Abstrak

Studi epidemiologi menghubungkan beberapa faktor yang berhubungan

dengan produksi estrogen pada wanita dengan peningkatan risiko kanker payudara.
Hal ini termasuk menarche dini, late menopause, obesitas, penggunaan terapi hormon
pasca menopause, dan tingkat plasma estradiol. Dua kemungkinan mekanisme yang
telah diusulkan untuk menjelaskan peningkatan risiko: (1) Estrogen Receptor (ER)
memediasi stimulasi dari proliferasi sel payudara seiring dengan meningkatnya
tingkat mutasi dan (2) metabolisme estradiol menjadi metabolit genotoksik dengan
peningkatan hasil pada mutasi DNA. Metabolisme estradiol dapat menyebabkan
kerusakan DNA dalam dua cara: (a) pembentukan estradiol-adenin-guanine adduct
yang dilepaskan dari DNA tulang belakang meninggalkan tanda depurinasi melalui
kesalahan perbaikan DNA dan mutasi dan (b) pembentukan radikal bebas oksigen
yang dihasilkan dari siklus redoks 4-OH estradiol menjadi 3-4 estradiol kuinon dan
dikonversikan kembali ke 4-OH estradiol. Jika salah satu atau kedua jalur tersebut
operatif, angka kecukupan untuk total mutasi selama periode waktu yang panjang
digunakan untuk menginduksi transformasi neoplastik.
Studi kami didasarkan pada hipotesis bahwa kedua receptor-mediated dan
jalur

genotoksik

berkontribusi

terhadap

kanker

payudara.

Kami

awalnya

menunjukkan bahwa MCF-7 sel kanker payudara dan jaringan payudara yang normal
pada aromatase transfected tikus mengandung enzim yang diperlukan untuk
mengkonversi estradiol ke estradiol DNA adducts. Kemudian kami memanfaatkan
highly reductionist model untuk menganalisis secara terpisah pengaruh alpha ER pada
pembentukan tumor dan efek deplesi estrogen oleh castration pada

ER knock

out/Wnt-1 (ERKO/Wnt) hewan transgenik untuk menilai efek dari estradiol dalam
ketiadaan ER. Estradiol ditambahkan kembali pada castrate ERKO/Wnt hewan untuk
menentukan apakah Kochs postulates dapat dipenuhi untuk meningkatkan kejadian
kanker dengan pemberian estradiol eksogen. Akhirnya, kami menilai efek dari
inhibitor aromatase pada insiden tumor non-castrate, ERKO /Wnt hewan.
Studi menunjukkan konversi estradiol untuk metabolit genotoksik dalam
jaringan payudara. Selain itu, knockout dari ER menyebabkan penurunan kejadian
pembentukan tumor dan keterlambatan dalam terjadinya pembentukan tersebut.
Ooforektomi lebih lanjut mengurangi insiden tumor dan penundaan onsetnya
sedangkan estradiol add-back mengembalikan tingkat kejadian dengan yang diamati
sebelum ooforektomi. Aromatase inhibitor, letrozole melambatkan onset pembentukan

tumor. Secara bersama-sama, data ini mendukung peran untuk metabolisme estradiol
sebagai salah satu komponen dalam perkembangan penelitian kanker payudara.
Pendahuluan
Beberapa pengamatan klinis dan eksperimental menunjukkan adanya
hubungan mekanistik antara produksi estradiol pada wanita dan perkembangan kanker
payudara. Pengamatan yang menarik bahwa kanker payudara terjadi 100 kali lipat
lebih sering pada wanita dibandingkan pada pria dan rata-rata E2 level urutan
besarnya lebih tinggi pada wanita dibandingkan pada pria. Ooforektomi bilateral
sebelum usia 35 tahun mengurangi kejadian kanker payudara seumur hidup sebesar
75%. Peningkatan paparan seumur hidup terhadap estrogen sebagaimana disimpulkan
dengan menarche dini, late menopause, peningkatan densitas tulang dan obesitas
berhubungan dengan peningkatan risiko kanker payudara. Data dari dua studi berbeda
menunjukkan peningkatan risiko kanker payudara sebagai fungsi dari plasma free-E2
levels. Dalam studi ini, wanita dalam quintile E2 plasma tertinggi mengalami tingkat
2,5 kali lipat lebih tinggi pada kanker payudara selama bertahun-tahun daripada
mereka yang berada pada quintile terendah. Blokade aksi estrogen dengan tamoxifen
atau raloxifene mengurangi kejadian kanker payudara sebesar 38% dan dengan
inhibitor aromatase sebesar 51-65% pada wanita berisiko tinggi. Akhirnya,
penghambatan sintesis E2 dengan inhibitor aromatase atau pembatalan aksi dengan
anti-estrogen mencegah perkembangan kanker payudara kontralateral selama terapi
adjuvant. Data eksperimental pada hewan juga mendukung peran estrogen dalam
pengembangan neoplasma payudara. E2 administration menyebabkan kanker
payudara pada berbagai macam hewan dan antiestrogen membatalkan efek ini. Secara
bersama-sama, data ini memberikan bukti substansial untuk peran estrogen dalam
perkembangan kanker payudara.
Mekanisme dimana estrogen meningkatkan kejadian kanker payudara tidak
sepenuhnya dipahami dan beberapa subjek masih kontroversi. Estrogen dapat
menyebabkan kanker payudara de novo baik pada reseptor-dependent atau
mekanisme-independent (Gambar 1). Melalui tindakan mediasi oleh reseptor tersebut,
E2 meningkatkan proliferasi sel, sebuah faktor penyebab terkait dengan
pengembangan kanker payudara. Kemungkinan kesalahan dalam replikasi DNA dan
mutasi menghasilkan peningkatan pari passu sebagai peningkatan jumlah pembelahan
sel. Estrogen dan untuk tingkat progestogen yang lebih baik dalam hubungannya
dengan estrogen meningkatkan laju proliferasi pada immature dan mature jaringan

payudara manusia. Proliferasi sel terbesar pada payudara dewasa ketika E2 dan
tingkat progesteron berada pada tingkat tertinggi. Hofseth dkk telah menunjukkan
bahwa terapi hormon menopause dengan estrogen atau estrogen plus progestogen
meningkatkan proliferasi di unit terminal saluran lobular, diduga sebagai tanda
perkembangan kanker payudara. Hubungan pada tingkat proliferasi dengan proses
karsinogenik merupakan landasan konseptual atas peran mekanisme ER dependen
pada karsinogenesis payudara.
ER independen, efek karsinogenik dari estrogen diyakini terjadi melalui aksi
metabolit estrogen (Gambar 1). Karena kehadiran A-ring aromatik, metabolisme
oksidatif hasil E2/E1 dalam pembentukan 2,3 dan 3,4-katekol dikatalisasi oleh tahap I
enzim sitokrom P450 seperti 3A4, 1A1, dan kehadiran 1B1 dalam jaringan payudara
manusia. CYP1B1 didominasi mengkatalisis pembentukan 4-OH katekol dan
lainnya, didominasi 2-OH katekol. Secara khusus, 3,4-kuinon membentuk unstable
depurinationg adducts dengan adenin dan guanin, 4-OH-E2/E1-1-N3Adenine dan 4OH-E2/E1-1-N7Guanin seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2. Adducts ini
menjalani depurinasi spontan dari DNA tulang belakang yang menyebabkan
pembentukan tanda apurinik yang cenderung mengalami kesalahan perbaikan DNA
dengan resultant point mutations. 2,3-kuinon, di sisi lain, membentuk DNA adducts
yang relatif stabil dan jarang terjadi depurinasi. 2,3 dan 3,4-kuinon juga dapat
dikurangi untuk semiquinones oleh sitokrom P450 reduktase, dan proses ini dapat
membuat siklus redoks untuk menghasilkan spesies oksigen reaktif yang
menyebabkan kerusakan DNA oksidatif (misalnya, 8-okso-deoxyguanosine). Data
eksperimental menunjukkan bahwa metabolit 4-OH mungkin lebih karsinogenik
daripada pasangan 2-OH mereka.
Kami menduga bahwa perbedaan antara reseptor-dependen dan aksiindependent bisa menjadi yang terbaik oleh percobaan pada hewan coba
menggunakan teknologi knock-out. Bocchinfuso et al., memanfaatkan model
ERKO/Wnt-1 untuk langsung menunjukkan peran ERa dalam proses karsinogenesis.
Studi kami memberikan bukti dari prinsip bahwa kedua ER-dependen dan aksi ERindependen berkontribusi pada proses karsinogenik.
Material dan Metode
Hewan: Tikus ERKO/Wnt-1 dan Wnt-1/ER-/+ heterozygous dari National Institute of
Environmental Health Sciences, Research Triangle Park. Hewan Wnt-1 transgenik
adalah peranakan dengan tikus heterozygous ERa knockout untuk menghasilkan tikus

Wnt-1 transgenik ganda, yang kemudian bisa dibiakkan lebih untuk menghasilkan Era
knockout/Wnt-1 transgenik ganda (ERKO/Wnt-1). Karakterisasi fenotip, biologis dan
biokimia dari sifat hewan ini telah dipublikasikan sebelumnya
E2 clamps metode dan pemberian obat: tabung Silastic diameter 0,19 cm diisi
dengan campuran E2 / kolesterol dengan berbagai rasio. Studi kami sebelumnya
mengevaluasi kemampuan untuk "clamps" plasma E2 pada level sekitar 20-800 pg /
ml selama periode 2 bulan. Dalam penelitian kami, kami clamped estradiol pada awal
fase folikuler (80 pg / ml) dan fase mid-luteal (240 pg / ml) pada wanita Letrozole
yang bergantung pada 0,3% larutan karboksimetil selulosa dalam saline dan diberikan
melalui injeksi subkutan sekali sehari dengan dosis 20 mg / mouse, 5 hari seminggu.
Metabolit Estrogen: metabolit Estradiol, konjugat dan depurinasi DNA adducts
diukur dengan HPLC dengan detektor 12-channelelectrochemical dikonfirmasi
dengan massa spektrometri yang dimanfaatkan untuk memverifikasi petunjuk
pengukuran. Metode ini telah banyak dijelaskan sebelumnya dan tidak akan
dijelaskan lebih lanjut di sini
Metode Statistik: Analisis Kaplan-Meier digunakan untuk membandingkan tumor-free
survival antara kelompok perlakuan yang berbeda pada tikus dalam penelitian ini.
Laju perkembangan tumor dibandingkan di antara berbagai kelompok perlakuan
untuk menentukan apakah secara statistik memiliki perbedaan yang signifikan.
Students t-test digunakan untuk membandingkan rata-rata bobot uterus antara 2
kelompok dan tingkat signifikansi 0,05 dianggap signifikan secara statistik.
Hasil
Pengukuran metabolit dalam MCF-7 sel kanker payudara: percobaan awal kami
menilai apakah enzim yang bertanggung jawab untuk pembentukan metabolit
estrogen dan konjugat hadir pada sel kanker payudara manusia, seperti diperhitungkan
dari deteksi metabolit. Sel MCF-7 diinkubasi dengan 10 M 4-OH-estradiol selama
24 jam sebelum pengumpulan media untuk kemudian diukur pada berbagai metabolit
dan konjugat (Gambar 3 A-D). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3B, kami
mendeteksi 4-metoksi-estradiol sama baiknya seperti konjugat kuinon dan depurinasi
4-OH-Estradiol-1-N7-guanine adduct dan estron analognya. Kami selanjutnya
menentukan apakah sel-sel ini dapat aromatize sejumlah yang cukup pada testosteron
untuk estradiol agar menghasilkan pembentukan depurinating species. Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 3C, kami mendeteksi 131 pg/ml estrogen (92 pg/ml

estradiol dan 39 pg/ml estrone di media) menunjukkan produksi estrogen dari

aromatisasi. 4-OH-estradiol-1-N7-guanine adduct (dan estron analog nya) juga hadir
pada konsentrasi total 0,92 pg/ml seperti glutathione, sistein dan konjugat Nacetylcysteine pada estradiol-3,4-kuinon dan estron analognya. Akhirnya, aromatase
inhibitor letrozole mampu menghambat pembentukan estrogen dari total 131 pg/ml
E1 dan E2 (Gambar. 3C) menjadi 2,8 pg/ml (Gambar. 3D) dan metabolit
downstreamnya ke tingkat yang tidak terdeteksi di kebanyakan kasus.
Pengukuran metabolit dalam jaringan mammae ERKO/Wnt1: Pembentukan
metabolit 4-OH-estrogen lebih difavoritkan daripada spesies 2-OH dan jalur catecholO-metil-transferase tampaknya relatif tidak aktif. Kami mendeteksi 10,9 pmol/g 4OH-E2 dan 4-OH-E1 di jaringan mammae, serta total 2,3 pmol/g terkonjugasi kuinon
estrogen (Gambar 4). Tidak ada metabolit 4-metoksi-estrogen yang hadir.