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CONTRIBUCIN DE LA GENOTIFICACION EN

LA RESOLUCIN DE PROBLEMAS
IMMUNOHEMATOLOGICOS.
Nancy Bentez,
BS, MHS (ASCP)SBBCM
Reference Laboratory Director
Julio 2016

Objetivos..
Aplicaciones de la
Biologia molecular
en
Immunohematologia
Como usar esta
herramienta en la
resolucion de casos.
Proporcionar sangre
compatible.
Su participacion
2

Cuantos pares de bases nucleicas tiene


el cuerpo Humano? Escoja la respuesta.

1.500.000
2.1.000.000
3.3.000.000.000
4. 50000
3

Alfabeto genetico.

A-T

C-G

Adenina
Tiamina

Citocina
Guanina
4

Un sueno tecnico hecho realidad


3.000.000.000 pares de bases
nucleicas en el haplotipo
humano
AAT CGT
TTA GCA
1 AA en el par de bases para
alterar la expresin en los
grupos sanguneos

Diversidad..

30.000 tipos de
genes
300 antigenos
36 sistemas de
grupos sanguneos
6

Immunohematologa Molecular
Los genes que codifican para los antigenos
de los grupos sanguineos estan codificados y
secuenciados.
Polimorfismos de nucletido nico (SNP)
ocasiona cambio de un solo aminocido que
causa la diferencia en los antgenos de los
grupos sanguneos
Cambio de nucletidos, delecin de genes,
insercin y la recombinacin de genes
origina cambios en los sistemas.

Cmo se definen los grupos


sanguneos a nivel gentico?

A travs de
Mutacin : K vs k
Simple cambio de
base nucleica codifica
un aminoacido diferente.

Mutacin de sentido equivocado SNP


K versus k Polimorfismo de un solo
nucleotide.
Cambio en Aminocido
Treonina antigeno k

A T
A

Kell gp

Metionina antigeno K

Cmo se definen los grupos


sanguneos a nivel gentico?
Mutacin sin sentido SNP: Gy(a-)

El cambio de base implica una


codificacin de terminacin y
concluye la sntesis de la protena

Mutacin sin sentido


(Nonsense) SNP Gy(a-)
Codn de terminacin Fenotipo Donull
Codn Stop
T A C

Dombrock
Glutamina 148

No hay sntesis de proteina

Cmo se definen los grupos


sanguneos a nivel gentico?

Alteracin transcripcional:
Protenas alteradas: Jknull
Regulacin
Perdida de expresin en los eritrocitos:
Fy(a-b)

Genotipo de 33 antigenos
Blood Group System

Genotype

Predicted Phenotype

RhCE

C, c, Cw, Cx, E, e, rs, ceAR

C, Cweak, c, Cw, Cx, E, e, VS

Kell

K, k, KpA, KpB, Kmod-1,


JSA, JSB

K, k, Kpa, Kpb, Kmod-1, Jsa,


Jsb

Kidd

JKA, JKB, Jknull (IVS5-1G>A,


Jka, Jkb
871T>C)

Duffy

FYA, FYB, FyGATA, Tyx

Fya, Fyb

MNS

M, N, Ss, GYPB (230C>T,


IVS5+1G>A, IVS5+5G>T),
Gp.Mur

M, N, Ss, U, Mia

Dombrock

Doa, Dob, Hy, Jo

Doa, Dob, Hy, Jo

Diego

Dia, Dib

Dia, Dib

Colton

Coa, Cob

Coa, Cob

Cartwright

Yta, Ytb

Yta, Ytb

Genetic Identification panel for 33 for RBC Antigens

13

Aplicaciones en el banco de sangre


Tipificacin del antgeno
Pacientes: recin tranfundidos
Con prueba de antiglobulina
directa positiva.
Cigocidad del RHD.
Falta de disponibilidad de
antisueros
Genotipo de las donaciones.
Resolver problemas serolgicos
Deteccin de expresin dbil en
antgenos
14

Montana mas alta de Mexico

15

INFORMACION

Femenina
45 aos
Emergencia
Intenso dolor
abdominal.
Obstruccin Intestinal
2 unidades de
sangre.
.
16

Inicio de la
investigacinHistoria.claves
Vamos a empezar a
Historia de 2
poner las piezas del
embarazos,
rompecaza juntas
Placenta previa 2
unidades de sangre
trasfundidas.
Peruana
Acidez persistente.
Toma vitaminas
17

ABO-RhA Pos

FORWARD TYPE

REVERSE TYPE

ANTI-A

ANTI-B

ANTI-D

A1 CELLS

B CELLS

18

Prueba de Rastreo .

Rh

Kell

Cw

Kpa

Duffy

Kidd

MNSs

Kpb

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

Lewis

Lu

P1

Lea

Leb

Lua

Lub

IS

IAT

R1R1

3+

II

R2R2

3+

III

rr

3+

Patient Cells

Rastreo Gel: tambien


positivo
19

Panel
Rh
D
1 R1wR1 +
2 R1R1 +
3 R2R2 +
4 Ror
+
5
r'r
0
6 r''r
0
7
rr
0
8
rr
0
9
rr
0
10 rr
0
TC AC

C
+
+
0
0
+
0
0
0
0
0

c
0
0
+
+
+
+
+
+
+
+

E
0
0
+
0
0
+
0
0
0
0

e
+
+
0
+
+
+
+
+
+
+

Kell
K
0
+
0
0
0
0
+
0
0
+

Duffy

Kidd

k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb


+ 0 + + + + +
+ 0 + 0 + + +
+ 0 + + + 0 +
+ 0 + 0 0 + 0
+ 0 + + + + +
+ 0 + + + 0 +
+ 0 + 0 + + 0
+ 0 + + 0 + 0
+ 0 + + 0 + +
+ 0 + 0 + 0 +

P MNS
P1 M N
+ + +
+ + +
+ + 0
+ 0 +
0 + +
+ + +
+ + +
0 + +
0 + +
0 + 0

S
0
0
+
+
0
0
+
0
0
0

s
+
+
+
+
+
+
0
+
+
+

AGH
3+
3+
3+
3+
3+
3+
3+
3+
3+
3+
0

20

Posibilidades
1. Anticuerpo contra
un antgeno (s) de
alta incidencia.
2. Anticuerpos
mltiples
3. Anticuerpos Frios.
4. Autoanticuerpos y
alloanticuerpos
21

Y ahora qu hacemosvamos a ver su


opinin
1. UN PANEL DE FICINA y DTT

2. ORDENAMOS GENOTIPO.
3. ENVIAMOS LA MUESTRA A OTRA
CIUDAD
4. CELULA CON EL MISMO FENOTIPO
DEL PACIENTE.

22

Fenotipo
C

R2R2
S

Fya

Fyb

Jka

Jkb

23

SUERO DEL PACIENTE Vs CELULAS DE


FENOTIPO SIMILAR.
Rh

Kell

Duffy Kidd

MNSs

P Lewis

Lu

D C c E e V Cw K k Kpa Kpb Jsa Jsb Fya Fyb Jka Jkb M N S s P1 Lea Leb Lua Lub

LISS PeG
IgG IgG

+ 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + 2+ 3+

24

Clulas tratadas con qumicos-Ficina


Rh

Kell

Duffy

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

Ficin
IgG

Cw

Kpa

Kpb

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

P1

Lea

Leb

Lua

Lub

3+

II

3+

III

3+

Clulas tratadas con


0.2 M DTT
Rh

Kell

Duffy

Kpa Kpb Jsa

Jsb

Fya Fyb

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

Jka

Jkb

P1

Cw

R1R1

R2R2

rr

Lea Leb Lua Lub

0.2 M DTT TTD


PEG IgG

3+
3+
3+

25

Tratamiento con Ficina y DTT.


Ficina/Papana

DTT (200mM)

Posible
especificidad

Negative

Positive

N, S, s, Fya, Fyb

Variable

Negative

Yta

Positive

Negative

Kell, Scianna

Positive

Negative

Dombrock; Ge3;
KTIM

Positive

Negative

LW

Positivo Positivo

A,B; H; P1;
Lewis; RH;
Kidd; Wra;
Wrb; U; Fy3;
Dia; Dib; Lan;
Ata.
26

Y ahora qu hacemos, ningn qumico


nos ayud.
1. Realizar absorciones selectivas

2. Usar clulas Rh nulo


3. Correr el suero contra clulas
negativas para antgenos de alta
incidencia

4. Solicitar el resultado del genotipo

27

Genotipo Molecular
K/k, Kpa/Kpb, Jsa/Jsb,
Jka/Jkb

Colton Coa, Cob

Dombrock Hy, Joa,


Doa, Dob

Fya/Fyb

/GATA

Expresion debil Fyb/FyX


M/N, S/s/Uvar
Rh C/c and E/e, VS and V

Scianna Sc1, Sc2


Lutheran Lua, Lub

Diego Dib, Dia,

28

Genotipo de 33 antigenos
Blood Group System

Genotype

Predicted Phenotype

RhCE

C, c, Cw, Cx, E, e, rs, ceAR

C, Cweak, c, Cw, Cx, E, e, VS

Kell

K, k, KpA, KpB, Kmod-1,


JSA, JSB

K, k, Kpa, Kpb, Kmod-1, Jsa,


Jsb

Kidd

JKA, JKB, Jknull (IVS5-1G>A,


Jka, Jkb
871T>C)

Duffy

FYA, FYB, FyGATA, Tyx

Fya, Fyb

MNS

M, N, Ss, GYPB (230C>T,


IVS5+1G>A, IVS5+5G>T),
Gp.Mur

M, N, Ss, U, Mia

Dombrock

Doa, Dob, Hy, Jo

Doa, Dob, Hy, Jo

Diego

Dia, Dib

Dia, Dib

Colton

Coa, Cob

Coa, Cob

Cartwright

Yta, Ytb

Yta, Ytb

Genetic Identification panel for 33 for RBC Antigens

29

Genotipo de Dib

Dib

Aleluya !!!

30

Raza.
Antigen or Phenotype
Negative

Population

Ata

Blacks

Cra

Blacks

Dib

South Americans>
Native Americans>
Japanese

Esa

Mexicans, South
Americans, Blacks

GUTI

Chileans

HrB

Blacks

Caucasians>> Blacks> any

Blacks
31

Posible anti-Dib

Habrn otros alloanticuerpos en el


suero??.

Cmo descartar los anticuerpos ms


comunes..anti-C,-e, -K, -Fya, M
Posibilidades???.
1. ABSORBER EL SUERO CON CELULAS DE
FENOTIPO CONOCIDO.
2. CORRER UN PANEL DE CELULAS Di(b-)
3. CORRER UN PANEL TRATADO CON
QUIMICOS.
4. TRANSFUNDIR SANGRE Di(b-)
SOLAMENTE Y NO PREOCUPARSE POR
LOS OTROS ANTGENOS
33

Clulas usadas para absorptionnegative: C, e, Fya, K, M - (Dib+)


Rh

Kell

Duffy

Kidd

MNSs

C c E e K Fya Fyb Jka Jkb M N S

Suero: Anti-Dib

34

Rastreo con Plasma absorbido.

PeG
IgG

Rh

Kell

Duffy Kidd

MNSs

P Lewis Lu

V Cw K

k Kpa Kpb Jsa Jsb Fya Fyb Jka Jkb M N

P1 Lea Leb Lua Lub

R1R1 +

II

R2R2 +

III

rr

35

2+
0
2

Rastreo con Plasma absorbido.cont

Rh

Kell

Duffy

Kpa Kpb

Cw

II

Kidd

MNSs

Lewis

PeG
IgG

Lu

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

P1

Lea

Leb

Lua Lub

36

Clulas Di(b-), e, C negative Vs plasma.

Rh

Kell

Duffy Kidd

MNSs

D C c E e V Cw K k Kpa Kpb Jsa Jsb Fya Fyb Jka Jkb M N S s Dib


I + 0 + + 0

0 + + + 0 + + + 0

LISS IgG

Peg
IgG

37

Sistema Diego
20 antgenos.
Principales: Dia, Dib
Ayudan a la
integridad de la
membrana de los GR.
Cromosoma: 17q2122
Descubierto en Vzla
by Miguel Layrisse.
38

Conseguir sangre compatible (Anti-Dib,e, -C (rara)

Tipiar hermanos
Donaciones autologas
Llamar al centro de donates raros

Tipificar donates con biologia


molecular o microtechnicas

Historial del paciente Emilio G


Paciente

Hombre de 31 aos

Diagnstico

Anemia Deprenoctica

Historia
2 unidades RBC.
Transfusional
Hb/Hct

5.8 g/dL / 21.3 %

Etnicidad

Negro de Samoa

Emilio G. Pruebas Pretransfusionales

Globular
ANTI-A

ANTI-B

ANTID

Srica
B CELLS
A1 CELLS

41

Prueba de rastreo
Code
Phenotype

L
I 3 I
S 7 S
S

Tube
No.

Fy
D

C Cw E

R1R1 BS 300

R2R2 BS 301

rr

BS 304

O O O

O O O

O +

O O

O O O O

s Lua Lub P1 Lea Leb K

O O O

O O

+ O O

+ +

O O

k Kpa Kpb Jsa Jsb Fya

A
G
H

P
E
G

Jka Jkb Xga Doa Cell

O +

+ O

O O

I
0

2+

3+

II

3+

III

0
AC

AC

0
0

Panel revelo un mezcla de anticuerpos

Fenotipo Serolgico

Fe

Anti-

C E c E*

M N S* s

Fya Fyb

Jka Jkb

4+ 0 0 3+

3+ 3+ 0 3+

3+ 1

Paciente

* Reaccion de campo mixto

Hallazgos
Alloanticuerpos mltiples

Anti-E
Anti-S

Recomendacin para la Transfusin en


anemia Depranoctica
Componentes Leuco-reducidos y negativos para
hemoglobina S
Unidades pareadas feno o genotpicamente para:
Antgenos Rh
C, E, c, and e (RH2, RH3, RH4, RH5)
K (KEL1)
Fy(a-) si el paciente es Fy(a-b-)

Genotipo.

Fenotipo y Genotipo

Fenotipo Fy(a-b-)

Genotipo

Duffy Promotor Normal

Mutacin GATA-1

Duffy.

Glicoprotena transmembrane de
paso Mltiple
Chromosoma 1
Posicin 1q23.2
Gene: FY (DARC)
2 Exones distribudos en
1.5kbp de gDNA
FYA y FYB alelos
SNP en exn 2 codifica
aminocido sustituto en el
residuo 42
Gly42 y Asp 42

49

Otras indicaciones..Genotipo

50

% DE IMMUNIZACION
%

Rate

60
50

40
30
20

10
0
Warm auto

Sickle cell
From%

Myelodisplatic Overall hospital

Thalasemia

To %
51

Genotipo en donantes
Identifica genotipos de antgenos negativos
Control inventario
Apoyo a los bancos de sangre

Frecuencias de unidades no communes y fenotipo raro


Unidades para pacientes con clulas falciformes
Apoyo a American Rare Donor Program (ARDP)

Identifica discrepancias
fenotipo genotipo
Impacto de D dbil

Futuro Genotipo
Crecimiento
exponencial.
Limitaciones en
reactivos.
Aparear los antigenosbeneficio al paciente.
Secuencia
Costo
Complemento de la
serologia.
Discrepancias.
53

Objetivos..
Aplicaciones de la
Biologia molecular
en
Immunohematologia
Como usar esta
herramienta en la
resolucion de casos.
Proporcionar sangre
compatible.
Su participacion
54

La Biblia de Immunohematologia.

55

Gracias por su atencin.


-Todos tus
sueos pueden
hacerse realidad
si tienes el coraje
de perseguirlos.
Walt Disney

56