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genticas de la resistencia y
virulencia de Staphylococcus aureus
de diferente origen
Tesis Doctoral
Universidad de Oviedo
Nombre:
MARIA DE LOS
ANGELES
FOR-OFE-VCE-021
D.N.I. 71887079G
Datos Acadmicos:
Programa de Doctorado cursado: Biologa Funcional y Molecular
Departamento responsable: BIOLOGIA FUNCIONAL
Departamento en el que presenta la tesis doctoral: BIOLOGIA FUNCIONAL
Ttulo definitivo de la Tesis: Epidemiologa molecular y bases genticas de la resistencia y virulencia
de Staphylococcus aureus de diferente origen
Autorizacin del director/es de la tesis
RODICIO RODICIO, MARIA DEL ROSARIO
D/D:
Departamento: BIOLOGIA FUNCIONAL
MARTIN MARTIN, MARIA CRUZ
D/D:
csic
Universidad:
Director de la Tesis
FOR-OFE-VCE-024
Datos Acadmicos:
Programa de Doctorado cursado: Biologa Funcional y Molecular
Departamento responsable: BIOLOGIA FUNCIONAL
BIOLOGIA FUNCIONAL
Departamento en que presenta la tesis doctoral:
Ttulo definitivo de la Tesis: Epidemiologa molecular y bases genticas de la resistencia y virulencia de
Staphylococcus aureus de diferente origen
Autorizacin del director/es de la tesis
MARIA DEL ROSARIO RODICIO RODICIO
D/D:
Departamento: BIOLOGIA FUNCIONAL
MARIA CRUZ MARTIN MARTIN
D/D:
csic
Universidad:
Resolucin
El Departamento BIOLOGIA FUNCIONAL en su reunin de fecha 8 de Abril de 2011, acord dar su
conformidad para la presentacin de la tesis doctoral a la Comisin de Doctorado, en cumplimiento de lo
establecido 35.2 de la Modificacin del Reglamento del tercer ciclo de estudios universitarios, la obtencin y
expedicin del ttulo de doctor y otros cursos de postgrado, aprobada por el Consejo de Gobierno, en su sesin
del da 23 de octubre de 2008 (BOPA del 19 de diciembre de 2008).
Agradecimientos
A mis padres
ndice
ndice
Abreviaturas
vii
Resumen
Espaol
English
ix
x
1. Introduccin
1. 1. Caractersticas microbiolgicas de Staphylococcus aureus
1. 2. Epidemiologa
1. 3. Factores de virulencia
1.3.1. Componentes de la pared celular
1.3.2. Enzimas
1.3.3. Toxinas
1.3.3.1. Citotoxinas
1.3.3.2. Exfoliatinas
1.3.3.3. Superantgenos
1.3.4. Bacteriocinas
1.3.5. Regulacin
1. 4. Resistencia a antimicrobianos
1.4.1. Antecedentes histricos
1.4.2. Bases bioqumicas y genticas de la resistencia a antimicrobianos
1.4.2.1. Resistencia a antimicrobianos que inhiben la sntesis de la pared bacteriana
1.4.2.2. Resistencia a antimicrobianos que alteran la membrana citoplasmtica
1.4.2.3. Resistencia a antimicrobianos que inhiben la sntesis proteica
1.4.2.4. Resistencia a antimicrobianos que alteran la sntesis de cidos nucleicos
1.4.2.5. Resistencia a antimicrobianos que bloquean rutas metablicas
1.4.2.6. Resistencia a biocidas
1.5. Estructura poblacional
1.5.1. Tcnicas de tipificacin
1.5.2. Evolucin de los linajes de S. aureus
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2. Objetivos
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3. Resultados
3.1. Captulo 1: Staphylococcus aureus procedentes de hospitales del Principado de
Asturias
3.1.1. Artculo 1
Argudn MA, Mendoza MC, Mndez FJ, Martn MC, Guerra B, Rodicio, MR. Clonal
complexes and diversity of exotoxin gene profiles in methicillin-resistant and methicillinsusceptible Staphylococcus aureus isolates from patients in a Spanish hospital. J Clin
Microbiol 2009, 47(7): 2097-2105.
3.1.2. Artculo 2
Argudn MA, Mendoza MC, Vzquez F, Guerra B, Rodicio MR. Molecular typing of
Staphylococcus aureus bloodstream isolates from geriatric patients attended at a long-term
care Spanish hospital. J Med Microbiol 2010 60: 172-179.
41
43
53
ndice
3.1.3. Artculo 3
Argudn MA, Mendoza MC, Vzquez F, Rodicio MR. Exotoxin gene backgrounds of
bloodstream and wound Staphylococcus aureus isolates from geriatric patients attending a
long-term care Spanish hospital (en preparacin).
3.2. Captulo 2: Staphylococcus aureus procedentes de portadores sanos del
Principado de Asturias
3.2.1. Artculo 4
Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Genomic diversity of methicillin-susceptible
Staphylococcus aureus strains from young healthy carriers(en preparacin).
3.2.2. Artculo 5
Argudn MA, Mendoza MC, Argumosa V, Rodicio MR. Virulence profiles of
Staphylococcus aureus isolates from young healthy carriers (en preparacin).
3.2.3. Artculo 6
Argudn MA, Mendoza MC, Martn MC, Rodicio MR. Molecular basis of antimicrobial
drug resistance of Staphylococcus aureus isolates recovered from university students in a
Spanish region (en preparacin).
3.3. Captulo 3: Staphylococcus aureus procedentes de alimentos y manipuladores de
alimentos del Principado de Asturias
3.3.1. Artculo 7
Argudn MA, Mendoza MC, Gonzlez-Hevia MA, Bances M, Rodicio MR.
Characterization of food-borne Staphylococcus aureus from a Spanish region (en
preparacin).
3.3.2. Artculo 8
Martn MC, Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Characterization of pUO-SaSED3, a virulence-resistance plasmid from Staphylococcus aureus (en preparacin).
3.3.2. Artculo 9
Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Food poisoning and Staphylococcus aureus
enterotoxins. Toxins 2010, 2: 1751-1773.
3.4. Captulo 4: Staphylococcus aureus procedentes de animales de Alemania
3.4.1. Artculo 10
Argudn MA, Rodicio MR, Guerra B. The emerging methicillin-resistant Staphylococcus
aureus ST398 clone can easily be typed using the Cfr9I SmaI-neoschizomer. Lett App
Microbiol 2010, 50: 127-130.
3.4.2. Artculo 11
Argudn MA, Fetsch A, Tenhagen BA, Hammerl JA, Hertwig S, Kowall J, Rodicio MR,
Ksbohrer A, Helmuth R, Schroeter A, Mendoza MC, Brunig J, Appel B, Guerra B. High
heterogeneity within methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST398 isolates defined by
Cfr9I macrorestriction-PFGE profiles, spa- and SCCmec types. App Environ Microbiol
2010, 76(3): 652-658.
3.4.3. Artculo 12
Argudn MA, Tenhagen BA, Fetsch A, Sachsenrder J, Ksbohrer A, Schroeter A,
Hammerl JA, Hertwig S, Helmuth R, Brunig J, Mendoza MC, Appel B, Rodicio MR,
Guerra B. Virulence and resistance determinants in German Staphylococcus aureus ST398
isolates from non-human origin App Environ Microbiol, 2011, 77(9): 3052-3060.
ii
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4. Discusin
4.1. Objetivo 1. Identificar los linajes y clones de S. aureus de distinto origen
(hospitales, portadores sanos y relacionados con alimentos) que han estado circulando
del Principado de Asturias, y sub-tipificacin del linaje ST398 de origen animal.
4.1.1. Comparacin de las tcnicas de tipificacin utilizadas
4.1.1.1. Tipificacin mediante electroforesis en campo pulsante (PFGE)
4.1.1.2. Tipificacin mediante secuenciacin del gen de la protena A (spa)
4.1.1.3. Tipificacin por secuenciacin de mltiples loci (MLST)
4.1.1.4. Tipificacin mediante el test RM
4.1.2. Linajes circulantes en el Principado de Asturias
4. 2. Objetivo 2. Identificar determinantes de virulencia en los linajes encontrados en
el Principado de Asturias y en el clon ST398, y establecer su relacin con elementos
genticos mviles.
4.2.1. Determinantes de virulencia en las poblaciones de Staphylococcus aureus de
distinto origen y su relacin con elementos genticos
4.2.2. Distribucin de tipos del sistema de regulacin agr en las poblaciones de
Staphylococcus aureus de distinto origen
4.3. Objetivo 3. Determinar los fenotipos y genotipos de resistencia (prestando
especial atencin al SCCmec) en los linajes encontrados en el Principado de Asturias y
en el clon ST398.
4.3.1. Resistencia a antimicrobianos en las poblaciones de Staphylococcus aureus de
distinto origen
4.3.2. Clones MRSA
4.3.3. Determinantes de resistencia en poblaciones de Staphylococcus aureus de
distinto origen
4.4. Objetivo 4. Caracterizar mediante tcnicas moleculares el plsmido hibrido de
virulencia-resistencia pUO-Sa-SED3
4. 5. Consideraciones generales
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5. Conclusiones
201
6. Bibliografa
205
7. Anexos
Anexo I. Oligonucletidos utilizados en este trabajo.
Tabla Ia. Oligonucletidos utilizados para la identificacin de complejos clnales (RM
test).
Tabla Ib. Oligonucletidos utilizados para la identificacin de tipos spa y secuencias tipo
(ST, MLST).
Tabla Ic. Oligonucletidos utilizados para la caracterizacin de sistemas de restriccinmodificacin.
Tabla Id. Oligonucletidos utilizados para la identificacin de MRSA
Tabla Ie. Oligonucletidos utilizados para la identificacin de SCCmec.
Tabla If. Oligonucletidos utilizados para identificacin de determinantes de resistencia.
Tabla Ig. Oligonucletidos utilizados para identificacin de determinantes de virulencia.
Tabla Ih. Oligonucletidos utilizados para la deteccin de islas de patogenicidad.
A1
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iii
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Tabla Ii. Oligonucletidos utilizados para identificacin del tipo de sistema de regulacin
agr.
Tabla Ij. Oligonucletidos utilizados para la caracterizacin de plsmidos pUO-Sa-SED.
Anexo II. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus utilizados en este trabajo.
Tabla IIa. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus procedentes del Hospital
Universitario Central de Asturias durante el periodo 2005-2006.
Tabla IIb. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus procedentes del Hospital Monte
Naranco durante el periodo 1996-2006.
Tabla IIc. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus procedentes de portadores sanos
durante el periodo 1997-2002.
Tabla IId. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus procedentes de portadores sanos
durante el periodo 2004-2006.
Tabla IIe. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus procedentes de alimentos, brotes
y manipuladores de alimentos durante el periodo 1997-2008.
Tabla IIf. Caractersticas de los aislamientos de S. aureus procedentes de animales durante
el periodo 2004-2008.
Tablas
Tabla 1. Patologas asociadas a colonizacin/infeccin por Staphylococcus aureus.
Tabla 2. Determinantes de patogenicidad o factores de virulencia de Staphylococcus
aureus.
Tabla 3. Elementos genticos que codifican SAgs en Staphylococcus aureus.
Tabla 4. Determinantes de resistencia a antimicrobianos en Staphylococcus aureus
Tabla 5. Clones MRSA de distribucin mundial.
Tabla 6. Complejos clonales, secuencias tipo y tipos spa encontrados en las poblaciones
de Staphylococcus aureus estudiadas en esta Tesis doctoral.
Tabla 7. Resolucin de las distintas tcnicas utilizadas para la tipificacin de
Staphylococcus aureus.
Tabla 8. Distribucin de determinantes de virulencia en distintas poblaciones y
complejos clonales.
Tabla 9. Distribucin de elementos genticos mviles en distintas poblaciones y
complejos clonales de Staphylococcus aureus estudiados en esta Tesis doctoral.
Tabla 10. Distribucin de tipos agr en distintas poblaciones y complejos clonales de
Staphylococcus aureus estudiados en esta Tesis doctoral.
Tabla 11. Porcentajes de resistencia a diferentes antimicrobianos en las poblaciones y
complejos clonales de Staphylococcus aureus estudiados en esta Tesis doctoral.
Tabla 12. Clones MRSA presentes en las poblaciones de Staphylococcus aureus
estudiadas en esta Tesis Doctoral.
Tabla 13. Genes de resistencia en las poblaciones y complejos clonales de
Staphylococcus aureus estudiados en esta Tesis doctoral.
Figuras
Figura 1. Morfologa y agrupacin de Staphylococcus aureus.
Figura 2. Modo de unin de un superantgeno y de un antgeno convencional a molculas
del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (Class II MHC) de una clula
presentadora de antgenos y al receptor de un linfocito T colaborador (TCR).
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Abreviaturas
Abreviaturas
AAC, acetiltransferasas
AAD, adenililtransferasas o nucleotidiltransferasas
ALM, aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores de alimentos del PA implicados o no en
brotes de intoxicacin alimentaria
AMK, amikacina
AMP, ampicilina
AN, aislamientos procedentes de animales (muestras nasales de cerdos asintomticos, muestras
clnicas de cerdos enfermos, muestras de polvo de granjas de crianza y muestras de alimentos)
APH, fosfotransferasas
agr, accessory gene regulator (gen regulador accesorio)
ATCC, american type culture collection
BfR, Federal Institute for Risk Assessment (Bundesinstitut fr Risikobewertung)
BURP, Based Upon Repeat Pattern
BURST, Based Upon Related Sequence Types
CA-MRSA, community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus
CAT, cloranfenicol acetiltransferasas
CC, clonal complex (complejo clonal)
CHIPS, chemotaxis inhibiting protein (protena inhibidora de la quimiotaxis)
CHL, cloranfenicol
CI, intervalos de confianza del ndice de discriminacin
CIP, ciprofloxacina
CLIC, clindamicina constitutiva
CLII, clindamicina inducible
CMI, concentracin mnima inhibitoria
egc, enterotoxin gene cluster
ERY, eritromicina
ET, exfoliatina
Dsg1, desmogleina 1
GEN, gentamicina
HA-MRSA, healthcare-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus
Hl, hemolisina
HMN, Hospital Monte Naranco
HUCA, Hospital Universitario Central de Asturias
hVISA, heterogeneous vancomycin intermediate Staphylococcus aureus
ID, ndice de discriminacin de Simpson
Ig, inmunoglobulina
KAN, kanamicina
LMUO, Laboratorio de Microbiologa de la Universidad de Oviedo
Luk, leucotoxinas
MET, meticilina
MFS, major facilitator superfamily
MGE, mobile genetic element (elemento gentico movil)
MLS, macrlidos, lincosaminas y estreptograminas
MLST, multilocus sequence typing (secuenciacin de mltiples loci)
vii
Abreviaturas
MOX, moxifloxacina
MRSA, methicillin-resistant Staphylococcus aureus
MSSA, methicillin-susceptible Staphylococcus aureus
MSCRAMMs, microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules (componentes
de la superficie bacteriana que reconocen las molculas de adhesin de la matriz celular)
MUP, mupirocina
NCBI, National Center for Biotechnology Information
NRL-Staph, National Reference Laboratory for coagulase positive staphylococci
OXA, oxacilina
PA, Principado de Asturias
PABA, cido paraaminobenzoico
PBP, penicillin-binding protein
PCR, polymerase chain reaction
PEN, penicilina
PFGE, pulse field gel electrophoresis (electroforesis en campo pulsante)
PMN, polimorfonucleares
PS, aislamientos procedentes de portadores sanos (estudiantes de biologa)
RIF, rifampicina
RM, restriccin y modificacin
SAgs, superantgenos
SaPI, Staphylococcus aureus pathogenicity island (isla de patogenicidad de Staphylococcus aureus)
SCC, staphylococcal cassette chromosome (cassette cromosmico estafiloccico)
SE, enterotoxina estafiloccica
SEl, enterotoxina estafiloccica-like
SNP, single nucleotide polymorphism
SMR, small multidrug resistance family
SpA, Staphylococcal protein A
Spl, serin proteasa
SSSS, staphylococcal scalded-skin sndrome (sndrome de la piel escaldada)
ST, sequence type (secuencia tipo)
TCR, receptor de linfocito T colaborador
TET, tetraciclina
Tn, transposn
TOB, tobramicina.
TSS, sndrome del shock txico
TSST, toxina del sndrome del shock txico
UE, Unin Europea
UPGMA, unweighted pair group matching analysis
VISA, vancomycin intermediate Staphylococcus aureus
VRSA, vancomycin resistant Staphylococcus aureus
viii
Resumen
Resumen
ix
Resumen
Staphylococcus aureus is both a commensal and a pathogenic bacterium, able to cause disease
or to establish a carrier state in humans and animals. S. aureus has a highly clonal population structure,
which is facilitated by the presence of restriction-modification (RM) systems that modulate the genetic
exchange. However, horizontal transfer events can occur allowing the spread or exchange of mobile
genetic elements (MGE) and regulatory systems between clones of the same and even different
lineages. This Doctoral Thesis analyzes the population structure of a large collection of isolates of S.
aureus from different origins (human, animal and food), and examines the distribution of resistance
and virulence determinants among different lineages. The isolates analyzed were recovered from
human clinical samples in two hospitals, healthy carriers, food samples and food handlers in the
Principality of Asturias (PA). Isolates collected in Germany from animal samples and belonging
mainly to the emerging ST398/CC398 clone were also analyzed. The main objectives of the Thesis
were the following:
1. Identification of the clones and lineages which have been circulating in the PA, both in
nosocomial and community settings, and its internal variability using different typing techniques:
pulsed field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST), protein A gene (spa)
typing, and PCR amplification of the sau1hsdS1 and sau1hsdS2 of the Sau1 RM system. By these
means, 15 lineages (CC1, CC5, CC8, CC9, CC12, CC15, CC22, CC25, CC30, CC45, CC59, CC72,
CC88, CC97, CC121) were detected in our region, with CC5, CC30 and CC45 being predominant.
Moreover, we developed a new typing PFGE protocol for CC398, which was previously untypeable by
this technique.
2. Detection of virulence determinants and MGEs involved in their spread. In contrast to
CC398, the isolates from the PA carried a large number of virulence genes, associated with MGEs,
such as genomic islands, pathogenicity islands, prophages and plasmids, and arranged in many
different combinations. These results reveal the high plasticity of the S. aureus genome, which can be
viewed as a means of adaptation to the different ecological niches that can be colonized by this
bacterium. These studies were complemented with the characterization of a hybrid virulence-resistance
plasmid, which represents an interesting example of evolutionary engineering in S. aureus.
3. Resistance studies. High rates of resistance, particularly against -lactams,
aminoglycosides, macrolides and lincosamides, as well as multidrug resistance, were found in clinical
isolates recovered in the PA and the CC398 clone, in comparison to isolates recovered in the
community. The genes responsible for the resistances detected, and the MGEs involved in their spread
(transposons and plasmids), were identified and their distribution among different lineages and clones
was established. Determination of the SCCmec types in methicillin-resistant isolates led to the
identification of the MRSA clones circulating in the PA and within CC398.
This Doctoral Thesis increases the existing knowledge on the population structure of S.
aureus, and on its resistance and virulence properties. It supplies information on the epidemic,
sporadic and emerging clones which have been circulating in the PA, and highlights the importance of
further epidemiological surveillance.
1.Introduccin
1. Introduccin
B.
Figura 1. Morfologa y agrupacin de Staphylococcus aureus. A. Tincin Gram que muestra las
formas cocceas agrupadas en racimos y de color violeta debido a la retencin del colorante primario
cristal violeta. B. Microfotografa electrnica de barrido (http://phil.cdc.gov).
1. Introduccin
congelacin y el calor aunque no tanto como las endosporas bacterianas (Mandell et al.,
2000).
1. 2. Epidemiologa
S. aureus es un comensal y un patgeno, cuyo hbitat primario en el hombre es la
mucosa nasofarngea, donde forma parte de la microbiota normal persistente o transente, sin
causar sintomatologa. De la nasofaringe pueden pasar a otras reas corporales como la piel,
el tracto respiratorio, las glndulas mamarias y los aparatos genitourinario e intestinal
(Wertheim et al., 2005; Harbarth et al., 2007; Acton et al., 2009). La tasa de portadores
adultos se estima alrededor del 20-30%, lo que depende de factores estacionales y
epidemiolgicos locales (Kluytmans et al., 1997; Kluytmans y Wertheim, 2005; Wertheim et
al., 2005). Estudios longitudinales estiman que un 20% (rango 12-30%) de personas son
portadores persistentes de S. aureus, un 30% (rango 16-70%) son portadores intermitentes y
un 50% (rango 16-69%) no portadores (Wertheim et al., 2005). Algunos grupos de personas
parecen ser ms susceptibles a la colonizacin que otros y es posible que haya varias cepas en
un mismo hospedador. Los portadores persistentes suelen estar colonizados por una sola cepa
de S. aureus, mientras que los portadores intermitentes pueden contener varias cepas (Eriksen
et al., 1995; VandenBergh et al., 1999; Wertheim et al., 2005). En el personal sanitario,
pacientes crnicos e infantes la tasa de portadores es mayor que en la poblacin general
(Wertheim et al., 2005; Albrich y Harbarth, 2008; Shinefield y Ruff, 2009). Mamferos y aves
son tambin reservorios y hospedadores sensibles a infecciones por S. aureus (Lloyd, 2007;
Cuny et al., 2009; Morgan et al., 2009). La colonizacin aumenta significativamente el riesgo
de infeccin, ya que sirve de reservorio del patgeno para su introduccin en el hospedador
cuando sus defensas estn comprometidas (Kluytmans et al., 1997; von Eiff et al., 2001;
Safdar y Bradley, 2008).
S. aureus es agente etiolgico de un amplio espectro de infecciones de origen
comunitario y nosocomial (adquiridas en hospitales), desde simples abscesos a sepsis
mortales; y de distintas enfermedades causadas por toxinas: intoxicaciones alimentarias,
sndrome del shock txico y sndrome de la piel escaldada (Tabla 1). La lesin anatmica
bsica producida por S. aureus, ya sea un exudado pigeno o absceso, es consecuencia de una
infeccin focal. Desde ah, por rotura profunda de la piel u otra lesin, la bacteria puede llegar
a atravesar las defensas del organismos hasta ocasionar una infeccin sistmica y/o
metastsica (Mandell et al., 2000). Los individuos proclives a infecciones estafiloccicas son
recin nacidos e infantes, mujeres en periodos de lactancia, enfermos crnicos y personas con
sistemas inmunolgicos deprimidos (Mandell et al., 2000; Shinefield y Ruff, 2009).
1. 3. Factores de virulencia
La diversidad de patologas producidas por S. aureus se debe a que este patgeno
posee una amplia gama de factores de virulencia, que abarcan desde componentes de la pared
celular a una gran variedad de exoprotenas, lo cual contribuye a su habilidad para colonizar y
2
1. Introduccin
La exposicin inicial de las clulas epiteliales de piel o mucosas y de los fagocitos del
hospedador a los productos bacterianos y al dao tisular producido por S. aureus, activa al
sistema inmune. Molculas como el peptidoglicano y la lipoprotena son reconocidas por el
mismo, aumentando la seal proinflamatoria y estimulando el reclutamiento de neutrfilos y
macrfagos. S. aureus es capaz de sobrevivir tanto dentro como fuera de las clulas del
hospedador. En el exterior celular, la bacteria evita la opsonizacin por el sistema del
complemento y por anticuerpos mediante la cpsula, el factor de agregacin (coagulasa
ligada), la protena A e inhibidores del complemento (Liu, 2009). Adems, resiste la accin
de los leucocitos polimorfonucleares (PMN, que incluyen los basfilos, eosinfilos y
neutrfilos) gracias a la protena de adherencia extracelular y la protena inhibitoria de la
quimiotaxis. Los neutrfilos en el sitio de infeccin secretan una serie de sustancias
antimicrobianas, como pptidos y especies reactivas de oxgeno que S. aureus es capaz de
neutralizar mediante diferentes enzimas. Por otro lado la toxina del sndrome del shock txico
(TSST) y las enterotoxinas secretadas por la bacteria actan como superantgenos
estimulando de forma inespecfica a un nmero muy elevado de linfocitos T colaboradores
(Liu, 2009).
1. Introduccin
Protenas de superficie
Cpsula externa
Enzimas
Catalasa
Coagulasa
Estafiloquinasas
Hialuronidasa
Lipasa
Proteasa
Termonucleasa
Toxinas
Citotoxinas
Exfoliatinas
Toxina TSST-1
Enterotoxinas
Bacteriocinas
cidos teicoicos
1. Introduccin
1. Introduccin
1.3.2. Enzimas
Los estafilococos producen varios enzimas que contribuyen a la patognesis, como
coagulasas, hialuronidasas, estafiloquinasas, proteasas, lipasas, y termonucleasas (DNasa). La
deteccin de algunos de estos enzimas se utiliza como carcter diferencial en medios de
cultivo para la identificacin de S. aureus.
La coagulasa de S. aureus existe en dos formas, una unida a la pared celular del
estafilococo (coagulasa ligada, que se corresponde con el factor de agregacin nombrado
anteriormente) y una libre. El factor de agregacin se une a la protrombina, complejo que
trasforma el fibringeno en fibrina insoluble provocando la aglomeracin de los
estafilococos. La coagulasa libre reacciona con el factor reactivo de la coagulasa (CRF),
presente en el plasma, dando lugar a un complejo anlogo a la trombina que reacciona con el
fibringeno formando el cogulo de fibrina. Ambas acciones producen un capa de fibrina
alrededor del absceso estafiloccico, localizando la infeccin y protegiendo a la bacteria de la
fagocitosis (Mandell et al., 2000).
Otros enzimas intervienen en la degradacin de tejidos y macromolculas, facilitando
la liberacin de nutrientes para el crecimiento de la bacteria, la diseminacin de la infeccin a
los tejidos adyacentes y provocando diversos sntomas.
La estafiloquinasa es una fibrinolisina cuya funcin bsica es la destruccin de
cogulos. Se une al plasmingeno formando un complejo que se une a fibrina y la hidroliza
para facilitar la entrada de S. aureus en tejidos ms profundos. Adems la interaccin de
estafiloquinasa con -defensinas origina resistencia bacteriana a la fagocitosis. El gen que
codifica esta enzima (sak) se encuentra en diversos profagos, y es regulado por el gen
regulador accesorio (accessory gene regulation, agr) como muchos otros factores de
patogenicidad de esta bacteria (Bokarewa y Tarkowski, 2006; apartado 1.3.5.).
1. Introduccin
1.3.3. Toxinas
S. aureus puede producir un gran nmero de toxinas, incluyendo citotoxinas,
exfoliatinas, toxina del sndrome del shock txico y enterotoxinas. Los dos ltimos tipos
pertenecen a la familia de los superantgenos (SAgs).
1.3.3.1. Citotoxinas
Una de las caractersticas ms importantes de S. aureus es la capacidad de secretar
citotoxinas o toxinas citolticas que alteran la membrana celular de las clulas del hospedador
formando poros que causan la fuga del contenido celular y la lisis (Kaneco y Kamio, 2004).
Entre este tipo de toxinas se encuentran las hemolisinas y las leucotoxinas.
Las hemolisinas se detectan fcilmente en medio agar sangre por el dao que causan
a las membranas celulares de los glbulos rojos. La mayora de las cepas de S. aureus
produce alguna hemolisina, habindose descrito cinco tipos: alfa (-hemolisina, codificada
por el gen hla), beta (-hemolisina, hlb), delta (-hemolisina, hld), gamma (-hemolisina,
hlg), y gamma-variante (hlg variant o hlg-2). Su amplia distribucin en S. aureus se debe en
parte a que los genes que las codifican se encuentran en regiones estables del cromosoma
(Kaneco y Kamio, 2004).
La hemolisina mejor estudiada es la -hemolisina que acta sobre membranas de una
gran variedad de clulas eucariotas (eritrocitos, leucocitos, plaquetas, fibroblastos, monocitos,
trombocitos, clulas endoteliales) pero no sobre membranas celulares bacterianas (Mandel et
al., 2000; Menestrina et al., 2001; Murray et al., 2009). La sensibilidad a -hemolisina
depende de la especie animal (los eritrocitos de conejo son 1000 veces ms sensibles que los
del ser humano) y del tipo de clula (los fibroblastos pueden reparar la membrana celular de
una forma ms eficaz que los eritrocitos) (Menestrina et al., 2001; Murray et al., 2009).
Adems tiene actividad dermonecrtica y neurotxica (Dinges et al., 2000). El gen que la
7
1. Introduccin
codifica (hla) es cromosmico y su expresin est regulada por el locus agr (Dinges et al.,
2000; apartado 1.3.5.).
La -hemolisina, tambin conocida como esfingomielinasa C, produce su efecto
citotxico al degradar la esfingomielina y la lisofosfatidilcolina, por lo que es activa frente a
una gran variedad de clulas incluyendo eritrocitos, leucocitos, fibroblastos y macrfagos
(Murray et al., 2009). Cataliza la hidrlisis de fosfolpidos en la membrana de clulas
susceptibles, y la lisis es proporcional a la concentracin y distribucin de esfingomielina en
la superficie celular. Junto con la -hemolisina es responsable de la destruccin celular y la
formacin de abscesos (Murray et al., 2009). La expresin del gen que la codifica (hlb)
tambin depende del locus agr, aunque hlb suele estar truncado por la insercin de profagos
(Feng et al., 2008).
La -hemolisina acta como un surfactante que altera las membranas celulares
mediante una accin de tipo detergente. Tiene un amplio espectro de actividad citoltica,
afectando a eritrocitos y otras clulas de mamferos, y tambin a diversas estructuras
subcelulares como protoplastos, esferoplastos y lisosomas (Verdon et al., 2009). El gen que la
codifica (hld) forma parte del locus agr, y est regulado por el mismo (Verdon et al., 2009).
Por otro lado, se ha demostrado que esta toxina tiene cierta actividad antimicrobiana sobre
Legionella (Verdon et al., 2009).
La -hemolisina es capaz de lisar eritrocitos y otras clulas de mamferos, y al igual
que otras toxinas citolticas como las leucotoxinas, es una toxina bi-componente: un
componente proporciona adherencia a la clula del hospedador y el otro es txico o citoltico
(Kaneco y Kamio, 2004).
En S. aureus se han descritos tres tipos de leucotoxinas: la leucocidina de PantonValentine (LukS-PV/LukF-PV, pvl), la LukE/LukD (lukED) y la LukM/LukF-PV (lukM).
La leucocidina de Panton-Valentine tiene una actividad citoltica especfica sobre
macrfagos, monocitos y leucocitos PMN. A diferencia de las hemolisinas, que estn
ampliamente distribuidas en S. aureus, la Panton-Valentine se encuentra slo en un bajo
porcentaje (2-3%) de cepas (Dinges et al., 2000). Sin embargo, es relativamente frecuente en
S. aureus de adquisicin comunitaria y su presencia se ha asociado con lesiones (furnculos y
abscesos) e infecciones necrticas cutneas y tambin con neumona necrtico-hemorrgica
severa, aunque su relacin con patogenicidad es variable dependiendo de los modelos
animales en estudio (Patel, 2009). A pesar de las discrepancias en los estudios, aunque la
Panton-Valentine no resulte el factor de virulencia determinante en este tipo de cepas, sirve
como marcador epidemiolgico de las mismas aunque no en todos los casos (Rossney et al.,
2007). El gen pvl ( lukPV) est presente en profagos de la familia Siphoviridae con integrasa
de tipo Sa2, que bsicamente se dividen en dos grupos: los de tipo SLT y los de tipo PVL
(Canchaya et al., 2003; Goerke et al., 2009).
La leucotoxina LukE/LukD produce dermonecrosis en conejos pero tiene una dbil
actividad leucocitoltica y carece de actividad hemoltica. Se ha descrito una variante con ms
actividad leucocitoltica y una debil actividad hemoltica en la cepa ATCC 27733 de S.
1. Introduccin
aureus (Kaneco y Kamio, 2004). El gen que codifica esta toxina (lukED) se ha identificado en
islas genmicas vSa junto con otros factores de virulencia (ver apartado 1.3.3.3.).
Los leucocitos PMN de rumiantes son altamente sensibles a la leucotoxina
LukM/LukF-PV, y su presencia se ha asociado a casos de mastitis en bvidos. El gen que la
codifica (lukM) est en el profago PV83-pro, de la familia Siphoviridae con integrasa de
tipo Sa5, que fue originariamente descrito en la cepa P83 (ATCC 31890) de S. aureus aislada
de la ubre infectada de un bvido (Kaneco y Kamio, 2004).
1.3.3.2 Exfoliatinas
Las exfoliatinas (ETs), toxinas epidermoliticas o exfolitativas son los factores de
virulencia asociados a infecciones directas en piel tipo imptigo y con el sndrome de la piel
escaldada (staphylococcal scalded-skin sndrome, SSSS). Ambas enfermedades son ms
frecuentes en nios, aunque tambin adultos inmunocomprometidos pueden padecerlas. El
imptigo es altamente contagioso y se caracteriza por la presencia de ampollas llenas de pus
(pstulas), mientras que en el SSSS o enfermedad de Ritter la piel presenta reas eritematosas
muy sensibles.
Las exfoliatinas son serin proteasas especificas de glutamato, que actan cortando un
nico enlace peptdico entre dominios extracelulares de la desmogleina 1 (Dsg1) (Nishifuji et
al., 2008), protena transmembrana de la familia de las cadherinas que forma parte de los
desmosomas que unen las clulas epiteliales. Dsg1 predomina en las capas superficiales de la
epidermis, mientras que otras desmogleinas son ms abundantes en capas basales y mucosas.
Al hidrolizar el enlace peptdico de Dsg1 se pierde la adhesin celular entre los queratinocitos
producindose el desprendimiento de las capas superficiales de la epidermis, de modo que la
piel adquiere un aspecto que recuerda al que presentan las quemaduras. La funcin de Dsg1
no puede ser compensada por otras isoformas de desmogleinas, lo que propicia la
epidermlisis (Nishifuji et al., 2008; Bukowski et al., 2010).
Estudios iniciales sugirieron que las ETs se comportaban como superantgenos y
estimulaban la mitogenia de linfocitos humanos y de ratn. Sin embargo investigaciones ms
recientes han demostrado que su actividad superantgnica es muy inferior a la que presentan
los autnticos superantgenos, y en exmenes histopatolgicos de lesiones cutneas asociadas
a SSSS no se ha observado un incremento importante de linfocitos en la epidermis, como
cabra esperar de unos verdaderos superantgenos (Nishifuji et al., 2008; Bukowski et al.,
2010).
Se han descritos 3 isoformas de exfoliatinas en S. aureus: ETA (eta), ETB (etb), y
ETD (etd). Estudios iniciales determinaron que ETA es ms frecuente en aislamientos de
Europa y Amrica, mientras que ETB es ms frecuente en Japn. A, su vez, esta ltima es
predominante en casos de SSSS, aunque las diferencias regionales y su asociacin con
enfermedades an no han sido del todo determinadas (Nishifuji et al., 2008; Bukowski et al.,
2010). ETA y ETB estn asociadas slo a casos de imptigo y SSSS, mientras que ETD se ha
relacionado tambin con otras infecciones, como abscesos y furnculos (Nishifuji et al.,
1. Introduccin
2008; Bukowski et al., 2010). Estas toxinas son relativamente especificas, afectando a
humanos y ratones pero no a otras especies, aunque ETB y ETD tambin actan sobre la
Dgs1 presente en la epidermis del ganado porcino (Nishifuji et al., 2008). En infecciones de
caballos causadas por S. aureus se describi una cuarta exfoliatina, denominada ETC, pero su
estructura no corresponde a la de una serin proteasa y su actividad sobre Dgs1 an no ha sido
determinada (Sato et al., 1994).
En cuanto a la localizacin gentica de los genes que codifican este tipo de toxinas,
eta se encuentra en el cromosoma y est asociado con la presencia de profagos de la clase
Siphoviridae con integrasa de tipo Sa1 (Canchaya et al., 2003) y con la isla genmica vSa
(Gill et al., 2005). El gen etb esta localizado en plsmidos (O'Toole y Foster, 1996;
Yamaguchi et al., 2001) y el gen etd en una isla tipo SaPI (Yamaguchi et al., 2002; apartado
1.3.3.3.).
1.3.3.3. Superantgenos
Los SAgs bacterianos son protenas exocelulares con la capacidad de estimular no
especficamente a un nmero elevado de linfocitos T en el hospedador, provocando la
produccin de citoquinas hasta niveles txicos (Fraser y Proft, 2008; Ortega et al., 2010). Los
SAgs se unen a regiones de las molculas del complejo mayor de histocompabilidad de clase
II (MHC) de las clulas presentadores de antgenos y a los receptores de los linfocitos T
colaboradores (TCR) en lugares diferentes a los de reconocimiento de antgenos
convencionales (Figura 2). Esta interaccin da lugar a la proliferacin de los linfocitos T
diana y a la liberacin de grandes cantidades de diversas citoquinas y otros efectores por parte
de las clulas inmunes. Los factores ms txicos son la interleucina-2, el interferon gamma y
el factor de necrosis tumoral, que en exceso producen sntomas como nuseas, vmitos
(actividad emtica), fiebre y, en casos extremos, incluso shock, insuficiencia multiorgnica y
muerte (Mandell et al., 2000). Dentro de la familia de los SAgs se encuentra la toxina del
sndrome del shock toxico (TSST-1), las enterotoxinas estafiloccicas (SEs) y las
enterotoxinas estafiloccicas-like (SEls).
Estudios cristalogrficos han demostrado que las estructuras tridimensionales de
TSST-1 y varias SEs y SEls estn conservadas, aunque la interaccin con las molculas MHC
as como la especificidad por TCR es diferente (Fraser y Proft, 2008). Cada molcula est
constituida fundamentalmente por lminas beta, aunque tambin incluye algunas hlices alfa
(Fraser y Proft, 2008, Larkin et al., 2009). La presencia de un bucle disulfuro dentro del
dominio N-terminal en las SEs se ha relacionado con las propiedades emticas de muchas de
estas toxinas (Thomas et al., 2007).
La capacidad emtica es la caracterstica utilizada en la nomenclatura que diferencia
entre SEs y SEls. Slo aqullas enterotoxinas que producen vmitos tras administracin oral
en modelos animales de primates se consideran SEs. Sin embargo, aquellas que no tienen
actividad emtica en dicho modelo o no se han comprobado se consideran SEls. Hasta ahora
(Diciembre 2010) la familia de SEs/SEls incluye 22 miembros, excluyendo variantes
10
1. Introduccin
moleculares: i) las clsicas SEA, SEB, SEC (con las variantes SEC1, SEC2 y SEC3, SEC
ovina y SEC bovina), SED y SEE; ii) y los nuevos tipos de SEs (SEG, SEH, SEI, SER, SES,
SET) y SEls (SElJ, SElK, SElL, SElM, SElN, SElO, SElP, SElQ, SElU, SElU2, SElV)
(Jarraud et al., 2001; Letertre et al., 2003; Munson et al., 1998; Omoe et al., 2005a; Ono et
al., 2008; Orwin et al., 2001; Orwin et al., 2002; Orwin et al., 2003; Su y Wong, 1995;
Thomas et al., 2006; Zhang et al., 1998). TSST-1 que fue inicialmente denominada SEF,
carece de actividad emtica (Bergdoll et al., 1981; Reuiser et al., 1983).
Antgeno
convencional
Superantigeno
Antgeno
convencional
Superantigeno
Clase II MHC
Clula presentadora
de antgenos
Pptido de un
antgeno
convencional
Lisosoma
Clase II
MHC
Superantigeno
TCR TCR
Linfocito T
colaborador
Entre las enfermedades que producen los SAgs de S. aureus destaca el sndrome del
shock txico y las intoxicaciones alimentarias. El sndrome del shock txico (TSS) cursa
con fiebre, hipotensin, erupciones cutneas, inflamacin, disfuncin multiorgnica e incluso
muerte. En el caso del sndrome del shock txico menstrual, TSST-1 es la nica toxina
responsable, ya que es la nica capaz de atravesar las mucosa vaginal (Fraser y Proft, 2008).
En los casos de TSS no menstrual adems de TSST-1, otras SEs (SEA, SEB y SEC) pueden
producir la enfermedad (Thomas et al., 2007). La intoxicacin alimentaria resulta del
consumo de alimentos en los que S. aureus se ha multiplicado y ha producido enterotoxinas
(SEs). Sus sntomas incluyen nuseas, vmitos, dolor abdominal y diarrea tras un periodo
corto de incubacin (aproximadamente 4 horas tras la ingestin de los alimentos
contaminados) (Ortega et al., 2010). Otras enfermedades que se han relacionado con este tipo
de SAgs incluyen artritis, dermatitis atpica, enfermedad intestinal inflamatoria,
11
1. Introduccin
Actividad emtica demostrada en conejos (SElL; Orwin et al., 2003) o en el insectvoro Suncus murinus
(SElP; Omoe et al., 2005a) pero no en modelo de primates. bLocalizacin hipottica en un profago (Couch et
al., 1988). cRevisin.
Entre los SAgs de codificacin plasmdica se incluyen SEs y SEls como SEB, SED,
SElJ, SER, SET y SES. El gen seb se localiza en plsmidos como el pZA10 (Altboum et al.,
1985), aunque tambin se ha descrito en SaPIs. Los genes de las otras toxinas se encuentran
en una familia de plsmidos relacionados que incluyen al inicialmente descrito pIB485
12
1. Introduccin
(Bayles y Iandolo, 1989; Zhang et al., 1998), a sus variantes (pIB485-like, Omoe et al., 2003;
Fueyo et al., 2005a) y al pF5 (Ono et al., 2008).
Los genes de las toxinas SEA, SEP, SEK y SEQ se localizan en profagos de la familia
Siphoviridae dentro del subgrupo que tiene la integrasa de tipo Sa3. Estos profagos suelen
incluir adems genes que codifican otros factores de virulencia como chp y sak, para la
produccin de CHIPS y estafiloquinasa, respectivamente (Goerke et al., 2009). La integracin
de este tipo de profagos en el genoma de S. aureus interrumpe el gen de la -hemolisina (hlb)
(Lindsay et al., 2008).
Las SaPIs con genes que codifican SAgs son MGEs ampliamente distribuidos en
S. aureus, tienen un tamao entre 15 a 27 kb y presentan una organizacin muy
conservada, paralela a la de bacterifagos temperados (Figura 3).
attL
attR
SaPI1
attL
attR
SaPI2
attL
attR
SaPI3
attL
attR
SaPI5
attL
attR
attL
attR
SaPIm1/n1
SaPImw2
attL
attR
SaPIbov1
600-800 nt
genes de PTSAgs
genes de integrasas
genes de terminasas
otros
1. Introduccin
hemolisina (hla) y el cluster de las modulinas solubles en fenol (staphylococcal phenolsoluble modulins, PSM). Las islas tipo vSa contienen genes de serin proteasas (spl),
leucotoxinas (lukED), lantibiticos (bsa), el cluster egc (enterotoxin gene cluster) que
contiene diferentes genes de enterotoxinas (Figura 4, apartado 1.3.). Tanto vSa y vSa,
contienen genes que codifican las subunidades de reconocimiento y modificacin del sistema
de restriccin y modificacin (RM) SauI (apartado 1.5.).
tRNA
tRNA
II
tRNA
III
600-800 nt
genes de enterotoxinas
genes de leucotoxinas
otros
Figura 4. Estructura de las vSa de Staphylococcus aureus. Basado en Baba et al., 2008.
1.3.4. Bacteriocinas
Las bacteriocinas, en general, son pptidos antimicrobianos que inhiben el
crecimiento de cepas y especies de bacterias diferentes pero relacionadas con la bacteria
14
1. Introduccin
attL
attR
attL
genes de enterotoxinas
genes de recombinasas
genes de resistencia
attR
otros
600-800 nt
Figura 5. Comparacin de las dos formas allicas de elementos SCC asociados con seh.
Basado en Noto y Archer (2006).
1.3.5. Regulacin
La expresin de los factores de virulencia en S. aureus esta controlada por las
condiciones ambientales (pH y concentracin de CO2) y por la concentracin de pptidos
autoinductores dependientes de la densidad bacteriana. Cada una de estas seales controla
diferentes sistemas reguladores, que incluyen sistemas reguladores de dos componentes como
el agr, el sistema accesorio regulador estafiloccico (staphylococcal accessory regulator,
sarA) y el factor sigma B (B) (Novick et al., 2003; Bronner et al., 2004).
El sistema regulador de S. aureus que ha sido ms estudiado es el codificado por el
opern agr. Este sistema tiene una accin dual ya que reprime la transcripcin de genes que
codifican protenas asociadas a la pared (protena A, coagulasa, protenas de unin a
fibronectina) y activa la transcripcin de genes de varias exoprotenas (hemolisinas, TSST-1,
enterotoxinas, exfoliatinas, leucotoxinas) durante la fase estacionaria de crecimiento (Bronner
et al., 2004). El opern agr est compuesto por cinco genes (agrA, agrC, agrD, agrB, hld) y
produce dos transcritos divergentes, denominados RNAII y RNAIII. RNAII codifica los
distintos componentes del sistema, mientras que RNAIII es el efector del locus agr y tambin
codifica la -hemolisina (Bronner et al., 2004; George et al., 2007). Variaciones en los genes
agrC, agrD y agrB determinan los cuatros tipos de sistemas agr existentes (comnmente
denominados agrI, agrII, agrIII y agrIV) (Novick et al., 2003), aunque se han descrito tipos
mixtos (Goerke et al., 2005; Robinson et al., 2006). Ciertas enfermedades, resistencias y
factores de virulencia se han relacionado con la presencia de un determinado sistema agr.
15
1. Introduccin
As, el sistema agrIII se asocia con cepas productoras de TSST-1 (Ji et al., 1997) y con
aislamientos LukPV positivos causantes de neumona necrotizante (Gillet et al., 2002). El
tipo agrIV se asocia con cepas productoras de exfoliatinas (Jarraud et al., 2000; McDowell et
al., 2001) y los tipos agrI y agrII con cepas que muestran susceptibilidad reducida a
vancomicina (Sakoulas et al., 2002).
Otros sistemas reguladores de dos componentes [como el regulador de la expresin de
exoprotenas (S. aureus exoprotein expression, sae), la respuesta respiratoria estafiloccica
(Staphylococcal respiratory response, srrAB) y el locus relacionado a autolisis (Autolysisrelated locus, ArlSR)] tambin actan a nivel de la transcripcin de genes de virulencia
(Bronner et al., 2004).
El sistema sarA es otro regulador que influye en la expresin de exoprotenas
(hemolisinas, TSST-1, enterotoxinas, leucotoxinas) y protenas de superficie celular (protena
A, protenas de unin a fibronectina), adems de incrementar la expresin de los transcritos
del sistema agr (Novick et al., 2003; Bronner et al., 2004). Y por ltimo, B regula la
expresin de genes conservados y de genes involucrados en respuestas al estrs (Bronner et
al., 2004).
1. 4. Resistencia a antimicrobianos
1.4.1. Antecedentes histricos
En la era pre-antibitica la mortalidad de pacientes con bacteriemia por S. aureus se
situaba entre el 70-80%. Con el descubrimiento y aplicacin teraputica de las primeras
penicilinas, las infecciones estafiloccicas pudieron ser controladas. Sin embargo, poco
despus Spink y Ferris (1945) describieron el primer aislamiento de una cepa resistente a
penicilina por produccin de una -lactamasa (apartado 1.4.2.1.). Dos dcadas despus, ms
del 80% de las cepas intrahospitalarias y procedentes de la comunidad eran ya resistentes a
penicilina y actualmente, lo son ms del 95% (Mandell et al., 2000). En el ao 1959 se
introdujo en la prctica clnica la meticilina, una penicilina semisinttica diseada para
combatir cepas de S. aureus productoras de -lactamasas y, posteriormente, otras penicilinas
semisintticas que escapaban tambin a la inactivacin, como la oxacilina y la dicloxacilina.
Al igual que anteriormente, al poco tiempo de su introduccin comenzaron a aparecer cepas
resistentes a los nuevos agentes, las cuales se denominaron cepas MRSA (Jevons, 1961). La
mayora de estas cepas presentaban tambin resistencia a otros antimicrobianos como
eritromicina, tetraciclina, estreptomicina y clindamicina. Las cepas MRSA se extendieron
rpidamente por Europa y Estados Unidos siendo causa de importantes brotes de infeccin
nosocomial, y creando serios problemas en el tratamiento de las infecciones estafiloccicas
(Kluytmans y Struelens, 2009). A partir del ao 1989 empezaron a diagnosticarse infecciones
con cepas MRSA adquiridas en la comunidad por individuos sanos, sin relacin, directa o
indirecta, con instalaciones hospitalarias, lo que plante un nuevo problema de salud pblica
de gran magnitud (Udo et al., 1993). Estas cepas MRSA asociadas a la comunidad son
epidemiolgicamente y genticamente distintas a las nosocomiales, por lo que se conocen
16
1. Introduccin
Esta situacin ha puesto de manifiesto la importancia del uso apropiado de los agentes
antimicrobianos, tanto en clnica como en veterinaria y ganadera (Collignon et al, 2009),
adems de la necesidad de contar con nuevos frmacos. Ante este panorama, la industria
farmacutica retom el inters por la investigacin en antimicrobianos, y ms concretamente
en aquellos con actividad frente a bacterias Gram positivas. Durante esta dcada, se han
empezado a comercializar nuevos agentes antimicrobianos contra S. aureus (como linezolid,
tigeciclina y daptomicina), que se sumaron a los glucopptidos (vancomicina y teicoplanina),
y a las estreptograminas (quinupristina-dalfopristina), conformando el actual arsenal
teraputico para el tratamiento de las infecciones por cocos Gram positivos, incluidas las
cepas multirresistentes (Eliopoulos et al., 2009). Sin embargo, ya se han encontrado cepas
resistentes a estos nuevos agentes antimicrobianos, lo que puede dificultar seriamente el
tratamiento de las infecciones por S. aureus en algunos casos, llegando a convertirse en un
17
1. Introduccin
Quinolonas
Rifamicinas
ADN
Sntesis proteica
THFA
ARNm
Membrana citoplasmtica
50
30
Rutas metablicas
Sulfonamidas
Diaminopirimidinas
Ribosomas
DHFA
Lipopptidos
PABA
50
30
50
30
Aminoglicsidos
Fenicoles
Macrlidos
Lincosamidas
Estreptograminas
Mupirocina
Oxazolidinonas
Tetraciclinas
Glicilciclinas
1. Introduccin
Localizacina
-lactmicos
Penicilinas
Penicilinas de espectro
extendido
-lactamasa
PBP de baja afinidad (PBP2a)
blaZ
mecA
Tn::P, Tn::C
SCC::C
vanA
Tn::P
Adeniltransferasa
Adeniltransferasa
Adeniltransferasa
Acetiltransferasa
Fosfotransferasa
Adeniltransferasa
spc
str
aadE
sat4
aphA-3
aadD
Tn::C
P
Tn::P, Tn::C
Tn::P, Tn::C
Tn::P, Tn::C
P, P::C
Acetiltransferasa y fosfotransferasa
aacA-aphD
Tn::P, Tn::C
Acetiltransferasa
Bomba de expulsin
cat
fexA
P
Tn::P, Tn::C
Metiltransferasa
ermA
ermB
ermC
vatA, vatB
vgaA, vgaB, vgaC
vgbA, vgbB
msrA, msrB
linA/linA
Tn::C
Tn::P
P
P
P
P
P
P
ileS
mupA
P, P::C
Oxazolidinonas
Fenicoles, estreptograminas A,
lincosamidas, oxazolidinonas
cfr
P, P::C
Tetraciclinas y glicilciclinas
Tetraciclina, minociclina
Tetraciclina
Bomba de expulsin
Tigeciclina
Bomba de expulsin
tetM
tetO
tetK
tetL
mepA
Tn::C
C
P, P::C
P
C
Glucopptidos
Aminoglucsidos
Espectinomicina
Estreptomicina
Estreptotricina
Neomicina, kanamicina
Amikacina, kanamicina,
neomicina y tobramicina
Amikacina, kanamicina,
gentamicina y tobramicina
Fenicoles
MLS
Macrolidos, lincosamidas,
estreptograminas
Estreptograminas A
Estreptograminas B
Macrolidos
Lincosamidas
Mupirocina
Acetiltransferasa
Bomba de expulsin
Liasa
Bomba de expulsin
Nucleotidiltransferasa
19
1. Introduccin
grlA, grlB
gyrA, gyrB
norA, norB, norC, mepA,
sdrM
C
C
Rifamicinas
rpoB
Diaminopirimidinas
dfrA, dfrK
dfrB, dfrG
P
C
Sulfonamidas
sulA
Biocidas
Bomba de expulsin
P
C
C, Cromosoma; P, plsmido; Tn, transposn; SCC, cassette cromosmico estafiloccico; Tn::P, transposn
de localizacin plasmdica; Tn::C, transposn de localizacin cromosmica; P::C, plsmido integrado en el
cromosoma. Basado en Dale et al. (1995), Derbise et al. (1997), Kadlec y Schwarz, (2009a y 2009b), Jensen
y Lyon (2009), Malachowa y De Leo (2010), Roberts (2008), Patel et al. (2009) y Sekiguchi et al. (2005).
-lactmicos
Los -lactmicos constituyen una amplia familia de antibiticos de gran uso en
clnica, que se caracterizan por presentar un anillo -lactmico en su estructura qumica. Este
componente va unido generalmente a un anillo secundario, cuya composicin determina los
distintos grupos de compuesto que incluye esta familia (penicilinas, cefalosporinas,
carbapenemes y monobactmicos) (Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
Los antibiticos -lactmicos son agentes bactericidas que inhiben la sntesis de la pared
celular bacteriana, al bloquear la ltima etapa de sntesis del peptidoglucano (la
transpeptidacin). Estos antibiticos se asocian covalentemente a las PBPs (penicillin-binding
proteins), que son los enzimas (transpeptidasas, transglucosilasas y carboxipeptidasas)
encargadas de entrelazar los componentes del peptidoglucano. Los -lactmicos bloquean las
PBPs ya que el anillo -lactmico es un anlogo estructural del sustrato de las mismas (el
residuo acil-D-alanin-D-alanina de las cadenas de peptidoglucano). La afinidad por las
distintas PBPs determina la actividad de los distintos grupos de -lactmicos. Por otro lado,
estos antibiticos tienen efecto autoltico, al activar autolisinas que estn implicadas en la
degradacin del peptidoglucano. La rotura del equilibrio entre la sntesis y degradacin de
este compuesto por accin de los -lactmicos, provoca la muerte celular. En bacterias que
carecen de autolisinas, se detiene el crecimiento (efecto bacteriosttico) pero no son
destruidas (Marn y Gudiol, 2003).
S. aureus ha desarrollado varios mecanismos de resistencia frente a -lactmicos (Tabla 4):
a) Inactivacin enzimtica: Las -lactamasas (penicilinasas) son enzimas que
destruyen por hidrlisis el anillo -lactmico, originando derivados inactivos. Se clasifican
20
1. Introduccin
21
1. Introduccin
J2
J3
Tn554
pUB110
Clase A
Tn554
Opero n mer
Tn554
pT18 1
Clase A
SCCHg
transposones
genes de recombinasas
plsmidos integrados
secuencias de insercin
otros
Glucopptidos
Este grupo est integrado por dos antibiticos de uso clnico (vancomicina y
teicoplanina). Actan a nivel de la biosntesis de la pared celular de bacterias en divisin,
inhibiendo la sntesis del peptidoglucano en un estadio previo a los -lactmicos. Los
glucopptidos se unen a los residuos D-alanin-D-alanina del extremo del precursor del
peptidoglucano situado en la membrana plasmtica, evitando la accin de las
glucosiltransferasas y transpeptidasas, y por tanto impidiendo la elongacin de la cadena
(Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
En S. aureus se han descrito dos mecanismos de resistencia a glucopptidos:
a) Engrosamiento de la pared celular: La rotura del balance entre sntesis y
degradacin del peptidoglucano por autolisisnas, aumenta el grosor de la pared celular, que
22
1. Introduccin
contiene un nmero mayor de residuos D-alanin-D-alanina, los cuales retienen las molculas
de antibitico, impidiendo su difusin por la pared celular. Numerosos genes tanto
reguladores como de protenas de superficie se han relacionado con este fenotipo (Howden et
al., 2010). Los aislamientos con esta caracterstica se denominan VISA (vancomycin
intermediate Staphylococcus aureus), o hVISA (heterogeneous vancomycin intermediate
Staphylococcus aureus). Las cepas VISA presentan una CMI a vancomicina entre 4 y 8
g/ml, mientras que las hVISA tendran una CMI propia de cepas susceptibles (igual o
inferior a 2 g/ml) pero una proporcin de la poblacin estara dentro del rango para VISA
(Howden et al., 2010). Las primeras cepas de ambos tipos se aislaron en Japn, y
posteriormente en otros pases siendo responsables de fallos teraputicos en el tratamiento de
S. aureus (Howden et al., 2010).
b) Modificacin de la diana: La resistencia de nivel elevado (CMI mayor o igual a
32 g/ml) se debe a la adquisicin a partir de Enterococcus spp. del transposon Tn1546 que
contiene el opern vanA (Tabla 4). Los transposones de la familia Tn1546, contienen
operones vanRS y vanHAXYZ que codifican varios enzimas implicados en la regulacin y
produccin de un precursor de peptidoglucano con residuos D-alanin-D-lactato con baja
afinidad por glucopptidos (Prichon y Courvalin, 2009). La primera cepa clnica de S.
aureus resistente a vancomicina (vancomycin resistant Staphylococcus aureus, VRSA), se
aisl en 2002 de un paciente de Michigan, y posteriormente se aislaron otras cepas VRSA de
EEUU, India e Irn (Prichon y Courvalin, 2009). La prevalencia de VRSA es mucho menor
que los fenotipos VISA y hVISA, que adems han sido detectados en ms pases (Howden et
al., 2010).
1.4.2.2. Resistencia a antimicrobianos que alteran la membrana citoplasmtica
La membrana citoplasmtica es vital para todas las clulas, ya que interviene
activamente en los proceso de difusin y transporte activo, y de esta forma controla la
composicin del medio interno celular. Las sustancias que alteran esta estructura modifican la
permeabilidad, y provocan la salida de iones, elementos esenciales para la vida bacteriana, o
la entrada de otros que a altas concentraciones alteran el metabolismo bacteriano normal. Los
antibiticos que actan en esta estructura son bactericidas, incluso en bacterias en reposo
(Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
Lipopptidos
La daptomicina es el primer agente de la clase de lipopptidos cclicos, es de reciente
introduccin en clnica y posee una gran actividad frente a bacterias Gram positivas pero no
es activa frente a las Gram negativas (no atraviesa su pared). Es una gran molcula cclica
peptdica (parte hidroflica) unida a una cadena lateral de acido graso (parte lipoflica). Su
actividad depende de la presencia de calcio, que favorece la unin de la parte lipoflica de la
molcula a la membrana citoplasmtica. Varias molculas de daptomicina se insertan en la
membrana tras una serie de cambios conformacionales, formando canales que producen la
23
1. Introduccin
24
1. Introduccin
AAC(6)-APH(2) (aminoglicsido-6-N-acetiltransferasa/2-O-fosforiltransferasa):
enzima bifuncional codificado por el gen aacA-aphD [ aac(6)-aph(2)] asociado al
transposon Tn4001 (Shaw et al., 1993; Jensen y Lyon, 2009).
APH(3)III (aminoglicsido-3-O-fosforiltransferasa III): Codificado por el gen aphA3 [ aph(3)-IIIa], asociado al transponsn Tn5405, que tambin contiene otros genes
modificadores de aminoglucsidos (Shaw et al., 1993; Jensen y Lyon, 2009).
Fenicoles
El florfenicol, cloranfenicol, y su derivado el tianfenicol, son antibiticos
bacteriostticos con un amplio espectro de actividad. Bloquean la sntesis proteica bacteriana
al unirse reversiblemente a la protena L16 de la subunidad 50S del ribosoma bacteriano,
impidiendo la fijacin del ARNt a la enzima peptidiltransferasa, y por tanto, inhibiendo la
formacin de los enlaces peptdicos en la cadena de elongacin (Calvo y Martnez-Martnez,
2009). Compite con otros antibiticos que se unen a la misma subunidad (macrlidos y
lincosaminas) y por ello no deben asociarse (Torres et al., 2000).
Los mecanismos de resistencia frente a fenicoles son (Tabla 4):
a) Modificacin de la diana: El enzima metiltransferasa codificado por el gen cfr,
metila el ARNr 23S en posicin A2503, disminuyendo la afinidad de la droga por el
ribosoma, confiriendo resistencia a fenicoles as como a otras familias de antibiticos que
actan en la subunidad 50S del ribosoma bacteriano (Jensen y Lyon, 2009).
b) Inactivacin enzimtica: Es el mecanismo ms frecuente, y ocurre a travs de la
accin de cloranfenicol acetiltransferasas (CAT), que acetilan la molcula del antibitico
impidiendo su unin al ribosoma. Los genes que las codifican (cat) en S. aureus se
encuentran en plsmidos de 2.9 a 5.1 kb (pC221, pC223, pC194 y pUB112) (Jensen y Lyon,
2009).
c) Expulsin del antimicrobiano: Mediante un transportador de la superfamilia MFS
(major facilitator superfamily), codificado por el gen fexA que forma parte del transposn
25
1. Introduccin
Tn558 (Hassssan et al., 2007). Este gen, as como cfr, son ms frecuentes en aislamientos
procedentes de animales que en aislamientos humanos (Kehrenberg y Schwarz, 2006).
Macrlidos, lincosaminas y estreptograminas
Los macrlidos, las lincosaminas y las estreptograminas constituyen un grupo de
antibiticos conocido como MLS, que a pesar de tener estructuras qumicas diferentes, se
estudian en conjunto por poseer indicaciones clnicas, mecanismos de accin y mecanismos
de resistencia semejantes. Presentan un efecto bacteriosttico al unirse a la subunidad 50S del
ribosoma bacteriano, inhibiendo la sntesis de protenas, aunque pueden ser bactericidas
dependiendo del microorganismo, la concentracin y el tiempo de exposicin (Torres et al.,
2000).
Los macrlidos se caracterizan por la presencia de un anillo lactnico macrocclico al
que se le unen uno o varios azcares. Dependiendo del nmero de elementos contenidos en el
anillo se clasifican en macrlidos de 14 (ej. eritromicina), 15 (ej. azitromicina) y 16 (ej.
josamicina) tomos de carbono. Se unen de forma reversible al dominio V del centro
peptidiltransferasa, en el ARNr 23S de la subunidad 50S del ribosoma, interfiriendo en la
elongacin de la sntesis proteica (Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
Las lincosamidas (lincomicina y su derivado clindamicina) tienen la estructura de un
aminocido unido a un aminoazcar. Inhiben la sntesis proteica al unirse reversiblemente a la
subunidad 50S del ribosoma, en un lugar prximo al de unin de macrlidos o cloranfenicol,
impidiendo la accin de la peptidiltransferasa (Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
Las estreptograminas, tambin llamadas sinerginas, tienen una estructura compleja
constituida por una macrolactona (en estreptograminas del grupo A) o un polipptido cclico
(en estreptograminas del grupo B). Ambos compuestos actan sinrgicamente de forma
bactericida (por separado son bacteriostticos), bloqueando la accin de la peptidiltransferasa
en diferentes puntos. Su principal representante es la asociacin quinupristina-dalfopristina.
Las estreptograminas A (dalfopristina) se unen al ARNr 23S, modificando la estructura
terciaria de ciertas protenas ribosmicas, de manera que aumentan su afinidad por las
estreptograminas B (quinupristina) (Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
En Staphylococcus la resistencia a antibiticos del grupo MLS, puede ser debida a
varios mecanismos (Tabla 4):
a) Modificacin de la diana: Es el tipo de resistencia ms extendida, consiste en la
6
N -dimetilacin de un residuo de adenina en el ARNr 23S, que produce un cambio
conformacional en el ribosoma, reduciendo su afinidad por el antibitico. Se han identificado
numerosos genes que codifican metilasas del ARNr 23S en distintos gneros bacterianos,
pero los ms frecuentes en estafilococos son ermA, ermB y ermC (Roberts, 2008). Otros
genes erm descritos en S. aureus, pero menos frecuentes, son ermF, ermY y erm33 (Roberts,
2008). Generalmente se consideraba que las metilasas ErmA y ErmC eran ms comunes en
cepas clnicas, mientras que la ErmB era ms comn en aislamientos de animales (Fluit et al.,
2001), pero recientemente sta tambin se ha encontrado con gran frecuencia en aislamientos
26
1. Introduccin
clnicos (Zmantar et al., 2008). Los genes erm se encuentran en transposones (ermA en Tn554
y ermB en Tn551) o en plsmidos multicopia de pequeo tamao (ermC). La expresin de los
genes erm puede ser constitutiva: resistencia cruzada a macrlidos, lincosaminas y
estreptograminas B (fenotipo MLSB); o inducible: por separado slo confiere resistencia a
macrolidos de 14 y 15 tomos, pero la presencia de estos induce el fenotipo MLSB. Este
ltimo tipo de resistencia se debe a un proceso de atenuacin de la traduccin en la expresin
de los genes, pero mutaciones, deleciones o duplicaciones en la regin reguladora hacen que
la expresin pase a ser constitutiva (Werckenthin et al., 2001). Por otro lado, la
metiltransferasa codificada por el gen cfr, confiere resistencia a lincosamidas y
estreptograminas tipo A.
b) Inactivacin enzimtica: Se han descrito varios enzimas que inactivan
macrolidos: esterasas (genes ereA y ereB) y fosfotransferas (gen mphC); estreptograminas A:
acetiltransferasas (genes vatA y vatB); estreptograminas B: liasas (genes vgbA y vgbB); y
lincosamidas: nucleotidiltransferasas (gen linA/linA) (Fluit et al., 2001; Matsuoka y Sasaki,
2004; Roberts, 2008).
c) Expulsin del antimicrobiano: Se han descrito sistemas de transporte activo de
ATPasas del tipo ABC (ATP-binding cassette) que confieren resistencia a macrlidos de 14 y
15 tomos de carbono y estreptograminas tipo B (genes msrA y msrB) o a estreptograminas
tipo A (genes vgaA, vgaB y vgaC) (Hassssan et al., 2007; Kadlec y Schwarz, 2009b).
Mupirocina
La mupirocina (cido pseudomnico A) es un antibitico bactericida obtenido de
especies de Pseudomonas spp., que inhibe competitivamente la enzima isoleucil-ARNt
sintetasa, con lo cual no puede incorporarse el aminocido isoleucina al pptido en formacin
y la sntesis de protenas se interrumpe (Calvo y Martnez-Martnez, 2009). Se usa
fundamentalmente en el tratamiento tpico de infecciones cutneas o para la erradicacin del
estado de portador de S. aureus (McConeghy et al., 2009).
El mecanismo de resistencia a mupirocina en Staphylococcus consiste en la
modificacin de la diana (Tabla 4). La resistencia de bajo nivel (CMI = 8 a 64 g/ml), se
debe a la alteracin de la isoleucil ARNt sintetasa nativa como consecuencia de mutaciones
espontneas en el gen ileS. Es el mecanismo de resistencia ms prevalente en aislamientos
clnicos, y aunque no esta clara su relacin con fallo en la descolonizacin, puede contribuir
al mantenimiento del estado de portador (Patel et al., 2009). La resistencia de alto nivel (CMI
512 g/ml), que teraputicamente implica fallo en la descolonizacin (Patel et al., 2009), se
debe a la adquisicin del gen mupA (o ileS2) que codifica una isoleucil ARNt sintetasa con
reducida afinidad por la mupirocina, la cual presenta slo un 30% de homologa con el
enzima nativo (Patel et al., 2009). Este gen se ha identificado en plsmidos de diferente
tamao en S. aureus, aunque tambin se ha descrito en el cromosoma (Patel et al., 2009).
27
1. Introduccin
Oxazolidinonas
Las oxazolidinonas representan una de las ltimas familias de antimicrobianos
incorporadas a la prctica clnica. Son compuestos obtenidos por sntesis (quimioterpicos),
con una estructura bsica bicclica, la feniloxazolidin-2-ona. El representante en uso es el
linezolid, que est compuesto por un nico enantimero de centro asimtrico en el anillo de
oxazolidinona y acta como bacteriosttico frente a bacterias Gram positivas (Calvo y
Martnez-Martnez, 2009). Las oxazolidinonas inhiben la sntesis proteica e impiden la
formacin del complejo de iniciacin 70S, formado por formilmetionil-ARNt, ARNm,
diversas protenas y las subunidades ribosmicas 30S y 50S. Se fijan a la subunidad
ribosmica 50S, en el centro peptidiltransferasa dentro del ARNr 23S (dominio V),
distorsionando as el punto de unin del formilmetionil-ARNt, y evitando por tanto, la
formacin del complejo de iniciacin (Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
La resistencia a linezolid se debe a modificacin de la diana, concretamente a
mutaciones en los genes ARNr 23S que disminuyen la afinidad por la droga. En casi todas las
bacterias, el gen del ARNr 23S se presenta en mltiples copias (5 a 6 en S. aureus). Las cepas
resistentes a linezolid presentan ms de una copia mutada, de hecho se ha observado que a
medida que aumenta el nmero de copias mutadas se incrementa el nivel de resistencia (Meka
y Gold, 2004). Adems, las mutaciones en estos genes confieren resistencia cruzada frente a
otros antibiticos que actan a nivel de la subunidad 50S, como los del grupo MLS y los
fenicoles (Besier et al., 2008). La mutacin ms frecuente asociada con resistencia a linezolid
en varios gneros bacterianos, es la sustitucin G2576T en el centro peptidiltransferasa,
aunque en S. aureus se han descrito otras mutaciones en el dominio V responsables de
resistencia a linezolid como T2500A y G2576T (Meka y Gold, 2004; Besier et al., 2008). Por
otro lado, la metiltransferasa codificada por el gen cfr, descrita en el apartado de resistencia a
fenicoles, tambin confiere resistencia a las oxazolidinonas.
Tetraciclinas y glicilciclinas
Las tetraciclinas son molculas naturales o semisintticas con un ncleo
hidronaftaceno, que contiene cuatro anillos fundidos al que se pueden unir distintos radicales
que darn lugar a las diferentes tetraciclinas (Calvo y Martnez-Martnez, 2009). Penetran en
el citoplasma bacteriano de bacterias Gram positivas mediante sistemas de transporte activo,
y una vez en el citoplasma se unen de forma reversible a la subunidad 30S del ribosoma
(protenas S7, S14 y S19), bloqueando el acceso de los complejos aminoacil-ARNt, e
impidiendo la continuacin de la sntesis proteica (Calvo y Martnez-Martnez, 2009). El
compuesto ms usado en clnica es la doxiciclina, aunque tambin estn disponibles otras
tetraciclinas (minociclina, oxitetraciclina, tetraciclina) (Gold y Pillai, 2009).
S. aureus ha desarrollado varios mecanismos de resistencia a tetraciclinas (Tabla 4):
a) Modificacin de la diana: La resistencia a tetraciclinas (incluyendo la
minociclina) puede deberse a protenas de proteccin ribosomal (asociadas a los genes tetM,
tetO, tetU y tetW en Staphylococcus) (Roberts, 2005). Estas protenas interaccionan con
28
1. Introduccin
29
1. Introduccin
30
1. Introduccin
dihidrofolato reductasa, formar el cido tetrahidroflico (cido folnico) (Calvo y MartnezMartnez, 2009).
Sulfonamidas y diaminopirimidinas
El compuesto base de las sulfonamidas (sulfametoxazol) es la sulfanilamida, cuya
estructura qumica es similar al PABA, por lo que al ser anlogos de ste compiten por la
enzima dihidropteroato sintetasa impidiendo as la formacin del cido dihidropteroico,
precursor del cido flico. Las diaminopirimidinas (trimetoprima y pirimetamina), compiten
por el enzima dihidrofolato reductasa, impidiendo la formacin del cido flico. En clnica se
utiliza el cotrimoxazol (combinacin de trimetoprima y sulfametoxazol en proporcin 1:5), ya
que la sinergia entre sus dos componentes bacteriostticos puede llegar a tener efecto
bactericida (Calvo y Martnez-Martnez, 2009).
Para ambos antimicrobianos la resistencia de S. aureus consiste en la modificacin de
la diana. La resistencia a sulfonamidas se debe a mutaciones cromosmicas en el gen de la
dihidropteroato sintetasa (sulA), que reduce su afinidad por estas drogas (Jensen y Lyon,
2009). La resistencia a diaminopirimidinas es de nivel bajo a intermedio cuando se debe a
mutaciones en el gen cromosmico de la dihidrofolato reductasa (dfrB), y de nivel alto (CMI
> 800 g/ml) cuando la resistencia se debe a una dihidrofolato reductasa con baja afinidad a
trimetoprima de codificacin plasmdica (dfrA, tambin denominado dfrS1, asociado a
Tn4003) (Jensen y Lyon, 2009). En S. aureus se han descrito otros genes que codifican
dihidrofolato reductasas con baja afinidad a trimetoprima: dfrK (asociado a plsmidos) y dfrG
(localizado en el cromosoma formando parte de una secuencia de insercin adquirida de
Enterococcus faecium) (Sekiguchi et al., 2005; Kadlec y Schwarz, 2009a).
1.4.2.6. Resistencia a biocidas
En aislamientos clnicos de S. aureus se han encontrado determinantes de resistencia
frente a biocidas (compuestos de amonio cuaternario), que generalmente son bombas de
expulsin que confieren resistencia cruzada a numerosos antibiticos. Entre ellas destacan
transportadores de la superfamilia MFS (QacA y QacB) y de la familia de pequeas bombas
de flujo multidrogas SMR (small multidrug resistance family), como QacC, que confieren
resistencia a cationes lipoflicos y los genes que los codifican estn asociados a distintos
plsmidos (Jensen y Lyon, 2009). Por otro lado, la expresin elevada de bombas de expulsin
cromosmicas de la familia MFS (NorA, NorB, NorC, MdeA y SdrM), MATE (MepA) y
SMR (SepA), ya sea por mutaciones en las regiones promotoras de sus genes codificantes o
en sus genes reguladores, tambin confiere resistencia a biocidas y a antimicrobianos como
glicilciclinas (MepA), novobiocina y cido fusdico (MdeA), y quinolonas (NorA, NorB,
NorC, MepA y SdrM) (Jensen y Lyon, 2009).
31
1. Introduccin
1. 5. Estructura poblacional
La variacin existente entre cepas de S. aureus se debe a cambios en los tres
componentes que conforman su genoma: el genoma conservado, el variable o flotante y los
MGEs (Lindsay, 2008). El genoma conservado o core, esta relativamente conservado entre
cepas aunque puede tener pequeas variaciones denominadas SNPs (single nucleotide
polymorphisms). El genoma variable (core variable) se corresponde con genes que varan de
acuerdo con los distintos linajes. Los MGEs se mueven de unas cepas a otras y codifican
genes de virulencia o resistencia (Lindsay, 2008). En base a la variacin observada, los
aislamientos de S. aureus se distribuyen en linajes o complejos clonales (CCs). Los
aislamientos procedentes de humanos pertenecen a diez linajes mayoritarios que se han
mantenido estables durante los ltimos 40 aos (Feil et al., 2003; Gomes et al., 2006). La
mayora de los aislamientos clnicos se asignan a cinco de ellos (CC5, CC8, CC22, CC30 y
CC45). La seleccin de estos CCs se debi, en parte, a la interaccin con el hospedador
humano, ya que los aislamientos procedentes de animales pertenecen a linajes diferentes
(Sung y Lindsay, 2007). Adems, los proyectos de secuenciacin de genomas y la utilizacin
de microarrays han demostrado que cientos de genes varan entre CCs y han confirmado la
relativa estabilidad intra-linaje. Este fenmeno se atribuy a la divergencia existentes en el
sistema de RM Sau1 de diferentes linajes. En la mayor parte de los genomas de S. aureus
secuenciados, el sistema de RM de tipo 1 Sau1, consiste en una subunidad enzimtica de
restriccin (codificada por el gen sau1hsdR), dos copias de la subunidad de modificacin
(codificadas por sau1hsdM1 y sau1hsdM2) y dos copias de la subunidad que determina la
especificidad de reconocimiento de secuencia (sau1hsdS1 y sau1hsdS2). Cada pareja de
genes sau1hsdM y sau1hsdS se localiza en una isla genmica (vSa o vSa; apartado
1.3.3.3.) (Waldron y Lindsay, 2006; Lindsay, 2008). Debido a las diferencias existentes entre
las subunidades de reconocimiento de secuencia, el sistema Sau1 limita el intercambio
gentico entre aislamientos de distintos linajes, pero no entre miembros de un mismo linaje
(Waldron y Lindsay, 2006; Lindsay, 2008).
La importancia de la distincin entre linajes de S. aureus radica en que algunos de
ellos han adquirido el casete SCCmec y se han dispersado mundialmente, en hospitales, en la
comunidad o en poblaciones animales, siendo responsables de un elevado nmero de
infecciones cuyo tratamiento se complica a consecuencia de la resistencia a meticilina
(Deurenberg y Stobberingh, 2009).
1. Introduccin
33
1. Introduccin
type, ST) (Enright et al., 2000). Los clones endmicos, tanto HA-MRSA como CA-MRSA, se
corresponden con un ST concreto que porta un determinado SCCmec (Murchan et al., 2003;
Deurenberg y Stobberingh, 2009). Al igual que en el anlisis de clusters revelados por
macrorrestriccin-PFGE, los STs pueden agruparse segn el nmero de alelos que tienen en
comn, lo que permite diferenciar distintos linajes. Generalmente, se considera que los STs
que comparten 5 o ms alelos pertenecen al mismo CC. El ST con mayor nmero de variantes
en un solo alelo (single locus variant, SLV) se considera el antecesor del grupo y su nmero
se corresponde con el asignado al CC. Adems, un SLV o un ST con variaciones en dos
alelos (double locus variant, DLV) puede ser fundador de un subgrupo si se ha diversificado
lo suficiente como para tener sus propios SLVs y DVLs (Enright et al., 2000; Enright et al.,
2002; Spratt et al., 2004). La estructura clonal de una poblacin de S. aureus puede
determinarse mediante el anlisis eBURST, un algoritmo implementado en el anlisis
BURST (Based Upon Related Sequence Types) (Feil et al., 2004; http://eburst.mlst.net/). Las
secuencias allicas, as como los STs, estn disponibles en una base de datos global
(http://www.mlst.net/) que se actualiza constantemente, permitiendo comparaciones interlaboratorio. Sin embargo, en comparacin con otras tcnicas de tipificacin, la secuenciacin
de varios genes es laboriosa y de alto coste. Adems de que no aporta datos sobre la
heterogeneidad dentro de cada ST.
Secuenciacin del gen de la protena A (spa)
La tcnica spa-typing se basa en la secuenciacin de la regin polimrfica X del gen
que codifica para la protena A de S. aureus (apartado 1.3.1.). El anlisis del nmero de
repeticiones y su variabilidad permite identificar distintos tipos (spa tipos) (Frenay et al.,
1996). Para la designacin de los tipos spa se usan dos sistemas de nomenclatura, lo que
dificulta la comparacin de resultados publicados (Koreen et al., 2004 ; Harmsen et al.,
2003). El ms utilizado est disponible online en la base de datos de SpaServer
(http://www.spaserver.ridom.de), sincronizada con el programa informtico Ridom
StaphType. El anlisis BURP (Based Upon Repeat Pattern) ha demostrado que existe una
elevada correlacin entre los resultados obtenidos con las tcnicas de tipificacin
macrorrestriccin-PFGE, MLST y spa (Cookson et al., 2007; Hallin et al., 2007b), siendo la
tipificacin spa ms simple que los PFGE y MLST, y presentando mayor poder
discriminatorio que este ltimo (varios tipos spa pueden corresponderse con un mismo ST,
pero siempre dentro del mismo CC) (Enright et al., 2002; Robinson y Enright, 2004).
Generalmente presenta una gran concordancia con el CC, aunque se han descrito excepciones
en las que mismos tipos spa pertenecen a CCs diferentes, o aislamientos de un mismo grupo
contenan tipos spa no relacionados (Koreen et al., 2004; von Eiff et al., 2008).
Test RM
Las divergencias existentes entre linajes en los genes sau1hsdS1 y sau1hsdS2, que
codifican las subunidades de reconocimiento de secuencia del sistema Sau1, han permitido
34
1. Introduccin
desarrollar una tcnica basada en la reaccin en cadena de la polimerasa que distingue los
linajes HA-MRSA ms frecuentes (CC1, CC5, CC8/239, CC22, CC30/ST36, CC45)
(Waldron y Lindsay, 2006; Cockfield et al., 2007). Esta tcnica, aunque es menos
discriminatoria que las basadas en secuenciacin, es ms rpida y tiene menor coste,
aportando una primera aproximacin a la estructura clonal de una poblacin de S. aureus
antes del uso, si compensa, de tcnicas mas laboriosas.
Tipificacin del SCCmec
Los clones MRSA se caracterizan por poseer un determinado SCCmec, por lo que se
han desarrollado numerosas tcnicas basadas en la reaccin en cadena de la polimerasa para
la distincin de estos casetes. Estas tcnicas basadas en diferencias estructurales, permiten
diferenciar los tipos principales (ej. Zhang et al., 2005; Milheirio et al., 2007a) o ciertos
subtipos (ej. deteccin de subtipos del SCCmec IV en Milheirio et al., 2007b), pero ninguna
incluye todas las variantes posibles, por lo que a veces se deben aplicar varias metodologas
para la determinacin de los SCCmec de una poblacin MRSA. En la pgina web
http://www.staphylococcus.net, se muestra un compendio de las metodologas basadas en
PCR para una clasificacin exhaustiva de los SCCmec.
Tipificacin del sistema agr
El sistema regulador codificado por el opern agr modula la expresin de genes de
virulencia en S. aureus (apartado 1.3.5.). Existen cuatro variantes de este sistema (agrI,
agrII, agrIII y agrIV) mutuamente excluyentes, ya que cada uno inhibe la actividad
regulatoria de los otros. Se ha sugerido que esta interferencia en la expresin de genes de
virulencia entre grupos agr sirve como mecanismo de aislamiento de poblaciones y
subdivisin de especies (Novick et al., 2003; Robinson et al., 2006). De hecho, existe una
gran correlacin entre tipo agr y linaje, por lo que se ha propuesto que en la evolucin de S.
aureus primero hubo una diferenciacin en bases a grupos agr seguida de la diversificacin
de linajes (Novick et al., 2003; Wright et al., 2005). Sin embargo, se han descrito excepciones
de linajes con aislamientos pertenecientes a distintos grupos agr (Robinson et al., 2006;
Wright et al., 2005). De hecho, se ha demostrado que existen fenmenos de recombinacin de
tipos agr entre linajes (Robinson et al., 2006). Por lo que se ha sugerido que, ya que este
sistema de regulacin acta sobre la expresin de varios genes de virulencia, la
recombinacin puede proporcionar nuevos y ventajosos patrones de expresin de los mismos
beneficiando a la bacteria. A pesar de este fenmeno, el grupo agr suele ser una caracterstica
relativamente estable de cada CC, por lo que se utiliza junto con otras tcnicas para la
determinacin y caracterizacin de linajes.
1. Introduccin
36
1. Introduccin
Nombre clon
Tipo
SARM
1
5
USA400
Alemania-Sur
Nueva York/Japn (USA100)
Peditrico (USA800)
UK-EMRSA-3
Arcaico
Brasileo/Hngaro
Ibrico
Irlandes-1
UK EMRSA-2/-6 (USA500)
USA300
UK EMRSA-15
Sudoeste Pacifico (USA1100)
UK EMRSA-16 (USA200)
Berln (USA600)
USA1000
Europeo
CA
HA
HA
HA
HA
HA
HA
HA
HA
HA
CA
HA
CA
HA
HA
CA
CA
22
30
36
45
59
80
ST
SCCmec
Tipo spa
ms
frecuente
Distribucin geogrfica
1
228
5
5
5
250
239
247
8
8
8
22
30
36
45
59
80
IV
I
II
IV
I
I
III
I
II
IV
IV
IV
IV
II
IV
IV VII
IV
t127
t001
t001, t002
t001, t002
t001, t002
t008
t037
t008, t051
t008
t008
t008
t032
t012
t018
t004
t216
t044
Af, frica; As, Asia; CA, de adquisicin comunitaria; CC, complejo clonal (linaje); Eu, Europa; HA,
nosocomial; NA, Norte-Amrica; Oc, Oceana; SA, Sud-Amrica. Basado en Deurenberg y Stobberingh
(2009).
37
1. Introduccin
38
2.Objetivos
2. Objetivos
2. Objetivos
El trabajo de esta Tesis Doctoral se enmarca en la lnea de investigacin
Epidemiologa molecular de Staphylococcus aureus que desde hace diez aos se desarrolla
en el rea de Microbiologa de la Universidad de Oviedo. El trabajo se centr en la
caracterizacin epidemiolgica y de factores de resistencia y virulencia en varias poblaciones
de S. aureus de distinto origen. S. aureus es un organismo comensal, cuyo hbitat primario en
el hombre y animales es la mucosa nasofarngea, formando parte de la microbiota normal
(estado de portador). Sin embargo, tambin es un importante patgeno responsable de un
amplio espectro de infecciones (localizadas o sistmicas) de origen comunitario y
nosocomial, as como enfermedades mediadas por toxinas. La poblacin de S. aureus es
altamente clonal, siendo determinados linajes los responsables de la mayora de las
infecciones tanto a nivel hospitalario como en la comunidad.
En este trabajo se determin la estructura poblacional de colecciones de S. aureus
procedentes no slo de hospitales y la comunidad, sino tambin de animales y alimentos. Esto
permiti identificar los linajes y clones circulantes en el Principado de Asturias, as como las
variaciones existentes en un determinado clon (ST398) prevalente en ganadera porcina en
Europa. Adems, se ha estudiado la resistencia y establecido sus bases genticas, y se
identificaron potenciales factores de virulencia en los distintos aislamientos.
De acuerdo con lo expuesto, los objetivos generales de esta tesis doctoral son:
Objetivo 1. Identificar los linajes y clones de S. aureus de distinto origen (hospitales,
portadores sanos y relacionados con alimentos) que han estado circulando en el Principado de
Asturias, y sub-tipificar el linaje ST398 de origen animal (Artculos 1, 2, 4, 7, 10 y 11).
Objetivo 2. Identificar determinantes de virulencia en los linajes encontrados en el
Principado de Asturias y en el clon ST398, y establecer su relacin con elementos genticos
mviles (Artculos 1, 3, 5, 7, 8 y 12).
Objetivo 3. Determinar los fenotipos y genotipos de resistencia (prestando especial atencin
al SCCmec) en los linajes encontrados en el Principado de Asturias y en el clon ST398
(Artculos 1, 2, 6, 7, 11 y 12).
Objetivo 4. Caracterizar mediante tcnicas moleculares el plsmido hibrido de virulenciaresistencia pUO-Sa-SED3 (Artculo 8).
Teniendo en cuenta que los distintos objetivos se abordaron en diferentes poblaciones
de S. aureus, la seccin de resultados se dividi en captulos segn el origen de los
aislamientos:
39
2. Objetivos
Capitulo 1: Aislamientos clnicos de S. aureus del Principado de Asturias procedentes del
Hospital Universitario de Asturias y del Hospital Monte Naranco (Artculos 1, 2 y3).
Capitulo 2: Aislamientos de S. aureus del Principado de Asturias procedentes de portadores
sanos sin relacin con el medio hospitalario: estudiantes de biologa de la Universidad de
Oviedo (Artculos 4, 5 y6).
Capitulo 3: Aislamientos de S. aureus del Principado de Asturias procedentes de alimentos,
manipuladores alimentarios y brotes de intoxicacin alimentaria (Artculo 7). En este
captulo tambin se incluye la caracterizacin del plsmido hibrido de resistencia y virulencia
pUO-Sa-SED3 detectado en un aislamiento de alimentos (Artculo 8) y una revisin sobre
enterotoxinas e intoxicaciones alimentarias producidas por S. aureus (Artculo 9).
Capitulo 4: Aislamientos del clon ST398 de S. aureus de Alemania, procedentes
fundamentalmente de animales sanos o enfermos, pero tambin de alimentos y del ambiente
(Artculos 10, 11 y12). Este captulo, se llev a cabo en el marco de una estancia realizada
en el Federal Institut for Risk Assessment (BfR) de Berln, Alemania.
40
3.Resultados
3.1.Capitulo 1
Staphylococcus aureus procedentes de hospitales
del Principado de Asturias
3. Resultados
41
3. Resultados
42
3. Resultados
3.1.1. Artculo 1
43
3. Resultados
44
3. Resultados
45
3. Resultados
46
3. Resultados
47
3. Resultados
48
3. Resultados
49
3. Resultados
50
3. Resultados
51
3. Resultados
52
3. Resultados
3.1.2. Artculo 2
53
3. Resultados
54
3. Resultados
55
3. Resultados
56
3. Resultados
57
3. Resultados
58
3. Resultados
59
3. Resultados
60
3. Resultados
3.1.3. Artculo 3
61
3. Resultados
Table 1. Distribution of exotoxin genes, and SaPIs and Sa markers, among MRSA and MSSA isolates recovered
from blood and wound infections affecting geriatric patients (1996-2006).
Gene
Total
isolates
n (%)
Total Bisolates
n (%)
Total Wisolates
n (%)
P valuea
MRSA
isolates
n (%)
MSSA
isolates
n (%)
P valuea
hla
hlb
hld
hlg
hlg-v
eta
etb
etd
lukED
lukPV
lukM
tst
sea
seb
sec
sed
see
seg
seh
sei
selj
selk
sell
selm
seln
selo
selp
selq
ser
selu
ses
set
ear
splF
bsaB
62 (100)
40 (64.5)
62 (100)
22 (35.5)
53 (85.5)
16 (25.8)
3 (4.8)
18 (29)
61 (98.4)
17 (27.4)
18 (29)
40 (64.5)
15 (29.2)
42 (67.7)
11 (17.7)
4 (6.5)
62 (100)
2 (3.2)
62 (100)
11 (17.7)
7 (11.3)
6 (9.7)
62 (100)
62 (100)
62 (100)
6 (9.7)
7 (11.3)
10 (16.1)
18 (29)
2 (3.2)
2 (3.2)
41 (66.1)
45 (56.5)
23 (37.1)
31 (100)
17 (54.8)
31 (100)
20 (64.5)
22 (71)
11 (35.5)
3 (9.7)
10 (32.3)
31 (100)
12 (38.7)
18 (58)
14 (45)
2 (6.5)
27 (87)
5 (16)
31 (100)
2 (6.5)
31 (100)
6 (19.4)
1 (3.2)
5 (16)
31 (100)
31 (100)
31 (100)
3 (9.7)
1 (3.2)
5 (16)
17 (54.8)
1 (3.2)
1 (3.2)
11 (35.5)
18 (58)
5 (16)
31 (100)
23 (74.2)
31 (100)
3 (9.7)
31 (100)
5 (16)
8 (25.8)
30 (96.8)
5 (16)
26 (83.9)
13 (41.9)
15 (48.4)
5 (16)
4 (12.9)
31 (100)
31 (100)
5 (16)
6 (19.4)
1 (3.2)
31 (100)
31 (100)
31 (100)
3 (9.7)
6 (19.4)
5 (16)
1 (3.2)
30 (96.8)
27 (87.1)
18 (58.1)
na
0.11
na
<0.01
<0.01
0.08
0.076
0.58
0.31
0.046
na
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
1.0
0.038
na
0.15
na
0.74
0.044
0.08
na
na
na
na
0.044
1.0
<0.01
0.31
0.31
<0.01
0.01
<0.01
21 (100)
16 (76.2)
21 (100)
1 (4.8)
20 (64.5)
2 (9.5)
10 (47.6)
21 (100)
5 (23.8)
2 (9.5)
17 (81)
7 (33.3)
12 (57.1)
4 (19)
2 (9.5)
21 (100)
21 (100)
4 (19)
5 (23.8)
21 (100)
21 (100)
21 (100)
4 (19)
5 (23.8)
3 (14.3)
4 (19)
16 (76.2)
17 (81)
11 (52.4)
41 (100)
24 (58.5)
41 (100)
22 (53.7)
33 (80.5)
14 (34.1)
3 (7.3)
8 (19.5)
40 (97.6)
12 (29.3)
16 (39)
23 (56.1)
8 (19.5)
30 (73.2)
6 (14.6)
2 (4.9)
41 (100)
2 (4.9)
41 (100)
7 (17.1)
2 (4.9)
6 (14.6)
41 (100)
41 (100)
41 (100)
2 (4.9)
2 (4.9)
7 (17.1)
14 (34.1)
1 (2.5)
1 (2.5)
21 (51.2)
28 (68.3)
12 (29.3)
na
0.92
na
<0.01
0.12
0.04
0.20
0.02
0.47
0.65
na
0.02
0.053
0.23
0.20
0.65
0.48
na
0.30
na
0.85
0.03
0.07
na
na
na
0.07
0.03
0.78
0.22
0.47
0.47
0.06
0.29
0.075
Statistically significant results are highlighted in bold. na, P value not applicable; -, negative for the indicated gene or marker.
62
3. Resultados
Table 2. Exotoxin gene profiles of S. aureus recovered from blood.
Isolate/Year
Virulence
Exotoxin genes
(CC)a
profile
C16/96 (CC5)
V1
hla/b/d/gv-lukED/PV-etd-sea/c/lp-egc2
C17/97 (CC45) V2
hla/d/g-lukED-sea/b/c/ll-egc1
C18/97 (CC15) V3
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sec-egc2
C19/98 (CC45) V4
hla/d/gv-lukED/PV-sec-egc1
C20/98 (CC8)
V5
hla/d/g/gv-lukED/PV-sea-egc1
C21/98 (CC45) V6
hla/d/g-lukED-eta-tst-sec/ll-egc1
C22/98 (CC45) V7
hla/d/g-lukED-etd-tst-sea/c/ll-egc2
C24/99 (CC45) V6
hla/d/g-lukED-eta-tst-sec/ll-egc1
C25/99 (CC15) V8
hla/d/g/gv-lukED-sec-egc1
C26/99 (CC1)
V9
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta/d-tst-sea/c/d/h/lj/lk/lq/r-egc2
C27/00 (CC5)
V10
hla/b/d/gv-lukED/PV-etd-tst-sea/c/lj/r/s/t-egc2
C28/00 (CC5)
V11
hla/b/d/g-lukED-etd-tst-sec/h-egc2
C29/00 (CC30) V12
hla/d/g-lukED-etd-sea-egc2
C30/01 (CC121) V13
hla/d/gv-lukED/PV-eta-tst-sec-egc2
C31/01 (CC121) V14
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sec-egc2
C32/01 (CC30) V15
hla/d/g-lukED-tst-sea/c-egc2
C33/01 (CC5)
V16
hla/d/gv-lukED-eta-tst-sea-egc1
C34/03 (CC45) V17
hla/d/g-lukED-sec-egc2
C35/01 (CC5)
V18
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sea/c-egc1
C36/02 (CC5)
V19
hla/b/d/g/gv-lukED-sec/d/lj/r-egc2
C38/02 (CC88) V20
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-tst-sec-egc2
C39/02 (CC88) V21
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc1
C40/02 (CC88) V22
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc1
C42/03 (CC45) V23
hla/d/g/gv-lukED-sec/ll-egc1
C43/03 (CC45) V24
hla/b/d/g-lukED-sec-egc1
C44/03 (CC8)
V25
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta-sea/c/d/lj/r-egc2
C47/03 (CC5)
V26
hla/b/d/gv-lukED/PV-etd-tst-sec-egc2
C50/04 (CC5)
V27
hla/d/gv-lukED-etd-tst-sea/c/d/lj/lp-egc2
C51/04 (CC5)
V28
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta-seb/c/d/lj/r-egc1
C53/05 (CC5)
V29
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-tst-sec/lp-egc1
C57/06 (CC25) V30
hla/b/d/gv-lukED-etd-egc2
a
Methicillin-resistant isolates are shown in bold. The CC (clonal complex) is shown in parenthesis
2011a).
Sa/SaPI markers
splF-ear
splF
splF
splF-bsaB
ear
ear
ear
splF
splF-bsaB
bsaB
splF
splF
splF
splF
splF
splF
splF-ear
splF
ear
splF-ear
splF-ear
ear
bsaB
splF
ear
splF
ear
bsaB
for of each isolate (Argudn et al.,
63
3. Resultados
Table 3. Exotoxin gene profiles of S. aureus recovered from wound.
Isolate/Year
Virulence
(CC)a
profile
C258/96 (CC8) V31
C259/96 (CC45) V32
C260/96 (CC5) V33
C261/96 (CC8) V34
C262/96 (CC8) V35
C263/96 (CC8) V36
C264/96 (CC59) V37
C265/96 (CC5) V38
C266/97 (CC8) V39
C267/97 (CC5) V40
C268/97 (CC5) V41
C269/97 (CC5) V42
C270/97 (CC8) V43
C271/98 (CC8) V43
C272/99 (CC15) V8
C273/99 (CC45) V44
C274/00 (CC8) V37
C275/00 (CC5) V45
C276/00 (CC5) V36
C277/01 (CC8) V46
C278/01 (CC5) V47
C279/02 (CC5) V48
C280/02 (CC15) V49
C281/02 (CC15) V50
C282/03 (CC8) V51
C283/03 (CC15) V38
C284/04 (CC15) V52
C285/06 (CC25) V30
C286/06 (CC5) V53
C287/06 (CC5) V54
C289/03 (CC72) V55
a
Methicillin-resistant isolates are shown in bold.
2011a).
Exotoxin genes
hla/d/gv-lukED-etd-sea/b-egc1
ear-splF-bsaB
hla/d/g/gv-lukED-sea/b/c/ll-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED-sea/c-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/c-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/lk/lq-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/lk/lq-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/lk/lq-egc1
ear-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/c-egc1
ear-splF-bsaB
hla/d/gv-lukED-sea/c-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/g/gv-lukED-sea-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED-eta-sea/b/c-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/e-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea-egc1
ear-splF
hla/d/g/gv-lukED-sec-egc1
splF
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/b/c/lk/lq-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/lk/lq-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED/PV-sea-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/lk/lq-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED/PV-sea/c-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/b/d/e/lj/lp/r-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta/d-seb/d/lj/r-egc1
ear-bsaB
hla/d/gv-lukED/PV-sea/b/c/e-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/b-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta-sea/c/d/lj/r-egc1
ear-splF-bsaB
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/c-egc1
ear-splF
hla/d/gv-lukED-eta-sea/b/c-egc1
ear-splF
hla/b/d/gv-lukED-etd-egc2
bsaB
hla/b/d/gv-lukED-eta/d-sea/c/d/e/lj/lp/r-egc1 splF
hla/d/gv-lukED-sec/d/lj/lp/r-egc1
hla/d/gv-egc1
splF
The CC (clonal complex) is shown in parenthesis for of each isolate (Argudn et al.,
64
SaPI/Sa markers
3. Resultados
Table 4. Distribution of suspected mobile genetic elements among clonal complexes.
Suspected MGEa
Sa I (splF-lukED-egc1)
Sa II (splF-bsaB-lukED)+egc1
Sa II (splF-bsaB-lukED)+egc2
Sa III (splF-egc2)+lukED
SaPI2 (tst)
SaPI3 (ear-seb-selq-selk)d
SaPI5 (ear-selq-selk)d
SaPIm1/SaPIn1 (sell-sec-ear-tst)e
SaPImw2 (ear-sell-sec)
etdSaPI (etd)
Sa1 (eta)
Sa2 (lukPV)
Sa3 (sea)
Sa3 (sea-selk-selq)
Sa3 (selp)
Sa (see)
CCsb
Bloodstream isolates (N)
CC1
CC5 (3)
-
CC5 (3)
CC5 (3), CC15
MGEmw2/mssa476 (seh)
CC1, CC5
Genomic islands according to Baba et al. (2008); pathogenicity islands according to Novick and Subedi (2007) and Yamaguchi et al.
(2002); prophage types according to Couch et al. (1988) and Goerke et al. (2009); plasmids according to Altboum et al. (1985), Bayles
and Iandolo (1989); Fueyo et al. (2005b), Ono et al. (2008) and Yamaguchi et al. (2001); MGEmw2/mssa476 element according to
Noto and Archer (2006).
b
Clonal complexes as in Argudn et al. (2011a).
c
Percentages calculated with respect to the total number of isolates within each CC: CC1 (1), CC5 (22), CC8 (12), CC15 (7), CC25 (2),
CC30 (2), CC45 (9), CC59 (1), CC72 (1), CC88 (3), CC121 (2).
d
These isolates also carried sea and could be positive for Sa3 (sea) or Sa3 (sea-selk-selq).
e
These isolates could carry SaPImw2 (ear-sec-sell).
MGE, mobile genetic element; N, number of isolates when more than one.
65
3. Resultados
Some of the inferred MGEs, including Sa type I
(lukED-egc1), Sa type II (lukED), Sa type III (egc2),
or variants therein, SaPI2 (tst), etdSaPI, Sa1 (eta),
Sa2 (lukPV), and Sa3 (sea), were widely distributed,
being present in five to seven CCs. Other SaPIs (like
SaPI3, SaPI5, and the sec-carrying SaPIs), prophages
(sea-selk-selq- and selp-carrying Sa3, and the seecarrying Sa), the seh-carrying MGE, as well as
plasmids of the pIB458 and pF5 families, were restricted
to one to three CCs. The bases for the different
distribution of MGEs, and toxin genes therein, between
S. aureus lineages remains unknown, but the high
number and variety of exotoxin genes found in the
nosocomial isolates characterized in this study, together
with the expected differences in gene expression
(Robinson et al., 2005; Varshney et al., 2009), could play
a role in the adaptation of this highly versatile pathogen.
Moreover, successful combinations of virulence genes
can be among the factors leading to the increase in
frequency of certain strains, and their epidemic spread
within and outside the nosocomial setting.
ACKNOWLEDGMENTS
This work was supported by the Spanish Ministry of
Science and Innovation (project FIS-PI080656). M. A.
Argudn was supported by grant FPU AP-2004-3641
from the Ministry of Science and Innovation, Spain, cofunded by the European Social Fund.
REFERENCES
Altboum Z, Hertman I, Sarid S. Penicillinase plasmid-linked genetic
determinants for enterotoxins B and C1 production in Staphylococcus
aureus. Infect Immun 1985, 47: 514-521.
Argudn MA, Mendoza MC, Mndez FJ, Martn MC, Guerra B,
Rodicio MR. Clonal Complexes and diversity of exotoxin gene profiles
in methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus
isolates from patients in a Spanish hospital. J Clin Microbiol 2009, 47:
2097-2105.
Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Food poisoning and
Staphylococcus aureus enterotoxins. Toxins 2010, 2: 1751-1773.
Argudn MA, Mendoza MC, Vzquez F, Guerra B, Rodicio MR.
Molecular typing of Staphylococcus aureus bloodstream isolates from
geriatric patients attended at a long-term care Spanish hospital. J Med
Microbiol 2011a, 60:172-179.
Argudn MA, Tenhagen BA, Fetsch A, Sachsenrder J, Ksbohrer
A, Schroeter A, Hammerl JA, Hertwig S, Helmuth R, Brunig J,
Mendoza MC, Appel B, Rodicio MR, Guerra B. Virulence and
resistance determinants in German Staphylococcus aureus ST398 isolates
from non-human origin. Appl Environ Microbiol 2011b, 77:3052-3060.
Baba T, Takeuchi F, Kuroda M, Yuzawa H, Aoki K, Oguchi A,
Nagai Y, Iwama N, Asano K, Naimi T, Kuroda H, Cui L, Yamamoto
K, Hiramatsu K. Genome and virulence determinants of high virulence
community-acquired MRSA Lancet 2002, 359:1819-1827.
Baba T, Bae T, Schneewind O, Takeuchi F, Hiramatsu K. Genome
sequence of Staphylococcus aureus strain Newman and comparative
analysis of staphylococcal genomes: polymorphism and evolution of two
major pathogenicity islands. J Bacteriol 2008, 190: 300-310.
Baba-Moussa L, Anani L, Scheftel JM, Couturier M, Riegel P,
Hakou N, Hounsou F, Monteil H, Sanni A, Prvost G. Virulence
factors produced by strains of Staphylococcus aureus isolated from
urinary tract infections. J Hosp Infect 2008, 68: 32-38.
Bachert C, Zhang N, Patou J, van Zele T, Gevaert P. Role of
staphylococcal superantigens in upper airway disease. Curr Opin Allergy
Clin Immunol 2008, 8: 34-38.
Bayles KW, Iandolo JJ. Genetic and molecular analyses of the gene
encoding staphylococcal enterotoxin D. J Bacteriol 1989, 171: 4799
4806.
Becker K, Friedrich AW, Lubritz G,, Weilert M, Peters G, Von
Eiff C. Prevalence of genes encoding pyrogenic toxin superantigens and
exfoliative toxins among strains of Staphylococcus aureus isolated from
blood and nasal specimens. J Clin Microbiol 2003, 41: 1434-1439.
Campbell SJ, Deshmukh HS, Nelson CL, Bae IG, Stryjewski ME,
Federspiel JJ, Tonthat GT, Rude TH, Barriere SL, Corey R, Fowler
VG Jr. Genotypic characteristics of Staphylococcus aureus isolates from
a multinational trial of complicated skin and skin structure infections. J
Clin Microbiol 2008, 46: 678-684.
66
Couch JL, Soltis MT, Betley MJ. Cloning and nucleotide sequence of
the type E staphylococcal enterotoxin gene. J Bacteriol 1988, 170: 29542960.
Dinges MM, Orwin PM, Schlievert PM. Exotoxins of
Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Rev 2000, 13: 16-34.
Ferry T, Perpoint T, Vandenesch F, Etienne J. Virulence
determinants in Staphylococcus aureus and their involvement in clinical
syndromes. Curr Infect Dis Rep 2005, 7: 420-428.
Fueyo JM, Martn MC, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza MC.
Enterotoxin production and DNA fingerprinting in Staphylococcus aureus
isolated from human and food samples. Relations between genetic types
and enterotoxins. Int J Food Microbiol 2001, 67: 139-145.
Fueyo JM, Mendoza MC, Alvarez MA, Martin MC. Relationships
between toxin gene content and genetic background in nasal carried
isolates of Staphylococcus aureus from Asturias, Spain. FEMS Microbiol
Lett 2005a., 243: 447-454.
Fueyo JM, Mendoza MC, Martn MC. Enterotoxins and toxic shock
syndrome toxin in Staphylococcus aureus recovered from human nasal
carriers and manually handled foods: epidemiological and genetic
findings. Microbes Infect 2005b, 7: 187-194.
Fueyo JM, Mendoza MC, Rodicio MR, Muiz J, Alvarez MA,
Martn MC. Cytotoxin and pyrogenic toxin superantigen gene profiles of
Staphylococcus aureus associated with subclinical mastitis in dairy cows
and relationships with macrorestriction genomic profiles. J Clin
Microbiol 2005c, 43: 1278-1284.
Gill SR, Fouts DE, Archer GL, Mongodin EF, Deboy RT, Ravel J,
Paulsen IT, Kolonay JF, Brinkac L, Beanan M, Dodson RJ,
Daugherty SC, Madupu R, Angiuoli SV, Durkin AS, Haft DH,
Vamathevan J, Khouri H, Utterback T, Lee C, Dimitrov G, Jiang L,
Qin H, Weidman J, Tran K, Kang K, Hance IR, Nelson KE, Fraser
CM. Insights on evolution of virulence and resistance from the complete
genome analysis of an early methicillin-resistant Staphylococcus aureus
strain and a biofilm-producing methicillin-resistant Staphylococcus
epidermidis strain. J Bacteriol 2005, 187:2426-2438.
Ghebremedhin B, Olugbosi MO, Raji AM, Layer F, Bakare RA,
Knig B, Knig W. Emergence of a community-associated methicillinresistant Staphylococcus aureus strain with a unique resistance profile in
Southwest Nigeria. J Clin Microbiol 2009, 47: 2975-2980.
Goerke C, Pantucek R, Holtfreter S, Schulte B, Zink M, Grumann
D, Brker BM, Doskar J, Wolz C. Diversity of prophages in dominant
Staphylococcus aureus clonal lineages. J Bacteriol 2009, 191: 3462-3468.
Holtfreter S, Grumann D, Schmudde M, Nguyen HT, Eichler P,
Strommenger B, Kopron K, Kolata J, Giedrys-Kalemba S, Steinmetz
I, Witte W, Brker BM. Clonal distribution of superantigen genes in
clinical Staphylococcus aureus isolates. J Clin Microbiol 2007, 45: 26692680.
Hu DL, Omoe K, Inoue F, Kasai T, Yasujima M, Shinagawa K,
Nakane A. Comparative prevalence of superantigenic toxin genes in
meticillin-resistant and meticillin-susceptible Staphylococcus aureus
isolates. J Med Microbiol 2008, 57: 1106-1112.
Kaneco J, Kamio Y. Bacterial two-component and hetero-heptameric
pore-forming cytolytic toxins: structures, pore-forming mechanism, and
organization of the genes. Biosci Biotechnol Biochem 2004, 68: 9811003.
Larkin EA, Carman RJ, Krakauer T, Stiles BG. Staphylococcus
aureus: The thoxic presence of a pathogen extraordinaire. Current
Medicinal Chemistry 2009, 16: 4003-4019.
Lina G, Pimont Y, Godail-Gamot F, Bes M, Peter MO,
Gauduchon V, Vandenesch F, Etienne J. Involvement of PantonValentine leukocidin-producing Staphylococcus aureus in primary skin
infections and pneumonia. Clin Infect Dis 1999, 29: 1128-1132.
Nashev D, Toshkova K, Bizeva L, Akineden O, Lmmler C,
Zschck M. Distribution of enterotoxin genes among carriage- and
infection-associated isolates of Staphylococcus aureus. Lett Appl
Microbiol 2007, 45: 681-685.
Nishifuji K, Sugai M, Amagai M. Staphylococcal exfoliative toxins:
"Molecular scissors" of bacteria that attack the cutaneous defense barrier
in mammals. J Dermatol Sci 2008, 49: 21-31.
Noto MJ, Archer GL. A subset of Staphylococcus aureus strains
harboring staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) type IV is
deficient in CcrAB-mediated SCCmec excision. Antimicrob Agents
Chemother 2006, 50: 2782-2788.
Novick RP, Subedi A. The SaPIs: Mobile pathogenecity islands of
Staphylococcus. Chem Immunol Allergy 2007, 93: 42-57.
Monecke S, Ldicke C, Slickers P, Ehricht R. Molecular
epidemiology of Staphylococcus aureus in asymptomatic carriers. Eur J
Clin Microbiol Infect Dis 2009, 28:11591165.
Monk AB, Curtis S, Paul J, Enright MC. Genetic analysis of
Staphylococcus aureus from intravenous drug user lesions. J Med
Microbiol 2004, 53:223-227.
Ono HK, Omoe K, Imanishi K, Iwakabe Y, Hu DL, Kato H, Saito
N, Nakane A, Uchiyama T, Shinagawa K. Identification and
characterization of two novel staphylococcal enterotoxins, types S and T.
Infect Immun 2008, 76: 4999-5005
Ozaki K, Takano M, Higuchi W, Takano T, Yabe S, Nitahara Y,
Nishiyama A, Yamamoto T. Genotypes, intrafamilial transmission, and
3. Resultados
virulence potential of nasal methicillin-resistant Staphylococcus aureus
from children in the community. J Infect Chemother 2009, 15: 8491.
Peacock SJ, Moore CE, Justice A Kantzanou M, Story L, Mackie
K, O'Neill G, Day NP. Virulent combinations of adhesin and toxin genes
in natural populations of Staphylococcus aureus. Infect Immun 2002, 70:
4987-4996.
Peck KR, Baek JY, Song JH, Ko KS. Comparison of genotypes and
enterotoxin genes between Staphylococcus aureus isolates from blood
and nasal colonizers in a Korean hospital. J Korean Med Sci 2009, 24:
585-591.
Robinson DA, Monk AB, Cooper JE, Feil EJ, Enright MC.
Evolutionary genetics of the accessory gene regulator (agr) locus in
Staphylococcus aureus. J Bacteriol 2005, 187: 83128321.
Schlievert PM, Case LC, Strandberg KL, Abrams BB, Leung DY.
Superantigen profile of Staphylococcus aureus isolates from patients with
steroid-resistant atopic dermatitis. Clin Infect Dis 2008, 46: 1562-1567.
Struelens MJ, Bauernfeind A, Van Belkum A, Blanc D, Cookson B
D, Dijkshoorn L, El Solh N, Etienne J, Garaizar J, Gerner-Smidh P,
Legakis N, de Lencastre H, Nicolas MH, Pitt TL, Romling U,
Rosdahl V, Witte W. Consensus guidelines for appropriate use and
evaluation of microbial epidemiologic typing systems. Clin Microbiol
Infect 1996, 2: 211.
Tristan A, Bes M, Meugnier H, Gerard L, Bozdogan B, Courvalin
P, Reverdy ME, Enright MC, Vandenesch F, Etienne J. Global
Distribution of Panton-Valentine Leukocidinpositive Methicillinresistant Staphylococcus aureus. Emerg Infect Dis 2007, 13:594-600.
Varshney AK, Mediavilla JR, Robiou N, Guh A, Wang X,
Gialanella P, Levi MH, Kreiswirth BN, Fries BC. Diverse enterotoxin
gene profiles among clonal complexes of Staphylococcus aureus isolates
from the Bronx, New York. Appl Environ Microbiol 2009, 75:6839-6849.
Yamaguchi T, Hayashi T, Takami H, Ohnishi M, Murata T,
Nakayama K, Asakawa K, Ohara M, Komatsuzawa H, Sugai M.
Complete nucleotide sequence of a Staphylococcus aureus exfoliative
toxin B plasmid and identification of a novel ADP-ribosyltransferase,
EDIN-C. Infect Immun 2001, 69: 7760-7771.
Yamaguchi T, Nishifuji K, Sasaki M, Fudaba Y, Aepfelbacher M,
Takata T, Ohara M, Komatsuzawa H, Amagai M, Sugai M.
Identification of the Staphylococcus aureus etd pathogenicity island
which encodes a novel exfoliative toxin, ETD, and EDIN-B. Infect
Immun 2002, 70: 5835-5845.
67
3. Resultados
68
3.2.Capitulo 2
Staphylococcus aureus procedentes de portadores
sanos del Principado de Asturias
3. Resultados
69
3. Resultados
70
3. Resultados
3.2.1. Artculo 4
71
3. Resultados
isolates have been previously tested for antimicrobial
drug resistance and exotoxin gene content. None of them
was resistant to methicillin and only one was positive for
lukPV (Argudn et al., Article 5; Argudn et al., Article
6).
RESULTS
The 43 isolates recovered from healthy carriers
during 2004 to 2006 generated 33 SmaI-PFGE profiles
(Figure 1). Eight of them (S3, S11, S31, S33, S51, S52,
S55, S70) were identical, and five (S126, S127, S133,
S135, S148) closely related to profiles generated from
isolates of the 1997 to 2002 period (labelled as S3 to S75
by Fueyo et al., 2005a), while the remaining 20 were
clearly different. At all, 61 distinct PFGE profiles were
recognized among all analyzed isolates collected from
1997 to 2006, yielding a DI of 0.97. A dendrogram of
similarity grouped 54 of them within one out of eleven
clusters, and the remaining seven appeared as
independent branches (Figure 2). Using sequencingbased methods the 111 isolates were further distributed
into 49 spa types (DI of 0.97), two of them of new
description (t6489, t6490), and representative isolates
were assigned to 14 STs by MLST. The latter technique,
supported by spa typing, identified twelve CCs: CC1 (4
isolates; 3.6%), CC5 (21 isolates; 18.9%), CC8 (1
isolates; 0.9%), CC9 (4 isolates; 3.6%), CC15 (13
isolates; 11.7%), CC25 (9 isolates; 8.1%), CC30 (30
isolates; 27%), CC45 (18 isolates; 16.2%), CC59 (3
isolates; 2.7%), CC72 (2 isolates, 1.8%), CC97 (3
isolates; 2.7%) and CC121 (3 isolates; 2.7%). With few
exceptions, isolates belonging to eight out of the twelve
CCs grouped within a single SmaI-PFGE cluster.
However, most CC30 isolates were distributed into two
clusters, one including ST30 and the other ST34 (a single
locus variant of ST30 with arcC 8 instead of arcC 2).
However, a number of isolates from CC1 (ST3 and
ST188), CC9 (ST109) and CC97 (ST97) showed
relatively close SmaI-PFGE profiles, grouping together
in a single PFGE cluster. ST109 and ST97 share four
alleles with ST1, the founder of CC1. The independent
branches in the PFGE dendogram corresponded to CC1
(one), CC5 (two), CC30 (one) and CC45 (three) isolates
(Figure 2).
S150
S149
S148
S147
S146
S145
S144
S142
S143
S141
S139
S140
S138
S137
S136
S135
S133
S134
S132
S128
S129
S130
S131
S126
S127
S70
S55
S51
S52
S33
S31
S11
S3
S0
kb
582.0
398.0
242.5
194.0
145.5
97.0
48.5
Figure 1. SmaI-PFGE analysis of S. aureus isolates recovered between 2004 and 2006 from healthy nasal carriers. Lane , lambda
ladder PFG Marker (New England Biolabs); lanes S, SmaI profiles, continuing the nomenclature used by Fueyo et al. (2005a, 2005b
and 2005c). S0, SmaI profile of strain NCTC 8325 used as control.
72
3. Resultados
CC121
CC30
CC30
CC59
CC15
CC25
CC5
CC45
CC8
CC72
CC1/9/97
J
0,28
0,4
0,52
0,64
0,76
0,88
SmaI-PFGE (N)
S58
S57
S28
S143
S142
S136
S25
S13
S127 (3)
S5
S7
S11 (3)
S9
S4
S126 (2)
S3 (11)
S138
S75
S134
S27
S26
S146
S139
S62 (2)
S70 (6)
S73 (2)
S71 (2)
S65
S72
S148
S63
S23
S131 (2)
S56
S55 (4)
S149
S129
S128
S130
S52 (4)
S53
S51 (6)
S54
S42 (3)
S140
S132
S33 (2)
S32
S31 (11)
S18
S0
S144
S145
S141
S137
S74 (2)
S60
S133 (2)
S150
S147
S15
S135
spa-type (N)
t159
t159
t375
t6490
t166
t166
t012
t021
t012, t6713, t7785
t012
t122
t018 (3)
t942
t012
t1515 (2)
t012 (2), t017 (2), t021, t253 (2), t275 (2), t7785
t026
t002
t216
t3952
t216
t1618
t002
t018, t275
t084 (3), t085, t346, t7756
t346, t2949
t2949, t7248
t2949
t346
t346
t3201
t6489
t078 (2)
t1054
t167 (2), t287 (2)
t078
t548
t548
t306
t002, t1340
t242
t002 (5), t071
t002
t002 (3)
t179
t050
t015, t026
t015
t015 (4), t040 (3), t798, t1618 (3)
t008
t211
t026
t148
t148
t209
t267, t1877
t267
t209 (2)
t209
t177
t177
t189
MLST (N)
ST121
ST34
ST34
ST30
ST30
ST59
ST15
ST1
ST25
ST25
ST5 (2)
ST45
ST8
ST8
ST72
ST97
ST3
agr (N)
IV
IV
III
I
III
III
III
I
III (3)
III
III
III (3)
III
III
III (2)
III (11)
I
II
IV
IV
IV
I
II
III (2)
II (6)
II (2)
II (2)
II
II
II
II
IV
I, IV
IV
IV (4)
I
II
II
II
II (4)
II
II (6)
II
II (3)
II
I
I (2)
I
I (10), IV
I
IV
I
I
I
II
I, II
I
II (2)
II
III
III
I
Figure 2. Dendrogram showing the relatedness between SmaI-PFGE profiles, spa types, multi locus sequence types (ST), agr types
and the year(s) of isolation (between 1997 and 2006) of S. aureus recovered from nasal carriers. S0 corresponds to the SmaI profile of
strain NCTC 8325. 11 clusters associated with 12 clonal complexes were established at Jaccards coefficients of similarity (J) of 0.58
(CC1/CC9/CC97, CC30/ST30); 0.59 (CC30/ST34); 0.61 (CC25); 0.67 (CC59, CC121); 0.70 (CC5, CC45); 0.71 (CC72); 0.76 (CC8);
and 0.78 (CC15). Only seven profiles appeared as independent branches outside the corresponding cluster.
73
3. Resultados
Table 1. Clonal complexes in S. aureus from young healthy carriers in comparison with two nosocomial settings in
Asturias.
Nosocomial isolates
Clonal
Healthy carriers
complexa
(1997-2006; 111)bN (%)
HUCA (2005-2006; 81)bN (%)
MNH (1996-2006; 62)bN (%)
CC1
4 (3.6)
1 (1.6)
CC5
21 (18.9)
45 (55.6)
22 (35.5)
CC8
1 (0.9)
1 (1.2)
12 (19.4)
CC9
4 (3.6)
CC12
3 (3.7)
CC15
13 (11.7)
3 (3.7)
7 (11.3)
CC25
9 (8.1)
2 (2.5)
2 (3.2)
CC30
30 (27)
15 (18.5)
2 (3.2)
CC45
18 (16.2)
9 (11.1)
9 (14.5)
CC59
3 (2.7)
1 (1.2)
1 (1.6)
CC72
2 (1.8)
1 (1.2)
1 (1.6)
CC88
3 (4.8)
CC97
3 (2.7)
CC121
3 (2.7)
1 (1.2)
2 (3.2)
a
Clonal complexes (CCs) are based on MLST and supported by other typing techniques (see test for details).
b
Period of isolation and total number of S. aureus from healthy carriers (this work), the "Hospital Universitario Central de Asturias"
(HUCA; Argudn et al., 2009), and the Monte Naranco Hospital (MNH; Argudn et al., 2011). Isolates from the HUCA that did not
grouped within SmaI-PFGE clusters in Argudn et al. (2009) were later analyzed by spa-typing or by spa-typing and MLST to
determined CCs (M. A. Agudn and M. R. Rodicio, unpublished results).
74
CC5
CC30
CC45
CC59 CC72
HUCA-S7
HC-S129
HUCA-S26
HC-S127
HUCA-S33
HC-S5
HUCA-S4
HC-S33
HUCA-S49
HC-S31
HUCA-S19
HC-S26
HUCA-S48
HC-S145
S0
kb
582.0
398.0
242.5
194.0
mecA
145.5
97.0
48.5
3. Resultados
among S. aureus from healthy carriers both in Asturias
and La Rioja (Lozano et al., 2011). Isolates within CC97
have been recovered from cattle, being responsible for
most cases of bovine mastitis, and they were recently
reported in pigs (Rabello et al., 2007; Gmez-Sanz et al.,
2010). In contrast, ST398/CC398 was not present in
young healthy carriers from Asturias. ST398 MRSA
isolates are widely associated with food-producing
animals, particularly pigs, in many European countries,
including Spain (Lozano et al., 2009; Gmez-Sanz et al.,
2010), and have also been detected in healthy carriers
(Lozano et al., 2011).
In summary, results of the present study revealed the
high diversity of MSSA isolates found in healthy carriers
from Asturias, and corroborated CC30, CC5 and CC45 as
the most successful colonizers. It was also shown that
apparently identical isolates, as well as MSSA and
MRSA counterparts, are circulating in the nosocomial
setting and the community, highlighting the role of nasal
colonization in the epidemiology of S. aureus.
ACKNOWLEDGMENTS
This work was supported by the Spanish Ministry of
Science and Innovation (project FIS-PI080656). M. A.
Argudn was the recipient of grant FPU AP-2004-3641
from the Ministry of Science and Innovation, Spain, cofunded by the European Social Fund.
REFERENCES
Argudn MA, Mendoza MC, Mndez FJ, Martn MC, Guerra B,
Rodicio MR. Clonal Complexes and diversity of exotoxin gene profiles
in methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus
isolates from patients in a Spanish hospital. J Clin Microbiol 2009, 47:
2097-2105.
Argudn MA, Mendoza MC, Vzquez F, Guerra B, Rodicio MR.
Molecular typing of Staphylococcus aureus bloodstream isolates from
geriatric patients attended at a long-term care Spanish hospital. J Med
Microbiol 2011, 60:172-179.
Argudn MA, Mendoza MC, Vzquez F, Rodicio MR. Exotoxin
gene backgrounds of bloodstream and wound Staphylococcus aureus
isolates from geriatric patients attending a long-term care Spanish
hospital, in preparation.
Argudn MA, Mendoza MC, Martn MC, Rodicio MR. Molecular
basis of antimicrobial drug resistance of Staphylococcus aureus isolates
recovered from university students in a Spanish region, in preparation.
Collery MM, Smyth DS, Twohig JM, Shore AC, Coleman DC,
Smyth CJ. Molecular typing of nasal carriage isolates of Staphylococcus
aureus from an Irish university student population based on toxin gene
PCR, agr locus types and multiple locus, variable number tandem repeat
analysis. J Med Microbiol 2008, 57: 348-358.
Cookson BD, Robinson DA, Monk AB, Murchan S, Deplano A, de
Ryck R, Struelens MJ, Scheel C, Fussing V, Salmenlinna S, VuopioVarkila J, Cuny C, Witte W, Tassios PT, Legakis NJ, van Leeuwen
W, van Belkum A, Vindel A, Garaizar J, Haeggman S, OlssonLiljequist B, Ransjo U, Muller-Premru M, Hryniewicz W, Rossney A,
O'Connell B, Short BD, Thomas J, O'Hanlon S, Enright MC.
Evaluation of molecular typing methods in characterizing a European
collection of epidemic methicillin-resistant Staphylococcus aureus
strains: the HARMONY collection. J Clin Microbiol 2007, 45: 18301837.
Deurenberg RH, Stobberingh EE. The molecular evolution of
hospital- and community-associated methicillin-resistant Staphylococcus
aureus. Curr Mol Med 2009, 9: 100-115.
Enright MC, Day NP, Davies CE, Peacock SJ, Spratt BG.
Multilocus sequence typing for characterization of methicillin-resistant
and methicillin-susceptible clones of Staphylococcus aureus. J Clin
Microbiol 2000, 38: 1008-1015.
Feil EJ, Cooper JE, Grundmann H, Robinson DA, Enright MC,
Berendt T, Peacock SJ, Smith JM, Murphy M, Spratt BG, Moore
CE, Day NP. How clonal is Staphylococcus aureus? J Bacteriol 2003,
185: 3307-3316.
Fueyo JM, Mendoza MC, Alvarez MA, Martn MC. Relationships
between toxin gene content and genetic background in nasal carried
isolates of Staphylococcus aureus from Asturias, Spain. FEMS Microbiol
Lett 2005a, 243: 447-454.
Fueyo JM, Mendoza MC, Martn MC. Enterotoxins and toxic shock
sndrome toxin in Staphylococcus aureus recovered from human nasal
carriers and manually handled foods: epidemiological and genetic
findings. Microb Infect 2005b, 7: 187-194.
Fueyo JM, Mendoza MC, Rodicio MR, Muiz J, Alvarez MA,
Martn MC. Cytotoxin and pyrogenic toxin superantigen gene profiles of
Staphylococcus aureus associated with subclinical mastitis in dairy cows
and relationships with macrorestriction genomic profiles. J Clin
Microbiol 2005c, 43: 1278-1284.
Gomes AR, Westh H, de Lencastre H. Origins and evolution of
methicillin-resistant Staphylococcus aureus clonal lineages. Antimicrob
Agents Chemother 2006, 50: 3237-3244.
Gmez-Sanz E, Torres C, Lozano C, Fernndez-Prez R, Aspiroz
C, Ruiz-Larrea F, Zarazaga M. Detection, molecular characterization,
and clonal diversity of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
CC398 and CC97 in Spanish slaughter pigs of different age groups.
Foodborne Pathog Dis 2010, 7: 1269-1277.
Hallin M, Denis O, Deplano A, De Mendonca R, De Ryck R,
Rottiers S, Struelens MJ. Genetic relatedness between methicillinsusceptible and methicillin-resistant Staphylococcus aureus: results of a
national survey. J Antimicrob Chemother 2007, 59: 465-472.
Holtfreter S, Grumann D, Schmudde M, Nguyen HT, Eichler P,
Strommenger B, Kopron K, Kolata J, Giedrys-Kalemba S, Steinmetz
I, Witte W, Brker BM. Clonal distribution of superantigen genes in
clinical Staphylococcus aureus isolates. J Clin Microbiol. 2007, 45: 26692680.
Kluytmans J, van Belkum A, Verbrugh H. Nasal carriage of
Staphylococcus aureus: epidemiology, underlying mechanisms, and
associated risks. Clin Microbiol Rev 1997, 10: 505520.
Kluytmans JA, Wertheim HF. Nasal carriage of Staphylococcus
aureus and prevention of nosocomial infections. Infection 2005, 33: 38.
Kck R, Becker K, Cookson B, van Gemert-Pijnen JE, Harbarth S,
Kluytmans J, Mielke M, Peters G, Skov RL, Struelens MJ, Tacconelli
E, Navarro Torn A, Witte W, Friedrich AW. Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus (MRSA): burden of disease and control challenges
in Europe. Euro Surveill. 2010, 15: 19688.
Kuehnert MJ, Kruszon-Moran D, Hill HA, McQuillan G,
McAllister SK, Fosheim, G, McDougal LK, Chaitram J, Jensen B,
Fridkin SK, Killgore G, Tenover, FC Prevalence of Staphylococcus
aureus nasal colonization in the United States, 2001-2002. J Infect Dis
2006, 193: 172179.
Lamers RP, Stinnett JW, Muthukrishnan G, Parkinson CL, Cole
AM. Evolutionary analyses of Staphylococcus aureus identify genetic
relationships between nasal carriage and clinical isolates. PLoS One
2011, 6: e16426.
Layer F, Ghebremedhin B, Knig W, Knig B. Heterogeneity of
methicillin-susceptible Staphylococcus aureus strains at a German
University Hospital implicates the circulating-strain pool as a potential
source of emerging methicillin-resistant S. aureus clones. J Clin
Microbiol 2006, 44: 2179-2185.
Lina G, Pimont Y, Godail-Gamot F, Bes M, Peter MO,
Gauduchon V, Vandenesch F, Etienne J. Involvement of PantonValentine leukocidin-producing Staphylococcus aureus in primary skin
infections and pneumonia. Clin Infect Dis 1999, 29: 1128-1132.
Lowy FD. Staphylococcus aureus infections. N Engl J Med 1998, 339:
520532.
Lozano C, Lpez M, Gmez-Sanz E, Ruiz-Larrea F, Torres C,
Zarazaga M. Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
ST398 in food samples of animal origin in Spain. J Antimicrob
Chemother 2009, 64: 1325-1326.
Lozano C, Gmez-Sanz E, Benito D, Aspiroz C, Zarazaga M,
Torres C. Staphylococcus aureus nasal carriage, virulence traits,
antibiotic resistance mechanisms, and genetic lineages in healthy humans
in Spain, with detection of CC398 and CC97 strains. Int J Med Microbiol
2011, doi:10.1016/j.ijmm.2011.02.004.
McClure JA, Conly JM, Lau V, Elsayed S, Louie T, Hutchins W,
Zhang K. Novel multiplex PCR assay for detection of the staphylococcal
virulence marker Panton-Valentine leukocidin genes and simultaneous
discrimination of methicillin-susceptible from -resistant staphylococci. J
Clin Microbiol 2006, 44, 11411144.
Melles DC, Tenover FC, Kuehnert MJ, Witsenboer H, Peeters JK,
Verbrugh HA, van Belkum A. Overlapping population structures of
nasal isolates of Staphylococcus aureus from healthy Dutch and
American individuals. J Clin Microbiol 2008, 46: 235241.
Moore PCL, Lindsay JA. Genetic variation among hospital isolates of
methicillin-sensitive Staphylococcus aureus: evidence for horizontal
transfer of virulence genes. J Clin Microbiol 2001, 39: 27602767.
Murchan S, Kaufmann ME, Deplano A, de Ryck R, Struelens M,
Zinn CE, Fussing V, Salmenlinna S, Vuopio-Varkila J, El Solh N,
Cuny C, Witte W, Tassios PT, Legakis N, van Leeuwen W, van
Belkum A, Vindel A, Laconcha I, Garaizar J, Haeggman S, OlssonLiljequist B, Ransjo U, Coombes G, Cookson B. Harmonization of
pulsed-field gel electrophoresis protocols for epidemiological typing of
strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus: a single approach
developed by consensus in 10 European laboratories and its application
75
3. Resultados
for tracing the spread of related strains. J Clin Microbiol 2003, 41: 15741585.
Nbel U, Roumagnac P, Feldkamp M, Song JH, Ko KS, Huang
YC, Coombs G, Ip M, Westh H, Skov R, Struelens MJ, Goering RV,
Strommenger B, Weller A, Witte W, Achtman M. Frequent emergence
and limited geographic dispersal of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus. Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105: 14130-14135.
Patel M. Community-associated meticillin-resistant Staphylococcus
aureus Infections. Epidemiology, Recognition and Management. Drugs
2009; 69: 693-716.
Rabello RF, Moreira BM, Lopes RM, Teixeira LM, Riley LW,
Castro AC. Multilocus sequence typing of Staphylococcus aureus
isolates recovered from cows with mastitis in Brazilian dairy herds. J Med
Microbiol 2007, 56: 1505-1511.
Ruimy R, Armand-Lefevre L, Barbier F, Rupp E, Cocojaru R,
Mesli Y, Maiga A, Benkalfat M, Benchouk S, Hassaine H, Dufourcq
JB, Nareth C, Sarthou JL, Andremont A, Feil EJ. Comparisons
between geographically diverse samples of carried Staphylococcus
aureus. J Bacteriol 2009, 191: 5577-5583.
Sakwinska O, Kuhn G, Balmelli C, Francioli P, Giddey M,
Perreten V, Riesen A, Zysset F, Blanc DS, Moreillon P. Genetic
diversity and ecological success of Staphylococcus aureus strains
colonizing humans. Appl Environ Microbiol 2009, 75: 175-183.
Shopsin B, Gomez M, Montgomery SO, Smith DH, Waddington
M, Dodge DE, Bost DA, Riehman M, Naidich S, Kreiswirth BN.
Evaluation of protein A gene polymorphic region DNA sequencing for
typing of Staphylococcus aureus strains. J Clin Microbiol 1999, 37:
35563563.
Struelens MJ, Bauernfeind A, Van Belkum A, Blanc D, Cookson B
D, Dijkshoorn L, El Solh N, Etienne J, Garaizar J, Gerner-Smidh P,
Legakis N, de Lencastre H, Nicolas MH, Pitt TL, Romling U,
Rosdahl V, Witte W. Consensus guidelines for appropriate use and
evaluation of microbial epidemiologic typing systems. Clin Microbiol
Infect 1996, 2: 211.
Tenover FC, McDougal LK, Goering RV, Killgore G, Projan SJ,
Patel JB, Dunman PM. Characterization of a strain of communityassociated methicillin-resistant Staphylococcus aureus widely
disseminated in the United States. J Clin Microbiol 2006, 44: 108-118.
Tristan A, Bes M, Meugnier H, Lina G, Bozdogan B, Courvalin P,
Reverdy ME, Enright MC, Vandenesch F, Etienne J. Global
distribution of Panton-Valentine leukocidin--positive methicillin-resistant
Staphylococcus aureus, 2006. Emerg Infect Dis. 2007, 13: 594-600.
van Belkum A, Melles DC, Nouwen J, van Leeuwen WB, van
Wamel W, Vos MC, Wertheim HF, Verbrugh HA. Co-evolutionary
aspects of human colonisation and infection by Staphylococcus aureus.
Infect Genet Evol 2009, 9: 32-47.
Wertheim HFL, Melles DC, Vos MC, van Leeuven W, van Belkum
A, Verbrugh HA, Nouwen JI. The role of nasal carriage in
Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis 2005, 5: 751762.
76
3. Resultados
3.2.2. Artculo 5
77
3. Resultados
Table 1. Virulence gene profiles of Staphylococcus aureus isolates recovered from healthy carriers.
Isolates /Year
Genotype
CCa
LMUO1/04
LMUO2/04
LMUO3/04
LMUO4/04
LMUO5/04
LMUO1/05
LMUO2/05
LMUO3/05
LMUO4/05
LMUO5/05
LMUO6/05
LMUO7/05
LMUO8/05
LMUO9/05
LMUO10/05
LMUO11/05
LMUO12/05
LMUO13/05
LMUO14/05
LMUO15/05
LMUO16/05
LMUO17/05
LMUO18/05
LMUO19/05
LMUO20/05
LMUO21/05
LMUO22/05
LMUO23/05
LMUO24/05
LMUO25/05
LMUO26/05
LMUO27/05
LMUO28/05
LMUO29/05
LMUO30/05
LMUO31/05
LMUO32/05
LMUO33/05
LMUO1/06
LMUO2/06
LMUO3/06
LMUO4/06
LMUO5/06
hla/d/g/gv-lukED-sea/c-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-sea-splF
hla/b/d/g-lukED-tst-sea/c/h-egc2-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/h-egc2-splF
hla/d/g-lukED-tst-sea/c-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-sea/d/h/lj/r-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/c/lk/ll/lq-egc1
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-sea-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sea/h-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b/d-sea/b/c-egc2-ear-splF-bsaB
hla/d/g/gv-lukED-eta/d-sea/c/ll-egc1
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/c/ll/lp-egc1
hla/d/gv-sea
hla/d/g/gv-lukED-eta/d-tst-sea/b/c/h-egc1
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/d-tst-sea/b-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-sea-egc1
hla/d/g-tst-sea-egc2
hla/b/d/g-lukED-eta/d-tst-sea/c/h/lp-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sea-egc2
hld/g-egc1-ear
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sed/lj/r-egc1-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/c-egc2-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-egc1-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/b/h
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/b/c/d/lj/lk/ll/lq/r-egc2-ear-bsaB
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-tst-sea/b/c/d/h/lj/lk/lq/r-egc2-ear
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/c/d/lj/r-egc2
hla/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/h-ear
hla/b/d/g/gv-tst-sea/b/d/lj/r-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-seb-egc1
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sea/b/c/ll-egc1-ear
hla/b/d/g-lukED-etd-tst-seh-egc2
hla/b/d/g-lukED-tst-sea-egc2-splF
hla/b/d/g-sea-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-sea/lp-egc2-splF
hla/d/g/gv-lukED/PV-etb/d-tst-sea/h/lp/-egc2
hla/b/d/gv-lukED-sea/c/lp-egc2-splF
hla/b/d/gv-lukED-tst-sea/c-egc2
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sed/lj/lk/lp/lq/r-egc1-ear-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sec/d/ll/lp/lj/r-egc1-ear-splF
hla/d/g-lukED-sec/d/lj/ll/r-egc1-ear
hla/b/d/g/gv-etb/d-seb/c/d/h/lj/r-egc1-splF-bsaB
hla/d/gv-lukED-etd-sed/lj/r-egc1-splF
CC15
CC1
CC30
CC30
CC30
CC9
CC9
CC9
CC9
CC25
CC5
CC5
CC15
CC45
CC30
CC5
CC30
CC5
CC30
CC45
CC5
CC30
CC5
CC30
CC59
CC30
CC30
CC15
CC30
CC25
CC72
CC30
CC30
CC45
CC5
CC45
CC72
CC45
CC5
CC25
CC45
CC1
CC25
78
3. Resultados
Table 2. Distribution of suspected mobile genetic elements: genomic islands, pathogenicity islands, prophages and
plasmids, among clonal complexes associated with S. aureus isolates from nasal healthy carriers.
Gene or gene combinations
CCs (N)b
lukED
egc1
egc2
lukED-egc1
lukED-egc2
lukED-splF
lukED-egc1-splF
lukED-egc2-bsaB
egc2-splF + lukED
lukED-bsaB-splF / egc2-splF
nd
nd
nd
nd
nd
nd
Sa I
nd
Sa III + nd
Sa II / Sa III
CC15, CC30
CC1, CC45
CC30 (2), CC45
CC5 (3), CC9, CC25, CC45 (2), CC72
CC5, CC9 (3), CC30 (6), CC45 (2)
CC1, CC15
CC5 (3), CC25 (2)
CC59
CC5,CC30 (4), CC72
CC25
etd
ear-tst-selk-selq
tst
ear-seb-selk-selq + sea
ear-selk-selq
ear-sec-sell
ear-sec-sell / ear-tst-sec-sell
etd SaPI
SaPI1
SaPI2
SaPI3 + Sa3
SaPI5
SaPImw2
SaPImw2/ SaPIn1 / SaPIm1
CC1, CC5 (4), CC25 (4), CC30 (3), CC45 (2), CC72
CC30, CC59
CC5, CC9 (2), CC15, CC30 (11), CC45 (3)
CC30, CC59
CC5
CC25, CC45, CC72
CC59
eta
lukPV
sea
Sa1
Sa2
Sa3
selp
sea-selk-selq
Sa3
Sa3
etb
seb
sed-selj-ser
pETB
pZA10
pIB458 family
seh
MGEmw2/mssa476
The nomenclature is based in Baba et al. (2008) for genomic islands (vSa and vSa), Novick and Subedi (2007) and Yamaguchi et
al. (2002) for pathogenicity islands (SaPIs), Goerke et al. (2009) for prophage types, Noto and Archer (2006) for the
MGEmw2/mssa476 element and Altboum et al, (1985), Yamaguchi et al. (2001); Ono et al. (2008) for plasmids.
b
Clonal complexes determined in Argudn et al., Article 4.
egc1, cluster with seg, sei selm, seln and selo genes; egc2, cluster with seg, sei selm, seln, selo and selu genes; N, number of isolates
when more than one; nd, not-determined.
DISCUSSION
In the present study 35 exotoxin genes were screened
in isolates collected from young healthy students without
relationship with the hospital setting during 2004 to 2006
in Asturias (a region located in the North of Spain). A
previous study was performed with nasal S. aureus
recovered between 1997 and 2002 in the same region
(Fueyo et al., 2005a). Interestingly, most exotoxin genes
were more frequent during the 2004-2006 period than in
the previous period: eta (20.9% vs. 0%), etb (14% vs.
0%), etd (34.9% vs. 0%), tst (46.5% vs. 22%), sea
(76.7% vs. 7%), seb (23.3% vs. 7%), sec (44.2% vs.
4.7%), sed-selj-ser (25.6% vs. 5.8%), selk-selq (9.3% vs.
3.5%), seh (27.9% vs. 7%), sell (16.3% vs. 2.3%), selp
(16.3% vs. 0%) and egc2 (53.5% vs. 23.3%). All
differences, except selk-selq, were statistically
significative (p-value < 0.05), underlying the capacity of
commensal S. aureus to acquire and act as a reservoir of
virulence determinants.
When isolates collected during 2006 in the central
univerisity hospital of Asturias (Argudn et al., 2009)
were compared with the healthy carrier isolates analyzed
in the present study, the hospital isolates had higher
percentages of etb (89% vs. 14%), sec (80.2% vs. 44.2%),
egc1 (71.6% vs. 32.6%), selp (24.7% vs. 16.3%) and eta
79
3. Resultados
(43.2% vs. 20.9%), and lower percentages of sea (55.6%
vs. 76.7%), egc2 (28.4% vs. 53.5%), etd (17.3% vs.
34.9%), seh (12.3% vs. 27.9%), sell (2.5% vs. 16.3%),
selq (3.7% vs. 9.3%), and selk (2.5% vs. 9.3%). The
differences were statistically significative (p-value <
0.05) for eta, etb, sec and egc1 in the first group, and for
etd, sea, seh, sell and egc2 in the second group. Similar
percentages were only found for seb (27.2% vs. 23.3%)
and sedseljser (24.7% vs. 25.6%).
Differences in exotoxin gene carriage between nasal
and invasive isolates have been reported in other studies
(Nashev et al., 2004; Nashev et al., 2007; Peacock et al.,
2002; Becker et al., 2003; Holtfreter et al., 2007;
Lawrynowicz-Paciorek et al. 2007). In general, the genes
for the egc locus are usually more common among nasal
isolates than invasive isolates, and it has been proposed
that the egc-encoded toxins could enhance the carriage
potential of S. aureus (van Belkum et al., 2006; Peacock
et al., 2002; Becker et al., 2003). In Asturias, however,
100% of the nosocomial isolates and 86.1% of the nasal
isolates carried egc1 or egc2, with the latter being
significantly more frequent in nasal isolates. Interestingly
all isolates, except one, carried sea together with egc2, a
combination that was reported in other nasal isolates
(Lawrynowicz-Paciorek et al. 2007).
Individual exotoxin genes or some groups of genes
could be carried by well known mobile genetic elements,
including genomic islands, pathogenicity islands,
prophages, and plasmids (Table 2). However, new
exotoxin gene combinations were also found, and these
could correspond to variants which can be originated
through deletions or recombination, as reported (Hu et
al., 2008; Collery et al., 2008; Collery et al., 2009). This
is particularly true in the case of Sa, the genomic
island where the egc1 and egc2 clusters have been
located (Baba et al., 2008). In the present work, only
27.9% of the analyzed isolates carried gene combinations
consistent with Sa type 1 (egc1) and Sa type 3
(egc2), while 88.3% of the isolates tested positive for
egc1/egc2 genes.
The distribution of suspected mobile genetic
elements (and exotoxin genes herein), among the clonal
complexes which include S. aureus from young healthy
carriers (Argudn et al., Article 4) is shown in Table 2.
The majority of the detected genes were previously
reported in the corresponding CC (Argudn et al., 2009;
Argudn et al., Article 3; Holtfreter et al., 2007;
Varshney et al., 2009; Monecke et al., 2009, Monk et al.,
2004, Schlebusch et al., 2009; Peck et al., 2009; Lozano
et al., 2011), but new associations were also found. For
instance, CC1 with seb and etb, CC25 with eta and etb,
and CC72 with lukED, etd and seb. It is of note that a
single isolate within CC45 carried the lukPV genes,
which encode the bi-component Panton-Valentine
leukocidin and are located in a prophage. This toxin has
been associated with severe skin and pulmonary
infections caused by community acquired MRSA (Patel
et al., 2009). Detection of lukPV in commensal S. aureus
is important, because of its possible transfer to CAMRSA (Deurenberg et al., 2010). The frequency of tst in
isolates from healthy students analyzed in the present
work (46.5%) was considerably higher than in healthy
individuals from other studies (20-30%; Mgevand et al.,
2010; Lozano et al., 2011). This gene, carried by
different SaPIs, has been mainly associated with CC30,
one of the most successful lineages in human
colonization, but here it was also found in CC5, CC9,
80
CC15, CC45 and CC59. The eta, etb and etd exfoliatin
genes, reported in SaPIs, prophages and plasmids (Table
2), were also frequent (20.9, 14 and 34.9%, respectively)
and widely distributed, appearing in five (eta and etb) or
six (etd) CCs. In contrast with our results, the prevalence
of exfoliatin genes in S. aureus from healthy carriers is
generally low (Becker et al., 2003; Lozano et al., 2011).
Since exfoliatins have been associated with scalded skin
syndrome and bulbous impetigo (Nishifuji et al., 2008),
their relatively high incidence in commensal S. aureus
from Asturias is worrisome. Other mobile genetic
elements, including the Sa3NM3u prophage carrying
sea, and the pIB458-like plasmids carrying sed-selj-ser
were also common and widely spread, appearing in nine
and seven CCs, respectively (Table 2).
In summary, nasal S. aureus from young healthy
carriers in Asturias were highly diverse with regard to
exotoxin gene content. In fact, each isolate showed a
distinct profile and thus, genotyping by this means has a
DI of 1. The number of exotoxin genes per isolate ranged
from 4 up to 23, and the presence of antibiotic resistance
determinants in these isolates has also been demonstrated
(Argudin et al., Article 6). Nasal colonization with strains
resistant to antimicrobials and carrying numerous
virulence genes can be considered as a risk for public
health, underlying the potential problems associated with
their dispersion among the healthy population.
ACKNOWLEDGMENTS
This work was supported by the Spanish Ministry of
Science and Innovation (project FIS-PI080656). M. A.
Argudn was the recipient of grant FPU AP-2004-3641
from the Ministry of Science and Innovation, Spain, cofunded by the European Social Fund.
REFERENCES
Altboum Z, Hertman I, Sarid S. Penicillinase plasmid-linked genetic
determinants for enterotoxins B and C1 production in Staphylococcus
aureus. Infect Immun. 1985, 47: 514-521.
Argudn MA, Mendoza MC, Mndez FJ, Martn MC, Guerra B,
Rodicio M R. Clonal complexes and diversity of exotoxin gene profiles
in methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus
isolates from patients in a spanish hospital. J. Clin. Microbiol 2009, 47:
20972105.
Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Food poisoning and
Staphylococcus aureus Enterotoxins. Toxins 2010, 2: 1751-1773.
Argudn MA, Tenhagen BA, Fetsch A, Sachsenrder J, Ksbohrer
A, Schroeter A, Hammerl JA, Hertwig S, Helmuth R, Brunig J,
Mendoza MC, Appel B, Rodicio MR, Guerra B. Virulence and
resistance determinants in German Staphylococcus aureus ST398 isolates
from non-human origin. Appl Environ Microbiol 2011b, 77: 3052-3060.
Argudn MA, Mendoza MC, Vzquez F, Rodicio MR. Exotoxin
gene backgrounds in bloodstream and wound Staphylococcus aureus
from geriatric patients attending a long-term care Spanish hospital, in
preparation.
Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Genomic diversity of
methicillin-susceptible Staphylococcus aureus strains from young healthy
carriers, in preparation.
Argudn MA, Mendoza MC, Martn MC, Rodicio MR. Molecular
basis of antimicrobial drug resistance of Staphylococcus aureus isolates
recovered from university students in a Spanish region, in preparation.
Baba T, Bae T, Schneewind O, Takeuchi F, Hiramatsu K. Genome
sequence of Staphylococcus aureus strain Newman and comparative
analysis of staphylococcal genomes: polymorphism and evolution of two
major pathogenicity islands. J. Bacteriol 2008, 190: 300310.
Bania J, Dabrowska A, Korzekwa K, Zarczynska A, Bystron J,
Chrzanowska J, Molenda J. The profiles of enterotoxin genes in
Staphylococcus aureus from nasal carriers. Lett Appl Microbiol. 2006,
42: 315-320.
Becker K, Friedrich AW, Lubritz G,, Weilert M, Peters G, Von
Eiff C. Prevalence of genes encoding pyrogenic toxin superantigens and
exfoliative toxins among strains of Staphylococcus aureus isolated from
blood and nasal specimens. J Clin Microbiol 2003, 41: 1434-1439.
3. Resultados
Collery MM, Smyth DS, Twohig JM, Shore AC, Coleman DC,
Smyth CJ. Molecular typing of nasal carriage isolates of Staphylococcus
aureus from an Irish university student population based on toxin gene
PCR, agr locus types and multiple locus, variable number tandem repeat
analysis. J Med Microbiol 2008, 57: 348-358.
Collery MM, Smyth DS, Tumilty JJ, Twohig JM, Smyth CJ.
Associations between enterotoxin gene cluster types egc1, egc2 and egc3,
agr types, enterotoxin and enterotoxin-like gene profiles, and molecular
typing characteristics of human nasal carriage and animal isolates of
Staphylococcus aureus. J Med Microbiol 2009, 58: 13-25.
Deurenberg RH, Beisser PS, Visschers MJ, Driessen C,
Stobberingh EE. Molecular typing of methicillin-susceptible
Staphylococcus aureus isolates collected in the Yogyakarta area in
Indonesia, 2006. Clin Microbiol Infect 2010, 16: 92-94.
Fueyo JM, Martn MC, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza MC.
Enterotoxin production and DNA fingerprinting in Staphylococcus aureus
isolated from human and food samples. Relations between genetic types
and enterotoxins. Int J Food Microbiol 2001, 67:139-145.
Fueyo JM, Mendoza MC, Alvarez MA, Martin MC. Relationships
between toxin gene content and genetic background in nasal carried
isolates of Staphylococcus aureus from Asturias, Spain. FEMS Microbiol
Lett 2005a, 243: 447-454.
Fueyo JM, Mendoza MC, Martn MC. Enterotoxins and toxic shock
syndrome toxin in Staphylococcus aureus recovered from human nasal
carriers and manually handled foods: epidemiological and genetic
findings. Microbes Infect 2005b, 7: 187-194.
Goerke C, Pantucek R, Holtfreter S, Schulte B, Zink M, Grumann
D, Brker BM, Doskar J, Wolz C. Diversity of prophages in dominant
Staphylococcus aureus clonal lineages. J Bacteriol 2009, 191: 3462-3468.
Holtfreter S, Grumann D, Schmudde M, Nguyen HT, Eichler P,
Strommenger B, Kopron K, Kolata J, Giedrys-Kalemba S, Steinmetz
I, Witte W, Brker BM. Clonal distribution of superantigen genes in
clinical Staphylococcus aureus isolates. J Clin Microbiol 2007, 45: 26692680.
Kaneco J, Kamio Y. Bacterial two-component and hetero-heptameric
pore-forming cytolytic toxins: structures, pore-forming mechanism, and
organization of the genes. Biosci Biotechnol Biochem 2004, 68: 9811003.
Kluytmans J, van Belkum A, Verbrugh H. Nasal carriage of
Staphylococcus aureus: epidemiology, underlying mechanisms, and
associated risks. Clin Microbiol Rev 1997, 10: 505-520.
Kluytmans JA, Wertheim HF. Nasal carriage of Staphylococcus
aureus and prevention of nosocomial infections. Infection 2005, 33: 3-8.
Larkin EA, Carman RJ, Krakauer T, Stiles BG. Staphylococcus
aureus: The thoxic presence of a pathogen extraordinaire. Curr Med
Chem 2009, 16: 4003-4019.
Lawrynowicz-Paciorek M, Kochman M, Piekarska K, Grochowska
A, Windyga B. The distribution of enterotoxin and enterotoxin-like genes
in Staphylococcus aureus strains isolated from nasal carriers and food
samples. Int J Food Microbiol 2007, 117: 319-323.
Lozano C, Gmez-Sanz E, Benito D, Aspiroz C, Zarazaga M,
Torres C. Staphylococcus aureus nasal carriage, virulence traits,
antibiotic resistance mechanisms, and genetic lineages in healthy humans
in Spain, with detection of CC398 and CC97 strains. Int J Med Microbiol
2011, doi:10.1016/j.ijmm.2011.02.004.
Hu DL, Omoe K, Inoue F, Kasai T, Yasujima M, Shinagawa K,
Nakane A. Comparative prevalence of superantigenic toxin genes in
meticillin-resistant and meticillin-susceptible Staphylococcus aureus
isolates. J Med Microbiol 2008, 57: 1106-1112.
Lindsay JA. Staphylococcus: molecular genetics. 1 ed., Caster
Academic Press, UK. 2008.
Lozano C, Gmez-Sanz E, Benito D, Aspiroz C, Zarazaga M,
Torres C. Staphylococcus aureus nasal carriage, virulence traits,
antibiotic resistance mechanisms, and genetic lineages in healthy humans
in Spain, with detection of CC398 and CC97 strains. Int J Med Microbiol
2011, doi:10.1016/j.ijmm.2011.02.004.
Mgevand C, Gervaix A, Heininger U, Berger C, Aebi C, Vaudaux
B, Kind C, Gnehm HP, Hitzler M, Renzi G, Schrenzel J, Franois P;
Paediatric Infectious Disease Group Switzerland Staphylococcus
aureus Study Group. Molecular epidemiology of the nasal colonization
by methicillin-susceptible Staphylococcus aureus in Swiss children. Clin
Microbiol Infect 2010, 16: 1414-1420.
81
3. Resultados
82
3. Resultados
3.2.3. Artculo 6
83
3. Resultados
sequence typing (MLST) in previous studies (Fueyo et
al., 2005, Argudn et al., Article 4).
Antimicrobial susceptibility testing. All isolates
were tested for antimicrobial susceptibility by the disk
diffusion method, using commercially available discs
(Oxoid), or by the agar dilution method for tested
minimal inhibitory concentrations. In both cases, the
medium used was Mueller-Hinton agar and the results
were scored according to the Clinical and Laboratory
Standards Institute (CLSI, 2009). The families and
antimicrobials tested included: beta-lactams [ampicillin
(AMP), penicillin (PEN), and oxacillin (OXA, used as a
substitute for methicillin)], MLS group [erythromycin
(ERY) and clindamycin (CLI)], aminoglycosides
[gentamicin (GEN), tobramycin (TOB), kanamycin
(KAN), and amikacin (AMK)], tetracycline (TET),
chloramphenicol (CHL), trimethoprim-sulfamethoxazole
(SXT), quinolones [ciprofloxacin (CIP) and moxifloxacin
(MXF)], rifampicin (RIF), mupirocin (MUP),
vancomicin (VAN), tigecycline (TGC) and linezolid
(LZD). MICs for ciprofloxacin (Sigma-Aldrich, Spain),
mupirocin (GlaxoSmithKline, Spain) and vancomycin
(Laboratorios Normon SA, Madrid, Spain) were
determined by the agar dilution method using ranges
from 0 to 8 g/ml, 0 to 80 g/ml and 0 to 4 g/ml
respectively. The breakpoints in the case of mupirocin
resistance were categorized as low (MIC 8 to 64 mg/l)
and high ( 512 g/ml) (Patel et al., 2009). To estimate
the
rate
of
inducible
macrolide-lincosamidestreptogramin B (MLS) resistance, the double-disk
diffusion test (D-Zone test) was performed on isolates
that were susceptible to clindamycin and resistant to
erythromycin, as reported (Steward et al., 2005). S.
aureus ATCC 29213, NCTC 8325 and several resistant
isolates were included as controls in different
experiments (Argudn et al., 2009; Argudn et al., 2011).
Isolation of genomic DNA, PCR amplification,
and DNA sequencing of resistance determinants.
DNA was extracted as reported (Martin et al., 2003), and
PCR assays always included negative and positive
controls. Primers were selected according to the
resistance phenotypes of the isolates, and were
previously described for genes conferring resistance to
Gene
blaZ
blaZ::Tn552
p480 (Tn552)
mecA
msrA
ermA
ermB
sat4
aadE
tetM
cat::pC221
cat::pC194
cat::pC223
mupA
ATGTAATTCAAACAGTTCACATGCC / ATAGGTTCAGATTGGCCCTTAGG
GAATTACATGCACTTAAAACTAAAGC / AAAAATTAGTTAGATACTTCTCCTTG
CTAACTAATTTTTCTGAAGCCAAACG / TTTAAGTGTTTTCTTCTCTGACTACG
CCCTCAAACAGGTGAATTATTAGC / TATCTTGTAACGTTGTACCCACCCC
CTCCATATACCTATGCATACAACC / CTAACGATAATTTCGTTCTTTCCCC
CCAGAAAAACCCTAAAGACACGC / TGTCTCAGATGTGAACCGAATCC
GCCATGCGTCTGACATCTATCTG / ACAATACTTGCTCATAAGTAACGG
GCAGAGCACCTGAAAGATATCG / GCGTATAACATAGTATCGACGG
AGTTAGATAATTACCTAAAGGGCG / ATATCAGCGGCATATGTGCTATCC
AATATAGGGATTGATAACCTTATAGAAG / TATCTCCAAGAACACTATTTAACTTC
TGGAAGTTGTAAATAAAAATAAAGTG / CAATCCAAGGAATCATTGAAATCGG
CAAGGGTGATAAACTCAAATACAGC / AAAGCCAGTCATTAGGCCTATCTG
AGGATATGAACTGTATCCTGCTTTG / AATAATGAAACATGGTAACCATCAC
GGTGACTCCTTATTGTACACATG / AGAAATTTCCCATTCTCCCTTCC
Amplicon (bp)
701
3151
1360
284
985
499
347
480
564
319
269
472
464
778
The genes screened in this study conferred resistance to ampicillin and penicillin (blaZ), oxacillin (mecA), erythromycin (msrA),
erythromycin and clindamycin (ermA and ermB), streptomycin (aadE), streptothricin (sat4), tetracycline (tetM), chloramphenicol
(cat::pC194, cat::pC221 and cat::pC223) and mupirocin (mupA). p480 encodes the transposase of Tn552, which can be associated with
blaZ.
84
3. Resultados
Table 2. Resistance profiles shown by single Staphylococcus aureus recovered from healthy carriers and distribution
among clonal complexes.
RProfile
R2
R4
R6
R9
R10
R12
R13
R15
R16
R17
R18
R19
R20
R22
R23
R26
R27
R28
R29
R30
R31
R-phenotype/R-genotypea
Isolate/year
ERY/[msrA-msrB] + qacA/Bd
CLI/linA
[AMK-KAN]/[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-[ERY-CLIC]/blaZ::Tn552-[msrB-ermC]
AMP-CLI/blaZ::Tn552-linA
AMP-KAN-AMK /blaZ::Tn552-[ aphA-aadE-sat4]
AMP-[AMK-GEN-KAN-TOB]/blaZ::Tn552-[aacA+aphD]
ERY-KAN//msrA-[aphA-aadE-sat4]
TET-ERY-CLIC/blaZ::Tn552-ermC-tetK
AMP-[ERY-CLIC]-KAN/blaZ::Tn552-[msrB-ermC]-[aphA-aadE-sat4]
AMP-[ERY-CLIC]-[GEN-KAN-TOB]/blaZ::Tn552-[msrB-ermC]-aacA+aphD
AMP-[ERY-CLII]-KAN/blaZ::Tn552l-[msrB-ermC]-[aphA-aadE-sat4]
AMP-[ERY-CLII]-[AMK-GEN-KAN-TOB]/blaZ::Tn552-[msrB-ermC]-[aphAaadE-sat4-aacA+aphD-aadD]
AMP-[ERY-CLII]-CHL/blaZ-ermC-cat::pC194
AMP-[ERY-CLIC]-[CIP-MXF]/blaZ-[msrB-ermB-ermC] ]-[glrA (Ile45 to Met)glrB (Asp422 to Glu)]
AMP-[AMK-KAN-TOB]-TET/blaZ::Tn552-[aphA-aadE-sat4-aadD]-tetK
AMP-[GEN-KAN-TOB]-TET(I)/blaZ::Tn552-tetK-[aacA+aphD]
AMP-[KAN-AMK-GEN-KAN-TOB]-TET/blaZ::Tn552-[ aphA-aadE-sat4aacA+aphD]-tetK
AMP-KAN-CHL/blaZ::Tn552]-[aphA-aadE-sat4]-cat ::pC194
AMP-ERY-[KAN-APR]-CHL/blaZ::Tn552-msrB-[aphA-aadE-sat4]cat::pC221
AMP-[ERY-CLIC]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-MUP/blaZ-[msrA-msrB-ermClinA]-[aphA-aadE-sat4-aacA+aphD-aadD]-nd + qacA/Bd
Plasmid
profileb
Clonal
complexc
13/05
21/01
23/05
11/01
2/06
4/05
7/02
36/01
24/01
35/01
14/02
20/05
5/05
pR18
pR3
pR10
pR27
pR21
pR21
pR14
pR35
CC5
CC121
CC15
CC25
CC25
CC9
CC5
CC5
CC30
CC5
CC5
CC59
CC25
1/05
6/02
pR39
pR16
CC9
CC45
2/04
95/99
9/02
pR34
pR26
pR31
CC1
CC30
CC30
4/02
25/01
pR38
pR37
CC97
CC15
5/06
pR40
CC25
Resistance to clindamycin could be constitutive (C) or inducible (I). AMK, amikacin; AMP, ampicillin and penicillin; CHL,
chloramphenicol; CIP, ciprofloxacin; CLI, clindamycin; ERY, erythromycin; GEN, gentamicin; (I), intermediate resistance; KAN,
kanamycin; MXF, moxifloxacin; MUP, mupirocin; TET, tetracycline; TOB, tobramycin.
b
Profiles generated by digestion of plasmid DNA with HindIII, and shown to hybridize with probes for antimicrobial resistance genes.
c
Clonal complexes (CCs) as reported by Argudn et al. (Article 4).
d
Resistance to quaternary ammonium compounds was not tested.
N, number of isolates when more than 1.
85
3. Resultados
Table 3. Resistance profiles shown by two or more Staphylococcus aureus recovered from healthy carriers and
distribution among clonal complexes.
R-Profile
(N)
S (7)
Sensible
R-phenotype/R-genotypea
R1 (46)
R3 (3)
[ERY-CLII]/blaZ::Tn552-[ermC msrB]
Year of isolation
(N)
99, 01, 02, 04, 05
(3)
97 (3), 99, 01
(18), 02 (4), 04
(2), 05 (17), 06
99, 01, 05
R-plasmid profilesb
(N)
pR1, pR2 (2), pR3 (6),
pR4 (11), pR5, pR6,
pR7, pR10, pR11,
pR12, pR13, pR15
pR4, pR16, pR20
R5 (2)
KAN/[aphA-aadE-sat4] blaZ::Tn552
02, 05
CC5 (2)
R7 (5)
AMP-ERY/blaZTn552-[msrB msrA]
01 (2), 05 (2), 06
R8 (6)
R11 (9)
AMP-[ERY-CLII]/blaZTn552-[ermC msrB
msrA]
AMP-KAN/blaZTn552-[aphA-aadE-sat4] qacA/B
R14 (5)
AMP-TET/blaZTn552/pl-tetK
AMP-[ERY-CLIC]-TET/blaZ::Tn552-[msrB-ermC
02 (2)
CC45 (2)
ermB]-tetK
R24 (3)
AMP-CLI-KAN/blaZTn552/pl-linA-[aphA-aadE02 (3)
pR1, pR5
CC15, CC30, CC121
sat4]
R25 (2)
AMP-KAN-TET/blaZ::Tn552-[aphA-aadE-sat4
02 (2)
pR29, pR33
CC30, CC97
aacA+aphD]-tetK
a
Resistance to clindamycin could be constitutive (C) or inducible (I). AMP, ampicillin and penicillin; CLI, clindamycin; ERY,
erythromycin; KAN, kanamycin; TET, tetracycline.
b
Profiles generated by digestion of plasmid DNA with HindIII, and shown to hybridize with probes for antimicrobial resistance genes.
c
Clonal complexes (CCs) as reported by Argudn et al. (Article 4).
N, number of isolates when more than 1.
R21 (2)
86
3. Resultados
pR profile
kb
1 2
z
t
5 6
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
14.211.5-
5.14.52.82.52.1-
z
t
z
t
t
z
tz
z
t
z
t
z
b
tz
tz
bc c bc bc ctz bctz
zt
1.7-
1.1-
pR profile
kb
24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
p
z
14.211.5z
5.14.52.82.52.1-
tz
btz tz
ab
k
k
ctz
ktz
pz
z
t
pz
z z
hpt
k
t
k hkp k ktz k
bc k
bc
b
1
2
1.71.1-
Figure 1. HindIII plasmid profiles of antimicrobial resistant S. aureus from healthy carriers. Lanes , lambda digested with PstI; lines
1 to 43, profiles pR1 to pR40. Italic letters indicate the probes that mapped on the different fragments: 1, cat::pC194; 2, cat::pC221; a;
msrA; b, msrB; c, ermC; d, aadD; h, accA+aphD; k, tetK; p, aphA; t, p480 Tn552; z, blaZ.
87
3. Resultados
(aphA, aadE, sat4, aacA+aphD and aadD) and four
(ermC, mrsA, mrsB and linA/linA) determinants
conferring resistance to aminoglycosides and MLS,
respectively. Gathering of multiple resistant determinants
in the same isolate is commonly mediated by stepwise
acquisition of mobile genetic elements, such as
transposons and plasmids (Fluit et al., 2001; Jensen and
Lyon, 2009), and this appeared to be the case in the
present study. For instance, i) in most penicillin resistant
isolates the blaZ gene was associated with Tn552; ii) in
all except one of the tetracycline resistant isolates the
tetK efflux gene was plasmid-borne; iii) in all
chloramphenicol resistant isolated, the cat genes were
also carried by plasmids; and iv) ermC and msrB, the
prevalent MLS resistance determinants in MSSA isolates
(Fluit et al., 2001), were also the most common in the
present work, and mapped on plasmids in most positive
isolates. The high number of profiles including genes
conferring resistance to aminoglycosides is also of note,
being aphA the gene most commonly found followed by
aacA+aphD and aadD. The simultaneous presence of
aadE and sat4 in all aphA-positive isolates strongly
support the location of the three genes within Tn5405
(Derbise et al., 1996). Detection of some of these
plasmids (CC1, CC5, CC8, CC9, CC15, CC25, CC30,
CC45, CC59, CC72, CC97) and transposons (CC1, CC5,
CC9, CC15, CC25, CC30, CC45, CC59, CC97) in the
indicated CCs (Tables 1, 2 and 3), emphasises their role
in the spread of resistance.
In conclusion, the young healthy carriers in this study
do not constitute a reservoir of MRSA, but they represent
a reservoir of multiple determinants conferring resistance
to old antimicrobials. Some of them have still clinical
applications and, considering the increasing resistance to
new antimicrobials, none of them can be disregarded. In
addition, these commensal MSSA can eventually be
involved in disease, or act as recipients of SCCmec,
stressing the importance of the study of the reservoir S.
aureus in the healthy carriers.
ACKNOWLEDMENTS
This work was supported by project FIS-06PI052489 from the Spanish Ministry of Science and
Innovation. M. A. Argudn was the recipient of grant
FPU AP-2004-3641 from the Ministry of Science and
Innovation, Spain, co-funded by the European Social
Fund. We thank to the GlaxoSmithKline Company for
the mupirocin samples.
REFERENCES
Alghaithy AA, Bilal NE, Gedebou M, Weily AH. Nasal carriage and
antibiotic resistance of Staphylococcus aureus isolates from hospital and
non-hospital personnel in Abha, Saudi Arabia. Trans R Soc Trop Med
Hyg 2000, 94: 504-507.
Argudn MA, Mendoza MC, Mndez, Martn FJ, Guerra B,
Rodicio MR. Clonal complexes and diversity of exotoxin gene profiles in
methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus
isolates from patients in a Spanish hospital. J Clin Microbiol 2009, 47:
2097-2105.
Argudn MA, Tenhagen BA, Fetsch A, Sachsenrder J, Ksbohrer
A, Schroeter A, Hammerl JA, Hertwig S, Helmuth R, Brunig J,
Mendoza MC, Appel B, Rodicio MR, Guerra B. Virulence and
resistance determinants in German Staphylococcus aureus ST398 isolates
from non-human origin. Appl Environ Microbiol 2011b, 77:3052-3060.
Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Genomic diversity of
methicillin-susceptible Staphylococcus aureus strains from young healthy
carriers, in preparation.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance
standards for antimicrobial susceptibility testing M100S19. 2009, Vol 29
(3).
88
3. Resultados
Ruimy R, Armand-Lefevre L, Barbier F, Rupp E, Cocojaru R,
Mesli Y, Maiga A, Benkalfat M, Benchouk S, Hassaine H, Dufourcq
JB, Nareth C, Sarthou JL, Andremont A, Feil EJ. Comparisons
between geographically diverse samples of carried Staphylococcus
aureus. J Bacteriol 2009, 191: 5577-5583.
S-Leo R, Sanches IS, Couto I, Alves CR, de Lencastre H. Low
prevalence of methicillin-resistant strains among Staphylococcus aureus
colonizing young and healthy members of the community in Portugal.
Microb Drug Resist 2001,7: 237-245.
Sambrook J, Russell D. Molecular Cloning: A Laboratory Manual
(Third Edition). Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY. 2000.
Sakwinska O, Kuhn G, Balmelli C, Francioli P, Giddey M,
Perreten V, Riesen A, Zysset F, Blanc DS, Moreillon P. Genetic
diversity and ecological success of Staphylococcus aureus strains
colonizing humans. Appl Environ Microbiol 2009, 75: 175-183.
Schmitz FJ, Fluit AC, Gondolf M, Beyrau R, Lindenlauf E,
Verhoef J, Heinz HP, Jones ME. The prevalence of aminoglycoside
resistance and corresponding resistance genes in clinical isolates of
staphylococci from 19 European hospitals. J Antimicrob Chemother
1999, 43: 253-259.
Sidhu MS, Heir E, Leegaard T, Wiger K, Holck A. Frequency of
disinfectant resistance genes and genetic linkage with beta-lactamase
transposon Tn552 among clinical staphylococci. Antimicrob Agents
Chemother 2002, 46: 2797-2803.
Steward CD, Raney PM, Morrell AK, Williams PP, McDougal LK,
Jevitt L, McGowan JE Jr, Tenover FC. Testing for Induction of
Clindamycin Resistance in Erythromycin-Resistant Isolates of
Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2005, 43: 1716-1721.
Strommenger B, Kettlitz C, Werner G, Witte W. Multiplex PCR
assay for simultaneous detection of nine clinically relevant antibiotic
resistance genes in Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2003, 41:
4089-4094.
van Belkum A, Melles DC, Nouwen J, van Leeuwen WB, van
Wamel W, Vos MC, Wertheim HF, Verbrugh HA. Co-evolutionary
aspects of human colonisation and infection by Staphylococcus aureus.
Infect Genet Evol 2009, 9: 32-47.
Wertheim HFL, Melles DC, Vos MC, van Leeuven W, van Belkum
A, Verbrugh HA, Nouwen JI. The role of nasal carriage in
Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis 2005, 5: 751-762.
Woodford N. Biological counterstrike: antibiotic resistance
mechanisms of Gram-positive cocci. Clin Microbiol Infect 2005, 11: 221.
89
3. Resultados
Table S1. Resistance and plasmid profiles of Staphylococcus aureus recovered from healthy carriers assigned to
different clonal complexes.
Isolate/Year
RProfilea
LMUO5/97
LMUO 6/97
LMUO 10/97
LMUO 3/99
LMUO 8/99
LMUO 12/99
LMUO 15/99
LMUO 95/99
LMUO 1/01
LMUO 2/01
LMUO 3/01
LMUO 4/01
LMUO 5/01
LMUO 6/01
LMUO 7/01
LMUO 8/01
LMUO 9/01
LMUO 10/01
LMUO 11/01
LMUO 12/01
LMUO 13/01
LMUO 14/01
LMUO 15/01
LMUO 16/01
LMUO 17/01
LMUO 18/01
LMUO 19/01
LMUO 20/01
LMUO 21/01
LMUO 22/01
LMUO 23/01
LMUO 24/01
LMUO 25/01
R1c
R1d
R1a
R11c
R1d
S
R3b
R27
R1c
R1c
R1d
R1d
R1d
R7a
R8d
R11b
R1c
R1d
R9
R1b
R1c
R1d
R1d
R1d
R1d
R14b
R11a
R1d
R4
R11b
R1d
R16
R30
LMUO 26/01
LMUO 27/01
LMUO 28/01
LMUO 29/01
LMUO 30/01
LMUO 31/01
LMUO 32/01
LMUO 33/01
LMUO 34/01
LMUO 35/01
LMUO 36/01
LMUO 1/02
LMUO 2/02
LMUO 3/02
LMUO 4/02
LMUO 5/02
LMUO 6/02
R8c
R1d
R14b
R14b
S
R1c
R7e
R1d
R3a
R17
R15
R25
R8e
R11b
R29
R21b
R23
LMUO 7/02
LMUO 8/02
LMUO 9/02
R13
R11b
R28
LMUO 10/02
LMUO 11/02
LMUO 12/02
LMUO 13/02
LMUO 14/02
R1d
R1d
R21a
R24c
R18
LMUO 15/02
LMUO 16/02
LMUO 17/02
LMUO 18/02
LMUO 19/02
LMUO 20/02
S
R11b
R1d
R1d
R24a
R14a
90
R-phenotypeb // R-genotypec
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ/nd
AMP-KAN // blaZ::Tn552/nd-[ aphA/nd-aadE-sat4] + qacA/Bf
AMP // blaZ::Tn552/pl
Susceptible// [ERY-CLII] // blaZ::Tn552/nd-[msrB/pl-ermC/pl]
AMP-[GEN-KAN-TOB]-TET(I) // blaZ::Tn552/pl-[aacA+aphD/nd]- tetK/pl
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-ERY // blaZ/nd-msrB/nd
AMP-[ERY-CLII] // blaZ::Tn552/nd-ermC/pl
AMP-KAN // blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-[ERY-CLIC] // blaZ::Tn552/pl-[msrB/pl-ermC/pl]
AMP // blaZ/pl
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-TET // blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
AMP-KAN // blaZ/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP // blaZ::Tn552/pl
CLI // linA/linA
AMP-KAN // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP // blaZ::Tn552/pl
TET-[ERY-CLIC] // blaZ::Tn552/pl-ermC/pl-tetK/nd
AMP-ERY-KAN-CHL // blaZ::Tn552/pl-msrB/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]cat::pC221/pl
AMP-[ERY-CLII] // blaZ/pl-[msrB/pl-ermC/pl]
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-TET // blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
AMP-TET // blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
Susceptible// AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP-ERY // blaZ::Tn552/pl--[msrA/nd-msrB/nd]
AMP // blaZ::Tn552/pl
[ERY-CLII] // blaZ::Tn552/pl-ermC/pl
AMP-[ERY-CLIC]-KAN // blaZ::Tn552/pl-[msrB/pl-ermC/pl]-[aphA/nd-aadE-sat4]
ERY-KAN // msrA/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-KAN-TET // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-tetK/pl
AMP-[ERY-CLII] // blaZ::Tn552/pl-[msrB/pl- ermC/pl]
AMP-KAN // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-KAN-CHL // [blaZ/nd-Tn552/pl]-[aphA/pl-aadE-sat4]-cat ::pC194/pl
AMP-[ERY-CLIC]-TET // [blaZ::Tn552/nd]-[msrB/pl-ermB/nd-ermC/pl]-tetK/pl
AMP-[ERY-CLIC]-[CIP-MXF] // blaZ/nd-[msrB/pl-ermB/nd-ermC/pl] ]-[glrA (Ile45
to Met)-glrB (Asp422 to Glu)]
AMP-[AMK-GEN-KAN-TOB] // blaZ::Tn552/pl-[ aacA+aphD/nd]
AMP-KAN // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-[AMK-GEN-KAN-TOB]-TET // blaZ::Tn552/pl-[ aphA/pl-aadE-sat4aacA+aphD/pl]-tetK/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-[ERY-CLIC]-TET // blaZ::Tn552/pl-[msrB/pl-ermC/pl]-tetK/pl
AMP-CLI-KAN // blaZ/nd-linA/linA-[aphA/nd-aadE-psat4]
AMP-[ERY-CLIC]-[GEN-KAN-TOB] // blaZ::Tn552/pl-[msrB/pl-ermC/pl][aacA+aphD/nd]
Susceptible// AMP-KAN // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-CLI-KAN // blaZ/pl-linA/linA-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-TET // blaZ/nd-tetK/pl
Plasmid
profiled
Clonal
complexe
p0
pR3
p0
p0
pR4
pR16
pR26
pc1
p0
pR5
pR4
pR6
pc13
pR17
pc2
p0
pR4
pR18
pR1
p0
pR7
pR3
pR3
pR3
pR26
p0
pR4
pc3
pR8
pR4
pR27
pR37
CC30
CC25
CC30
CC30
CC30
CC45
CC1
CC30
CC30
CC30
CC25
CC45
CC5
CC30
CC15
CC25
CC30
CC45
CC25
CC5
CC30
CC59
CC45
CC45
CC45
CC15
CC121
CC15
CC121
CC30
CC15
CC30
CC15
pR19
pR4
pR26
pR28
p0
pR9
pR4
pR20
pR21
pc10
pR29
pR21
pR10
pR38
pR30
pR16
CC1
CC45
CC15
CC15
CC5
CC30
CC15
CC15
CC5
CC5
CC5
CC97
CC5
CC5
CC97
CC45
CC45
pR10
pR10
pR31
CC5
CC30
CC30
pR11
pR3
pR31
pc4
pR21
CC5
CC97
CC45
CC121
CC5
pR4
pR10
pR12
pR1
pR32
CC45
CC45
CC25
CC59
CC30
CC8
3. Resultados
Table S1 (continuation). Resistance and plasmid profiles of Staphylococcus aureus recovered from healthy carriers
assigned to different clonal complexes.
Isolate/Year
R-Profilea
LMUO 21/02
LMUO 22/02
LMUO 23/02
LMUO 24/02
LMUO 1/04
LMUO 2/04
LMUO 3/04
LMUO 4/04
LMUO 5/04
LMUO 1/05
LMUO 2/05
LMUO 3/05
LMUO 4/05
LMUO 5/05
R25
R24b
R11b
R5a
S
R26
R11b
R1c
R1c
R22
R1a
R8a
R12
R20
LMUO 6/05
LMUO 7/05
LMUO 8/05
LMUO 9/05
LMUO 10/05
LMUO 11/05
LMUO 12/05
LMUO 13/05
LMUO 14/05
LMUO 15/05
LMUO 16/05
LMUO 17/05
LMUO 18/05
LMUO 19/05
LMUO 20/05
LMUO 21/05
LMUO 22/05
LMUO 23/05
LMUO 24/05
LMUO 25/05
LMUO 26/05
LMUO 27/05
LMUO 28/05
LMUO 29/05
LMUO 30/05
LMUO 31/05
LMUO 32/05
LMUO 33/05
LMUO 1/06
LMUO 2/06
LMUO 3/06
LMUO 4/06
LMUO 5/06
R1c
R5b
R7c
S
S
R1b
R1c
R2
R1c
R1d
R1d
R1c
S
R1d
R19
R3c
R1e
R6
R1c
R1d
R8b
R1c
R1c
R1a
R1b
R7b
R1a
R14b
R7d
R10
R8f
R1d
R31
R-phenotypeb // R-genotypec
AMP-KAN-TET // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-tetK/pl
AMP-CLI-KAN // blaZ::Tn552/pl-linA/linA-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-KAN // blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
KAN // [aphA/nd-aadE-sat4]
Susceptible// AMP-[AMK-KAN-TOB]-TET // blaZ::Tn552/pl-[aphA/pl-aadE-sat4-aadD/nd]-tetK/pl
AMP-KAN // blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP-[ERY-CLII]-CHL // blaZ/nd-ermC/nd-cat::pC194/pl
AMP // blaZ/nd
AMP-[ERY-CLII] // blaZ/nd-ermC/nd
AMP-[AMK-KAN] // blaZ-Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-[ERY-CLII]-[AMK-GEN-KAN-TOB] // blaZ::Tn552/pl-[msrB/pl-ermC/pl][aphA/pl-aadE-sat4-aacA+aphD/pl-aadD/nd]
AMP // blaZ::Tn552/nd
KAN // blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-ERY // blaZ/pl-msrB/pl
Susceptible// Susceptible// AMP // blaZ/pl
AMP // blaZ::Tn552/nd
ERY // [msrA/nd-msrB/nd]-qacA/B
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP // blaZ::Tn552/nd
Susceptible// AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-[ERY-CLII]-KAN // blaZ::Tn552/pl-[msrB/nd-ermC/nd]-[aphA/nd-aadE-sat4]
[ERY-CLII] // blaZ-Tn552/nd-[msrB/nd-ermC/pl]
AMP-(OLE) // blaZ::Tn552/nd-msrB/nd
[AMK-KAN] // [aphA/nd-aadE-sat4]
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-[ERY-CLII] // blaZ/nd-[msrB/pl-ermC/pl]
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ::Tn552/nd
AMP // blaZ/nd
AMP // blaZ/pl
AMP-ERY // blaZ/nd-msrB/pl
AMP // blaZ/nd
AMP-TET // blaZ::Tn552/pl- tetK/pl
AMP-ERY // blaZ::Tn552/pl-msrB/pl
AMP-CLI // blaZ::Tn552/pl-linA/linA
AMP-[ERY-CLII] // blaZ::Tn552/pl-[msrA/pl-msrB/pl-ermC/pl]
AMP // blaZ::Tn552/pl
AMP-[ERY-CLIC]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-MUP // blaZ/pl-[msrA/nd-msrB/nd-ermC/pllinA/linA]-[aphA/pl-aadE-sat4-aacA+aphD/nd-aadD/nd]-qacA/B
Plasmid
profiled
Clonal
complexe
pR33
pR5
pR12
p0
pR34
p0
p0
p0
pR39
pc5
pc11
pc6
pR35
CC30
CC15
CC5
CC5
CC15
CC1
CC30
CC30
CC30
CC9
CC9
CC9
CC9
CC25
pc7
pc8
pR22
pR2
p0
pc12
p0
pR4
pR13
p0
pR4
pR14
pR4
pR4
p0
pR4
pR3
pR16
pc9
p0
p0
pR2
pR23
pc2
pR36
pR24
pR3
pR25
pR15
pR40
CC5
CC5
CC15
CC45
CC30
CC5
CC30
CC5
CC30
CC45
CC5
CC30
CC5
CC30
CC59
CC30
CC30
CC15
CC30
CC25
CC72
CC30
CC30
CC45
CC5
CC45
CC72
CC45
CC5
CC25
CC45
CC1
CC25
Resistance (R-) profiles are numbered according to R-phenotypes, and subtypes are according to R-genotypes.
Resistance to clindamycin can be constitutive (C) or inducible (I). AMK, amikacin; AMP, ampicillin and penicillin; CHL,
chloramphenicol; CIP, ciprofloxacin; CLI, clindamycin; ERY, erythromycin; GEN, gentamicin; (I), intermediate resistance; KAN,
kanamycin; LZD, linezolid; MXF, moxifloxacin; MUP, mupirocin; OLE, oleandomycin; OXA, oxacillin; PEN, penicillin; RIF,
rifampicin; SXT, trimethoprim-sulfamethoxazole; TET, tetracycline; TMP, trimethoprim; TOB, tobramycin.
c
PCR amplification was used for detection of resistance genes for disinfectant compounds (qacA/B), ampicillin and penicillin (blaZ
and Tn552), erythromycin (msrA and msrB), erythromycin and clindamycin (ermA, ermB and ermC), clindamycin (linA/linA),
kanamycin, gentamicin and tobramycin (aacA+aphD), kanamycin, tobramycin and amikacin (aadD), kanamycin (aphA), streptomycin
(aadE), streptothricin (sat4), tetracycline (tetK, tetL, tetM and tetO), chloramphenicol (cat::pC194, cat::pC221, cat::pC223 and fexA),
ciprofloxacin (grlA, grlB, gyrA, gyrB and PnorA) and mupirocin (mupA). Plasmid location was determined by southern and
hybridization of HindIII plasmid profiles with probes for blaZ, p480 (Tn552), msrA, msrB, ermC, aphA, accA+aphD, aadD, tetK,
cat::pC194, cat::pC221. nd, not determined location; ni; not identified; pl, plasmid location.
d
p0, no plasmid(s) found; pC, cryptic plasmid(s) profiles which did not hybridized with probes for resistance genes; pR, plasmid
profiles which hybridized with probes for resistance genes. Cryptic and resistant plasmid profiles were generated through digestion of
the extracted DNA with HindIII.
e
Clonal complexes (CCs) were previously reported for this isolates (Argudn et al., Article 4).
f
Resistance to quaternary ammonium compounds was not tested.
b
91
3. Resultados
92
3.3.Capitulo 3
Staphylococcus aureus procedentes de alimentos y
manipuladores de alimentos del
Principado de Asturias
3. Resultados
3. Resultados
este captulo se resumen en la Tabla IIe del Anexo II. Este estudio ha dado lugar a dos
artculos que estn en fase de preparacin:
Artculo 7: Argudn MA, Mendoza MC, Gonzlez-Hevia MA, Bances M, Rodicio
MR. Characterization of food-borne Staphylococcus aureus from a Spanish region (en
preparacin).
Artculo 8: Martn MC, Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Characterization
of pUO-Sa-SED3, a virulence-resistance plasmid from Staphylococcus aureus (en
preparacin).
Por otro lado, a lo largo de la Tesis doctoral se ha realizado una revisin sobre
intoxicaciones alimentarias en S. aureus, que tambin se incluye en este captulo:
Artculo 9: Argudn MA, Mendoza MC, Rodicio MR. Food poisoning and
Staphylococcus aureus enterotoxins. Toxins 2010, 2: 1751-1773.
94
3. Resultados
3.3.1. Artculo 7
95
3. Resultados
MATERIALS AND METHODS
Bacterial strains. The S. aureus isolates analyzed in
this study (64) have been collected from food handlers
(14 isolates) and manually handled foods (50 isolates) in
Asturias, Spain (Table 1). Thirty seven isolates were
recovered from foods and restaurant employees during
three poisoning outbreaks (outbreaks 1 to 3) which
occurred at different restaurants of Asturias during 2002,
have been partially characterized in a previous study by
means of PFGE, randomly amplified polymorphic DNA,
plasmid content, and enterotoxin gene profile (see
below), and biochemical properties (Martn et al., 2004).
New isolates (27) were tested for haemolytic (on sheep
blood agar; Oxoid, Madrid, Spain), thermonuclease (on
DNase test agar; Oxoid) and coagulase (Slidex Staph
Plus, bioMerieux, Marcy-lEtolie, France) activities, and
identification as S. aureus was biochemically confirmed
with the API Staph system (bioMerieux). They were
recovered from foodstuffs associated with a fourth
outbreak (outbreak 4) which took place at an elderly
nursing home in 2006 in Asturias. Clinical isolates are
not available for any of the outbreaks. S. aureus collected
from a variety of foods (cakes, stuffed eggs, hamburgers
and cheese) within the Security Food Program of the
Agencia de Sanidad Ambiental y Consumo of Asturias,
and from healthy carriers attending a teaching course for
food handlers organized by the Consejera de Educacin
y Ciencia of the same region, were also included in this
study. Well characterized isolates from human clinical
samples, animals and healthy carriers were used as
controls (Argudn et al., 2009; Argudn et al., 2011a;
Argudn et al., 2011b; Argudn et al., Article 4; Argudn
et al., Article 5; Argudn et al., Article 6).
Antimicrobial susceptibility testing. All isolates
were also tested for antimicrobial susceptibility by the
disk diffusion method, using Mueller-Hinton agar and
commercially available discs (Oxoid). The antimicrobial
agents tested were ampicillin, penicillin, oxacillin,
methicillin,
gentamicin,
amikacin,
kanamycin,
tobramycin, tetracycline, erythromycin, clindamycin,
chloramphenicol,
ciprofloxacin,
moxifloxacin,
rifampicin,
linezolid,
vancomycin,
tigecycline,
mupirocin,
trimethoprim
and
trimethoprimsulfamethoxazole.
MICs
for
mupirocin
(GlaxoSmithKline, United Kigndom) and vancomycin
(Laboratorios Normon SA, Madrid, Spain) were
determined by the agar dilution method in MuellerHinton (Oxoid), with concentrations ranging from 0 to
1500 g/ml and from 0 to 4 g/ml, respectively. The
results were scored according to the Clinical and
Laboratory Standards Institute (CLSI, 2009), except in
the case of mupirocin for which the breakpoints were
categorized as low (MIC 8 to 64 mg/l) and high ( 512
g/ml) resistance (Patel et al., 2009). S. aureus ATCC
29213 and NCTC 8325 were included as controls. To
estimate the rate of inducible macrolide-lincosamidestreptogramin B (MLSB) resistance, the double-disk
diffusion test (D-Zone test) was performed on isolates
that were susceptible to clindamycin and resistant to
erythromycin, as reported (Steward et al., 2005).
Isolation of genomic DNA and PCR amplification
assays. Genomic DNA was purified as reported (Martn
et al., 2003). Genes encoding antimicrobial resistance
and virulence factors were detected by conventional and
96
26
27
28
29
30
31
Hamburger
Hamburger
TC-FH10
TC-FH11
TC-FH12
TC-FH13
hla/b/d/g-lukED-tst-egc2-splF-agrIII
hla/d/gv-lukED-ear-agrII
hla/b/d/gv-etb-egc2-agrIV
hla/b/d/g-tst-seh-egc2-splF-agrIII
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/d/j/r-egc2-splF-agrII
hla/b/d/gv-lukED-sed/j/r-egc1-splF-agrII
hla/b/d/g-lukED-egc1-splF-agrIII
hla/d/gv-lukED-splF-agrII
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear-agrI
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear-agrI
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear-agrI
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear-agrI
hla/d/g/gv-eta-agrIII
hla/d/g/gv-eta-lukED-tst-sea-egc2-splF-agrIII
lukED-tst-seh-egc2-splF-agrIII
hla/b/d/g/gv-lukED-seh-egc2-agrIV
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF-agrIV
hla/b/d/g/gv-lukED-sec-egc1-ear-agrI
hla/b/d/g/gv-lukED-sec-egc1-ear-agrI
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF-agrIV
lukED-sek/q-ear-bsaB-splF-agrIV
hla/d/gv-etd-lukED-seb-egc1-ear-bsaB-splF-agrIV
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF-agrIV
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF-agrIV
hla/d/gv-lukED-egc1-splF-agrII
hla/b/d/gv-lukED-egc1-splF-agrII
hla/b/d/gv-lukED-egc1-splF-agrII
hla/b/d/gv-lukED-egc1-splF-agrII
hld/g-tst-sea-egc2-agrIII
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sea/b/d/j/p/r-egc2-ear-agrII
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/b/d/j/p-egc2-agrIV
hla/d/gv-lukED-sed/j/p-egc1-ear-splF-agrII
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/c/l-egc2-ear-agrI
hld/g-lukED-sea/c/l-egc2-ear-agrI
hld/g-lukED-tst-sea-egc2-agrIII
hla/b/d/g/gv-sea/b/c/k/q-egc2-ear-agrIV
agrIII
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/d/j/r-egc2-ear-agrI
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/d/j/r-egc1-agrIII
Virulence profile
AMP / blaZ::Tn552
MUP / mupA
AMP / blaZ::Tn552
AMP / blaZ::Tn552
AMP / blaZ::Tn552
AMP / blaZ::Tn552
AMP-[ERY-CLII]-MUP / blaZ::Tn552-[ermA-ermC]
AMP-[ERY-CLII]-MUP / blaZ::Tn552-ermC
AMP-[ERY-CLII]-MUP / blaZ::Tn552-ermC
AMP-ERY / blaZ-[msrA-msrB]
AMP-[ERY-CLII]-TET / blaZ::Tn552-ermC-tetK
AMP/blaZ
AMP/blaZ
AMP-[ERY-CLII]-TET / blaZ::Tn552-ermC-tetK
AMP / blaZ
AMP / blaZ::Tn552
AMP-[ERY-CLII]-TET / blaZ::Tn552-ermC-tetK
AMP-[ERY-CLII]-TET / blaZ::Tn552-ermC-tetK
AMP / blaZ
AMP / blaZ
AMP / blaZ::Tn552
ERY / msrB
AMP / blaz
ERY / msrA-msrB-linA/linA'
AMP-[ERY-CLII] / blaZ::Tn552-[ermA-ermC]
AMP / blaZ::Tn552
AMP / blaZ::Tn552
AMP / blaZ::Tn552
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-MUP / [blaZ-SCCmec
IVd]-[aacA+aphD-aphA]
[AMP-OXA]-CLI-[AMK-GEN-KAN-TOB]-MUP / [blaZSCCmec IVd]-nd-[aadD-aphA]
-
Resistance profilec
CC30
CC15
CC121
CC30
CC5
CC5
CC30
CC15
CC45
CC45
CC45
CC45
CC1
CC30
CC30
CC5
CC5
CC22
CC22
CC5
CC8
CC25
CC5
CC5
CC5
CC5
CC5
CC5
CC30
CC5
CC8
CC5
CC45
CC45
CC30
CC59
CC30
CC45
CC45
CCd
t166
t3474
t272
t166
t2173
t002
t021
t120
t050
t050
t050
t050
t177
t012
t136
t616
t701
t790
t790
t701
t008
t7125
t701
t701
t1560
t1560
t1560
t1560
t012
t002
t008
t002
t015
t015
t840
t216
t012
t015
t604
spa
type
ST34
ST15
ST51
nd
ST5
ST5
ST30
ST15
ST45
nd
nd
nd
ST3
nd
ST34
ST1619
ST6
ST217
ST217
nd
ST8
ST26
nd
nd
ST146
nd
nd
nd
nd
nd
nd
ST5
ST45
nd
ST30
ST59
nd
nd
ST546
MLST
The order corresponds to the year of isolation. 36 isolates from foods (26) and food handlers (FH; 10) were recovered during four poisoning outbreaks (Martn et al., 2004). Three of them (O1 to O3) occurred in different restaurants
during 2002, and the fourth (O4) happened in an olds people home in 2006; 24 isolates were collected from non-outbreak associated foods during 1997, 2006 and 2007; four isolates were recovered from the nasal cavities of healthy
carriers attending a teaching course (TC) for food handlers in 2008. N, number of isolates when more than one.
b
The 64 food-borne isolates were assigned to 31 strains.
c
The antimicrobial agents tested were ampicillin-penicillin (AMP), oxacillin-methicillin (OXA), gentamicin (GEN), amikacin (AMK), kanamycin (KAN), tobramycin (TOB), tetracycline (TET), erythromycin (ERY), clindamycin
(CLI; being CLII, inducible), chloramphenicol, ciprofloxacin, moxifloxacin, rifampicin, linezolid, vancomycin, tigecycline, mupirocin (MUP), trimethoprim and trimethoprim-sulfamethoxazole.
d
CC, clonal complex according to MLST and supported by spa typing.
nd, not determined.
O4-Russian salad
Cake
Cake
Cake
Stuffed eggs
Sponge cake (5)
Sponge cake (5)
Swiss roll (5)
Cheese
Hamburger
Hamburger
O3-Cream-cake (2)
O2-Beef
O3-FH6
O3-FH7
O3-FH8
O3-FH9
O3-Stuffed crab
O3-Shellfish salad (2)
1
2
3
3
3
3
4
5
6
7
8
9
9
8
10
11
8
8
12
13
14
13
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
Strainb
O1-FH1 (2)
O1-FH2
O1-Cooked lamb (5)
O1- Shellfish salad (5)
O1- Paella (4)
O1-Cream-cake (2)
O2-FH3
O2-FH4
O2-FH5
O2-Cream cake
O2-Vegetables (2)
Source (N)a
3. Resultados
97
3. Resultados
Table 2. Clonal complexes, sequence types and spa-types found in food-related S. aureus strains.
CC (N/%)a
ST (n)
CC5 (9/29.0)
CC30 (8/25.8)
CC45 (5/16.1)
CC8 (2/6.5)
CC15 (2/6.5)
CC1 (1/3.2)
CC22 (1/3.2)
CC25 (1/3.2)
CC59 (1/3.2)
CC121 (1/3.2)
Origin (n)
CC, clonal complex; ST, sequence type; N, number of strains; n, number of strains when more than one; O1-O4, food poisoning
outbreaks; F, foods; FH, food handlers; TC, teaching course.
98
3. Resultados
was probably the cause of the outbreak, as already
proposed by Martn et al. (2004). Strain 8 was also
present in vegetables at the outbreak 2 restaurant, but a
total of six strains (4 to 9), belonging to four CCs (CC1,
CC5, CC22 and CC30), were recovered from foods and
food-handlers at this restaurant and all, except one from a
food handler, carried at least one enterotoxin gene
(namely sea, sec or seh with or without egc1 or egc2).
With regard to outbreak 4, a single isolate (strain 15), is
available. It was recovered from Russian salad served at
an elderly nursing home, proved to be positive for sea,
resistant to ampicillin, and belonged to t012 (ST30)
within CC30. It is of note that the lack of clinical isolates
associated with the four outbreaks precluded the
identification of the responsible strain(s), with the
probable exception of outbreak 3 (see above).
SEA, followed by SED, are the enterotoxins most
frequently associated with SFP, although outbreaks
caused by SEB, SEC, SEE and SEH have also been
reported (Le Loir et al., 2003; Argudn et al., 2010). In
the food-related strains characterized in this study, sea
was the most common (38.7%), seb, sec and seh
appeared at a lower frequency (12.9, 16.1 and 9.7%,
respectively), and see was not detected. Like the former
enterotoxins, egc-encoded SEG and SEI, and the
plasmid-borne SER, SES and SET, were shown to be
emetic after oral administration in a primate model
(Munson et al., 1998; Ono et al., 2008). In the present
work, a high percentage of strains contained one of the
two egc clusters (32.3 or 48.4%), which are located in
Sa type 1 (egc1) or Sa type 3 (egc2). The sed and ser
genes, carried by plasmids of the pIB485 family, were
also frequent (22.9 and 16.1%, respectively), and
appeared in most of the not-outbreak-associated food
isolates.
The use of antimicrobial agents in veterinary
medicine, animal husbandry and other agricultural
activities has contributed to an alarming increase in
antimicrobial resistance. Transmission of resistant
bacteria from farm animals to humans can occur through
ingestion of food products of animal origin. In addition,
ingested resistant bacteria can transfer resistance genes,
as well as virulence genes, to the human commensal
microbiota (Kluytmans, 2010). Thus, study of the
resistance and virulence properties of S. aureus isolates
present in the food chain is an important issue of public
health.
Like in S. aureus from other sources, resistance to
ampicillin-penicillin was high (61.3%) in food-related
isolates tested in this study, and the responsible gene,
blaZ, was often associated with Tn552 (Jensen and Lyon,
2009). The frequency of other resistances, including
oxacillin/methicillin (6.5%), erythromycin (25.8%),
clindamycin (16.1%), and gentamicin-tobramycin
(6.5%), was lower than that reported in Spanish hospitals
(averages of 30.2%, 31.7%, 20% and 20-27% during the
2002 to 2006 period) (Cuevas et al., 2008). The two
MRSA isolates detected (t002/ST5 and t2173/ST5;
strains 26 and 27) belonged to CC5, carried SCCmec IVd
and were recovered from hamburgers acquired at a local
supermarket. This type of SCCmec is uncommon in
Spain, and was only associated with CC8 (accounting for
0.8% of a sample of 135 MRSA isolates, Vindel et al.,
2009). The presence of MRSA in hamburgers was
probably due to contamination by food handlers, since
their preparation requires several steps of human
involvement, including processing at the supermarket.
99
3. Resultados
Balaban N, Rasooly A. Staphylococcal enterotoxins. Int J Food
Microbiol 2000, 61: 110.
Bayles KW, Iandolo JJ. Genetic and molecular analyses of the gene
encoding staphylococcal enterotoxin D. J Bacteriol 1989, 171: 47994806.
Cevallos C, Hernndez-Pezzi G, Torres A, Ordez P, Villarrubia
S, Bleda MJ. Brotes de enfermedades transmitidas por alimentos.
Espaa. 2003 (excluye brotes hdricos) Boletn Epidemiolgico Semanal
2005, 13(3): 25-36.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance
standards for antimicrobial susceptibility testing M100S19. 2009, Vol 29
(3).
Collery MM, Smyth DS, Twohig JM, Shore AC, Coleman DC,
Smyth CJ. Molecular typing of nasal carriage isolates of Staphylococcus
aureus from an Irish university student population based on toxin gene
PCR, agr locus types and multiple locus, variable number tandem repeat
analysis. J Med Microbiol 2008, 57: 348-358.
Cuevas O, Cercenado E, Goyanes MJ, Vindel A, Trincado P,
Boquete T, Marn M, Bouza E; Grupo Espaol para el Estudio de
Estafilococo. Staphylococcus spp. in Spain: present situation and
evolution of antimicrobial resistance (1986-2006)] Enferm Infecc
Microbiol Clin 2008, 26: 269-277.
Diederen BM, Kluytmans JA. The emergence of infections with
community-associated methicillin resistant Staphylococcus aureus. J
Infect 2006, 134: 52-56.
Dinges MM, Orwin PM, Schlievert PM Exotoxins of Staphylococcus
aureus. Clin Microbiol Rev 2000, 13: 16-34.
Enright MC, Day NP, Davies CE, Peacock SJ, Spratt BG.
Multilocus sequence typing for characterization of methicillin-resistant
and methicillin-susceptible clones of Staphylococcus aureus. J Clin
Microbiol 2000, 38: 1008-1015.
Goerke C, Pantucek R, Holtfreter S, Schulte B, Zink M, Grumann
D, Brker BM, Doskar J, Wolz C. Diversity of prophages in dominant
Staphylococcus aureus clonal lineages. J Bacteriol 2009. 191: 3462346.
Fraser JD, Proft T. The bacterial superantigen and superantigen-like
proteins. Immunol Rev 2008, 225: 226-243.
Harmsen D, Claus H, Witte W, Rothgnger J, Claus H, Turnwald
D, Vogel U. Typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a
university hospital setting by using novel software for spa repeat
determination and database management. J Clin Microbiol 2003, 41:
5442-5448.
Jensen SO, Lyon BR. Genetics of antimicrobial resistance in
Staphylococcus aureus. Future Microbiol 2009, 4: 565-582.
Jones TF, Kellum ME, Porter SS, Bell M, Schaffner W. An
outbreak of community-acquired foodborne illness caused by a
methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Emerg Infect Dis 2002, 8:
82-84.
Hernndez-Pezzi G, Torres A, Ordez P, Cevallos C. Brotes de
enfermedades transmitidas por alimentos. Espaa, 1993-2002 (excluye
brotes hdricos) Boletn Epidemiolgico Semanal 2004, 12(26):289-296.
Kluytmans JA, van Leeuwen W, Goessens W, Hollis R, Messer S,
Herwaldt L, Bruining H, Heck M, Rost J, van Leeuwen N. Foodinitiated outbreak of methicillin-resistant Staphylococcus aureus analyzed
by pheno- and genotyping. J Clin Microbiol 1995, 33: 1121-1128.
Kluytmans JA. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in food
products: cause for concern or case for complacency? Clin Microbiol
Infect 2010, 16: 11-15.
Le Loir Y, Baron F, Gautier M. Staphylococcus aureus and food
poisoning. Genet Mol Res 2003, 2: 63-76.
Lina G, Bohach GA, Nair SP, Hiramatsu K, Jouvin-Marche E,
Mariuzza R; International Nomenclature Committee for
Staphylococcal Superantigens. Standard nomenclature for the
superantigens expressed by Staphylococcus. J Infect Dis 2004, 189: 23342336.
Lozano C, Lpez M, Gmez-Sanz E, Ruiz-Larrea F, Torres C,
Zarazaga M. Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
ST398 in food samples of animal origin in Spain. J Antimicrob
Chemother 2009, 64: 1325-1326.
Martn MC, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza MC. Usefulness of a
two-step PCR procedure for detection and identification of
enterotoxigenic staphylococci of bacterial isolates and food samples.
Food Microbiol. 2003, 20: 605 610.
Martn MC, Fueyo JM, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza MC.
Genetic procedures for identification of enterotoxigenic strains of
Staphylococcus aureus from three food poisoning outbreaks. Int J Food
Microbiol 2004, 94: 279-286.
Martnez EV, Varela MC, Cevallos C, Hernndez-Pezzi G, Torres
A, Ordez P. Brotes de enfermedades transmitidas por alimentos.
Espaa, 2004-2007 (excluye brotes hdricos). Boletn Epidemiolgico
Semanal 2008, 16(21): 241-252.
Munson SH, Tremaine MT, Betley MJ, Welch, RA. Identification
and characterization of staphylococcal enterotoxin types G and I from
Staphylococcus aureus. Infect Immun 1998, 66: 33373348.
Murray RJ. Recognition and management of Staphylococcus aureus
toxin-mediated disease. Intern Med J. 2005, 2: S106119.
100
3. Resultados
3.3.2. Artculo 8
Size (pb)
repA
cadD
abiK
blaZ
blaRI
blaI
bin
sin
marR-like
AD
Bacteriocin
ABC transport
ses
set
CTCGAAGAATTGCCACAACA/TGCATAGCTTCAACGGTTTC
AAGTTGTGGCGCCGATAATA/TTTCTCCAATTCCTGGGATA
AGCTACGGTAAATCAGATGC/TCTTGCATGAAAAACATCAA
ATAGGTTCAGATTGGCCCTTAGG/ATGTAATTCAAACAGTCCACATGCC
GCCCTTACAGAACGATCACC/ATGGTCAAGTCCAAACATCG
GCGATAAAACGATTAGAACA/AACTTTTCATGTCCCCTCCA
CATTGAATTTGCGAGGTCAG/CTGCAAATGCTGCGAATAAA
AATGGGAGATCGATTCGTTG/ACCTTGAGCTTGTCGACGTT
TGGCCATAAGTCTTTTGCTT/TGGTGTTTTGAATTGCTTGA
GATGTCGGCGTGACACATAC/ACCACCTGTAGCCCCAGAC
GCCAATCCCGATAAAAACAA/AGTCAATCCATCCTTGGTGA
TCTCTAAGCGGTGGTGAACA/ACATCAAATCGTTTCGCAAG
CGGGTGTTACTTCTGTTTGC/ATGTAGATGCTTGGGGACAT
AATGCAATTTGCCCCATAGT/AACTTCATATTCGCAGGACA
217
154
223
701
183
170
199
243
176
198
201
205
162
214
101
3. Resultados
A.
pIB485-like plasmid
mer region
pIB485-like plasmid
ORF-4
IS431 merR
merT merA
merB IS431
msrA mphC
sin
AD
B.
traG-ftsK element
ORF-5
ftsK
pIB485-like plasmid
ORF-6 ORF-7
traG
ORF-8
sed
Figure 1. Schematic representation of two gene arrays of pUO-Sa-SED3. A. Fragment of 16.3 kb with the insertion of the mer operon
and macrolide resistance genes upstream of sin and the alcohol dehydrogenase gene. B. Fragment of 10.4 kb with the insertion of the
traG-fstK element that truncates the ser gene.
(recombinase
gene
previously
reported
in
multiresistance plasmids; Rowland and Dyke, 1989), and
genes which encode a putative alcohol dehydrogenase
and a MarR-like factor (Cheung et al., 2004; Cheung et
al., 2008; Korem et al., 2010). pUO-Sa-SED1 and pUOSa-SED2, but not pUO-Sa-SED3, were also PCRpositive for ser, for the bla operon (for -lactams
resistance) (Bayles y Iandolo, 1989; Zhang et al., 1998),
and for the bin recombinase gene, previously found in
Tn552 (Mouw et al., 2008). It is also of note that none of
the three plasmids found in S. aureus recovered from
foods in Asturias contained the genes for the enterotoxins
ses and set, the genes for bacteriocin production, or for
an ABC transporter, all characteristically present in pF5like plasmids (Ono et al., 2008).
Interestingly, sequence analysis revealed that the ser
gene of pUO-Sa-SED3 was truncated by insertion of a
traG-ftsK element (Figure 1). It has been shown that the
ftsK and traG products act as a bipartite translocation
system in an E. coli plasmid (Gunton et al., 2007), and a
mobile genetic element carrying the two genes has been
reported in the genome of S. aureus recovered from
persistent nasal carriers (Burts et al., 2005; Sivaraman et
al., 2008). The presence of the traG and ftsK region in
pUO-Sa-SED3, is particularly interesting, due to its
possible role in persistent colonization. This plasmid also
contains macrolide resistance genes (msrA and mphC), as
well as an additional insertion of 7 kb consisting of two
copies of IS431 which flank, in the same orientation, a
mer operon similar to that of the SAP105A plasmid of S.
epidermidis (accession number: GQ900452.1) (Figure
1).
Based on structural and functional properties, three
groups of large staphylococcal multiresitance plasmids
have been recognized: the pSK1 family, pSK41-like
conjugative plasmids, and -lactamase-heavy metal
resistance plasmids (Firth et al., 2000). The pIB485-like
plasmids carry cadmium and -lactams resistance genes,
and could therefore have originated from -lactamaseheavy metal resistance plasmids, which acquired
enterotoxin genes. As a member of the pIB485-like
family, pUO-Sa-SED3 constitutes an interesting example
of further evolution, through acquisition of new
resistance genes and of an element possibly involved in
persistent carriage. This element could contribute to the
maintenance of potential dangerous strains in the human
host, which represents a hazard to human health.
Moreover, linkage of resistance and virulence genes in
plasmids of the pIB485-like family, including pUO-SaSED3, is a cause of concern, since the use of
102
3. Resultados
Rowland SJ, Dyke KG. Characterization of the staphylococcal betalactamase transposon Tn552. EMBO J.1989, 8: 2761-2773.
Sambrook J, Russell DW. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd
ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, cold spring Harbor, NY. 2001.
Sivaraman K, Venkataraman N, Tsai J, Dewell S, Cole AM.
Genome sequencing and analysis reveals possible determinants of
Staphylococcus aureus nasal carriage. BMC Genomics 2008, 9: 433.
Rowland SJ, Dyke KG. Characterization of the staphylococcal betalactamase transposon Tn552. EMBO J.1989, 8: 2761-2773.
Yamaguchi T, Hayashi T, Takami H, Ohnishi M, Murata T,
Nakayama K, Asakawa K, Ohara M, Komatsuzawa H, Sugai M.
103
3. Resultados
104
3. Resultados
3.3.3. Artculo 9
105
3. Resultados
106
3. Resultados
107
3. Resultados
108
3. Resultados
109
3. Resultados
110
3. Resultados
111
3. Resultados
112
3. Resultados
113
3. Resultados
114
3. Resultados
115
3. Resultados
116
3. Resultados
117
3. Resultados
118
3. Resultados
119
3. Resultados
120
3. Resultados
121
3. Resultados
122
3. Resultados
123
3. Resultados
124
3. Resultados
125
3. Resultados
126
3. Resultados
127
3. Resultados
128
3.4.Capitulo 4
Staphylococcus aureus procedentes de animales de
Alemania
3. Resultados
3. Resultados
130
3. Resultados
3.4.1. Artculo 10
131
3. Resultados
132
3. Resultados
133
3. Resultados
134
3. Resultados
3.4.2. Artculo 11
135
3. Resultados
136
3. Resultados
137
3. Resultados
138
3. Resultados
139
3. Resultados
140
3. Resultados
141
3. Resultados
142
3. Resultados
3.4.3. Artculo 12
143
3. Resultados
144
3. Resultados
145
3. Resultados
146
3. Resultados
147
3. Resultados
148
3. Resultados
149
3. Resultados
150
3. Resultados
151
3. Resultados
Table S1. Oligonucleotides used in this study.
Group
Haemolysins
Gene
HLA-1
HLA-2
hlb
HLB-1
HLB-2
hld
HLD-1
HLD-2
hlg
mpHLG-1
mpHLG-2
hlg-variant mpHLG2-1
mpHLG2-2
Leucotoxins
lukM
LUKM-1
LUKM-2
lukED
LUKDE-1
LUKDE-2
lukPV
Luk-PV-1
Luk-PV-2
Exfoliative toxins
eta
ET-1
ET-2
etb
ET-3
ET-4
etd
ET-14
ET-15
Toxic shock syndrome toxin tst
TST-1
TST-2
Enterotoxins
sea
se[adej]-f
sea-r
seb
se[bc]-f
seb-r
sec
se[bc]-f
sec-r
sed
SED-3
SED-4
see
se[adej]-f
see-r
seg
SEG1
SEG2
seh
SEH1
SEH2
sei
SEI-1
SEI-2
sej
SEJ-1
SEJ-2
sek
SEK-3
SEK-4
sel
SEL-1
SEL-2
sem
SEM-1
SEM-2
sen
mpSEN-1
mpSEN-2
seo
SEO-1
SEO-2
sep
SEP-1
SEP-2
seq
SEQ-1
SEQ-2
ser
SER-1
SER-2
seu
PSE-2
PSE-6
Island markers
ear
ear-1
ear-2
splF
splF-1
splF-2
bsaB
bsaB-1
bsaB-2
152
hla
Name
Sequence 5-3
CTGATTACTATCCAAGAAATTCGATTG
CTTTCCAGCCTACTTTTTTATCAGT
GTGCACTTACTGACAATAGTGC
GTTGATGAGTAGCTACCTTCAGT
AAGAATTTTTATCTTAATTAAGGAAGGAGTG
TTAGTGAATTTGTTCACTGTGTCGA
GTCAYAGAGTCCATAATGCATTTAA
CACCAAATGTATAGCCTAAAGTG
GACATAGAGTCCATAATGCATTYGT
ATAGTCATTAGGATTAGGTTTCACAAAG
TGGATGTTACCTATGCAACCTAC
GTTCGTTTCCATATAATGAATCACTAC
TGAAAAAGGTTCAAAGTTGATACGAG
TGTATTCGATAGCAAAAGCAGTGCA
ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA
GCATCAAGTGTATTGGATAGCAAAAGC
CTATTTACTGTAGGAGCTAG
ATTTATTTGATGCTCTCTAT
ATACACACATTACGGATAAT
CAAAGTGTCTCCAAAAGTAT
AACTATCATGTATCAAGG
CAGAATTTCCCGACTCAG
AGCATCTACAAACGATAATATAAAGG
CATTGTTATTTTCCAATAACCACCCG
AAAGATTTGCGAAAAAAGTGTGAATT
TAAATCGTAATTAACCGAAGGTTCTG
TATGATGATAATCATGTATCAGCAA
CCAAATAGTGACGAGTTAGGTAA
TATGATGATAATCATGTATCAGCAA
TAAGTACATTTTGTAAGTTCCCATT
CTAGTTTGGTAATATCTCCTTTAAACG
TTAATGCTATATCTTATAGGGTAAACATC
AAAGATTTGCGAAAAAAGTGTGAATT
TTGCACCTTACCGCCAAAGCTG
TGCTATCGACACCTACAACC
CCAGATTCAAATGCAGAACC
CGA AAGCAGAAGATTTACACG
GACCTTTACTTATTTCGCTGTC
CTCAAGGTGATATTGGTGTAGG
AAAAAACTTACAGGCAGTCCATCTC
CTCCCTGACGTTAACACTACTAATAA
TTGTCTGGATATTGACCTATAACATT
ACCGCTCAAGAGATTGAT
TTATATCGTTTCTTTATAAGAA
AATATATAACTAGTGATCTAAAGGG
TATGGAATACTACACACCCCTTATA
ATGCTGTAGATGTATATGGTCTAAG
CGTCCTTATAAGATATTTCTACATC
ATGAGATTGTTCTACATAGCTGCAAT
AACTCTGCTCCCACTGAAC
TGTAGTGTAAACAATGCATATGCAAATG
TTATGTAAATAAATAAACATCAATATGATGTC
TTAGACAAACCTATTATCATAATGG
TATTATCATGTAACGTTACACCGCC
AAGAGGTAACTGCTCAAG
TTATTCAGTCTTCTCATATG
AAACCAGATCCAAGGCCTGGAG
TCACATTTGTAGTCAGGTGAACTT
TAAAATAAATGGCTCTAAAATTGATGG
ATCCGCTGAAAAATAGCATTGAT
ACATTGATAGCAAGTGCTTTAG
CTTTYAATTTKTCWGTTAATTTTTTCCATG
GTTACTAAGATTGTAGATTATCCTGG
CTCTTGTGCTTTCACCTGATGGC
CATTGTTATTAGTCCTTTAACGGCG
ATTCGTGTCATATTCAAAG AAGGC
(6)
309
(6)
111
(6)
535
(6)
390
(6)
780
(6)
269
(6)
433
(13)
741
(18)
629
(18)
376
(18)
481
(3)
669
(11)
424
(11)
315
(11)
319
(1)
512
(11)
704
(14)
495
(14)
576
(5)
641
(1)
278
(19)
359
(3)
473
(3)
680
(6)
722
(3)
272
(3)
285
(19)
700
(4)
141
(9)
374
This study
1200
This study
350
This study
3. Resultados
Table S1 (continuation). Oligonucleotides used in this study.
Group
SCCmec
typing
Gene
SCCmec I
Name
Type I-F
GCTTTAAAGAGTGTCGTTACAGG
GTTCTCTCATAGTATGACGTCC
CGTTGAAGATGATGAAGCG
CGAAATCAATGGTTAATGGACC
CCATATTGTGTACGATGCG
CCTTAGTTGTCGTAACAGATCG
GCCTTATTCGAAGAAACCG
CTACTCTTCTGAAAAGCGTCG
TCTGGAATTACTTCAGCTGC
AAACAATATTGCTCTCCCTC
ACAATATTTGTATTATCGGAGAGC
TTGGTATGAGGTATTGCTGG
CTCAAAATACGGACCCCAATACA
TGCTCCAGTAATTGCTAAAG
GAACATTGTTACTTAAATGAGCG
TGAAAGTTGTACCCTTGACACC
CCCTTTTTATACAATCTCGTT
ATATCATCTGCAGAATGGG
TATTTTTGGGTTTCACTCGG
CTCCACGTTAATTCCATTAATACC
ATTGCCTTGATAATAGCCITCT
AACCTATATCATCAATCAGTACGT
ATTGCCTTGATAATAGCCITCT
TAAAGGCATCAATGCACAAACACT
ATTGCCTTGATAATAGCCITCT
AGCTCAAAAGCAAGCAATAGAAT
ATGAATTCAAAGAGCATGGC
GATTTAGAATTGTCGTGATTGC
ATGTAATTCAAACAGTTCACATGCC
(20)
398
(20)
280
(20)
776
(20)
493
(20)
200
(20)
881
(20)
325
(20)
146
(20)
1305
(20)
700
(20)
1000
(20)
1600
(20)
336
(20)
701
This study
ATAGGTTCAGATTGGCCCTTAGG
TCCAATCATTGCACAAAATC
163
(12)
595
(10)
323
(10)
linA/linA-Rw GCTTCTTTTGAAATACATGGTATTTTTCGATC
vatA1
CAATGACCATGGACCTGATC
614
(17)
AmpicillinPenicillin
resistance
blaZ
Macrolide
resistance
msrA
blaZ-2
msrA Fw
SCCmec III
SCCmec IVa
SCCmec IVb
SCCmec IVc
SCCmec IVd
SCCmec V
mec clase A
mec clase B
ccr type 1
ccr type 2
ccr type 3
ccr type 5
msrB
Lincosamide
resistance
linA/linA
Streptogramin vatA
A resistance
vatB
vatC
vgaA
vgaB
vgaC
Streptogramin vgbA
B resistance
vgbB
Macrolidelincosamidestreptogramin
B (MLSB)
resistance
ermA
ermB
ermC
Type I-R
Type II-F
Type II-R
Type III-F
Type III-R
Type IVa-F
Type IVa-R
Type IVb-F
Type IVb-R
Type IVc-F
Type IVc-R
Type IVd-F
Type IVd-R
Type V-F
Type V-R
mecI-F
mecI-R
IS1272-F
mecR1-R
ccrAB-b2
ccrAB-a2
ccrAB-b2
ccrAB-a3
ccrAB-b2
ccrAB-a4
ccrC-F
ccrC-R
blaZ-1
SCCmec II
Sequence 5-3
msrA Rv
AATTCCCTCTATTTGGTGGT
msrB-Fw
TATGATATCCATAATAATTATCCAATC
msrB-Rv
AAGTTATATCATGAATAGATTGTCCTGTT
linA/linA-Fw GGTGGCTGGGGGGTAGATGTATTAACTGG
vatA2
vatB1
vatB2
vatC1
vatC2
vgaA1
vgaA2
vgaB1
vgaB2
vgaC1
vgaC2
vgbA1
AGCATTTCGATATCTCC
CCTGATCCAAATAGCATATATCC
CTAAATCAGAGCTACAAAGTG
TGGCAAAATCAGCAAGG
TCGTCTCTATCTCTAGGTCC
AGTGGTGGTGAAGTAACACG
CTTGTCTCCTCCGCGAATAC
TCTCTCAATTAGAAGAACC
TTATCTATTCGTGTTTCC
AGCTGGAGAAAGCAATCCAA
TCTTGCTGAAAATCCCGTTC
CCAGATTCAGCACCCTACG
vgbA2
vgbB1
vgbB2
ermA Fw
CCCCCCATTCAGTAAACC
CAGCAGTCTAGATCAGAGTGG
CATACGGATCCATCTTTTCC
TATCTTATCGTTGAGAAGGGATT
ermA Rv
ermB Fw
ermB Rv
ermC Fw
ermC Rv
CTACACTTGGCTTAGGATGAAA
CTATCTGATTGTTGAAGAAGGATT
GTTTACTCTTGGTTTAGGATGAAA
CTTGTTGATCACGATAATTTCC
ATCTTTTAGCAAACCCGTATTC
600
(17)
573
(17)
659
(17)
579
(17)
885
This study
427
(17)
728
(17)
139
(12)
142
(12)
190
(12)
153
3. Resultados
Table S1 (continuation). Oligonucleotides used in this study.
Group
Tetracycline resistance
Gene
tet(K)
Name
tet(K) Fw
tet(K) Rv
tet(M) Fw
tet(M) Rv
tet(O)
tet(O) Fw
tet(O) Rv
tet(L)
tet(L) Fw
tet(L) Rv
aac(6)-Ie-aph(2)-Ia aac6-aph2-1
tet(M)
Aminoglycoside
resistance
ant(4)-Ia
aph(3)-IIIa
Phenicol resistance
cat::pC221
cat::pC194
cat::pC223
fexA
Trimethoprim
resistance
dfrD
dfrK
dfrG
dfrS1(dfrA)
Phenicol, lincosamide,
oxazolidinone,
pleuromutilin and
streptogramin A
resistance
cfr
Sequence 5-3
TCGATAGGAACAGCAGTA
CAGCAGATCCTACTCCTT
GTGGACAAAGGTACAACGAG
CGGTAAAGT TCG TCACACAC
AACTTAGGCATTCTGGCTCAC
TCCCACTGT TCCATATCGTCA
TCGTTAGCGTGCTGTCATTC
GTATCCCACCAATGTAGCCG
CCAAGAGCAATAAGGGCATACC
aac6-aph2-2
ant4-1
ant4-2
aph3-1
aph3-2
cat-1
cat-2
cat-3
cat-4
cat-5
cat-6
fex-A-fw
fexA-rv
P1
CACACTATCATAACCATCACCG
CTGCTAAATCGGTAGAAGC
CAGACCAATCAACATGGCACC
CTGATCGAAAAATACCGCTGC
TCATACTCTTCCGAGCAAAGG
TGGAAGTTGTAAATAAAAATAAAGTG
CAATCCAAGGAATCATTGAAATCGG
CAATCCAAGGAATCATTGAAATCGG
AAAGCCAGTCATTAGGCCTATCTG
AGGATATGAACTGTATCCTGCTTTG
AATAATGAAACATGGTAACCATCAC
GTACTTGTAGGTGCAATTACGGCTGA
CGCATCTGAGTAGGACATAGCGTC
CCCTGCTATTAAAGCACC
P2
dfrK-1
dfrK-2
dfrG-1
dfrG-2
dfrS1-1
dfrS1-2
cfr-fw
cfr-rv
CATGACCAGATAACTC
CAAGAGATAAGGGGTTCAGC
ACAGATACTTCGTTCCACTC
TGCTGCGATGGATAAGAA
TGGGCAAATACCTCATTCC
CACTTGTAATGGCACGGAAA
CGAATGTGTATGGTGGAAAG
TGAAGTATAAAGCAGGTTGGGAGTCA
ACCATATAATTGACCACAAGCAGC
(15)
406
(15)
515
(15)
267
(15)
347
(16)
172
(16)
268
(16)
269
This study
472
This study
464
This study
1272
(7)
606
(2)
229
This study
405
This study
270
This study
746
(8)
a
References:
1. Becker, K., R. Roth, and G. Peters. 1998. Rapid and specific detection of toxigenic Staphylococcus aureus: use of two multiplex
PCR enzyme immunoassays for amplification and hybridization of staphylococcal enterotoxin genes, exfoliative toxin genes, and toxic
shock syndrome toxin 1 gene. J. Clin. Microbiol. 36:25482553.
2. Dale, G. E., H. Langen, M. G., Page, R. L. Then, and D. Stber. 1995. Cloning and characterization of a novel, plasmid-encoded
trimethoprim-resistant dihydrofolate reductase from Staphylococcus haemolyticus MUR313. Antimicrob. Agents Chemother.
39:19201924.
3. Fueyo, J. M., M. C. Mendoza, M. R. Rodicio, J. Muiz, M. A. Alvarez, and M. C. Martin. 2005. Cytotoxin and pyrogenic toxin
superantigen gene profiles of Staphylococcus aureus associated with subclinical mastitis in dairy cows and relationships with
macrorestriction genomic profiles. J. Clin. Microbiol. 43:12781284.
4. Fueyo, J. M., M. C. Mendoza, and M. C. Martin. 2005. Enterotoxins and toxic shock syndrome toxin in Staphylococcus aureus
recovered from human nasal carriers and manually handled foods: epidemiological and genetic findings. Microbes Infect. 7:187194.
5. Jarraud, S., M. A. Peyrat, A. Lim, A. Tristan, M. Bes, C. Mougel, J. Etienne, F. Vandenesch, M. Bonneville, and G. Lina.
2001. egc, a highly prevalent operon of enterotoxin gene, forms a putative nursery of superantigens in Staphylococcus aureus. J.
Immunol. 166:669677.
6. Jarraud, S., C. Mougel, J. Thioulouse, G. Lina, H. Meugnier, F. Forey, X. Nesme, J. Etienne, and F. Vandenesch. 2002.
Relationships between Staphylococcus aureus genetic background, virulence factors, agr groups (alleles), and human disease. Infect.
Immun. 70:631641.
7. Kehrenberg, C., and S. Schwarz. 2005. Florfenicol-chloramphenicol exporter gene fexA is part of the novel transposon Tn558.
Antimicrob. Agents Chemother. 49:813815.
8. Kehrenberg, C., and S. Schwarz. 2006. Distribution of florfenicol resistance genes fexA and cfr among chloramphenicol-resistant
Staphylococcus isolates. Antimicrob. Agents Chemother. 50:11561163.
9. Letertre, C., S. Perelle, F. Dilasser and P. Fach. 2003. Identification of a new putative enterotoxin SEU encoded by the egc
cluster of Staphylococcus aureus. J. Appl. Microbiol. 95:3843.
10. Lina, G., A. Quaglia, M.-E. Reverdy, R. L., F. Vandenesch, and J. Etienne. 1999. Distribution of genes encoding resistance to
macrolides, lincosamides, and streptogramins among Staphylococci. Antimicrob. Agents Chemother. 43:10621066.
11. Martn, M.C., M.A. Gonzlez-Hevia and M.C. Mendoza. 2003. Usefulness of a two-step PCR procedure for detection and
identification of enterotoxigenic staphylococci of bacterial isolates and food samples. Food Microbiol. 20:605610.
12. Martineau, F., F. J. Picard, N. Lansac, C. Menard, P. H. Roy, M. Ouellette, and M. G. Bergeron. 2000. Correlation between
the resistance genotype determined by multiplex PCR assays and the antibiotic susceptibility patterns of Staphylococcus aureus and
Staphylococcus epidermidis. Antimicrob. Agents Chemother. 44:231238.
154
3. Resultados
13. McClure, J. A., J. M. Conly, V. Lau, S. Elsayed, T. Louie, W. Hutchins, and K. Zhang. 2006. Novel multiplex PCR assay for
detection of the staphylococcal virulence marker Panton-Valentine leukocidin genes and simultaneous discrimination of methicillinsusceptible from -resistant staphylococci. J. Clin. Microbiol. 44:11411144.
14. McLauchlin, J., G.L. Narayanan, V. Mithani, and G. O'Neill. 2000. The detection of enterotoxins and toxic shock syndrome
toxin genes in Staphylococcus aureus by polymerase chain reaction. J. Food Prot. 63:479488.
15. Ng, L.-K., I. Martin, M. Alfa, and M. Mulvey. 2001. Multiplex PCR for the detection of tetracycline resistant genes. Mol. Cell.
Probes 15:209215.
16. Schmitz, F. J., A. C. Fluit, M. Gondolf, R. Beyrau, E. Lindenlauf, J. Verhoef, H. P. Heinz, and M. E. Jones. 1999. The
prevalence of aminoglycoside resistance and corresponding resistance genes in clinical isolates of staphylococci from 19 European
hospitals. J. Antimicrob. Chemother. 43:253259.
17. Werner, G, C. Cuny, F. J. Schmitz, and W. Witte. 2001. Methicillin-resistant, quinupristin-dalfopristin-resistant Staphylococcus
aureus with reduced sensitivity to glycopeptides. J. Clin. Microbiol. 39:35863590.
18. Yamaguchi, T., K. Nishifuji, M. Sasaki, Y. Fudaba, M. Aepfelbacher, T. Takata, M. Ohara, H. Komatsuzawa, M. Amagai
and M. Sugai. 2002. Identification of the Staphylococcus aureus etd pathogenicity island which encodes a novel exfoliative toxin,
ETD, and EDIN-B. Infect. Immun. 70:58355845.
19. Yarwood, J. M., J. K. McCormick, M. L. Paustian, P. M. Orwin, V. Kapur and P. M. Schlievert. 2002. Characterization and
expression analysis of Staphylococcus aureus pathogenicity island 3. Implications for the evolution of staphylococcal pathogenicity
islands. J. Biol. Chem. 277:1313813147.
20. Zhang, K., J. A. McClure, E. Sameer, T. Louie, and J. M. Conly. 2005. Novel multiple PCR assay for characterization and
concomitant subtyping of Staphylococcal Cassette Chromosome mec types I to IV in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J.
Clin. Microbiol. 43:50265033.
Table S2. Resistance profiles of ST398 and outgroup S. aureus isolates, and their relationships with spa types and
PFGE profiles (n = 113).
Rgenotypea
R0
R1
R2e
R3e
R4
R5
R6e
R7
R8a
No
R-phenotypeb
StrainGroup
(2)
Susceptible
[AMP-PEN]
TET
[AMP-PEN]-TET
[AMP-PEN]-TET-ERY-CLI
[AMP-PEN]-TET-[ERY-CLI-QUI/DAL]
[AMP-PEN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[AMP-PEN]-GEN-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-TET
ST8, ST433
ST5
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST9
ST398
NCTC, CP
ATCC
M
CP
CP
CP
CP
CP
M
ST398
AP (6), CP,
FPf, M (2)
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST217
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
CP, M
D
D
AP
FPf
AP (3)
MC
CP
MP
MP
CP, MP
CP
AP
AP
AP
D
AP
D
MP
CH
FPf
MB
D
FPf
AP
AP
AP, CP, MP
AP
AP
AP
AP
CP
CP, D
D
b (10) [MET-OXA]-TET
c
R9
R10
R11a
b
c
d
e
f
g
h
R12
R13
R14
R15a
b
c
d
e
R16
R17
R18a
b
R19
R20a
b
R21a
b
c
d
e
f
g
h
(2)
(3)
(2)
(3)
(2)
[MET(I)-OXA]-TET
[MET-OXA]-KAN(I)-TET
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]
[MET(I)-OXA]-KAN-TET
[MET-OXA]-TET-CHL
[MET-OXA]-TET-CIP
[MET-OXA]-TET-TMP
[MET-OXA]-TET-TMP
[MET-OXA]-TET-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-TMP
[MET-OXA]-QUI/DAL-CIP
[MET-OXA]-GEN-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-KAN(I)-TET-[ERY-CLI]
[MET-OXA]-KAN(I)-TET-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
Originc
spa type
t211, t318
t002
t011
t011
t034
t108
t034
t337
t011
t011 (3), t1451 (2),
t1457, t1580, t2346,
t2576 (2)
t011 (2)
t011
t011
t108
t108
t1255, t1451, t2346
t011
t034
t034
t108
t011 (2)
t011
t108
t011
t011
t011
t034
t011
t034
t032
t011
t011
t011
t011
t011
t034
t034 (3)
t2970
t1985
t011
t034
t034
t034 (2)
t2510
PFGE profiled
Control, S1
Control
C18
C6
C16
C32
C27
S2
C6
C5 (2), C6 (3),
C8 (2), C10,
C12 (2)
C6, C18
C18
C19
C2
C2
C6 (2), C10
C6
C9
C16
C12
C18 (2)
C6
C12
C6
C6
C5
C7
C21
C14
S5
C34
C12
C18
C35
C15
C3
C1, C5, C14
C6
C6
C6
C1
C16
C1 (2)
C1
155
3. Resultados
Table S2 (continuation). Resistance profiles of ST398 and outgroup S. aureus isolates, and their relationships with spa
types and PFGE profiles (n = 113).
R-genotypea
i
j
k
l
m
n
o
R22
R23
R24
R25a
b
c
d
e
R26
R27
R28a
b
c
d
e
f
g
h
i
R29a
b
c
d
e
R30
R31a
b
R32
R33
R34
R35a
b
R36
R37
R38a
b
R39
R40
R41
a
No R-phenotypeb
(3)
(2)
(2)
(2)
(2)
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-CIP-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-SXT(I)-TMP
[MET-OXA]-GEN(I)-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-CIP-TMP
[MET(I)-OXA]-KAN(I)-TET-[ERY-CLI]-CHL
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET(I)-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET(I)-OXA]-[GEN-KAN]-TET-[ERY-CLI]-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-QUI/DAL-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-QUI/DAL-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]-QUI/DAL-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-QUI/DAL(I)-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]-QUI/DAL(I)-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-[SXT-TMP]
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-CIP-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-[ERY-CLI]-CIP-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-CHL-CIP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI]-CHL-TMP
[MET-OXA]-TET-[ERY-CLI- QUI/DAL(I)]-[SXT-TMP]
[MET(I)-OXA]-TET-CHL-CIP-TMP
[MET(I)-OXA]-TET-CHL-CIP-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-CIP
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-CIP-MUP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-CIP-TMP
[MET(I)-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI]-CIP-TMP
[MET-OXA]-KAN(I)-TET-[ERY-CLI]-CHL-TMP
[MET-OXA]-KAN-TET-[ERY-CLI- QUI/DAL]-CHL-TMP
[MET(I)-OXA]-KAN(I)-TET-[ERY-CLI]-CHL-[SXT(I)TMP]
StrainGroup
Originc
spa type
PFGE
profiled
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST398
ST5
ST225
ST9
ST398
ST398
ST398
AP
CP
AP
AP, CP, MP
AP
CP
CP, MP
FPf
CP
AP
AP
AP
D
CP
AP (2)
AP
CP
MT
AP
AP
MT
AP
AP
AP
CP, D
CP
AP
CP
MP
D
MT (2)
AP
AP
CP
AP
CP
AP
CP
CP
MT
CH
MB
CP
CP
AP
t2011
t011
t1928
t034, t571 (2)
t1793
t011
t034 (2)
t011
t108
t2576
t108
t2576
t034
t034
t034, t1250
t011
t011
t779
t034
t011
t011
t011
t011
t011
t011 (2)
t011
t034
t034
t034
t034
t034, t5210
t108
t034
t034
t108
t011
t034
t011
t1451
t002
t003
t1430
t108
t034
t034
C6
C25
C11
C9 (2), C11
C3
C5
C1 (2)
C14
C26
C12
C12
C12
C9
C11
C16, C17
C14
C5
C30
C9
C15
C30
C4
C3
C15
C20, C33
C28
C1
C24
C1
C20
C24, C31
C1
C9
C23
C13
C22
C1
C14
C5
S4
S6
S3
C12
C29
C5
ST398
CP
t108
C14
The subtyping of the R-patterns was according to the presence of a genetic background, as shown in Figure 2.
MET, methicillin; OXA, oxacillin; TET, tetracycline; GEN, gentamicin; KAN, kanamycin; ERY, erythromycin; CLI, clindamycin; MUP,
mupirocina; QUI/DAL; quinupristin-dalfopristin; CHL, chloramphenicol; CIP, ciprofloxacin; TMP, trimethoprim; SXT, trimethoprimsulfamethoxazole; (I), intermediate susceptibility. Susceptible methicillin and oxacillin isolates were also tested for ampicillin (AMP) and
penicillin (PEN).
c
ATCC, American Type Culture Collection; CH, human clinical sample; AP, asymptomatic carrier pig; CP, pig clinical sample; D, dust
(from pig farms); FP, Dutch pig faecal sample; M, milk; MC, meat from cattle; MB, meat from broiler; MP, meat from pig; MT, meat from
turkey; NCTC, National Collection of Type Cultures.
d
C, Cfr9I-PFGE profile; S, SmaI-PFGE profile.
e
Isolates mecA positive (MRSA).
f
ST398 isolates kindly provided by D. Mevius (Central Veterinary Institute of Waningen, Lelystad, The Netherlands), used as control
strains.
Number of isolates in brackets when n>1.
b
156
4.Discusin
4. Discusin
4. Discusin
humanos, como CC1, CC5, CC30 y CC45 (Artculos 1 y 4). Las excepciones pueden deberse
a variaciones en los puntos de corte de la endonucleasa en el cromosoma bacteriano o a la
presencia de bandas correspondientes a plsmidos. De hecho dentro del linaje CC5, ST5 ha
demostrado ser bastante variable en cuanto a SNPs (Nbel et al., 2008). Otros autores
tambin han encontrado casos de perfiles PFGE asignados a CC1, CC5 CC30 y/o CC45 que
se distanciaban en el dendograma de otros perfiles del mismo CC (Rabello et al., 2007;
Bartels et al., 2008; Vainio et al., 2008). Este fenmeno tambin se ha sido observado por
otros autores en otros CCs mayoritarios, como CC8, (Shabir et al., 2010), pero no en nuestros
estudios. Por otro lado, los pulsotipos de aislamientos de portadores sanos pertenecientes a
CC1, CC9 y CC97 se agruparon en un mismo cluster por PFGE, fenmeno posiblemente
debido a que estos linajes estn relativamente relacionados (Artculo 4). El fundador del
CC1, es ST1 (arcC 1, aroE 1, gplF 1, gmk 1, pta 1, tpi 1, yqiL 1) que comparte 4 de los 7
alelos utilizados para definir el ST con los correspondientes a los linajes CC9 (ST109: arcC
3, aroE 27, gplF 1, gmk 1, pta 1, tpi 1, yqiL 10) y CC97 (ST97: arcC 3, aroE 1, gplF 1,
gmk 1, pta 1, tpi 5, yqiL 3).
Por otro lado, ciertos perfiles de restriccin fueron idnticos en aislamientos
procedentes del HUCA y de PS (Artculo 4), destacando el hecho de que entre estos perfiles
se encontraban algunos de los ms frecuentes en los linajes CC5/ST5, CC30 y CC45. Como
en este caso, otros estudios han demostrado que los mismos linajes (Day et al., 2001; Feil et
al., 2003; Hotfreter et al., 2007; Lamers et al., 2011) y perfiles PFGE (Peacock et al., 2002)
tienen xito tanto en la colonizacin de seres humanos como en la produccin de enfermedad.
De hecho, la colonizacin por S. aureus es uno de los mayores factores de riesgo de
infeccin, siendo el 80% de las infecciones nosocomiales de origen endgeno (Wertheim et
al., 2005). En este mismo sentido, el perfil HUCA-S48, generado por un aislamiento
MRSA SCCmec IVc del CC72, es casi idntico al perfil PS-S145 de un aislamiento
MSSA del mismo linaje. Estos perfiles slo se diferencian en una banda, de 143,8 kb en
el aislamiento MSSA y de 196,2 kb en el MRSA (Artculo 4). La hibridacin de esta
ltima banda con una sonda para mecA apoya la avalada teora multiclon, que propone la
repetida introduccin de distintos tipos de SCCmec en aislamientos de un mismo o de
diferentes linajes como origen de los clones MRSA (Deurenberg y Stobberingh, 2009). De
hecho ya se ha demostrado que los linajes MSSA presentes en una comunidad constituyen un
reservorio para la captacin de SCCmec (Gomes et al., 2006; Layer et al., 2006). Adems,
anlisis recientes de SNPs en poblaciones de S. aureus estiman que la introduccin de
elementos mec en MSSA es ms comn de lo que se pensaba anteriormente lo que genera una
mayor diversidad de clones MRSA (Nbel et al., 2008).
158
4. Discusin
CC5
ST1
ST3
ST188
Total
ST5
ST6
ST125
ST146
ST228
ST1619
nd
Total
ST8
ST239
ST247
nd
Total
CC9 ST9
ST109
Total
CC12 ST12
nd
Total
CC15 ST14
ST15
CC8
ST582
ST620
nd
Total
CC22 ST217
CC25 ST25
ST26
nd
Total
CC30 ST30
ST34
ST433
ST605
nd
Total
t127, t3201
t177
t189
t001, t002, t045, t179,
t548, t2173, t6488
t701
t067, t3734
t002, t1560
t109
t166
t001, t002, t067, t071,
t242, t306, t1340
t008, t024, t351
t037
t051
t008, t051
t337, t1430
t209
t160
t1381
las poblaciones de
ALM
(N=64)
n (%)
1 (1,2)
1 (1,6)
1 (1,6)
10 (16,1)
1 (0,9)
2 (1,8)
1 (0,9)
4 (3,6)
5 (5,5)
1 (1,6)
1 (1,6)
3 (4,7)
4 (4,9)
3 (3,7)
37 (45,7)
5 (8,1)
2 (3,2)
1 (1,6)
4 (6,5)
16 (14,4)
4 (6,3)
4 (6,3)
1 (1.6)
1 (1,6)
45 (55,6)
1 (1,2)
1 (1,2)
1 (1,2)
2 (2,5)
3 (3,7)
2 (2,5)
22 (35,5)
2 (3,2)
3 (4,8)
6 (9,7)
1 (1,6)
12 (19,4)
1 (1,6)
5 (8,1)
21 (18,9)
1 (0,9)
1 (0,9)
4 (3,6)
4 (3,6)
2 (1,8)
13 (20.3)
1 (1,6)
1 (1,6)
2 (3,1)
2 (3,1)
1 (1,6)
7 (11,3)
2 (3,2)
2 (3,2)
2 (3,2)
4 (3,6)
7 (6,3)
13 (11,7)
4 (3,6)
5 (4,5)
9 (8,1)
5 (4,5)
2 (3,1)
2 (3,1)
1 (1,6)
1 (1,6)
7 (10,9)
t279
t084, t085, t120, t279,
t547, t3474, t5111
t085
t346
t084, t2949, t7248, t7756 1 (1,2)
3 (3,7)
t790
t078, t081, t167, t1054
1 (1,2)
t7125
t078, t081, t287, t6489
2 (2,5)
3 (3,7)
t012, t017, t018, t021,
2 (2,5)
t122, t840
t136, t166, t6490
1 (1,2)
t318
t275
t018, t012, t021, t253,
12 (14,8)
t942, t1515, t6713, t7785
15 (18,5)
2 (3,2)
AN
(N=109)
n (%)
1 (0,9)
-
1 (0,9)
2 (1,8)
2 (1,8)
-
3 (2,7)
3 (4,7)
3 (2,7)
19 (17,1) 3 (4,7)
1 (0,9)
-
30 (27,0) 13 (20,3)
1 (0,9)
159
4. Discusin
Tabla 6 (continuacin). Complejos clonales, secuencias tipo y tipos spa encontrados en las
poblaciones de Staphylococcus aureus estudiadas en esta Tesis doctoral.
HUCA HMN
PS
ALM
AN
a
a
a
CC
ST
Tipos spa
(N=81) (N=62) (N=111) (N=64)
(N=109)
n (%)
n (%)
n (%)
n (%)
n (%)
t015, t026, t040, t050,
t065, t350, t1078, t1618
ST47 t383
ST546 t604
nd
t015, t026, t050, t282,
t798, t1618, t1494, t1618
Total
CC59 ST59 t216
nd
t3952
Total
CC72 ST72 t148
nd
t148
Total
CC88 ST88 t1814
CC97 ST97 t267
nd
t1877
Total
CC121 ST121 t159, t272
ST51 t272
nd
t159, t375
Total
CC398 ST398 t011, t034, t108, t571,
t779, t1250, t1255, t1451,
t1457, t1580, t1793, t1928,
t1985, t2011, t2346, t2576,
t2970, t5210
CC45
ST45
1 (1,2)
6 (9,7)
4 (3,6)
6 (9,4)
1 (1,2)
6 (7,4)
3 (4,8)
14 (12,6)
1 (1,6)
17 (26,6)
8 (9,9)
1 (1,2)
1 (1,2)
1 (1,2)
1 (1,2)
1 (1,2)
1 (1,2)
-
9 (14,5)
1 (1,6)
1 (1,6)
1 (1,6)
1 (1,6)
3 (4,8)
2 (3,2)
2 (3,2)
-
18 (16,2)
2 (1,8)
1 (0,9)
3 (2,7)
1 (0,9)
1 (0,9)
2 (1,8)
2 (1,8)
1 (0,9)
3 (2,7)
1 (0,9)
2 (1,8)
3 (2,7)
-
24 (37,5)
5 (7,8)
5 (7,8)
1 (1,6)
1 (1,6)
105 (96,3)
Las secuencias tipo (ST) y los tipos spa se determinaron por MLST y tipificacin spa,
respectivamente. Los complejos clonales (CC) se establecieron en base a STs, tipos spa y/o a los
resultados del test RM. bLos tipos spa t6488, t6489 y t6490 son de nueva descripcin. AN,
aislamientos procedentes de animales; ALM, aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores
de alimentos; HMN, aislamientos procedentes del Hospital Monte Naranco; HUCA, aislamientos
procedentes del Hospital Universitario Central de Asturias; PS, aislamientos procedentes de portadores
sanos; N, nmero total de aislamientos; n, nmero de aislamientos de cada grupo y tipo; nd, no
determinado.
4. Discusin
301
403
135
237
144
107
34
7
5,3
9,7
14,1
27,0
0,987 (0,984-0,990)
0,969 (0,963-0,976)
0,946 (0,960-0,932)
0,800 (0,783-0,817)
4. Discusin
entre PFGE y MLST (Tabla 7), existiendo una gran correlacin con ambas tcnicas
(Cookson et al., 2007; Hallin et al., 2007b). Durante un tiempo, la comparacin de datos spa
resultaba complicada debido a la existencia de dos nomenclaturas: la americana basada en el
estudio de Koreen et al. (2004) y la europea propuesta por Harmsen et al. (2003).
Actualmente, la nomenclatura europea es la ms utilizada ya que existe un software (Ridom
StaphType, Ridom GmbH) para su determinacin, el cual est conectado a una amplia base de
datos disponible en la web (Friedrich et al., 2006; http://www.seqnet.org/;
http://www.spaserver.ridom.de/).
En esta Tesis doctoral la tipificacin spa ha permitido, en la mayora de los casos,
asignar correctamente los aislamientos a los CCs establecidos por MLST (Tabla 6). Los
linajes CC5, CC15, CC25, CC30, CC45 y CC398 de dispersin mundial, incluyeron un
mayor nmero de tipos spa. Por otro lado, la mayora de los STs identificados se asociaron a
varios tipos spa y en ocasiones el mismo spa apareci ligado a ms de un ST dentro del
mismo CC.
Respecto a la poblacin del HUCA, mediante PFGE se agruparon en un cluster de
CC45/ST47, dos aislamientos con tipo spa t081, el cual est relacionado con CC25. Este
fenmeno se debe probablemente a que la tcnica PFGE no gener un cluster homogneo de
aislamientos CC45 (Bartels et al., 2008; Vainio et al., 2008), y no a la adquisicin de este spa
por dichos aislamientos. As, aunque estudios de tipificacin spa y posterior anlisis BURP
han demostrado que los tipos spa dentro del CC45 se distribuyen en varios spa-CCs, que en
muchos casos incluyen aislamientos de otros CCs, como CC1, CC5, CC15 o CC30 (Nulens et
al., 2008, von Eiff et al., 2008, Deurenberg et al., 2009), el anlisis MLST de una de las cepas
t081 del HUCA demostr su adscripcin a ST25 (Anexo II).
El linaje CC398 fue el ms heterogneo en cuanto a tipos spa. Este fenmeno se debe
en parte a la seleccin de la muestra analizada, que pretenda abarcar la mayor diversidad. Sin
embargo, el 77% de los aislamientos estudiados presentaron los tipos t011, t034 y t108,
mayoritarios de este linaje (Rasschaert et al., 2009; Graveland et al., 2010; Hasman et al.,
2010), mientras que el resto slo apareci en 1, 2 o 4 aislamientos. El anlisis BURP de todos
los tipos spa detectados en los aislamientos CC398 analizados en nuestro trabajo indic que
el 80% estaban relacionados, siendo t011 el fundador ms probable (Figura 9). Estos datos,
estn de acuerdo con los obtenidos por el NRL-Staph de Alemania, que en una muestra ms
amplia encontr una gran variabilidad de tipos spa menos frecuentes, la mayora relacionados
con los mayoritarios (Tenhagen et al., 2009).
4. Discusin
et al., 2007; Melles et al., 2007). Adems, es una tcnica relativamente fcil de aplicar
cuya base de datos est continuamente aumentado, y actualizndose debido al
descubrimiento de nuevos STs (http://www.mlst.net/). Sin embargo, se trata de una
tcnica costosa que no est al alcance de cualquier laboratorio.
El MLST se ha utilizado en aislamientos representativos de cada poblacin
estudiada en esta Tesis Doctoral para establecer su pertenencia a un determinado linaje
y/o clon MRSA (Anexo II, Apartados 4.1.2. y 4.3.2.).
Figura 9. Agrupacin BURP de los tipos spa del CC398. El diagrama fue realizado utilizando el
software Ridom Staphtype (Ridom GmbH; Wrzburg), y se bas en el sistema BURP (based upon
repeat pattern) sin excluir tipos spa con menos de cinco repeticiones. El 80% de los tipos spa del
CC398 (correspondientes al 91% de los aislamientos) se agruparon en un nico cluster, siendo t011
(08-16-02-25-34-24-25) el tipo spa fundador (color azul). Varios tipos infrecuentes: t2510 (08-1725), t2576 (08-12-16-02-25-34-24-25), t2970 (08-16-02-25-34-34-24-25) y t5210 (08-16-02-25-2534-24-25) no se incluyeron en este cluster. El tamao de los crculos es proporcional al nmero de
aislamientos que pertenece al tipo spa indicado.
4. Discusin
1
1
91
43
177
125
260
209
327
299
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-LMUO25/05
416
389
502
462
588
552
678
642
768
732
858
822
948
912
1038
1002
1128
1092
B.
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25_05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-LMUO25/05
1182
AF5 AGGGTTTGAAGGCGAATGGG
ATGAGTAATACACAAAAGAAAAATGTGCCAGAGTTGAGATTCCCAGGGTTTGAAGGCGAATGGGAAGAGAAGCAGTTGGGGGATCTTACA
------------------------------------------------TTTGAAGGCGAATGGGAAGAAAAGAAGTTAGGGAATCTTACT
GATAGAGTAATTAGGAAAAATAA----AAACTTAGAATCGAAAAAGCCTTTAACAATATCCGGACAGTTAGGTTTAATTGATCAAACAGA
ACCAAAATAGGTAGTGGAAAGACTCCCAAAGGTGGAAGTGAAAA---CTATACAAACAAAGGCATA-CCATTTTTAAGGAGTCAAA---ATATTTTAGTAAA--TCAGTTTCGTCGAAAAATCTAGAAAATTATACACTAATAAAGA-----ATGGAGAATTCGCGTATAACAAAAGTT
--ATATTAGAAATGGTAAATTAAATCTTAATGACT----TAGTTTATATTAGTAAAGATATAGATGATGAGATGAAAAATAGTAGAACGT
ATTCTAATGGA-------TACCCATTAGGGGCT-ATTAAAAG-----------ATTAACTAGATA--TGATAGTGGTGT--ATTGTCCTC
ACTATGGTGATGTTCTTTTAAATATTACAGGAGCATCAATAGGTAGAACAGCCATTAATTCGATAGTTGAAACGCATGCTAATTTAAATC
TTTGTATATTTGTTTTTCTATTAAAAGTGAAATGTC-TAAAGACTTCATGGAAGCATATTTTGATTCGACACACTGGTATAGAGAAGTTT
AACATGTATGTATTATTAGATTAAAAAAAGAGTATTATTATAATTTTTTTGGACAGTATCTATTATCAAGAAAAGGTAAAAGAAAAATTT
AR5 CGTCAACTCCCACGTTCTTTAG
CTGGAATTGCAGTTGAGGGTGCAAGAAATCACGGATTATTAAATGTTTCTGTGAATGATTTTTTTACTATTCTAATTAAATATCCA------TCCTTGCAC---AAAGTGGAGGTAGTCGAGAAGGACTAAA--CTTCAAAGAA-------ATTGCTAATTTAA--AAATCTTCACCCC
----AGTTTAGAAGAACAGCAAAAAATAGGCAAGTTCTTCAGCAAACTCGACCGACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAGCTTGAATTACT
AACTATATTTGAAGAACAACAAAAAATAGGACAATTCTTCAGCAAACTTGACCAACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTACT
TCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAAATTTTCTCACAGGAACTGCGATTCAAAGATGAGAATGGTGAAGATTATCCAGATTGGGA
TCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAAATCTTCTCACAGGAACTGCGATTCAAAGATGAGAATAGTGAAGATTATCCACATTGGGA
AAATAGCAAAATAGAAAAATATTTAAAAGAGAGAAACGAACGTTCTGACAAAGGGCAAATGCTTTCAGTAACTATAAATAGTGGCATTAT
AAGTAGCAAAATAGAAAAATATTTAAAAGAGAGAAACGAACGTTCTGACAAAGGTCAAATGCTTTCAGTAACTATAAATAGTGGCATTAT
AAAATTTAGTGAATTGGATAGAAAAGATAATTCAAGTAAAGATAAAAGTAATTATAAAGTAGTTAGGAAAAATGATATTGCATATAATTC
AAAATTTAGTGAATTGGATAGAAAAGATAATTCAAGTAAAGATAAAAGTAATTATAAAGTAGTTAGGAAAAATGATATTGCATATAATTC
TATGAGAATGTGGCAAGGGGCTAGTGGTAAATCAAATTATAATGGGATTGTTAGCCCTGCATATACTGTGCTTTATCCAACACAAAATAC
TATGAGAATGTGGCAAGGGGCTAGTGGTAAATCAAATTATAATGGGATTGTTAGCCCTGCATATACTGTGCTTTATCCAACACAAAATAC
TAGCTCATTATTTATTGGATATAAGTTTAAAACACATAGAATGATTCATAAATTTAAAATTAATTCACAAGGATTAACATCAGATACATG
TAGCTCATTATTTATTGGATATAAGTTTAAAACACATAGAATGATTCATAAATTTAAAATTAATTCACAAGGATTAACATCAGATACATG
GAACTTAAAATATAAACAATTAAAAAATATAAATATAGATATACCTGTATTGGAGGAACAAGAAAAGATAGGTGATTTCTTTAAAAAAAT
GAACTTAAAATATAAACAATTAAAAAATATAAATATAGATATACCTGTATTGGAGGAACAAGAAAAGATAGGTGATTTCTTTAAAAAAAT
GGATATATTGATAAGTAAACAGAAAATGAAAATTGAAATATTAGAAAAAGAGAAACAATCCTTTTTACAAAAAATGTTCTTATAA----GGATATATTGATAAGTAAACAGAAAATGAAAATTGAAATATTAGAAAAAGAGAAACAATCCTTTTTACAAAAAATGTTCTTATAACTTTG
---------------------------------------------------------------ATAAATACATAGATTGCATAAGAATAAAATTTGTATAATTTAACATATAAGTGTAAAAGTAAAA
1 ATGAGTAATACACAAACGAAAAATGTGCCAGAGTTGAGATTCCCAGGATTTGAGGGCGAATGGGAAGAGAAGAAGTTAGGGAATCTTACT
1 ---AGT-ATACACAA---AGAAATTTGCCAGAGTTGAGATTCCCAGGGTTTGAAGGCGAATGGGAAGAAAAGAAGTTAGGGAATCTTACT
BF CCCAAAGGTGGAAGTGAAAA
ACCAAAATAGGTAGTGGAAAGACTCCCAAAGGTGGAAGTGAAAACTATACAAACAAAGGCATACCATTTTTAAGGAGTCAAAATATTAGA
ACCAAAATAGGTAGTGGAAAGACTCCCAAAGGTGGAAGTGAAAACTATACAAACAAAGGCATACCATTTTTAAGGAGTCAAAATATTAGA
AATGGTAAATTAAATCTTAATGACTTAGTTTATATTAGTAAAGATATAGATGATGAGATGAAAAATAGTAGAACGTACTATGGTGATGTT
AATGGTAAATTAAATCTTAATGACTTAGTTTATATTAGTAAAGATATAGATGATGAGATGAAAAATAGTAGAACGTACTATGGTGATGTT
CTTTTAAATATTACAGGAGCATCAATAGGTAGAACAGCCATTAATTCGATAGTTGAAACGCATGCTAATTTAAATCAACATGTATGTATT
CTTTTAAATATTACAGGAGCATCAATAGGTAGAACAGCCATTAATTCGATAGTTGAAACGCATGCTAATTTAAATCAACATGTATGTATT
ATTAGATTAAAAAAAGAGTATTATTATAATTTTTTTGGACAGTATCTATTATCAAGAAAAGGTAAAAGAAAAATTTTCCTTGCACAAAGT
ATTAGATTAAAAAAAGAGTATTATTATAATTTTTTTGGACAGTATCTATTATCAAGAAAAGGTAAAAGAAAAATTTTCCTTGCACAAAGT
GGAGGTAGTCGAGAAGGACTAAACTTCAAAGAAATTGCTAATTTAAAAATCTTCACCCCAACTATATTTGAAGAACAACAAAAAATAGGA
GGAGGTAGTCGAGAAGGACTAAACTTCAAAGAAATTGCTAATTTAAAAATCTTCACCCCAACTATATTTGAAGAACAACAAAAAATAGGA
CAATTCTTCAGCAAACTTGACCAACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTACTTCAACAACAGAAAAAATGCTATATACAGAAA
CAATTCTTCAGCAAACTTGACCAACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTACTTCAACAACAGAAAAAATGCTATATACAGAAA
ATCTTCTCACAAGAATTACGATTCAAAGATGAAGAAGGTAATTACTATAAAGGATGGAACAAAAAGCAATTAAAAGATGTATTAGAATTT
ATCTTCTCACAAGAATTACGATTCAAAGATGAAGAAGGTAATTACTATAAAGGATGGAACAAAAAGCAATTAAAAGATGTATTAGAATTT
AGTAATAAAAGAACTATTAATGAAAATGAATATCCTGTTTTAACATCGTCAAGACAAGGTTTAATACTTCAGTCAGACTACTATAAAGAT
AGTAATAAAAGAACTATTAATGAAAATGAATATCCTGTTTTAACATCGTCAAGACAAGGTTTAATACTTCAGTCAGACTACTATAAAGAT
AGGAAAACTTTTGCAGAGAGTAATATTGGGTATTTCATACTCCCTAAAAATCATATAACATACCGTTCAAGAAGCGACGATGGAATTTTT
AGGAAAACTTTTGCAGAGAGTAATATTGGGTATTTCATACTCCCTAAAAATCATATAACATACCGTTCAAGAAGCGACGATGGAATTTTT
AAGTTTAATTTAAATCTAATGATTGATGTAGGTATTATTAGTAAATATTACCCTGTCTTTAAAGGGATAGATGCAAATCAATATTATTTA
AAGTTTAATTTAAATCTAATGATTGATGTAGGTATTATTAGTAAATATTACCCTGTCTTTAAAGGGATAGATGCAAATCAATATTATTTA
ACATTACACTTAAACTATCAACTGAAAAAAGAATATATTAAATATGCAACTGGTACATCACAATTGGTACTCTCACAAAAAGACTTGCAA
ACATTACACTTAAACTATCAACTGAAAAAAGAATATATTAAATATGCAACTGGTACATCACAATTGGTACTCTCACAAAAAGACTTGCAA
BR5 GTTAGA
1081 AACATAAAGACTAAATTGCCATCTTATGAAGAACAACAAAAAATCGGTGATTTTTTCAGTGAAATAGATAGATTGGTTGAAAAACAATCT
1074 AACATAAAGACTAAATTGCCATCTTATGAAGAACAACAAAAAATCGGTGATTTTTTCAGTGAAATAGATAGATTGGTTGAAAAACAATCT
AGTTTTCAGCCTGCT
1171 TCAAAAGTCGGACGATTAAAAGTACGTAAAAAAGAACTATTACAAAAAATGTTTGTTTAA
1164 TCAAAAGTCGGACGATTAAAAGTACGT--------------------------------91
84
181
174
271
264
361
354
451
444
541
534
631
624
721
714
811
804
901
894
991
984
Figura 10. Comparaciones de las secuencias de los genes sau1hsdS de los linajes CC5 y
CC25. A. Comparacin de las secuencias de los genes sau1hsdS1 de CC5 (N315, NC_002745.2) y
CC25 (obtenida a partir de los aislamientos: C57, C285, LMUO 8/01, LMUO 25/05 y LMUO 2/06).
Se indican los oligonucletidos (AF y AR5) diseados para distinguir aislamientos de uno y otro linaje
en base al gen sau1hsdS1 (Anexo I). B. Comparacin de las secuencias de los genes sau1hsdS2 de
CC5 (N315, NC_002745.2) y CC25 (obtenida a partir de los aislamientos: C57, C285, LMUO 8/01,
LMUO 25/05 y LMUO 2/06). Se incluyen los oligonucletidos (BF y BR5) propuestos para la
deteccin de CC5 (Cockfiel et al., 2007).
164
4. Discusin
A.
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
1 ATGAGTAATACACAAAAGAAAAATGTGCCAGAGTTGAGATTCCCAGGGTTTGAAGGCGAATGGGAAGAGAAGCAGTTGGGGGATCTTACA
1 ATGAGTAATACACAAAAGAAAAATGTGCCAGAATTGAGGTTCCCAGGGTTTGAAGGCGAATGGGAAGAGAAGCAGTTAGGGGATCTTACA
1 ----------------AAAGAAATGTGCCAGAGTTGAGGTTCCTAGGGTTTGAAGGCGAATGGGAAGAGAAGCAGTTAGGGGATATTATA
91 GATAGAGT-AATTAGGAAAAA---TAAAAACTTAGAATCGAAAAAGCC--TTTAACAATATCCGGACAGTTAGGTTTAATTGATCAAA-91 GATAGAGT-AATTAGGAAAAA---TAAAAACTTAGAATCGAAAAAGCC--TTTAACAATATCCGGACAGTTAGGTTTAATTGATCAAA-75 ---AAAGTTAATTCTGGAAAAGATTATAAACAT---TTGGATAAAGGCGATATACCAGTCTATGGT-ACTGGCGGTTATATGA-CAAGTG
173 ---CAGAATATTTTAGTAAATCAGTTTC-GTCGAAAAATCTAGAAAATTATACACTAATAAAGAATGGAGAATTCGCGTATAACAAAAGT
173 ---CAGAATATTTTAGTAAATCAGTTTC-GTCGAAAAATCTAGAAAATTATACACTAATAAAGAATGGAGAATTCGCGTATAACAAAAGT
157 TTTCAGAACCACTAAGTGAAATTGATGCTGTTGGTATTGGGAGAAAAGGGACTATAAACAAACCAT-----ATTTGCTTGAGGCGCCGTT
259 TATTCTAATGGATACCCATTAGGGGCTATTAAAAGATTAACTAGATATGATAGTGGTGTATTGTCCTCTTTGTATATTTGTTTTTCTATT
259 TATTCTAATGGATACCCATTAGGGGCTATTAAAAGATTAACTAGATATGATAGTGGTGTATTGTCCTCTTTGTATATTTGTTTTTCTATT
242 TTGGACGGTGGATA--CATTA------TTTTATTGTACACCTAAAAAAGAAACAGACATA-------CTATTTATATTAAGTTTATTTAG
349 AAAAGTGAAATGTCTAAAGACTTCATGGAAGCATATTTTGATTCGACACACTGGTATAGAGAAGTTTCTGGAATTGCAGTTGAGGGTGCA
349 AAAAGTGAAATGTCTAAAGACTTCATGGAAGCATATTTTGATTCGACACACTGGTATAGAGAAGTTTCTGGAATTGCAGTTGAGGGTGCA
317 AAAAATAAACTG--------------GAAAGTATACGATGAATCAACA----GGTGT-GCCAAGCTTAAGCA-----------------A
439 AGAAATCACGGATTATTAAATGTTTCTGTGAATGATTTTTTTACTATTCTAATTAAATATCCAAGTTTAGAAGAACAGCAAAAAATAGGC
439 AGAAATCACGGATTATTAAATGTTTCTGTGAATGATTTTTTTACTATTCTAATTAAATATCCAAGTTTAGAAGAACAGCAAAAAATAGGC
371 ACAAACC----ATTAATAAA-------ATAAATAGATTTGTCCCTA-------CAAATA-----------AAGAGCAGCAAAAAATAGGC
529 AAGTTCTTCAGCAAACTCGACCGACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAGCTTGAATTACTTCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAA
529 AAGTTCTTCAGCAAACTCGACCGACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAGCTTGAATTACTTCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAA
432 AAGTTCTTCAGCAAACTCGACCGGCAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTACTTCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAA
619 ATTTTCTCACAGGAACTGCGATTCAAAGATGAGAATGGTGAAGATTATCCAGA---------TTGGGAAAATAGCAAAATAGAAAAATAT
619 ATTTTCTCACAGGAACTGCGATTCAAAGATGAGAATGGTGAAGATTATCCAGA---------TTGGGAAAATAGCAAAATAGAAAAATAT
522 ATCTTCTCGCAAGAATTGCGATTCAAAGATGAGAATGGTAATGATTATCCGGAAAGTCTACTTTATAAACTTAGCGAGATTG--GAACAT
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
sau1hsdS1-N315
sau1hsdS1-COL
sau1hsdS1-B2-5/02
700
700
610
775
775
699
857
857
787
929
929
877
1013
1013
952
1103
1103
1036
1192
1192
1125
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
1 ATGAGTAATACACAAACGAAAAATGTGCCAGAGTTGAGATTCCCAGGATTTGAGGGCGAATGGGAAGAGAAGAAGTTAGGGAATCTTACT
1 ATGAGTAATACACAAAAGAAAAATGTGCCAGAATTGAGATTCCCAGGATTTGAAGGCGAATGGGAAGAGAAGAAGTTAGGGAATCTTACT
1 --------------------AAATGTGCCAGAGTTGAGATTCCCAGGATTTGAGGGCGAATGGGAAGAGAAGAAGTTAGGGAATCTTACT
BF CCCAAAGGTGGAAGTGAAAA
91 ACCAAAATAGGTAGTGGAAAGACTCCCAAAGGTGGAAGTGAAAACTATACAAACAAAGGCATACCATTTTTAAGGAGTCAAAATATTAGA
91 ACCAAAATAGGTAGTGGAAAGACTCCCAAAGGTGGAAGTGAAAACTATACAAACAAAGGCATACCATTTTTAAGGAGTCAAAATATTAGA
71 ACCAAAATAGGTAGTGGAAAGACTCCCAAAGGTGGAAGTGAAAACTATACAAACAAAGGCATACCATTTTTAAGGAGTCAAAATATTAGA
181 AATGGTAAATTAAATCTTAATGACTTAGTTTATATTAGTAAAGATATAGATGATGAGATGAAAAATAGTAGAACGTACTATGGTGATGTT
181 AATGGTAAATTAAATCTTAATGACTTAGTTTATATTAGTAAAGATATAGATGATGAGATGAAAAATAGTAGAACGTACTATGGTGATGTT
161 AATGGTAAATTAAATCTTAATGACTTAGTTTATATTAGTAAAGATATAGATGATGAGATGAAAAATAGTAGAACGTACTATGGTGATGTT
271 CTTTTAAATATTACAGGAGCATCAATAGGTAGAACAGCCATTAATTCGATAGTTGAAACGCATGCTAATTTAAATCAACATGTATGTATT
271 CTTTTAAATATTACAGGAGCATCAATAGGTAGAACAGCCATTAATTCGATAGTTGAAACGCATGCTAATTTAAATCAACATGTATGTATT
251 CTTTTAAATATTACAGGAGCATCAATAGGTAGAACAGCCATTAATTCGATAGTTGAAACGCATGCTAATTTAAATCAACATGTATGTATT
361 ATTAGATTAAAAAAAGAGTATTATTATAATTTTTTTGGACAGTATCTATTATCAAGAAAAGGTAAAAGAAAAATTTTCCTTGCACAAAGT
361 ATTAGATTGAAAAAAGAGTATTATTATAATTTTTTTGGACAGTATCTATTATCAAGAAAAGGTAAAAGGAAAATTTTCCTTGCACAAAGT
341 ATTAGATTGAAAAAAGAGTATTATTATAATTTTTTTGGACAGTATCTATTATCAAGAAAAGGTAAAAGGAAAATTTTCCTTGCACAAAGT
451 GGAGGTAGTCGAGAAGGACTAAACTTCAAAGAAATTGCTAATTTAAAAATCTTCACCCCAACTATATTTGAAGAACAACAAAAAATAGGA
451 GGAGGTAGTCGAGAAGGTCTAAACTTCAAAGAAATTGCTAATTTAAAAATCTTCACCCCAACTATATTTGAAGAACAGCAAAAAATAGGC
431 GGAGGTAGTCGAGAAGGTCTAAACTTCAAAGAAATTGCTAATTTAAAAATCTTCACCCCAACTATATTTGAAGAACAGCAAAAAATAGGC
541 CAATTCTTCAGCAAACTTGACCAACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTACTTCAACAACAGAAAAAATGCTATATACAGAAA
541 AAGTTCTTCAGCAAACTCGACCGACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTGCTTCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAA
521 AAGTTCTTCAGCAAACTCGACCGACAAATTGAATTAGAAGAACAAAAACTTGAATTGCTTCAACAACAGAAAAAAGGCTATATGCAGAAA
631 ATCTTCTCACAAGAATTACGATTCAAAGATGAAGAAGGTAATTACTATAAAGGATGGAACAAAAAGCAATTAAAAGATGTATTAGAATTT
631 ATCTTCACACAAGAATTGCGATTCAAAGATGAGAATGGTGAAGAATATCCAGAGTGGGAAAACAAATTCATAAAAGACATCTTTATCTTT
611 ATCTTCACACAAGAATTGCGATTCAAAGATGAGAATGGTGAAGAATATCCAGAGTGGGAAAACAAATTCATAAAAGACATCTTTATCTTT
BR8
ATG
GGAATGATACCAC
721 AGTAATAAAAGAACTATTAATGAAAATGAATATCCTGTT--TTAACATCGTCAAGACAAGGTTTAATACTTCAGTCAGACTACTATAAAG
721 GAAAATAATAGAA--------GAAAACCAATTACTTCTTCATTAA-------GAGAAAAGGGGTTATAC--------CCTTACTATGGTG
701 GAAAATAATAGAA--------GAAAACCAATTACTTCTTCATTAA-------GAGAAAAGGGGTTATAC--------CCTTACTATGGTG
GTTGACC
809 ATAGGAAAACTTTTGCAGA-GAGTAATATTGGGTATTTCATACTCCCTAAAAATCATATAACAT------ACCGTTCAAGAAGCGACGAT
788 CAACTGGAATTATTGATTACGTAAAAGATTATTTATTCAATAATGAAGAACGATTA-CTAATAGGAGAAGATGGTGCAAAATGGG----768 CAACTGGAATTATTGATTACGTAAAAGATTATTTATTCAATAATGAAGAACGATTA-CTAATAGGAGAAGATGGTGCAAAATGGG----892 GGAATTTTTAA--GTTTAATTTAAAT-CTAATGATTGATGTAGGTATTATTAGTAAATATTACCCTGTCTTTAAAGGGATAGATGCAAAT
872 GGCAGTTTGAGACGAGTAGCTTTATTGCTAATGGGCAATACTGG----GTAAATAATCATGCGCATGTAGTTAAAAGTAATGATCATAAT
852 GGCAGTTTGAGACGAGTAGCTTTATTGCTAATGGGCAATACTGG----GTAAATAATCATGCGCATGTAGTTAAAAGTAATGATCATAAT
979 CAATATTATTTAACATTACACTTAAACTATCAACTGAAAAAAGAATATATTAAATATGCAACTGGTACATCACAATTGGTACTCTCACAA
958 TTGTTTTTTATGAATTATTATTTAAATTTT---------AAAGAACTACGAGCATTTGTCACAGGTAATGCACCAGCTAAATTAACTCAT
938 TTGTTTTTTATGAATTATTATTTAAATTTT---------AAAGAACTACGAGCATTTGTCACAGGTAATGCACCAGCTAAATTAACTCAT
1069 AAAGACTTGCAAAACATAAAGACTAAATTGCCATCTTATGAAGAACAACAAAAAATCGGTGATTTTTTCAGTGAAATAGATAGATTGGTT
1039 GCGAACTTATGCAATATAAATCTTAAAATACCTTGTCTCACTGAACAAGATAAAGTAAGTGCATTGT----TAAAATCTATAGA---CAA
1019 GCGAACTTATGCAATATAAATCTTAAAATACCTTGTCTCACTGAACAAGATAAAGTAAGTGCATTGT----TAAAATCTATAGA---CAA
BR5 GTTAGAAGTTTTC
AGCCTGCT
1159 GAAAAACAATCTTCAAAAG-------TCGGACGATTAAAAGTACGTAAAAAAGAACTATTACAAAAAATGTTTGTTTAA
1122 TAAAATGAATAATCAAATGAATAGAATTGAGTTATTAAAAGAACGTAAAAAAGGACTATTACAAAAAATGTTTATTTAA
1102 TAAAATGAATAATCAAATG-----------------------------AATAGAA---------------TTCAATTA-
B.
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
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sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
sau1hsdS2-N315
sau1hsdS2-COL
sau1hsdS2-B2-5/02
TTAAAAGAGAGAAACGAACGTTCTGACA---------------AAGGGCAAATGCTTTCAGTAACTATAAATAGTGGCATTATAAAATTT
TTAAAAGAGAGAAACGAACGTTCTGACA---------------AAGGGCAAATGCTTTCAGTAACTATAAATAGTGGCATTATAAAATTT
TTAATACTG-GTATTGGATTTCCTGAAAGTTTACAGGGTGGGAAAGAAGGAATACCTTTCTTTAAAATTTCTGATATGAATAATAAAGGC
AGTGAATTGGATA---GAAAAGATAATTCAAGTAAAGATAAAA-GTAATTATAAAGT---AGTTAGGAAAAATGATATTGCATATAAT-T
AGTGAATTGGATA---GAAAAGATAATTCAAGTAAAGATAAAA-GTAATTATAAAGT---AGTTAGGAAAAATGATATTGCATATAAT-T
AATGAAATAATTATGAGAAATGCTAAT--AACTACGTTTCAAATGGGATTATAGAGTCTAAAAAATGGAAAATTATAACTAACGTACCAT
CTATGAG--------AATGTGGCAAGGGGCTAGTGGTAAATCAAATTATAATGGG---------ATTGTTAGCCCTGCATA-TACTGTGC
CTATGAG--------AATGTGGCAAGGGGCTAGTGGTAAATCAAATTATAATGGG---------ATTGTTAGCCCTGCATA-TACTGTGC
CTATGATTTTTGCTAAAGTTGGAGCTGCAATAATGTTGAATCGAAAAAGATTAGTTTTAGAACCATTTTTAATCGATAACAATACTATGA
TTTATCCAACA-CAAAATACTAGCTCATTATTTATTGGATATAA--GTTTAAAACACATAGAATGATTCATAAATTTA---AAATTAATT
TTTATCCAACA-CAAAATACTAGCTCATTATTTATTGGATATAA--GTTTAAAACACATAGAATGATTCATAAATTTA---AAATTAATT
GTTATTCATTTTCGCAAGAATGGAACATTAATTTTGGAAGAACATTGTTTCAAAC-------------CATTTATTTACCTAAAT--ATG
CACAAGGATTAACATCAGATACATGGAACTTAAAATATAAACAATTAAAAAATATAAATATAGATATACCTGTATTGGAGGAACAAGAAA
CACAAGGATTAACATCAGATACATGGAACTTAAAATATAAACAATTAAAAAATATAAATATAGATATACCTGTATTGGAGGAACAAGAAA
CCCAGGTTGGTGCACTTCCATCATACAATGCAAAAGATATTGGATTA------ATTAAAATAGAATTACCTGTCAAAGAGGAACAAAAAA
AGATAGGTGATTTCTTTAAAAAAATGGATATATTGATAAGTAAACAGAAAATGAAAATTGAAATATTAGAAAAAGAGAAACA-ATCCTTT
AGATAGGTGATTTCTTTAAAAAAATGGATATATTGATAAGTAAACAGAAAATGAAAATTGAAATATTAGAAAAAGAGAAACA-ATCCTTT
GAATAGGTGACTTTTTTGTTTGGTTTGAAGAATTAATTGAAAGACAGATATTAAAACTAGATTTATTA-AAAGAGAGAAAAAGAGCGATT
TTACAAAAAATGTTCTTATAA--------------------------------------------------------------------TTACAAAAAATGTTCTTATAA--------------------------------------------------------------------TTACAGAAAATGTTTATTTAATTTGTCGCTACAATATAGTTTTAATTATTTGTTTATTTCAGCTGTTTCATCACACGATATAACTTTATA
------------------------------------1215 AATAAGATGTAAATTTATC
Figura 11. Comparaciones de las secuencias de los genes sau1hsdS de los linajes CC5 y CC8.
A. Comparacin de la secuencia del gen sau1hsdS1 de aislamientos CC5 (N315, NC_002745.2) y
CC8 (COL, CP000046.1) con la secuencia parcial obtenida de un aislamiento ST6/CC5 (B2-5/02). B.
Comparacin de la secuencia del gen sau1hsdS2 de aislamientos CC5 (N315, NC_002745.2) y CC8
(COL, CP000046.1) con la secuencia parcial obtenida de un aislamiento ST6/CC5 (B2-5/02). Se
indican los oligonucletidos (BF, BR5 y BR8) utilizados para la deteccin del linaje CC5 y CC8
mediante el test RM (Cockfiel et al., 2007).
165
4. Discusin
Por otro lado, todos los aislamientos ST6 del linaje CC5, amplificaron el producto de
680 pb esperado para el gen sau1hsdS2 de aislamientos del CC8 en el test RM (Anexo II). La
secuenciacin de los genes sau1hsdS1 y sau1hsdS2 de un aislamiento ST6 (1233 pb de
sau1hsdS1 y 1135 pb de sau1hsdS2) y su comparacin con las secuencias correspondientes a
aislamientos CC5 (N315; ST5, NC_002745.2) y CC8 (COL; ST8, CP000046.1), mostr que
el gen sau1hsdS1 de ST6 slo comparta un 53% de la secuencia con los genes sau1hsdS1 de
CC5 y CC8, mientras que el gen sau1hsdS2 de ST6 era ms similar al de CC8 (94%) que al
de CC5 (72%). De hecho, los oligonucletidos para la deteccin de CC8 tambin reconocen
la secuencia del sau1hsdS2 de ST6 (Figura 11).
A pesar de estos problemas, es necesario destacar que el test RM es una tcnica
rpida, sencilla y de bajo coste, que identifica correctamente los CCs de la mayor parte de los
MRSA que estn circulando actualmente en hospitales. Adems, su combinacin con la
secuenciacin del gen spa puede resolver los falsos negativos del test RM, e identificar otros
linajes que escapan a la deteccin con esta ltima tcnica. Una mejor caracterizacin de los
genes sau1hdsS de los distintos CCs de S. aureus permitir extender an ms la aplicacin del
test RM y solventar los problemas existentes actualmente para la tipificacin de MSSA. En
este sentido, recientemente se ha diseado un nueva reaccin de PCR, basada en sau1hsdS1,
para la deteccin del CC398 (Stegger et al., 2010) y se est intentando ampliar a otros linajes
como CC12, CC15, CC25 y CC59 (Lindsay et al., 2010).
4. Discusin
de linajes encontrados en los dos hospitales de Asturias, CC5, CC8, CC12, CC15, CC25,
CC30, CC45, CC72, CC88 y CC121, pero no CC59, CC72 y CC88, ya haban sido descritos
en hospitales en Espaa (Prez-Roth et al., 2004; Vindel et al., 2006; Potel et al., 2007;
Prez-Vzquez et al., 2008; Manzur et al., 2010; Montesinos et al., 2010). De ellos, CC5,
CC8, CC30 y CC45 fueron los ms comunes, pudiendo considerarse endmicos en uno o
ambos hospitales, mientras que CC12, CC15, CC25, CC59, CC72, CC88, CC121 (Figura 13)
aparecieron con baja frecuencia, por lo se consideran espordicos. Cabe destacar, que
aislamientos del CC72 y CC88 se han detectado recientemente en pacientes portadores de S.
aureus (Montesinos et al., 2010).
188
247
228
146
1619
5
125
239
605
546
15
30
45
14
34
47
582
620
Grupos menores
Singletones
4. Discusin
enfermedad estn tambin presentes en la comunidad (Day et al., 2001; Lamers et al., 2011).
Sin embargo, las frecuencias de los distintos linajes varan considerablemente, siendo las
muestras de portadores sanos ms heterogneas (Day et al., 2001; Feil et al., 2003; Holtfreter
et al., 2007; Lozano et al., 2011b). En Asturias, el linaje ms frecuente en estos ltimos fue
CC30 (27%), al igual que en otros estudios, donde oscil entre el 20 y el 33% (Feil et al.,
2003; Collery et al., 2008; Ruimy et al., 2009). CC5, CC15, CC25 y CC45 son tambin
frecuentes en portadores, mientras que el resto de CCs encontrados en estudiantes de Asturias
(CC1, CC8, CC9, CC59, CC72, CC121) son menos comunes (Feil et al., 2003; Holtfreter et
al., 2007; Ruimy et al., 2009; Sakwinska et al., 2009; Ruimy et al., 2010; Lozano et al.,
2011b). Al igual que CC398, CC97 es un linaje asociado principalmente a animales (Sung et
al., 2008). En Espaa ha sido descrito en ganado porcino (Gmez Sanz et al., 2010). CC97,
pero no CC398, apareci con baja frecuencia en portadores del PA (2,7%), y ambos CCs lo
hicieron en portadores de la Rioja (Lozano et al., 2011b).
En general, los aislamientos obtenidos en el PA a partir de alimentos pertenecen a
CCs previamente encontrados en portadores sanos de esta comunidad (Artculo 7, Figura
13). Los linajes ms comunes fueron CC45, CC5 y CC30, que incluyeron el 37,5%, 20,3% y
20,3% de los aislamientos analizados, respectivamente. Otros CCs aparecieron con menor
frecuencia (1,6% a 7,8%), destacando la deteccin de CC22 (ST217) en alimentos implicados
en un brote, ya que este CC no se encontr en ninguna otra muestra del PA. Un aislamiento
MRSA del mismo ST se encontr recientemente en muestras de carne de jabal salvaje en
Espaa (Lozano et al., 2009), pero al ser una variante del actual clon epidmico EMRSA-15
(CC22/ST22 SCCmec IV; Manzur et al., 2010; Montesinos et al., 2010), los autores sugieren
que fue trasmitido a la muestra por manipuladores del alimento.
En la Figura 13 B. se observa la distribucin temporal de los distintos linajes
encontrados en el PA. La mayora de los aislamientos analizados se recogieron entre 20012006, periodo en el que se detect mayor heterogeneidad. El resto de aos fueron ms
homogneos debido al menor nmero de muestras analizadas. En este sentido, los aos 2007
y 2008 son poco representativos ya que slo incluyen muestras de alimentos/manipuladores
de alimentos por lo que no se han incluido en la grfica. Aunque la representacin est
sesgada debido al diferente nmero de aislamientos recogidos cada ao, y las frecuencias de
los distintos linajes son diferentes dependiendo de la poblacin, se observa una evolucin
temporal comn. Centrndonos en el periodo 2001-2006 se observa como los linajes CC5,
CC30 y CC45, que se incluyen entre los ms frecuentes en aislamientos clnicos (Feil et al.,
2003; Gomes et al., 2006), se han mantenido en porcentajes altos, destacando el hecho de que
todos ellos fueron frecuentes en las distintas poblaciones analizadas en el PA (Figura 13 A.).
Respecto a la distribucin del CC8, en la grfica se aprecia que fue inicialmente muy
frecuente entre 1996-1998, y aunque se mantuvo durante 2001-2003, en los ltimos aos casi
ha desaparecido. CC15, que se corresponde con uno de los linajes MSSA ms ampliamente
distribuidos a nivel mundial (Deurenberg y Stobberingh, 2008), se ha mantenido desde 1997,
al igual que CC5, CC30 y CC45. La proporcin de aislamientos de los dems linajes fue
168
4. Discusin
inferior, pero algunos permanecieron durante largos periodos (CC1, CC25, CC59, CC72,
CC121), mientras que otros se detectaron de forma espordica (CC88, CC97).
A.
HMN (N=62)
HUCA (N=81)
CC88
CC121 CC1
CC59
CC72
CC121
CC72
CC59
CC45
CC5
CC45
CC30
CC30
CC5
CC25
CC15
CC25
CC15
CC8
CC12
ALM (N=64)
PS (N=111)
CC97
CC59
CC8
CC121
CC1
CC121
CC72
CC59
CC1
CC5
CC5
CC45
CC8
CC9
CC8
CC45
CC15
CC15
CC22
CC30
CC25
CC25
CC30
B.
100
CC121
90
CC97
CC88
80
CC72
70
CC59
60
CC45
CC30
50
CC25
40
CC22
30
CC15
CC12
20
CC9
2006
2005
2004
2003
2002
2001
2000
1999
CC5
1998
0
1997
CC8
1996
10
CC1
4. Discusin
4. Discusin
hlb
hld
hlg
hlg-v
eta
etb
etd
AN [1 (0,9)]
HUCA [42 (51,9)]; HMN [18 (29,0)];
PS [20 (46,5)]; ALM [12 (18,8)]
171
4. Discusin
seb
sec
sed
see
egc1
egc2
seh
selj
selk
sell
selp
selq
ser
172
HUCA [45 (72,6)]; HMN [42 (67,7)]; CC1 [2 (50,0)]; CC5 [48 (53,9)]; CC8 [13 (86,7)];
PS [33 (76,7)]; ALM [27 (42,2)]
CC9 [4 (66,7)]; CC12 [3 (100)]; CC15 [8 (53,3)];
CC25 [3 (30,0)]; CC30 [33 (75,0)]; CC45 [18 (38,3)];
CC59 [8 (100)]; CC72 [2 (50,0)]; CC88 [2 (66,7)];
CC121 [1 (25,0)]
HUCA [22 (27,2)]; HMN [16 (25,8)]; CC1 [1 (25,0)]; CC5 [19 (21,3)]; CC8 [3 (20,0)];
PS [10 (23,3)]; ALM [8 (12,5)]
CC15 [6 (40,0)]; CC25 [5 (50,0)]; CC30 [5 (11,4)];
CC45 [7 (14,9)]; CC59 [7 (87,5)]; CC72 [2 (50,0)]
HUCA [65 (80,2)]; HMN [42 (67,7)]; CC1 [2 (50,0)]; CC5 [55 (61,8)]; CC8 [6 (40,0)];
PS [18 (41,9)]; ALM [29 (45,3)]
CC9 [1 (16,7)]; CC12 [3 (100)]; CC15 [9 (60,0)];
CC22 [2 (100)]; CC25 [5 (50,0)];CC30 [17 (38,6)];
CC45 [39 (83,0)]; CC59 [7 (87,5)]; CC72 [3 (75,0)];
CC88 [3 (100)]; CC121 [3 (75,0)]
HUCA [20 (24,7)]; HMN [10 (16,1)]; CC1 [2 (50,0)]; CC5 [24 (27,0)]; CC8 [4 (26,7)];
PS [11 (25,6)]; ALM [7 (10,9)]
CC9 [1 (16,7)]; CC15 [1 (6,7)]; CC25 [3 (30,0)];
CC30 [4 (9,1)]; CC45 [5 (10,6)]; CC59 [2 (25,0)];
CC72 [1 (25,0)]; CC121 [1 (25,0)]
HMN [4 (6,5)]
CC5 [3 (3,4)]; CC15 [1 (6,7)]
HUCA [57 (70,4)]; HMN [45 (72,6)]; CC1 [1 (25,0)]; CC5 [65 (73,0)]; CC8 [12 (80,0)];
PS [15 (34,9)]; ALM [28 (43,8)];
CC9 [3 (50,0)]; CC12 [2 (66,7)]; CC15 [8 (53,3)];
AN [3 (2,8)]
CC22 [2 (100)]; CC25 [7 (70,0)]; CC30 [6 (13,6)];
CC45 [34 (72,4)]; CC59 [2 (25,0)]; CC72 [3 (75,0)];
CC88 [2 (66,7)]
HUCA [24 (29,6)]; HMN [17 (27,4)]; CC1 [1 (25,0)]; CC5 [20 (22,5)]; CC8 [2 (13,3)];
PS [23 (53,5)]; ALM [27 (42,2)];
CC9 [3 (50,0)]; CC12 [1 (33,3)]; CC15 [2 (13,3)];
AN [1 (0,9)]
CC25 [3 (30,0)]; CC30 [36 (81,8)]; CC45 [13 (27,7)];
CC59 [6 (75,0)]; CC72 [1 (25,0)]; CC88 [1 (33,3)];
CC121 [4 (100)]
HUCA [10 (12,3)]; HMN [2 (3,2)];
CC1 [2 (50,0)]; CC5 [7 (7,9)]; CC9 [2 (33,3)];
PS [12 (27,9)]; ALM [3 (4,7)]
CC12 [1 (33,3)]; CC15 [2 (13,3)]; CC25 [1 (10,0)];
CC30 [9 (20,5)]; CC45 [3 (6,4)]
HUCA [19 (23,5)]; HMN [11 (17,7)]; CC1 [2 (50,0)]; CC5 [25 (28,1)]; CC8 [4 (26,7)];
PS [11 (25,6)]; ALM [7 (10,9)]
CC9 [1 (16,7)]; CC15 [1 (6,7)]; CC25 [3 (30,0)];
CC30 [3 (6,8)]; CC45 [5 (10,6)]; CC59 [2 (25,0)];
CC72 [1 (25,0)]; CC121 [1 (25,0)]
HUCA [2 (2,5)]; HMN [7 (11,3)];
CC1 [1 (25,0)]; CC5 [2 (2,2)]; CC8 [4 (26,7)];
PS [4 (9,3)]; ALM [6 (9,4)];
CC9 [1 (16,7)]; CC30 [2 (4,5)]; CC45 [1 (2,1)];
CC59 [8 (100)]
HUCA [2 (2,5)]; HMN [6 (9,7)];
CC5 [2 (2,2)]; CC9 [1 (16,7)]; CC25 [1 (10,0)];
PS [7 (16,3)]; ALM [22 (34,4)]
CC45 [31 (66,0)]; CC59 [1 (12,5)]; CC72 [1 (25,0)]
HUCA [20 (24,7)]; HMN [6 (9,7)];
CC5 [30 (33,7)]; CC8 [1 (6,7)]; CC25 [1 (10,0)];
PS [7 (16,3)]; ALM [3 (4,7)]
CC45 [2 (4,3)]; CC59[1 (12,5)]; CC72 [1 (25,0)]
HUCA [3 (3,7)]; HMN [7 (11,3)];
CC1 [1 (25,0)]; CC5 [3 (3,4)]; CC8 [4 (26,7)];
PS [4 (9,3)]; ALM [6 (9,4)]
CC9 [1 (16,7)]; CC30 [2 (4,5)]; CC45 [1 (2,1)];
CC59 [8 (100)]
HUCA [15 (18,5)]; HMN [10 (16,1)]; CC1 [2 (50,0)]; CC5 [20 (22,5)]; CC8 [3 (20,0)];
PS [11 (25,6)]; ALM [5 (7,8)]
CC9 [1 (16,7)]; CC15 [1 (6,7)]; CC25 [3 (30,0)];
CC30 [4 (9,1)]; CC45 [5 (10,6)]; CC59 [1 (12,5)];
CC121 [1 (25,0)]
4. Discusin
splF
bsaB
HMN [1 (1,6)]
HMN [1 (1,6)]
HUCA [41 (50,6)]; HMN [39 (62,9)];
PS [9 (20,9)]; ALM [36 (56.3)]
CC5 [1 (1,1)]
CC5 [1 (1,1)]
CC5 [42 (47,2)]; CC8 [11 (73,3)]; CC12 [1 (33,3)];
CC15 [8 (53,3)]; CC22 [2 (100)]; CC25 [5 (50,0)];
CC30 [5 (11,4)]; CC45 [36 (76,7)]; CC59 [7 (87,5)];
CC72 [2 (50,0)]; CC88 [2 (66,7)]; CC121 [1 (25,0)]
HUCA [53 (65,4)]; HMN [45 (72,6)]; CC1 [3 (75,0)]; CC5 [64 (71,9)]; CC8 [13 (86,7)];
PS [15 (34,9)]; ALM [20 (31,3)]
CC12 [3 (100)]; CC15 [11 (73,3)]; CC25 [6 (60,0)];
AN [2 (1,8)]
CC30 [22 (50,0)]; CC45 [6 (12,8)]; CC72 [2 (50,0)];
CC88 [2 (66,7)]; CC121 [3 (75,0)]
HUCA [17 (21,0)]; HMN [23 (37,1)]; CC1 [2 (50,0)]; CC5 [14 (15,7)]; CC8 [12 (80,0)];
PS [3 (7,0)]; ALM [6 (9,4)]
CC12 [2 (66,7)]; CC15 [2 (13,3)]; CC25 [7 (70,0)];
CC30 [1 (2,3)]; CC45 [6 (12,8)]; CC59 [2 (25,0)];
CC121 [1 (25,0)]
Porcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada poblacin (HUCA: 81; HMN: 62; ALM:
64; PS: 43; AN: 109). HUCA, aislamientos procedentes del Hospital Universitario Central de
Asturias; HMN, aislamientos procedentes del Hospital Monte Naranco; PS, aislamientos procedentes
de portadores sanos; ALM, aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores de alimentos; AN,
aislamientos procedentes de animales. bPorcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada
linaje (CC1: 4; CC5: 89; CC8: 15; CC9: 6; CC12: 3; CC15: 15; CC22: 2; CC25: 10; CC30: 44; CC45:
47; CC59: 8; CC72: 4; CC88: 3; CC121: 4; CC398: 105). Los porcentajes superiores al 30% se
muestran en negrilla.
174
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
100
sed
50
0
seb
sec
100
100
50
50
HUCA
HMN
PS
ALM
AN
CC88
CC121
CC398
CC88
CC121
CC398
CC72
CC72
0
CC59
50
CC59
tst
CC45
50
CC88
CC121
CC398
CC398
CC72
CC72
CC121
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CC88
CC59
CC59
CC30
CC45
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CC45
CC30
CC25
CC22
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CC45
100
CC15
CC398
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC398
CC121
eta
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
hlgv
CC30
100
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
hla
CC30
0
CC25
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CC25
0
CC9
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CC25
50
CC22
50
CC22
100
CC22
100
CC12
CC15
CC15
50
CC12
50
CC15
100
100
CC12
CC9
CC12
50
CC9
50
CC9
100
CC8
100
CC9
CC8
CC9
50
CC8
50
CC8
100
CC8
100
CC8
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CC25
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CC9
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CC1
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CC88
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CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
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CC1
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CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
50
CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
100
CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
100
CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
4. Discusin
hlb
hlg
etd
4. Discusin
see
selq
bsaB
CC398
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC121
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC59
CC72
CC88
CC121
CC59
CC72
CC88
CC121
CC398
CC45
CC45
CC30
CC398
CC30
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
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CC15
50
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CC25
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CC8
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
0
CC12
0
CC9
50
CC8
50
CC5
100
CC5
ser
100
CC1
CC30
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
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CC15
0
CC12
50
CC9
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CC5
100
CC25
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CC30
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
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50
CC5
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CC1
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CC15
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CC88
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CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
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CC5
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CC1
100
CC25
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100
CC1
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC1
CC398
CC88
CC121
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC9
0
CC12
0
CC8
50
CC5
50
CC1
100
CC5
egc1
100
HUCA
100
HMN
PS
50
ALM
CC398
CC121
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
AN
175
4. Discusin
176
4. Discusin
ampliamente distribuidos en todas las poblaciones. En esta lnea, otros autores no han
encontrado diferencias respecto al cluster egc entre aislamientos de origen invasivo y nasal,
pero si en cuanto a genes de otras toxinas (Becker et al., 2003). Las diferencias entre estudios
ponen de manifiesto nuevamente la importancia del origen geogrfico de los aislamientos, no
slo en la distribucin de linajes sino tambin de factores de virulencia.
Tabla 9. Distribucin de elementos genticos mviles en distintas poblaciones y complejos clonales
de Staphylococcus aureus estudiados en esta Tesis doctoral.
EGMa
Poblacin [n (%)]b
CC [n (%)]c
Sa3d
Sa Id
Sa IId
Sa IIId
SaPI1d
SaPI3d
SaPI5 d
SaPImw2 d
SaPIn1/SaPIm1d
pIB485
pUO-Sa-SED3
pF5
Cada elemento gentico mvil (EGM) contiene varios determinantes de virulencia: Sa3 (sea-selk-selq), Sa
I (lukED-egc1-splF), Sa II (splF-lukED-bsaB), Sa III (splF-egc2), SaPI1 (ear-tst-selk-selq); SaPI3 (earseb-selk-selq), SaPI5 (ear-selk-selq), SaPImw2 (ear-sec-sell), SaPIn1/SaPIm1 (ear-tst-sec-sell) pIB485 (sedselj-ser), pF5 (selj-ser-ses-set). bPorcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada poblacin (AA:
109; AB: 64; HMN: 62; HUCA: 81; PS: 43). HUCA, aislamientos procedentes del Hospital Universitario
Central de Asturias; HMN, aislamientos procedentes del Hospital Monte Naranco; PS, aislamientos
procedentes de portadores sanos; ALM, aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores de alimentos;
AN, aislamientos procedentes de animales. cPorcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada
linaje (CC1: 4; CC5: 90; CC8: 15; CC9: 6; CC12: 3; CC15: 15; CC22: 1; CC25: 10; CC30: 44; CC45: 47;
CC59: 8; CC72: 4; CC88: 3; CC97: 3; CC121: 4; CC398: 105). dEn varios casos distintas combinaciones son
posibles. Los porcentajes superiores al 30% se muestran en negrilla.
4. Discusin
Goerke et al., 2009; Monecke et al., 2009; Ghasemzadeh-Moghaddam et al., 2011; Hisata et
al., 2011; Lozano et al., 2011b). De hecho, en este trabajo su frecuencia fue inferior a la
encontrada para genes de la mayora de las dems toxinas, aunque superior a la descrita por
otros autores (Figura 14). El gen eta estudiado se encuentra asociado a un profago tipo Sa1,
y se ha detectado con baja frecuencia en aislamientos de distintos linajes (Monk et al., 2004;
Goerke et al., 2009; Monecke et al., 2009; Ghasemzadeh-Moghaddam et al., 2011; Hisata et
al., 2011; Lozano et al., 2011b), mientras que el gen etb, localizado en un plsmido, es an
menos frecuente (Becker et al., 2003; Larsen et al., 2008). Sin embargo, este ltimo gen
apareci con elevada frecuencia en aislamientos de distintos linajes del HUCA (Tabla 8,
Artculo 1), probablemente debido a la dispersin del plsmido entre el nmero limitado de
linajes detectados en este hospital. El gen etd, asociado a una SaPI, ha sido menos estudiado
que los anteriores, aunque cabe destacar que en nuestras poblaciones, al igual que en otros
estudios, los aislamientos del linaje CC25 presentan este gen en elevada proporcin
(Holtfreter et al., 2007; Monecke et al., 2009). La mayora de aislamientos de este linaje
portan agrIV, que se ha relacionado con una mayor presencia de genes para la produccin de
exfoliatinas, as como de enfermedades mediadas por este tipo de toxinas, respecto a los otros
tipos de agr (Jarraud et al., 2000; Jarraud et al., 2002).
El gen de la toxina tst, localizado en varios tipos de islas (Apartado 1.3.3.3.) se
encontr en distintos linajes (Tabla 8), destacando su asociacin con el CC30, uno de los
mayoritarios en las poblaciones estudiadas. Estudios previos han determinado que los
aislamientos productores del sndrome del shock txico, y por tanto portadores de tst, suelen
pertenecer a agrIII (Jarraud et al., 2002) y a su vez la mayora de aislamientos agrIII-tst
pertenecen al CC30 (Holtfreter et al., 2007; Monecke et al., 2009). Sin embargo, tst se ha
encontrado tambin en otros linajes con otros tipos de agr (Holtfreter et al., 2007;
Ghebremedhin et al., 2009; Monecke et al., 2009; Varshney et al., 2009; GhasemzadehMoghaddam et al., 2011; Lozano et al., 2011b), destacando el hecho de que en nuestras
poblaciones incluso apareci en linajes minoritarios como CC9, CC12, CC25 y CC88.
La toxina SEA se ha relacionado con la mayora de casos de intoxicacin alimentaria
por S. aureus, ya que tiene una extraordinaria resistencia a la actividad proteoltica y, al ser de
las primeras enterotoxinas descritas en esta bacteria, su presencia ha sido intensivamente
investigada (Artculo 9). El gen sea se localiza en profagos de tipo Sa3, que portan sea o la
combinacin sea-selk-selq (Tabla 9). Este gen fue uno de los ms frecuentes en los
aislamientos analizados, encontrndose en varios linajes ya relacionados previamente con su
presencia (Monk et al., 2004; Cha et al., 2006; Holtfreter et al., 2007; Monecke et al., 2009;
Varshney et al., 2009; Ghasemzadeh-Moghaddam et al., 2011), as como en linajes
minoritarios (CC9, CC72, CC88).
El gen de la toxina SEB (seb), descrito tanto en plsmidos como en SaPIs (Apartado
1.3.3.3.), se encontr en varios linajes (Holtfreter et al., 2007; Tristan et al., 2007; Collery et
al., 2008; Ghebremedhin et al., 2009; Monecke et al., 2009; Ellington et al., 2010;
Ghasemzadeh-Moghaddam et al., 2011), incluido el poco toxignico CC398 (Artculo 12;
178
4. Discusin
Kadlec et al., 2009), apareciendo adems en el linaje minoritario CC72 en esta Tesis
Doctoral. En los aislamientos seb positivos, sin ningn otro gen perteneciente a SaPI3, seb
podra localizarse en plsmidos (Altboum et al., 1985), mientras que la presencia de seb junto
con selk y selq apoya la presencia de SaPI3 (Tabla 9). Entre estos ltimos, destaca la gran
proporcin de aislamientos del linaje CC59, de acuerdo con lo descrito por otros autores
(Monk et al., 2004; Tristan et al., 2007; Ellington et al., 2009; Varshney et al., 2009).
La mayora de los aislamientos selk-selq positivos podran asociarse con un EGM
previamente descrito (Tabla 9), exceptuando un aislamiento CC5 procedente del HUCA que
fue sea-seb-selq positivo. Otros estudios encontraron slo seb-selq y combinaciones
adicionales (Holtfreter et al., 2007; Varshney et al., 2009; Lozano et al., 2011b), lo que indica
la posible participacin de nuevos elementos en la dispersin de estas toxinas.
Con anterioridad al 2009 pocos estudios haban examinado los determinantes de
virulencia en CC398 (Huijsdens et al., 2006, Monecke et al., 2007; Witte et al., 2007). Los
datos aqu presentados, as como en otros trabajos recientes (Kadlec et al., 2009; Lozano et
al., 2011b; Lozano et al., 2011c) han mostrado que los aislamientos de este clon de origen
animal carecen generalmente de factores de virulencia distintos a hemolisinas. Sin embargo,
dos aislamientos de los Pases Bajos examinados en esta Tesis poseen la enterotoxina seb, y a
su vez otros aislamientos de Alemania presentaron las toxinas seb o selk y selq (Kadlec et al.,
2009). Estos datos, juntos a la adquisicin de otras toxinas como sec y ser por aislamientos
CC398 de origen humano (Varshney et al., 2009; Yeung et al., 2011), y de lukPV por
aislamientos de origen humano y animal (Yu et al., 2008, van Belkum et al., 2008), ponen de
manifiesto la capacidad de este clon emergente, al principio poco toxignico, de ir
acumulando factores de virulencia anteriormente ausentes en el linaje.
El gen sec se ha descrito co-localizado con otros genes de toxinas en SaPImw2 (secsell junto con ear) y SaPIn1/SaPIm1 (tst-sec-sell junto con ear). Este gen se ha encontrado en
todas las poblaciones analizadas del PA y en todos los linajes, lo que muestra su elevada
dispersin en esta regin geogrfica. Un estudio reciente ha determinado que sec tiende a ser
ms frecuente en aislamientos causantes de infecciones graves (incluyendo sepsis severa,
shock sptico, fallo multiorgnico o TSS) que en infecciones menos complicadas (sepsis no
severa) (Nhan et al., 2011). Se ha descrito anteriormente en varios linajes (Ellington et al.,
2009; Monecke et al., 2009; Varshney et al., 2009; Ellington et al., 2010; GhasemzadehMoghaddam et al., 2011), incluyndose ahora tambin en otros minoritarios (CC9, CC72 y
CC88). Un hecho que muestra la capacidad de dispersin de este tipo de genes es la reciente
descripcin de una isla de patogenicidad en S. epidermidis (SePI) que contiene sec y sell
(Madhusoodanan et al., 2011). En esta Tesis, se ha podido identificar la posible isla portadora
de sec en algunos linajes, destacando la presencia de SaPImw2 en CC45 (Tabla 9). Otros
autores tambin haban detectado un alto porcentaje de aislamientos sec-sell en CC45
(Holtfreter et al., 2007). Sin embargo, en varios aislamientos sec positivos no se ha podido
encontrar el gen sell, el cual ha sido menos investigado que sec en S. aureus. Trabajos previos
de nuestro grupo (Martn et al., 2004; Fueyo et al., 2005b), as como de otros autores
179
4. Discusin
(Varshney et al., 2009), ya haban descrito aislamientos sec positivos sin sell, e incluso sell
positivos sin sec, lo cual puede indicar la presencia de nuevos EGM sin sell o sec, o la
existencia de nuevas variantes allicas en estos genes. De hecho, para sec ya se han descrito
al menos cinco variantes (Apartado 1.3.3.3.).
El gen see se ha encontrado en muy baja frecuencia en S. aureus, aunque la toxina
SEE ha sido responsable de algunos brotes de intoxicacin alimentaria (Artculo 9). El gen
see, posiblemente situado en un profago (Couch et al., 1988), no fue encontrado en
aislamientos procedentes de portadores sanos, alimentos/manipuladores, ni asociados con
mastitis bovina en el PA (Artculos 5 y 7; Fueyo et al., 2001; Fueyo et al., 2005a; Fueyo et
al., 2005b; Fueyo et al., 2005c), pero s en cuatro aislamientos del HMN procedentes de
herida quirrgica (Artculo 3).
La toxina SEH se detect en varios casos de intoxicacin alimentaria (Artculo 9) y,
en esta Tesis, el gen que la codifica se encontr en varios linajes, adems de CC1, CC5 y
CC30 donde ya se haba descrito (Cha et al., 2006; Monecke et al., 2009; Varshney et al.,
2009; Lozano et al., 2011b).
De la misma manera, el gen selp, asociado a profagos Sa3, se encontr en linajes
donde haba sido descrito previamente (Holtfreter et al., 2007; Varshney et al., 2009; Lozano
et al., 2011b), as como en el minoritario CC72. En cuanto a la distribucin de este gen,
destaca su asociacin con CC5, que incluy aislamientos positivos de todas las poblaciones
estudiadas (Figura 14).
Los genes sed, selj y ser asociados a plsmidos tipo pIB485 se han encontrado
anteriormente en los linajes CC1, CC5, CC8, CC15, CC30, CC45, CC59 (Holtfreter et al.,
2007; Varshney et al., 2009; Lozano et al., 2011b), incluyendo este estudio su descripcin en
los linajes minoritarios CC9, CC25, CC72 y CC121. Aunque los porcentajes de aislamientos
positivos dentro de cada linaje son bajos (Tabla 9), cabe destacar el hecho de que adems de
la combinacin prototipo de pIB485 (sed-selj-ser), se encontraron otras combinaciones como
las correspondientes al plsmido pUO-Sa-SED3 (sed-selj) y pF5 (selj-ser-ses-set) (Tabla 9;
Fueyo et al., 2005a; Ono et al., 2008).
4. Discusin
Kadlec et al., 2009; Smyth et al., 2009). Sin embargo, se observaron varias excepciones ya
descritas: CC1-agrI, CC1-agrII, CC5-agrI, CC25-agrIV, CC12-agrIV, CC30-agrI, CC45agrIII, CC45-agrIV, CC59-agrI/IV, CC121-agrII (Wright et al., 2005; Robinson et al., 2006,
Prez-Vzquez et al., 2008), y otras de nueva descripcin: CC5-agrIII, CC5-agrIV, CC8agrIV, CC9-agrII, CC12-agrIII, CC15-agrIV, CC25-agrII, CC121-agrIII, CC97-agrII.
Tabla 10. Distribucin de tipos agr en distintas poblaciones y complejos clonales de
Staphylococcus aureus estudiados en esta Tesis doctoral.
Tipo
CC [n (%)]b
Poblacin [n (%)]a
agr
I
II
III
IV
I/IV
HMN [2 (3,2)]
Porcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada poblacin (HUCA: 81; HMN: 62;
PS: 111; ALM: 64; AN: 109). ALM, aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores de
alimentos; AN, aislamientos procedentes de animales; HMN, aislamientos procedentes del Hospital
Monte Naranco; HUCA, aislamientos procedentes del Hospital Universitario Central de Asturias;
PS, aislamientos procedentes de portadores sanos. bPorcentajes respecto al nmero total de
aislamientos de cada linaje (CC1: 6; CC5: 102; CC8: 16; CC9: 6; CC12: 3; CC15: 25; CC22: 2;
CC25: 15; CC30: 61; CC45: 59; CC59: 10; CC72: 4; CC88: 3; CC97: 3; CC121: 7; CC398: 105).
Los porcentajes superiores al 30% se muestran en negrilla.
4. Discusin
presentando este sistema hbrido porciones similares a agrI y a agrIV en el gen agrC.
Adems, se han descrito dos aislamientos con un caso ms extremo de recombinacin,
implicando tres tipos de sistemas al presentar homologas con agrI en agrC y con agrII y
agrIII en agrD (Gilot et al., 2002). Otros autores han encontrado aislamientos positivos para
agrI/agrII y agrI/agrIII (Yoon et al., 2007), y en otros casos no fue posible determinar el tipo
de sistema agr de algunos aislamientos. Esto ltimo puede deberse a la delecin de locus del
sistema o a la existencia de nuevas variantes (Holfreter et al., 2007, OBrien et al., 2009;
Megevand et al., 2010). El locus agr, fue inicialmente considerado una caracterstica estable
de cada linaje y, de hecho, generalmente hay una gran correlacin entre ambos. Sin embargo,
estudios ms amplios sobre la distribucin del mismo, as como las excepciones y la
deteccin de sistemas hbridos, indican que con cierta frecuencia existe recombinacin entre
linajes, lo cual puede originar nuevos tipos agr cuyos efectos sobre la regulacin de la
virulencia y posible potenciacin de la patogenicidad de la bacteria deben ser investigados.
100
agrI
80
agrII
60
agrIII
40
agrIV
20
agrI/IV
CC398
CC121
CC97
CC88
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC15
CC12
CC9
CC8
CC5
CC1
Figura 15. Distribucin de grupos agr en los distintos complejos clonales. Porcentajes
respecto al nmero total de aislamientos en cada complejo clonal (CC1: 6; CC5: 102; CC8: 16; CC9:
6; CC12: 3; CC15: 25; CC22: 2; CC25: 15; CC30: 61; CC45: 59; CC59: 10; CC72: 4; CC88: 3;
CC97: 3; CC121: 7; CC398: 105).
182
4. Discusin
183
4. Discusin
AMK, amikacina; AMP, ampicilina; CHL, cloranfenicol; CIP, ciprofloxacina; CLIC, clindamicina
constitutiva, CLII, clindamicina inducible; ERY, eritromicina; GEN, gentamicina; KAN,
kanamicina; MET, meticilina; MOX, moxifloxacina; MUP, mupirocina; OXA, oxacilina; PEN,
penicilina; RIF, rifampicina; SXT, sulfametoxazol/trimetoprima; TET, tetraciclina; TMP,
trimetoprima; TOB, tobramicina. bPorcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada
poblacin (HUCA: 81; HMN: 62; PS: 111; ALM: 64; AN: 109). HUCA, aislamientos procedentes
del Hospital Universitario Central de Asturias; HMN, aislamientos procedentes del Hospital Monte
Naranco; PS, aislamientos procedentes de portadores sanos; ALM, aislamientos procedentes de
alimentos y manipuladores de alimentos; AN, aislamientos procedentes de animales. n, nmero de
aislamientos resistentes, incluyendo las resistencias intermedias. cPorcentajes respecto al nmero
total de aislamientos de cada linaje (CC1: 6; CC5: 102; CC8: 16; CC9: 6; CC12: 3; CC15: 25;
CC22: 2; CC25: 15; CC30: 61; CC45: 59; CC59: 10; CC72: 4; CC88: 3; CC97: 3; CC121: 7;
CC398: 105). dLos aislamientos AN no fueron analizados para susceptibilidad frente a AMK, TOB
y MOX y los aislamientos HUCA y HMN no fueron analizados para TMP. Los porcentajes
superiores al 30% se muestran en negrilla.
184
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
100
80
60
40
20
0
100
80
60
40
20
0
100
80
60
40
20
0
100
80
60
40
20
0
SXT
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
100
80
60
40
20
0
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
100
80
60
40
20
0
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
100
80
60
40
20
0
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
CC1
CC5
CC8
CC9
CC12
CC15
CC22
CC25
CC30
CC45
CC59
CC72
CC88
CC97
CC121
CC398
4. Discusin
AMPPEN
100
80
60
40
20
0
METOXA
GEN
100
80
60
40
20
0
KAN
CHL
100
80
60
40
20
0
ERY
CLI
100
80
60
40
20
0
MUP
TET
100
80
60
40
20
0
CIP
RIF
100
80
60
40
20
0
TMP
HUCA
HMN
ALM
PS
AN
185
4. Discusin
186
4. Discusin
manipulador de alimentos mostraron resistencia de alto nivel (CMI superior a 1000 g/ml)
(Anexo II).
187
4. Discusin
Tabla 12. Clones MRSA presentes en las poblaciones de Staphylococcus aureus estudiadas en
esta Tesis Doctoral.
CCa
Clon
STb
tipo spa
SCCmec Poblacin [n (%)c]
CC5
5
5
t001, t045
t002, t045, t6488
II
IVc
5
5
125
125
125
t002, t2173
t002
t067
t067
t067, t3734
IVd
nd
III
IVa
IVc
Alemania-Sur
125 t067
228 t109
V
I
239
247
9
14
45
45
47
72
398
398
III
I
IVa
V
III
IVc
IVc
IVc
IVa
V
HMN [2 (9,5)]
HUCA [1 (3,8)];
HMN [2 (9,5)]
ALM [2 (100)]
AN [1 (1)]
HMN [1 (4,8)]
HMN [1 (4,8)]
HUCA [20 (77)];
HMN [1 (4,8)]
HMN [1 (4,8)]
HUCA [3 (11,5)];
HMN [1 (4,8)]
HMN [3 (11,5)]
HMN [6 (23)]
AN [1 (1)]
HMN [1 (4,8)]
HMN [1 (4,8)]
HMN [1 (4,8)]
HUCA [1 (4,8)]
HUCA [1 (4,8)]
AN [5 (4,8)]
AN[80 (76,2)]
V*
nd
AN[11 (10,5)]
AN [7 (6,7)]
Brasileo/Hngaro
Ibrico
CC9
CC15 CC45 Berln (USA 600)
CC72 USA700
CC398 CC8
t037
t051
t1430
t279
t1078
t065
t383
t148
t011, t779
t011, t034, t108, t1255
t1451, t1457, t1580,
t1985, t2011, t2346,
t2510, t2576, t2970,
t5210
398 t034, t108, t571, t1928
398 t011, t034, t1250, t1753
CC, complejo clonal. bST, Secuencia Tipo. cLos porcentajes estn calculados en base al nmero total de
aislamientos MRSA en cada poblacin (HUCA: 26; HMN: 21; AN: 105, ALM: 2). HUCA, aislamientos
procedentes del Hospital Universitario Central de Asturias; HMN, aislamientos procedentes del Hospital
Monte Naranco; ALM, aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores de alimentos; AN,
aislamientos procedentes de animales; n, nmero de aislamientos de cada clon. Los porcentajes superiores
al 30% se muestran en negrilla.
Dentro del linaje CC45 se encontr el clon Berln (ST45-SCCmec IV), que ha sido
descrito con baja frecuencia en Espaa (Vindel et al., 2006), as como el ST45-SCCmec III
previamente encontrado en un hospital de los Pases Bajos (Nulens et al., 2009). El ST47SCCmec IVc es de nueva descripcin en Espaa, ya que slo se haba encontrado en muestras
clnicas y de portadores en el Reino Unido (Day et al., 2001) y en aislamientos BORSA de
Canad (Nadarajah et al., 2006). Segn estos ltimos autores ST47, como progenitor del clon
Berln, proporcionara un ambiente estable para la integracin del SCCmec (Nadarajah et al.,
2006), como lo demuestra el aislamiento ST47-SCCmec IVc (Artculo 1). En relacin a
CC72, el clon ST72-MRSA-IV encontrado en el HUCA, que es muy frecuente en Corea (Kim
et al., 2007; Bae et al., 2010), fue descrito por primera vez en Espaa en 2006 en pacientes
con fibrosis qustica (Molina et al., 2008), y recientemente se ha encontrado en portadores
188
4. Discusin
sanos y pacientes en Portugal y las Islas Canarias (Montesinos et al., 2010; Tavares et al.,
2010).
Por otro lado, CC15 es un linaje MSSA distribuido mundialmente (Deurenberg y
Stobberingh, 2008). Al igual que otros linajes MSSA, se considera que CC15 no proporciona
un ambiente estable para la integracin del SCCmec (Katayama et al., 2005). Sin embargo se
han descrito varias excepciones no slo en CC15 (Ho et al., 2007; Campanile et al., 2009)
sino tambin en CC12, otro linaje MSSA (Fossum y Bukholm, 2006). El clon ST14-SCCmec
V del linaje CC15 hallado en el HMN constituira otra excepcin (Artculo 2).
Respecto a los aislamientos procedentes de Alemania, se encontraron 4 clones ST398,
siendo el mayoritario el portador de SCCmec V. Otros autores tambin han identificado este
tipo de SCCmec como el ms frecuente en ST398, siendo menor la proporcin de
aislamientos con SCCmec IVa (de Neeling et al., 2007; Witte et al., 2007; Fesler et al.,
2010). En el presente trabajo, 11 aislamientos de este clon adscritos al SCCmec III por el
protocolo de Zhang et al. (2005), fueron sometidos a un anlisis ms exhaustivo para
determinar la posible presencia de SCCmec V (Artculo 11). De hecho, en el 2009 se haba
determinado que los aislamientos ST398 identificados como SCCmec III por el protocolo de
Zhang et al. (2005) realmente contenan SCCmec V (Jansen et al., 2009). Los aislamientos
adscritos a SCCmec III en nuestra serie contienen el gen que codifica la transposasa A del
Tn554 integrado en la regin J2 del SCCmec III, pero carecen del ccrA/B3 de este casete y
poseen el ccrC del SCCmec V. La posesin de un gen de recombinasa de SCCmec V pude
indicar que estos aislamientos poseen algn tipo nuevo de SCCmec que ha adquirido parte de
las regiones junkyard del SCCmec III. Adems, 7 aislamientos fueron no tipificables con los
mtodos utilizados, lo que muestra la posibilidad de nuevas variantes SCCmec en la
poblacin del ST398. De hecho, otros autores tambin han encontrado elementos SCCmec
atpicos y/o no tipificables en este linaje (Kadlec et al., 2009; Fesler et al., 2010). En las
muestras de animales tambin se observ un clon ST5 con SCCmec no tipificable, as como
un ST9-SCCmec IVa, aunque el ST9 se asocia fundamentalmente con SCCmec V (Neela et
al., 2009).
Por ltimo, cabe destacar que el 80,7% de los aislamientos MRSA de hospitales fue
multirresistente, lo que dificultara su tratamiento y/o eliminacin dependiendo del caso.
Dentro del linaje CC398, el 70% de los MRSA fueron multirresistentes y a diferencia del
resto de poblaciones y linajes presentaron un alto porcentaje de resistencia a trimetoprima
(Artculo 12). La resistencia a este antimicrobiano es infrecuente en otros MRSA pero parece
ser una caracterstica frecuente en CC398 (Kadlec et al., 2009; Fesler et al., 2010). Por otro
lado, los linajes CC5 y CC8 presentaron altos porcentajes de resistencia frente a otros
antimicrobianos como GEN, KAN, ERY-CLIC, TET y/o CIP. Cabe destacar que la mayora
de aislamientos CC5 y CC8 proceden de muestras hospitalarias (66.3% y 81.3%,
respectivamente). Sin embargo, para estos aislamientos an dispondramos de alternativas
teraputicas, ya que tanto los multirresitentes, como el resto de los analizados en esta Tesis
fueron sensibles a linezolid, vancomicina y tigeciclina.
189
4. Discusin
blaZ
PS [99 (89,2)];
ALM [48 (75)];
AN [102 (93,6)]
[ERY-CLIC]
catpC194
catpC221
fexA
cfrd
ermA
ermB
ermC
[ERY-CLII]
190
ermA
ermC
PS [2 (1,8)]
PS [1 (0,9)]
AN [2 (3,1)]
AN [1 (1,6)]
AN [37 (33,9)]
PS [2 (1,8)];
AN [33 (30,3)]
PS [8 (7,2)];
AN [43 (39,4)]
ALM [2 (3,1)]
PS [12 (10,8)];
ALM [8 (12,5)]
4. Discusin
msrA
msrB
CLI
linA/linA
MUP
TET
mupA
tetK
TMP
PS [5 (4,5)];
ALM [2 (3,1)]
PS [23 (20,7)];
ALM [3 (4,7)]
PS [6 (5,4)];
ALM [1 (1,6)];
AN [4 (3,7)]
ALM [1 (1,6)]
PS [13 (11,7)];
ALM [4 (6,3)]
AN [76 (69,7)]
tetL
tetM
AN [42 (38,5)]
AN [107 (98,2)]
dfrA/S1d
dfrDd
dfrGd
dfrKd
AN [1 (1,6)]
AN [1 (1,6)]
AN [24 (22,0)]
AN [44 (40,4)]
AMK, amikacina; AMP, ampicilina; CC, complejo clonal; CHL, cloranfenicol; CIP, ciprofloxacina;
CLIC, clindamicina constitutiva, CLII, clindamicina inducible; ERY, eritromicina; GEN, gentamicina;
KAN, kanamicina; MUP, mupirocina; PEN, penicilina; PS, aislamientos procedentes de portadores
sanos; RIF, rifampicina; TET, tetraciclina; TMP, trimetoprima; TOB, tobramicina. bPorcentajes
respecto al nmero total de aislamientos de cada poblacin (PS: 111; ALM: 64; AN: 109). ALM,
aislamientos procedentes de alimentos y manipuladores de alimentos; n, nmero de aislamientos;
AN, aislamientos procedentes de animales; PS, aislamientos procedentes de portadores sanos.
c
Porcentajes respecto al nmero total de aislamientos de cada linaje (CC1: 5; CC5: 35; CC8: 3; CC9:
6; CC15: 15; CC22: 2; CC25: 10; CC30: 44; CC45: 42; CC59: 8; CC72: 2; CC97: 3; CC121: 4;
CC398: 105). dGenes analizados slo en la poblacin AN. nd, no determinado. Los porcentajes
superiores al 30% se muestran en negrilla.
En todas las poblaciones se encontr un alto porcentaje del gen blaZ, que codifica una
-lactamasa que confiere resistencia a -lactmicos tipo penicilina y ampicilina (Figura 17).
Este gen, generalmente localizado en plsmidos, est muy extendido en las poblaciones de S.
aureus de procedencia clnica, comunitaria y animal (Mandell et al., 2000; Werckenthin et
al., 2001; Gold y Pillai, 2009; Jensen y Lyon, 2009). Adems, en las poblaciones de
portadores sanos y alimentos/manipuladores, se determin que este gen estaba asociado al
transposn Tn552 en un 79,6% y 81% de los aislamientos blaZ positivos, respectivamente
(Artculos 6 y 7).
Respecto a la resistencia a aminoglicsidos, en aislamientos clnicos generalmente el
aacA-aphD es el determinante ms frecuente seguido de aadD o aphA, dependiendo de la
poblacin bajo estudio (Fluit et al., 2001; Hauschild et al., 2008; Emaneini et al., 2009;
Fatholahzadeh et al., 2009). Sin embargo, existen poblaciones en las que aphA (Monecke y
191
4. Discusin
Ehricht, 2005) o aadD (Laplana et al., 2007; Prez-Vzquez et al., 2008) son ms frecuentes
que aacA-aphD. En este sentido, los estudios sobre la distribucin de estos genes en
aislamientos clnicos espaoles apuntan a un elevado porcentaje de aadD frente a los otros
determinantes de resistencia (Laplana et al., 2007; Prez-Vzquez et al., 2008). Este hecho se
debe a la asociacin de aadD con ST125-SCCmec IV, que era el clon ms frecuente en
hospitales espaoles durante los aos en que se llevaron a cabo dichos estudios (Laplana et
al., 2007; Prez-Vzquez et al., 2008; Vindel et al., 2009). Ninguno de los aislamientos
encontrados en portadores sanos o alimentos/manipuladores, se pudo asignar a este clon y,
aunque en ambas poblaciones hubo aislamientos CC5, stos fueron ST5. De acuerdo con ello,
los porcentajes de aadD hallados en aislamientos de las dos poblaciones fueron muy bajos,
del 3,6 y 1,6%, respectivamente. Estos datos contrastan con el 24,3% de aphA y el 5,4% de
aacA-aphD en S. aureus de portadores sanos, pero no con los inferiores porcentajes
observados en aislamientos de alimentos/manipuladores (3,1% de aphA y 1,6% de aacAaphD) (Figura 17). Estos datos son interesantes ya que, al igual que en MRSA de origen
hospitalario en Alemania (Monecke y Ehricht, 2005) y en estafilococos coagulasa negativos
(Fluit et al., 2001), el gen aphA es frecuente en la poblacin de portadores sanos del PA. Los
aislamientos aphA positivos tanto de portadores sanos como de alimentos/manipuladores
fueron tambin positivos para los genes aadE y sat4 (Artculos 6 y 7), que se localizan junto
a aphA-3 en el transposn Tn5404 (Derbise et al., 1997), lo que apoya la posible implicacin
de este elemento gentico mvil en la dispersin de aphA en Asturias. A diferencia de las
poblaciones de portadores sanos y de alimentos/manipuladores de Asturias, un alto porcentaje
de los aislamientos del CC398 fueron positivos para aacA-aphD y aadD, mientras que slo
dos tenan aphA-3, lo que tambin se ha descrito en otras series de CC398 (Figura 17, Kadlec
et al., 2009; Fesler et al., 2010). Un hecho interesante fue que muchos aislamientos CC398
fenotpicamente susceptibles portaban genes de resistencia (Artculo 12). Este fenmeno se
ha dado en S. aureus en otros estudios, y se ha atribuido a fenmenos de induccin de la
transcripcin o a la presencia de genes inactivos (Monecke y Ehricht, 2005; Hauschild et al.,
2008; Fatholahzadeh et al., 2009).
El cloranfenicol, debido a sus efectos secundarios, es un antibitico poco utilizado
para el tratamiento de infecciones en humanos (Torres et al., 2000), por lo que hay pocos
estudios sobre la incidencia de genes de resistencia a fenicoles en S. aureus de origen clnico
(Fluit et al., 2001). Sin embargo, el uso del florfenicol est aprobado para el tratamiento de
animales, incluyendo el ganado porcino (Kehrenberg y Schwarz, 2006). De hecho, en nuestro
estudio slo tres aislamientos de la poblacin de portadores sanos fueron positivos para genes
cat, destacando el hecho de que dos de ellos pertenecen a los linajes CC9 y CC97 asociados a
animales (Sung et al., 2008; Neela et al., 2009; Gmez Sanz et al., 2010; Ruimy et al., 2010).
A pesar de su uso en ganadera porcina, pocos aislamientos CC398 fueron resistentes a
cloranfenicol (8,6%), y slo en dos se pudo identificar el determinante de resistencia
implicado (Artculo 12). El resto de aislamientos pueden poseer otros mecanismos de
resistencia; de hecho este clon parece ser prolfico en nuevos genes de resistencia como ya se
192
4. Discusin
Aminoglsidos
100
80
60
40
20
0
CC398
CC97
CC121
CC59
CC45
CC30
CC25
CC9
CC15
CC5
CC398
CC121
CC97
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
tetM
CC15
linA/linA'
tetL
CC9
CC398
CC121
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC15
msrB
tetK
CC8
msrA
Tetraciclina
100
80
60
40
20
0
CC5
ermC
CC9
aphA
CC1
ermB
CC5
aadD
ermA
100
80
60
40
20
0
CC1
aacAaphD
CC1
CC398
CC97
MLS
CC121
CC72
CC59
CC45
CC30
CC25
CC22
CC9
CC15
CC8
CC5
CC1
100
80
60
40
20
0
193
4. Discusin
Espaa. El gen ermB es uno de los genes de resistencia frente a antibiticos MLS ms
extendido ya que se ha encontrado en varios gneros bacterianos (Roberts, 2005; Roberts,
2008), siendo en S. aureus ms frecuente en aislamientos de origen animal (Werckenthin et
al., 2001). Sin embargo, en Espaa parece ser frecuente en aislamientos clnicos (Laplana et
al., 2007), aunque en Asturias, al igual que en la Rioja, apareci en pocos aislamientos de
origen comunitario (Tabla 13; Lozano et al., 2011b). La resistencia slo a clindamicina, as
como el gen linA/linA se encontr con baja frecuencia en las poblaciones estudiadas. En
general existe poca informacin sobre la incidencia de este gen en S. aureus, a pesar de la
existencia de homlogos en otros gneros bacterianos, debido a la alta dispersin de genes
erm que confieren resistencia a todo el grupo MLS (Fluit et al., 2001). Por otro lado, en los
aislamientos de animales tambin se estudio la resistencia a estreptrogaminas, as como la
presencia de posibles determinantes, aunque ninguno de los genes descritos pudo ser
detectado en la serie (Artculo 12).
La resistencia a tetraciclina en aislamientos de portadores sanos se present con baja
frecuencia, siempre asociada al gen tetK (Figura 17). Este gen se ha encontrado, slo o junto
con tetM, en aislamientos clnicos espaoles (Laplana et al., 2007). El linaje CC398 est
asociado a altos porcentajes de resistencia a tetraciclina, debido al uso indiscriminado de este
antibitico en ganadera porcina (MARAN, 2007; DANMAP, 2008; Broens et al., 2011).
Todos los aislamientos CC398 analizados en esta Tesis doctoral posean el gen tetM y el
91,4% fue positivo para uno o dos genes ms de resistencia a tetraciclinas (tetK y/o tetL), lo
que muestra la extensin de esta resistencia en CC398. En general, se han descrito muy pocos
aislamientos de este complejo clonal que carecen del gen tetM (Kadlec et al., 2009; Kadlec y
Schwarz, 2009a; Lozano et al., 2011b; Lozano et al., 2011c).
4. Discusin
aphA-3, ermC, mrsA, msrB, y tetK hibridaron en estos perfiles en el 36.8%, 68.4%, 66.7%,
18.5%, 85%, 20%, 72.7% y 92.3% de los aislamientos positivos para cada uno de los genes
indicados. Los genes blaZ, blaZ::Tn552, aacA-aphD, aphA-3, y tetK se han descrito tanto en
plsmidos como en el cromosoma (ver apartado 1.4.2.). Sin embargo los genes ermC, msrA
y msrB se localizan generalmente en plsmidos, aunque se han descrito aislamientos con
msrA y ermC de localizacin o posible localizacin cromosmica (Wondrack et al., 1996;
Tenover et al., 2006). Cabe destacar que muchos perfiles plasmdicos fueron similares en
aislamientos de distintos linajes, siendo la mayora de ellos portadores de blaZ (pR1 en CC5 y
CC30) o blaZ::Tn552 (pR3 en CC25, CC45 y CC97; pR4 en CC15, CC30 y CC45; pR5 en
CC15 y CC25; pR10 en CC5, CC25 y CC30; pR12 en CC5 y CC59), mientras que otros
conferan resistencia a antibiticos del grupo MLS (pR16 en CC1, CC45 y CC72) o a varios
antimicrobianos (pR26 en CC15 y CC30; pR31 en CC30 y C4C5) (Artculo 6). Este
fenmeno muestra la importancia de los plsmidos en la trasmisin de resistencias, y sugiere
su capacidad de superar la barrera impuesta por el sistema RM Sau1 al intercambio de
informacin gentica entre linajes (Lindsay, 2008).
4. Discusin
resistencia a -lactmicos y metales pesados (Weaver et al., 2009), por lo que podran
considerarse miembros de esta ltima familia, dada la presencia de los genes bla y cad. Sin
embargo, como tambin contienen genes de enterotoxinas (sed, selj y ser) se pueden
considerar plsmidos hbridos de virulencia-resistencia. Estos plsmidos portan, adems, el
gen ftsK, que codifica una protena de membrana que se asocia a sistemas de secrecin en
micobacterias (Abdallah et al., 2007). Por otro lado, poseen el gen abiK, que confiere
resistencia a fagos mediante un mecanismo de infeccin abortiva, descrito inicialmente en un
plsmido de Lactococcus lactis (Emond et al., 1997) y posteriormente en pETB de S. aureus
(Yamaguchi et al., 2001). Adems, todos los plsmidos tipo pIB485 secuenciados contienen
i) el gen sin que codifica una resolvasa de la familia de las serina recombinasas (enzimas que
introducen roturas bicatenarias en el ADN y luego intercambian cadenas para promover la
recombinacin), y est presente en muchos plsmidos de multirressitencia de S. aureus
(Mouw et al., 2008); ii) un gen que codifica un regulador transcripcional de tipo MarR,
estando este tipo de reguladores implicados en la expresin de factores de virulencia en S.
aureus (Cheung et al., 2004; Cheung et al., 2008); y iii) un gen que codifica una alcohol
deshidrogenasa, que puede contribuir a resistir el estrs oxidativo dentro de macrfagos. Este
fenmeno es destacable, ya que recientemente se ha descrito que el etanol, adems de inducir
la respuesta frente estrs oxidativo, afecta a la expresin de mltiples toxinas aumentando el
potencial patognico de S. aureus (Korem et al., 2010). La mayora de plsmidos tipo pIB485
secuenciados, tambin contienen el gen bin que codifica una invertasa de la familia de
recombinasas sitio-especificas inicialmente descrita en Tn552 que porta el operon bla
(Rowland y Dyke, 1989).
En esta Tesis se disearon oligonucletidos para la deteccin por PCR de los genes
presentes en plsmidos de tipo pIB485, para determinar la estructura de pUO-Sa-SED1 y
pUO-Sa-SED2 (Anexo I). Como se observa en la Figura 19, ambos presentaron todos los
genes analizados, confirmndose su relacin con pIB485. Por otro lado, la estructura de pUOSa-SED3 se investig no slo mediante PCR sino tambin por clonacin y secuenciacin. As
se confirm que pUO-Sa-SED3 comparte caractersticas con los plsmidos de tipo pIB485 (el
gen repA, cadD, sin y los genes que codifican MarR y la alcohol deshidrogenasa), pero que,
de acuerdo con su mayor tamao contiene varias inserciones de ADN adicional (Artculo 8).
Destaca la adquisicin del opern mer (de resistencia a mercurio), posiblemente a partir de un
plsmido de S. epidermidis [nmero de acceso: GQ900452.1 (Summers y colaboradores, no
publicado)], as como la presencia de genes de resistencia a macrolidos (msrA y mphC que
codifican una bomba de expulsin y una macrlido fosfotransferasa que inactiva al
antibitico, respectivamente). Adems, se ha podido determinar que el gen ser, presente en
otros plsmidos de tipo pIB485, se encuentra truncado por la insercin de un elemento
cromosmico que contiene genes para una lipoprotena, traG y ftsK. Este hecho es
interesante, ya que los productos de traG y ftsK actan como un sistema de translocacin
bipartito en un plsmido de E. coli (Gunton et al., 2007), mientras que la protena FtsK
presenta homologa con un sistema de secrecin de tipo VII (el sistema Esx) de
196
4. Discusin
SAP047A (28.9Kb)
otros genes
gen es de enterotoxinas
genes de resistencia
genes de recombinasas
600-800 nt
Figura 18. Organizacin gentica de los plsmidos sed-seljser secuenciados. Los plsmidos
secuenciados estn depositados en bases de datos con los siguientes nmeros de acceso: p19321-P03
(CP002147.1). pIB485 (AF053140.1 y M94872.1), pF5 (AB075606.1 y AB330135.1) pLUH02
(FR714929.1), pSK67 (GQ900447.1), pWBG744 (GQ900398.1), SAP012A (GQ900377.1), SAP047A
(GQ900405.1), SAP048A (GQ900406.1), SAP074A (GQ900426.1).
Los diferentes plsmidos de tipo pIB485 no slo son interesantes por las funciones de
resistencia y virulencia que aportan, sino tambin desde un punto de vista evolutivo. Como ya
se ha indicado, posiblemente proceden de plsmidos de resistencia a -lactmicos y metales
pesados que han adquirido genes para enterotoxinas. Estos plsmidos presentan una
organizacin comn, pero han ido evolucionando y dando lugar a nuevas variantes por
adquisicin y/o prdida de determinantes de resistencia y virulencia. Los resultados de este
trabajo sugieren la presencia de estos plsmidos en S. aureus de distinto origen y
pertenecientes a CCs, sugiriendo que son capaces de superar las barreras que limitan el
intercambio de informacin gentica entre linajes.
197
4. Discusin
A. Comparacin con plsmidos tipo pIB485
SAP048A (27.3Kb)
repA-Fw3
2156 pb
cad-Fw2
blaZ-Fw2
cad-Rv2
2485 pb
1219 pb
ftsK-Rv
1560 pb
AD-Fw2
blaRI-Rv2
966 pb
bin-Fw
sin-Rv
1458 pb
ser-Rv2
868 pb
1016 pb
ser-Fw
selj-Rv
blaI-Rv
abiK-Rv2 blaRI-Fw
1876 pb
1115 pb
sin-Fw
MarR-Rv
abiK-Fw
blaZ-Rv2
1411 pb
935 pb
blaI-Fw
bin-Rv
selj-Fw2
sed-Rv2
908 pb
MarR-Fw
AD-Rv
ftsK-Fw
pUO-Sa-SED1
+ +
+ +
+ +
pUO-Sa-SED2
+ +
+ +
+ +
pUO-Sa-SED3
+ +
+ +
pUO-Sa-SED4
+ +
+ +
2271 pb
bact-Fw2
bact-Rv2
1387 pb
pUO-Sa-SED1
pUO-Sa-SED2
pUO-Sa-SED3
pUO-Sa-SED4
ABCtranp-Rv2
SAP047A (28.9Kb)
repA-Fw4
4175 pb
selj-Fw
TnaseIS431-Rv
cad-Fw2
1135 pb
TnaseIS431-Rv
1180 pb
TnaseIS431-Fw
blaZ1-Rv2
1379pb
set-Fw
set-Rv
1429 pb
ses-Fw2
ses-Rv
3800 pb
pUO-Sa-SED1
pUO-Sa-SED2
pUO-Sa-SED3
pUO-Sa-SED4
otros genes
gen es de enterotoxinas
genes de resistencia
genes de recombinasas
ABCtransp-Rv2
600-800 nt
Figura 19. Organizacin gentica de los tres tipos de plsmidos sed-seljser encontrados en
el Principado de Asturias. Las secuencias de pF5 (AB075606.1 y AB330135.1), SAP047A
(GQ900405.1) y SAP048A (GQ900406.1) se tomaron como modelo para el diseo de PCRs para
determinar la estructura de los distintos plsmidos. Se indican los oligonucletidos de las PCR de
anclaje (Anexo I), as como el tamao esperado de los amplicones en cada caso. +, amplificacin
positiva, -, amplificacin negativa.
4. Discusin
4. 5. Consideraciones generales
Los procesos de recombinacin y mutacin son las fuerzas que inducen a la
diversificacin de clones bacterianos. En las poblaciones de tipo clonal en las que la
diversidad gentica es debida principalmente a procesos de mutacin, se muestran
asociaciones entre los alelos de los diversos loci (desequilibrio de ligamiento). Sin embargo,
en las poblaciones donde predominan los fenmenos de recombinacin se detectan bajos
niveles de asociacin entre alelos de los diferentes loci (equilibrio de ligamiento) (Spratt et
al., 2001). La estructura poblacional de S. aureus se describe como altamente clonal, y esto se
ha relacionado con las diferencias existentes en el sistema RM Sau1, que limita el
intercambio gentico entre aislamientos de distintos linajes, pero no entre miembros de un
mismo linaje (Waldron y Lindsay, 2006; Lindsay, 2008). Sin embargo, estudios recientes
apoyan la existencia de tasas de recombinacin entre linajes superiores a las que se asuman
anteriormente, hecho que podra facilitar la emergencia de clones ms virulentos (BasicHammer et al., 2010). En esta lnea, los estudios con SNPs sugieren que la introduccin de
elementos SCCmec en cepas MSSA ocurren con una frecuencia ms elevada que la estimada
previamente (Nbel et al., 2008; Smyth et al., 2010). Los resultados del presente trabajo
apoyan esta idea, ya que aunque se han detectado factores de virulencia y resistencia muy
vinculados a determinados linajes, generalmente aparecen en varios CCs. Estos fenmenos
potenciaran la generacin de bacterias ms patgenas y resistentes, incluso imbatibles con el
arsenal teraputico actual. Por tanto, la identificacin de los linajes que estn circulando en
una regin, no slo en hospitales sino tambin en la comunidad, y de los determinantes de
resistencia y virulencia que portan, son importantes ya que pueden ayudar a establecer
mejores estrategias para el control de este verstil patgeno.
199
4. Discusin
200
5.Conclusiones
5. Conclusiones
1. La aplicacin de distintas tcnicas de tipificacin molecular: macrorrestriccin genmica
con SmaI seguida de electroforesis en campo pulsante (PFGE), secuenciacin del gen de la protena A
(spa), secuenciacin de multiples loci (MLST) y amplificacin por PCR de los genes sau1hsdS1 y
sau1hsdS2 del sistema de restriccin-modificacin Sau1, permiti establecer la estructura poblacional
de los aislamientos de Staphylococcus aureus que han estado circulando en el Principado de Asturias
(PA), tanto en hospitales como en la comunidad.
2. Se detectaron quince linajes o complejos clonales (CCs): CC1, CC5, CC8, CC9, CC12,
CC15, CC22, CC25, CC30, CC45, CC59, CC72, CC88, CC97, CC121, la mayora presentes, aunque
en proporciones variables, en todas las poblaciones analizadas. Estas incluyeron aislamientos de dos
hospitales: Hospital Universitario Central de Asturias y Hospital Monte Naranco; de portadores sanos,
de alimentos y manipuladores de alimentos. En todos los casos, CC5, CC30 y CC45 fueron linajes ms
frecuentes, poniendo de manifiesto su xito en diferentes ambientes.
3. La tipificacin molecular demostr el intercambio de aislamientos entre el medio
hospitalario y la comunidad. Esto se puso de manifiesto, por ejemplo, mediante la tcnica SmaI-PFGE,
que fue altamente discriminativa y mostr una elevada correlacin con las tipificaciones spa y MLST.
4. En las poblaciones analizadas la mayor parte de los linajes se asoci con un tipo concreto
del sistema agr regulador de virulencia. Sin embargo, se encontraron excepciones que apoyan la
existencia de intercambio gentico entre linajes, lo que podra introducir variaciones en la expresin de
las funciones de virulencia.
5. Todas las poblaciones del PA estudiadas presentaron altos porcentajes de genes de
hemolisinas, lukED, genes sea, sec y de los clsters egc1 y egc2 de enterotoxinas. Los genes de
exfoliatinas y de la leucotoxina Panto-Valentine fueron ms frecuentes en aislamientos clnicos que en
aislamientos comunitarios.
6. La combinacin de genes de virulencia y marcadores de distintos elementos genticos
mviles (EGMs) revel la presencia de distintos tipos de isla genmica Sa, de islas de patogenicidad
(SaPIs), de profagos y de plsmidos en los aislamientos del PA, y apoy la existencia de nuevas islas o
variantes que pudieron surgir por procesos de delecin y/o recombinacin.
7. Algunos genes y/o EGMs fueron ms frecuentes en determinados linajes, destacando las
asociaciones etd-CC25, sep-CC5, tst-CC30, SaPImw2-CC45, SaPI3-CC59, Sa I-CC5 y CC15, Sa
III-CC30 y CC121. Sin embargo, la amplia dispersin de determinantes de virulencia entre los
aislamientos analizados indica la existencia de fenmenos de transferencia horizontal, no slo dentro
de un mismo linaje sino tambin entre linajes.
8. Todas las poblaciones del PA presentaron altos porcentajes de resistencia a ampicilinapenicilina, kanamicina, eritromicina y clindamicina, pero la multirresistencia fue ms frecuente en los
aislamientos nosocomiales que en los comunitarios (44 y 2,5%, respectivamente). Adems, los
aislamientos CC5 y CC8 de procedencia hospitalaria mostraron elevados porcentajes de resistencia a
gentamicina y ciprofloxacina.
9. La frecuencia total de aislamientos de S. aureus resistentes a meticilina (MRSA) fue del
15,4%, siendo la mayora de origen hospitalario (95,9%). Los restantes se hallaron en muestras de
manipuladores de alimentos (4,1%).
10. En las poblaciones del PA se identificaron 15 clones MRSA, siendo tres ellos: ST14SCCmec V, ST125-SCCmec III y ST125-SCCmec V, de nueva descripcin. Los clones MRSA ms
frecuentes fueron el Peditrico (ST5, SCCmec IV) y el ST125-SCCmec IV, coincidiendo con lo
descrito en Espaa durante el periodo de estudio.
201
5. Conclusiones
11. En S. aureus de origen comunitario destaca el elevado porcentaje del gen aphA (24,3%),
que confiere resistencia a kanamicina, en aislamientos de portadores sanos y la redundancia de genes
de resistencia a antimicrobianos del grupo MLS en poblaciones procedentes de portadores sanos,
alimentos y manipuladores de alimentos.
12. En todas las poblaciones se encontraron aislamientos resistentes a mupirocina, el
antibitico de eleccin para la erradicacin del estado de portador. La resistencia a mupirocina fue de
nivel bajo (65,2%), intermedio (8,3%) o alto (25%).
13. El 64,9% de los aislamientos presentaron plsmidos de resistencia, muchos de ellos
compartidos por distintos linajes. Mediante experimentos de hibridacin se comprob la localizacin
plasmdica de la mayora de los determinantes de resistencia encontrados en S. aureus de portadores
sanos.
14. Los plsmidos hbridos de virulencia-resistencia pUO-Sa-SED constituyen un ejemplo de
evolucin bacteriana y plasmdica, destacando pUO-Sa-SED3 que contiene, no slo genes de
virulencia y resistencia, sino tambin genes implicados en colonizacin y procesos de conjugacin.
Estos ltimos facilitaran la persistencia de la bacteria en el hospedador y la dispersin del plsmido
entre bacterias. La co-seleccin de las distintas funciones codificadas por el mismo EGM constituye
un importante problema de salud pblica.
15. La sustitucin del enzima de restriccin SmaI por el isosquizmero Cfr9I permiti la
tipificacin del clon ST398 (CC398) mediante PFGE. A pesar de su reciente emergencia, la
tipificacin Cfr9I-PFGE puso de manifiesto la existencia de variabilidad intra-clon, asociada al tipo de
SCCmec. Una C5-citosina-metiltransferasa es responsable de la resistencia del genoma de ST398 a la
digestin por SmaI.
16. La mayora de los aislamientos MRSA del CC398 contienen SCCmec V y ms de la mitad
fueron multiresistentes. Destaca la redundancia de genes de resistencia a antibiticos del grupo MLS y
tetraciclina y la presencia de genes de resistencia a aminoglicsidos en cepas susceptibles.
17. Por el momento, el potencial toxignico del CC398 es muy limitado. De 30 genes de
virulencia analizados slo se detect el gen de la enterotoxina SEB en dos aislamientos.
202
5. Conclusiones
1. The application of different molecular typing techniques: genomic macrorestriction with
SmaI followed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), protein A gene (spa) sequencing, multi
locus sequence typing (MLST), and PCR amplification of the sau1hsdS1 and sau1hsdS2 genes of the
SauI restriction-modification system; established the population structure of Staphylococcus aureus
isolates that have been circulating in the Principality of Asturias (PA), both in hospital and community
settings.
2. Fifteen lineages or clonal complexes (CCs): CC1, CC5, CC8, CC9, CC12, CC15, CC22,
CC25, CC30, CC45, CC59, CC72, CC88, CC97, CC121, were detected. The majority were found at
different frequencies in all populations, which included isolates from two hospitals: Hospital
Universitario Central de Asturias and Monte Naranco Hospital; healthy carriers, foodstuffs and food
handlers. CC5, CC30 and CC45 were the most frequent lineages in all samples, indicating their
success in different environments.
3. Molecular typing of the isolates demonstrated the exchange of strains between hospital and
community settings. This was for instance revealed by the SmaI-PFGE technique, which was highly
discriminative and showed a good correlation with spa and MLST typing.
4. Most lineages were associated with a certain type of agr virulence regulatory system.
However, exceptions were found and were consistent with a possible exchange of genetic information
between lineages, which can lead to changes the expression patterns of virulence determinants.
5. All the PA populations had high percentages of haemolysin genes, lukED, sea and sec
genes, and the egc1 and egc2 clusters of enterotoxin genes. Exfoliatin genes and the Panto-Valentine
leukotoxin gene were more frequently found in clinical than in community isolates.
6. Combinations of virulence factors and markers of different mobile genetic elements
(MGEs) supported the presence of different types of the Sa genomic island, pathogencity islands
(SaPIs), prophages and plasmids in PA isolates. However, the existence of new islands or variants,
which could have originated through deletion and/or recombination events, was also possible.
7. Some genes and/or MGEs were more frequent in certain lineages, as: etd-CC25, sep-CC5,
tst-CC30, SaPImw2-CC45, SaPI3-CC59, Sa I-CC5 and CC15, Sa III-CC30 and CC121.
However, the wide dispersion of virulence determinants among the analysed isolates indicates the
existence of horizontal transfer events that contribute to their spread within and between lineages.
8. All the PA populations showed high rates of resistance to ampicillin, penicillin, kanamycin,
erythromycin and clindamycin, but multidrug resistance was more common in hospitals than in
community populations (percentages of 44 and 2.5%, respectively). In addition, the frequency of
gentamicin and ciprofloxacin was high in CC5 and CC8 isolates from nosocomial settings.
9. The overall frequency of methicillin resistant S. aureus (MRSA) was 15.4%, being the
majority from hospital origin (95.9%). The remaining MRSA were recovered from food handlers
(4.1%).
10. Fifteen MRSA clones were identified in the PA populations, and three were of new
description (ST14-SCCmec V, ST125-SCCmec III and ST125-SCCmec V). The most common MRSA
clones were the Pediatric clone (ST5, SCCmec IV) and ST125-SCCmec IV, which have also been the
most frequent MRSA clones in Spain during the period of study.
11. With regard to community isolates, the high percentage of the aphA gene (24.3%), which
confers resistance to kanamycin, in S. aureus from healthy carriers, and the redundancy of MLS
resistance gene in S. aureus from healthy carriers, foodstuffs and food handlers, is significant.
203
5. Conclusiones
12. Mupirocin resistant isolates were detected in all populations, being the antibiotic of choice
for the eradication of carrier state. Mupirocin resistance was low (65.2%), intermediate (8.3%) or high
(25%). In one isolate from a food handler, which showed high level of resistance, the mupA
responsible for such resistance was detected.
13. 64.9% of the isolates carried resistance plasmids, many of them shared by different
lineages. Hybridization experiments demonstrated the plasmid location of most resistance
determinants detected in healthy carrier isolates.
14. The pUO-Sa-SED resistance-virulence hybrid plasmids constitute an example of bacterial
and plasmid evolution. pUO-Sa-SED3 is particularly interesting, since it does not only contain
resistance and virulence genes, but also genes involved in colonization and conjugation processes. The
latter could facilitate persistence of the bacteria in their host, and spread of the plasmid dispersion
between bacteria. Co-selection of different functions encoded by the same EGM represents a major
problem of public health.
15. Replacement of SmaI restriction enzyme for its Cfr9I isoesquizomer allowed the typing of
CC398 by PFGE. Although CC398 is an emergent lineage, typing by Cfr9I-PFGE showed internal
variation that was linked to SCCmec type. A C5-cytosine-methyltransferase is responsible for the
resistance of CC398 genome to SmaI digestion.
16. Most CC398 MRSA isolates contained SCCmec V, and more than a half were
multiresistant. Redundancy of MLS and tetracycline resistance genes and the presence of
aminoglycoside resistance genes in susceptible strains must be highlighted.
17. Nowadays, the toxigenic potential of CC398 is very limited. From 30 virulence genes
analysed, only SEB enterotoxin gene was detected in two isolates.
204
6.Bibliografa
6. Bibliografa
Acton DS, Plat-Sinnige MJ, van Wamel W, de Groot N, van Belkum, A. Intestinal carriage of
Staphylococcus aureus: how does its frequency compare with that of nasal carriage and what is its
clinical impact? Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2009, 28: 115-127.
Abdallah AM, Gey van Pittius NC, Champion PA, Cox J, Luirink J, Vandenbroucke-Grauls CM,
Appelmelk BJ, Bitter W. Type VII secretion mycobacteria show the way. Nat Rev Microbiol
2007, 5: 883-891.
Albrich WC, Harbarth S. Health-care workers: source, vector, or victim of MRSA? Lancet Infect Dis
2008, 8: 289-301.
Altboum Z, Hertman I, Sarid S. Penicillinase plasmid-linked genetic determinants for enterotoxins B and
C1 production in Staphylococcus aureus. Infect Immun 1985, 47: 514-521.
Ambler RP, Coulson AF, Frer JM, Ghuysen JM, Joris B, Forsman M, Levesque RC, Tiraby G,
Waley SG. A standard numbering scheme for the class A beta-lactamases. Biochem J 1991, 276:
269-270.
Armand-Lefevre L, Ruimy R, Andremont A. Clonal comparison of Staphylococcus aureus isolates from
healthy pig farmers, human controls, and pigs. Emerg Infect Dis 2005, 11: 711-714.
Aspiroz C, Lozano C, Vindel A, Lasarte JJ, Zarazaga M, Torres C. Skin lesion caused by ST398 and
ST1 MRSA, Spain. Emerg Infect Dis 2010, 16: 157-159.
Baba T, Bae T, Schneewind O, Takeuchi F, Hiramatsu K. Genome sequence of Staphylococcus aureus
strain Newman and comparative analysis of staphylococcal genomes: polymorphism and evolution
of two major pathogenicity islands. J Bacteriol 2008, 190: 300-310.
Bae IG, Kim JS, Kim S, Heo ST, Chang C, Lee EY. Genetic correlation of community-associated
methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains from carriers and from patients with clinical
infection in one region of Korea. J Korean Med Sci 2010, 25: 197-202.
Bania J, Dabrowska A, Korzekwa K, Zarczynska A, Bystron J, Chrzanowska J, Molenda J. The
profiles of enterotoxin genes in Staphylococcus aureus from nasal carriers. Lett Appl Microbiol.
2006, 42: 315-320.
Barlow M. What antimicrobial resistance has taught us about horizontal gene transfer. In Horizontal Gene
Transfer: Genomes in flux. Eds. MB Gogarten et al.., Springer-Verlag, New York. Vol. 532,
2009.
Bartels MD, Nanuashvili A, Boye K, Rohde SM, Jashiashvili N, Faria NA, Kereselidze M, Kharebava
S, Westh H. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in hospitals in Tbilisi, the Republic of
Georgia, are variants of the Brazilian clone. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2008, 27: 757-760.
Basic-Hammer N, Vogel V, Basset P, Blanc DS. Impact of recombination on genetic variability within
Staphylococcus aureus clonal complexes.Infect Genet Evol 2010, 10: 1117-1123.
Bayles KW, Iandolo JJ. Genetic and molecular analyses of the gene encoding staphylococcal enterotoxin
D. J Bacteriol 1989, 171: 4799-4806.
Becker K, Friedrich AW, Lubritz G,, Weilert M, Peters G, Von Eiff C. Prevalence of genes encoding
pyrogenic toxin superantigens and exfoliative toxins among strains of Staphylococcus aureus
isolated from blood and nasal specimens. J Clin Microbiol 2003, 41: 1434-1439.
Bens CC, Voss A, Klaassen CH. Presence of a novel DNA methylation enzyme in methicillin-resistant
Staphylococcus aureus isolates associated with pig farming leads to uninterpretable results in
standard pulsed-field gel electrophoresis analysis. J Clin Microbiol 2006, 44: 1875-1876.
Bergeys Manual of Systematic Bacteriology Eds. GM Garrity,GM; Boone, DR; Castenholz, RW. 2 ed.,
Springer-Verlag, New York. 2001.
Bergdoll MS, Crass BA, Reiser RF, Robbins RN, Davis, JP. A new staphylococcal enterotoxin,
enterotoxin F, associated with toxic-shock-syndrome Staphylococcus aureus isolates. Lancet 1981,
5: 10171021.
Besier S, Ludwig A, Zander J, Brade V, Wichelhaus TA. Linezolid resistance in Staphylococcus aureus:
gene dosage effect, stability, fitness costs, and cross-resistances. Antimicrob Agents Chemoter
2008, 52: 1570-1572.
Bhat M, Dumortier C, Taylor BS, Miller M, Vasquez G, Yunen J, Brudney K, Snchez-E J,
Rodriguez-Taveras C, Rojas R, Leon P, Lowy FD. Staphylococcus aureus ST398, New York
City and Dominican Republic. Emerg Infect Dis 2009, 15: 285-287.
Bokarewa MI, Jin T, Tarkowski, A. Staphylococcus aureus: Staphylokinase. Int J Biochem Cell Biol
2008, 38: 504-509.
Bosch T, de Neeling AJ, Schouls LM, van der Zwaluw KW, Kluytmans JA, Grundmann H,
Huijsdens XW. PFGE diversity within the methicillin-resistant Staphylococcus aureus clonal
lineage ST398. BMC Microbiol 2010,10: 40.
205
6. Bibliografa
Broens EM, Graat EA, van der Wolf PJ, van de Giessen AW, van Duijkeren E, Wagenaar JA, van
Nes A, Mevius DJ, de Jong MC. MRSA CC398 in the pig production chain. Prev Vet Med 2011,
98: 182-189.
Bronner S, Monteil H, Prvost G. Regulation of virulence determinants in Staphylococcus aureus:
complexity and applications. FEMS Microbiol Rev 2004, 28: 183-200.
Bukowski M, Wladyka B, Dubin G. Exfoliative toxins of Staphylococcus aureus. Toxins 2010, 2: 11481165.
Burts ML, Williams WA, DeBord K, Missiakas DM. EsxA and EsxB are secreted by an ESAT-6-like
system that is required for the pathogenesis of Staphylococcus aureus infections. Proc Natl Acad
Sci USA 2005, 102: 1169-1174.
Bush K, Jacoby GA, Medeiros AA. A functional classification scheme for beta-lactamases and its
correlation with molecular structure. Antimicrob Agents Chemoter 1995, 39: 1211-1233.
Calvo J, Martnez-Martnez L. Mecanismos de accin de los antimicrobianos. Enferm Infect Microbiol
Clin 2009, 27: 44-52.
Campanile F, Bongiorno D, Borbone S, Stefani S. Hospital-associated methicillin-resistant
Staphylococcus aureus (HA-MRSA) in Italy. Ann Clin Microbiol Antimicrob 2009, 24: 8-22.
Canchaya C, Proux C, Fournous G, Bruttin A, Brssow H. Prophage Genomics. Microbiol Mol Biol
Rev 2003, 67: 238-276.
Cevallos C, Hernndez-Pezzi G, Torres A, Ordez P, Villarrubia S, Bleda MJ. Brotes de
enfermedades transmitidas por alimentos. Espaa. 2003 (excluye brotes hdricos) Boletn
Epidemiolgico Semanal 2005, 13(3): 25-36.
Cha JO, Lee JK, Jung YH, Yoo JI, Park YK, Kim BS, Lee YS. Molecular analysis of Staphylococcus
aureus isolates associated with staphylococcal food poisoning in South Korea. J Appl Microbiol
2006, 101: 864-871.
Cheung AL, Bayer AS, Zhang G, Gresham H, Xiong YQ. Regulation of virulence determinants in vitro
and in vivo in Staphylococcus aureus. FEMS Immunol Med Microbiol 2004, 40: 1-9.
Cheung AL, Nishina KA, Trotonda MP, Tamber S. The SarA protein family of Staphylococcus aureus.
Int J Biochem Cell Biol 2008, 40: 355-361.
Clarke SR, Foster SJ. Surface adhesins of Staphylococcus aureus. Adv Microb Physiol 2006, 51: 187-224.
Cockfield JD, Pathak S, Edgeworth JD, Lindsay JA. Rapid determination of hospital-acquired
meticillin-resistant Staphylococcus aureus lineages. J Med Microbiol 2007, 56: 614-619.
Collery MM, Smyth DS, Twohig JM, Shore AC, Coleman DC, Smyth CJ. Molecular typing of nasal
carriage isolates of Staphylococcus aureus from an Irish university student population based on
toxin gene PCR, agr locus types and multiple locus, variable number tandem repeat analysis. J
Med Microbiol 2008, 57: 348-358.
Collery MM, Smyth DS, Tumilty JJ, Twohig JM, Smyth CJ. Associations between enterotoxin gene
cluster types egc1, egc2 and egc3, agr types, enterotoxin and enterotoxin-like gene profiles, and
molecular typing characteristics of human nasal carriage and animal isolates of Staphylococcus
aureus. J Med Microbiol 2009, 58: 13-25.
Collignon P, Powers JH, Chiller TM, AidaraKane A, Aarestrup FM. World Health Organization
ranking of antimicrobials according to their importance in human medicine: a critical step for
developing risk management strategies for the use of antimicrobials in food production animals.
Clin Infect Dis 2009; 49: 132-141.
Cookson BD, Robinson DA, Monk AB, Murchan S, Deplano A, de Ryck R, Struelens MJ, Scheel C,
Fussing V, Salmenlinna S, Vuopio-Varkila J, Cuny C, Witte W, Tassios PT, Legakis NJ, van
Leeuwen W, van Belkum A, Vindel A, Garaizar J, Haeggman S, Olsson-Liljequist B, Ransjo
U, Muller-Premru M, Hryniewicz W, Rossney A, O'Connell B, Short BD, Thomas J,
O'Hanlon S, Enright MC. Evaluation of molecular typing methods in characterizing a European
collection of epidemic methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains: the HARMONY
collection. J Clin Microbiol 2007, 45: 1830-1837.
Cosgrove SE, Sakoulas G, Perencevich EN, Schwaber MJ, Karchmer AW, Carmeli Y. Comparison of
mortality associated with methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus
bacteremia: a meta- analysis. Clin Infect Dis 2003, 36: 53-59.
Couch JL, Soltis MT, Betley MJ. Cloning and nucleotide sequence of the type E staphylococcal
enterotoxin gene. J Bacteriol 1988, 170: 2954-2960.
Cuevas O, Cercenado E, Vindel A, Guinea J, Snchez-Conde M, Snchez-Somolinos M, Bouza E.
Evolution of the antimicrobial resistance of Staphylococcus spp. in Spain: five nationwide
prevalence studies, 1986 to 2002. Antimicrob Agents Chemother 2004, 48: 4240-4245.
206
6. Bibliografa
Cuevas O, Cercenado E, Bouza E, Castellares C, Trincado P, Cabrera R, Vindel A; Spanish Group
for the Study of Staphylococcus. Molecular epidemiology of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus in Spain: a multicentre prevalence study (2002). Clin Microbiol Infect 2007, 13 :250-256.
Cuevas O, Cercenado E, Goyanes MJ, Vindel A, Trincado P, Boquete T, Marn M, Bouza E; Grupo
Espaol para el Estudio de Estafilococo. Staphylococcus spp. in Spain: present situation and
evolution of antimicrobial resistance (1986-2006). Enferm Infecc Microbiol Clin 2008, 26: 269277.
Cui S, Li J, Hu C, Jin S, Li F, Guo Y, Ran L, Ma Y. Isolation and characterization of methicillinresistant Staphylococcus aureus from swine and workers in China. J Antimicrob Chemother 2009,
64: 680-683.
Cuny C, Friedrich A, Kozytska S, Layer F, Nbel U, Ohlsen K, Strommenger B, Walther B, Wieler
L, Witte W. Emergence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in different
animal species. Int J Med Microbiol 2010, 300: 109-117.
Daly KM, Upton M, Sandiford SK, Draper LA, Wescombe PA, Jack RW, O'Connor PM, Rossney A,
Gtz F, Hill C, Cotter PD, Ross RP, Tagg JR. Production of the Bsa lantibiotic by communityacquired Staphylococcus aureus strains. J Bacteriol 2010, 192:1131-1142.
DANMAP 2008. Use of antimicrobial agents and occurrence of antimicrobial resistance in bacteria from
food animals, foods and humans in Denmark. ISSN 1600-2032. 2008.
Day NP, Moore CE, Enright MC, Berendt AR, Smith JM, Murphy MF, Peacock SJ, Spratt BG, Feil
EJ. A link between virulence and ecological abundance in natural populations of Staphylococcus
aureus. Science 2001, 292: 114-116. Retraction in: Day NP, Moore CE, Enright MC, Berendt
AP, Smith JM, Murphy MF, Peacock SJ, Spratt BG, Feil EJ. Science. 2002, 295: 971.
de Boer E, Zwartkruis-Nahuis JT, Wit B, Huijsdens XW, de Neeling AJ, Bosch T, van Oosterom RA,
Vila A, Heuvelink AE. Prevalence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in meat. Int J
Food Microbiol 2009, 134: 52-56.
de Haas CJ, Veldkamp KE, Peschel A, Weerkamp F, Van Wamel WJ, Heezius EC, Poppelier MJ,
Van Kessel KP, van Strijp JA. Chemotaxis inhibitory protein of Staphylococcus aureus, a
bacterial antiinflammatory agent. J Exp Med 2004, 199: 687695.
de Neeling AJ, van den Broek MJ, Spalburg EC, van Santen-Verheuvel MG, Dam-Deisz WD,
Boshuizen HC, van de Giessen AW, van Duijkeren E, Huijsdens XW. High prevalence of
methicillin resistant Staphylococcus aureus in pigs. Vet Microbiol 2007, 122: 366-372.
Derbise A, Aubert S, El Solh N. Mapping the regions carrying the three contiguous antibiotic resistance
genes aadE, sat4, and aphA-3 in the genomes of staphylococci. Antimicrob Agents Chemother
1997, 41: 1024-1032.
Deurenberg RH, Stobberingh EE. The evolution of Staphylococcus aureus. Infect Genet Evol 2008,
8:747-763.
Deurenberg RH, Stobberingh EE. The molecular evolution of hospital- and community-associated
methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Curr Mol Med 2009, 9: 100-115.
Deurenberg RH, Rijnders MI, Sebastian S, Welling MA, Beisser PS, Stobberingh EE. The
Staphylococcus aureus lineage-specific markers collagen adhesin and toxic shock syndrome toxin
1 distinguish multilocus sequence typing clonal complexes within spa clonal complexes. Diagn
Microbiol Infect Dis 2009, 65: 116-122.
Diemond Hernndez JBBD, Novales GM. Biofilm: amenaza latente o factor de proteccin? Estado del
arte. Enf Inf Microbiol 2007, 27: 22-28.
Dinges MM, Orwin PM, Schlievert PM. Exotoxins of Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Rev 2000,
13: 16-34.
Duck WM, Steward CD, Banerjee SN, McGowan JE Jr, Tenover FC. Optimization of computer
software settings improves accuracy of pulsed-field gel electrophoresis macrorestriction fragment
pattern analysis. J. Clin. Microbiol 2003, 41: 30353042.
Eliopoulos GM. Microbiology of drugs for treating multiply drug-resistant Gram-positive bacteria. J Infect
2009, 59: S17 S24
Ellington MJ, Perry C, Ganner M, Warner M, McCormick Smith I, Hill RL, Shallcross L,
Sabersheikh S, Holmes A, Cookson BD, Kearns AM. Clinical and molecular epidemiology of
ciprofloxacin-susceptible MRSA encoding PVL in England and Wales. Eur J Clin Microbiol Infect
Dis 2009, 28: 1113-1121.
Ellington MJ, Ganner M, Warner M, Cookson BD, Kearns AM. Polyclonal multiply antibiotic-resistant
methicillin-resistant Staphylococcus aureus with Panton-Valentine leucocidin in England. J
Antimicrob Chemother 2010, 65: 46-50.
207
6. Bibliografa
Emaneini M, Taherikalani M, Eslampour MA, Sedaghat H, Aligholi M, Jabalameli F, Shahsavan S,
Sotoudeh N. Phenotypic and genotypic evaluation of aminoglycoside resistance in clinical isolates
of staphylococci in Tehran, Iran. Microb Drug Resist 2009, 15: 129-132.
Emond E, Holler BJ, Boucher I, Vandenbergh PA, Vedamuthu ER, Kondo JK, Moineau S.
Phenotypic and genetic characterization of the bacteriophage abortive infection mechanism AbiK
from Lactococcus lactis. Appl Environ Microbiol 1997, 63: 1274-1283.
Enright MC, Day NP, Davies CE, Peacock SJ, Spratt BG. Multilocus sequence typing for
characterization of methicillin-resistant and methicillin-susceptible clones of Staphylococcus
aureus. J Clin Microbiol 2000, 38: 1008-1015.
Enright MC, Robinson DA, Randle G, Feil EJ, Grundmann H, Spratt BG. The evolutionary history of
methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Proc Natl Acad Sci USA 2002, 99: 76877692.
Errecalde JO. Uso de antimicrobianos en animales de consume: incidencia del desarrollo de resistencias
en salud pblica. Produccin y Sanidad Animal (FAO). Organizacin de las Naciones Unidas para
la agricultura y la alimentacin, Roma. 2004.
Eriksen NH, Espersen F, Rosdahl VT, Jensen K. Carriage of Staphylococcus aureus among 104 healthy
persons during a 19-month period. Epidemiol Infect 1995, 115: 51-60.
Euler CW, Ryan PA, Martin JM, Fischetti VA. M.SpyI, a DNA methyltransferase encoded on a mefA
chimeric element, modifies the genome of Streptococcus pyogenes. J Bacteriol 2007, 189: 10441054.
European Antimicrobial Resistance Surveillance System (EARSS). Annual Report 2008. 2008,
http://www.rivm.nl/earss/.
Eurostat. Pig farming in the EU, a changing sector. Issue number 8. 2010.
http://epp.eurostat.ec.europa.eu/portal/page/portal/eurostat/home/
Fanoy E, Helmhout LC, van der Vaart WL, Weijdema K, van Santen-Verheuvel MG, Thijsen SF, de
Neeling AJ, van Wamel WJ, Manaskova SH, Kingma-Thijssen JL. An outbreak of nontypeable MRSA within a residential care facility. Euro Surveill 2009, 14: 19080.
Fatholahzadeh B, Emaneini M, Feizabadi MM, Sedaghat H, Aligholi M, Taherikalani M, Jabalameli
F. Characterisation of genes encoding aminoglycoside-modifying enzymes among meticillinresistant Staphylococcus aureus isolated from two hospitals in Tehran, Iran. Int J Antimicrob
Agents 2009, 33:264-265.
Fesler A, Scott C, Kadlec K, Ehricht R, Monecke S, Schwarz S. Characterization of methicillinresistant Staphylococcus aureus ST398 from cases of bovine mastitis. J Antimicrob Chemother
2010, 65: 619-625.
Fesler AT, Kadlec K, Schwarz S. Novel apramycin resistance gene apmA in bovine and porcine
methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST398 isolates. Antimicrob Agents Chemother 2011,
55: 373-375.
Feil EJ, Cooper JE, Grundmann H, Robinson DA, Enright MC, Berendt T, Peacock SJ, Smith JM,
Murphy M, Spratt BG, Moore CE, Day NP. How clonal is Staphylococcus aureus? J Bacteriol
2003, 185: 3307-3316.
Feil EJ, Li BC, Aanensen DM, Hanage WP, Spratt BG. eBURST: inferring patterns of evolutionary
descent among clusters of related bacterial genotypes from multilocus sequence typing data. J
Bacteriol 2004, 186: 1518-1530.
Feng Y, Chen C-J, Su L-H, Hu S, Yu J, Chiu, C-H. Evolution and pathogenesis of Staphylococcus
aureus: lessons learned from genotyping and comparative genomics. FEMS Microbiol Rev 2008,
32: 2337.
Ferry, T, Perpoint, T, Vandenesch, F, Etienne J. Virulence determinants in Staphylococcus aureus and
their involvement in clinical syndromes. Curr Infect Dis Reports 2005, 7: 420-428.
Firth N, Apisiridej S, Berg T, O'Rourke BA, Curnock S, Dyke KG, Skurray RA. Replication of
staphylococcal multiresistance plasmids. J Bacteriol 2000, 182: 2170-2178.
Fitzgerald JR, Monday SR, Foster TJ, Bohach,GA, Hartigan PJ, Meaney WJ, Smith CJ.
Characterization of putative pathogenicity island from bovine Staphylococcus aureus encoding
multiple superantigens. J Bacteriol 2001, 18: 63-70.
Fluit ADC, Visser MR, Schmitz FJ. Molecular detection of antimicrobial resistance. Clin Microbiol Rev
2001, 14. 836-871.
Fossum AE, Bukholm G. Increased incidence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST80, novel
ST125 and SCCmec IV in the south-eastern part of Norway during a 12-year period. Clin
Microbiol Infect 2006, 12: 627-633.
Foster TJ. Immune evasion by staphylococci. Nat Rev Microbiol 2005, 3: 948958
208
6. Bibliografa
Frnay HM, Bunschoten AE, Schouls LM, van Leeuwen WJ, Vandenbroucke-Grauls CM, Verhoef J,
Mooi FR. Molecular typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus on the basis of protein
A gene polymorphism. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1996, 15: 60-64.
Friedrich AW, Witte W, Harmsen D, de Lencastre H, Hryniewicz W, Scheres J, Westh H..
SeqNet.org: a European laboratory network for sequence based typing of microbial pathogens.
Euro Surveill 2006, 11: 112-114.
Fueyo JM, Martn MC, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza MC. Enterotoxin production and DNA
fingerprinting in Staphylococcus aureus isolated from human and food samples. Relations between
genetic types and enterotoxins. Int J Food Microbiol 2001, 67: 139-145.
Fueyo JM, Mendoza MC, Martn MC. Enterotoxins and toxic shock sndrome toxin in Staphylococcus
aureus recovered from human nasal carriers and manually handled foods: epidemiological and
genetic findings. Microb Infect 2005a, 7: 187-194.
Fueyo JM, Mendoza MC, Alvarez MA, Martn MC. Relationships between toxin gene content and
genetic background in nasal carried isolates of Staphylococcus aureus from Asturias, Spain. FEMS
Microbiol Lett 2005b, 243: 447-454.
Fueyo JM, Mendoza MC, Rodicio MR, Muiz J, Alvarez MA, Martn MC. Cytotoxin and pyrogenic
toxin superantigen gene profiles of Staphylococcus aureus associated with subclinical mastitis in
dairy cows and relationships with macrorestriction genomic profiles. J Clin Microbiol 2005c, 43:
1278-1284.
Fraser JD, Proft T. The bacterial superantigen and superantigen-like proteins. Immunol Rev 2008, 225:
226-243.
George EA, Muir TW. Molecular mechanisms of agr quorum sensing in virulent staphylococci.
Chembiochem 2007, 8: 847-855.
Ghasemzadeh-Moghaddam H, Ghaznavi-Rad E, Sekawi Z, Yun-Khoon L, Aziz MN, Hamat RA,
Melles DC, van Belkum A, Shamsudin MN, Neela V. Methicillin-susceptible Staphylococcus
aureus from clinical and community sources are genetically diverse. Int J Med Microbiol 2010,
301: 347-53.
Ghebremedhin B, Olugbosi MO, Raji AM, Layer F, Bakare RA, Knig B, Knig, W. Emergence of a
community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain with a unique resistance
profile in Southwest Nigeria. J Clin Microbiol 2009, 47: 297-2980.
Gherardi G, De Florio L, Lorino G, Fico L, Dicuonzo G. Macrolide resistance genotypes and phenotypes
among erythromycin-resistant clinical isolates of Staphylococcus aureus and coagulase-negative
staphylococci, Italy. FEMS Immunol Med Microbiol 2009, 55: 62-67.
Gill SR, Fouts DE, Archer GL, Mongodin EF, Deboy RT, Ravel J, Paulsen IT, Kolonay JF, Brinkac
L, Beanan M, Dodson RJ, Daugherty SC, Madupu R, Angiuoli SV, Durkin AS, Haft DH,
Vamathevan J, Khouri H, Utterback T, Lee C, Dimitrov G, Jiang L, Qin H, Weidman J,
Tran K, Kang K, Hance IR, Nelson KE, Fraser CM. Insights on evolution of virulence and
resistance from the complete genome analysis of an early methicillin-resistant Staphylococcus
aureus strain and a biofilm-producing methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis strain. J
Bacteriol 2005, 187: 2426-2438.
Gillet Y, Issartel B, Vanhems P, Fournet JC, Lina G, Bes M, Vandenesch F, Pimont Y, Brousse N,
Floret D, Etienne J. Association between Staphylococcus aureus strains carrying gene for
PantonValentine leukocidin and highly lethal necrotising pneumonia in young immunocompetent
patients. Lancet 2002, 359: 753759.
Gilot P, Lina G, Cochard T, Poutrel B. Analysis of the genetic variability of genes encoding the RNA
IIIactivating components agr and TRAP in a population of Staphylococcus aureus strains isolated
from cows with mastitis. J Clin Microbiol 2002, 40: 4060-4067.
Goerke C, Pantucek R, Holtfreter S, Schulte B, Zink M, Grumann D, Brker BM, Doskar J, Wolz C.
Diversity of prophages in dominant Staphylococcus aureus clonal lineages. J Bacteriol 2009. 191:
3462346.
Goerke C, Esser S, Kmmel M, Wolz C. Staphylococcus aureus strain designation by agr and cap
polymorphism typing and delineation of agr diversification by sequence analysis. Int J Med
Microbiol 2005, 295: 67-75.
Gold HS, Pillai SK. Antistaphylococcal agents. Infect Dis Clin N Am 2009, 23: 99-131.
Golding GR, Bryden L, Levett PN, McDonald RR, Wong A, Wylie J, Graham MR, Shaun Tyler, Van
Domselaar G, Simor AE, Gravel D, Mulvey MR. Livestock-associated methicillin-resistant
Staphylococcus aureus sequence type 398 in humans, Canada. Emerg Infect Dis 2010, 16: 587594.
Gomes AR, Westh H, de Lencastre H. Origins and evolution of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus clonal lineages. Antimicrob Agents Chemother 2006, 50: 3237-3244.
209
6. Bibliografa
Gmez MI, Seaghdha MO, Prince AS. Staphylococcus aureus protein A activates TACE through EGFRdependent signalling. The EMBO Journal 2007, 26: 701709.
Gmez-Sanz E, Torres C, Lozano C, Fernndez-Prez R, Aspiroz C, Ruiz-Larrea F, Zarazaga M.
Detection, molecular characterization, and clonal diversity of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus CC398 and CC97 in Spanish slaughter pigs of different age groups. Foodborne Pathog Dis
2010, 7: 1269-1277.
Goossens H. Antibiotic consumption and link to resistance. Clin Microbiol Infect 2009, 15 (Suppl 3): 1215.
Gtz F. Staphylococcus and biofilms. Mol Microbiol 2002, 43: 1367-1378.
Graveland H, Wagenaar JA, Heesterbeek H, Mevius D, van Duijkeren E, Heederik D. Methicillin
resistant Staphylococcus aureus ST398 in veal calf farming: human MRSA carriage related with
animal antimicrobial usage and farm hygiene. PLoS One 2010, 5: e10990.
Gray RR, Tatem AJ, Johnson JA, Alekseyenko AV, Pybus OG, Suchard MA, Salemi M. Testing
Spatiotemporal Hypothesis of Bacterial Evolution Using Methicillin-Resistant Staphylococcus
aureus ST239 Genome-wide Data within a Bayesian Framework. Mol Biol Evol 2011, 28: 1593603.
Grundmann, H, Hori S, Tanner G. Determining confidence intervals when measuring genetic diversity
and the discriminatory abilities of typing methods for microorganisms J Clin Microbiol 2001, 39:
41904192.
Grundmann H, Aires-de-Sousa M, Boyce J, Tiemersma E. Emergence and resurgence of meticillinresistant Staphylococcus aureus as a public-health threat. Lancet 2006, 368: 874-885.
Grundmann H, Aanensen DM, van den Wijngaard CC, Spratt BG, Harmsen D, Friedrich AW;
European Staphylococcal Reference Laboratory Working Group. Geographic distribution of
Staphylococcus aureus causing invasive infections in Europe: a molecular-epidemiological
analysis. PLoS Med 2010, 7: e1000215.
Guardabassi L, Stegger M, Skov R. Retrospective detection of methicillin resistant and susceptible
Staphylococcus aureus ST398 in Danish slaughter pigs. Vet Microbiol 2007, 122: 384-386.
Gunton JE, Gilmour MW, Baptista KP, Lawley TD, Taylor DE. Interaction between the co-inherited
TraG coupling protein and the TraJ membrane-associated protein of the H-plasmid conjugative
DNA transfer system resembles chromosomal DNA translocases. Microbiol 2007, 153: 428-441.
Hallin M, Denis O, Deplano A, De Mendonca R, De Ryck R, Rottiers S, Struelens MJ. Genetic
relatedness between methicillin-susceptible and methicillin-resistant Staphylococcus aureus:
results of a national survey. J Antimicrob Chemother 2007a, 59: 465-472.
Hallin M, Deplano A, Denis O, De Mendona R, De Ryck R, Struelens MJ. Validation of pulsed-field
gel electrophoresis and spa typing for long-term, nationwide epidemiological surveillance studies
of Staphylococcus aureus infections. J Clin Microbiol 2007b, 45: 127-133.
Harbarth S, Schrenzel J, Renzi G, Akakpo C, Ricou B. Is throat screening necessary to detect
methicillin-resistant Staphylococcus aureus colonization in patients upon admission to an intensive
care unit? J Clin Microbiol 2007, 45: 1072-1073.
Harmsen D, Claus H, Witte W, Rothgnger J, Claus H, Turnwald D, Vogel U. Typing of methicillinresistant Staphylococcus aureus in a university hospital setting by using novel software for spa
repeat determination and database management. J Clin Microbiol 2003, 41: 5442-5448.
Hartleib, J., Kohler, N., Dickinson, R. B., Chhatwal GS, Sixma JJ, Hartford OM, Foster TJ, Peters
G, Kehrel BE, Herrmann M. Protein A is the von Willebrand factor binding protein on
Staphylococcus aureus. Blood 2000, 96: 2149-2156.
Hasman H, Moodley A, Guardabassi L, Stegger M, Skov RL, Aarestrup FM. spa type distribution in
Staphylococcus aureus originating from pigs, cattle and poultry. Veterinary Microbiology 2010,
141: 326-331.
Hassan KA, Skurray RA, Brown MH. Active export proteins mediating drug resistance in Staphylococci.
J Mol Microbiol Biotechnol 2007, 12: 180-196.
Hauschild T, Sacha P, Wieczorek P, Zalewska M, Kaczyska K, Tryniszewska E. Aminoglycosides
resistance in clinical isolates of Staphylococcus aureus from a University Hospital in Bialystok,
Poland. Folia Histochem Cytobiol 2008, 46: 225-228.
Hernndez Mart V, Rom Snchez E, Salavert Llet M, Bos Ribelles V, Poveda Andrs JL.
Daptomicina: revitalizando un antiguo frmaco ante la necesidad de nuevos agentes activos frente
a bacterias grampositivas multirresistentes. Rev Esp Quimioterap 2007; 20: 261-276.
Hernndez-Pezzi G, Torres A, Ordez P, Cevallos C. Brotes de enfermedades transmitidas por
alimentos. Espaa, 1993-2002 (excluye brotes hdricos) Boletn Epidemiolgico Semanal 2004,
12(26):289-296.
210
6. Bibliografa
Hisata K, Ito T, Matsunaga N, Komatsu M, Jin J, Li S, Watanabe S, Shimizu T, Hiramatsu K.
Dissemination of multiple MRSA clones among community-associated methicillin-resistant
Staphylococcus aureus infections from Japanese children with impetigo. J Infect Chemother 2011,
doi:10.1007/s10156-011-0223-4.
Ho PL, Wang TK, Ching P, Mak GC, Lai E, Yam WC, Seto, WH. Epidemiology and genetic diversity
of methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains in residential care homes for elderly persons
in Hong Kong. Infect Control Hosp Epidemiol 2007, 28: 671-678.
Holden MT, Feil EJ, Lindsay JA, Peacock SJ, Day NP, Enright MC, Foster TJ, Moore CE, Hurst L,
Atkin R, Barron A, Bason N, Bentley SD, Chillingworth C, Chillingworth T, Churcher C,
Clark L, Corton C, Cronin A, Doggett J, Dowd L, Feltwell T, Hance Z, Harris B, Hauser H,
Holroyd S, Jagels K, James KD, Lennard N, Line A, Mayes R, Moule S, Mungall K, Ormond
D, Quail MA, Rabbinowitsch E, Rutherford K, Sanders M, Sharp S, Simmonds M, Stevens
K, Whitehead S, Barrell BG, Spratt BG, Parkhill J. Complete genomes of two clinical
Staphylococcus aureus strains: evidence for the rapid evolution of virulence and drug resistance.
Proc Natl Acad Sci USA 2004, 101: 9786-9791.
Holtfreter S, Grumann D, Schmudde M, Nguyen HT, Eichler P, Strommenger B, Kopron K, Kolata
J, Giedrys-Kalemba S, Steinmetz I, Witte W, Brker BM. Clonal distribution of superantigen
genes in clinical Staphylococcus aureus isolates. J Clin Microbiol. 2007, 45: 2669-2680.
Howden BP, Davies JK, Johnson PD, Stinear TP, Grayson ML. Reduced vancomycin susceptibility in
Staphylococcus aureus, including vancomycin-intermediate and heterogeneous vancomycinintermediate strains: resistance mechanisms, laboratory detection, and clinical implications. Clin
Microbiol Rev 2010, 23:99-139.
Huijsdens XW, van Dijke BJ, Spalburg E, van Santen-Verheuvel MG, Heck ME, Pluister GN, Voss
A, Wannet WJ, de Neeling AJ. Community-acquired MRSA and pig-farming. Ann Clin
Microbiol Antimicrob 2006, 5: 26.
Hunter PR, Gaston MA. Numerical index of the discriminatory ability of typing systems: an application
of Simpson's index of diversity. J Clin Microbiol 1988, 26: 2465-2466.
International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome
Elements (IWG-SCC). Classification of staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec):
guidelines for reporting novel SCCmec elements. Antimicrob Agents Chemother 2009, 53:49614967.
ISO 6888-3:2003. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration
of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species). Part 3: Detection
and MPN technique for low numbers. http://www.iso.org/iso/home.htm. 2003.
Jansen MD, Box AT, Fluit AC. SCCmec typing in methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains of
animal origin. Emerg Infect Dis 2009, 15: 136-137.
Jansson B, Uhlen M, Nygren PA. All individual domains of staphylococcal protein A show Fab binding.
FEMS Immunol Med Microbiol 1998, 20: 69-78.
Jarraud S, Lyon GJ, Figueiredo AM, Grard L, Vandenesch F, Etienne J, Muir TW, Novick RP.
Exfoliatin-producing strains define a fourth agr specificity group in Staphylococcus aureus. J
Bacteriol 2000, 182: 6517-6522.
Jarraud S, Peyrat MA, Lim A, Tristan A, Bes M, Mougel C, Etienne J, Vandenesch F, Bonneville M,
Lina G. egc, a highly prevalent operon of enterotoxin gene, forms a putative nursery of
superantigens in Staphylococcus aureus. J Immunol 2001, 166: 669-677.
Jarraud S, Mougel C, Thioulouse J, Lina G, Meugnier H, Forey F, Nesme X, Etienne J, Vandenesch
F. Relationships between Staphylococcus aureus genetic background, virulence factors, agr groups
(alleles), and human disease. Infect Immun 2002, 70: 631-641.
Jensen SO, Lyon BR. Genetics of antimicrobial resistance in Staphylococcus aureus. Future Microbiol
2009, 4: 565-582.
Jevons MP. Celvenin-resistant staphylococci. Br Med J 1961, 1:124-125.
Ji G, Beavis R, Novick RP. Bacterial interference caused by autoinducing peptide variants. Science 1997,
276: 20272030.
Jorgensen JH. Mechanisms of methicillin resistance in Staphylococcus aureus and methods for laboratory
detection. Infect Control Hosp Epidemiol 1991,12:14-19.
Kadlec K, Ehricht R, Monecke S, Steinacker U, Kaspar H, Mankertz J, Schwarz S. Diversity of
antimicrobial resistance pheno- and genotypes of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
ST398 from diseased swine. J Antimicrob Chemother 2009, 64: 1156-1164.
Kadlec K, Schwarz S. Identification of a novel trimethoprim resistance gene, dfrK, in a methicillinresistant Staphylococcus aureus ST398 strain and its physical linkage to the tetracycline resistance
gene tet(L). Antimicrob Agents Chemother 2009a, 53: 776-778.
211
6. Bibliografa
Kadlec K, Schwarz S. Novel ABC transporter gene, vga(C), located on a multiresistance plasmid from a
porcine methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST398 strain. Antimicrob Agents Chemother
2009b, 53: 3589-3591.
Kaneko J, Kamio Y. Bacterial two-component and hetero-heptameric pore-forming cytolytic toxins:
structures, pore-forming mechanism, and organization of the genes. Biosci Biotechnol Biochem
2004, 68: 981-1003.
Katayama Y, Robinson DA, Enright MC, Chambers HF. Genetic background affects stability of mecA
in Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2005, 43: 2380-2383.
Kehrenberg C, Schwarz S. Distribution of florfenicol resistance genes fexA and cfr among
chloramphenicol-resitant Staphylococcus isolates. Antimicrob Agents Chemoter 2006, 50: 11561163.
Kennedy AD, Porcella SF, Martens C, Whitney AR, Braughton KR, Chen L, Craig CT, Tenover FC,
Kreiswirth BN, Musser JM, DeLeo FR. Complete nucleotide sequence analysis of plasmids in
strains of Staphylococcus aureus clone USA300 reveals a high level of identity among isolates
with closely related core genome sequences. J Clin Microbiol 2010, 48: 4504-4511.
Kim ES, Song JS, Lee HJ, Choe PG, Park KH, Cho JH, Park WB, Kim SH, Bang JH, Kim DM, Park
KU, Shin S, Lee MS, Choi HJ, Kim NJ, Kim EC, Oh MD, Kim HB, Choe KW. A survey of
community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Korea. J Antimicrob
Chemother 2007 60: 1108-1114. Erratum in: J Antimicrob Chemother 2008 62: 214.
Kim JH, Kim CH, Hacker J, Ziebuhr W, Lee BK, Cho SH. Molecular characterization of regulatory
genes associated with biofilm variation in a Staphylococcus aureus strain. J Microbiol Biotechnol
2008, 18: 28-34.
Kluytmans J, van Belkum A, Verbrugh H. Nasal carriage of Staphylococcus aureus: epidemiology,
underlying mechanisms, and associated risks. Clin Microbiol Rev 1997, 10: 505-520.
Kluytmans JA, Wertheim HF. Nasal carriage of Staphylococcus aureus and prevention of nosocomial
infections. Infection 2005, 33: 3-8.
Kluytmans J, Struelens M. Meticillin resistant Staphylococcus aureus in the hospital. BMJ 2009,
338:b364.
Koreen L, Ramaswamy SV, Graviss EA, Naidich S, Musser JM, Kreiswirth BN. spa typing method for
discriminating among Staphylococcus aureus isolates: implications for use of a single marker to
detect genetic micro- and macrovariation. J Clin Microbiol 2004, 42: 792-799.
Korem M, Gov Y, Rosenberg M. Global gene expression in Staphylococcus aureus following exposure to
alcohol. Microb Pathog 2010, 48: 74-84.
Kreiswirth B, Kornblum J, Arbeit RD, Eisner W, Maslow JN, McGeer A, Low DE, Novick RP.
Evidence for a clonal origin of methicillin resistance in Staphylococcus aureus. Science 1993, 259:
227-230.
Lamers RP, Stinnett JW, Muthukrishnan G, Parkinson CL, Cole AM. Evolutionary analyses of
Staphylococcus aureus identify genetic relationships between nasal carriage and clinical isolates.
PLoS One 2011, 6: e16426.
Laplana LM, Cepero MA, Ruiz J, Zolezzi PC, Calvo MA, Erazo MC, Gmez-Lus R. Molecular typing
of Staphylococcus aureus clinical isolates by pulsed-field gel electrophoresis, staphylococcal
cassette chromosome mec type determination and dissemination of antibiotic resistance genes. Int J
Antimicrob Agents 2007, 30: 505-513.
Larkin EA, Carman RJ, Krakauer T, Stiles BG. Staphylococcus aureus: the toxic presence of a
pathogen extraordinaire. Curr Med Chem 2009, 16: 4003-4019.
Larsen AR, Skov RL, Jarlier V, Henriksen AS. Epidemiological differences between the UK and Ireland
versus France in Staphylococcus aureus isolates resistant to fusidic acid from community-acquired
skin and soft tissue infections. J Antimicrob Chemother 2008, 61: 589-594.
Layer F, Ghebremedhin B, Knig W, Knig B. Heterogeneity of methicillin-susceptible Staphylococcus
aureus strains at a German University Hospital implicates the circulating-strain pool as a potential
source of emerging methicillin-resistant S. aureus clones. J Clin Microbiol 2006, 44: 2179-2185.
Letertre C, Perelle S, Dilasser F, Fach P. Identification of a new putative enterotoxin SEU encoded by
the egc cluster of Staphylococcus aureus. J Appl Microbiol 2003, 95: 38-43.
Lindsay JA. Staphylococcus: molecular genetics. 1 ed., Caster Academic Press, Reino Unido. 2008.
Lindsay JA, Sung JM. The RM test for determining methicillin-resistant Staphylococcus aureus lineages.
Methods Mol Biol 2010, 642 :3-11.
Liu GY. Molecular pahtogenesis of Staphylococcus aureus infection. Pediatr Res 2009, 65: 71R-77R.
Livermore DM. Beta-Lactamases in laboratory and clinical resistance, Clin Microbiol Rev 1995, 8: 557584.
212
6. Bibliografa
Llosa M, Gomis-Rth FX, Coll M, de la Cruz Fd F. Bacterial conjugation: a two-step mechanism for
DNA transport. Mol Microbiol 2002, 45: 1-8.
Lloyd DH. Reservoirs of antimicrobial resistance in pet animals. Clin Infect Dis 2007, 45: S148-S152.
Loeffler A, Kearns AM, Ellington MJ, Smith LJ, Unt VE, Lindsay JA, Pfeiffer DU, Lloyd DH. First
isolation of MRSA ST398 from UK animals: a new challenge for infection control teams? J Hosp
Infect 2009, 72: 269-271.
Lozano C, Lpez M, Gmez-Sanz E, Ruiz-Larrea F, Torres C, Zarazaga M. Detection of methicillinresistant Staphylococcus aureus ST398 in food samples of animal origin in Spain. J Antimicrob
Chemother 2009, 64: 1325-1326.
Lozano C, Aspiroz C, Ezpeleta AI, Gmez-Sanz E, Zarazaga M, Torres C. Empyema caused by MRSA
ST398 with atypical resistance profile, Spain. Emerg Infect Dis 2011a, 17: 138-140.
Lozano C, Gmez-Sanz E, Benito D, Aspiroz C, Zarazaga M, Torres C. Staphylococcus aureus nasal
carriage, virulence traits, antibiotic resistance mechanisms, and genetic lineages in healthy humans
in Spain, with detection of CC398 and CC97 strains. Int J Med Microbiol 2011b,
doi:10.1016/j.ijmm.2011.02.004.
Lozano C, Aspiroz C, Lasarte JJ, Gmez-Sanz E, Zarazaga M, Torres C. Dynamic of nasal
colonization by methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST398 and ST1 after mupirocin
treatment in a family in close contact with pigs. Comp Immunol Microbiol Infect Dis 2011c, 34:
e1-7.
Lowy, FD. Staphylococcus aureus infections. N Engl J Med 1998, 339: 520-532.
Madhusoodanan J, Seo KS, Remortel B, Park JY, Hwang SY, Fox LK, Park YH, Deobald CF, Wang
D, Liu S, Daugherty SC, Gill AL, Bohach GA, Gill SR. An enterotoxin-bearing pathogenicity
island in Staphylococcus epidermidis. J Bacteriol 2011, 193:1854-1862.
Matsuoka M, Sasaki T. Inactivation of macrolides by producers and pathogens. Curr Drug Targets Infect
Disord 2004, 4: 217-240.
Mandell, GL, Bennett JE, Dolin R. Staphylococcus aureus (Including Staphylococcal Toxic Shock). In
Bennetts-Principles and practice of infectious diseases. 5 ed., Churchill Livingstone,
Philadelphia, USA. 2000.
Manzur A, Dominguez MA, Ruiz de Gopegui E, Mariscal D, Gavalda L, Segura F, Perez JL, Pujol
M; Spanish Network for Research in Infectious Diseases. Natural history of meticillin-resistant
Staphylococcus aureus colonisation among residents in community long term care facilities in
Spain. J Hosp Infect 2010,76: 215-219.
MARAN 2007. Monitoring of antimicrobial resistance and antibiotic usage in animals in The Netherlands
in 2006/2007. Veterinary Antibiotic Usage and Resistance Surveillance Working Group. D. J.
Mevius, B. Wit, and W. van Pelt (ed.). 2007.
Marn M, Gudiol F. Antibiticos betalactmicos. Enferm Infecc Microbiol Clin 2003, 21: 42-55.
Martn MC, Fueyo JM, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza MC. Genetic procedures for identification of
enterotoxigenic strains of Staphylococcus aureus from three food poisoning outbreaks. Int J Food
Microbiol 2004, 94: 279-286.
Martnez EV, Varela MC, Cevallos C, Hernndez-Pezzi G, Torres A, Ordez P. Brotes de
enfermedades transmitidas por alimentos. Espaa, 2004-2007 (excluye brotes hdricos). Boletn
Epidemiolgico Semanal 2008, 16(21): 241-252.
Meka, VG, Gold HS. Antimicrobial resistance to linezolid. Clin Infect Dis 2004, 39: 1010-1015.
Menestrina G, Serra MD, Prvost G. Mode of action of beta-barrel pore-forming toxins of the
staphylococcal alpha-hemolysin family. Toxicon 2001, 39: 1661-1672.
McAleese F, Petersen P, Ruzin A, Dunman PM, Murphy E, Projan SJ, Bradford PA. A novel MATE
family efflux pump contributes to the reduced susceptibility of laboratory-derived Staphylococcus
aureus mutants to tigecycline. Antimicrob Agents Chemother 2005, 49: 1865-1871.
McConeghy KW, Mikolich DJ, LaPlante KL. Agents for the decolonization of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus. Pharmacotherapy 2009, 29:263-280.
McDowell P, Affas Z, Reynolds C, Holden MT, Wood SJ, Saint S, Cockayne A, Hill PJ, Dodd CE,
Bycroft BW, Chan WC, Williams P. Structure, activity and evolution of the group I thiolactone
peptide quorum-sensing system of Staphylococcus aureus. Mol Microbiol 2001, 41: 503512.
Mgevand C, Gervaix A, Heininger U, Berger C, Aebi C, Vaudaux B, Kind C, Gnehm HP, Hitzler M,
Renzi G, Schrenzel J, Franois P. Molecular epidemiology of the nasal colonization by
methicillin-susceptible Staphylococcus aureus in Swiss children. Clin Microbiol Infect 2010, 16:
1414-1420.
Melles DC, van Leeuwen WB, Snijders SV, Horst-Kreft D, Peeters JK, Verbrugh HA, van Belkum A.
Comparison of multilocus sequence typing (MLST), pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), and
213
6. Bibliografa
amplified fragment length polymorphism (AFLP) for genetic typing of Staphylococcus aureus. J
Microbiol Methods 2007, 69: 371-375.
Milheirio C, Oliveira DC, de Lencastre H. Update to the multiplex PCR strategy for assignment of mec
element types in Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemoter 2007a, 51: 3374-3377.
Milheirio C, Oliveira DC, de Lencastre H. Multiplex PCR strategy for subtyping the staphylococcal
cassette chromosome mec type IV in methicillin-resistant Staphylococcus aureus: SCCmec IV
multiplex. J Antimicrob Chemother 2007b, 60, 42-48.
Min YH, Kwon AR, Yoon JM, Yoon EJ, Shim MJ, Choi EC. Molecular analysis of constitutive
mutations in ermB and ermA selected in vitro from inducibly MLSB-resistant enterococci. Arch
Pharm Res 2008, 31: 377-380.
Mirelis, B; Gurgu M. Medicamentos antibacterianos. En Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y
microbiologa clnica. Ed. Mdica Panamericana, Spain. 2006.
Molina A, Del Campo R, Miz L, Morosini MI, Lamas A, Baquero F, Cantn R. High prevalence in
cystic fibrosis patients of multiresistant hospital-acquired methicillin-resistant Staphylococcus
aureus ST228-SCCmecI capable of biofilm formation. J Antimicrob Chemother 2008, 62: 961967.
Monecke S, Ehricht R. Rapid genotyping of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates
using miniaturised oligonucleotide arrays. Clin Microbiol Infect 2005, 11: 825-833.
Monecke S, Kuhnert P, Hotzel H, Slickers P, Ehricht R. Microarray based study on virulence-associated
genes and resistance determinants of Staphylococcus aureus isolates from cattle. Vet Microbiol
2007, 125: 128-140.
Monecke S, Luedicke C, Slickers P, Ehricht R. Molecular epidemiology of Staphylococcus aureus in
asymptomatic carriers. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2009, 28: 1159-1165.
Monday SR, Bohach GA. Genes encoding staphylococcal enterotoxins G and I are linked and separated by
DNA related to other staphylococcal enterotoxins. J Nat Toxins 2001, 10: 1-8.
Monk AB, Curtis S, Paul J, Enright MC. Genetic analysis of Staphylococcus aureus from intravenous
drug user lesions. J Med Microbiol 2004, 53: 223-227.
Montesinos I, Castro B, Lecuona M, Sierra A. Molecular epidemiology of meticillin-resistant
Staphylococcus aureus in a Spanish hospital: low prevalence of community and animal-associated
clones. J Hosp Infect 2010, 77: 362-363.
Moragas M, de Pablo MB. Recopilacin de normas microbiolgicas de los alimentos y asimilados y otros
parmetros
fsico-qumicos
de
inters
sanitario.
http://cvu.rediris.es/pub/bscw.cgi/d311175/Normicro/Recopila/normicro.htm. 2010.
Morgan M. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus and animals: zoonosis or humanosis? J Antimicrob
Chemother 2008, 62:1181-1187.
Mouw KW, Rowland SJ, Gajjar MM, Boocock MR, Stark WM, Rice PA. Architecture of a serine
recombinase-DNA regulatory complex. Mol Cell 2008, 30: 145-155.
Mulders MN, Haenen AP, Geenen PL, Vesseur PC, Poldervaart ES, Bosch T, Huijsdens XW,
Hengeveld PD, Dam-Deisz WD, Graat EA, Mevius D, Voss A, Van De Giessen AW.
Prevalence of livestock-associated MRSA in broiler flocks and risk factors for slaughterhouse
personnel in The Netherlands. Epidemiol Infect 2010, 138: 743-755.
Munson SH, Tremaine MT, Betley MJ, Welch RA. Identification and characterization of staphylococcal
enterotoxin types G and I from Staphylococcus aureus. Infect Immun 1998, 66: 3337-3348.
Murchan S, Kaufmann ME, Deplano A, de Ryck R, Struelens M, Zinn CE, Fussing V, Salmenlinna S,
Vuopio-Varkila J, El Solh N, Cuny C, Witte W, Tassios PT, Legakis N, van Leeuwen W, van
Belkum A, Vindel A, Laconcha I, Garaizar J, Haeggman S, Olsson-Liljequist B, Ransjo U,
Coombes G, Cookson B. Harmonization of pulsed-field gel electrophoresis protocols for
epidemiological typing of strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus: a single approach
developed by consensus in 10 European laboratories and its application for tracing the spread of
related strains. J Clin Microbiol 2003, 41: 1574-1585.
Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA. Microbiologa Mdica. 6 ed., Elservier, Spain. 2009.
Nadarajah J, Lee MJ, Louie L, Jacob L, Simor AE, Louie M, McGavin MJ. Identification of different
clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin-binding protein 2 (PBP2)
associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates. J Med
Microbiol 2006, 55: 1675-1683.
Nashev D, Toshkova K, Bizeva L, Akineden O, Lmmler C, Zschck M. Distribution of enterotoxin
genes among carriage- and infection-associated isolates of Staphylococcus aureus. Lett Appl
Microbiol 2007, 45: 681-685.
214
6. Bibliografa
Neela V, Mohd Zafrul A, Mariana NS, van Belkum A, Liew YK, Rad EG. Prevalence of ST9
methicillin-resistant Staphylococcus aureus among pigs and pig handlers in Malaysia. J Clin
Microbiol 2009, 47: 4138-4140.
Nemati M, Hermans K, Lipinska U, Denis O, Deplano A, Struelens M, Devriese LA, Pasmans F,
Haesebrouck F. Antimicrobial resistance of old and recent Staphylococcus aureus isolates from
poultry: first detection of livestock-associated methicillin-resistant strain ST398. Antimicrob
Agents Chemother 2008, 52: 3817-3819.
Nhan TX, Leclercq R, Cattoir V. Prevalence of toxin genes in consecutive clinical isolates of
Staphylococcus aureus and clinical impact. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2011, 30: 719-725.
Nishifuji K, Sugai M, Amagai M. Staphylococcal exfoliative toxins: Molecular scissors of bacteria that
attack the cutaneous defense barrier in mammals. J Dermatol Sci 2008, 49: 21-31.
Noto MJ, Archer GL. A subset of Staphylococcus aureus strains harboring staphylococcal cassette
chromosome mec (SCCmec) type IV is deficient in CcrAB-mediated SCCmec excision.
Antimicrob Agents Chemother 2006, 50: 27822788.
Novick RP. Autoinduction and signal transduction in the regulation of staphylococcal virulence. Mol
Microbiol 2003, 48: 1429-1449.
Novick RP, Subedi A. The SaPIs: mobile pathogenicity islands of Staphylococcus. Chem Immunol Allergy
2007, 93: 42-57.
Nbel U, Roumagnac P, Feldkamp M, Song JH, Ko KS, Huang YC, Coombs G, Ip M, Westh H, Skov
R, Struelens MJ, Goering RV, Strommenger B, Weller A, Witte W, Achtman M. Frequent
emergence and limited geographic dispersal of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Proc
Natl Acad Sci USA 2008, 105: 14130-14135.
Nulens E, Stobberingh EE, van Dessel H, Sebastian S, van Tiel FH, Beisser PS, Deurenberg RH.
Molecular characterization of Staphylococcus aureus bloodstream isolates collected in a Dutch
university hospital between 1999 and 2006. J Clin Microbiol 2008, 46: 2438-2441.
Nulens E, Stobberingh EE, Smeets E, van Dessel H, Welling MA, Sebastian S, van Tiel FH, Beisser
PS, Deurenberg RH. Genetic diversity of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a tertiary
hospital in The Netherlands between 2002 and 2006. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2009, 28:
631-639.
OBrien FG, Coombs GW, Pearman JW, Gracey M, Moss F, Christiansen KJ, Grubb WB. Population
dynamics of methicillin-susceptible and resistant Staphylococcus aureus in remote communities.
J Antimicrob Chemother 2009, 64: 684-693.
Ogston A. Micrococcus poisoning. J Anat Physiol. 1883, 17: 24-58.
Omoe K, Hu DL, Takahashi-Omoe H, Nakane A, Shinagawa K. Identification and characterization of a
new staphylococcal enterotoxin-related putative toxin encoded by two kinds of plasmids. Infect
Immun 2003, 71: 6088-6094.
Omoe K, Imanishi K, Hu DL, Kato H, Fugane Y, Abe Y, Hamaoka S, Watanabe Y, Nakane A,
Uchiyama T, Shinagawa K. Characterization of novel staphylococcal enterotoxin-like toxin type
P. Infect Immun 2005a, 73: 5540-5546.
Omoe K, Hu DL, Takahashi-Omoe H, Nakane A, Shinagawa K. Comprehensive analysis of classical
and newly described staphylococcal superantigenic toxin genes in Staphylococcus aureus isolates.
FEMS Microbiol Lett 2005, 246: 191-198.
Ono HK, Omoe K, Imanishi K, Iwakabe Y, Hu DL, Kato H, Saito N, Nakane A, Uchiyama T,
Shinagawa K. Identification and characterization of two novel staphylococcal enterotoxins, types
S and T. Infect Immun 2008, 76: 4999-5005.
Ortega E, Abriouel H, Lucas R, Glvez A. Multiple roles of Staphylococcus aureus enterotoxins:
Pathogenecity, superantigenic activity, and correlation to antibiotic resistance. Toxins 2010, 2:
2117-2131.
Orwin PM, Leung DY, Donahue HL, Novick RP, Schlievert PM. Biochemical and biological properties
of staphylococcal enterotoxin K. Infect Immun 2001, 69: 360-366.
Orwin PM, Leung DY, Tripp TJ, Bohach GA, Earhart, CA, Ohlendorf DH, Schlievert, PM.
Characterization of a novel staphylococcal enterotoxin-like superantigen, a member of the group V
subfamily of pyrogenic toxins. Biochemistry 2002, 41: 14033-14040.
Orwin PM, Fitzgerald JR, Leung DY, Gutierrez JA, Bohach GA, Schlievert PM. Characterization of
Staphylococcus aureus enterotoxin L. Infect Immun 2003, 71: 2916-2919.
O'Toole PW, Foster TJ. Epidermolytic toxin serotype B of Staphylococcus aureus is plasmid-encoded.
FEMS Microbiol Lett 1986, 36: 311-314.
Otter JA, French GL. Molecular epidemiology of community-associated meticillin-resistant
Staphylococcus aureus in Europe. Lancet Infect Dis 2010, 10: 227-239.
Otto M, Gtz F. ABC transporters of staphylococci. Res Microbiol 2001, 152: 351-356.
215
6. Bibliografa
Palomino J,Pachn J. Aminoglucsidos. Enferm Infecc Microbiol Clin 2003, 21: 105-115.
Pascual MR, Caldern V. Microbiologia alimentaria. Ed. Daz de Santos, 2000.
Patel M. Community-associated meticillin-resistant Staphylococcus aureus Infections. Epidemiology,
Recognition and Management. Drugs 2009; 69: 693-716.
Patel JB, Gorwitz RJ, Jernigan JA. Mupirocin resistance. Clin Infect Diseases 2009; 49: 935-941.
Peacock SJ, Moore CE, Justice A, Kantzanou M, Story L, Mackie K, O'Neill G, Day NP. Virulent
combinations of adhesin and toxin genes in natural populations of Staphylococcus aureus. Infect
Immun 2002, 70: 4987-4996.
Prez-Roth E, Lorenzo-Diaz F, Batista N, Moreno A, Mendez-Alvarez S. Tracking methicillin-resistant
Staphylococcus aureus clones during a 5-year period (1998 to 2002) in a Spanish hospital. J Clin
Microbiol 2004, 42: 4649-4656.
Prez-Vzquez M, Vindel A, Marcos C, Oteo J, Cuevas O, Trincado P, Bautista V, Grundmann H,
Campos J; EARSS Spain spa-typing Group. Spread of invasive Spanish Staphylococcus aureus
spa-type t067 associated with a high prevalence of the aminoglycoside-modifying enzyme gene
ant(4')-Ia and the efflux pump genes msrA/msrB. J Antimicrob Chemother 2009, 63: 21-31.
Prichon B, Courvalin P. VanA-type vancomycin-resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents
Chemother 2009, 53:4580-4587.
Potel C, Alvarez M, Alvarez P, Otero I, Fluiters E. Evolution, antimicrobial susceptibility and
assignment to international clones of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated over a 9year period in two Spanish hospitals. Clin Microbiol Infect 2007, 13: 728-730.
Potel C, Alvarez P, Constenla L, Alvarez M. Activity of mupirocin against methicillin-resistant
Staphylococcus aureus isolated in Pontevedra province. Enferm Infecc Microbiol Clin 2009, 27:
59-60.
Pratt C, Cornely K. Essential Biochemistry. Eds. John Wiley & Sons. 2004.
http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/index.html
Rabello RF, Moreira BM, Lopes RM, Teixeira LM, Riley LW, Castro AC. Multilocus sequence typing
of Staphylococcus aureus isolates recovered from cows with mastitis in Brazilian dairy herds. J
Med Microbiol 2007, 56: 1505-1511.
Rasschaert G, Vanderhaeghen W, Dewaele I, Janez N, Huijsdens X, Butaye P, Heyndrickx M.
Comparison of fingerprinting methods for typing methicillin-resistant Staphylococcus aureus
sequence type 398. J Clin Microbiol 2009,47: 3313-3322.
Reiser RF, Robbins RN, Khoe GP, Bergdoll MS. Purification and some physicochemical properties of
toxic-shock toxin. Biochemistry 1983, 22: 3907-3912.
Roberts MC. Update on acquired tetracycline resistance genes. FEMS Microbiol Lett 2005, 245: 105-203.
Roberts MC. Update on macrolide-lincosamide-streptogramin, ketolide, and oxazolidinone resitance
genes. FEMS Microbiol Lett 2008, 282: 147-159.
Robinson DA, Enright MC. Evolution of Staphylococcus aureus by large chromosomal replacements. J
Bacteriol 2004, 186: 1060-1064.
Robinson DA, Monk AB, Cooper JE, Feil EJ, Enright MC. Evolutionary genetics of the accessory gene
regulator (agr) locus in Staphylococcus aureus. J Bacteriol 2005, 187: 8312-8321.
Rosenbach FJ. Mikro-Organismen bei den. Wund-Infections-Krankheiten des Menschen. JF Bergmanns
Verlag, Wiesbaden, Germany, 1884, pp. 1122.
Rossney AS, Shore AC, Morgan PM, Fitzgibbon MM. The emergence and importation of diverse
genotypes of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) harboring the Panton-Valentine
leukocidin gene (pvl) reveal that pvl is a poor marker for Community-Acquired MRSA Strains in
Ireland. J Clin Microbiol 2007, 45: 25542563.
Rowland SJ, Dyke KG. Characterization of the staphylococcal beta-lactamase transposon Tn552. EMBO
J.1989, 8: 2761-2773.
Ruimy R, Armand-Lefevre L, Barbier F, Rupp E, Cocojaru R, Mesli Y, Maiga A, Benkalfat M,
Benchouk S, Hassaine H, Dufourcq JB, Nareth C, Sarthou JL, Andremont A, Feil EJ.
Comparisons between geographically diverse samples of carried Staphylococcus aureus. J
Bacteriol 2009, 191: 5577-5583.
Ruimy R, Angebault C, Djossou F, Dupont C, Epelboin L, Jarraud S, Lefevre LA, Bes M, Lixandru
BE, Bertine M, El Miniai A, Renard M, Bettinger RM, Lescat M, Clermont O, Peroz G, Lina
G, Tavakol M, Vandenesch F, van Belkum A, Rousset F, Andremont A. Are host genetics the
predominant determinant of persistent nasal Staphylococcus aureus carriage in humans? J Infect
Dis 2010, 202: 924-934.
Safdar N, Bradley EA. The Risk of Infection after Nasal Colonization with Staphylococcus aureus. Am J
Med 2008, 121: 310-315.
216
6. Bibliografa
Sakoulas G, Eliopoulos GM, Moellering R, Wennersten C, Venkataraman L, Novick RP, Gold HS.
Accessory gene regulator (agr) locus in geographically diverse Staphylococcus aureus isolates
with reduced susceptibility to vancomycin. Antimicrob Agents Chemother 2002, 46: 14921502.
Sakwinska O, Kuhn G, Balmelli C, Francioli P, Giddey M, Perreten V, Riesen A, Zysset F, Blanc DS,
Moreillon P. Genetic diversity and ecological success of Staphylococcus aureus strains colonizing
humans. Appl Environ Microbiol 2009, 75: 175-183.
Sato H, Matsumori Y, Tanabe T, Saito H, Shimizu A, Kawano J. A new type of staphylococcal
exfoliative toxin from a Staphylococcus aureus strain isolated from a horse with phlegmon. Infect
Immun 1994, 62: 3780-3785.
Sekiguchi J, Tharavichitkul P, Miyoshi-Akiyama T, Chupia V, Fujino T, Araake M, Irie A, Morita
K, Kuratsuji T, Kirikae T. Cloning and characterization of a novel trimethoprim-resistant
dihydrofolate reductase from a nosocomial isolate of Staphylococcus aureus CM.S2 (IMCJ1454).
Antimicrob Agents Chemother 2005, 49: 3948-3951.
Schijffelen MJ, Boel CH, van Strijp JA, Fluit AC. Whole genome analysis of a livestock-associated
methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST398 isolate from a case of human endocarditis.
BMC Genomics 2010, 11: 376.
Shabir S, Hardy KJ, Abbasi WS, McMurray CL, Malik SA, Wattal C, Hawkey PM. Epidemiological
typing of meticillin-resistant Staphylococcus aureus isolates from Pakistan and India. J Med
Microbiol 2010, 59: 330-337.
Shaw KJ, Rather PN, Hare RS,Miller GH. Molecular genetics of aminoglycoside resistance genes and
familial relationships of the aminoglycoside-modifying enzymes. Microbiol Rev 1993, 57: 138163.
Shinefield HR, Ruff NL. Staphylococcal Infections: A Historical Perspective. Infect Dis Clin N Am 2009:
23: 115.
Silva-Costa C, Ramirez M, Melo-Cristino J. Identification of macrolide-resistant clones of Streptococcus
pyogenes in Portugal. Clin Microbiol Infect 2006, 12: 513-518.
Silva-Costa C, Pinto FR, Ramirez M, Melo-Cristino J; Portuguese Surveillance Group for the Study
of Respiratory Pathogens. Decrease in macrolide resistance and clonal instability among
Streptococcus pyogenes in Portugal. Clin Microbiol Infect 2008, 14: 1152-1159.
Simpson, EH. Measurement of diversity. Nature 1949, 163: 688.
Sivaraman K, Venkataraman N, Tsai J, Dewell S, Cole AM. Genome sequencing and analysis reveals
possible determinants of Staphylococcus aureus nasal carriage. BMC Genomics 2008, 9: 433.
Smyth, DS, Feil EJ, Meaney WJ, Hartigan PJ, Tollersrud T, Fitzgerald JR, Enright MC, Smyth CJ.
Molecular genetic typing reveals further insights into the diversity of animal-associated
Staphylococcus aureus. J Med Microbiol 2009, 58: 1343-1353.
Smyth DS, McDougal LK, Gran FW, Manoharan A, Enright MC, Song JH, de Lencastre H,
Robinson DA. Population structure of a hybrid clonal group of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus, ST239-MRSA-III. PLoS One 2010, 5: e8582.
Sola C, Saka HA; Cordoba MRSA Collaborative Study Group, Vindel A, Bocco JL. Emergence and
dissemination of a community-associated methicillin-resistant Panton-Valentine leucocidinpositive Staphylococcus aureus clone sharing the sequence type 5 lineage with the most prevalent
nosocomial clone in the same region of Argentina. J Clin Microbiol 2008, 46: 1826-1831.
Spink, WW, Ferris, V. Quantitative action of penicillin inhibitor from penicillin-resistant strains of
Staphylococci. Science 1945, 102: 221-223.
Spratt BG, Hanage WP, Feil EJ. The relative contributions of recombination and point mutation to the
diversification of bacterial clones.Curr Opin Microbiol 2001, 4: 602-606.
Spratt BG, Hanage WP, Li B, Aanensen DM, Feil EJ. Displaying the relatedness among isolates of
bacterial species -- the eBURST approach. FEMS Microbiol Lett 2004, 241: 129-134.
Stegger M, Lindsay JA, Moodley A, Skov R, Broens EM, Guardabassi L. Rapid PCR detection of
Staphylococcus aureus clonal complex 398 by targeting the restriction-modification system
encoding sau1hsdS1. J Clin Microbiol 2010, 49: 732-734.
Straus SK, Hancock REW. Mode of action of the new antibiotic for Gram-positive pathogens
daptomycin: Comparison with cationic antimicrobial peptides and lipopeptides. Biochim Biophys
Acta 2006, 1758: 1215-1223.
Su, YC, Wong, AC. Identification and purification of a new staphylococcal enterotoxin, H. Appl
Environ.Microbiol 1995, 61: 1438-1443.
Sun J. Pathogenic bacterial proteins and their anti-inflammatory effects in the eukaryotic host. Antiinflamm
Antiallergy Agents Med Chem 2009, 8: 214227.
Sung JM, Lindsay JA. Staphylococcus aureus strains that are hypersusceptible to resistance gene transfer
from enterococci. Antimicrob Agents Chemother 2007, 51: 2189-2191.
217
6. Bibliografa
Sung JM, Lloyd DH, Lindsay JA. Staphylococcus aureus host specificity: comparative genomics of
human versus animal isolates by multi-strain microarray. Microbiology 2008, 154: 1949-1959.
Tavares DA, S-Leo R, Miragaia M, de Lencastre H. Large screening of CA-MRSA among
Staphylococcus aureus colonizing healthy young children living in two areas (urban and rural) of
Portugal. BMC Infect Dis 2010, 10: 110.
Teng LJ, Hsueh PR, Ho SW, Luh KT. High prevalence of inducible erythromycin resistance among
Streptococcus bovis isolates in Taiwan. Antimicrob Agents Chemother 2001, 45: 3362-3365.
Tenhagen BA, Fetsch A, Sthrenberg B, Schleuter G, Guerra B, Hammerl JA, Hertwig S, Kowall J,
Kmpe U, Schroeter A, Brunig J, Ksbohrer A, Appel B. Prevalence of MRSA types in
slaughter pigs in different German abattoirs. Vet Rec 2009, 165: 589-593.
Tenover FC, McDougal LK, Goering RV, Killgore G, Projan SJ, Patel JB, Dunman PM.
Characterization of a strain of community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus
widely disseminated in the United States. J Clin Microbiol 2006, 44: 108-118.
Thomas DY, Jarraud S, Lemercier B, Cozon G, Echasserieau K, Etienne J, Gougeon ML, Lina G,
Vandenesch F. Staphylocccal enterotoxin-like toxins U2 and V, two new staphylococcal
superantigens arising from recombination within the enterotoxin gene cluster. Infect Immun 2006,
74: 4724-4734.
Thomas D, Chou S, Dauwalder O, Lina G. Diversity in Staphylococcus aureus enterotoxins. Chem
Immunol Allergy 2007, 93: 24-41.
Thompson KM, Abraham N, Jefferson KK. Staphylococcus aureus extracellular adherence protein
contributes to biofilm formation in the presence of serum. FEMS Microbiol Lett 2010, 305: 143
147.
Torres J, Schelotto F, Braselli A, Torres E, y Meerovich E. Las principales familias de antimicrobianos.
2000. http://www.infecto.edu.uy.
Tristan A, Bes M, Meugnier H, Lina G, Bozdogan B, Courvalin P, Reverdy ME, Enright MC,
Vandenesch F, Etienne J. Global distribution of Panton-Valentine leukocidin--positive
methicillin-resistant Staphylococcus aureus, 2006. Emerg Infect Dis. 2007, 13: 594-600.
Udo EE, Pearman JW, Grubb WB. Genetic analysis of community isolates of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus in Western Australia. J Hosp Infect 1993; 25: 97-108.
VandenBergh MF, Yzerman EP, van Belkum A, Boelens HA, Sijmons M, Verbrugh HA. Follow-up of
Staphylococcus aureus nasal carriage after 8 years: redefining the persistent carrier state. J Clin
Microbiol 1999, 37: 3133-3140.
Vanderhaeghen W, Cerpentier T, Adriaensen C, Vicca J, Hermans K, Butaye P. Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus (MRSA) ST398 associated with clinical and subclinical mastitis in Belgian
cows. Vet Microbiol. 2010, 144: 166-171.
Verdon J, Girardin N, Lacombe C, Berjeaud JM, Hchard Y. delta-hemolysin, an update on a
membrane-interacting peptide. Peptides 2009, 30: 817-823.
Vindel A, Trincado P, Gmez E, Cabrera R, Boquete T, Sol C, Valdezate S, Saez-Nieto JA.
Prevalence and evolution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Spanish hospitals
between 1996 and 2002. J Clin Microbiol 2006, 44: 266-270.
Vindel A, Cuevas O, Cercenado E, Marcos C, Bautista V, Castellares C, Trincado P, Boquete T,
Prez-Vzquez M, Marn M, Bouza E; Spanish Group for the Study of Staphylococcus.
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Spain: molecular epidemiology and utility of
different typing methods. J Clin Microbiol 2009, 47: 1620-1627.
von Eiff C, Becker K, Machka K, Stammer H, Peters G. Nasal carriage as a source of Staphylococcus
aureus bacteremia. Study Group. N Engl J Med 2001, 344: 11-16.
Voss A, Loeffen F, Bakker J, Klaassen C, Wulf M.. Methicillin resistant Staphylococcus aureus in pig
farming. Emerg Infect Dis 2005, 11: 1965-1966.
Waldron DE, Lindsay JA. Sau1: a novel lineage-specific type I restriction-modification system that
blocks horizontal gene transfer into Staphylococcus aureus and between S. aureus isolates of
different lineages. J Bacteriol. 2006, 188: 5578-5585.
van Belkum A, Melles DC, Snijders SV, van Leeuwen WB, Wertheim HF, Nouwen JL, Verbrugh HA,
Etienne J. Clonal distribution and differential occurrence of the enterotoxin gene cluster, egc, in
carriage- versus bacteremia-associated isolates of Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2006,
44: 1555-1557.
van Belkum A, Melles DC, Peeters JK, van Leeuwen WB, van Duijkeren E, Huijsdens XW, Spalburg
E, de Neeling AJ, Verbrugh HA; Dutch Working Party on Surveillance and Research of
MRSA-SOM. Methicillin-resistant and -susceptible Staphylococcus aureus sequence type 398 in
pigs and humans. Emerg Infect Dis 2008, 14: 479-483.
218
6. Bibliografa
Vainio A, Kardn-Lilja M, Ibrahem S, Kerttula AM, Salmenlinna S, Virolainen A, Vuopio-Varkila J.
Clonality of epidemic methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains in Finland as defined by
several molecular methods. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2008, 27: 545-555.
Varshney AK, Mediavilla JR, Robiou N, Guh A, Wang X, Gialanella P, Levi MH, Kreiswirth BN,
Fries BC. Diverse enterotoxin gene profiles among clonal complexes of Staphylococcus aureus
isolates from the Bronx, New York. Appl Environ Microbiol 2009, 75: 6839-6849.
van Loo IH, Diederen BM, Savelkoul PH, Woudenberg JH, Roosendaal R, van Belkum A, Lemmensden Toom N, Verhulst C, van Keulen PH, Kluytmans JA. Methicillin-resistant Staphylococcus
aureus in meat products, the Netherlands. Emerg Infect Dis 2007, 13: 1753-1755.
von Eiff C, Maas D, Sander G, Friedrich AW, Peters G, Becker K. Microbiological evaluation of a new
growth-based approach for rapid detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J
Antimicrob Chemother 2008, 61: 1277-1280.
Weaver KE, Kwong SM, Firth N, Francia MV. The RepA_N replicons of Gram-positive bacteria: a
family of broadly distributed but narrow host range plasmids. Plasmid 2009, 61: 94-109.
Werckenthin C, Cardoso M, Martel JL, Schwarz S. Antimicrobial resistance in staphylococci from
animals with particular reference to bovine Staphylococcus aureus, porcine Staphylococcus hyicus,
and canine Staphylococcus intermedius. Vet Res 2001, 32: 341-362.
Wertheim HF, Melles DC, Vos MC, van Leeuwen W, van Belkum A, Verbrugh HA, Nouwen JL. The
role of nasal carriage in Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis 2005, 5: 751-762.
WHO Surveillance Programme for Control of Foodborne Infections and Intoxications in Europe. 7th
Report.
Country
Reports:
Spain
19931998.
http://www.bfr.bund.de/internet/7threport/7threp_fr.htm.
Witte W, Strommenger B, Stanek C, Cuny C. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST398 in
humans and animals, Central Europe. Emerg Infect Dis 2007, 13: 255-258.
Wondrack L, Massa M, Yang BV, Sutcliffe J. Clinical strain of Staphylococcus aureus inactivates and
causes efflux of macrolides. Antimicrob. Agents Chemother 1996, 40: 992998.
Xia G, Kohler T, Peschel A. The wall teichoic acid and lipoteichoic acid polymers of Staphylococcus
aureus. Int J Med Microbiol 2010, 300: 148-154.
Yamaguchi T, Hayashi T, Takami H, Ohnishi M, Murata T, Nakayama K, Asakawa K, Ohara M,
Komatsuzawa H, Sugai M. Complete nucleotide sequence of a Staphylococcus aureus exfoliative
toxin B plasmid and identification of a novel ADP-ribosyltransferase, EDIN-C. Infect Immun
2001, 69: 7760-7771.
Yarwood JM, McCormick JK, Paustian ML, Orwin PM, Kapur V, Schlievert PM. Characterization
and expression analysis of Staphylococcus aureus pathogenicity island 3. Implications for the
evolution of staphylococcal pathogenicity islands. J Biol Chem 2002, 277: 13138-13147.
Yeung M, Balma-Mena A, Shear N, Simor A, Pope E, Walsh S, McGavin MJ. Identification of major
clonal complexes and toxin producing strains among Staphylococcus aureus associated with atopic
dermatitis. Microbes Infect 2011, 13: 189-197.
Yoon HJ, Choi JY, Lee K, Yong D, Kim JM, Song YG. Accessory gene regulator group polymorphisms
in methicillin-resistant Staphylococcus aureus: an association with clinical significance. Yonsei
Med J 2007, 48: 176-183.
Yu F, Chen Z, Liu C, Zhang X, Lin X, Chi S, Zhou T, Chen Z, Chen X. Prevalence of Staphylococcus
aureus carrying Panton-Valentine leukocidin genes among isolates from hospitalised patients in
China. Clin Microbiol Infect. 2008, 14: 381-384.
Zhang S, Iandolo JJ, Stewart GC. The enterotoxin D plasmid of Staphylococcus aureus encodes a second
enterotoxin determinant (sej). FEMS Microbiol Lett 1998, 168: 227-233.
Zhang K, McClure JA, Elsayed S, Louie T, Conly JM. Novel multiplex PCR assay for characterization
and concomitant subtyping of staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillinresistant Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2005, 43: 5026-5033.
Zmantar T, Chaieb K, Ben Abdallah F, Ben Kahla-Nakbi A, Ben Hassen A, Mahdouani K, Bakhrouf
A. Multiplex PCR detection of the antibiotic resistance genes in Staphylococcus aureus strains
isolated from auricular infections. Folia Microbiol 2008, 53: 357362.
219
6. Bibliografa
220
Anexos
7. Anexos
Tabla Ia. Oligonucletidos utilizados para la identificacin de complejos clnales (RM test).
CC
identificado
Cebador
CC1
AF
AGGGTTTGAAGGCGAATGGG
AR1
GGGTTGCTCCTTGCATCATA
CC5
CC5
Secuencia 5 3
BF
CCCAAAGGTGGAAGTGAAAA
BR8
CCAGTTGCACCATAGTAAGGGTA
AF
AGGGTTTGAAGGCGAATGGG
AR5
GATTTCTTGCACCCTCAACTGC
BF
CCCAAAGGTGGAAGTGAAAA
BR5
TCGTCCGACTTTTGAAGATTG
CC8
BF
CCCAAAGGTGGAAGTGAAAA
BR8
CCAGTTGCACCATAGTAAGGGTA
CC22
AF
AGGGTTTGAAGGCGAATGGG
AR22
TCAGAGCTCAACAATGATGC
CC30
CC45
AF
AGGGTTTGAAGGCGAATGGG
AR30
CAACAGAATAATTTTTTAGTTC
AF
AGGGTTTGAAGGCGAATGGG
AR45
GGAGCATTATCTGGTGTTTTCC
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
1037
55
680
55
445
55
1071
55
680
55
203
55
990
55
722
55
Referencia
Cebador
Secuencia 5 3
1095F
AGACGATCCTTCGGTGAGC
1517R
GCTTTTGCAATGTCATTTACTG
arcC-Up
TTGATTCACCAGCGCGTATTGTC
arcC-Dn
AGGTATCTGCTTCAATCAGCG
aroE-Up
ATCGGAAATCCTATTTCACATTC
aroE-Dn
GGTGTTGTATTAATAACGATATC
glpF-Up
CTAGGAACTGCAATCTTAATCC
glpF-Dn
TGGTAAAATCGCATGTCCAATTC
gmk-Up
ATCGTTTTATCGGGACCATC
gmk-Dn
TCATTAACTACAACGTAATCGTA
pta-Up
GTTAAAATCGTATTACCTGAAGG
pta-Dn
GACCCTTTTGTTGAAAAGCTTAA
tpi-Up
TCGTTCATTCTGAACGTCGTGAA
tpi-Dn
TTTGCACCTTCTAACAATTGTAC
yqiL-Up
CAGCATACAGGACACCTATTGGC
yqiL-Dn
CGTTGAGGAATCGATACTGGAAC
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
422
60
456
50
456
50
485
50
429
50
474
50
402
50
516
50
Referencia
A1
7. Anexos
Cebador
sau1/hsdS1
sau1/hsdS1-Fw
AATGCATACCTGAAAGAACTTGG
sau1/hsdS1-Rv
GACACTGCGCTTTCACAGTGCC
sau1/hsdS2
spyIM
Secuencia 5 3
sau1/hsdS2-Fw
ATGCATACCTGAAAGAACTTGG
sau1/hsdS2-Rv
CAATTAATAGGTTGTTATCAGG
MetFI
ATGACCTTTGATAGACACATTTTAG
MetR
CTATTTTTTTAGGACGGCTAGTAT
spyIMF
ACTCGTTGCTGGTTTTCCTT
spyIMR
TCCTTTCTCTATTTTGTGGT
ADNpol
dnapF
CCCTTTACTTGTCCGTTTTC
10394.4
dnapR
CCGTTTCATCTTCCGTCA
mefA
mefA-M2F
AGTATCATTAATCACTAGTGC
mefA-M2R
TTCTTCTGGTACTAAAAGTGG
spyIM
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
1200-1500
52
1200-1500
52
1227
58
275
50
224
55
346
50
Referencia
Cebador
Secuencia 5 3
16Sup1
GTGCCAGCAGCCGCGGTAA
16Sup2
AGACCCGGGAACGTATTCAC
mecup1
GGGATCATAGCGTCATTATTC
mecup2
AACGATTGTGACACGATAGCC
nucPCR1
TCAGCAAATGCATCACAAACAG
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
886
55
527
55
255
55
Referencia
nucPCR2 CGTAAATGCACTTGCTTCAGG
A2
Cebador
Secuencia 5 3
Type I-F
GCTTTAAAGAGTGTCGTTACAGG
Type I-R
GTTCTCTCATAGTATGACGTCC
Type II-F
CGTTGAAGATGATGAAGCG
Type II-R
CGAAATCAATGGTTAATGGACC
Type III-F
CCATATTGTGTACGATGCG
Type III-R
CCTTAGTTGTCGTAACAGATCG
Type IVa-F
GCCTTATTCGAAGAAACCG
Type IVa-R
CTACTCTTCTGAAAAGCGTCG
Type IVb-F
TCTGGAATTACTTCAGCTGC
Type IVb-R
AAACAATATTGCTCTCCCTC
Type IVc-F
ACAATATTTGTATTATCGGAGAGC
Type IVc-R
TTGGTATGAGGTATTGCTGG
Type IVd-F
CTCAAAATACGGACCCCAATACA
Type IVd-R
TGCTCCAGTAATTGCTAAAG
Type V-F
GAACATTGTTACTTAAATGAGCG
Type V-R
TGAAAGTTGTACCCTTGACACC
MecA147-F
GTGAAGATATACCAAGTGATT
MecA147-R
ATGCGCTATAGATTGAAAGGAT
mecI-F
CCCTTTTTATACAATCTCGTT
mecI-R
ATATCATCTGCAGAATGGG
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
613
60
398
52
280
52
776
52
493
50
200
54
881
52
325
58
147
52
146
50
Referencia
7. Anexos
Cebador
Secuencia 5 3
IS1272-F
TATTTTTGGGTTTCACTCGG
mecR1-R
CTCCACGTTAATTCCATTAATACC
ccr type 1
ccrAB-b2
ATTGCCTTGATAATAGCCITCT
(SCCmec I)
ccrAB-a2
AACCTATATCATCAATCAGTACGT
ccr type 2
ccrAB-b2
ATTGCCTTGATAATAGCCITCT
TAAAGGCATCAATGCACAAACACT
ccrAB-a3
ccr type 3
ccrAB-b2
ATTGCCTTGATAATAGCCITCT
(SCCmec III)
ccrAB-a4
AGCTCAAAAGCAAGCAATAGAAT
ccr type 5
ccrC-F
ATGAATTCAAAGAGCATGGC
(SCCmec V)
ccrC-R
GATTTAGAATTGTCGTGATTGC
ccrB
ccrB F1
CGWYTRGCWMGWAAYACHTC
ccrB R1
CTTTTCGWCKYTTWTCRYTCC
ccrA/B Type 3
mN1
TGGAGAATATGAAGATTACATTCA
(SCCmec III)
mN2
TTTTGACGATGAAGGTCTTCA
ccrC
ccrC-Fw
CGTCTATTACAAGATGTTAAGGATAAT
CCTTTATAGACTGGATTATTCAAAATAT
(SCCmec V)
ccrC-Rv
tnpB-Tn55
mN3
AGTAACGCAACGGGTATGATTA
(SCCmec III)
Tn554(171-146)
TACGGCTTATTCTCCACTTCTATCCT
tnpA
TnpA1016
TGTGATGTAAATTCTATTCCAGT
(SCCmec III)
TnpA636
TGAGATCAAAGGAAGTTAAGCAAATTATTGATG
merA
merA2
TCTTCACAGCCTGTGCATGTCATGCCT
(SCCmec III)
merN
ACGGATTGCTGTACGCCTCCAGA
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
1305
52
700
56
1000
56
1600
56
336
52
496
42
1958
58
520
58
220
58
402
56
169
62
Referencia
Cebador
Secuencia 5 3
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
701
60
Este trabajo
1360
55
Este trabajo
3151
50
Este trabajo
491
54
Este trabajo
347
58
462
50
Este trabajo
172
52
382
50
Este trabajo
Referencia
-lactamicos
blaZ
p480
p480-blaZ
blaZ-1
ATGTAATTCAAACAGTTCACATGCC
blaZ-2
ATAGGTTCAGATTGGCCCTTAGG
Tn552-1
CTAACTAATTTTTCTGAAGCCAAACG
Tn552-2
TTTAAGTGTTTTCTTCTCTGACTACG
blaZ-3
GAATTACATGCACTTAAAACTAAAGC
Tn552-3
AAAAATTAGTTAGATACTTCTCCTTG
aacA-aphD
aac6-1
GAAGTACGCAGAAGAGA
[aac(6)-Ie+aph(2)]
aac6-2
ACATGGCAAGCTCTAGGA
aac6-aph2-1
CCAAGAGCAATAAGGGCATACC
aac6-aph2-2
CACACTATCATAACCATCACCG
aadD-1
TTGGTCGTCAGACTGATGGGCCC
Aminoglicosidos
aadD (ant(4)-Ia)
aadD-2
CAGTTAAGACCGAAGCGCTCGTCG
ant4-1
CTGCTAAATCGGTAGAAGC
ant4-2
CAGACCAATCAACATGGCACC
aphA
aph3-1
ACAGCCGGTATAAAGGGACCACC
(aph(3)-IIIa)
aph3-2
AAAATCATACAGCTCGCGCGGATC
A3
7. Anexos
Tabla If (continuacin). Oligonucletidos utilizados para identificacin de determinantes de resistencia.
Grupo
resistencia/Gen
Cebador
Secuencia 5 3
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
268
58
564
60
Este trabajo
480
50
Este trabajo
269
50
Este trabajo
269
50
Este trabajo
472
50
Este trabajo
464
50
Este trabajo
1272
50
499
54
Este trabajo
139
55
347
54
Este trabajo
142
55
295
54
190
55
985
54
Este trabajo
163
55
595
62
323
78
614
50
600
50
573
50
659
55
579
50
Referencia
Aminoglicosidos
aphA
2aph3-1
CTGATCGAAAAATACCGCTGC
(aph(3)-IIIa)
2aph3-2
TCATACTCTTCCGAGCAAAGG
aadE
aadE-1
AGTTAGATAATTACCTAAAGGGCG
aadE-2
ATATCAGCGGCATATGTGCTATCC
Psat1
GCAGAGCACCTGAAAGATATCG
Psat2
GCGTATAACATAGTATCGACGG
cat-1
TGGAAGTTGTAATAAAAATAAAGTG
psat4
Fenicoles
cat (pC221)
cat (pC221)
cat (pC194)
cat (pC223)
fexA
cat-2
CAATCCAAGGAATCATTGAAATCGG
cat-1Fw 2
TGGAAGTTGTAAATAAAAATAAAGTG
cat-2
CAATCCAAGGAATCATTGAAATCGG
cat-3
CAAGGGTGATAAACTCAAATACAGC
cat-4
AAAGCCAGTCATTAGGCCTATCTG
cat-5
AGGATATGAACTGTATCCTGCTTTG
cat-6
AATAATGAAACATGGTAACCATCAC
fex-A-fw
GTACTTGTAGGTGCAATTACGGCTGA
fexA-rv
CGCATCTGAGTAGGACATAGCGTC
ermA-1
CCAGAAAAACCCTAAAGACACGC
ermA-2
TGTCTCAGATGTGAACCGAATCC
MLS
ermA
ermB
ermC
msrA
msrB
linA/linA
vatA
vatB
vatC
ermA Fw
TATCTTATCGTTGAGAAGGGATT
ermA Rv
CTACACTTGGCTTAGGATGAAA
ermB-3
GCCATGCGTCTGACATCTATCT
ermB-4
ACAATACTTGCTCATAAGTAACGG
ermB Fw
CTATCTGATTGTTGAAGAAGGATT
ermB Rv
GTTTACTCTTGGTTTAGGATGAAA
ermC-1
AATCGTCAATTCCTGCATGT
ermC-2
TAATCGTGGAATACGGGTTTG
ermC Fw
CTTGTTGATCACGATAATTTCC
ermC Rv
ATCTTTTAGCAAACCCGTATTC
msrA-1
CTCCATATACCTATGCATACAACC
msrA-2
CTAACGATAATTTCGTTCTTTCCCC
msrA Fw
TCCAATCATTGCACAAAATC
msrA Rv
AATTCCCTCTATTTGGTGGT
msrB-Fw
TATGATATCCATAATAATTATCCAATC
msrB-Rv
AAGTTATATCATGAATAGATTGTCCTGTT
linA/linA-Fw
GGTGGCTGGGGGGTAGATGTATTAACTGG
linA/linA-Rv
GCTTCTTTTGAAATACATGGTATTTTTCGATC
vatA1
CAATGACCATGGACCTGATC
vatA2
AGCATTTCGATATCTCC
vatB1
CCTGATCCAAATAGCATATATCC
vatB2
CTAAATCAGAGCTACAAAGTG
vatC1
TGGCAAAATCAGCAAGG
vatC2
TCGTCTCTATCTCTAGGTCC
vgaA
vgaA1
AGTGGTGGTGAAGTAACACG
vgaA2
CTTGTCTCCTCCGCGAATAC
vgaB
vgaB1
TCTCTCAATTAGAAGAACC
vgaB2
TTATCTATTCGTGTTTCC
A4
7. Anexos
Cebador
Secuencia 5 3
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
885
50
Este trabajo
427
55
728
50
778
54
Este trabajo
746
48
360
58
169
55
Ng et al., 2001
319
54
Este trabajo
406
55
Ng et al., 2001
781
54
515
55
Ng et al., 2001
267
55
Ng et al., 2001
602
50
Referencia
MLS
vgaC
vgbA
vgbB
vgaC1
AGCTGGAGAAAGCAATCCAA
vgaC2
TCTTGCTGAAAATCCCGTTC
vgbA1
CCAGATTCAGCACCCTACG
vgbA2
CCCCCCATTCAGTAAACC
vgbB1
CAGCAGTCTAGATCAGAGTGG
vgbB2
CATACGGATCCATCTTTTCC
MUP-1
GGTGACTCCTTATTGTACACATG
MUP-2
AGAAATTTCCCATTCTCCCTTCC
Mupirocina
mupA
cfr-fw
TGAAGTATAAAGCAGGTTGGGAGTCA
cfr-rv
ACCATATAATTGACCACAAGCAGC
tetK-1
GTAGCGACAATAGGTAATAGT
tetK-2
GTAGTGACAATAAACCTCCTA
Tetraciclinas
tetK
tetM
tetO
tetL
tet(K) Fw
TCGATAGGAACAGCAGTA
tet(K) Rv
CAGCAGATCCTACTCCTT
tetM-1
AATATAGGGATTGATAACCTTATAGAAG
tetM-2
TATCTCCAAGAACACTATTTAACTTC
tet(M) Fw
GTGGACAAAGGTACAACGAG
tet(M) Rv
TetO-Fw1
AATGAAGATTCCGACAATTT
TetO-Rv1
CTCATGCGTTGTAGTATTCCA
tet(O) Fw
AACTTAGGCATTCTGGCTCAC
tet(O) Rv
TCCCACTGT TCCATATCGTCA
tet(L) Fw
TCGTTAGCGTGCTGTCATTC
tet(L) Rv
GTATCCCACCAATGTAGCCG
grlA-Fw2
GATGAGGAGGAAATCTAG
grlA-Rv
TTAGGAAATCTTGATGGCAA
Quinolonas
grlA (parC)
grlB (parE)
gyrA
gyrB
norA (Promotor)
grlB-Fw
GACAATTGTCTAAATCACTTGTG
grlB-Rv
CATCAGTCATAATAATTACAC
gyrA-Fw
GCGATGAGTGTTATCGTTGCT
gyrA-Rv
CAGGACCTTCAATATCCTCC
gyrB-Fw
CAGCGTTAGATGTAGCAAGC
gyrB-Rv
CGATTTTGTGATATCTTGCTTTCG
PnorA-1
TTCTTCGTATTGTTTCGTTG
PnorA-2
TTTGCTCTATGTTGCTTTTC
dfrS1-Fw
CACTTGTAATGGCACGGAAA
dfrS1-Rv
CGAATGTGTATGGTGGAAAG
dfrD-Fw
CCCTGCTATTAAAGCACC
dfrD-Rv
CATGACCAGATAACTC
50
554
56
267
56
1535
50
270
55
Este trabajo
606
55
405
55
Este trabajo
229
50
Este trabajo
Diaminopirimidinas
dfrS1
dfrD
dfrG
dfrK
dfrG-Fw
TGCTGCGATGGATAAGAA
dfrG-Rv
TGGGCAAATACCTCATTCC
dfrK-Fw
CAAGAGATAAGGGGTTCAGC
dfrK-Rv
ACAGATACTTCGTTCCACTC
A5
7. Anexos
Cebador
Secuencia 5 3
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
217
50
Referencia
Biocidas
qacA/B
qacA/B F
ATTCCATTGAGTGCCTTTGC
qacA/B
RTGGCCCTTTCTTTAGGGTTT
Cebador
Secuencia 5 3
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
209
64
309
60
111
64
535
60
390
64
269
60
780
50
433
70
741
45C
629
50C
376
45C
481
58
669
58
424
60
315
56
401
50
319
68
Referencia
Hemolisinas
hla (Hl)
hlb (Hl)
hld (Hl)
hlg (Hl)
hlgv (Hl-variante)
HLA-1
CTGATTACTATCCAAGAAATTCGATTG
HLA-2
CTTTCCAGCCTACTTTTTTATCAGT
HLB-1
GTGCACTTACTGACAATAGTGC
HLB-2-2
GTTGATGAGTAGCTACCTTCAGT
HLD-1
AAGAATTTTTATCTTAATTAAGGAAGGAGTG
HLD-2
TTAGTGAATTTGTTCACTGTGTCGA
mpHLG-1
GTCAYAGAGTCCATAATGCATTTAA
mpHLG-2
CACCAAATGTATAGCCTAAAGTG
mpHLG2-1 GACATAGAGTCCATAATGCATTYGT
mpHLG2-2 ATAGTCATTAGGATTAGGTTTCACAAAG
Leucotoxinas
lukED
LUKDE-1
TGAAAAAGGTTCAAAGTTGATACGAG
(LukE-LukD)
LUKDE-2
TGTATTCGATAGCAAAAGCAGTGCA
lukM
LUKM-1
TGGATGTTACCTATGCAACCTAC
(LukM-LukF'-PV)
LUKM-2
GTTCGTTTCCATATAATGAATCACTAC
lukPV
LukPV-1
ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA
(LukS-PV-LukF-PV)
LukPV-2
GCATCAAGTGTATTGGATAGCAAAAGC
Exfoliatinas
eta
ET-1
CTATTTACTGTAGGAGCTAG
ET-2
ATTTATTTGATGCTCTCTAT
etb
ET-3
ATACACACATTACGGATAAT
ET-4
CAAAGTGTCTCCAAAAGTAT
etd
ET-14
AACTATCATGTATCAAGG
ET-15
CAGAATTTCCCGACTCAG
TST-1
AGCATCTACAAACGATAATATAAAGG
TST-2
CATTGTTATTTTCCAATAACCACCCG
se[adej]-f
AAAGATTTGCGAAAAAAGTGTGAATT
sea-r
TAAATCGTAATTAACCGAAGGTTCTG
TSST-1
tst
Enterotoxinas
sea
seb
sec
sed
A6
se[bc]-f
TATGATGATAATCATGTATCAGCAA
seb-r
CCAAATAGTGACGAGTTAGGTAA
se[bc]-f
TATGATGATAATCATGTATCAGCAA
sec-r
TAAGTACATTTTGTAAGTTCCCATT
se[adej]-f
AAAGATTTGCGAAAAAAGTGTGAATT
sed-r
GAACTTTATCTAAAGAAACTTCT
sed-f3
CTAGTTTGGTAATATCTCCTTTAAACG
sed-r3
TTAATGCTATATCTTATAGGGTAAACATC
7. Anexos
Cebador
Secuencia 5 3
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
239
50
Este trabajo
512
62
704
50
495
50
576
60
648
60
641
64
248
50
Este trabajo
278
48
359
60
473
60
680
54
722
70
272
60
285
48
700
60
209
52
Este trabajo
Referencia
Enterotoxinas
sed
see
seg
sed-Fw
GCCAATGAAAACATTGATTC
sed-Rv
TGTTGAGCCATTTCTTTTGA
se[adej]-f
AAAGATTTGCGAAAAAAGTGTGAATT
see-r
TTGCACCTTACCGCCAAAGCTG
SEG1
TGCTATCGACACCTACAACC
SEG2
CCAGATTCAAATGCAGAACC
seh
SEH1
CGA AAGCAGAAGATTTACACG
SEH2
GACCTTTACTTATTTCGCTGTC
sei
SEI-3
CTCAAGGTGATATTGGTGTAGG
SEI-4
AAAAAACTTACAGGCAGTCCATCTC
se[adej]-f
AAAGATTTGCGAAAAAAGTGTGAATT
sej-r
ATGCATGTTTTCAGATTCTATGA
sej-f3
CTCCCTGACGTTAACACTACTAATAA
sej
sej
sek
sel
sem
sej-r3
TTGTCTGGATATTGACCTATAACATT
selj-Fw
AACCAACGGTTCTTTTGAGG
selj-Rv
CACTGCATGAAAACAATCAA
SEK-3
ACCGCTCAAGAGATTGAT
SEK-4
TTATATCGTTTCTTTATAAGAA
SEL-1
AATATATAACTAGTGATCTAAAGGG
SEL-2
TATGGAATACTACACACCCCTTATA
SEM-1
ATGCTGTAGATGTATATGGTCTAAG
SEM-2
CGTCCTTATAAGATATTTCTACATC
sen
SEN-1
ATGAGATTGTTCTACATAGCTGCAAT
SEN-2
AACTCTGCTCCCACTGAAC
seo
SEO-1
TGTAGTGTAAACAATGCATATGCAAATG
SEO-2
TTATGTAAATAAATAAACATCAATATGATGTC
sep
SEP-1
TTAGACAAACCTATTATCATAATGG
SEP-2
TATTATCATGTAACGTTACACCGCC
seq
SEQ-1
AAGAGGTAACTGCTCAAG
SEQ-2
TTATTCAGTCTTCTCATATG
ser
SER-1
AAACCAGATCCAAGGCCTGGAG
SER-2
TCACATTTGTAGTCAGGTGAACTT
ser-Fw
CATATACGGGGGCGTTACA
ser-Rv
TCTCATATGCCGACCCATC
seu
PSE-2
TAAAATAAATGGCTCTAAAATTGATGG
141
55
set
PSE-6
set-1
ATCCGCTGAAAAATAGCATTGAT
CGGGTGTTACTTCTGTTTGC
162
55
Este trabajo
set-2
ATGTAGATGCTTGGGGACAT
214
55
Este trabajo
ses
ses-1
AATGCAATTTGCCCCATAGT
ses-2
AACTTCATATTCGCAGGACA
A7
7. Anexos
Tabla Ih. Oligonucletidos utilizados para la deteccin de islas de patogenicidad.
Gen
ear
Cebador
Secuencia 5 3
ear-1
ACATTGATAGCAAGTGCTTTAG
ear-2
CTTTYAATTTKTCWGTTAATTTTTTCCATG
bsaB
epiB-1
CATTGTTATTAGTCCTTTAACGGCG
(epiB)
epiB-2
ATTCGTGTCATATTCAAAGAAGGC
splF
splF-1
GTTACTAAGATTGTAGATTATCCTGG
splF-2
CTCTTGTGCTTTCACCTGATGGC
Tamao
amplicn (pb)
T
(C)
374
50
Este trabajo
1200
60
Este trabajo
350
66
Este trabajo
Referencia
agrI
agrII
Cebador
agr I-Fw
Secuencia 5 3
CCACTAATTATAGCTGG
agr II-Fw
GTAGAGCCGTATTGATTCC
agr II-Rv
GTATTTCATCTCTTTAAGG
agr III-Rv
T
(C)
Referencia
351
46
464
46
558
42
876
46
CACTTATCATCAAAGAGCC
agr I-Rv
Tamao
amplicn (pb)
CTGCATTTATTAGTGGAATACG
GTTTCATTTCTTTAAGAG
CACTTATCATCAAAGAGC
agr IV-Rv
GTATTTCATCTCTTTAAGG
Cebador
Secuencia 5 3
repA-Fw
CTCGAAGAATTGCCACAACA
repA-Rv
TGCATAGCTTCAACGGTTTC
cad-Fw
AAGTTGTGGCGCCGATAATA
cad-Rv
TTTCTCCAATTCCTGGGATA
abiK-Fw
AGCTACGGTAAATCAGATGC
abiK-Rv
TCTTGCATGAAAAACATCAA
blaZ-Fw
ATAGGTTCAGATTGGCCCTTAGG
blaZ-Rv
ATGTAATTCAAACAGTCCACATGCC
blaRI-Fw
GCCCTTACAGAACGATCACC
blaRI-Rv
ATGGTCAAGTCCAAACATCG
blaI-Fw
GCGATAAAACGATTAGAACA
blaI-Rv
AACTTTTCATGTCCCCTCCA
bin-Fw
CATTGAATTTGCGAGGTCAG
bin-Rv
CTGCAAATGCTGCGAATAAA
sin-Fw
AATGGGAGATCGATTCGTTG
sin-Rv
ACCTTGAGCTTGTCGACGTT
MarR-Fw
TGGCCATAAGTCTTTTGCTT
MarR-Rv
TGGTGTTTTGAATTGCTTGA
Alcohol
AD-Fw
GATGTCGGCGTGACACATAC
Deshidrogenasa
AD-Rv
ACCACCTGTAGCCCCAGAC
Bacteriocina
Bact-Fw
GCCAATCCCGATAAAAACAA
Bact-Rv
AGTCAATCCATCCTTGGTGA
Transportador
ABCtransp-Fw
TCTCTAAGCGGTGGTGAACA
tipo ABC
ABCtransp-Rv
ACATCAAATCGTTTCGCAAG
A8
Tamao
amplicn (pb)
T (C)
217
54
Este trabajo
154
52
Este trabajo
223
50
Este trabajo
701
64
Este trabajo
183
54
Este trabajo
170
50
Este trabajo
199
50
Este trabajo
243
54
Este trabajo
176
50
Este trabajo
198
58
Este trabajo
201
52
Este trabajo
205
52
Este trabajo
Referencia
7. Anexos
ftsK-abiK
abiK-blaZ
blaZ-blaRI
blaRI-blaI
blaI-bin
bin-sin
sin-marR
marR-AD
AD-ser
ser-selj
selj-sed
selj-set
set-ses
ses-bacteriocina
Cebador
Secuencia 5 3
ftsk-Fw
TGCAATATAGCCAATGTTATAAAACA
abiK-Rv2
GCATCTGATTTACCGTAGCT
abiK-Fw2
TTGATGTTTTTCATGCAAGA
blaZ-Rv2
CCTAAGGGCCAATCTGAACCTAT
blaZ-Fw2
GGCATGTGGACTGTTTGAATTACAT
blaRI-Rv2
GGTGATCGTTCTGTAAGGGC
blaRI-Fw
GCCCTTACAGAACGATCACC
blaI-Rv
AACTTTTCATGTCCCCTCCA
blaI-Fw
GCGATAAAACGATTAGAACA
bin-Rv
CTGCAAATGCTGCGAATAAA
bin-Fw
CATTGAATTTGCGAGGTCAG
sin-Rv
ACCTTGAGCTTGTCGACGTT
sin-Fw
AATGGGAGATCGATTCGTTG
MarR-Rv
TGGTGTTTTGAATTGCTTGA
MarR-Fw
TGGCCATAAGTCTTTTGCTT
AD-Rv
ACCACCTGTAGCCCCAGAC
AD-Fw2
GTCTGGGGCTACAGGTGGT
ser-Rv2
TGTAACGCCCCCGTATATG
ser-Fw
CATATACGGGGGCGTTACA
selj-Rv
CACTGCATGAAAACAATCAA
selj-Fw2
TTGATTGTTTTCATGCAGTG
sed-Rv2
GAATCAATGTTTTCATTGGC
selj-Fw
AACCAACGGTTCTTTTGAGG
set-Rv
ATGTAGATGCTTGGGGACAT
set-Fw
CGGGTGTTACTTCTGTTTGC
ses-Rv
AACTTCATATTCGCAGGACA
ses-Fw2
TGTCCTGCGAATATGAAGTT
Bact-Rv2
TTGTTTTTATCGGGATTGGC
bacteriocina-
Bact-Fw-2
TCACCAAGGATGGATTGACT
transp. ABC
ABCtransp-Rv2
TGTTCACCACCGCTTAGAGA
ses-transp. ABC
repA-cad
repA-TnIS431
cad-TnaseIS431
Tn1S431-blaZ
cad-ftsK
ses-Fw2
TGTCCTGCGAATATGAAGTT
ABCtransp-Rv2
TGTTCACCACCGCTTAGAGA
repA-Fw3
GAAACCGTTGAAGCTATGCA
cad-Rv2
TATTATCGGCGCCACAACTT
repA-Fw4
GGCTATTCAGAGGCGAAAGA
Tn15431-Rv
TTCAACGAAGGTAGCAATGG
cad-Fw2
TATCCCAGGAATTGGAGAAA
Tn1S431-Rv
TTCAACGAAGGTAGCAATGG
Tn1S431-Fw
CATGGCGAAAATCCGTAGAT
blaZ-Rv2
CCTAAGGGCCAATCTGAACCTAT
cad-Fw2
TATCCCAGGAATTGGAGAAA
ftsK-Rv
TGTTTTATAACATTGGCTATATTGCA
Tamao
amplicn
(pb)
T (C)
1560
54
Este trabajo
1876
50
Este trabajo
1219
54
Este trabajo
1016
54
Este trabajo
935
50
Este trabajo
966
54
Este trabajo
1115
50
Este trabajo
908
56
Este trabajo
1458
52
Este trabajo
868
50
Este trabajo
1411
50
Este trabajo
1379
54
Este trabajo
1429
52
Este trabajo
2271
52
Este trabajo
1387
54
Este trabajo
3800
52
Este trabajo
2156
54
Este trabajo
4175
54
Este trabajo
1135
52
Este trabajo
1180
50
Este trabajo
2485
52
Este trabajo
Referencia
A9
7. Anexos
Bibliografa Anexo I:
Becker K, Roth R, Peters G. Rapid and specific detection of toxigenic Staphylococcus aureus: use of two
multiplex PCR enzyme immunoassays for amplification and hybridization of staphylococcal
enterotoxin genes, exfoliative toxin genes, and toxic shock syndrome toxin 1 gene. J Clin
Microbiol 1998, 36: 2548-2553.
Becker K, Friedrich AW, Lubritz G, Weilert M, Peters G, von Eiff C. Prevalence of genes encoding
pyrogenic toxin auperantigens and exfoliative toxins among strains of Staphylococcus aureus
isolated from blood and nasal specimens. J Clin Microbiol 2003, 41: 1434-1439.
Cockfield JD, Pathak S, Edgeworth JD, Lindsay JA. Rapid determination of hospital-acquired
meticillin-resistant Staphylococcus aureus lineages. J Med Microbiol 2007, 56: 614-619.
Dale G E, Langen H, Page MG, Then RL, Stber D. Cloning and characterization of a novel, plasmidencoded trimethoprim-resistant dihydrofolate reductase from Staphylococcus haemolyticus
MUR313. Antimicrob Agents Chemother 1995, 39: 1920-1924.
Enright MC, Day NP, Davies CE, Peacock SJ, Spratt BG. Multilocus sequence typing for
characterization of methicillin-resistant and methicillin-susceptible clones of Staphylococcus
aureus. J Clin Microbiol 2000, 38: 1008-1015.
Euler CW, Ryan PA, Martin JM, Fischetti VA. M.SpyI, a DNA methyltransferase encoded on a mefA
chimeric element, modifies the genome of Streptococcus pyogenes. J Bacteriol 2007, 189: 10441054.
Fueyo JM, Mendoza MC, Martn MC. Enterotoxins and toxic shock syndrome toxin in Staphylococcus
aureus recovered from human nasal carriers and manually handled foods: epidemiological and
genetic findings. Microbes Infect 2005a, 7: 187-194.
Fueyo JM, Mendoza MC, Rodicio MR, Muiz J, Alvarez MA, Martn MC. Cytotoxin and pyrogenic
toxin superantigen gene profiles of Staphylococcus aureus associated with subclinical mastitis in
dairy cows and relationships with macrorestriction genomic profiles. J Clin Microbiol. 2005b, 43:
1278-1284.
Harmsen D, Claus H, Witte W, Rothgnger J, Claus H., Turnwald D, Vogel U. Typing of methicillinresistant Staphylococcus aureus in a university hospital setting by using novel software for spa
repeat determination and database management. J Clin Microbiol 2003, 41: 5442-5448.
Horii T, Suzuki Y, Monji A, Morita M, Muramatsu H, Kondo Y, Doi M, Takeshita A, Kanno T,
Maekawa M. Detection of mutations in quinolone resistance-determining regions in levofloxacinand methicillin-resistant Staphylococcus aureus: effects of the mutations on fluoroquinolone MICs.
Diagn Microbiol Infect Dis 2003, 46: 139-145.
Huys G, D'Haene K, Van Eldere J, von Holy A, Swings J. Molecular diversity and characterization of
tetracycline-resistant Staphylococcus aureus isolates from a poultry processing plant. Appl Environ
Microbiol 2005, 71: 574-579.
Ito T, Katayama Y, Asada K, Mori N, Tsutsumimoto K, Tiensasitorn C, Hiramatsu K.. Structural
comparison of three types of staphylococcal cassette chromosome mec integrated in the
chromosome in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2001,
45: 1323-1336.
Ito T, Xue Ma X, Takeuchi F, Okuma K, Yuzawa H, Hiramatsu K. Novel type V staphylococcal
cassette chromosome mec driven by a novel cassette chromosome recombinase, ccrC. Antimicrob
Agents Chemother 2004, 48: 2637-2651.
Jarraud S, Peyrat MA, Lim A, Tristan A, Bes B, Mougel C, Etienne J, Vandenesch F, Bonneville M,
Lina G. egc, a highly prevalent operon of enterotoxin gene, forms a putative nursery of
superantigens in Staphylococcus aureus. J Immunol 2001, 166: 669677.
Jarraud S, Mougel C, Thioulouse J, Lina G, Meugnier H, Forey F, Nesme X, Etienne J, Vandenesch,
F. Relationships between Staphylococcus aureus genetic background, virulence factors, agr groups
(alleles), and human disease. Infect Immun 2002, 70 : 631-641.
Kehrenberg C, Schwarz, S. Florfenicol-chloramphenicol exporter gene fexA is part of the novel
transposon Tn558. Antimicrob Agents Chemother 2005, 49: 813-815.
Kehrenberg C, Schwarz, S. Distribution of florfenicol resistance genes fexA and cfr among
chloramphenicol-resistant Staphylococcus isolates. Antimicrob Agents Chemother 2006, 50: 11561163.
Letertre C, Perelle, S, Dilasser F, Fach, P. Identification of a new putative enterotoxin SEU encoded by
the egc cluster of Staphylococcus aureus. J Appl Microbiol 2003, 95: 38-43.
Lina G, Quaglia A, Reverdy ME, Vandenesch RLF, Etienne J. Distribution of genes encoding
resistance to macrolides, lincosamides, and streptogramins among Staphylococci. Antimicrob
Agents Chemother 1999, 43:1062-1066.
A10
7. Anexos
Martn MC, Gonzlez-Hevia MA, Mendoza, MC. Usefulness of a two-step PCR procedure for detection
and identification of enterotoxigenic staphylococci of bacterial isolates and food samples. Food
Microbiol 2003, 20: 605-610.
Martineau F, Picard FJ, Lansac N, Menard C, Roy PH, Ouellette M, Bergeron MG. Correlation
between the resistance genotype determined by multiplex PCR assays and the antibiotic
susceptibility patterns of Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis. Antimicrob
Agents Chemother 2000, 44: 231-238.
McClure JA, Conly JM, Lau V, Elsayed S, Louie T, Hutchins W, Zhang K. 2006. Novel multiplex
PCR assay for detection of the staphylococcal virulence marker Panton-Valentine leukocidin genes
and simultaneous discrimination of methicillin-susceptible from -resistant staphylococci. J Clin
Microbiol 2006, 44: 1141-1144.
McLauchlin J, Narayanan GL, Mithani V, O'Neill G. The detection of enterotoxins and toxic shock
syndrome toxin genes in Staphylococcus aureus by polymerase chain reaction. J Food Prot 2000,
63:479488.
Moore PCL, Lindsay JA. Genetic variation among hospital isolates of methicillin-sensitive
Staphylococcus aureus: Evidence for horizontal transfer of virulence genes. J Clin Microbiol 2001,
39: 27602767.
Ng, LK, Martin I, Alfa M, Mulvey M. Multiplex PCR for the detection of tetracycline resistant genes.
Mol. Cell. Probes 2001, 15: 209-215.
Oliveira DC, Santos M, Milheirio C., Carrio JA, Vinga S, Oliveira AL, de Lencastre H. ccrB typing
tool: an online resource for staphylococci ccrB sequence typing. J Antimicrob Chemoter 2008, 61:
959-964.
Poulsen AB, Skov R, Pallesen LV. Detection of methicillin resistance in coagulase-negative staphylococci
and in staphylococci directly from simulated blood cultures using the EVIGENE MRSA Detection
Kit. J Antimicrob Chemother 2003, 51: 419-421.
Schmitz FJ, Jones ME, Hofmann B, Hansen B, ScheuringS, Lckefahr M, Fluit A, Verhoef J,
Hadding U, Heinz HP, Khrer K. Characterization of grlA, grlB, gyrA, and gyrB mutations in
116 unrelated isolates of Staphylococcus aureus and effects of mutations on ciprofloxacin MIC.
Antimicrob Agents Chemother 1998, 42: 1249-1252.
Schmitz F J, Fluit AC, Gondolf M, Beyrau, Lindenlauf RE, Verhoef J, Heinz HP, Jones ME. The
prevalence of aminoglycoside resistance and corresponding resistance genes in clinical isolates of
staphylococci from 19 European hospitals. J Antimicrob. Chemother 1999, 43: 253-259.
Sidhu MS, Heir E, Srum H, Holck A. Genetic linkage between resistance to quaternary ammonium
compounds and beta-lactam antibiotics in food-related Staphylococcus spp. Microb Drug Resist
2001, 7: 363-371.
Strommenger B, Kettlitz, C, Werner G, Witte W. Multiplex PCR assay for simultaneous detection of
nine clinically relevant antibiotic resistance genes in Staphylococcus aureus, J Clin Microbiol
2003, 41: 4089-4094.
Sung, JML, Lloyd DH, Lindsay JA. Staphylococcus aureus host specificity: comparative genomics of
human versus animal isolates by multi-strain microarray. Microbiol 2008, 154: 1949-1959.
Tenover FC, McDougal LK, Goering RV, Killgore G, Projan SJ, Patel JB, Dunman PM.
Characterization of a strain of community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus
widely disseminated in the United States. J Clin Microbiol 2006, 44: 108-118.
Werner G, Cuny C, Schmitz FJ, Witte W. Methicillin-resistant, quinupristin-dalfopristin-resistant
Staphylococcus aureus with reduced sensitivity to glycopeptides. J Clin Microbiol 2001, 39: 35863590.
Yamaguchi T, Nishifuji K, Sasaki M, Fudaba Y, Aepfelbacher M, Takata T, Ohara M, Komatsuzawa
H, Amagai M, Sugai M. Identification of the Staphylococcus aureus etd pathogenicity island
which encodes a novel exfoliative toxin, ETD, and EDIN-B. Infect Immun 2002, 70: 5835-5845.
Yarwood JM, McCormick JK, Paustian ML, Orwin PM, Kapur V, Schlievert PM. Characterization
and expression analysis of Staphylococcus aureus pathogenicity island 3. Implications for the
evolution of staphylococcal pathogenicity islands. J Biol Chem 2002, 277: 13138-13147.
Zhang K, McClure JA, Sameer E, Louie T, Conly JM.. Novel multiple PCR assay for characterization
and concomitant subtyping of Staphylococcal Cassette Chromosome mec types I to IV in
methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2005, 43: 5026-5033.
A11
7. Anexos
A12
Tipo
Cuadro PFGE Clster Tipo
Perfil Resistenciad/SCCmec
MLSTb CCc
agr
clnicoa SmaI PFGE
spa
SP
S1
G2
t3734 ST125
5
II
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-tst-sea/c-egc1-splF
Cepa/Ao
Perfil Virulenciae
C3/05
SP
S2
12
IV
AMP
hla/b/d/g/gv-lukPV-eta/b-tst-sea/c-egc2-splF-bsaB
C4/05
SSSS
S3
t547
ST15
15
IV
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc2-splF-bsaB
C5/05
SP
S4
t1618 ST45
45
IV
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c/l-egc2-ear-bsaB
C6/05
HQ
S5
t012
(ST30)
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc2-splF
C7/05
ID
S6
G2
t067
(ST125) 5
IV
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea-egc1-ear-bsaB
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc1-ear-splF-bsaB
C8/05
HQ
S5
t012
(ST30)
III
AMP
C9/06
HQ
S6
G2
t067
(ST125) 5
30
III
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-tst-sea/c-egc2-ear-splF
C10/06
SP
S7
G1
t002
ST5
II
AMP
hla/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-sea/c-egc1-splF
C13/06
SP
S8
G2
t067
ST125
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-CHL-MUP-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c/d/j/p/r-egc2-ear
C45/06
SP
S6
G2
III
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-ERY-CHL-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-sec/p-egc2-ear-bsaB
C55/06
SP
S9
G2
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-CHL-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-sea/c/d/j-egc2
C56/06
SP
S10
t067
ST125
IV
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLI ]-CHL-[CIP-MOX]/IVc
C59/06
HQ
S11
IV
AMP-KAN-[ERY-CLII]-TET
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etd-tst-sea/c/d/j/r-egc2-bsaB
C60/06
SP
S12
t159
(ST121) 121
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-tst-sea/c/d/j/r-egc2-ear-splF-bsaB
C61/06
SP
S13
t067
(ST125) 5
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-CHL-MUP-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-tst-sec-egc2-ear
C62/06
SP
S14
t067
(ST125) 5
IV
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-CHL-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sec/p-egc1-ear-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c-egc2-splF
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b/d-tst-sea/c-egc2-ear-splF
SP
S15
III
AMP
SP
S25
t109
ST228
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]- [ERY-CLIC]-MUP-[CIP-MOX(I)]/I
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c-egc1-splF
C66/06
SP
S5
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea-egc2
C67/06
HQ
S16
G2
t3734 (ST125) 5
II
AMK-[ERY-CLIC]-CHL-[CIP-MOX(I)]
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c/d/j/r-egc1-ear-splF
C68/06
SP
S17
t1381 (ST12)
12
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c/h-egc1-splF-bsaB
C69/06
SP
S18
G1
t002
(ST5)
III
AMP-[ERY-CLIC]
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c/d/h/j-egc1-splF
C70/06
SP
S19
59
IV
[ERY-CLIC]
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/b/c/d/j/k/q/p-egc1
C71/06
PN
S20
t067
(ST125) 5
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-CIP/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c/h-egc1-splF
C72/06
SP
S21
t1618 (ST45)
II
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sep-egc1
45
A13
7. Anexos
C64/06
C65/06
Tabla IIa (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes del Hospital Universitario Central de Asturias durante el
periodo 2005-2006 (Articulo 1).
Cepa/Ao
C76/06
Perfil Resistenciad/SCCmec
Perfil Virulenciae
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sec/p-egc1-ear-splF
C77/06
SP
S22
G2
t067
(ST125) 5
II
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLI ]-CHL-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sec/p-egc1-ear-splF
C78/06
SP
S23
G1
II
AMP-KAN-[ERY-CLII]-CHL-[CIP-MOX(I)]
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-seb/c/p-egc1-ear-splF
C79/06
SP
S24
G2
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/gv-lukED-sec-egc1-ear-splF
C80/06
SP
S8
G2
t067
(ST125) 5
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-CHL-MUP-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sec/d/j/r-egc1-ear-splF
C81/06
PN
S25
t109
(ST228) 5
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/c-egc1-ear-splF
C82/06
SP
S26
30
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sec/d/r-egc2-ear
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sec/p-egc1-splF
C83/06
SP
S27
G2
II
AMP-[KAN-TOB]-ERY-[CIP-MOX]-FOS
C84/06
SP
S28
G1
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-tst-sep-egc1-splF
C87/06
HQ
S29
G2
II
AMP-KAN-[ERY-CLIC]-CHL-MUP-[CIP-MOX]-FOS
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-sea/b/c-egc1-ear-splF
C93/06
HQ
S26
t012
ST30
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-tst-sea/c-egc2-splF
C103/06
HQ
S26
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-tst-sea/c-egc2-ear-splF
C
C112/06
SP
S6
G2
II
AMP-[KAN-TOB]-[CIP-MOX]-[ERY-CLI ]
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sec/p-egc1-ear-splF
C114/06
HQ
S26
t012
(ST30)
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc2
C117/06
PN
S30
G1
t002
(ST5)
II
[AMP-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLIC]-MUP-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-sec-egc1-splF
C128/06
HQ
S31
t166
(ST34)
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-tst-sec/h-egc2
C132/06
HQ
S32
t024
ST8
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b/d-tst-sec/d/j/r-egc1-splF-bsaB
C133/06
HQ
S33
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-tst-sea-egc2
C177/06
PN
S26
t021
ST30
30
III
AMP-[ERY-CLIC]
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-tst-sea/c-egc2-ear-splF
C180/06
PN
S7
G1
II
AMP
hla/d/g/gv-lukED-etb-sea/b/p-egc1-ear-splF
C183/06
PN
S34
G2
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-CIP-RIF-FOS/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-sec/p-egc2-ear-splF
C192/06
HQ
S18
G1
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sec/p-egc1-splF
C193/06
SP
S18
G1
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-sec-egc1-splF
C200/06
PN
S35
30
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-egc1
C203/06
HQ
S5
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/b/c-egc1-splF
C205/06
HQ
S6
G2
II
AMP-[KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-CIP-FOS
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/b/c/h-egc1-ear-splF
7. Anexos
A14
Tabla IIa (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes del Hospital Universitario Central de Asturias durante el
periodo 2005-2006 (Articulo 1).
MLSTb CCc Tipo
Perfil Resistenciad/SCCmec
agr
(ST125) 5
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-ERY-[CIP-MOX]-FOS/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/b/c/d/h/j/r-egc1-ear-splF
C214/06
C217/06
HQ
S36
t160
ST12
12
II
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-tst-sea/c-egc1-ear-splF
C221/06
HQ
S26
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/c/h-egc2-splF
C222/06
SP
S37
30
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/k/q-egc1-splF
C224/06
HQ
S38
G2
t067
(ST125) 5
II
AMP-KAN-ERY-CHL-MUP-[CIP-MOX(I)]
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-sea/b/c/p/q-egc1-ear-splF
C227/06
PN
S39
G2
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-CIP-ERY/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/b/c/p-egc1-ear-splF
Cepa/Ao
Perfil Virulenciae
C232/06
HQ
S39
G2
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-sec/p-egc1-splF
C233/06
HQ
S34
G2
II
[AMP-OXA]-KAN-[ERY-CLIC]-CHL-[CIP-MOX(i)]-RIF-FOS//IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-sea/b/c/d/j/p-egc1-splF
C234/06
HQ
S40
45
IV
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-seb/c-egc1-splF-bsaB
C235/06
SP
S24
G2
II
[AMP-OXA]-KAN-ERY-CHL-[CIP-MOX]/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-sea/b/c/p-egc1-ear-splF
C236/06
SP
S41
t1494 -
45
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b/d-egc1-ear
C237/06
HQ
S42
30
III
AMP-[ERY-CLIC]
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-tst-sea/c-egc2-splF
C238/06
HQ
S43
t081
(ST25)
25
II
AMP-[ERY-CLI ]
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b/d-sea/b/c/d/h/j/r-egc1-ear-splF-bsaB
C239/06
SP
S44
t383
ST47
45
[AMP-OXA]-[ERY-CLII]-MUP-CIP/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b/d-sea/b/c/d/h/j/r-egc1-splF-bsaB
C240/06
HQ
S43
t081
ST25
25
AMP-[ERY-CLIC]
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-tst-sea/c-egc1-ear-splF-bsaB
C241/06
ID
S45
t1494 -
45
II
AMP-[ERY-CLIC]
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-seb/c-egc1
C242/06
ID
S41
t081
25
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-seb/c-egc1-bsaB
(ST25)
C243/06
IU
S46
t067
(ST125) 5
II
AMP-[ERY-CLI ]-MUP
C244/06
PN
S47
t084
ST15
15
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-seb/c/d/h/j/r-egc1-ear
C245/06
ID
S28
G1
II
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-seb-egc1-ear
72
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-sed/j/r-egc1-ear
HQ
S48
t148
(ST72)
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-MUP-CIP/IVc
hla/b/d/gv-lukED-eta/b-seb/c/d/j-egc1-ear
HQ
S25
t109
(ST228) 5
II
[AMP-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLIC]-MUP-CIP/I
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sea/c-egc1
C248/06
PN
S34
G2
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX(I)]-RIF/IVc
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-seb-egc1-ear
C249/06
HQ
S6
G2
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX(I)]/IVc
hla/b/d/gv-lukED-etb-sec/p-egc1-splF
C250/06
ID
S47
t084
(ST15)
15
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-seb-egc1-ear-splF
C251/06
SP
S28
G1
t002
(ST5)
II
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sed/j/r-egc1-ear
A15
7. Anexos
C246/06
C247/06
7. Anexos
A16
Tabla IIa (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes del Hospital Universitario
Central de Asturias durante el periodo 2005-2006 (Articulo 1).
MLSTb
CCc
45
C252/06
Cuadro
clnicoa
HQ
C253/06
PN
S50
G1
t002
(ST5)
C254/06
HQ
S49
45
Cepa/Ao
PFGE
SmaI
S49
Clster
PFGE
D
Tipo
spa
t282
Tipo
agr
II
Perfil Resistenciad/SCCmec
Perfil Virulenciae
AMP
hla/b/g/gv-lukED-eta/b-tst-egc1-bsaB
II
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b-seb/c/d/j/r-egc1
IV
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b/d-tst-sec/d/j/l/r-egc1-ear-bsaB
HQ, infeccin en herida quirrgica; PN, neumona; ID, infeccin directa; IU, infeccin aparato urinario; SP, sepsis; SSSS, sndrome de la piel escaldada.
Las secuencias tipo (ST) entre parntesis se corresponden a ST presuntivos segn el tipo spa.
c
Complejo clonal (CC) en base a los resultados de la agrupacin en clsteres de los perfiles PFGE SmaI y de la tipificacin por spa y MLST.
d
Perfil de resistencia frente a los antimicrobianos: ampicilina-penicilina (AMP), oxacilina-meticilina (OXA), amikacina (AMK), kanamicina (KAN), gentamicina (GEN),
tobramicina (TOB), cloranfenicol (CHL), eritromicina (ERY), clindamicina (CLIC constitutiva, CLII inducible), tetraciclina (TET), ciprofloxacina (CIP), moxifloxacina
(MOX), linezolid, mupirocina (MUP), rifampicina (RIF), sulfametoxazol/trimetoprima, tigeciclina y vancomicina. (I), resistencia intermedia. Concentracin mnima
inhibitoria a mupirocina: 8g/ml (C87), 10g/ml (C243), 20g/ml (C239, C246), 30g/ml (C65, C247), 1000g/ml (C117, C224), >2000g/ml (C13, C61, C80).
e
Hemolisina (hl), exfoliatina (et), leucotoxina (luk), enterotoxina (se), egc1 (cluster con seg-sem-sen-sei-seo), egc2 (cluster con seg-sem-sen-sei-seo-seu).
b
Tabla IIb. Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes del Hospital Monte Naranco durante el periodo 1996-2006 (Articulo 2 y 3).
MLSTc
C16/96
Cuadro
RM
clnicoa
testb
SP
CC5
Tipo
spa
t045
ST5
C17/97
SP
t350
ST45
Cepa/Ao
CC45
CCd
CC5
Tipo
Perfil Resistenciae/SCCmec
agr
II
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLII]-TET-CHL-RIF/IVc
hla/b/d/gv-lukED/PV-etd-sea/c/p-egc2
CC45
IV
AMP
hla/d/g-lukED-sea/b/c/l-egc1-ear-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sec-egc2-splF
Perfil Virulenciaf
C18/97
SP
nt
t5111 ST15
CC15
II
AMP
C19/98
SP
CC5
t045
ST5
CC5
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-MUP-CIP-RIF-SXT-FOS/II hla/d/gv-lukED/PV-sec-egc1-splF
C20/98
SP
CC8/239 t051
ST247
CC8/239 I
AMP-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-MUP-TET-[CIP-MOX]
hla/d/g/gv-lukED/PV-sea-egc1-splF-bsaB
C21/98
SP
CC45
ST45
CC45
AMP
hla/d/g-lukED-eta-tst-sec/l-egc1-ear
t015
C22/98
SP
CC45
t015
(ST45)
CC45
AMP
hla/d/g-lukED-etd-tst-sea/c/l-egc2-ear
C24/99
SP
CC45
t015
(ST45)
CC45
AMP-[GEN(I)-KAN-TOB]
hla/d/g-lukED-eta-tst-sec/l-egc1-ear
C25/99
SP
nt
t084
ST15
CC15
II
hla/d/g/gv-lukED-sec-egc1-splF
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta/d-tst-sea/c/d/h/j/k/q/r-egc2-splF-bsaB
C26/99
SP
CC1
t127
ST1
CC1
III
AMP
C27/00
SP
CC5
t002
ST5
CC5
II
AMP-KAN-ERY(I)-MUP
hla/b/d/gv-lukED/PV-etd-tst-sea/c/j/r/s/t-egc2-bsaB
C28/00
SP
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
AMP
hla/b/d/g-lukED-etd-tst-sec/h-egc2
CC30
C29/00
SP
CC30
t012
ST30
III
AMP-KAN
hla/d/g-lukED-etd-sea-egc2-splF
C30/01
SP
nt
t272
(ST121) CC121
IV
AMP
hla/d/gv-lukED/PV-eta-tst-sec-egc2-splF
C31/01
SP
nt
t272
ST121
CC121
IV
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sec-egc2-splF
C32/01
SP
CC30
t012
(ST30)
CC30
III
AMP-[KAN-TOB]-MUP-TET
hla/d/g-lukED-tst-sea/c-egc2-splF
C33/01
SP
CC5
t002
ST146
CC5
AMP
hla/d/gv-lukED-eta-tst-sea-egc1-splF
C34/03
SP
CC45
t065
ST45
CC45
[AMP-OXA]-CHL-[ERY-CLIC]/IVc
hla/d/g-lukED-sec-egc2
C35/01
SP
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
AMP-[KAN-TOB]
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sea/c-egc1-splF
C36/02
SP
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED-sec/d/j/r-egc2-ear-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-tst-sec-egc2-splF
C38/02
SP
nt
t1814 ST88
CC88
III
AMP
C39/02
SP
nt
t1814 (ST88)
CC88
III
AMP
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc1-ear
C40/02
SP
nt
t1814 (ST88)
CC88
III
AMP
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta/b-tst-sea/c-egc1-ear-splF
C42/03
SP
CC45
t015
(ST45)
CC45
AMP
hla/d/g/gv-lukED-sec/l-egc1-ear-splF
C43/03
SP
CC45
t015
(ST45)
CC45
AMP
hla/b/d/g-lukED-sec-egc1-ear
C44/03
SP
CC8/239 t351
ST8
CC8/239 I
AMP-[ERY-CLII]
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta-sea/c/d/j/r-egc2-bsaB
7. Anexos
A17
C47/03
RM
Cuadro
testb
clnicoa
SP
CC5
CCd
Tipo MLSTc
spa
t6488 ST5
CC5
Tipo
Perfil Resistenciae/SCCmec
agr
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-CIP-FOS/IVc
C50/04
IR
CC5
t067
ST125
CC5
II
C51/04
SP
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-eta-seb/c/d/j/r-egc1-splF
C53/05
SP
CC5
t067
(ST125) CC5
II
AMP-[KAN-TOB-]-CHL-[CIP-MOX]-FOS
hla/b/d/g/gv-lukED/PV-etb-tst-sec/p-egc1-ear
C57/06
SP
CC5
t081
ST25
CC25
IV
AMP
hla/b/d/gv-lukED-etd-egc2-bsaB
C258/96
HQ
CC8
t051
ST247
CC8
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-TET-CIP/I
hla/d/gv-lukED-etd-sea/b-egc1*-ear-splF-bsaB
Cepa/Ao
[AMP-OXA]-[AMK-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-MUP-[CIP-MOX] /IVc
Perfil Virulenciaf
hla/b/d/gv-lukED/PV-etd-tst-sec-egc2-splF
hla/d/gv-lukED-etd-tst-sea/c/d/j/p-egc2-ear
C259/96
HQ
CC45
t1078 (ST45)
CC45
hla/d/g/gv-lukED-sea/b/c/l-egc1-ear-splF
C260/96
HQ
CC5
t001
ST5
CC5
II
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-CIP/II
hla/b/d/gv-lukED-sea/c-egc1-ear-splF-bsaB
C261/96
HQ
CC8
t051
(ST247) CC8
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/c-egc1*-ear-splF-bsaB
C262/96
HQ
CC8
t051
(ST247) CC8
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-TET-[ CIP-MOX(I)] /I
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/k/q-egc1-ear-splF-bsaB
C263/96
HQ
CC8
t051
(ST247) CC8
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-TET-[ CIP-MOX(I)] /I
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/k/q-egc1-ear-splF-bsaB
C264/96
HQ
nt
t216
ST59
CC59
I/IV
AMP-GEN-[ERY-CLII]
hla/b/d/gv-lukED-sea/k/q-egc1-ear-bsaB
C265/96
HQ
CC5
t001
(ST5)
CC5
II
AMP-ERY-[GEN-KAN-TOB]-[CIP-MOX(I)]
C
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/c-egc1-ear-splF-bsaB
C266/97
HQ
CC8/239 t051
ST247
CC8/239 I
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLI ]-[CIP-MOX] /I
C267/97
HQ
CC5
t001
(ST5)
CC5
II
AMP-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP
hla/b/d/g/gv-lukED-sea-egc1-ear-splF
C268/97
HQ
CC5
t001
(ST5)
CC5
II
AMP-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP
hla/b/d/gv-lukED-eta-sea/b/c-egc1-ear-splF-bsaB
C269/97
HQ
CC5
t001
ST5
CC5
II
AMP-[GEN-KAN-TOB]
hla/b/d/gv-lukED-sea/e-egc1-ear-splF-bsaB
C270/97
HQ
CC8/239 t051
(ST247) CC8/239 I
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX] /I
hla/b/d/gv-lukED-sea-egc1-ear-splF-bsaB
C271/98
HQ
CC8/239 t037
ST239
CC8/239 I
[AMP-OXA]-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-TET-CIP/III
hla/b/d/gv-lukED-sea-egc1-ear-splF
C272/99
HQ
nt
t084
(ST15)
CC15
II
hla/d/g/gv-lukED-sec-egc1-splF
C273/99
HQ
CC45
t1078 ST45
CC45
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-MUP-CIP-SXT-FOS/III
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/b/c/k/q-egc1-ear-splF-bsaB
C274/00
HQ
CC8/239 t037
ST239
CC8/239 I
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-[TET-[CIP-MOX(I)]-SXT-FOS/III hla/b/d/gv-lukED-sea/k/q-egc1-ear-splF-bsaB
C275/00
HQ
CC5
t001
(ST5)
CC5
II
AMP-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]
hla/b/d/gv-lukED/PV-sea-egc1-ear-splF
C276/00
HQ
CC5
t067
ST125
CC5
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-TET-[CIP-MOX(I)]-SXT-FOS/III
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/k/q-egc1-ear-splF
C277/01
HQ
CC8/239 t037
(ST239) CC8/239 I
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-TET-CIP-SXT-FOS/III
hla/b/d/gv-lukED/PV-sea/c-egc1-ear-splF
C278/01
HQ
CC5
ST125
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-CHL-[ERY-CLIC]-[CIP-MOX(I)] /V
hla/b/d/gv-lukED-etd-sea/b/d/e/j/p/r-egc1-ear-splF-bsaB
t067
CC5
II
hla/d/gv-lukED-sea/c-egc1-ear-splF-bsaB
7. Anexos
A18
Tabla IIb (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes del Hospital Monte Naranco durante el periodo 1996-2006
(Articulo 2 y 3).
Tabla IIb (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes del Hospital Monte Naranco durante el periodo 1996-2006
(Articulo 2 y 3).
MLSTc
CCd
C279/02
Cuadro
clnicoa
HQ
RM
testb
CC5
Tipo
spa
t019
ST228
CC5
II
[AMP- OXA]-[ERY-CLIC]-[GEN-KAN-TOB]-[CIP-MOX]/I
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta/d-seb/d/j/r-egc1-ear-bsaB
C280/02
HQ
nt
t279
ST15
CC15
II
AMP
hla/d/gv-lukED/PV-sea/b/c/e-egc1-ear-splF-bsaB
Cepa/Ao
Tipo
agr
Perfil Resistenciae/SCCmec
Perfil Virulenciaf
C281/02
HQ
nt
t084
ST15
CC15
II
AMP
hla/b/d/gv-lukED-sea/b-egc1-ear-splF
C282/03
HQ
CC8/239
t351
ST8
CC8/239
AMP
hla/b/d/gv-lukED/PV-eta-sea/c/d/j/r-egc1-ear-splF-bsaB
C283/03
HQ
nt
t279
ST14
CC15
II
[AMP-OXA]-[KAN-TOB]-[CIP-MOX(I)]-SXT-FOS/V
I
hla/b/d/gv-lukED-sea/b/c-egc1-ear-splF
C284/04
HQ
nt
t085
ST582
CC15
II
AMP-[ERYCLI ]
hla/d/gv-lukED-eta-sea/b/c-egc1-ear-splF
C285/06
HQ
CC5
t081
ST25
CC25
IV
AMP
hla/b/d/gv-lukED-etd-egc2-bsaB
C286/06
HQ
CC5
t067
ST125
CC5
II
[AMP-OXA]-[AMK-GEN-KAN]-CIP/IVa
hla/b/d/gv-lukED-eta/d-sea/c/d/e/j/p/r-egc1-splF
C287/06
HQ
CC5
t002
ST5
CC5
II
hla/d/gv-lukED-sec/d/j/p/r-egc1
C289/03
HQ
CC72
t148
ST72
CC72
I/IV
AMP-ERY
hla/d/gv-egc1-splF
7. Anexos
A19
Cepa LMUOa/
Ao
5/97
PFGE
SmaIb
S5
RM testc
6/97
S23
MLSTd
CC30
Tipo
spa
t012
(ST30)
CC25
t6489
(ST25)
CCe
CC30
Tipo
agr
III
HindIII
Pl Perfilf
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
CC25
IV
pR3
AMP/blaZ::Tn552/pl
Perfil Resistenciag
10/97
S25
CC30
t012
(ST30)
CC30
III
p0
AMP/blaZ/nd
3/99
S7
CC30
t122
(ST30)
CC30
III
p0
AMP-KAN/blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]-qacA/B
8/99
S13
CC30
t021
(ST30)
CC30
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
12/99
S32
CC45
t015
(ST45)
CC45
-/-
15/99
S15
CC1
t177
(ST3)
CC1
III
pR16
[ERY-CLII]/blaZ::Tn552/nd-[ermC/pl-msrB/pl]
95/99
S3
CC30
t253
(ST36)
CC30
III
pR26
AMP-[GEN-KAN-TOB]-TET(I)/blaZ::Tn552/pl-[aacA+aphD/nd]- tetK/pl
1/01
S4
CC30
t012
(ST30)
CC30
III
pc1
AMP/blaZ::Tn552/nd
2/01
S3
CC30
t7785
CC30
III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
3/01
S55
CC25
t167
(ST25)
CC25
IV
pR5
AMP/blaZ::Tn552/pl
4/01
S31
CC45
t1618
(ST45)
CC45
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
5/01
S51
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
pR6
AMP/blaZ::Tn552/pl
6/01
S3
CC30
t275
(ST605)
CC30
III
pc13
AMP-ERY/blaZ/nd-msrB/nd
7/01
S70
nt
t084
(ST15)
CC15
II
pR17
AMP-[ERY-CLII]/blaZ::Tn552/nd-ermC/pl
8/01
S55
CC25
t167
(ST25)
CC25
IV
pc2
AMP-KAN/blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
9/01
S3
CC30
t275
(ST605)
CC30
III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
10/01
S31
CC45
t015
(ST45)
CC45
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
11/01
S56
CC25
t1054
ST25
CC25
IV
pR18
AMP-[ERY-CLIC]/blaZ::Tn552/pl-[ermC/pl-msrB/pl]
12/01
S52
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
pR1
AMP/blaZ/pl
13/01
S62
CC30
t275
(ST605)
CC30
III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
14/01
S26
nt
t216
ST59
CC59
IV
pR7
AMP/blaZ::Tn552/pl
15/01
S31
CC45
t015
(ST45)
CC45
pR3
AMP/blaZ::Tn552/pl
16/01
S31
CC45
t015
(ST45)
CC45
pR3
AMP/blaZ::Tn552/pl
17/01
S33
CC45
t015
(ST45)
CC45
pR3
AMP/blaZ::Tn552/pl
18/01
S71
nt
t2949
(ST15)
CC15
II
pR26
AMP-TET/blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
7. Anexos
A20
Tabla IIc. Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de portadores sanos durante el periodo 1997-2002
(Artculos 4 y 6).
Tabla IIc (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de portadores sanos durante el periodo 1997-2002
(Artculos 4 y 6).
Cepa LMUOa/ PFGE RM testc Tipo
Ao
SmaIb
spa
19/01
S57
nt
t159
20/01
S71
nt
MLSTd
ST121
t7248 -
CCe
Tipo HindIII
Perfil Resistenciag
agr Pl Perfilf
CC121 IV
p0
AMP-KAN-FOS/blaZ/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
CC15
II
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
21/01
S28
nt
t375
(ST121)
CC121 III
pc3
CLI/linA/linA
22/01
S11
CC30
t018
(ST30)
CC30
III
pR8
AMP-KAN/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
23/01
S70
nt
t084
ST15
CC15
II
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
24/01
S62
nt
t018
(ST30)
CC30
III
pR27
[ERY-CLIC]-TET/blaZ::Tn552/pl-ermC/pl-tetK/nd
(ST620)
25/01
S72
nt
t346
CC15
II
pR37
AMP-KAN-ERY-CHL/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-msrB/pl-cat::pC221/pl
26/01
S63
nt
t3201 ST1
CC1
II
pR19
AMP-[ERY-CLII]/blaZ/pl-[ermC/pl-msrB/pl]
27/01
S31
CC45
t798
CC45
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
28/01
S65
nt
t2949 -
CC15
II
pR26
AMP-TET/blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
29/01
S73
nt
t2949 (ST15)
CC15
II
pR28
AMP-TET/blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
(ST45)
30/01
S51
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
-/-
31/01
S9
CC30
t942
CC30
III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
32/01
S70
nt
t084
(ST15)
CC15
II
pR9
AMP-ERY/blaZ::Tn552/pl-[msrA/nd-msrB/nd]
33/01
S73
nt
t346
(ST620)
CC15
II
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
34/01
S53
CC5
t242
II
pR20
[ERY-CLII]/blaZ::Tn552/pl-ermC/pl
35/01
S51
CC5
t002
(ST5)
II
pR21
AMP-KAN-[ERY-CLIC]/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-[ermC/pl-msrB/pl]
CC5
36/01
S54
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
pc10
KAN-ERY/[aphA/nd-aadE-sat4]-msrA/nd
1/02
S74
CC1
t267
(ST97)
CC97
pR29
AMP-KAN-TET/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-tetK/pl
2/02
S51
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
pR21
AMP-[ERY-CLII]/blaZ::Tn552/pl-[ermC/pl-msrB/pl ]
3/02
S75
CC5
t002
(ST5)
CC5
II
pR10
AMP-KAN/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
4/02
S60
CC1
t267
ST97
CC97
pR38
AMP-KAN-CHL/[blaZ/nd-Tn552/pl]-[aphA/pl-aadE-sat4]-cat ::pC194/pl
5/02
S31
CC45
t040
(ST45)
CC45
pR30
AMP-[ERY-CLIC]-TET/[blaZ::Tn552/nd]-[ermB/nd-ermC/pl-msrB/pl]-tetK/pl
6/02
S31
CC45
t040
(ST45)
CC45
pR16
S42
CC5
t002
ST5
CC5
II
pR10
AMP-[AMK-GEN-KAN-TOB]/blaZ::Tn552/pl-[ aacA+aphD/nd]
S11
CC30
t018
(ST30)
CC30
III
pR10
AMP-KAN/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
9/02
S3
nt
t7785 -
CC30
III
pR31
A21
7. Anexos
7/02
8/02
MLSTd
CCe
CC5
Tipo HindIII
agr Pl Perfilf
II
pR11
AMP/blaZ::Tn552/pl
11/02
S74
nt
t1877 (ST97)
CC97
II
pR3
AMP/blaZ::Tn552/pl
12/02
S31
CC45
t040
(ST45)
CC45
pR31
AMP-[ERY-CLIC]-TET/blaZ::Tn552/pl-[ermC/pl-msrB/pl]-tetK/pl
13/02
S58
nt
t159
(ST121) CC121
IV
pc4
AMP-KAN-CLI/blaZ/nd-[aphA/nd-aadE-psat4]-linA/linA
14/02
S42
CC5
t002
(ST5)
II
pR21
AMP-[GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]/blaZ::Tn552/pl-[ermC/pl-msrB/pl]-[aacA+aphD/nd]
ST5
CC5
15/02
S31
CC45
t015
(ST45)
CC45
-/-
16/02
S31
CC45
t1618 (ST45)
CC45
IV
pR4
AMP-KAN/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
17/02
S55
CC25
t287
(ST25)
CC25
IV
pR10
AMP/blaZ::Tn552/pl
Perfil Resistenciag
18/02
S27
nt
t3952 (ST59)
CC59
IV
pR12
AMP/blaZ::Tn552/pl
19/02
S3
CC30
t017
(ST30)
CC30
III
pR1
AMP-KAN-CLI/blaZ/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-linA/linA
20/02
S18
CC8/239 t008
ST8
CC8/239 I
pR32
AMP-TET/blaZ/nd-tetK/pl
21/02
S3
CC30
t017
(ST30)
CC30
III
pR33
AMP-KAN-TET/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-tetK/pl
22/02
S70
nt
t7756 -
CC15
II
pR5
AMP-KAN-CLI/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-linA/linA
23/02
S52
CC5
t002
CC5
II
pR12
AMP-KAN/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]
24/02
S52
CC5
t1340 -
CC5
II
p0
KAN/[aphA/nd-aadE-sat4]
(ST5)
7. Anexos
A22
Tabla IIc (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de portadores sanos durante el periodo 1997-2002
(Artculos 4 y 6).
Tabla IId. Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de portadores sanos durante el periodo 2004-2006 (Artculos 4, 5 y 6).
Cepa LMUOa/ PFGE RM
Ao
SmaIb Testc
1/04
S70
nt
Tipo
spa
t085
MLSTd
2/04
S135
CC1
t189
(ST188) CC1
3/04
S136
CC30 t166
CC30 III
p0
AMP-KAN/blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
hla/b/d/g-lukED-tst-sea/c/h-egc2-splF
4/04
S127
CC30 t7785 -
CC30 III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/h-egc2-splF
5/04
S3
CC30 t253
CC30 III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/d/g-lukED-tst-sea/c-egc2
ST15
ST34
(ST36)
Tipo HindIII
Perfil Resistenciag
agr Pl Perfilf
CC15 II
-/-
CCe
pR34
Perfil Virulenciah
hla/d/g/gv-lukED-sea/c-splF
AMP-[AMK-KAN-TOB]-TET/blaZ::Tn552/pl-[aphA/pl-aadE-sat4-aadD/nd]-tetK/pl hla/b/d/g/gv-lukED--sea-splF
1/05
S133
CC1
t209
ST109
CC9
II
pR39
AMP-[ERY-CLI ]-CHL/blaZ/nd-ermC/nd-cat::pC194/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-sea/d/h/j/r-egc2
2/05
S150
CC1
t209
(ST109) CC9
II
pc5
AMP/blaZ/nd
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/c/k/l/q-egc1
3/05
S133
nt
t209
(ST109) CC9
II
pc11
AMP-[ERY-CLII]/blaZ/nd-ermC/nd
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-sea-egc2
4/05
S137
CC1
t209
(ST109) CC9
II
pc6
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sea/h-egc2
5/05
S131
CC25 t078
hla/d/g/gv-lukED-eta/d-sea/c/l-egc1
6/05
S128
CC5
t548
(ST5)
CC5
II
pc7
AMP-[AMK-KAN]/blaZ-Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
AMP-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLII]/
blaZ::Tn552/pl-[aphA/pl-aadE-sat4-aacA+aphD/pl-aadD/nd]-[ermC/pl-msrB/pl]
AMP-FOS/blaZ::Tn552/nd
7/05
S130
CC5
t306
(ST5)
CC5
II
pc8
KAN/blaZ::Tn552/nd-[aphA/nd-aadE-sat4]
hla/b/d/g/gv-lukED--sea/c/l/p-egc1
t346
ST25
CC25 I
pR35
8/05
S148
nt
9/05
S138
CC45 t026
10/05
S142
nt
t166
(ST34)
CC30 II
11/05
S52
CC5
t002
(ST5)
CC5
12/05
S126
p0
t002
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/b/d-sea/b/c-egc2-ear-splF-bsaB
(ST620) CC15 II
pR22
AMP-ERY/blaZ/pl-msrB/pl
hla/d/gv--sea
(ST45)
Sensible/-
hla/d/g/gv-lukED-eta/d-tst-sea/b/c/h-egc1
FOS/-
hla/b/d/g/gv-lukED-eta/d-tst-sea/b-egc2
pR2
AMP/blaZ/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-sea-egc1
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/d/g-tst-sea-egc2
(ST5)
CC45 I
II
CC30 III
13/05
S139
CC5
pc12
ERY/[msrA/nd-msrB/nd]-qacA/B
hla/b/d/g-lukED-eta/d-tst-sea/c/h/p-egc2
14/05
S126
CC30 III
CC5
II
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/b/d/g/gv-lukED-eta-tst-sea-egc2
15/05
S31
CC45 I
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
hld/g-egc1-ear
16/05
S140
CC5
(ST5)
CC5
pR13
AMP/blaZ::Tn552/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sed/j/r-egc1-splF
t179
II
17/05
S3
CC30 t012
(ST30)
CC30 III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/c-egc2-splF
18/05
S51
CC5
t002
(ST5)
CC5
-/-
hla/b/d/g/gv-lukED-egc1-splF
19/05
S127
nt
t6713 -
CC30 III
pR4
AMP/blaZ::Tn552/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/b/h
20/05
S134
nt
t216
CC59 IV
pR14
AMP-KAN-[ERY-CLII]/blaZ::Tn552/pl-[aphA/nd-aadE-sat4]-[ermC/nd-msrB/nd]
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/b/c/d/j/k/l/q/r-egc2-ear-bsaB
(ST59)
II
21/05
S3
CC30 t012
(ST30)
CC30 III
pR4
[ERY-CLI ]/blaZ-Tn552/nd-[ermC/pl-msrB/nd]
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-tst-sea/b/c/d/h/j/k/q/r-egc2-ear
22/05
S127
CC30 t012
(ST30)
CC30 III
pR4
AMP*/blaZ::Tn552/nd-msrB/nd
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/c/d/j/r-egc2
7. Anexos
A23
Cepa
LMUOa/
Ao
23/05
PFGE
SmaIb
RM
Testc
Tipo
spa
MLSTd
CCe
Tipo
agr
HindIII
Perfil Resistenciag
Pl Perfilf
Perfil Virulenciah
S70
nt
t346
(ST620)
CC15
II
p0
[AMK-KAN]/[aphA/nd-aadE-sat4]
hla/d/g/gv-lukED-etb-tst-sea/h-ear
24/05
S11
CC30
t018
ST30
CC30
III
pR4
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/b/d/g/gv-tst-sea/b/d/j/r-egc2
25/05
S131
CC25
t078
(ST26)
CC25
IV
pR3
AMP/blaZ::Tn552/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-seb-egc1
26/05
S141
nt
t148
ST72
CC72
pR16
AMP-[ERY-CLII]/blaZ/nd-[ermC/pl-msrB/pl]
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sea/b/c/l-egc1-ear
27/05
S143
CC30
t6490
ST34
CC30
pc9
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/b/d/g-lukED-etd-tst-seh-egc2
28/05
S3
CC30
t021
ST30
CC30
III
p0
AMP/blaZ::Tn552/nd
hla/b/d/g-lukED-tst-sea-egc2-splF
29/05
S33
CC45
t026
ST45
CC45
p0
AMP/blaZ/nd
hla/b/d/g-sea-egc2
30/05
S51
CC5
t071
(ST5)
CC5
II
pR2
AMP/blaZ/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-etb/d-sea/p-egc2-splF
31/05
S144
CC45
t026
(ST45)
CC45
pR23
AMP-ERY/blaZ/nd-msrB/pl
hla/d/g/gv-lukED/PV-etb/d-tst-sea/h/p/-egc2
32/05
S145
nt
t148
(ST72)
CC72
pc2
AMP/blaZ/nd
hla/b/d/gv-lukED-sea/c/p-egc2-splF
33/05
S146
nt
t1618
(ST45)
CC45
pR36
AMP-TET/blaZ::Tn552/pl-tetK/pl
hla/b/d/gv-lukED-tst-sea/c-egc2
1/06
S129
CC5
t548
(ST5)
CC5
II
pR24
AMP-ERY/blaZ::Tn552/pl-msrB/pl
hla/b/d/g/gv-lukED-etb-sed/j/k/p/q/r-egc1-ear-splF
2/06
S55
CC25
t287
(ST25)
CC25
IV
pR3
AMP-CLI/blaZ::Tn552/pl-linA/linA
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sec/d/l/p/j/r-egc1-ear-splF
3/06
S132
CC45
t050
(ST45)
CC45
pR25
AMP-[ERY-CLII]/blaZ::Tn552/pl-[msrA/pl-msrB/pl-ermC/pl]
hla/d/g-lukED-sec/d/j/l/r-egc1-ear
4/06
S147
CC1
t177
ST3
CC1
III
pR15
5/06
S149
CC25
t078
(ST26)
CC25
pR40
AMP/blaZ::Tn552/pl
hla/b/d/g/gv-etb/d-seb/c/d/h/j/r-egc1-splF-bsaB
AMP-[AMK-GEN-KAN-TOB]-[ERY-CLIC]-MUP/blaZ/pl-[aphA/pl-aadEhla/d/gv-lukED-etd-sed/j/r-egc1-splF
sat4-aacA+aphD/nd-aadD/nd]-[ermC/pl-msrA/nd-msrB/nd-linA/linA]-qacA/B
7. Anexos
A24
Tabla IId (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de portadores sanos durante el periodo 2004-2006
(Artculos 4, 5 y 6).
Tabla IIe. Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de alimentos, brotes y manipuladores de alimentos durante el
periodo 1997-2008 (Articulo 7).
Origen (N)a/Ao
B1-MA1 (2)/02
Nombre
RM
Aislamientos
testb
B1-1 a 2
CC30
Tipo
spa
t021
MLSTc
ST30
CCd
CC30
Tipo
Perfil Resistenciae
agr
III
AMP/blaZ::Tn552
Perfil Virulenciaf
hla/b/d/g-lukED-egc1-splF
B1-MA2/02
B1-3
nt
t120
ST15
CC15
II
MUP/mupA
hla/d/gv-lukED--splF
B1-CA (5)/02
B1-4 a 8
CC45
t050
ST45
CC45
AMP/blaZ::Tn552
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear
B1-SM (5)/02
B1-9 a 13
CC45
t050
(ST45)
CC45
AMP/blaZ::Tn552
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear
B1-P (4)/02
B1-14 a 17
CC45
t050
(ST45)
CC45
AMP/blaZ::Tn552
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear
B1-TC (2)/02
B1-18 a 19
CC45
t050
(ST45)
CC45
AMP/blaZ::Tn552
hla/d/g-lukED-sec/l-egc1-ear
B2-MA3/02
B2-1
CC1
t177
ST3
CC1
III
AMP-[ERY-CLI ]-MUP/blaZ::Tn552-[ermA-ermC]
hla/d/g/gv-eta
B2-MA4/02
B2-2
CC30
t012
(ST30)
CC30
III
AMP-[ERY-CLII]-MUP/blaZ::Tn552-ermC
hla/d/g/gv-eta-lukED-tst-sea-egc2-splF
B2-MA5/02
B2-3
CC30
t136
ST34
CC30
III
AMP-[ERY-CLII]-MUP/blaZ::Tn552-ermC
lukED-tst-seh-egc2-splF
B2-TC/02
B2-4
CC5
t616
ST1619
CC5
IV
AMP-ERY/blaZ-[msrA-msrB]
hla/b/d/g/gv-lukED-seh-egc2
B2-VG/02
B2-5
CC8/239 t701
ST6
CC5
IV
AMP-[ERY-CLII]-TET / blaZ::Tn552-ermC-tetK
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF
B2-VG/02
B2-6
CC22
t790
ST217
CC22
AMP/blaZ
hla/b/d/g/gv-lukED-sec-egc1-ear
t790
hla/b/d/g/gv-lukED-sec-egc1-ear
B2-SL/02
B2-7
CC22
ST217
CC22
AMP/blaZ
B3-MA6/02
B3-1
CC8/239 t701
(ST6)
CC5
IV
AMP-[ERY-CLII]-TET/blaZ::Tn552-ermC-tetK
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF
B3-MA7/02
B3-2
CC8/239 t008
ST8
CC5
IV
AMP/blaZ
lukED-sek/q-ear-bsaB-splF
B3-MA8/02
B3-3
CC5*
CC25
IV
AMP/blaZ::Tn552
hla/d/gv-etd-lukED-seb-egc1-ear-bsaB-splF
B3-MA9/02
B3-4
CC8/239 t701
(ST6)
CC5
IV
AMP-[ERY-CLII]-TET/blaZ::Tn552-ermC-tetK
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF
B3-CC/02
B3-5
CC8/239 t701
(ST6)
CC5
IV
AMP-[ERY-CLII]-TET/blaZ::Tn552-ermC-tetK
hla/b/d/gv-sea-bsaB-splF
B3-SM (2)/02
B3 (6-1)
CC5
CC5
II
AMP/blaZ
hla/b/d/gv-lukED-egc1-splF
B3 (6-2)
CC5
t1560 (ST146)
CC5
II
hla/d/gv-lukED-egc1-splF
B3 (7-1)
CC5
t1560 (ST146)
CC5
II
hla/b/d/gv-lukED-egc1-splF
B3 (7-2)
CC5
t1560 (ST146)
CC5
II
AMP/blaZ
hla/b/d/gv-lukED-egc1-splF
B4-ER/06
LSP062266
CC30
t012
(ST30)
CC30
III
AMP/blaZ::Tn552
hld/g-tst-sea-egc2
LSP-PT/97
LSP 5836
CC5
t002
(ST5, ST231)
CC5
II
ERY/msrB
hla/b/d/g/gv-lukED-etd-sea/b/d/j/p/r-egc2-ear
LSP-PT/97
LSP 5919
CC8/239 t008
(ST8)
CC8/239 IV
AMP/blaZ
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/b/d/j/p-egc2
B3-TC (2)/02
t7125 ST26
t1560 ST146
7. Anexos
A25
7. Anexos
A26
Tabla IIe (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de alimentos, brotes y manipuladores de
alimentos durante el periodo 1997-2008 (Articulo 7).
Origen (N)a/Ao
LSP-PT/97
Nombre
Aislamientos
LSP 6592
RM
testb
CC5
Tipo
spa
t002
MLSTc
ST5
CCd
CC5
Tipo
Perfil Resistenciae
agr
II
ERY/msrA-msrB-linA/linA
I
Perfil Virulenciaf
hla/d/gv-lukED-sed/j/p-egc1-ear-splF
LSP-HR/06
LSP061741
CC45
t015
ST45
CC45
AMP-[ERY-CLI ]/blaZ::Tn552-[ermA-ermC]
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/c/l-egc2-ear
LSP-PT (5)/07
LSP071048-1
CC45
t015
(ST45)
CC45
AMP/blaZ::Tn552
hld/g-lukED-sea/c/l-egc2-ear
LSP-PT (5)/07
LSP071049-1 a -5
CC30
t840
ST30
CC30
III
AMP/blaZ::Tn552
hld/g-lukED-tst-sea-egc2
LSP-PT (5)/07
LSP071159-1 a -5
nt
t216
ST59
CC59
IV
hla/b/d/g/gv-sea/b/c/k/q-egc2-ear
LMUO-QU/07
LMUO-A4
CC30
t012
(ST30)
CC30
III
agrIII
LMUO-HG/07
LMUO-A2
CC45
t015
(ST45)
CC45
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/d/j/r-egc2-ear
LMUO-HG/07
LMUO-A5
CC45
t604
ST546
CC45
III
hla/b/d/g/gv-lukED-tst-sea/d/j/r-egc1
LMUO-HG/07
LMUO-A6
CC5
t002
ST5
CC5
II
LMUO-HG/07
LMUO-A7
CC5
t2173 ST5
CC5
II
hla/d/gv-lukED-ear
CMA-MA10/08
LMUO-MA1
CC30
t166
ST34
CC30
III
AMP/blaZ::Tn552
[AMP-OXA]-[ AMK-GEN-KAN-TOB]-MUP
/[blaZ-SCCmec IVd]-[aacA+aphD-aphA]
[AMP-OXA]-CLI-[ AMK-GEN-KAN-TOB]-MUP
/[blaZ-SCCmec IVd]-nd-[aacA+aphD-aphA]
-
CMA-MA11/08
LMUO-MA2
nt
t3474 ST15
CC15
II
CMA-MA12/08
LMUO-MA3
nt
t272
ST51
CC121
IV
hla/b/d/gv-etb-egc2
CMA-MA13/08
LMUO-MA4
CC30
t166
(ST34)
CC30
III
hla/b/d/g-tst-seh-egc2-splF
hla/b/d/gv-lukED-sed/j/r-egc1-splF
hla/b/d/g/gv-lukED-sea/d/j/r-egc2-splF
hla/b/d/g-lukED-tst-egc2-splF
Las muestras proceden de cuatro brotes de intoxicacin alimentaria (B, de 1 a 4); del Programa de Seguridad alimentaria de la Agencia de Sanidad Ambiental y Consumo llevado a cabo
en el Laboratorio de Salud Publica del Principado de Asturias (LSP); de alimentos analizados en el Laboratorio de Microbiologa de la Universidad de Oviedo (LMUO); y de muestras
nasales de asistentes al curso para obtener el certificado de manipulador de alimentos (CMA). CA, cordero asado; CC, carro de centollo; EM, ensalada de marisco; ER, ensaladilla rusa;
HG, hamburguesa; HR, huevos rellenos; MA, muestra nasal de manipulador de alimentos; P, paella; PT, pastel; QU, queso; SM, salpicn de marisco; SL, solomillo de ternera; TC, tarta
de crema; VG, vegetales. N, nmero de aislamientos.
b
Test de restriccin-modificacin para deteccin de complejos clnales de Cockfield et al. (J Med Microbiol 2007, 56: 614-619). nt, no tipiflicable.
c
Las secuencias tipo (ST) entre parntesis se corresponden a ST presuntivos segn el tipo spa.
d
Complejo clonal (CC) en base a los resultados de la tipificacin por RM test, spa y MLST.
e
Perfil de resistencia frente a los antimicrobianos: ampicilina-penicilina (AMP), oxacilina-meticilina (OXA), amikacina (AMK), kanamicina (KAN), gentamicina (GEN), tobramicina
(TOB), cloranfenicol (CHL), eritromicina (ERY), clindamicina (CLIC constitutiva, CLII inducible), tetraciclina (TET), ciprofloxacina (CIP), moxifloxacina (MOX), linezolid, mupirocina
(MUP), rifampicina (RIF), sulfametoxazol/trimetoprima (SXT), trimetoprima (TMP), tigeciclina y vancomicina. Concentracin mnima inhibitoria a mupirocina: 40g/ml (B2-1, B2-2);
60g/ml (LMUO-A6, LMUO-A7); 1250g/ml (B1-3).
f
Hemolisina (hl), exfoliatina (et), leucotoxina (luk), enterotoxina (se), egc1 (cluster con seg-sem-sen-sei-seo), egc2 (cluster con seg-sem-sen-sei-seo-seu).
Tabla IIf. Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de animales durante el periodo 2004-2008 (Artculos 10, 11 y 12).
Tipo
Perfil Resistenciac
agr
I
[MET-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL(I)]-TET-[SXT-TMP]/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB]-[tetK-tetM]-dfrG
07S00011/07 AP-E
ST398
07S00022/07 AP-E
nt
C2
t108
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-tetM
hla/b/d/g
07S00042/07 AP-E
nt
C3
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec nt-[aacA-aphD-aadD]-ermB-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00077/07 AP-E
nt
C4
t011
ST398
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec IVa-[aacA-aphD-aadD]-ermC-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00101/07 AP-E
nt
C5
t2576 (ST398) I
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00107/07 AP-E
nt
C6
t2346 ST398
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00112/07 AP-E
nt
C7
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-[ermA-ermB-ermC]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
(ST398) I
Cepa/Ao
Origena
MLSTb
I
I
07S00122/07 AP-E
nt
C6
t011
07S00130/07 AP-E
nt
C8
t1451 (ST398) I
Perfil Virulenciad
hla/b/d/g
[MET-OXA]-TET-CIP/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
hla/b/d/g
07S00131/07 AP-E
nt
C6
t2011 (ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-ermB-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
07S00133/07 AP-E
nt
C8
t1451 ST398
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00138/07 AP-E
nt
C6
t011
[MET-OXA]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00159/07 AP-E
nt
C6
t1985 ST398
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermB-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00167/07 AP-C
nt
C9
t034
07S00171/07 AP-B
nt
C10
t1255 ST398
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/SCCmec V*-aadD-[ermA-ermB]-[tetL-tetM]
hla/b/d/g
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
(ST398) I
I
(ST398) I
07S00244/07 AP-C
nt
C11
t1928 ST398
07S00254/07 AP-E
nt
C1
t034
07S00289/07 AP-E
nt
C6
t2346 (ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00295/07 AP-E
nt
C6
t1451 (ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00347/07 AP-D
nt
C1
t108
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-[SXT-TMP]/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
hla/b/d/g
(ST398) I
ST398
07S00361/07 AP-D
nt
C3
t1793 (ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec nt-aadD-[ermA-ermB]-[tetL-tetM]-dfrK
07S00427/07 AP-E
nt
C6
t2970 ST398
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermA-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00431/07 AP-E
nt
C1
t034
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermA-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
07S00435/07 AP-E
nt
C12
t108
(ST398) I
[MET-OXA]-TET-CHL/SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00436/07 AP-E
nt
C13
t108
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-CHL-TET-CIP/blaZ-SCCmec V*-ermC-tetM
hla/b/d/g
07S00448/07 AP-E
nt
C14
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-KAN-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V-aphA-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
(ST398) I
7. Anexos
A27
7. Anexos
A28
Tabla IIf (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de animales durante el periodo 2004-2008 (Artculos 10, 11 y 12).
07S00449/07
AP-E
(ST398)
Tipo
Perfil Resistenciac
agr
I
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec nt-ermC-[aacA-aphD-aadD]-[tetL-tetM]-dfrK
07S00450/07
AP-E
nt
C12
t108
(ST398)
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-ermC-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00464/07
AP-E
nt
C3
t034
(ST398)
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-TMP/blaZ-SCCmec nt-aadD-[ermA-ermB-ermC]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00467/07
AP-E
nt
C15
t011
(ST398)
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec IVa-[aacA-aphD]-ermC-tetM-dfrK
hla/b/d/g
Cepa/Ao
Origena
MLSTb
Perfil Virulenciad
hla/b/d/g
07S00475/07
AP-E
nt
C16
t034
(ST398)
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec nt-aadD-[ermA-ermB-ermC]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00488/07
AP-E
nt
C6
t011
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00491/07
AP-E
nt
C15
t011
(ST398)
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET-TMP/blaZ-SCCmec IVa-[aacA-aphD]-tetM-dfrK
hla/b/d/g
07S00532/07
AP-A
nt
C17
t1250
ST398
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec nt-aadD-[ermA-ermB-ermC]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00573/07
AP-D
nt
C1
t034
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL]-TET-TMP/SCCmec V-[ermA-ermC]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
07S00580/08
AP-B
nt
C12
t2576
(ST398)
hla/b/d/g
07S00605/08
AP-D
nt
C5
t034
(ST398)
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI-QUI/DAL]-CHL-TET-TMP/SCCmec V-aphA-ermC-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
07S00610/08
AP-C
nt
C9
t034
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-[ermA-ermB-ermC]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00622/08
AP-C
nt
C10
t1580
(ST398)
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
07S00632/08
AP-A
nt
C9
t571
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-[ermA-ermB]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00634/08
AP-A
nt
C12
t2576
(ST398)
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-ermB-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
07S00640/08
AP-A
nt
C12
t2576
(ST398)
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00001-1/08
nt
C18
t011
(ST398)
[MET-OXA]-KAN(I)-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-aadD-ermC-[tetK-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00001-2/08
PC
PC
nt
C18
t011
(ST398)
[MET-OXA]-KAN(I)-TET/blaZ-SCCmec V-aadD-ermC-[tetK-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00001-5/08
PC
nt
C9
t034
(ST398)
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-[ermA-ermB]-[tetL-tetM]
hla/b/d/g
08S00008-1/08
PC
nt
C19
t011
(ST398)
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-TET/blaZ-SCCmec V-[aacA-aphD]-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00156/08
PC
nt
C20
t034
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL(I)]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermC]-[tetK-tetM]-[dfrG-dfrK]
hla/b/d/g
08S00177/08
PC
nt
C5
t011
(ST398)
[MET-OXA]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermB-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00205/08
PC
nt
C1
t2510
ST398
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-ermB-[tetK-tetL-tetM]
hla/b/d/g
08S00294/08
PC
nt
C21
t011
(ST398)
[MET(I)-OXA]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00020/04
MC
nt
C9
t034
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V*-ermA-tetM
hla/b/d/g
08S00023/04
MC
nt
C22
t011
(ST398)
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-CHL-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
Tabla IIf (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de animales durante el periodo 2004-2008 (Artculos 10, 11 y 12).
08S00027/04 MC
Tipo
Perfil Resistenciac
agr
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB-ermC]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00047/05 MC
nt
(ST398) I
hla/b/d/g
Cepa/Ao
Origena
C23
t034
MLSTb
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]-dfrG
Perfil Virulenciad
08S00051/05 MC
nt
C18
t011
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00053/05 MC
nt
C9
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-[ermA-ermB]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00063/05 MC
nt
C24
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-[ermA-ermB]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00074/05 MC
nt
C25
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-ermC-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00078/06 MC
nt
C26
t108
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-TET-[SXT(I)-TMP]/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00081/06 MC
nt
C5
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00098/06 MC
nt
C5
t1451 ST398
[MET(I)-OXA]-CHL-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V-linA/linA'-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00111/06 MC
nt
C11
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-[ermA-ermC]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00115/06 MC
nt
C1
t034
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]-[ermA-ermB]-dfrG
hla/b/d/g
08S00116/06 MC
nt
C27
t034
(ST398) I
[AMP-PEN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00121/07 MC
nt
C6
t011
ST398
[AMP-PEN]-[TET/blaZ-SCCmec V-linA/linA'-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00130/07 MC
nt
C16
t034
(ST398) I
hla/b/d/g
08S00133/07 MC
nt
C28
t011
(ST398) I
08S00134/07 MC
nt
C29
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermC]-[tetK-tetM]-dfrG
[MET(I)-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[aacA-aphD]-[ermB-linA/linA']-[tetK-tetLtetM]-dfrK
[MET-OXA]-KAN(I)-[ERY-CLI]-CHL-TET-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-ermA-[tetL-tetM]-dfrK
08S00138/07 MC
nt
C14
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermA-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00139/07 MC
nt
C5
t011
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-KAN(I)-[ERY-CLI]-CHL-TET/blaZ-SCCmec V-aadD-fexA-[tetK-tetL-tetM]-cfr
hla/b/d/g
hla/b/d/g
hla/b/d/g
08S00140/07 MC
nt
C14
t108
(ST398) I
hla/b/d/g
08S00141/07 MC
nt
C14
t011
(ST398) I
hla/b/d/g
41-089/07
MC
nt
C20
t011
(ST398) I
41-090/05
MC
nt
C12
t108
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-CHL-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V-fexA-[tetK-tetM]-dfrG
[MET(I)-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[aacA-aphD-aadD]-ermC-[tetK-tetL-tetM]dfrK
[MET(I)-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-ermC-[tetL-tetM]-dfrK
41-092/06
MC
S1
S1
t318
ST433
-/-
hla/b/d/g-lukM-egc2-splF
41-093/06
MC
nt
C6
t011
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-KAN-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
41-096/05
MC
S2
S2
t337
ST9
[AMP-PEN]-GEN-[ERY-CLI]-TET/blaZ-ermC-tetM
hla/b/d/gv-egc1
41-100/06
MC
nt
C6
t011
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
III
III
hla/b/d/g
hla/b/d/g
7. Anexos
A29
7. Anexos
A30
Tabla IIf (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de animales durante el periodo 2004-2008 (Artculos 10, 11 y 12).
41-112/05
MC
41-122/06
MC
nt
Cepa/Ao
Origena
C16
Tipo
Perfil Resistenciac
agr
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-/SCCmec V-aadD-[ermB-ermC]-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
MLSTb
Perfil Virulenciad
t034
(ST398) I
[AMP-PEN]-[ERY-CLI ]-TET/blaZ-aadD-ermC-tetM
hla/b/d/g
(ST398) I
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-aadD-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00004/06 CP
nt
C12
t011
08S00007/08
S3
S3
t1430 ST9
08S00305/08 CC
nt
C1
t034
III
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec IVa-aadD-ermB-tetL-dfrK
hla/b/d/gv-egc1
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00415/08 CC
nt
C14
t034
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]-[dfrG-dfrK]
hla/b/d/g
08S00427/08
S4
S4
t002
ST5
[MET-OXA]-KAN-[ERY-CLI]-TET-CIP/blaZ-SCCmec nt-aphA-ermA-[tetK-tetM]
hla/d/gv-lukED-egc1-splF
08S00428/08 CC
nt
C18
t011
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
IV
08S00434/08 CC
nt
C1
t034
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB-ermC]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00436/08 CC
nt
C16
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec nt-ermA-tetM
hla/b/d/g
(ST398) I
08S00438/08 CC
nt
C11
t571
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V*-aadD-[ermA-ermB]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00440/08 CO
nt
C24
t5210 (ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL(I)]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d
08S00441/08 CO
nt
C30
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec IVa-[aacA-aphD-aadD]-ermB-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00443/08 CO
nt
C30
t779
(ST398) I
[MET-OXA]-[GEN-KAN]-[ERY-CLI]-TET-TMP/SCCmec IVa-[aacA-aphD-aadD]-[tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g
08S00448/08 CC
nt
C12
t108
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-tetM
hla/b/d
08S00452/08 CC
nt
C5
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-ermA-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00453/08 CV
nt
C6
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermC]-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00455/08 CO
nt
C31
t034
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-[ERY-CLI-QUI/DAL(I)]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
08S00326/08 LV
nt
C6
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00337
LV
nt
C18
t011
(ST398) I
TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00352
LV
nt
C6
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-TET/blaZ-/SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00423
LV
nt
C18
t011
(ST398) I
[MET(I)-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00424
LV
nt
C6
t011
(ST398) I
[MET-OXA]-TET/SCCmec V-aadD-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
08S00290
PV
nt
C33
t011
(ST398) I
08S00292
PV
nt
C1
t034
(ST398) I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-[ermA-ermB-ermC]-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
MRSA 1/06
MH
nt
C34
t011
ST398
[MET-OXA]-GEN-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermC-[tetK-tetM]
hla/b/d/g-seb
Tabla IIf (Continuacin). Caractersticas de los aislamientos de Staphylococcus aureus procedentes de animales durante el periodo 2004-2008 (Artculos 10, 11 y 12).
MRSA 2/07
MH
PFGE
SmaI
nt
MRSA 307
MH
nt
C12
t1457
ST398
[MET-OXA]-TET/blaZ-SCCmec V-[tetK-tetM]
MRSA 407
MH
nt
C14
t011
ST398
[MET-OXA]-TET-CIP-TMP/blaZ-SCCmec V-linA/linA'-[tetK-tetM]-dfrG
hla/b/d/g
MRSA 507
MH
nt
C35
t011
ST398
[MET-OXA}-KAN(I)-TET-TMP/blaZ-SCCmec V-aadD-[tetK-tetL-tetM]-dfrK
hla/b/d/g-seb
MRSA 3707
MC
nt
C32
t108
ST398
[AMP-PEN]-[ERY-CLI-QUI/DAL]-TET/blaZ-[ermA-ermC]-[tetK-tetM]
hla/b/d/g
Cepa/Ao
Origena
PFGE
Cfr9I
C2
Clster
PFGE
C
Tipo
spa
t108
ST398
Tipo
agr
I
[MET-OXA]-[ERY-CLI]-TET/blaZ-SCCmec V-ermA-[tetK-tetM]
Perfil
Virulenciad
hla/b/d/g
hla/b/d/g
MLSTb
Perfil Resistenciac
AP, cerdo portador nasal asintomtico del matadero A, B, C, D o E; CC, carne de cerdo; CP, carne de pollo; CO, carne de pavo; CV, carne de vaca; LV, leche de vaca; MC, muestra clnica de cerdo enfermo; MH,
muestra de heces de cerdo; PC, polvo de granja de ganado porcino, PV, polvo de granja de ganado vacuno; nt, no tipiflicable.
b
Las secuencias tipo (ST) entre parntesis se corresponden a ST presuntivos segn el tipo spa y/o PFGE Cfr9I.
c
Perfil de resistencia frente a los antimicrobianos: meticilina (MET), oxacilina (OXA), kanamicina (KAN), gentamicina (GEN), cloranfenicol (CHL), eritromicina (ERY), clindamicina (CLI), quinupristina-dalfopristina
(QUI/DAL), tetraciclina (TET), ciprofloxacina (CIP), linezolid, mupirocina (MUP), rifampicina (RIF), sulfametoxazol/trimetoprima (SXT), trimetoprima (TMP) y vancomicina. En las cepas sensibles a meticilina y
oxacilina se testaron tambin los antibiticos ampicilina (AMP) y penicilina (PEN).
g
Hemolisina (hl), exfoliatina (et), leucotoxina (luk), enterotoxina (se), egc1 (cluster con seg-sem-sen-sei-seo), egc2 (cluster con seg-sem-sen-sei-seo-seu).
7. Anexos
A31
7. Anexos
A32
Tesis Doctoral
Universidad de Oviedo