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CINETICA ENZIMATICA

Introduccin
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan reacciones
qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles (Wikipedia , 2015). Las enzimas
son capaces de manipular a otras macromolculas, llamadas sustratos. Un sustrato es capaz
de unirse al sitio activo de una enzima, es decir, se une a una determinada zona de la
enzima, diseada especialmente para unirse a un sustrato. Una vez que esta unin se ha
dado, se produce la catlisis, es decir, la obtencin de productos a partir del sustrato,
gracias a la accin enzimtica (La guia quimica, 2015) .Las enzimas son protenas
complejas que producen un cambio qumico especfico en todas las partes del cuerpo. Por
ejemplo, pueden ayudar a descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo
los pueda usar. La coagulacin de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas.
La cintica enzimtica permite estudiar la velocidad a la que se cataliza una reaccin
variando las condiciones experimentales, revelando as su actividad cataltica (cintica).
Leonor Michaelis y Maud Menten establecieron la relacin matemtica entre la
concentracin de sustrato y la velocidad de las reacciones enzimticas medida por la
cantidad de producto formado (o sustrato consumido) en un tiempo determinado.
La cintica depende adems del sustrato y la enzima de factores como, pH, temperatura,
inhibidores y cofactores
Los factores anteriormente nombrados son de gran importancia a la hora de estudiar la
cintica enzimtica, es por eso que a continuacin se realizara un estudio en el cual se
incluirn diferentes modelos de cintica enzimtica que permitirn encontrar valores como
velocidad inicial de reaccin, velocidad mxima, constante de Michaelis, consumo de
sustrato o produccin de producto, el tipo de inhibidor los modelos sern los siguientes:

Curva de progreso
Curva de Michaelis-Menten
Curva de Lineweaver
Curva de Hanes
Curva de Hofstee
Inhibidores

CURVA DE PROGRESO
1. Determine la rapidez inicial a partir de la curva de progreso

Tabla 1. Datos para curva de progreso

Tiempo
(s)

moles sustrato

moles
producto

0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60

100
90
81
72,9
65,6
59
53,1
47,8
43
38,7
34,9

O
10
19
27,1
34,4
41
46,9
52,2
57
61,3
65,1

Curva de progreso
140
120
100
[A]o[P]

f(x) = 2.06x + 0

moles sustrato

80

moles producto

60

Tangente

40

Linear (Tangente)

20
0
0

10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (s)

Vo=

dP
mol producto
=2,0647
dt
s

CURVA DE MICHAELIS MENTEN


Tabla 2. Datos para curva de MichaelisMenten

[A]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100

Vo
0
28,6
44,4
54,5
61,5
66,7
70,6
73,7
76,2
78,3
80

Curva de Michaelis
100
80
60
Vo

40
20
0
0

20

40

60
[A]

Vmax=80

Vo=

Vmax
=40
2

A ( Vo=40 )=17,21
Km=

VmaxA
8017,21
A=
17,21=17,21
Vo
40

80

100

120

[ A ] min 2Km=34,42
CURVA LINEWEAVER BURK

1/A

1/Vo

0,1000
0,0500
0,0333
0,0250
0,0200
0,0167
0,0143
0,0125
0,0111
0,0100

0,0350
0,0225
0,0183
0,0163
0,0150
0,0142
0,0136
0,0131
0,0128
0,0125

Tabla 3. Datos para curva de LineweaverBurk

Curva de Leneweaver
0.0400
0.0300
1/ V

f(x) = 0.25x + 0.01


R = 1

0.0200
0.0100
0.0000
0.0000 0.0200 0.0400 0.0600 0.0800 0.1000 0.1200
1/A

1
Km
1
=
+
Vo VmA Vm

Km=

Pendiente
0,2498
=
=24,98
Intersecccin
0,01

Vm=

1
1
=
=100
Interseccin 0,01

CURVA DE HANES
Tabla 4. Datos para curva de Hanes

[A]

[A]/Vo

10
20
30
40
50
60
70
80
90
100

0,3497
0,4505
0,5505
0,6504
0,7496
0,8499
0,9498
1,0499
1,1494
1,2500

CURVA DE HANES
1.4000
1.2000

f(x) = 0.01x + 0.25


R = 1

1.0000
0.8000
[A]/Vo 0.6000
0.4000
0.2000
0.0000
0

20

40

60
[A]

80

100

120

A
1
Km
=
A+
Vo Vm
Vm
Km=

interseccion 0,2502
=
=25,01
puntode corte
0,01

Vm=

1
1
=
=100
punto de corte 0,01

CURVA DE HOFSTEE
Tabla 5. Datos para curva de Hofstee

Vo/[A]

Vo

2,860
2,220
1,817
1,538
1,334
1,177
1,053
0,953
0,870
0,800

28,6
44,4
54,5
61,5
66,7
70,6
73,7
76,2
78,3
80

Curva de Hofstee
100
80

f(x) = - 25.01x + 100.01


R = 1

60
Vo

40
20
0
0.500

1.000

1.500

2.000

2.500

3.000

Vo/[A]

Vo=Km

Vo
+Vm
A

Km=puntode corte=(25,007 )=25,007


Vm=interseccion=100,01

. EISENTHAL Y CORNISH-BOWDEN

CURVA DE EISENTHAL Y CORNISH-BOWDEN

Vo

90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

-100
-80
-60
-40
-20
0
20
40
60
80
100
-110
-90
-70
-50
-30
-10
10
30
50
70
90

[A]

Vm
Km

INHIBIDORES

100
26

Vo

V10

0,0

0,0

V2
0
0,0

V3
0
0,0

1/A

1/Vo

1/V10

1/V30

1/V20

0,000
0
1,000
0
0,500
0
0,333
3
0,250
0
0,200
0
0,166
7
0,142
9
0,125
0
0,1111

0,000000
0
0,010000
0
0,007501
9
0,006666
7
0,006250
0
0,005998
8
0,005834
3
0,005714
3
0,005624
3
0,005555
6
0,005500
6

0,00000
0
0,01499
3
0,01124
9
0,01000
0
0,00937
2
0,00900
1
0,00874
9
0,00856
9
0,00843
9
0,00833
3
0,00825
1

0,00000
0
0,02500
0
0,01876
2
0,01666
7
0,01562
5
0,01499
3
0,01457
7
0,01428
6
0,01406
5
0,01388
9
0,01385
0

0,000000
0
0,020000
0
0,014992
5
0,013333
3
0,012500
0
0,012004
8
0,011668
6
0,011428
6
0,011248
6
0,0111111

Tabla 6. Datos para curva de Inhibidores

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

100, 66,7 50, 40,


0
0
0
133, 88,9 66, 53,
3
7
3
150, 100, 75, 60,
0
0
0
0
160, 106, 80, 64,
0
7
0
0
166, 111, 83, 66,
7
1
3
7
171, 114, 85, 68,
4
3
7
6
175, 116, 87, 70,
0
7
5
0
177, 118, 88, 71,
8
5
9
1
180, 120, 90, 72,
0
0
0
0
181, 121, 90, 72, 0,100
8
2
9
2
0
Curva de Lineweaver sin inhibidores

0,011001
1

Curva de Lineweaver
0.0120000
0.0100000
0.0080000
1/Vo

f(x) = 0.01x + 0
R = 1

0.0060000
0.0040000
0.0020000
0.0000000
0.0000

0.2000

0.4000

0.6000
1/A

1
Km
1
=
+
Vo VmA Vm
Km=

Pendiente
0,005
=
=1
Intersecccin 0,005

Vm=

1
1
=
=200
Interseccin 0,005

CURVAS CON INHIBIDOR COMPETITIVO

0.8000

1.0000

1.2000

INHIBIDOR NO COMPETITIVO
0.030000
0.025000
0.020000
1/Vo

0.015000
0.010000

f(x) = 0.01x + 0.01


R = 1
f(x) = 0.01x + 0.01
R = 1
f(x) = 0.01x + 0.01
R = 1

1/V10
Linear (1/V10)
1/V30
Linear (1/V30)
1/V20
Linear (1/V20)

0.005000
0.000000
0.00

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

1.20

1/A

I
0
10
20
30

1
=
Vo

Inhibidor no competitivo
pendiente
interseccin
0,005
0,005
0,0075
0,0075
0,01
0,01
0,0125
0,0125

[I ]
Ka
1+
1
V max
K iS

[A]

1
V max

1+

[I ]
K ii

Ecuacin para inhibidor no competitivo

KISS
0.02
f(x) = 0x + 0.01
R = 1

0.01
Pendiente

pendiente
Linear (pendiente)

0.01
0
0

10

15

20

25

30

35

[I]

KII
0.02
f(x) = 0x + 0.01
R = 1

0.01
Interseccion

pendiente
Linear (pendiente)

0.01
0
0

10

15

20

25

30

[I]

Kii = Kis = intercepto con el eje X

0=0.0003 x +0.005
x= -16.66667
Kii = Kis = 16.66667

Conclusiones

35

El anlisis matemtico en la cintica enzimtica es de gran importancia, gracias a


este anlisis es posible obtener datos precisos de una enzima especifica debido a que
existen miles de enzimas y todas presentan diferente comportamiento, este estudio o
anlisis matemtico permite establecer cul es la enzima correcta a utilizar para un
procesos en especfico.

La curva de progreso permite analizar el consumo de sustrato y la produccin de


producto, para asi poder encontrar la velocidad inicial por medio de la recta
tangente

La curva de Michaelis- Menten no es un modelo muy exacto pues a la hora de


comparar con los modelos de Lineawer-Burk, Hanes y Hofstee se puede apreciar
que hay una diferencia significativa en los valores de Km y Vmax.

Es de gran importancia encontrar el tipo de inhibidor de una cintica enzimtica


para que a partir de este se establezcan los valores de la constante de inhibicin (Kii
y Kis), y asi poder encontrar las concentraciones de dicho inhibidor, importantes
para un proceso en especifico

Bibliografa
La guia quimica. (10 de 11 de 2015). Obtenido de enzimas:
http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/cinetica-enzimatica
Wikipedia . (10 de 11 de 2015). Obtenido de Enzimas:
https://es.wikipedia.org/wiki/Enzima