Mecanismos de Patogenicidad - Mayo de 2016

Exotoxinas Bacterianas
Blanco de accin, mecanismo de accin y su asociacin con evasin
a respuesta inmune.
Fabin Felipe Guerrero Delgado1
1

Estudiante de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia.

Contacto: +57 310 608 1017 ffguerrerod@unal.edu.co

Introduccin
Las exotoxinas son protenas producidas tanto por bacterias gram positivas como
gram negativas e incluyen enzimas citolticas y protenas de unin a receptores que
van a alterar la funcin de su blanco celular o la muerte de la misma. Generalmente
sus genes van codicados en plsmidos y en algunos casos en fagos lisognicos. (1)
Son mediadores solubles localizados en el citoplasma o periplasma bacteriano que
se liberan durante la lisis celular. A este grupo pertenecen las enterotoxinas,
neurotoxinas y hemolisinas entre otras, que reciben su nombre de acuerdo a su sitio
de accin.(2)
.
Dentro de las citolticas se encuentra la Alfa toxina o fosfolipasa C
producida por C. perfringens, la cual acta sobre membranas de fosfolpidos como
la esngomielina lo que produce su sintomatologa. En las Hemolisinas, cuyo blanco
de accin son los glbulos rojos, encontramos la Streptolisina O, que genera la
formacin de poros en la membrana celular causando prdida de agua y electrolitos
intracelulares causando as la muerte de su objetivo.(1)
.
Algunas de este tipo de toxinas son dimricas, es decir estn compuestas por sub
unidades A y B con diferentes funciones y sitios de accin. La porcin B es la
encargada de la unin con su receptor especico en la membrana celular. Una vez
unida se procede a la liberacin al interior de la clula de la porcin A, la cual ser
dirigida a su sitio de accin (ribosomas, mecanismos de transporte o vas de
sealizacin intracelular) produciendo la sintomatologa respectiva (diarrea,
dinfuncion neuronal o muerte).(1)
.
Las enfermedades producidas por estas toxinas tienen un amplio espectro.
Encontramos desde diarrea profusa como la producida por la toxina de Vibrio
cholarae, hasta enfermedades respiratorias, en el caso de Bordetella pertusis, y
ttano cuyo agente etiolgico es Clostridium tetani. Todas patologas frecuentes en
nuestra regin geogrca que sin adecuado tratamiento llevan a la muerte del
husped infectado. (1)
Clasicacin
Dependiendo de su estructura y actividad siolgica, podemos clasicar las
endotoxinas en 4 tipos(3):
.

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Toxinas AB: Tienen dos subunidades, la B que se une al receptor de la clula husped
y la A que tiene actividad enzimtica y causa la toxicidad (toxinas colrica, diftrica,
tetnica, botulnica, entre otras).
.
Que afectan un sitio especco del husped actuando fuera o dentro de la clula.
Pueden ser AB. Segn donde acten se subdividen en:
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Neurotoxinas: Botulnica, tetnica.
Enterotoxinas: Clera, toxinas termolbiles de E. coli.
Citotoxinas: Diftrica, Toxina Shiga.

.
.
.

Que desorganizan la membrana de la clula husped (leucocidinas, hemolisinas,

fosfolipasas). No tienen porciones AB separables.
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Que son superantgenos, estimulan, en mayor medida los antgenos normales a las
clulas T para producir citocitas (Toxina del SST, exfoliatina, enterotoxina
estaloccica).
Pero para nes prcticos, se va a clasicar a la exotoxinas en dos grandes grupos, de
acuerdo con el sitio sobre el cual actan. El primer grupo encierra aquellas
exotoxinas que operan intracelularmente, bien sea a nivel de componentes celulares
que estn ubicados en la cara interna de la membrana citoplasmtica, o a nivel de
estructuras dispersas en el citoplasma, como citoesqueleto y ribosomas. El segundo
grupo se constituye por exotoxinas que van a actuar directamente a nivel de la
membrana de la clula blanco. Dicho mecanismo puede causar lisis celular, por lo
que a este grupo de toxinas se les conoce como citolisinas (4).
.
Debemos aclarar que pese a su nombre, las exotoxinas bacterianas no siempre van
a ser secretadas al espacio extracelular de la clula bacteriana. En el caso de las
bacterias Gram negativas, algunas toxinas son transportadas nicamente hasta el
espacio periplsmico. Otras toxinas pueden ser transportadas a travs de las dos
membranas, por mecanismos que requieren la participacin de sistemas de
translocacin especcos.(4)
Exotoxinas que actan intracelularmente
Son del tipo de exotoxina AB (Action-Binding) que ya se ha hablado en el presente
trabajo. Dichas subunidades, separadamente, no muestran ningn efecto txico
sobre las clulas. En algunos casos se ha reportado que la subunidad A requiere de
un procesamiento adicional, el cual genera un fragmento denominado A1, que es el
responsable directo de la actividad txica (4).
Mecanismos de sntesis.
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Principalmente se conocen dos modelos generales de sntesis de dichas exotoxinas.
En el primer modelo, un gen contiene la informacin para la sntesis de una pretoxina,
la cual es posteriormente procesada por protelisis para generar la toxina activa.
Este proceso proteoltico puede ocurrir dentro de la bacteria o en el medio

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extracelular.(5) En este modelo, por lo general, se produce un heterodmero, en

donde las subunidades A y B estn unidas covalentemente por puentes disulfuro.
Algunos ejemplos de este modelo de sntesis incluyen la toxina diftrica de
Corynebacterium diphteriae, la exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa y las
neurotoxinas tetnica y botulnicas de Clostridium tetani y C. botulinum,
respectivamente.(4)
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En un segundo modelo, un opern est constituido por dos genes donde cada uno
contiene la informacin requerida para la sntesis de las subunidades. Es en este
modelo donde las subunidades pueden ser sintetizadas de manera independiente
partiendo del ARNm. (6) Dichas subunidades luego podran ser secretadas por la
bacteria hacia el espacio periplsmico o el medio extracelular, sitios en los cuales
ocurre el ensamble de la toxina. (4) Las toxinas que son sintetizadas de esta manera
generalmente estn conformadas por una subunidad A asociada a cinco
subunidades B. Como ejemplo de toxinas sintetizadas por el segundo mecanismo
podemos citar el col era de Vibrio cholera, la toxina termolbil de Escherichia coli, la
toxina Shiga de Shigella dysenteriae.(5)
.
Mecanismos de unin.
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Como ya se ha mencionado, las subunidades B son responsables de la interaccin
de las toxinas con los receptores especcos localizados en la supercie de las clulas
diana. Lgicamente, las clulas que no presenten receptores especcos para una
toxina determinada son resistentes a su actividad txica. Dichos receptores para los
mltiples tipos de subunidades B son, generalmente, glicolpidos o glicoprotenas (5).
Por citar ejemplos, la toxina del clera se une especcamente al glicolpido Gm1,
mientras que la toxina Shiga y similares lo hacen al glicolpido Gb3.(7) En el caso de
las neurotoxinas tetnica y botulnicas parece existir una interaccin mltiple con
receptores tanto proteicos como lipdicos de la membrana.(5) Y nalmente la
exotoxina ingresa a la clula con mecanismos que inician con una endocitosis
mediada por receptor.
Actividad enzimtica de algunas exotoxinas
Ya cuando la subunidad A ha alcanzado el citoplasma, puede ejercer su efecto
txico sobre los diferentes compuestos celulares. Hay proceso importantes de la
siologa celular que son alterados de tal manera que se favorece el crecimiento o la
dispersin de las bacterias generadoras de la toxicidad. La capacidad cataltica de
la actividad intracelular de dichas exotoxinas es la base para su alta potencia: tan
solo una molcula de la toxina es suciente para alterar las molculas blanco de
una clula.(5)
.
Actividad de ADP-ribosiltransferasa.
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Las subunidades A con esta actividad catalizan la modicacin covalente de un
determinado grupo de protenas, en donde transeren la molcula ADP-ribosa
proveniente del cofactor NAD a un residuo de aminocido especco. Esta unin
covalente altera la conformacin de la protena blanco, lo cual a su vez modica su
funcin. La alteracin de la estructura proteica es la responsable nal de los efectos

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txicos observados. Las toxinas clera, termolbil de E. coli, pertussis (29), diftrica,
as como la exotoxina A de P. aeruginosa son ejemplos clsicos de este mecanismo
de accin. Por lo general, las protenas blanco pertenecen a la familia de las
protenas G, las cuales utilizan GTP como cofactor en su funcionamiento normal. Las
toxinas clera, termolbil y pertussis catalizan la ADP-ribosilacin de protenas G que
regulan la actividad de la adenilato ciclasa en el sistema de transduccin celular, lo
cual provoca la elevacin de la concentracin intracelular de AMP cclico.(5)
Actividad de N-glicosidasa.
.
El principal ejemplo de exoenzima con esta actividad es la toxina Shiga. En su
fragmento A1, cataliza la hidrlisis del residuo de adenina en la posicin 4328 cerca
del extremo 3' del ARN ribosomal 28S. Esta depurinacion
resulta en la inhibicin de la
elongacin de la cadena polipeptdica durante la sntesis de protenas, debido a un
bloqueo en la unin del ARNt dependiente del factor de elongacin.(5)
.
Actividad de adenilato ciclasa.
.
Este tipo de actividad lo encontramos en las toxina EF de Bacillus anthracis y la
adenilato ciclasa-hemolisina de Bordetella pertussis. En estos casos, las toxinas
mismas tienen actividad de adenilato ciclasa y aumentan directamente la
concentracin intracelular de AMP cclico. La toxina ntrax producida por B.
anthracis el agente causal del carbunco, consiste de tres protenas separadas: el
antgeno protector (PA), el factor letal (LF) y el factor de edema (EF).(8) Cada
protena por separado no tiene actividad txica. Sin embargo, en combinacin
constituyen los dos componentes txicos de la toxina anthrax. PA en combinacion

con LF, heterodmero al que se le ha dado el nombre de toxina letal, provoca lisis de
macrfagos de ratones y ratas, y es considerado como el responsable de los efectos
letales en estos animales (8). El mecanismo intracelular para la accin de LF es an
desconocido (5). El PA junto con EF, heterodmero designado como toxina de
edema, produce edema e inhibe la funcin de clulas fagos. Los efectos de la
toxina de edema resultan de la elevacin de las concentraciones intracelulares de
AMP cclico, debido a que EF es una adenilato ciclasa que ingresa a la clula
gracias a PA y acta sobre el ATP citoslico.(5)
.
Neurotoxinas.
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Algunas bacterias anaerobias como C. tetani y C. botulinum que producen varias
neurotoxinas estructuralmente relacionadas, las cuales se conocen por ser potentes
inhibidores de la liberacin de neurotransmisores por parte de las vesculas
presinpticas en las terminaciones nerviosas. Las neurotoxinas son sintetizadas como
una nica cadena polipeptdica que es proteolticamente procesada para generar
la toxina madura, que consiste de una cadena pesada (H) unida a una cadena
liviana (L) a travs de un puente disulfuro (4). Se ha descrito, por ejemplo, que las
cadenas H de las neurotoxinas botulnicas actan sobre las neuronas motoras
perifricas, en donde causan un bloqueo de la liberacin de acetilcolina y as
producen las manifestaciones clnicas del botulismo (parlisis cida). Otro ejemplo
es la toxina tetnica, que sufre un transporte axonal retrgrado hasta el sistema
nervioso central, en donde bloquea la liberacin de neurotransmisores inhibitorios,
resultando en las manifestaciones clnicas del ttano (parlisis rgida). Es conocido

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que cadenas L de todas estas neurotoxinas son el componente activo que bloquean
la exocitosis tan pronto como son liberadas al citoplasma de las neuronas.(5)
Exotoxinas y evasin a la respuesta inmune
Algunas toxinas pueden evadir el sistema inmune al daar las clulas implicadas en
la respuesta inmune o al desviar la respuesta inmune. Es el caso de las exotoxinas A
de Pseudomonas aeruginosa, adems que parecen ser txicas para los fagocitos o
el ntrax. Estos microorganismos producen toxinas que despolarizan la membrana
celular del fagocito, con la subsiguiente degranulacin masiva y muerte celular.
Otras como las exotoxinas pirognicas A, B y C, y la protena M de S. Pyogenes son
capaces de sobreestimular el sistema inmune activando grandes nmeros de
clulas T para proliferar. Esta estimulacin incrementada ha dado lugar a la
designacin de estas sustancias como superantgenos.(9)
.
Se ha estudiado la accin sinrgica de la toxina pertussis y la toxina adenilato
ciclasa aniquila el reclutamiento y la funcin de las clulas inmunes innatas. Despus
de unirse a un receptor asialoglicoproteina es endocitado y retrgradamente
transportado al retculo endoplasmtico. Desde el ER, la subunidad A se entrega en
el citosol y viaja a la membrana plasmtica, donde ADP-ribosila la subunidad alfa de
las protenas G heterotrimricas, perturbando sus funciones de regulacin y que
conduce a un aumento en la concentracin de cAMP que contribuye a la supresin
temprana de la produccin de citoquinas inamatorias e inhibe el reclutamiento de
clulas inmunes en el sitio de la infeccin.(9)
.
Tambin se ha visto y estudiado la accin de las exotoxinas sobre las trampas
extracelulares de neutrlos, las cuales se han vinculado con la defensa inmune
innata. Se ha demostrado que las exotoxinas modulan la formacin de las trampas
extracelulares de neutrlos, por lo cual, facilitan la colonizacin o la propagacin
dentro del husped.(9)
.
En conclusin, podemos observar que las exotoxinas pueden ser dirigidas a
diferentes tipos de clulas, pero su labor principal en la modulacin inmunolgica,
se basa precisamente en el control de la respuesta inmune a nivel de macrfagos y
neutrlos, lo que las conlleva a obtener cierto control en la respuesta inmune
innata, y proporcionar al microorganismo patgeno un medio adecuado para la
proliferacin activa.

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Bibliografa
(1) Patrick R. Murray PhD, Ken S. Rosenthal PhD and Michael A. Pfaller MD. 2016. Medical
Microbiology, Chapter 14, 134-142.e1. 8th edition.
(2) Actor J. 2012. Elsevier's Integrated Review Immunology and Microbiology, 11, 93-103.
(3) Endotoxinas bacterianas. Disponible en: http://www.diversidadmicrobiana.com/index.
php?option=com_content&view=article&id=407&Itemid=490. Consultado en Mayo 27
de 2016.
(4) Middlebrook J. L., Dorland R. B.: Bacterial toxins: cellular mechanisms of action. Microbiol.
Rey. 1984; 48:199-221.
(5) Garca F. Recientes avances sobre los mecanismos de accin de exotoxinas bacterianas
que actan intracelularmente. Facultad de Microbiologa Universidad de Costa Rica.
(6) Jackson M., Neill R., O'Brien A., Holmes R., Newland J.: Nucleotide sequence analysis and
comparision of the structural genes for Shiga-like toxin and Shiga like toxin encoded by
bacteriophages from Escherichia coli 933. FEMS Microbiol. Lett. 1987; 44:109-114.
(7) Dams E., De Wolf M., Dierick W.: Nucleotide sequence analysis of the CT operon of the
Vibrio cholerae classical strain 569B. Biochim. Biophys. Acta 1991; 1090:139-141.
(8) Pezard C., Berche P., Mock M.: Contribution of individual toxin components to virulence of
Bacillus anthracis. Infect. lmmun. 1991; 59:3472-3477.
(9) Mecanismos de patogenicidad. Disponible en: http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d00000-00---off-0preclini--00-0----0-10-0---0---0direct-10---4-------0-0l--11-1l-50---20-about---00-01-00-0-0-11-1-00-00&a=d&cl=CL1&d=HASHf3fc49133efc261abf5271.7.3.3. Consultado en
Mayo 28 de 2016.