REVISIN LITERARIA:

Segn Bermejo (2014), las tcnicas no espectroscpicas son aquellas en las

que no hay intercambio de energa, sino que se basan en una interaccin
entre la radiacin electromagntica y la materia que da como resultado
cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de dicha radiacin.
Algunos ejemplos de tcnicas no espectroscpicas son la nefelometra, la
refractometra, la polarimetra, la difraccin de rayos X, la turbidimetra
(realizada en la prctica del laboratorio), etc.
Ros et. al (2012), mencionan que la medida de la dispersin de radiacin da
lugar a tres tcnicas analticas: a) la turbidimetra, que mide la disminucin
de la intensidad del haz de luz incidente que es dispersada por una
suspensin; b) la nefelometra, que mide directamente la dispersin
producida por las partculas que contiene la muestra (detector no alineado
con el haz de radiacin incidente); y c) la espectroscopia de dispersin
Raman.
La turbidimetra y la nefelometra se diferencian slo en la forma de medir la
radiacin dispersada. En turbidimetra la radiacin pasa directamente a
travs de la disolucin que contiene a la muestra y se mide (en la misma
direccin) el descenso de intensidad de la radiacin transmitida. En
nefelometra se mide el haz de radiacin dispersado en un ngulo,
generalmente 90, respecto al haz incidente.
Para la determinacin de la concentracin mediante turbidimetra:
Se mide la transmitancia, T, que es el cociente entre la intensidad de la
fuente de radiacin transmitida por la muestra, I M, y la intensidad de la
radiacin de la fuente transmitida por un blanco, I B:
T=

IM
IB

La transmitancia es proporcional a la concentracin de las partculas

dispersantes, C, mediante una relacin similar a la ley de Lambert- Beer:
-logT= k.b.C
k= constante (depende de tamao, forma de partculas y la
longitud de onda de la fuente de radiacin)
b= longitud del camino ptico
C= se expresa como masa por unidad de volumen
Instrumentacin:
Los turbidmetros y los nefelmetros estn integrados por los mismos
componentes:
-

Fuente de radiacin
Selector de longitud de onda
Detector
Procesador de la seal

La nica diferencia es el ngulo de medida con respecto a la fuente de

radiacin.

MATERIALES Y MTODOS:
Materiales por mesa
- Gradilla con 10
tubos de prueba
de 15mL.
- Pipetas
volumtricas
- Pipetas
graduadas de 10
mL
- Propipetas
- Matraz
volumtrico
o
fiolas
- Vaso
de
precipitados de
100 mL
- 1
piceta
con
agua destilada.

Reactivos
Solucin
madre
de
1000 mg/L de sulfatos.
Pesar 1.4792 g de
sulfato de sodio anhidro
y
diluir
con
agua
destilada en un matraz
volumtrico de 1L.
Solucin
acondicionadora
de
sulfato. Preparacin: En
un vaso de 500 mL
mezclar en orden: 300
mL de agua destilada
con probeta; 30 mL de
HCl concentrada; 100
mL
de
2-propanol
(alcohol
isoproplico);
75 gramos de NaCl y
mezclar
bien;
finalmente agregar 50
mL de glicerol: agitar y
enrazar a 500 mL.

Equipos
- Balanza
analtica
- Espectrofot
metro UV-VIS
- Cubetas de
plstico o
vidrio y
cuarzo.

Actividad 1. Calibracin del espectrofotmetro de absorcin

molecular UV-VIS
-

Calibrar el equipo segn instrucciones del manual del equipo e

indicaciones del profesor.
Completar la tabla 1.

Actividad 2. Construccin de una curva de calibracin.

-

Preparar 100 mL de cada uno de los estndares segn datos de la

siguiente tabla.
Calcular el volumen de solucin madre de 1000 ppm de sulfato para
preparar 100 mL de solucin estndar segn el cuadro 1. Enrazar con
agua destilada.
Para la tabla 2 utilizar tubos de prueba de 15 mL en gradillas.

Actividad 3. Generacin de precipitado en muestras de agua.

Asegurarse que las muestras no tengan concentraciones mayores a 80 ppm
de sulfatos que es el mximo del estndar. Si se excediera deber diluirse
hasta que se encuentre en el rango de concentraciones del estndar.

RESULTADOS
Para obtener los resultados se deben tabular los datos de las actividades
indicadas en el numeral 6 en cada una de las tablas correspondientes:
Tabla 5. Curva de calibracin de sulfato de bario y transmitancia; pT
Sustancia
Sulfato de Bario, BaSO4 en suspensin
Longitud onda de mx. de
420 nanmetros
transmitancia
Dimetro de cubeta o lado
1 cm
Blanco
St1
St2
St3
St4
St5
ppm de
0.0
5
10
20
40
80
SO42Lectura
0.0
0.026
0.055
0.152
0.244
0.780
de pT =
-log T
Curva de
pT = pendiente ppm SO42- + trmino independiente
calibraci
y = 0.0096x - 0.0385
n:
R = 0.9661
Y = mX +
b

Curva de calibracin de sulfato de bario

1
0.8 Curva de calibracin de sulfato de bario
f(x) = 0.01x - 0.04
R = 0.97

0.6

- log T

0.4
0.2
0

Linear (Curva de calibracin de sulfato de bario )

0

10

20

30

40

ppm

50

60

70

80

90

Para hallar la relacin exacta entre la transmitancia y la concentracin se

establece la curva de calibracin que se prepar usando un conjunto de
patrones de concentracin conocida.
Se observa que la curva de calibracin tiene un coeficiente de
correlacin de
Se demuestra que a mayor concentracin de iones sulfato, menor
transmitancia.
Se suele usar cuatro patrones para construir una curva de calibracin, en
este caso se utiliz 6 (incluyendo al blanco) debido a que no se puede
mantener por mucho tiempo el sulfato de bario en suspensin homognea y
esto genera que la lectura de la absorbancia de los patrones sean
diferentes.

Tabla 6. Transmitancia de muestras y concentracin

-lot T =
pT
Curva de
calibraci
n
Factor de
dilucin
ppm SO42en la
muestra

Muestra 1
Agua San Mateo (10
mL)
R1
R2
1.020
1.016

Muestra 2
Agua San Luis (10
mL)
R1
R2
0.056
0.078

Muestra 3
Agua Pozo (1 mL +
9mL H2O destilada)
R1
R2
0.606
0.691

y = 0.0096x - 0.0385

10

10

10

10

10

10

110.260

109.844

9.844

12.135

67.135

75.990

ppm
promedio
mg
SO42-/L

76.649

51.753

En Bermejo y Ramirez, 2014. La tcnica de turbidimetra se basa en la medicin de la

disminucin de la intensidad de la radiacin al pasar un haz de luz a travs de una
concentracin dada. La intensidad de la radiacin transmitida depender del nmero y
tamao de las partculas suspendidas. Estas partculas son los sulfatos y se
recomienda el uso de esta tcnica para muestras con concentraciones superiores a los
60ppm de sulfatos.
La medicin de sulfatos se dio al precipitar los iones sulfatos en un medio cido con el
cloruro de bario formando as cristales de sulfato de bario como indica la siguiente
reaccin:

BaCl2 + Na2SO4 2NaCl + BaSO4

Las concentraciones se obtuvieron a partir de la ecuacin de la curva de calibracin:

y = 0.0096x - 0.0385

En la literatura se encuentra que alguna de las interferencias que se pueden presentar

en esta tcnica es debido a la alta turbidez de las muestras de agua que deben ser
previamente centrifugadas o filtradas para su aclaracin y su posterior anlisis. Por lo
tanto, la muestra debe ser incolora y transparente, ya que la coloracin o turbidez
puede provocar errores.

La adicin del cloruro de bario debe ser de forma cristalina para controlar la velocidad
del precipitado de sulfato de bario. El uso de la solucin acondicionadora de sulfato
tiene una mezcla de glicerina/alcohol con lo cual se logra estabilizar y mantener el
precipitado en suspencin, logrando as una turbidez homognea.

El ECA del agua indica que la cantidad de sulfatos presentes en agua para el consumo
humano no debe pasar los 300mg/L, de lo contrario puede causar trastornos
gastrointestinales en los nios. Algunos autores suelen considerar que la
concentracin normal de sulfatos en agua debera ser de 25ppm y que la
concentracin permitida es hasta 250ppm. La concentracin de sulfatos de las tres
muestras dieron los siguientes resultados: se promedi las dos repeticiones para cada

muestra, encontrndose en el agua San Mateo una concentracin de 110.052 ppm de

SO42-, para el agua San Luis 10.9895 ppm de SO 42- y en el agua de pozo 71.563 ppm
de SO42-. Siendo el agua San Mateo la que tiene la mayor concentracin de sulfatos
debido a que es una agua mineral de manantial, por otro lado, es el Agua San Luis la
que presenta la menor concentracin. Las tres muestras de agua se encuentran dentro
del lmite establecido, menor a 250ppm. Cabe aclarar que el agua de pozo fue
preparada con 1ml de agua de pozo y 9ml de agua destilada, si hubiera sido 100%
agua de pozo, lo ms probable es que la concentracin de sulfatos exceda la
concentracin permitida.

CONCLUSIONES
-

El fundamento de la turbidimetra nos permiti comprender que el grado de

dispersion de la luz es proporcional al nmero de partculas que se encuentra en
su paso y que ello depende de la cantidad de analito que presenta la muestra. En
base a ello, conocer la gran variedad de aplicaciones que puede tener esta tcnica
en los laboratorios analticos.

Con esta tcnica se determin la concentracin de sulfatos presentes en las

muestras de agua san mateo, san luis y agua de pozo al precipitar el sulfato en
presencia del barrio. Las tres muestras estuvieron dentro del lmite mximo
permitido para el consumo humano.

BIBLIOGRAFIA
Bermejo Moreno, Raquel y Moreno Ramrez, Antonio.2014. Anlisis
Instrumental. Editorial Sntesis. Madrid.
Ros, A; Moreno, M; Simonet, B. Tcnicas espectroscpicas en qumica
analtica. Volumen I. Editorial Sntesis. Espaa
CUESTIONARIO:
Cul es la diferencia entre nefelometra y turbidimetra?
.La nefelometra se basa en la medicin de radiacin dispersa, en cambio la
turbidimetra en la medicin de la intensidad de un haz disminuido.
Factores para la eleccin entre turbidimetra y nefelometra:
-Intensidad de la radiacin transmitida o dispersada con la intensidad de la
radiacin procedente de la fuente. La mejor eleccin cuando la muestra

contiene pocas partculas dispersantes es la nefelometra. La turbidimetra

es buena cuando las muestras contienen grandes concentraciones de
partculas
dispersantes.
-Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra la intensidad de
la radiacin dispersada a 90 es mayor si las partculas son bastante
pequeas para que se produzca una dispersin Rayleigh. Si las partculas
son mayores la intensidad de la dispersin disminuir. En turbidimetra la
seal consiste en la disminucin relativa de la radiacin transmitida, por lo
que el tamao de las partculas dispersantes es menos importante.
Se utilizan normalmente en el anlisis de la calidad qumica del agua, para
determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento.
Tambin
para
la
determinacin
de
iones
sulfato.
Turbidimetra.
-Se utiliza para el anlisis de fibringeno, triglicridos, complejos Ag-Ac y
otras
sustancias.
-Aplicable cuando la dispersin es suficientemente grande (concentracin
alta
de
partculas).
Nefelometra.
-Preferible para concentraciones bajas de partculas, ya que la dispersin es
menor y la disminucin de intensidad del haz incidente es pequea.
-Se suele utilizar para medir concentraciones especficas de colonias de
bacterias en algn medio de cultivo, o de muchas protenas utilizando el
principio de dispersin luminosa molecular.
Cules
son
las
espectroscpicas?

tcnicas

espectroscpicas

las

no

.
CLASIFICACIN DE LOS MTODOS PTICOS
Los mtodos pticos se dividen en:
1.) Mtodos pticos espectroscpicos: son aquellos en los que existe
intercambio de energa entre la radiacin electromagntica y la materia.
Estos son debidos a transiciones entre distintos niveles energticos.
Son los mtodos ms utilizados.
2.)Mtodos pticos no espectroscpicos: se basan en una interaccin entre
radiacin electromagntica y la materia que produce como resultado un
cambio en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin
electromagntica.
En estos mtodos los mecanismos de interaccin son la reflexin, refraccin,
difraccin, dispersin, interferencias, polarizacin o la dispersin refractiva.
Espectroscpicos
Nivel molecular: UV
-Visible, IR, microondas
Absorcin
Nivel atmico: absorcin atmica, rayos X
Nivel molecular: fluorimetra, fosforimetra, quimioluminiscencia
Emisin
Nivel atmico: Emisin atmica, ICP, fluorescencia de rayos X
No espectroscpicos
Dispersin: turbidimetra, nefelometra
Refraccin: refractometra, interferometra
Difraccin: rayos X
Rotacin ptica: polarimetra

Las principales tcnicas espectroscpicas que se utilizan en los laboratorios

clnicos son la espectroscopia de absorcin molecular para la determinacin
de sustratos y enzimas, la espectroscopia atmica para la medida de la
concentracin de metales, la espectroscopia de fluorescencia y la
espectroscopia de luminiscencia para la medida de diversos compuestos
qumicos y actividades enzimticas, y la espectroscopia de dispersin para
determinar fundamentalmente protenas especficas.
Espectroscopia de absorcin molecular:
Las regiones del espectro electromagntico ms utilizadas en el trabajo
analtico de rutina en los laboratorios clnicos son la ultravioleta y la visible.
El trmino luz se aplica a la regin radiante con longitudes de onda visibles
para el ojo humano y las longitudes de onda que la rodean. La absorcin de
la luz por las molculas biolgicas depende de la estructura electrnica de
los tomos de carbono que las componen.
Espectrofotmetro:
Los espectrofotmetros son los instrumentos que se utilizan para medir la
absorcin de la luz por las disoluciones. Los principales componentes de un
espectrofotmetro de un solo haz son la fuente de luz, el sistema de
seleccin de la longitud de onda, la cubeta para el espcimen, el detector
de luz y el dispositivo de lectura. Los espectrofotmetros de doble haz
dividen el rayo luminoso en dos haces, uno que pasa por la cubeta de
referencia (blanco) y otro que pasa por la del espcimen. La seal que
incide sobre el detector es la diferencia (espcimen-referencia). El rayo
luminoso se divide por medio de un espejo giratorio que hace incidir el
mismo haz, alternativamente, por la cubeta con la referencia y por la cubeta
con el espcimen. El detector de luz de los espectrofotmetros convierte la
que le llega en energa elctrica. Los detectores ms utilizados para medir la
intensidad de la luz en las regiones ultravioleta y visible son los tubos
fotomultiplicadores
y
los
dispositivos
de
estado
slido.
Espectroscopia

atmica:

En contraste con las molculas que producen espectros de bandas, los

tomos producen espectros de lneas definidos con claridad. En general, y a
diferencia de la espectroscopia molecular, las concentraciones de tomos no
se miden directamente en la disolucin, sino que hay que volatilizarlos, lo
cual puede hacerse con una llama o electrotrmicamente en un horno. En
este estado, los elementos emiten o absorben fcilmente radiacin
monocromtica a la longitud de onda adecuada. La luz emitida o absorbida
es proporcional al nmero de tomos. La emisin de luz se mide por
espectroscopia de emisin atmica, y la absorcin de la luz, por
espectroscopia
de
absorcin
atmica.
Espectroscopia
de
emisin
atmica:
Espectroscopia de emisin atmica mide la luz emitida por los tomos
cuando reciben energa calorfica. Hay dos tipos de tcnicas de
espectroscopia de emisin atmica: la emisin por llama y la emisin por
plasma.

Espectroscopia de emisin atmica por llama: La espectroscopia de

emisin por llama se denomina tambin fotometra de llama. Se basa
en la emisin de luz caracterstica por los tomos de muchos
elementos metlicos cuando se les suministra energa con una llama.
El sodio produce luz amarilla (589 nm); el calcio rojo amarillenta (622
nm); el litio roja (760 nm); y el potasio violeta/66 nm). En condiciones
controladas, la intensidad de la luz de la longitud de onda
caracterstica producida por cada uno de los tomos es directamente
proporcional al nmero de tomos de la muestra. Esta tcnica se ha
utilizado en los laboratorios clnicos durante mucho tiempo para la
medida de sodio y potasio en los lquidos biolgicos, pero en la
actualidad ya no se emplea.

Espectroscopia de emisin atmica por plasma: Un plasma consta de

un gas caliente, parcialmente ionizado, con una concentracin
abundante de cationes y electrones que lo hacen conductor. Los
plasmas que se emplean en la emisin atmica se forma por la
ionizacin de una corriente de argn, que produce iones de argn
electrones. Las altas temperaturas del plasma se deben al
calentamiento resistivo que tiene lugar por obra del movimiento de
los electrones y los iones de argn. Como los plasmas operan a
temperaturas mucho mayores que las llamas, proporcionan una
atomizacin mejor y estados de excitacin mas intensamente
poblados. Adems de los tomos neutros, las temperaturas elevadas
del
plasma
producen
tambin
iones
de
la
sustancia.
La espectroscopia de emisin atmica por plasma es muy adecuada
para el anlisis multielemental, ya que todos los tomos de un
espcimen se excitan a la vez. Puede programarse un monocromador
de barrido para que se mueva rpidamente a la longitud de onda de
un tomo, se detenga y se registre la intensidad de su emisin, luego
vaya a la longitud de onda de otro y as sucesivamente. De esta
forma pueden analizarse tres o cuatro elementos por minuto. Otra
posibilidad es utilizar un aparato con varios canales que permita
medir simultneamente muchos elementos.

Espectroscopia de absorcin atmica:

La espectroscopia de absorcin atmica mide la luz de una determinada
longitud de onda absorbida por los tomos de un elemento. En su estado
fundamental, los tomos en forma de vapor absorben luz de longitudes de
onda muy estrechas y pasan entonces a estados de excitacin. El elemento
que quiere medirse se vaporiza por medio de una llama o un mtodo
electrotrmico (horno de grafito). La fuente se energa radiante son las
lmparas de ctodo hueco, construidas con el mismo elemento que quiere
medirse. Cuando se excitan los tomos de la lmpara producen un vapor
que emite un rayo de luz monocromtica de la misma longitud de onda que
la que absorben los tomos de ese elemento. Cuando la luz procedente de
la lmpara de ctodo hueco atraviesa la llama, parte de aquella es
absorbida por los tomos vaporizados en su estado fundamental, lo que
ocasiona un descenso de intensidad del rayo de la lmpara.
Espectroscopia de fluorescencia:
La absorcin por algunas molculas de luz ultravioleta o visible hace que un
electrn de valencia pase de su estado basal a otro excitado. La emisin de

luz al volver el electrn del estado excitado al basal se denomina

fluorescencia. La energa de la luz emitida es menor que la de la absorbida
y, por tanto, su longitud de onda, mayor. La diferencia entre estas dos
longitudes de onda se denomina desviacin de Stokes y, de forma general,
los mejores resultados de las medidas de fluorescencia se obtienen con
compuestos que tengan grandes diferencias entre la longitud de onda de
excitacin y de emisin. El tiempo que transcurre entre la absorcin de la
radiacin electromagntica y la emisin de la fluorescencia es muy
pequeo, de unos 10-8 s.
Son muchos los compuestos que presentan el fenmeno de la fluorescencia.
La mayora de ellos son sustancias que tienen enlaces mltiples conjugados
con electrones deslocalizados. La fluorescencia se emite en todas las
direcciones, puede cuantificarse y su medicin es mucho ms sensible que
la de la absorcin de la radiacin.
Espectroscopia de luminiscencia:
La luminiscencia es la emisin de la luz fruto de una reaccin qumica.
Puede ser quimioluminiscencia, cuando los electrodos pasan a un estado
excitado como consecuencia de una reaccin qumica y vuelven a su estado
estado basal emitiendo luz, o bioluminiscencia, cuando la emisin de luz
surge debido a una reaccin catalizada por una enzima.
La luminometra es la tcnica que mide la luminiscencia. Para medirla se
requieren aparatos sencillos, llamados luminmetros, que constan de estos
componentes: cmara de mezcla o cubeta, fotomultiplicador, amplificador y,
lector o registro.
La cmara de mezcla o cubeta debe mantenerse a temperatura constante,
ya que las reacciones que tienen lugar son muy sensibles a la temperatura,
especialmente las catalizadas por enzimas. En los laboratorios clnicos, la
lumiometra se aplica, principalmente, en los sistemas de deteccin de los
inmunoanlisis con reactivos marcados, por ejemplo los
enzimoinmunoanlisis que utilizan fosfatasa alcalina como enzima
marcadora en la deteccin por quimioluminiscencia.
Espectroscopia de dispersin:
Dispersin de la luz:
Cuando un rayo de luz choca con una partcula en suspensin, una parte de
la luz se absorbe, otra se refleja y otra se dispersa. La dispersin de la luz
por una partcula depende de su tamao, su ndice de refraccin respecto al
del lquido que la rodea y la longitud de onda de la luz. Cuando la longitud
de onda es mucho mayor que el tamao de la partcula , la luz se dispersa
de forma simtrica alrededor de esta, de modo que la intensidad de la
dispersin es mnima a 90 de rayo incidente. En cambio, cuando la longitud
de onda de la luz incidente sea aproximadamente igual al tamao de la
partcula, se dispersar ms luz hacia delante que hacia atrs. Finalmente,
cuando la longitud de onda sea mucho menor que el tamao de la partcula,
la mayora de la luz se dispersar hacia delante.
Turbidimetra y nefelometra:

La turbidimetra y la nefelometra son dos tcnicas relacionadas entre s que

se emplean para medir la luz dispersada por una suspensin de partculas
coloidales. En la turbidimetra, el detector se coloca en lnea con la fuente
de radiacin y se mide el descenso de la luz transmitida a travs de la
disolucin particulada a consecuencia de su dispersin por las partculas. La
nefelometra, por su parte, mide la luz dispersada a diversos ngulos de la
fuente de luz.
El principal problema para aplicar estas dos tcnicas a los sistemas
biolgicos es la presencia de molculas endgenas que dispersan la luz.
Adems, los reactivos deben estar libres de polvo, ya que las partculas
grandes de este dispersan mucho la luz y el fondo o dispersin blanco que
resulta limita la sensibilidad de ambas tcnicas. Estos problemas se han
solucionado diseando instrumentos muy sensibles y mejorando la calidad
de los anticuerpos