Está en la página 1de 30

INTRODUCCIN

Todas las clulas contienen la informacin necesaria para realizar distintas reacciones
qumicas mediante las cuales las clulas crecen, obtienen energa y sintetizan sus
componentes. Est informacin est almacenada en el material gentico, el cual puede
copiarse con exactitud para transmitir dicha informacin a las clulas hijas. Sin embargo
estas instrucciones pueden ser modificadas levemente, es por eso que hay variaciones
individuales y un individuo no es exactamente igual a otro de su misma especie (distinto
color de ojos, piel, etc.). De este modo, podemos decir que el material gentico es lo
suficientemente maleable como para hacer posible la evolucin.
La informacin gentica o genoma, est contenida en unas molculas llamadas cidos
nucleicos. Existen dos tipos de cidos nucleicos: ADN y ARN. El ADN guarda la
informacin gentica en todos los organismos celulares, el ARN es necesario para que
se exprese la informacin contenida en el ADN; en los virus podemos encontrar tanto
ADN como ARN conteniendo la informacin (uno u otro nunca ambos).

OBJETIVOS

Con el presente trabajo se quiere llegar a los presentes lectores a entender la


composicin bioqumica de los cidos nuclecos, llegando a detallarles ante cada
aspecto con su respectivo dibujo as se podr tener mas que un anlisis terico un
anlisis grafico el cual es nuestro objetivo, por que se desea que se llegue a saber
ms que un concepto tener una idea de lo que habla identificando cada punto en su
respectivo lugar.

cidos nucleicos
Definicin
Los cidos nucleicos son polinucletidos, es decir, polmeros lineales resultantes de la unin mediante
enlace fosfodister de un nmero variable de unidades monomricas bsicas, denominadas
nucletidos. Un nucletido est formado por tres componentes; una pentosa (la ribosa o la
desoxirribosa), un compuesto heterocclico nitrogenado (base nitrogenada purina o pirimidina) que
junto con la pentosa forma un nuclesido, y una molcula de cido fosfrico. Los nucletidos tienen

papeles muy variados dentro del metabolismo celular. Son la moneda energtica en el metabolismo
(ej. ATP), son mensajeros qumicos secundarios en la respuesta celular a los estmulos inducidos por
hormonas o agentes externos (ej.: AMPc), constituyen una serie de importantes cofactores
enzimticos y, por supuesto, son los constituyentes de los cidos nucleicos: ribonucleicos (ARN) y
Desoxirribonucleicos (ADN). Los cidos nucleicos son macromolculas polimricas formadas por
subunidades llamadas nucletidos.

Composicin
Los cidos nucleicos estn formados por la condensacin de unidades bsicas estructurales llamadas:
NUCLEOTIDOS
Unidos por enlace fosfodiester. Un nucletido est constituido por :
Bases pirimidnicas, derivadas de la pirimidinas. Son la citosina (C), que se encuentra tanto en el
ADN como en el ARN; la timina (T), que se presenta slo en el ADN; y el uracilo (U), componente
del ARN.
Bases pricas, derivadas de la purina. Las ms importantes
la guanina (G). Las dos en ambos tipos de cidos nucleicos.

son

la adenina (A) y

Pentosa, ribosa en el ARN y desoxirribosa en el ADN.


cido ortofosfrico (H3 PO4) se encuentran en forma de ion fosfato.

Nuclesido
La unin de una pentosa con una base nitrogenada forma un nuclesido. El enlace se
forma entre el carbono anomrico del azcar y uno de los nitrgenos de la base
nitrogenada. En la unin se forma una molcula de agua. Este enlace recibe el nombre de
enlace N-glucosdico. Si la pentosa es una ribosa, tenemos un ribonuclesido. Estos tienen
como bases nitrogenadas la adenina, guanina, citosina y uracilo. Si la pentosa es un
desoxirribosa, tenemos un desoxirribonuclesido. Estos tienen como bases nitrogenadas la
adenina, citosina, guanina y timina. Se nombra aadiendo la terminacin -osina, si derivan
de una base prica, o -idina, se sta es pirimidnica, al nombre de la base que lo forma:
adenosina, guanosina, citidina, timidina, etc. Si la pentosa es la desoxirribosa se antepone
el prefijo desoxi-; por ejemplo, desoxiaguanosina, desoxicitidina, etc.
Los nucletidos se forma por la unin de un nuclesido con el cido fosfrico, esta se
produce mediante la esterificacin del azcar por el cido fosfrico. Es una
unin fosfoster entre un OH del cido fosfrico y el OH situado en el carbono 5 del azcar,
con formacin de una molcula de agua. Segn el azcar sea la ribosa o la desoxirribosa,
tendremos ribonucletidos odesoxirribonucletidos.
La nomenclatura de los nucletidos es compleja. Los nucletidos se nombran como el
nuclesido del que proceden eliminando la a final y aadiendo la terminacin monofosfato, por
ejemplo, adenosin monofosfato (AMP). Llevan el prefijo desoxi-, en el caso de estar formadas por la
pentosa desoxirribosa. (dAMP)

PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS


Las principales propiedades fsico-qumicas de los cidos nucleicos que vamos a considerar son las siguientes:

DENSIDAD DE LOS CIDOS NUCLEICOS


Densidad: existe una relacin lineal entre el contenido en G+C y la densidad del ADN determinada en
un gradiente de densidad. A mayor contenido en G+C mayor densidad posee el ADN.
Meselson y col. (1957) desarrollaron una tcnica de centrifugacin en gradiente de densidad. Cuando
se centrifuga a alta velocidad un solucin densa (saturada) de un soluto de bajo peso molecular (ClCs
7,7 M, sucrosa, etc.) se produce un equilibrio entre dos fuerzas opuestas, la de difusin del soluto y la
fuerza de sedimentacin, como consecuencia se produce un gradiente de densidad que aumenta en
la direccin de la fuerza centrifuga (aumenta a medida que avanzamos hacia el fondo del tubo de
centrifuga). Si aadimos al centrifugar una molcula de ADN, est migrar hacia el fondo del tubo
hasta llegar al punto en que la densidad del soluto de bajo peso molecular (la densidad del ClCs)
coincide con la densidad del ADN centrifugado (densidad de flotacin). Posteriormente, es posible
aislar las molculas de ADN de diferente densidad practicando un orificio en el fondo del tubo y
sacando varias fracciones diferentes. Tambin es posible pinchar el tubo con una jeringa, justo en la
posicin de la banda y extraer el ADN contenido de esa zona del tubo.

Centrifugacin en gradiente de CsCl

Basndose en mltiples estudios de la densidad de los ADNs de diferentes organismos y de su


composicin en bases nitrogenadas, se ha establecido una frmula emprica que relaciona la
densidad de flotacin () con el contenido en G+C expresado en moles por ciento. Est frmula es la
siguiente: = 1,660 + 0,00098(G+C).

DESNATURALIZACIN: TEMPERATURA DE FUSIN


Desnaturalizacin: la proporcin A+T/C+G est relacionada en primer lugar con la estabilidad de la
molcula de ADN de doble hlice. Cuanto mayor es el contenido en G+C de una molcula, mayor
cantidad de pares G-C presentar, como consecuencia tendr una mayor cantidad de triples enlaces
y, por consiguiente, ser necesario suministrar una mayor cantidad de energa a esa doble hlice para
separar sus dos hebras (desnaturalizacin o fusin del ADN). Cuanto mayor es el contenido en G+C
mayor cantidad de calor que hay que suministrar a un ADN de doble hlice para desnaturalizarlo. La
temperatura de fusin (Tm) necesaria para desnaturalizar la mitad del ADN de una mezcla (punto
medio de la reaccin ADN doble hlice ADN hlice sencilla) esta directamente relacionada con el
contenido en G+C, a mayor contenido en G+C mayor temperatura de fusin (Tm).
ABSORBANCIA A 260 nm
Absorbancia a 2.600 : El estado fsico de los cidos nucleicos est relacionado con su capacidad
de absorcin de la luz ultravioleta (UV) a 2.600 . El menor grado de absorcin se produce en estado
de doble hlice, la absorcin aumenta cuando se produce la desnaturalizacin pasando a estado de
hlice sencilla (efecto hipercrmico, aumento de la absorbancia) y, por ltimo, si degradamos este
ADN de hlice sencilla a nivel de nucletidos libres, de nuevo aumenta la absorbancia.

Esquema efecto hipercrmico


Por tanto, la absorbancia a 2.600 se puede utilizar como una medida del estado fsico de la
molcula de ADN. Las curvas de fusin tienen forma de S observndose un aumento brusco de la
absorbancia al llegar a una temperatura determinada, la temperatura de fusin.
CINTICA DE RENATURALIZACIN: CURVAS CoT
Velocidad de renaturalizacin: la velocidad de renaturalizacin del ADN de un organismo est
relacionada con su complejidad. La complejidad se define como la suma del nmero de nucleotidos
que tiene cada tipo de secuencia sin tener en cuenta el nmero de veces que esta repetida. El ADN de
los virus y las bacterias en su mayora slo tiene secuencias que estn una sola vez en el genoma
(secuencias nicas). Sin embargo, los organismo ms complejos, como los eucariontes, presentan
distintos tipos de secuencias en su genoma. Los eucariontes tienen secuencias nicas (SU),
secuencias de bajo nmero de copias (SBNC, 2-10 copias), secuencias repetidas (SR, alrededor de
102 copias) y altamente repetidas (SAR, 103 a 106 copias).
Tipo de Secuencia

N de repeticiones

N de nucletidos

A (SU)

5.700

B (SU)

7.530

C (SBNC)

3.720

D (SBNC)

4.350

E (SR)

200

500

F (SAR)

10.000

300

G (SAR)

1.000.000

200

Complejidad

22.300

Si imaginamos un organismo eucarionte con los tipos de secuencias indicados en la tabla anterior, su
complejidad sera la suma del nmero de nucletidos de cada tipo de secuencia (22.300) sin tener en
cuenta el nmero de veces que est repetida cada una de ellas.
No es difcil imaginar que la velocidad de renaturalizacin del ADN (paso de dos hlices sencillas a
una doble hlice) este relacionada con el nmero de veces que esta repetida una determinada
secuencia.

Las curvas de renaturalizacin o curvas Cot, de organismos que carecen de secuencias repetidas
como virus y bacterias, tienen forma de S, tienen un slo punto de inflexin o punto medio de la
reaccin. Todas las secuencias son nicas y tienen la misma probabilidad de encontrar a su
complementaria para formar la doble hlice.

Curvas Cot de virus y bacterias

Curvas Cot de un eucarionte

Las curvas Cot de organismos eucariontes con diferentes tipos de secuencias, poseen varios puntos
de inflexin. Cada uno de ellos correspondiente a un tipo de secuencias (nicas, moderadamente
repetidas, y altamente repetidas).
Como en el caso de las curvas de fusin, tambin se utiliza como medida el punto medio de la
reaccin de renaturalizacin, es decir, el Cot o tiempo al que se ha reasociado la mitad del ADN. El
Cot es directamente proporcional a la complejidad del ADN del organismo. Valores de Cot bajos
(10-4 a 10-1) corresponden a secuencias altamente repetidas, valores de Cot comprendidos entre 10
y 102 corresponden a secuencias moderadamente repetidas y las secuencias nicas o de bajo nmero
de copias dan lugar a valores de Cot altos (mayores de 10 3) .

HIBRIDACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS


Las tcnicas de desnaturalizacin y posterior Re naturalizacin se utilizan para conseguir la
hibridacin de cidos nucleicos, es decir, una vez separadas las dos hebras del ADN doble hlice, es
posible volver a formar una doble hlice con una hebra de ADN que sea complementaria (hibridacin
de ADN con ADN) o volver a formar una doble hlice con un segmento de ARN que contenga la
secuencia complementaria (hibridacin de ADN con ARN).
Endonucleasas de restriccin
Las tcnicas de hibridacin (desnaturalizacin y posterior renaturalizacin) permiten, por ejemplo,
identificar el gen que ha dado lugar a un determinado ARN-mensajero. Si se asla un mensajero
determinado en una clula, es posible hibridar este ARN con el ADN de la clula previamente
fragmentado mediante el uso de endonucleasas de restriccin.
Las endonucleasas de restriccin de tipo II son enzimas que reconocen secuencias cortas de ADN (de
4 a 6 pares de bases) de tipo palindrmico y cortan por el interior de la secuencia diana a la misma
altura en las dos hlices de ADN (corte simtrico) o a distinto nivel en cada hlice (corte asimtrico).

Eco RI

Hae III

Dichas endonucleasas de restriccin fueron descubiertas por Werner Arber, Hamilton O. Smith y
Daniel Nathans en la bacteria E.coli , trabajos por los que recibieron el premio Nobel. Estas enzimas
forman parte del sistema de defensa (sistema de modificacin-restriccin) de las bacterias frente a la
entrada de ADN exgeno en su interior. Existen cientos de endonucleasas diferentes que reconocen
distintas secuencias cortas de tipo palndrmico. En la siguiente tabla se indican algunas de las
endonucleasas ms frecuentes:

Endonucleasa de
restriccin

Bacteria de la que procede

Secuencia que reconoce (5' 3')


y lugar de corte ()

Eco RI

Escherichia coli

5' GAATTC 3' (asimtrico)

Eco RII

Escherichia coli

5' CCTGG 3' (asimtrico)

Hae III

Haemophilus aegyptus

5' GGCC 3' (simtrico)

Hin dII

Haemophilus influenzae

5' GTPiPu AC 3' (simtrico)

Hin dIII

Haemophilus influenzae

5' AAGCTT 3' (asimtrico)

Hpa I

Haemophilus parainfluenzae

5' GTTAAC 3' (simtrico)

Hpa II

Haemophilus parainfluenzae

5' CCGG 3' (asimtrico)

Ava I

Anabaena variabilis

5' CGPuPiCG 3' (simtrico)

La utilizacin de diferentes endonucleasas y la separacin por tamaos de los fragmentos producidos


mediante electroforesis permite construir lo que se denomina Mapas de restriccin.
Cuando el ADN de un organismo eucarionte se fragmenta con una endonucleasa de restriccin, se
producen cientos de miles o incluso hasta millones de fragmentos. Dichos fragmentos se separan por
tamaos mediante electroforesis en geles de agarosa, una vez se parados por tamaos se transfieren
los fragmentos a una membrana de nylon en condiciones desnaturalizantes y de forma que
permanezcan en la misma posicin. Los fragmentos desnaturalizados y pegados a la membrana se
pueden renaturalizar o hibridar utilizando una segmento de ADN o de ARN (habitualmente
denominado sonda) marcado radiactivamente. Dicha sonda, hibridar solamente con aquellos
fragmentos de ADN que contengan la secuencia complementaria. La tcnica que permite transferir los
fragmentos de ADN desnaturalizados a una membrana de nylon y posteriormente hibridar con una
sonda de ADN marcada se denomina Tcnica Southern (hibridacin ADN-ADN), cuando la hibridacin
se realiza con una sonda de ARN marcada se denomina Northern (hibridacin ADN-ARN).
El empleo combinado de endonucleasas de restriccin y de diferentes sondas de ADN de secuencia
nica marcadas permite obtener Polimorfismos para Longitudes de Fragmentos de Restriccin
(RFLPs), muy utilizados en la construccin de mapas de ligamiento.

propiedades biolgica de los cidos nucleicos


Del ADN: Almacenar la informacin gentica, codificada en una secuencia de nucletidos y
facilitar su transmisin de una generacin a otra.

Del ARNm: Llevar la informacin gentica codificada (obtenida por transcripcin del ADN)
desde el ncleo hasta los ribosomas donde es traducida en una secuencia de AA.
Del ARNr: Asociado a protenas constituye los ribosomas y su funcin est relacionada con
la traslacin de stos a lolargo del ARNm durante la traduccin (sntesis de proteica).
Del ARNt: posee un triple papel:
-captar AA activados del citoplasma (forma los 'complejos de transferencia' AA-ARTt).
-transferir tales AA a los ribosomas en sntesis.
-colocarlos en el lugar que les corresponde en la protena de acuerdo con la informacin
codificada en el ARNm (por complementariedad entre el triplete anticodn del ARNt y el
triplete codn del ARNm)

En el ADN es la de contener la informacin hereditaria.


Almacenamiento, replicacin, recombinacin, y transmisin de la informacin gentica
( son las molculas que determinan lo que es y hace cada una de las clulas vivas).

Clasificacin

ADN
El ADN, cido desoxirribonucleico, o en ingls DNA, se define como un biopolmero (compuesto
qumico formado por unidades estructurales que se repiten) que constituye el material gentico de las
clulas. Est formado por unidades que estn ordenadas segn una secuencia y es ah donde se
encuentra la informacin para la sntesis de protenas. Es el responsable del cdigo gentico, que
determina en gran medida las caractersticas de los seres vivos al nacer.
La molcula de ADN est formada por dos cadenas formada por compuestos qumicos llamados
nucletidos. Existen cuatro tipos de nucletidos diferenciados por sus bases nitrogenadas; adenina,
timina, citosina y guanina. Las cadenas forman una especie de cadena retorcida, lo que permite que el
ADN se pueda desenrollar y hacer una lectura de ste. Cada nucletido posee una afinidad qumica
con aquel que se encuentra en paralelo en la otra cadena; adenina tiene afinidad con la timina, y la
citosina con la guanina. Esta afinidad qumica se ve empricamente con la unin de un enlace de
hidrgeno. Los nucletidos estn formados por un cido fosfrico, una desoxirribosa y una base
nitrogenada.
La estructura del ADN es tridimensional, por lo tanto posee tres niveles de distintas caractersticas:

Estructura primaria:
Cadena de nucletidos encadenados seguidos por una secuencia. Aqu se encuentra la
informacin gentica de la clula
Estructura secundaria:
Doble hlice. Mecanismo de duplicacin del ADN. Complementos en las bases nitrogenadas.
Estructura terciaria:
Almacenamiento del ADN en un volumen reducido. Esto vara dependiendo la clula si es
procarionte (disperso en el citoplasma) o eucarionte (almacenado complejamente en el ncleo).

El ADN posee diversas propiedades y funciones de las cuales destaca: El control de la actividad
celular. Lleva la informacin gentica de la clula la que determina las caractersticas de sta y que
puedan ser transmitidas en el proceso de divisin celular. Puede duplicarse en la divisin celular,

formando clulas idnticas a la original. Tiene la capacidad de mutacin (alteracin en la informacin


gentica) entendido por un proceso evolutivo.
La secuencia de las bases nitrogenadas del ADN cumplen un papel fundamental en lo que se llama la
sntesis de protenas. La secuencia de nucletidos es transmitida a un ARN mensajero (ARNm) en
forma de codones (tripletes que contienen el cdigo gentico). El ARNm acta sobre las molculas del
ARN de transferencia (ARNt) que contiene a los anticodones (tripletes complementarios), copiando el
material gentico. A cada anticodn le corresponde un aminocido (unidad bsica de la protena), de
esta manera la clula sabr cmo ordenar la secuencia de aminocido para formar la protena que le
sea til. En consecuencia, la secuencia de las bases nitrogenadas es una receta que la clula debe
seguir para formar la protena necesaria.
En la actualidad, para la biotecnologa el ADN cumple un papel fundamental. Por el conocimiento de
su estructura, funciones y propiedades se ha llevado a cabo el fenmeno de la clonacin. La famosa
oveja Dolly fue el primer experimento, en el que se extrajo el material gentico de una oveja y se
almacen en la clula de otra. De esta manera la oveja obtenida, Dolly, fue exactamente igual a la que
le extrajeron el material gentico (un ejemplo prctico que demuestra como el ADN porta lo que
llamamos el cdigo gentico.

ESTRUCTURA
Existen cuatro bases: dos pricas denominadas adenina (A) y guanina (G) y dos pirimidnicas

denominadas citosina (C) y timina (T). Para formar el ADN, se unen largas cadenas de estas bases
mediante molculas de fosfato y azcar. La estructura de doble hlice (ver figura) del ADN no fue
descubierta hasta 1953 por James Watson y Francis Crick (el artculo A Structure for Deoxyribose
Nucleic Acid fue publicado el 25 de abril, 1953) en Nature), que dejaba claro el modo en que el ADN
se poda "desenrollar" para que fuera posible su lectura o copia. Una larga hebra de cido
nucleico est enrollada alrededor de otra hebra formando un par entrelazado.Dicha hlice mide 3,4 nm
de paso de rosca y 2,37 nm de dimetro, y est formada , en cada vuelta, por 10,4 pares de
nucletidos enfrentados entre si por sus bases nitrogenadas. El rasgo fundamental es que las bases
de nucletidos de una hebra "casan" con la especie de nucletidos de la otra, en el sentido de que la
adenina siempre casa con la timina (lo que se denomina A....T) y la guanina siempre casa con la
citosina (G...C). Este emparejamiento corresponde a la observacin ya realizada por Chargaff (19052002) de que en todas las muestras la cantidad de adenina es siempre la misma que la timina, como

ocurre con la guanina y la citosina, as se aseguran cantidades iguales. Asi una pequea purina
(adenina y guanina) est siempre emparejada con una mayor pirimidina (timina y citosina), siendo de
este modo uniforme la doble hlice (no hay "bultos" ni "pellizcos"). La cantidad de purina (A+G) es
siempre igual a la cantidad de primidina (T+C). Se estima que el genoma humano tiene alrededor de
3.000 millones de pares de bases.Dos unidades de medida muy utilizdas son la kilobase (kb) que
equivale a 1.000 pares de bases, y la megabase (Mb) que equivale a un milln de pares de bases
El modelo de doble hlice permite explicar las propiedades que se esperan del ADN:

Capacidad para contener informacin:lenguaje codificado en la secuencia de pares nucletidos


Capacidad de replicacin: dar origen a dos copias iguales
Capacidad de mutacin: justificando los cambios evolutivos

Enlace de hidrgeno
La adhesin de las dos hebras de cido nuclico se debe a un tipo especial de unin qumica
conocido como puente de hidrgeno. Los puentes de hidrgeno son uniones ms dbiles que los
tpicos enlaces qumicos, esto significa que las dos hebras de la hlice pueden separarse con
facilidad, quedando intactas.
A--T

C---G

Papel de la secuencia
En un gen, la secuencia de los nucletidos a lo largo de la cadena de ADN define una protena que un
organismo es capaz de sintetizar o "expresar" en uno o varios momentos de su vida, usando la
informacin de dicha secuencia. La relacin entre la secuencia de nucletidos y la secuencia
de aminocidos de la protena es determinada por un mecanismo celular de transcripcin, conocido de
forma general como cdigo gentico.
En muchas especies de organismos, slo una pequea fraccin del total de la secuencia
del genoma codifica protenas. La funcin del resto es especulativa.
La secuencia tambin determina la susceptibilidad del ADN para ser cortado por restriccin
enzimtica, la quintaesencia de la ingeniera gentica. La posicin en la que es secuenciada en un
genoma individual determina la huella de ADN. (por completar)
EL ADN como almacn de informacin
En realidad se puede considerar as, como un almacn de informacin (mensaje) que se trasmite de
generacin en generacin, conteniendo toda la informacin necesaria para construir y sostener el
organismo en el que habita.Se puede considerar que las obreras de este mecanismo son
las protenas. Estas pueden ser estructurales como las protenas de los msculos, cartlagos, pelo,
etc., o bienfuncionales como las de la hemoglobina o las innumerables enzimas del organismo. La
funcin principal de la herencia es la especificacin de las protenas, siendo el ADN una especie
de plano o receta para nuestras protenas. Unas veces la modificacin del ADN que provoca
disfuncin protica lo llamamos enfermedad, otras veces, en sentido beneficioso, dar lugar a lo que
conocemos como evolucin.
Las alrededor de treinta mil protenas diferentes en el cuerpo humano estn hechas de veinte
aminocidos diferentes, y una molcula de ADN debe especificar la secuencia en que se unan dichos
aminocidos,

El ADN en el genoma de un organismo podra dividirse conceptualmente en dos, el que codifica las
protenas y el que no codifica. En el proceso de elaborar una protena, el ADN de un gen se lee y se
transcribe a ARN. Este ARN sirve como mensajero entre el ADN y la maquinaria que elaborar las
protenas y por eso recibe el nombre de ARN mensajero. El ARN mensajero instruye a la maquinaria
que elabora las protenas, para que ensamble los aminocidos en el orden preciso para armar la
protena.
El dogma central de la gentica es que el flujo de actividad y de informacin es:
ADN ARN protena
Slo muy raras veces la informacin fluye del ARN al ADN.
ADN LIGASA
ADN ligasa es una enzima que forma enlaces covalentes entre el extremo 5 de una cadena
polinucleotdica y el extremo 3 de otra cadena polinucleotdica. Tambin se denomina enzima de
unin de polinucletidos.
La reparacin por escisin puede ser realizada por 3 enzimas: la correndonucleasa U.V., iniciadora del
proceso, la ADN polimerasa I, que elimina y reconstruye el fragmento de ADN, y la ADN ligasa, que
realzia la unin de los fragmentos nuevos y antiguos.
ADN POLIMERASA
ADN polimerasa es una enzima que cataliza la sntesis de ADN a partir de desoxirribonucletidos y de
una molcula de ADN plantilla o molde.
Tras la accin de la ADN polimerasa I y una vez que se han eliminado y aadido alrededor de unas
10 bases, interviene la enzima ADN ligasa que une los extremos libres del fragmento recin formado
con el resto de la cadena, recuperando as el ADN su estructura normal
ADN FSIL
El estudio del ADN fsil, se usa en paleogentica, utiliza la reaccin en cadena de la polimerasa PCR,
permitiendo estudiar registros moleculares de ADN que sean lo suficientemente antiguos, pudiendo
realizar secuenciaciones y estudiar su composicin. Los restos de ADN del fsil ms antiguo que se
conoce (que han podido ser recuperados y ledos) pertenecen a losneanderthales no sobrepasando
los 50.000 aos.
Uno de sus usos ha sido los anlisis comparativos de ADN que concluyen que en nuestro genoma no
hay herencia neandertal
ADN GIRASA
Una de las ADN topoisomerasas que acta durante la replicacin del ADN para reducir la tensin
molecular causada por el superenrollamiento. La ADN girasa produce cortes de doble cadena y
despus los une.
La ADN girasa, como topoisomerasa, juega un papel muy importante en la modulacin del estado
topolgico del ADN, regulando la estructura superhelicoidal del mismo.
ADN MITOCONDRIAL

En las clulas eucariotas la mayor parte del cdigo gentico est dentro del ncleo celular, pero
tambin hay orgnulos dentro del citoplasma que contienen ADN, que es llamado mADN o ADN
mitocondrial para diferenciarlo del ADN nuclear.
El cdigo con el que las mitocondrias representan las protenas es parecido al nuclear, pero no es
igual, hay algunas diferencias.
ADN RECOMBINANTE
ADN recombinante : variedad de tcnicas que los bilogos moleculares utilizan para manipular las
molculas de ADN. El proceso consiste en tomar una molcula de ADN de un organismo, sea
un virus, planta o una bacteria y llevarla al laboratorio para manipularla y ponerla de nuevo dentro de
otro organismo. Esto se puede hacer para estudiar la expresin de ungen e incluso en algunos casos,
para tratar una enfermedad gentica humana.

Caractersticas e importancia de la replicacin del ADN


Introduccin
El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar
una copia idntica). De esta manera de una molcula de ADN nica, se obtienen dos o ms "clones"
de la primera. Esta duplicacin del material gentico se produce de acuerdo con un mecanismo
semiconservador, lo que indica que las dos cadenas complementarias del ADN original, al separarse,
sirven de molde cada una para la sntesis de una nueva cadena complementaria de la cadena molde,
de forma que cada nueva doble hlice contiene una de las cadenas del ADN original. Gracias a la
complementariedad entre las bases que forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN
tiene la importante propiedad de reproducirse idnticamente, lo que permite que la informacin
gentica se transmita de una clula madre a las clulas hijas y es la base de la herencia del material
gentico.
La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes de hidrgeno entre las
bases complementarias liberndose dos hebras y la ADN polimerasa sintetiza la mitad
complementaria aadiendo nucletidos que se encuentran dispersos en el ncleo. De esta forma,
cada nueva molcula es idntica a la molcula de ADN inicial.
La replicacin empieza en puntos determinados: los orgenes de replicacin. Las protenas iniciadoras
reconocen secuencias de nucletidos especficas en esos puntos y facilitan la fijacin de otras
protenas que permitirn la separacin de las dos hebras de ADN formndose una horquilla de
replicacin. Un gran nmero de enzimas y protenas intervienen en el mecanismo molecular de la
replicacin, formando el llamado complejo de replicacin o replisoma. Estas protenas y enzimas son
homlogas en eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias
Modo de operacin
En cada horquilla de replicacin, la ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan dos nuevas cadenas
de ADN que son complementarias respecto a las 2 cadenas originales. Durante este proceso, la ADN
polimerasa reconoce una base nucleotdica no apareada de la cadena original y la combina con un
nucletido libre que tiene la base complementaria correcta. Luego, la ADN polimerasa cataliza la
formacin de nuevos enlaces covalentes que ligan el fosfato del nucletido libre entrante con el azcar
del nucletido previamente agregado en la cadena hija en crecimiento. De esta forma, la ADN
polimerasa sintetiza el esqueleto de azcar-fosfato de la cadena hija.

Las ADN polimerasas tambin realizan otras funciones durante el proceso de replicacin. Adems de
participar en la elongacin, desempean una funcin correctora y reparadora gracias a su actividad
exonucleasa 3', que les confiere la capacidad de degradar el ADN partiendo de un extremo de ste.
Es importante que existan estos mecanismos de correccin ya que de lo contrario los errores
producidos durante la copia del ADN daran lugar a mutaciones.

Punto de origen
Un origen de replicacin es el lugar del cromosoma donde se inicia la replicacin de la cadena de
ADN. Se trata, por lo tanto, de una determinada secuencia de nucletidos a partir de la cual se
desarrolla una horquilla de replicacin que dar lugar a las dos cadenas idnticas de ADN resultantes.
En los organismos procariotas suele encontrarse un nico origen de replicacin en su ADN, mientras
que en los eucariotas se encuentran normalmente mltiples orgenes en cada cromosoma, lo que
permite una velocidad razonable de replicacin de las largas cadenas de ADN de estos organismos.
Esta multiplicidad de orgenes en una cadena conforma las denominadas burbujas de replicacin.

Caractersticas generales

En cada una de las molculas hijas se conserva una de las cadenas originales, y por eso se dice
que la replicacin del ADN es semiconservadora. Hasta que finalmente se pudo demostrar que la
replicacin es semiconservadora, se consideraron tres posibles modelos para el mecanismo de la
replicacin

Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las molculas hijas se conserva una de
las cadenas originales.

Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva, copia de la original.

Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de la cadena antigua y


fragmentos de la nueva.
Importancia de la replicacin del ADN
La importancia de la Replicacin del ADN es originar molculas de ADN hijas cada una de ellas
posee la misma informacin biolgica(fenotipo-genotipo) otorgada por el ADN progenitor para
Transmitir toda la informacin biolgica desde los progenitores hacia la descendencia. Como el
ADN se replica de manera Semiconservativa, en las molculas de ADN hijas habr sismpre una
cadena vieja y otra nueva de Nucletidos que contienen toda la informacin biolgica del
organismo.

Caracterstica e importancia de la transcripcin del ADN


Introduccin:
La transcripcin del ADN es el primer proceso de la expresin gnica, mediante el cul se
transfiere la informacin contenida en la secuencia del ADN hacia la secuencia de protena
utilizando diversos ARN como intermediarios. Durante la transcripcin gentica, las secuencias de
ADN son copiadas a ARN mediante una enzima llamada ARN polimerasa que sintetiza un ARN
mensajero que mantiene la informacin de la secuencia del ADN. De esta manera, la transcripcin
del ADN tambin podra llamarse sntesis del ARN mensajero.

Etapas de la transcripcin
Pre iniciacin
Al contrario de la replicacin de ADN, durante el inicio de la transcripcin no se requiere la presencia
de un cebador para sintetizar la nueva cadena, de ARN en este caso. Antes del inicio de la
transcripcin se necesitan toda una serie de factores de transcripcin que ejercen de factores de
iniciacin, que se unen a secuencias especficas de ADN para reconocer el sitio donde la transcripcin
ha de comenzar y se sintetice el ARN cebador. Esta secuencia de ADN en la que se ensamblan los
complejos de transcripcin se llama promotor. Los promotores se localizan en los extremos 5'terminales de los genes, antes del comienzo del gen, y a ellos se unen los factores de transcripcin
mediante fuerzas de Van der Waals y enlaces de hidrgeno. Los promotores tienen secuencias
reguladoras definidas, muy conservadas en cada especie, donde las ms conocidas son la caja TATA
(situada sobre la regin -10), con la secuencia consenso TATA(A/T)A(A/T); y la caja TTGACA (situada
en el punto -35). La formacin del complejo de transcripcin se realiza sobre el promotor TATA, all se
forma el ncleo del complejo de iniciacin. Sobre la caja TATA se fija una protena de unin (TBP)
junto con el factor de transcripcin TF II D (TF proviene del ingls: transcription factor). Despus, a ellos
se unen otros factores de transcripcin especficos: TF II A, que estabiliza el complejo TFII D-ADN; los
factores TFII B y TFII E se unen al ADN y el TF II F (una helicasa dependiente de ATP) y al final la ARN
polimerasa. Todo ello forma un complejo que se llama complejo de preiniciacin cerrado. Cuando la
estructura se abre por mediacin del factor de transcripcin TF II H, da comienzo la iniciacin.

Iniciacin
Primero, una Helicasa separa las hebras de ADN en estas denominadas cajas TATA, ya que la
adenina y timina poseen un doble enlace, mientras que la citocina y guanina poseen uno triple.
Posteriormente se unen las proteinas de transcripcin (TBP, TF2D, TF2B) permitiendo, de esta
manera, el acceso de la ARN polimerasa al molde de ADN de cadena simple, siendo esta la ultima en
posicionarse. Aunque la bsqueda del promotor por la ARN polimerasa es muy rpida, la formacin de
la burbuja de transcripcin o apertura del ADN y la sntesis del cebador es muy lenta. La burbuja de
transcripcin es una apertura de ADN desnaturalizado de 18 pares de bases, donde empieza a
sintetizarse el ARN cebador a partir del nucletido nmero 10 del ADN molde de la burbuja de
transcripcin. La burbuja de transcripcin se llama complejo abierto. La ARN polimerasa es una
enzima formada por 5 subunidades: 2 subunidades , 1 subunidad , 1 subunidad ' y 1 subunidad
que tiene como funcin la unin de ribonucletidos trifosfato. Cuando se forma el complejo abierto, la
ARN polimerasa comienza a unir ribonucletidos mediante enlaces fosfodister, y una vez que se
forma el primer enlace fosfodister, acaba la etapa de iniciacin.y comienza asi comienza la siguiente
etapa.
Disgregacin del promotor
Una vez sintetizado el primer enlace fosfodister, se debe deshacer el complejo del promotor para que
quede limpio para volver a funcionar de nuevo. Durante esta fase hay una tendencia a desprenderse
el transcrito inicial de ARN y producir transcritos truncados, dando lugar a una iniciacin abortada,
comn tanto en procariontes como eucariontes. Una vez que la cadena transcrita alcanza una longitud
de unos 23 nucletidos, el complejo ya no se desliza y da lugar a la siguiente fase, la elongacin.

La disgregacin del promotor coincide con una fosforilacin de la serina 5 del dominio carboxilo
terminal de la ARN polimerasa, que es fosforilado por el TF II H (que es una protena quinasa
dependiente de ATP)
Elongacin
La ARN polimerasa cataliza la elongacin de cadena del ARN. Una cadena de ARN se une por
apareamiento de bases a la cadena de ADN, y para que se formen correctamente los enlaces de
hidrgeno que determina el siguiente nucletido del molde de ADN, el centro activo de la ARN
polimerasa reconoce a los ribonucletidos trifosfato entrantes. Cuando el nucletido entrante forma los
enlaces de hidrgeno idneos, entonces la ARN polimerasa cataliza la formacin del enlace
fosfodister que corresponde. A esto se le llama elongacin, la segunda etapa de la transcripcin del
ARN.
Terminacin
Al finalizar la sntesis de ARNm, esta molcula ya se ha separado completamente del ADN (que
recupera su forma original) y tambin de la ARN polimerasa, terminando la transcripcin. La
terminacin es otra etapa distinta de la transcripcin, porque justo cuando el complejo de transcripcin
se ha ensamblado activamente debe desensamblarse una vez que la elongacin se ha completado.
La terminacin est sealizada por la informacin contenida en sitios de la secuencia del ADN que se
est transcribiendo, por lo que la ARN polimerasa se detiene al transcribir algunas secuencias
especiales del ADN. Estas secuencias son ricas en guanina y citosina, situadas en el extremo de los
genes, seguidas de secuencias ricas en timina, formando secuencias palindrmicas, que cuando se
transcriben el ARN recin sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo
ARN-ADN, obligando a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizndose la burbuja de
transcripcin. Algunas secuencias de ADN carecen de la secuencia de terminacin, sino que poseen
otra secuencia a la que se unen una serie de protenas reguladoras especficas de la terminacin de la
transcripcin como rho .

Importancia de la transcripcin del ADN


El ADN por TRANSCRIPCIN codifica ( enva mensajes en forma de cdigos ) a partir de una de sus
cadenas de nucletidos dentro del Ncleo al ARN mensajero para que se ejecute la rden en el
Citoplasma
por
Traduccin
e
iniciar
la
Sntesis
de
Protenas
celulares.
El ADN tiene un papel importante en la Transcripcin porque inicia o acta como un Disparador para la
Sntesis de Protenas Celulares, por eso el Dogma de la Biologa Celular y Molecular es :
ADN
+
ARN
------->
Protenas.

ARN
El ARN es un polmero de ribonucletidosde uracilo, citosina, guanina y adenina, organizado en una
banda simple, como la mitad de una escalera con la misma estructura del ADN: los laterales estn
formados por los grupos fosfatos y azcares de los cuales parte una base nitrogenada.
Para traducir de un idioma a otro se necesitan un diccionario y unas reglas gramaticales; igualmente,
para traducir el ADN a las protenas se necesita una clave o cdigo gentico de equivalencia, que se
denomina Cdigo Gentico.

No todos los genes que existen en una clula se expresan todo el tiempo. A lo largo del desarrollo y
dependiendo de las necesidades celulares, una veces se expresan unos genes y otras veces otros del
cual se origina.
El gen o los genes que se van a expresar se copian primero mediante un proceso que se denomina
transcripcin, y que consiste en que la secuencia de nucletidos correspondiente al gen en cuestin
se transcribe a una molcula de ARN mensajero (ARNm), que se separa del ADN y viaja desde el
ncleo al citoplasma (si se trata de una clula eucariota). Es como si de toda la informacin que existe
en una norme biblioteca (el ncleo con su inmensa cantidad de ADN) y se sacara una fotocopia de
una sola pgina o de unas pocas pginas, de un libro.
Por lo tanto la funcin del ARNm es sealar la secuencia de acuerdo con la cual los aminocidos son
incorporados del ADN a los ribosomas para dirigir la sntesis de protena.
El ARNm posee una sola banda, es lineal complementaria a la del ADN del cual se origina.
Es metablicamente muy activo; en la clula existen tantos ARN como genes deben ser transcrito el
mensaje escrito en nucletidos tiene que traducirse en aminocidos.
Biosntesis

Artculo principal: Transcripcin gentica


La biosntesis de ARN est catalizada normalmente por la enzima ARN polimerasa que usa una hebra
de ADN como molde, proceso conocido con el nombre de transcripcin. Por tanto, todos los ARN
celulares provienen de copias de genes presentes en el ADN.
La transcripcin comienza con el reconocimiento por parte de la enzima de un promotor, una
secuencia caracterstica de nucletidos en el ADN situada antes del segmento que va a transcribirse;
la doble hlice del ADN es abierta por la actividad helicasa de la propia enzima. A continuacin, la
ARN polimerasa progresa a lo largo de la hebra de ADN en sentido 3' 5', sintetizando una molcula
complementaria de ARN; este proceso se conoce como elongacin, y el crecimiento de la molcula de
ARN se produce en sentido 5' 3'. La secuencia de nucletidos del ADN determina tambin dnde
acaba la sntesis del ARN, gracias a que posee secuencias caractersticas que la ARN polimerasa
reconoce como seales de terminacin.18
Tras la transcripcin, la mayora de los ARN son modificados por enzimas. Por ejemplo, al pre-ARN
mensajero eucariota recin transcrito se le aade un nucletido de guanina modificado (7Metilguanosina) en el extremo 5' por medio de un puente de trifosfato formando un enlace 5' 5'
nico, tambin conocido como "capucha" o "caperuza", y una larga secuencia de nucletidos de
adenina en el extremo 3' (cola poli-A); posteriormente se le eliminan los intrones (segmentos no
codificantes) en un proceso conocido como splicing.
En virus, hay tambin varias ARN polimerasas ARN-dependientes que usan ARN como molde para la
sntesis de nuevas molculas de ARN. Por ejemplo, varios virus ARN, como los poliovirus, usan este
tipo de enzimas para replicar su genoma.
Hiptesis del mundo de ARN
Artculo principal: Hiptesis del mundo de ARN
La hiptesis del mundo de ARN propone que el ARN fue la primera forma de vida en la Tierra,
desarrollando posteriormente una membrana celular a su alrededor y convirtindose as en la primera
clula. Se basa en la comprobacin de que el ARN puede contener informacin gentica, de un modo
anlogo a como lo hace el ADN, y que algunos tipos son capaces de llevar a cabo reacciones
metablicas, como autocorte o formacin de enlaces peptdicos.
Durante aos se especul en qu fue primero, el ADN o las enzimas, ya que las enzimas se sintetizan
a partir del ADN y la sntesis de ADN es llevada a cabo por enzimas. Si se supone que las primeras
formas de vida usaron el ARN tanto para almacenar su informacin gentica como realizar su
metabolismo, se supera este escollo. Experimentos con los ribozimas bsicos, como el ARN viral Qbeta, han demostrado que las estructuras de ARN autorreplicantes sencillas pueden resistir incluso a
fuertes presiones selectivas (como los terminadores de cadena de quiralidad opuesta)
Genomas de ARN
El ADN es la molcula portadora de la informacin gentica en todos los organismos celulares, pero,
al igual que el ADN, el ARN puede guardar informacin gentica. Los virus ARN carecen por completo
de ADN y su genoma est formado por ARN, el cual codifica las protenas del virus, como las de la
cpside y algunos enzimas. Dichos enzimas realizan la replicacin del genoma vrico. Los viroides son
otro tipo de patgenos que consisten exclusivamente en una molcula de ARN que no codifica
ninguna protena y que es replicado por la maquinaria de la clula hospedadora.

Estructura
ESTRUCTURA PRIMARIA DEL ARN
Al igual que el ADN, se refiere a la secuencia de las bases nitrogenadas que constituyen sus
nucletidos.

ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ARN


Alguna vez, en una misma cadena, existen regiones con secuencias complementarias capaces de
aparearse

ESTRUCTURA TERCIARIA DE ARN


Es un plegamiento, complicado, sobre al estructura secundaria.

Tipos de ARN
El ARN mensajero (ARNm) es el tipo de ARN que lleva la informacin del ADN a los ribosomas, el
lugar de la sntesis de protenas. La secuencia de nucletidos del ARNm determina la secuencia de
aminocidos de la protena.21 Por ello, el ARNm es denominado ARN codificante.

No obstante, muchos ARN no codifican protenas, y reciben el nombre de ARN no codificantes; se


originan a partir de genes propios (genes ARN), o son los intrones rechazados durante el proceso de
splicing. Son ARN no codificantes el ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr), que
son elementos fundamentales en el proceso de traduccin, y diversos tipos de ARN reguladores.22
Ciertos ARN no codificantes, denominados ribozimas, son capaces de catalizar reacciones qumicas
como cortar y unir otras molculas de ARN,23 o formar enlaces peptdicos entre aminocidos en el
ribosoma durante la sntesis de protenas.

ARN implicados en la sntesis de protenas

Ribosoma 50S mostrando el ARNr (amarillo), las protenas (azul) y el centro activo, la adenina 2486
(rojo).

ARN mensajero. El ARN mensajero (ARNm o RNAm) lleva la informacin sobre la secuencia de
aminocidos de la protena desde el ADN, lugar en que est inscrita, hasta el ribosoma, lugar
en que se sintetizan las protenas de la clula. Es, por tanto, una molcula intermediaria entre
el ADN y la protena y el apelativo de "mensajero" es del todo descriptivo. En eucariotas, el
ARNm se sintetiza en el nucleoplasma del ncleo celular y de all accede al citosol, donde se
hallan los ribosomas, a travs de los poros de la envoltura nuclear.
ARN de transferencia. Los ARN de transferencia (ARNt o tRNA) son cortos polmeros de unos
80 nucletidos que transfiere un aminocido especfico al polipptido en crecimiento; se unen a
lugares especficos del ribosoma durante la traduccin. Tienen un sitio especfico para la
fijacin del aminocido (extremo 3') y un anticodn formado por un triplete de nucletidos que
se une al codn complementario del ARNm mediante puentes de hidrgeno.22
ARN ribosmico. El ARN ribosmico (ARNr o RNAr) se halla combinado con protenas para
formar los ribosomas, donde representa unas 2/3 partes de los mismos. En procariotas, la
subunidad mayor del ribosoma contiene dos molculas de ARNr y la subunidad menor, una. En
los eucariotas, la subunidad mayor contiene tres molculas de ARNr y la menor, una. En ambos

casos, sobre el armazn constituido por los ARNr se asocian protenas especficas. El ARNr es
muy abundante y representa el 80% del ARN hallado en el citoplasma de las clulas
eucariotas.25 Los ARN ribosmicos son el componente cataltico de los ribosomas; se
encargan de crear los enlaces peptdicos entre los aminocidos del polipptido en formacin
durante la sntesis de protenas; actan, pues, como ribozimas.

ARN reguladores

Muchos tipos de ARN regulan la expresin gnica gracias a que son complementarios de regiones
especficas del ARNm o de genes del ADN. .

ARN de interferencia. Los ARN interferentes (ARNi o iRNA) son molculas de ARN que
suprimen la expresin de genes especficos mediante mecanismos conocidos globalmente
como ribointerferencia o interferencia por ARN. Los ARN interferentes son molculas pequeas
(de 20 a 25 nuclotidos) que se generan por fragmentacin de precursores ms largos. Se
pueden clasificar en tres grandes grupos:26

Micro ARN. Los micro ARN (miARN o RNAmi) son cadenas cortas de 21 22 nucletidos hallados en
clulas eucariotas que se generan a partir de precursores especficos codificados en el genoma. Al
transcribirse, se pliegan en horquillas intramoleculares y luego se unen a enzimas formando un
complejo efector que puede bloquear la traduccin del ARNm o acelerar su degradacin comenzando
por la eliminacin enzimtica de la cola poli A.27 28

ARN interferente pequeo. Los ARN interferentes pequeo (ARNip o siARN), formados por 2025 nucletidos, se producen con frecuencia por rotura de ARN virales, pero pueden ser tambin
de origen endgeno.29 30 Tras la transcripcin se ensambla en un complejo proteico
denominado RISC (RNA-inducedsilencingcomplex) que identifica el ARNm complementario que
es cortado en dos mitades que son degradadas por la maquinaria celular, bloquean as la
expresin del gen.31 32 33
ARN asociados a Piwi.34 Los ARN asociados a Piwi son cadenas de 29-30 nucletidos, propias
de animales; se generan a partir de precursores largos monocatenarios, en un proceso que es
independiente de Drosha y Dicer. Estos ARN pequeos se asocian con una subfamilia de las
protenas "Argonauta" denominada protenas Piwi. Son activos las clulas de la lnea germinal;
se cree que son un sistema defensivo contra los transposones y que juegan algn papel en la
gametognesis.35 36
ARN antisentido. Un ARN antisentido es la hebra complementaria (no codificadora) de un hebra
ARNm (codificadora). La mayora inhiben genes, pero unos pocos activan la transcripcin.37 El
ARN antisentido se aparea con su ARNm complementario formando una molcula de doble
hebra que no puede traducirse y es degradada enzimticamente.38 La introduccin de un
transgen codificante para un ARNmantisentido es una tcnica usada para bloquear la expresin
de un gen de inters. Un mARNantisentido marcado radioactivamente puede usarse para
mostrar el nivel de transcripcin de genes en varios tipos de clulas. Algunos tipos estructurales
antisentidos son experimentales, ya que se usan como terapia antisentido.
ARN largo no codificante. Muchos ARN largos no codificantes (ARNnc largo o longncARN)
regulan la expresin gnica en eucariotas;39 uno de ellos es el Xist que recubre uno de los dos
cromosomas X en las hembras de los mamferos inactivndolo (corpsculo de Barr).40
Riboswitch. Un riboswitch es una parte del ARNm (cido ribonucleico mensajero) al cual
pueden unirse pequeas molculas que afectan la actividad del gen.41 42 43 Por tanto, un
ARNm que contenga un riboswitch est directamente implicado en la regulacin de su propia
actividad que depende de la presencia o ausencia de la molcula sealizadora. Tales
riboswitchs se hallan en la regin no traducida 5' (5'-UTR), situada antes del codn de inicio

(AUG), y/o en la regin no traducida 3' (3'-UTR), tambin llamada secuancia de arrastre,14
situada entre el codn de terminacin (UAG, UAA o UGA) y la cola poli A
ARN con actividad cataltica

Transformacin de uridina en pseudouridina, una modificacin comn del ARN.

Ribozimas. El ARN puede actuar como biocatalizador. Ciertos ARN se asocian a protenas
formando ribonucleoprotenas y se ha comprobado que es la subunidad de ARN la que lleva a
cabo las reacciones catalticas; estos ARN realizan las reacciones in vitro en ausencia de
protena. Se conocen cinco tipos de ribozimas; tres de ellos llevan a cabo reacciones de
automodificacin, como eliminacin de intrones o autocorte, mientras que los otros
(ribonucleasa P y ARN ribosmico) actan sobre substratos distintos.14 As, la ribonucleasa P
corta un ARN precursor en molculas de ARNt,44 mientras que el ARN ribosmico realiza el
enlace peptdico durante la sntesis proteica ribosomal.
Espliceosoma. Los intrones son separados del pre-ARNm durante el proceso conocido como
splicing por los espliceosomas, que contienen numerosos ARN pequeos nucleares (ARNpn o
snRNA).45 En otros casos, los propios intrones actan como ribozimas y se separan a si
mismos de los exones.46
ARN pequeo nucleolar. Los ARN pequeos nucleolares (ARNpno o snoRNA), hallados en el
nuclolo y en los cuerpos de Cajal, dirigen la modificacin de nucletidos de otros ARN;22 el
proceso consiste en transformar alguna de las cuatro bases nitrogenadas tpicas (A, C, U, G)
en otras. Los ARNpno se asocian con enzimas y los guan aparendose con secuencias
especficas del ARN al que modificarn. Los ARNr y los ARNt contienen muchos nucletidos
modificados.
ARN mitocondrial

La mitocondrias tienen su propio aparato de sntesis proteica, que incluye ARNr (en los ribosomas),
ARNt y ARNm. Los ARN mitocondriales (ARNmt o mtARN) representan el 4% del ARN celular total.
Son transcritos por una ARN polimerasa mitocondrial especfica
- SINTESIS Y LOCALIZACIN DE LOS ARN
En la clula eucarionte los ARN se sintetizan gracias a tres tipos de enzimas:
- ARN polimerasa I, localizada en el nucleolo y se encarga de la sinteisde los ARNr 18 S, 5,8 S y 28 S.
- ARN polimerasa II, localizada en el nucleoplasma y se encarga de la sntesis de los ARNhn, es decir
de los precursores de los ARNm
- ARN polimerasa III, localizada en el nucleoplasma y se encarga de sintetizar los ARNr 5 S y los
ARNm
funcion del ARN:
ARN mensajero
El ARN mensajero es el cido ribonucleico que contiene la informacin gentica procedente del ADN
para utilizarse en la sntesis de protenas, es decir, determina el orden en que se unirn los
aminocidos.
El ARN mensajero es un cido nucleico monocatenario, al contrario que el ADN que es bicatenario.
Procesamiento del ARN mensajero en clulas eucariotas

Inicialmente el ARN se conoce como transcrito primario o ARN precursor (pre-ARN), que en la
mayora de los casos no se libera del complejo de transcripcin en forma totalmente activa, sino que
ha de sufrir modificaciones antes de ejercer su funcin (procesamiento o maduracin del ARN). Entre
esas modificaciones se encuentran la eliminacin de fragmentos (splicing), la adicin de otros no
codificados en el DNA y la modificacin covalente de ciertas bases nitrogenadas. Concretamente, el
procesamiento del ARN en eucariotas comprende diferentes fases:
Adicin al extremo 5' de la estructura denominada caperuza (o CAP, su nombre en ingls) que es un
nucletido modificado de guanina, la 7-metilguanosina, que se aade al extremo 5' de la cadena del
ARNm transcrito primario (ubicado an en el ncleo celular). Esta caperuza es necesaria para el
proceso normal de traduccin del ARN y para mantener su estabilidad; esto es crtico para el
reconocimiento y el acceso apropiado del ribosoma.
Poliadenilacin: es la adicin al extremo 3' de una cola poli-A, una secuencia larga de poliadenilato, es
decir, un tramo de RNA cuyas bases son todas adenina. Su adicin est mediada por una secuencia o
seal de poliadenilacin (AAUAAA), situada unos 20-30 nucletidos antes del extremo 3' original. Esta
cola protege al ARNm frente a la degradacin, aumentando su vida media en el citosol, de modo que
se puede sintetizar mayor cantidad de protena.
En la mayora de los casos, el ARN mensajero sufre la eliminacin de secuencias internas, no
codificantes, llamadas intrones. Esto no ocurre en clulas procariontes, ya que estas no poseen
intrones en su DNA. El proceso de retirada de los intrones y conexin o empalme de los exones se
llama ayuste, o corte y empalme (en ingls, splicing). A veces un mismo transcrito primario o preARNm se puede ayustar de diversas maneras, permitiendo que con un solo gen se obtengan varias
protenas diferentes; a este fenmeno se le llama ayuste alternativo. Ciertas enzimas parecen estar
involucrados en editar el RNA antes de su exportacin fuera del ncleo, intercambiando o eliminando
nucletidos errneos.
El ARN mensajero maduro es trasladado al citoplasma de la clula, en el caso de los seres
eucariontes, a travs de poros de la membrana nuclear.
Al ARN mensajero en el citoplasma se acoplan los ribosomas, que son la maquinaria encargada de la
sntesis proteica. En procariontes, la unin de los ribosomas ocurre mientras la cadena de ARNmesta
siendo sintetizada.
Despus de cierta cantidad de tiempo el ARNm se degrada en sus nucletidos componentes,
generalmente con la ayuda de ribonucleasas.
ARN mensajero en clulas procariotas
El proceso de transcripcin y el de traduccin se realizan de manera similar que en las clulas
eucariotas. La diferencia fundamental est en que, en las procariotas, el ARN mensajero no pasa por
un proceso de maduracin y, por lo tanto, no se le aade caperuza ni cola, ni se le quitan intrones.
Adems no tiene que salir del ncleo como en las eucariotas, porque en las clulas procariotas no hay
un nucleo definido.-

M TODOS DE ROTURA DE ACIDOS NUCLEICOS


Existe una gran variedad de procedimientos para conseguir la fragmentacin
de cidos nucleicos.
a)Los mtodos fsicos estn basados en:
- Las fuerzas de cizalla que se originan cuando se obliga a la disolucin que
contiene a la (macro)molcula nucleica a pasar a travs de una seccin mucho
menor; para ello se utilizan prensas, agujas unidas a jeringuillas hipodrmicas o
incluso pipetas normales. Fuerzas anlogas producidas con una batidora o
agitador de aspas consiguen una rotura semejante (quiz algo ms controlada)
de las largas molculas de DNA. Se produce una mezcla heterognea de
fragmentos, cuyos tamaos dependen de las fuerzas provocadas, que a su vez
son funcin de la presin aplicada, la reduccin de la seccin, la velocidad de
las aspas, el tiempo de agitacin, etc.
- Las ondas de presin producidas por losultrasonidos. Los sonicadores son
los equipos que se utilizan para este propsito, y modulan tanto la frecuencia
como la intensidad de la onda; permiten por lo tanto trabajar en condiciones
ms controladas y conseguir resultados bastante ms reproducibles. Los
fragmentos producidos presentan tamaos que se aproximan ms a una
distribucin gaussiana; la mezcla conseguida es tambin, por supuesto, heterognea. El tamao medio depende de las condiciones y del tiempo del
tratamiento.
b)Los mtodos qumic os, dirigidos a la rotura, en este caso por
hidrlisis, de enlaces ster fosfrico de la cadena polinucleotdica.
Esta hidrlisis puede ser:

Hidrlisis cida, donde el catalizador de la reaccin son los protones de


un cido fuerte (clorhdrico, por ejemplo). El mecanismo de la reaccin
comienza por la rotura de los enlaces que unen los restos de azcar
ribosa o desoxirribosa) y las bases nitrogenadas pricas (A y G),
provocando la despurinizacin de la molcula, que queda as
inestabilizada. La continuacin del tratamiento cido conduce a la rotura
de los enlaces fosfodister de la cadena por los puntos que precisamente
perdieron la base nitrogenada. Este proceso se sigue en algunos casos
para facilitar la transferencia de grandes molculas de DNA o RNA desde
geles de agarosa a soportes slidos; es tambin la base de alguna de las
reacciones utilizadas en el mtodo de secuenciacin de DNA por rotura
qumica (mtodo de Maxam y Gilbert).
Resulta una mezcla heterognea de mono-, di- y oligonucletidos, en
concentraciones relativas que dependen de la intensidad de la reaccin.

Hidrlisis bsica, catalizada por los iones OH- de una base fuerte
(hidrxido sdico, por ejemplo). Es importante sealar que la hidrlisis

bsica slo acta sobre la cadena del RNA, ya que el mecanismo de esta
reaccin requiere un OH en 2, tan slo presente en la ribosa de las
molculas de RNA. Esto permite utilizar este tipo de hidrlisis para
degradar especficamente el RNA en una mezcla con DNA sin que se afecte
este ltimo. Es una forma de eliminar el RNA contaminante de una
preparacin de DNA.
La rotura del enlace fosfoster libera mono-, di- u oligorribonucletidos;
su concentracin relativa es funcin de la severidad de la hidrlisis.

Hidrlisis t otal o parcial, en funcin de las condiciones. Con poca


concentracin del catalizador (H' o OH-), a una temperatura inferior la
ptima o limitando el tiempo de incubacin se puede conseguir que la
reaccin de hidrlisis no se realice en su totalidad, es decir que tan slo se
rompan al azar algunos enlaces ster fosfrico, pero no todos.
El resultado de una hidrlisis parcial es una mezcla heterognea de
fragmentosoligonucleotdicos, cuyo tamao responde a una curva de
distribucin de Gauss y donde el tamao medio es funcin de la
severidad de la reaccin.
c)Los mtodos enzimticos, que, como los anteriores, producen la rotura
de enlaces fosfodister de la cadena polinucleotdica mediante su hidrlisis,
aunque en este caso
la reaccin est catalizada enzimticamente. A
travs del control de las condiciones (unidades de la enzima, temperatura,
etc.) puede conseguirse una hidrlisistotal o parcial. Estos mtodos utilizan
dos tipos de enzimas:
E ndonucleasas inespecficas(RNasas, DNasas), que rompen aleatoriamente los puentes fosfato de la
cadena. No presentan ninguna especificidad de sitio, aun que s de sustrato. Las DNasas slo hidrolizan enlaces
que implican a restos de desoxirribosa; son dependientes del catin Mg2+ por lo que su accin resulta inhibida en
presencia de agentes quelantes de este tipo de cationes (EDTA, por ejemplo), lo que es explotado en los
procedimientos preparativos de DNA.
Las RNasas son especficas de cadenas de RNA; son enzimas muy activasy difciles de desnaturalizar de manera
irreversible, por lo que se convierten en un riesgo importante en el aislamiento de RNA. Las nucleasas inespecficas,
tanto unas como otras, son muy tiles a la horade eliminar contaminaciones por alguna de estas dos
macromolculas.
Endonucleasas de restriccin (E R), que rompen la doble hebra del DNA por enlaces especficos. Son
nicas en este tipo de accin y, por tanto, herramientas insustituibles en el anlisis de DNA.
Los fragmentos que se consiguen tras la incubacin con alguna de estas enzimas son fragmentos
especficos (fragmentos de restriccin), resultado de la rotura del DNA por sitios especficos.
III. SEPARACIN Y PURIFICACIN
Una vez superada la fase de rotura de estructuras, la molcula objetivo del
proceso se encontrar en una solucin/suspensin ms o menos compleja,
mezclada con una gran variedad de otras molculas. La segunda fase del mtodo de
preparacin, la ms complicada, supone el fraccionamiento de esa mezcla mediante

una o, generalmente, varias etapas en las que se hace uso de tcnicas bioqumicas
clsicas de separacin y purificacin. Estas tcnicas aprovechan generalmente el gran
tamao y la naturaleza cida y, por lo tanto, hidroflica de los cidos nucleicos para
lograr su separacin del resto de los componentes de esa mezcla. En su estado
natural, in vivo, las molculas de cidos nucleicos se encuentran asociadas a
protenas (en su mayora bsicas); este hecho, unido a la semejanza en cuanto a
tamao de ambos tipos de molculas(macromolculas) convierte a las protenas en
los contaminantes naturales de los cidos nucleicos. Un segundo acompaante
universal es el otro tipo de cido nucleico: ambos, DNA y RNA, presentan una
enorme semejanza estructural, lo que, en principio, hace difcil su separacin.
Algunas de las tcnicas bioqumicas empleadas son de uso muy general, como:
La sedimentacin; se utilizan distintas variantes de esta tcnica, aunque
destaca por la calidad de sus resultados la sedimentacin en gradientes de
sacarosa, glicerol o, sobre todo, de sales de cesio (cloruro, trifluoroacetato,
etc.); en este ltimo medio se pueden separar, en condiciones adecuadas, las
molculas de protenas, el RNA, el DNA circular plasmdico y el DNA lineal
cromosmico; en presencia de bromuro de etidio, las molculas de DNA
intercalan ese catin entre sus bases nitrogenadas, lo que puede afectar a su
topologa y a su densidad, permitiendo la separacin de las molculas
plasmdicas, circulares y covalentemente cerradas

Adems, se utilizan otras tcnicas no tan extendidas, tales como:

La dilisis a travs de membranas: con el fin de eliminar pequeas molculas


(sales, nucletidos, etc.) presentes en la disolucin del cido nucleico y que
puedan afectar a procesos subsiguientes.

La extraccin con disolventes orgnicos.. el fenol, solo o mezclado con


cloroformo, es muy eficaz en la extraccin de protenas presentes en una
disolucin de cidos nucleicos; la omnipresencia de stas hace que la
extraccin con fenol sea una etapa casi indispensable en los procedimientos
preparativos. El fenol ha de prepararse previamente mediante saturacin con
una disolucin 0'1 M de Tris-HO a pH 8'0 (para evitar que capte agua de la
fase acuosa que va a ser extrada) y adicin de algn compuesto reductor, como
el -mercaptoetanol o la hidroxiquinolina (para evitar que se oxide). La
extraccin posterior de la disolucin del cido nucleico con cloroformo o ter
permite eliminar totalmente los restos de fenol que puedan haber quedado
en la fase acuosa.

La precipitacin de cidos nucleicos con alcoholes: en presencia de una cantidad


suficiente de sal (acetato o cloruro sdico, potsico, amnico, etc.) muchos
alcoholes provocan esta precipitacin; el etanol o el isopropanol son los de
uso ms frecuente.

La digestin enzimtica: como ya se ha sealado, las protenas son los


contaminantes universales en el aislamiento de los cidos nucleicos; adems,
algunas de ellas presentan actividades enzimticas degradativas (DNasas,
RNasas), capaces de estropear todo un largo proceso de obtencin.Por ese
motivo, el mtodo preparativo suele incluir una etapa de incubacin con
proteasas de amplia especificidad (proteinasa K, pronasa, etc.).Por otro lado,
la separacin de un tipo de cido nucleico del otro, se resuelve simplemente

con el uso de actividades nucleolticas especficas: la incubacin con RNasa


elimina la contaminacin por RNA de una preparacin de DNA, y viceversa;
obviamente, se requiere que la actividad usada se encuentre libre de contaminacin por la contraria