evidencia LCR lmpido, con
linfocitosis y protenas aumentadas. Se realiza una tincin negativa de tinta china, donde
se evidencia un organismo encapsulado.
b. Cul es la fase infectiva observada en la tinta china?
c. Cul es el factor predisponente para la enfermedad?
d. Cul es el tratamiento?
e. Qu otras pruebas de laboratorio confirman el diagnstico?
CASO CLNICO 6
Paciente de 45 aos, diestro, fumador moderado, en la entrevista la esposa comenta que
comenz con un cuadro febril de 38C axilar; a los pocos das agreg cefaleas, nuseas
81

y vmitos ocasionales, cuadro confusional con alteraciones de conducta e incontinencia

urinaria y fecal. 5 das despus del inicio de los sntomas consult en servicio de urgencia.
Exmenes complementarios: velocidad de eritrosedimentacin (VES) elevada,
leucocitos moderada, serologa para el VIH negativa, la cual se sugiere realizar
nuevamente dentro de 3 meses.
a. Qu tcnica utilizara para realizar el examen y que detecta la misma?
b. Qu tipo de muestra pide al paciente?
c. A qu familia pertenece el VIH?
d. Describa y dibuje el virus, indique el tipo de simetra y su cido nucl
e. Por qu el mdico enva nuevamente a repetir el examen en 3 meses?, explique
7.

microbiologa.
Descarte los materiales descartables en los contenedores para el efecto.

8.
9.

Resolucin de casos clnicos
Macalup S. (1997). Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora

Murray, R.P. Rosethal, K.S. Pfaller, M. (2006). Microbiologa mdica. 5 edicin. Espaa.
Elsevier. 963.
82

REPASO DE LABORATORIO
Prctica 15
1.
Introduccin
El medico adquiere sus conocimientos en el rea de Microbiologa como una

herramienta de su formacin en la cual profundiza en sus conocimientos sobre
parasitologa, micologa y virologa; haciendo uso de esta informacin para confirmar un
diagnstico al evidenciar la presencia de un agente etiolgico determinado y tomando la
mejor eleccin para el tratamiento del paciente
2.
Objetivos
Que el estudiante:
3.
Correlacione los conocimientos adquiridos durante el curso en el rea de

microbiologa
Repase lo aprendido en el las diferentes prcticas del curso de Microbiologa II.
Alcance
En esta prctica, estudiante integrar sus conocimientos adquiridos en las reas de

micologa, parasitologa y virologa durante el desarrollo de los laboratorios del curso de
Microbiologa II.
4.
Procedimiento
Resuelva las siguientes preguntas de forma clara y ordenada.

Entregue su repaso al instructor del laboratorio, incluyendo la bibliografa consultada.
1.
Al laboratorio de parasitologa llega una muestra de heces proveniente de un paciente

de la consulta externa, y se observa en 40x la siguiente estructura.
Responda:
a. Gnero y especie del parsito
b. Estado del parsito
c. Colorante utilizado para observar muestras de
heces
d. Que estructuras se pueden observan examen
microscpico
e. Describa la fase adulta del parsito
83

2.
Usted realiza una gota gruesa para la evaluacin de parsitos sanguneos.

Responda
a. Que tincin utiliza para la observacin
b. En qu objetivo del microscopio observa la muestra? y Cul es el aumento
final?
c. Mencione 3 gneros de parsitos sanguneos de importancia mdica
d. Al analizar la muestra se observan amastigotes intracelulares, a que gnero
pertenece el parsito
e. Coloque una figura del agente causal observado
f. Cul es el vector de la enfermedad?
g. Qu diferencia hay entre la observacin de una muestra preparada como
gota gruesa y una como frotis sanguneo? A su criterio, Cual es mejor?
3.
Se realiza una prctica para observar arcnidos en polvo casero, usted prepara la
muestra y logra observar estructuras microscpicas correspondiente a estos
organismos
a. Cul es el cuadro clnico que pueden producir en un paciente?
b. Cul es la complicacin clnica ms grave?
c. Cmo se llaman a las clulas de las cuales se alimentan estos arcnidos?
d. Mencione cuatro caractersticas de los caros
4.
Al realizar una preparacin para la observacin de una muestra de hongos, se

evidencia la siguiente figura
a. Descripcin de la fase observada al microscopio
b. Gnero y especie
c. Tincin utilizada para la observacin
d. Localizacin topogrfica de la tinea que produce
e. Agar utilizado para su aislamiento y condiciones de
temperatura y tiempo para el cultivo
5.
Se realiza una prueba de identificacin para el diagnstico de hepatitis A utilizando

un ELISA en peine. Responda
a. Cul es la forma de transmisin de la enfermedad?
b. Qu tipo de anticuerpos se determinan para el diagnstico temprano?
c. Describa el principio de la prueba inmunolgica
d. Interprete el resultado (diente 1: control positivo: punto superior control
interno de la prueba)
84

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4. En el laboratorio est prohibido el ingreso de:

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8. En caso de que el estudiante dae parcial o totalmente un material, deber

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De pasta dura, tamao media carta de 80 hojas con lneas (no

Forrado con plstico y papel de color

Identificado en la primera hoja y al frente.

cuaderno de laboratorio es el contenido. Aunque su presentacin es

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El cuaderno de laboratorio contiene las siguientes secciones:

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2. DESARROLLO DE LA PRCTICA DE LABORATORIO

Letra tipo Arial, tamao 12 a espacio cerrado (1,0)

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El reporte de laboratorio incluye las siguientes secciones

Debe mostrar toda la informacin de identificacin del

Debe expresar en forma clara y breve los objetivos, as como

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Responder las interrogantes planteadas al final de cada prctica

NOTA: Algunas secciones no tienen valor asignado, ya que su presencia no agrega

El reporte de laboratorio deber ser subido a la plataforma si exeder tomando

El reporte ser evaluado siguiendo la rbrica anterior.

Si algn alumno tiene cualquier duda o reclamo sobre la forma en que se ha

PRIMERA SEMANA despus de haberlo recibido corregido NO AL FINAL

Reproduccin no autorizada de una publicacin, palabra por palabra,

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DISTRIBUCIN DE LA ZONA DE LABORATORIO

Actividad Terico practica

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Examen de heces en fresco

Tinciones de Giemsa para quistes de amebas

Correlacin de casos clnicos con resultados de

PRIMERA ENTREGA TEXTO PARALELO

PRIMER PARCIAL DE TEORIA

Tincin de Giemsa para protozoos sanguneos y tisulares

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Observacin y cultivo de hongos levaduriformes

Cultivo, aislamiento e identificacin de virus

Virus hepatotxicos Hoja de trabajo

Correlacin de casos clnicos con resultados de

SEGUNDO PARCIAL DE TEORIA

Examen final de laboratorio

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Prctica 2. Microfilarias y Nemtodos tisulares.

Prctica 3. Nemtodos Intestinales.

Prctica 6. Protozoos sanguneos y tisulares.

Prctica 10. Micosis Sistmicas y Oportunistas.

Prctica 13. Hepatitis viral

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NORMAS DE BIOSEGURIDAD, BUENAS PRCTICAS DE

Conozca las normas de bioseguridad y sus implicaciones en el desempeo del

Se familiarice con el desarrollo y cumplimiento de las normas de bioseguridad, y

Aprenda a trabajar en forma disciplinada, ordenada y con mucha limpieza dentro

Se familiarice con el uso de microscopio y estereoscopio.

En esta prctica el estudiante aprender los conceptos fundamentales del

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El estudiante se familiarizara con la ejecucin y cumplimiento de buenas