UNIVERSIDAD NACIONAL

SANTIAGO ANTNEZ DE MAYOLO

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL
CURSO: Bioqumica Ambiental
DOCENTE: Mandujano Aylas Irma
INTEGRANTES:

Alvarado Cadillo Ronaldo

lvarez Romero Yelkin
Chvez Colonia Richert
Chumbes Veramendi Yonel
Dolores Tarazona Kiara
Flores Lezameta Margot
Vargas Asencios Waldir

CITOCROMO P450
I.

RESEA Y CONCEPTOS PREVIOS

El descubrimiento del citocromo P450 se remonta a la dcada de los aos 50,

en la que comenzaron a estudiarse unos pigmentos encontrados en clulas
hepticas, a los que se les denomin citocromos, del griego citos (hueco,
recipiente, urna; y en biologa clula) y croma (color). A principios de esta
dcada Martin Klingenberg, investigador alemn, observ durante sus estudios
con el citocromo b5 (enzima que se encuentra en la sangre que controla la
cantidad de hierro en los glbulos rojos y ayuda a las clulas a transportar la
cantidad normal de oxgeno), la presencia de un pigmento unido al monxido
de carbono con una banda de absorbancia mxima a 450nm de longitud de
onda. Podra ser una hemoprotena? Sin embargo, esta caracterstica no era
propia de las hemoprotenas tipo Protoporfirina IX que se conocan hasta el
momento. No sera hasta 1964 cuando Tsuneo Omura y Ryo Sato, identifican la
naturaleza hemoproteica de este pigmento, que se encontraba presente en los
microsomas hepticos de diferentes especies de mamferos y que tras ser
reducido por NADPH, era capaz de unirse al CO, mostrando un caracterstico
pico de absorcin en el espectro UV a 450 nm (pico de Soret). Por este motivo
a esta hemoprotena se la denomin citocromo P-450 (P por pigmento y 450
por su pico de absorcin en el UV). Se encuentra ampliamente distribuido en
animales, plantas y protistas (3), y existe en la naturaleza desde antes de la
divisin entre organismos eucariotas y procariotas (4). Pronto se relacion su
actividad con el metabolismo de gran nmero de xenobiticos como drogas,
pesticidas, procarcingenos, anestsicos, solventes, etc.
Hoy en da se sabe que el trmino citocromo P450 se refiere a una familia de
protenas heme presentes en todas las clulas de los mamferos (excepto las
clulas de la sangre y de los msculos esquelticos) que catalizan la oxidacin
de una amplia variedad de sustancias qumicas. El sistema citocromo P450
tiene una gran importancia porque est implicado en la activacin o
desactivacin de muchos frmacos, participa en la transformacin de productos
qumicos en molculas muy reactivas capaces de causar graves lesiones a los
tejidos o de provocar mutaciones y participa en el metabolismo de los
esteroides y de los cidos grasos. El objetivo perseguido por este sistema es el

oxidar las sustancias a productos ms solubles que puedan ser fcilmente

eliminados.
II.

DEFINICIN

El trmino citocromo P450 se refiere a una familia de protenas heme presentes

en todas las clulas de los mamferos (excepto las clulas de la sangre y de los
msculos esquelticos) que catalizan la oxidacin de una amplia variedad de
sustancias qumicas. El sistema citocromo P450 tiene una gran importancia
porque est implicado en la activacin o desactivacin de muchos frmacos,
participa en la transformacin de productos qumicos en molculas muy
reactivas capaces de causar graves lesiones a los tejidos o de provocar
mutaciones y participa en el metabolismo de los esteroides y de los cidos
grasos. El objetivo perseguido por este sistema es el oxidar las sustancias a
productos ms solubles que puedan ser fcilmente eliminados.
Los citocromos P450 o CYP, son un grupo de varios cientos de enzimas cuya
funcin es la de reducir el dioxgeno en las molculas orgnicas. Los
citocromos P450 se encuentran en el hgado y se evacan a travs de las vas
urinarias, despus de haber sido tratados por los riones. Los citocromos P450
permiten luchar contra las molculas extraas al organismo y eliminarlas, sobre
todo los tratamientos medicamentosos. Tambin pueden aumentar la eficacia
de ciertos productos, tales como la codena o la cafena.

III.

ESTRUCTURA Y LOCALIZACIN DEL CITOCROMO P-450

EN EL HOMBRE

En las estructuras cristalinas del enzima libre, disponibles hasta el momento se

observa un grupo hemo, en el cual el hierro se encuentra unido a un grupo tiol
(-SH) de una cistena y a una molcula de agua.
En general los citocromos P-450 de eucariotas tiene un peso molecular que
oscila entre 50 y 60 kD. La estructura secundaria del P450 consiste en
aproximadamente 12 alfa hlices, de las cuales las hlices I y L, altamente
conservadas, estn en contacto directo con el grupo hemo. La hlice I contiene
tambin residuos

crticos implicados en el suministro de protones a los

intermediarios hidroperoxo y peroxo del ciclo cataltico. La zona del ncleo est
constituida por cuatro hlices (D, E, I y L), hlices J y K, dos lminas , y
una espiral

denominada meander

loop (serpentina). Abarca

entre 7-10

residuos de aminocidos y se supone que juega un papel en la unin del grupo

hemo, y en la estabilizacin de la estructura terciaria de la protena.
Existen seis regiones denominadas sitios de reconocimiento de sustrato,
involucradas en el reconocimiento y unin de sustratos, que por lo tanto
determinan la especificidad de los mismos. De un modo resumido, vemos que
la molcula del enzima est constituida por una combinacin de regiones ahlice y de hojas (laminas b), fundamentalmente en la regin de la protena que
rodea al grupo hemo, mientras que las regiones ms variables son las que
constituyen los lugares de anclaje a la membrana o de unin y reconocimiento
de sustratos.
La alta conservacin de la regin del hemo, que se corresponde con el centro
cataltico del enzima, refleja un mecanismo comn de transferencia de
electrones y de protones y de activacin de oxgeno. El enzima permanece
anclado a la membrana a travs de una hlice hidrofbica cercana al extremo
N-terminal, por lo que la mayor parte de la protena se sita en la cara
citoslica de la membrana. Esta hlice transmembrana est seguida, por regla
general, por una serie de aminocidos bsicos cuyos residuos interaccionan
con las cargas negativas de los lpidos de la membrana.

Se estima que hay alrededor de 57 genes que codifican para citocromo P-450
en seres humano y se encuentran en cantidad mayor en clulas hepticas y
enterocitos, pero probablemente estn presentes en todos los tejidos. En el
hgado y en casi todos los otros tejidos, se encuentran principalmente en las
membranas del retculo endoplsmico liso, que constituyen parte de la fraccin
microsmica cuando el tejido queda sujeto a fraccionamiento subcelular. En
microsomas hepticos, los citocromos P- 450 pueden comprender hasta 20%
de la protena total.
Los citocromo P-450 estn presentes en casi todos los tejidos, aunque a
menudo en cantidades bajas en comparacin con el hgado. En las
suprarrenales, se hallan en las mitocondrias, as como en el retculo
endoplsmico; las diversas hidroxilasas presentes en ese rgano tienen un
papel importante en la biosntesis de colesterol y esteroides. El sistema de
citocromo P-450 mitocondrial difiere del sistema microsmico por cuanto usa
una flavoprotena enlazada a NADPH, adrenodoxina reductasa, y una protena
de hierro-azufre no hem, la adrenodoxina. Adems, las isoformas de P450
especficas involucradas en la biosntesis de esteroides por lo general
estn mucho ms restringidas en su especificidad de sustrato.

Al menos seis especies diferentes de citocromo P-450 se encuentran en

el retculo endoplsmico del hgado de ser humano, cada

una

con

especificidades de sustrato amplias y un poco superpuestas, y que

actan tanto sobre xenobiticos como sobre compuestos endgenos.
IV FAMILIAS DEL CYP450
A la fecha se han descrito ms de 74 familias de la superfamilia de CYP450,
14 presentes en mamferos y dentro de stas 26 subfamilias, de las cuales, 20
se han encontrado en el genoma humano. Para fines prcticos, se denominan
por un smbolo raz (CYP), seguido de un nmero arbigo para la familia, una
letra para la subfamilia y otro nmero rabe para el gen especfico. Siendo las
familias 1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4 las principales en el metabolismo humano.
Las primeras familias de CYP450 estudiadas corresponden a las familias 1, 2,
3 y 4. Descritas en el metabolismo de xenobiticos o molculas exgenas
entre ellos los frmacos o medicamentos, mientras que las familias 5, 7, 11, 17,
19, 21 y 27 del CYP450 participan, principalmente en el metabolismo de
molculas endgenas de naturaleza liposoluble. No obstante, ambas familias
pueden participar en ambos metabolismos. Particularmente, es el caso del
CYP450 2E1, ste est comprometido en el metabolismo oxidativo de
medicamentos, procancergenos y protoxinas, y es inducible por consumo de
grasas y adems muestra una correlacin positiva en pacientes diabticos tipo
1 con un pobre control metablico, lo que podra servir como un biomarcador
para un buen control metablico en personas con diabetes mellitus.
En el hombre, los citocromos de mayor relevancia en la farmacogentica son
los siguientes, el CYP450 3A4, isoforma responsable de la oxidacin
metablica de ms del 50% de los frmacos de uso clnico (7), los CYP450 2C
y 2D que participan en el metabolismo de antidepresivos, opiceos,
neurolpticos etc. y el CYP450 2 que participa tanto en el metabolismo de
esteroides como de xenobiticos y es el que presenta mayor cantidad de
subfamilias, en algunos miembros de esta familia, como 2J2, 2T, 2V y 2W
hasta el momento, no se ha demostrado que participen en el metabolismo de
xenobiticos.
Por otra parte, como los miembros del CYP participan en el metabolismo
de esteroides, stos resultan ser los responsables de la respuesta diferenciada

a nivel de sexo, a frmacos y a xenobiticos, por el hecho que la hidroxilacin

de hormonas ocurre por estos mecanismos enzimticos, de tal manera que en
las mujeres estn inducibles, lo cual las hace responder de manera diferente a
frmacos dependiendo de sus caractersticas inductoras o inhibidoras.
El control de la regulacin en la induccin de la superfamilia de citocromos
es a travs de receptores nucleares. Para la familia CYP450 1, con dos
subfamilias y 3 genes 1A1, 1A2, 1B1, el control transcripcional de la expresin
de la enzima es comn y va receptor nuclear aril hidrocarburo (AhR).
La superfamilia CYP450 2, incluye 20 subfamlias, no comparten vas
comunes de regulacin en su induccin, y participan distintos receptores
nucleares como el: receptor activo constitutivo (CAR), AhR,

receptor X

pregnano (PXR) y el del cido retinoico (RXR).

CYP450 3 en el hombre contiene, slo una familia con cuatro genes (3A4,
3A5, 3A7 y 3A43). De los cuales el 3A4 y 3A7, estn regulados por el receptor
nuclear PXR mientras que el 3A5 por el receptor para glucocorticoides.
IV.

FUNICON Y MECANISMO DE ACCIN

Los P450s requieren electrones para reducir el O 2, salvo excepciones que

utilizan perxidos. Se clasifican en cuatro clases en funcin de cmo acceden
los electrones desde el NADPH hasta el centro cataltico de la enzima. Las
protenas de clase I utilizan una reductasa que contiene FAD (ferridoxina
reductasa) para reducir a una ferrosulfoprotena (ferridoxina), la cual transfiere
los electrones al CYP450. Las de clase II necesitan una reductasa del CYP450
(CYP450 reductasa-NADPH dependiente) que contiene FAD/FMN para la
transferencia de electrones. Las de clase III no requieren un donador de
electrones, son autosuficientes dado que los genes del CYP450 y CYP450reductasa NADPH dependiente estn integrados en una sola protena. Las de
clase IV reciben los electrones directamente del NADPH.

En las bacterias y eucariotas, los P450s de clase I se encuentran asociados a

la membrana interna de la mitocondria, sin embargo, los de clase II son los ms
abundantes en eucariotas. En los mamferos los P450s y las NADPH-citocromo

P450 reductasas no estn asociados y ambos estn anclados de forma

independiente en la cara externa de la membrana del retculo endoplsmico
liso mediante la regin hidrofbica del extremo N-terminal. La actividad de
algunos P450 se ve favorecida por la interrelacin estrecha con el citocromo b 5
microsomal como donador del segundo electrn.

Adems de sus funciones biosintticas, los P450s de las clases I y II de todos

los organismos participan en la biotransformacin de Xbs. Son enzimas
responsables

del

metabolismo

de

frmacos

de

los

procesos

de

desintoxicacin. No obstante, en ocasiones participan en procesos de

activacin contribuyendo a la aparicin de fenmenos txicos o de
carcinognesis. Los P450s de clase III participan en la sntesis de
prostaglandinas en mamferos, mientras que el P450 de clase IV solo se ha
identificado en hongos.
El mecanismo de catlisis enzimtico, implica una primera transferencia
electrnica por parte de la cadena electrnica, la cual ceder un total de
2 e- , de uno en uno. La cadena de transferencia en el pseudomonas
putida (es una de las especies de mayor inters industrial entre las
bacterias del gnero pseudomonas. Degrada compuestos aromticos y
xenobioticos).
Una vez introducido el sustrato en el sitio activo, y transferido el primer
electrn externo, por parte de la anterior cadena de transferencia, se
produce

la

reduccin

del

Fe3+

Fe2+,

lo

que

provoca

una

desestabilizacin del sitio activo, ya que el Fe 2+, tiene menor afinidad en

el eje axial, bien por el azufre de la cistena o por la molcula de H 2O,
que el Fe3+, provocando as el ataque nucleoflico de la molcula de
dioxgeno, que desplaza al ligando axial de cistena o de agua,
ocupando esa posicin de coordinacin.

El resultado es una rpida activacin, con cesin de un electrn por

parte del Fe2+ al O2, en una reaccin de transferencia interna del
electrn, producindose la oxidacin del Fe 2+ a Fe3+, y la reduccin del
O2 a anin superxido O2- . En este momento, se produce la
transferencia del segundo electrn externo, por parte de la cadena de
transferencia NADH-FAD-rubredoxina, con el resultado de una nueva
reduccin del Fe3+ a Fe2+, lo que ocasiona que tambin de nuevo, el
Fe2+, realice una segunda transferencia interna de un electrn, esta vez
a la molcula de superxido O2-, resultando la oxidacin de Fe2+ a Fe3+,
junto a la reduccin de O2- a anin perxido O22-.

La cesin ahora, de 2 hidrgenos, en forma de H +, supone la

introduccin de uno de los tomos de oxgeno en el sustrato y la
formacin de una molcula de H2O, con el otro oxgeno de la molcula
de O22-. Las experiencias realizadas con oxgeno marcado

18

O,

confirman que un tomo de la molcula de oxgeno se incorpora al

sustrato, y el otro se reduce a agua. Considerando como sustrato la
vitamina D o colecalciferol.
No obstante, un enzima como el citocromo P-450, que a veces necesita
una unin directa al sustrato (tipo II) con el Fe hemo, adems de al

oxgeno molecular, y recibir electrones, para transferirlos posteriormente,

resulta de complicado mecanismo y no se presta a una interpretacin
sencilla y unvoca.
Poulos, profundiza un poco ms en este mecanismo, con sustratos de
tipo I. El sustrato orgnico se une a la protena en la cavidad del sitio
activo, en una zona prxima al grupo hemo, sin unin directa, pero
orientando espacialmente, para favorecer la hidroxilacin.
La formacin del complejo enzima-sustrato, provoca la prdida de la
molcula de agua ligada al Fe (III) situada en el eje axial, y un cambio en
el espn de bajo a alto, y que viene acompaado de un cambio en el
potencial redox, con un aumento, que desestabiliza el estado de
oxidacin +3 del Fe. Esto provoca la transferencia del primer electrn
externo, por parte de la cadena de transferencia electrnica, iniciada por
el NADH, y la consecuente reduccin a Fe (II). Este centro activo de Fe
(II) tiene una gran afinidad para la molcula de dioxgeno, que se une al
Fe en la posicin vacante del eje axial.
Mecanismo propuesto para el citocromo P-450 con sustratos de tipo I

Efectivamente el citocromo P-450 interviene en la reaccin de

hidroxilacin cataltica. Estabrook y Col. demuestran esta relacin,
mediante la coordinacin del CO, el cual puede ser liberado por
irradiacin luminosa. As, se puede medir la actividad enzimtica de la
21-monooxigenasa de esteroides, en presencia de CO y a longitudes de
onda variables. Los resultados obtenidos, son similares al espectro
ptico de un complejo citocromo P-450-CO.

Los detalles de los mecanismos por los que los P-450s catalizan tan
elevado nmero de reacciones son todava desconocidos. La activacin
del oxgeno, que parece ser similar en todos los P-450s (o al menos en
todos los estudiados), es precisamente el aspecto mejor conocido (5). El
centro cataltico de los P-450 es el tomo de hierro hexacoordinado (con
los 4 anillos de la protoporfirina IX, con el grupo tiol de un residuo de
cistena de la cadena polipeptdica y con el solvente, normalmente
agua).