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UNIVERSIDAD REGIONAL

AUTNOMA DE LOS ANDES


UNIANDES FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

ESCUELAS: Medicina
Odontologa

CATEDRA:

Laboratorio de

Bioqumica

SEMESTRE:

II

AUTORES: Gavilanes L. Gema


Salazar G. Richard

AGRADECIMIENTOS
El arte de ensear es el arte de ayudar a descubrir.

A nuestra maestra, la Dra. Marlene Lpez y a los


docentes que conforman la ctedra de Biologa Celular y
Molecular Bioqumica, todo nuestro esfuerzo,
dedicacin y gratitud.

Ayudantes de Ctedra de Bioqumica

dedicatoria
Dedicado al alumnado de la Facultad de Ciencias
Mdicas de la Universidad Regional Autnoma de los
Andes, en quienes vemos reflejados nuestros sueos y
esperanzas de ser profesionales.

Dime y lo olvido, ensame y lo recuerdo, involcrame y


lo aprendo
Benjamin Franklin

CARRERA DE MEDICINA
MISIN
Somos una carrera del rea de Ciencias Mdicas cuyo fin es formar
profesionales socialmente responsables de integrar el conocimiento de
avanzada, las tecnologas de punta, la investigacin, el servicio social
y comunitario para desarrollar una actitud humanista, de equidad,
integridad, respeto, solidaridad y competencias de alta resolucin de
las necesidades de la salud individual, familiar y comunitaria.

Visin
Ser una carrera de medicina reconocida en el mbito nacional e
internacional por una formacin de profesionales con slidos
conocimientos cientficos, actitud investigativa, competencias clnicas
de diagnstico, tratamiento y rehabilitacin, con profundas
convicciones morales y capacidad de integrar los conocimientos de
forma crtica, con proyeccin de servicio coherente a los avances de la
ciencia, investigacin y tecnologa, que aporten a la transformacin
positiva de la salud de la sociedad y comunidad.

CARRERA DE
ODONTOLOGA
MISIN
Somos una Carrera de las Ciencias Mdicas cuyo propsito es formar
profesionales odontlogos con avanzados conocimientos cientficos y
tecnolgicos con alta capacidad resolutiva en salud oral, enmarcada
en la tica, integridad, equidad, empata y respeto para interactuar en
la sociedad con sensibilidad humana.

Visin
Ser una Carrera que proyecta consolidarse como una de las ms
reconocidas a nivel nacional e internacional por su compromiso con
las necesidades de la salud oral de la poblacin, apoyada por
docentes capacitados acadmica y cientficamente para la formacin
de profesionales altamente calificados para brindar una atencin de
calidad.

Contenido
ESCUELAS: Medicina....................................................................................... 0
Odontologa..................................................................................................... 0
AUTORES: Gavilanes L. Gema.........................................................................0
Salazar G. Richard............................................................................................ 0
AGRADECIMIENTOS............................................................................................. 1
dedicatoria.......................................................................................................... 2
PRIMERA PRCTICA............................................................................................. 6
INTRODUCCIN AL TRABAJO EN EL LABORATORIO..........................................6
SEGUNDA PRCTICA.......................................................................................... 17
ESPECMENES, VARIACIONES, SOLUCIONES, SI..............................................17
TERCERA PRCTICA........................................................................................... 26
HEMOGLOBINA............................................................................................... 26
CUARTA PRCTICA............................................................................................. 34
COAGULACIN............................................................................................... 34
Bibliografa.......................................................................................................... 40

PRIMERA PRCTICA

INTRODUCCIN AL TRABAJO EN EL
LABORATORIO
OBJETIVOS

Al trmino de la prctica el estudiante estar en la capacidad de:

1. Conocer y trabajar con las medidas de seguridad establecidas en el


laboratorio.
2. Manejar adecuadamente los materiales en un laboratorio.
3. Familiarizarse con los trminos para la informacin producida en el
laboratorio.
4. Describir los principales factores de variabilidad de la informacin producida
en el laboratorio.
INTRODUCCIN

El laboratorio experimental forma parte de la enseanza de medicina, por ser parte


de un conjunto de habilidades, destrezas y conocimientos que permiten la
comprensin de los fenmenos qumicos en el organismo. Es un trabajo
introductorio, al laboratorio clnico que constituye una parte de los llamados
servicios de diagnstico y tratamiento en los hospitales del pas.
Servicios del laboratorio clnico
1. Descubrir enfermedades en etapas sub-clnicas.
2. Ratificar un diagnstico sospechado clnicamente.
3. Obtener informacin sobre el pronstico de una enfermedad.

4. Establecer un diagnstico basado en una sospecha bien definida.


5. Vigilar un tratamiento o conocer una determinada respuesta teraputica.
6. Precisar factores de riesgo.
El laboratorio en general consta de tres fases de trabajo:

1. Fase pre-instrumental en el cual se elabora una solicitud de exmenes, se


procede a clasificarlos, se extrae o se recibe una muestra biolgica y
adems se prepara una serie de materiales y reactivos a utilizar en la
realizacin experimental.
2. Fase instrumental que corresponde el tratamiento tcnico del espcimen
biolgico hasta obtener un resultado cualitativo y cuantitativo.
3. Fase post-instrumental en el cul se procede a traducir los datos
obtenidos, en una informacin que se reporta bajo parmetros conocidos al
mdico solicitante y en el caso de una prctica experimental en un
protocolo de trabajo.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

Conjunto de normas, procedimientos y hbitos personales que permiten el manejo


y tratamiento adecuado de especmenes biolgicos. Entre las principales medidas
se hallan:

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Mandil largo y uso de guantes de ltex desechables.


Uso de gafas de proteccin a reactivos qumicos (si la reaccin lo amerita).
Uso de mascarilla de proteccin a gases qumicos (si la reaccin lo amerita)
Mantn el rea de trabajo limpia y ordenada.
No tener uas largas ni sucias.
Recoger el cabello mediante una gorra desechable.
Los objetos corto punzantes como agujas, debe colocarse siempre en
recipientes desechables rotulado corto punzantes. El lquido de
contencin es siempre cloro o hipoclorito de sodio.
8. El material biolgico debe ser expuesto a cloro y luego desechado en
recipientes esenciales con el rtulo muestras contaminadas.

9. Todo material biolgico contaminado o potencialmente contaminante como


algodones con sangre, depositar en funda de color rojo con el rtulo
material contaminado.
10. La basura comn debe depositarse en recipiente con funda negra con el
rtulo basura comn.
11. No se debe fumar o comer alimentos o beber agua dentro de un laboratorio.
12. Depositar los lquidos de reacciones en el lavabo y dejar correr abundante
agua.
13. No jugar en el laboratorio. Cualquier desvo en este sentido puede causar
graves quemaduras a su piel y fundamentalmente a ojos.
14.
No llevar bufandas, pauelos largos ni prendas u objetos que
dificulten la movilidad.
15.
Procura no andar de un lado para otro sin motivo y, sobre todo, no
corras dentro del laboratorio.
16. No utilizar corriente elctrica con el piso o la mesa hmeda y peor con
lquido.
17. Verificar la limpieza del material entregado.
18. Comunicar a su instructor cualquier novedad.
19. Fjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los
productos qumicos, pues existen frascos con reactivos venenosos como el
alcohol metlico, cianuros, ferro y ferrocianuros, oxalatos, etc.
20.
Lvate las manos con jabn despus de tocar cualquier producto
qumico.
21. Los reactivos cidos como el sulfrico, ntrico, clorhdrico, destruyen tanto la
piel como las mucosas y en contacto con los ojos pueden ocasionar graves
quemaduras, por aquello al abrir un frasco que contenga este tipo de
material hgalo lentamente. Si se trata de verter a un tubo de ensayo, este
deber estar seco y limpio, vertindose el lquido lentamente por las
paredes inclinando el tubo con la boca en direccin opuesta a su cara.
22. Las bases fuertes como hidrxidos de sodio, potasio y amonio provoca al
contacto graves lesiones en boca y faringe. En el caso del amoniaco, evitar
estar cerca, pues genera vapores irritantes para la mucosa nasal y ocular.
23. Siempre que se tenga contacto con reactivos, lavarse fuerte, rpida y
largamente con agua corriente.
24. No desparramar reactivos en la mesa de trabajo, ni material biolgico para
evitar daar tanto su piel como la mesa de trabajo y dejarlos contaminados.
25.
No utilices ninguna herramienta o mquina sin conocer su uso
funcionamiento y normas de seguridad especficas.

MATERIALES DE LABORATORIO

Entre las ms importantes se encuentran:

Probetas: Recipiente de vidrio para medir volmenes, su precisin es bastante


aceptable, aunque por debajo de la pipeta. Las hay de capacidades muy
diferentes: 10, 25, 50 y 100 ml.

Copas: Consiste en una copa cnica con una muesca en la parte superior para
permitir el fcil vertido de lquidos, y tiene marcas de graduacin para permitir la
medicin fcil y precisa de los volmenes de lquido.

Buretas: son en realidad pipetas graduadas, tienen una llave de control de paso
del fluido a contener y dispersar. Se emplean para medir volmenes variables.

Frasco cuentagotas: Normalmente se utilizan para contener disoluciones recin


preparadas, se acompaan de cuentagotas para poder facilitar las reacciones de
tipo cualitativo.

Pipetas volumtricas: o de transferencia son fijos por poseer escalas de


graduacin. Poseen un bulbo superior con un aboca y punta de filo terminal.

Pipetas serolgicas o graduadas o terminales: contienen volmenes variables.


Poseen escalas de graduacin en ml con decimales y en su porcin bulbar tienen
un crculo de color en que consta el volumen a contener y dispersar, as como la
temperatura de fabricacin.

Erlenmeyers: son recipientes que se utilizan para medir sustancias de volumen


fijo.

Vasos de precipitacin: de 5 a 5000 ml de capacidad, son recipientes de


contencin con un pico de vaciamiento.

Matraz: Instrumento de laboratorio que se utiliza, sobre todo, para contener y


medir lquidos. Es un recipiente de vidrio de forma esfrica o troncocnica con un
cuello cilndrico.
Balones: con o sin lnea de aforo, son cristales cilndricos para medicin y
preparacin de soluciones.

Tubos de ensayo: sirven para contener sustancias. Las ms utilizadas son de:
10, 12 y 16 ml. Un tipo especial de tubo de ensayo son los tubos de Folin-Wu para
filtrado de protenas.

Gradilla. Material de madera o metal (aluminio), con taladros en los cuales se


introducen los tubos de ensayo.

Escobilla y escobilln. Material fabricado con mechn de pelo natural, segn el


dimetro se utilizan para lavar: tubos de ensayo, buretas, vasos de precipitado,
erlenmeyer, etc..

Frascos lavadores. Recipientes en general de plstico (tambin pueden ser de


vidrio), con tapn y un tubo fino y doblado, que se emplea para contener agua
destilada o desionizada. Se emplea para dar el ltimo enjuague al material de
vidrio despus de lavado, y en la preparacin de disoluciones.

Cristalizador. Puede ser de forma baja o alta. Es un recipiente de vidrio donde al


aadir una disolucin se intenta que, en la mejores condiciones, el soluto
cristalice.
Bao mara cromado: Es un dispositivo circular que permite calentar sustancias
en forma indirecta. Es decir permite calentar sustancias que no pueden ser
expuestas a fuego directo.
EQUIPOS DE LABORATORIO
Centrfugas: por giro a gran velocidad, se logra la deposicin de los cuerpos por
orden de densidades, quedando unos encima de otros, que se separa por

decantacin. Los sedimentos se pueden separar del lquido flotante y es posible


examinarlos.
Espectrofotmetro: es un instrumento analtico delicado y costoso; miden la luz
que es transmitida y no la que es absorbida. Utilizada para el anlisis cuantitativo
de muchas sustancias que son en s mismas coloreadas o que producen color
cuando reaccionan con otras sustancias.
Microscopio: es un equipo que consta de un juego de lentes que permiten al ojo
humano observar detalles que a simple vista sera imposible observar. El uso de
este equipo en los laboratorios clnicos, permite determinar la presencia de
parsitos, larvas, cristales, restos de tejido, componentes de la sangre y otros
cuerpos.
Balanza Analtica: es de vital importancia porque de su uso correcto depender la
exactitud en la preparacin de los reactivos. Antes de usarla se debe asegurar que
este calibrada.

TERMINOLOGA

Metodologa: es el conjunto de procedimientos y normas tcnicas que permiten


obtener un resultado.
Mtodo: es una gua exacta de los diferentes pasos que se debe seguir en el
tratamiento de una muestra para obtener un resultado. Los mtodos son
cuantitativos si expresan un valor, por ejemplo 120 mg/dl de glucosa o
cualitativos cuando se expresa una cualidad, como por ejemplo reaccin de
Benedit positiva para glucosa de orina.
Mtodos calorimtricos: son aquellos que obtienen un resultado, en base de la
intensidad del color que desarrolla un compuesto a investigar en una mezcla
obtenida.
Mtodos enzimticos: corresponden aquellos mtodos que emplean enzimas
para procesos de oxido-reduccin, hidrlisis, isomerizacin, etc., sobre los
componentes de una mezcla y el componente que se investiga por ejemplo:
mtodo enzimtico de la hexocinasa para glucosa. Estos mtodos son mucho ms
exactos y reproducibles en el laboratorio.

Mtodos volumtricos: son aquellos que se basan el volumen que se emplea en


la mezcla de laboratorio y comprenden:
Macromtodo

2ml de volumen total.

Semimicromtodo

1-2 ml

Micromtodo

0.1-1 ml

Ultramicromtodo

0.1 ml

Mtodo definitivo: es aquel que carece de imprecisiones y es aprobado por


organismos internacionales reconocidos
Mtodos de referencia: son mtodos precisos con escaso margen de error.
Espcimen: es todo el material biolgico que se obtiene para uso en laboratorio,
por ejemplo sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, etc.
Muestra: es una parte del espcimen, por ejemplo plasma, es la parte lquida del
espcimen sangre.
Reactivo: cualquier sustancia que interacta con otra en una reaccin qumica
que da lugar a otras sustancias de propiedades, caractersticas y conformacin
distinta.
Solvente: es una sustancia que permite la dispersin de otra sustancia en esta a
nivel molecular o inico.
Soluto: se lo llama as al compuesto de menor proporcin al solvente. El soluto
puede ser lquido o slido, mientras que el solvente nicamente lquido en el agua.
Transmitancia: se define como la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en
determinada cantidad de tiempo.
Absorbancia: cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte
de esta luz es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho
cuerpo.
Exmen: es una observacin detenida que busca reconocer ciertas propiedades,
particularidades o bien para analizar el estado.

EXMENES DE LABORATORIO

Se han descrito dos tipos de exmenes: de rutina y de urgencias.


Los exmenes de rutina son aquellos que pueden ser programados para
determinado da y bajo condiciones especiales ya que la patologa del paciente
permite la espera, por ejemplo PCR, ASTO, Factor Reumatoide o ltex para
discriminar una probable fiebre reumtica.

Los exmenes de urgencia tienen que realizarse de inmediato, ya que la


enfermedad es de suma gravedad y no importa las interferencias que puedan
tener factores exgenos o endgenos, por ejemplo, un infarto cardiaco troponina,
mioglobina, CPK masa, LDH, TGO. Tambin existe un patrn general de
exmenes de urgencias constituidos por hemograma, tipificacin, EMO (elemental
y microscpico de orina), Gram, Urea, glucosa, creatinina, enzimas, electrolitos,
gasometra arterial.

VARIACIONES DE LABORATORIO

Un examen puede presentar variables de cuatro tipos que pueden influenciar en


los resultados:

Variaciones pre-analticas: se refiere a las condiciones previas al examen, es


decir, dieta, edad, sexo, ejercicio fsico, influencia medicamentosa entre las ms
importantes que el mdico y el tcnico de laboratorio debe considerar: es deseable
en ayuno de por lo menos 10-12 horas. El ayuno prolongado puede provocar
alteraciones de las bilirrubinas, glucosa, triglicridos, protenas, etc. Una ingesta
de grasas altera los lpidos, triglicridos. Una dieta hipo proteica provoca alteracin
de la urea, amoniaco. La ingesta de carnes altera los niveles de cido rico,
purinas, uratos. El ejercicio afecta cuantas de CPK, creatinina, fsforo, cido
rico, lpidos totales, hierro, albmina. Respecto a la edad se han descrito valores
mayores de fosfatasa alcalina en los nios y adolescentes, LDH, TGO que los
adultos, mientras que en la vejez es comn observar disminuciones de albmina,
protenas totales y aumentos leves de urea, glucosa, colesterol y fosfatasa
alcalina.

Hay que tomar en consideracin la masa muscular y la talla del sujeto. Un sujeto
con mayor masa muscular presenta diferentes cuantas de creatinina o un obeso
tiene un perfil lipdico aumentado en comparacin con un sujeto delgado.
Respecto al sexo se ha observado variaciones en la creatinina, y en la mujer
depende si es gestante o no gestante. En la mujer de 50 aos se observan
mayores niveles de colesterol, calcio, fsforo y fosfatasa alcalina.

Tambin se observa una variacin en los fumadores en comparacin con los no


fumadores en cuantas del 4% de colesterol, glucosa 10% y triglicridos 20%.

La influencia medicamentosa es vital para interpretar un examen de laboratorio,


por ejemplo la urea se incrementa por anticidos, cefalosporinas, gentamicina,
kanamicina, alfa metildopa. La glucosa se eleva por la accin de corticoides,
adrenalina, furosemida, vitamina C, alfa metildopa. El colesterol se incrementa por
la clorpromacina y disminuye por la heparina y tiroxina. Las enzimas son las ms
afectadas por ejemplo la TGP-TGO se altera por anticonceptivos orales,
andrgenos, ampicilina, lincomicina, tetraciclinas, gentamicina, sulfamidas, etc.

Las variaciones analticas: son aquellas que dependen de los equipos y factor
humano tecnolgico. Es decir, se presentan dentro del tratamiento analtico de
laboratorio. Muestra mal identificadas, uso de anticoagulantes no apropiados, mala
rotulacin de muestras etc.

Variaciones post-analticas dadas por errores en el reporte, cambio de


resultados etc.

Variabilidad biolgica se refiere a aquellas variaciones de una persona en tiempo


y espacio o de un grupo poblacional. La variacin intraindividual o del propio
sujeto obedece generalmente al desarrollo de los ritmos circadianos como medio
de regulacin por ejemplo la secrecin pulstil de prolactina en la mujer que incide
en los resultados de una sola muestra. En casos hay variacin interindividual
como ocurre con las variaciones de hemoglobina que vara segn se trate de una
poblacin del llano o de altura.

MARCHA EXPERIMENTAL

TCNICAS PARA LA OBTENCIN DE SANGRE VENOSA CON JERINGUILLA


HIPODRMICA
Materiales Utilizados:

a)
b)
c)
d)

Tubos de ensayo.
Torunda de algodn-alcohol yodado
Torniquete
Jeringuilla hipodrmica

Marcha Experimental:

a) Rotule previamente los tubos donde va a recolectar las muestras obtenidas


en el que debe constar: nombre, edad, sexo, fecha, nmero de historia
clnica, etc.
b) Elija una vena de buen calibre, mire y verifique al tacto. De preferencia se
utilizan las venas del pliegue del codo y en especial la mediana ceflica en
los adultos. En los nios en el dorso del pie o de la mano.
c) Desinfecte la zona con torunda de algodn-alcohol yodado para lo cual se
emplean dos mtodos: el circular y el perpendicular.
d) Aplique un torniquete con nudo corredizo a una distancia de 8 a 10 cm. del
sitio de extraccin. Concomitantemente se pide que el paciente realice
puo.
e) Verificado el funcionamiento adecuado de la jeringuilla tome la misma con
los dedos ndice y pulgar descansando el dedo medio en el antebrazo del
paciente, formando un ngulo de 45 con la horizontal.
f) Retire el protector de la aguja
g) Atraviese firmemente la piel e introduzca la aguja una distancia aproximada
de 1 a 1.5 cm. con el bisel hacia arriba dentro del lumen de la vena. En este
instante fluye espontneamente la sangre.
h) Aydese con el mbolo para extraer la cantidad deseada de sangre; retire
el torniquete y pida que abra el puo.
i) Coloque una torunda de algodn-alcohol en el sitio de extraccin y retire
lentamente la jeringuilla. Realice una ligera presin para favorecer la
hemostasia.
j) Retire la aguja de la jeringuilla.
k) En el tubo de recoleccin de la muestra, forme un ngulo de 30 con la

jeringuilla; deslice lentamente la sangre por las paredes laterales del tubo
con una presin constante para evitar hemlisis.
l) Obtenida la muestra se procede a realizar las diferentes determinaciones.

PREGUNTAS

1. Investigar cules son las normas internacionales del manejo de los


desechos hospitalarios.
2. Investigar cmo se da el tratamiento de los residuos infecciosos.
3. El ayuno prolongado o la ingesta de comida, la postura corporal y a
congestin venosa, previa a una extraccin sangunea, como modifican los
valores de laboratorio.

SEGUNDA PRCTICA

ESPECMENES, VARIACIONES,
SOLUCIONES, SI
OBJETIVOS
Al trmino de la prctica el estudiante estar en la capacidad de:

1. Entender correctamente los conceptos sobre soluciones y unidades de


medida.
2. Obtener una muestra de sangre venosa mediante la tcnica de tubo al
vacio (vacutainer).
3. Manipular adecuadamente una muestra sangunea, para su anlisis y
utilizacin.
4. Conocer el mecanismo exacto de la centrifugacin sangunea y su
adecuada utilizacin.
SOLUCIONES

Las soluciones, son mezclas homogneas de sustancias en iguales o distintos


estados de agregacin. La concentracin de una solucin constituye una de sus
principales caractersticas.
Dado que en bioqumica es corriente el empleo de soluciones, es dable revisar las
principales de ellas.Algunos ejemplos de soluciones son: agua salada, oxgeno y
nitrgeno del aire, el gas carbnico en los refrescos y todas las propiedades: color,
sabor, densidad, punto de fusin y ebullicin dependen de las cantidades que
pongamos de las diferentes sustancias.

Se denomina soluto a la sustancia que se disgrega o dispersa y disolvente a la


sustancia que constituye el medio de dispersin.

1. SOLUCIONES PORCENTUALES: Expresan el porcentaje de soluto en 100 ml


de solucin final y pueden ser:

a) De volumen en volumen: % (v/v) expresa el nmero de militros de soluto en


100 ml de disolvente (ml/ 100ml) Se usa para disoluciones de lquidos. Por
ejemplo soluciones alcohlicas.

b) De peso en peso: % (p/p) expresan el nmero de gramos de soluto que


existen en 100g de disolucin final ejemplo cido clorhdrico al 36%, significa 36 g
del cido clorhdrico y el resto es agua.

c) Peso en volumen: % (p/v), expresan el nmero de gramos de soluto disueltos


en 100ml de solucin final (g/100ml) independientemente de cual sea el solvente.
Muy utilizada en soluciones de slidos en lquidos.

2. SOLUCIONES MOLARES: Expresa el nmero de moles de soluto que existen


en un litro de disolucin.

MOL: es el peso molecular de una sustancia expresado en gramos. En el


caso del Acido sulfrico ser:

SO4H2 (32+64+2) = 98
Un mol de cido sulfrico es igual entonces a 98 gramos.

MILIMOL, es el peso molecular expresado en miligramos.


Un milimol de cido sulfrico es igual a 0.098 gramos o 98 mg.

MICROMOL, es el peso molecular expresado en microgramos.


Un micromol de cido sulfrico es igual a 0.000098 g o 98 microgramos.

Por consiguiente una solucin molar ser aquella que se prepara aadiendo al
mol de soluto suficiente cantidad de agua hasta alcanzar un litro de solucin final.
Para poder preparar las soluciones molares es necesario conocer el peso
molecular del soluto. El peso molecular del soluto se obtiene sumando los pesos
atmicos de cada elemento qumico que interviene en la molcula.
SO4H2 (32+64+2) = 98
S = 32
O = 16 x 4 = 64
H=1x2 = 2

Para preparar cualquier cantidad de una solucin molar se utiliza la siguiente


frmula:
gr de sustancia=

VxPMxM
1000

V= volumen del problema; PM= peso molecular; M= molaridad de la solucin

3. SOLUCIONES MOLALES: Expresa el nmero de moles de soluto disueltos en


1 kg de disolvente.

4. SOLUCIONES NORMALES: Son las que contienen el equivalente qumico de


una sustancia en un litro de solucin final.

EQUIVALENTE O PESO EQUIVALENTE, es el peso de una molcula o de un


tomo o de un radical (grupo de tomos que reaccionan qumicamente como
unidad) dividido por su valencia.
Cuando la valencia es 1, el equivalente es igual que el peso de la molcula, del
tomo o del radical del que se trate. As:
HCO3 (12+48+1) = 61 g (peso molecular) = 61 g (equivalente) puesto que la
valencia del in bicarbonato es 1 .
Cuando la valencia es 2, 3, etc., el equivalente es la mitad, el tercio, etc., del peso
de la molcula, del tomo o del radical del que se trate As:
SO4 (32 + 64) = 96 g (peso molecular) = 48 g (equivalente). La valencia del in
sulfato es 2.
MILIEQUIVALENTE, es la milsima parte del equivalente o dicho de otra manera
es el peso equivalente expresado en miligramos. Se utiliza para expresar valores
de electrolitos. Por ejemplo: 40 mEq de Na / litro de plasma.

Para transformar mg/100 ml en mEq/l, se aplica la siguiente frmula:

mEq/1 = mg/100 ml x 10
peso equivalente
Para preparar cualquier cantidad de una solucin de molaridad determinada
aplquese la frmula siguiente:

Gramos de la sustancia = V x PM x M
1000
V es el volumen del problema, PM el peso molecular y M la molaridad de la
solucin.

5.- SOLUCIONES OSMOLARES: Son aquellas que contienen un osmol de


sustancia en gramos. OSMOL es la actividad osmtica de una molcula, un in o
un radical. La osmolaridad de una solucin se calcula multiplicando su

concentracin molar por el nmero de iones que forman cada mol. En condiciones
normales la osmolaridad de los lquidos orgnicos se mantiene constante entre
275 y 295 mOsm/l.

EL SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES

Diseado en 1960 por el Comit Internacional de pesos y medidas comprende


unidades bsicas y derivadas.

El Sistema Internacional de Unidades, abreviado SI, tambin denominado Sistema


Internacional de Medidas, es el nombre que recibe el sistema de unidades que se
usa en la mayora de los pases y es la forma actual del sistema mtrico decimal.
El SI tambin es conocido como sistema mtrico, especialmente en las naciones
en las que an no se ha implantado para su uso cotidiano. Las unidades bsicas
son siete:

Magnitud fsica que se toma como


fundamental

Unidad bsica o fundamental

Smbolo

Longitud ( L )

metro

Masa ( M )

kilogramo

Kg

Tiempo ( T

segundo

Intensidad de corriente elctrica ( I )

amperio

Temperatura ( )

kelvin

Cantidad de sustancia ( )

mol

Mol

Intensidad luminosa ( Iv )

candela

Cd

MLTIPLOS Y SUBMLTIPLOS EN EL SI

Algunas unidades bsicas del SI pueden tener distintos mltiplos y submltiplos,


cada uno de ellos con un nombre caracterstico que se forma mediante la unin de
un prefijo al nombre bsico de la unidad.
No tendra mucho sentido expresar la distancia entre la Tierra y la Luna en metros,
ni tampoco sera adecuado utilizar esta unidad para medir el grosor de un cabello.
Puesto que hay medidas tan grandes y tan pequeas, para facilitar los clculos,
las medidas suelen expresarse mediante lo que se conoce como notacin
cientfica.
La tabla adjunta contiene los mltiplos y submltiplos del SI.

Por ejemplo:

kilogramo = 103 gramos = 1000 gramos


miligramo = 10-3 gramos = 1/1000 gramos = 0.001 gramos
decmetro = 10-1 metros = 1/10 metros
= 0.1 metros
MARCHA EXPERIMENTAL

A) EXTRACCION DE SANGRE CON TUBO AL VACIO


El tubo al vaco, comnmente conocido como vacutainer, est reemplazando a la
jeringuilla hipodrmica para la obtencin de muestras de sangre, tanto en los
laboratorios clnicos como cuando se trata de recoleccin de muestras a grupos de
poblacin que son sujetos de investigacin (i.e. escuelas, cuarteles, etc.), puesto
que el tubo permite trasladar fcilmente la muestra recolectada desde el sitio de
obtencin de la misma hacia el laboratorio.
A continuacin un esquema con el procedimiento para extraer sangre con
vacutainer.

B.

SEPARACION DE SUERO Y PLASMA POR CENTRIFUGACION


Suero: Una vez obtenida la muestra de sangre, sta se debe trasvasar a un tubo
de centrfuga seco y limpio, se lo deja coagular a temperatura ambiente o a 37
grados centgrados en incubadora. Una vez formado el cogulo se despegan los
bordes con un estilete y se lo somete a centrifugacin por 10 minutos y a 3000
rpm (revoluciones por minuto) el lquido sobrenadante se retira cuidadosamente
por medio de una pipeta manual o semi-automtica para no contaminar la
muestra. El lquido obtenido se denomina suero y ste, carece de fibringeno Es
un lquido transparente ligeramente opalescente y de tonalidad amarilla; de
obtenerse un lquido quiloso (lechoso por alimentacin reciente, en especial
grasas), rojizo (hemlisis, por destruccin de glbulos) debe repetirse la toma de
la muestra.

Plasma: La sangre obtenida se recibe en un tubo de centrfuga que contenga un


anticoagulante. Se mezcla uniformemente por medio de inversin del tubo en
forma lenta, nunca agitando el tubo con la muestra, se lo deja en reposo por pocos
minutos y se lleva a centrifugacin por un lapso de 5 minutos a 3000 rpm.
El lquido sobrenadante se retira con pipeta con mayor precaucin que el suero;
tiene las mismas caractersticas que el plasma, pero se diferencia de ste porque
el plasma posee fibringeno.

C. TECNICA PARA LA OBTENCION DE SANGRE CAPILAR


a) Elija el sitio de puncin en el dedo medio o anular, o en el borde libre del lbulo
de la oreja y para los nios en el taln.
b) Desinfecte la zona de puncin con torunda de algodn - alcohol yodado y
espere evaporacin espontnea.
c) El sitio que Ud. ha elegido sujtelo entre los dedos pulgar e ndice.
d) Introduzca la lanceta de una sola vez y en la profundidad deseada. Deseche las
dos primeras gotas, que corresponden a lquido tisular.
e) Deje que fluya la sangre libremente, y si no lo hace realice una ligera presin, a
distancia del sitio de puncin.
f) Una vez realizadas las determinaciones, realice hemostasia con una torunda de
algodn - alcohol.

Preguntas
1. De que partes se encuentra formado el vacutainer, cules son los
beneficios que nos puede brindar y en que situaciones podemos utilizarlo.
2. Que es hematocrito y cules son los factores que pueden alterar los niveles
normales.
3. Semejanzas y diferencias entre suero y plasma.

TERCERA PRCTICA

HEMOGLOBINA
OBJETIVOS

Al trmino de la prctica el estudiante estar en la capacidad de:

1. Determinar la concentracin normal de hemoglobina en sangre


2. Manejar adecuadamente el espectrofotmetro
3. Relacionar lo aprendido en la teora con la prctica.

INTRODUCCIN
La hemoglobina es una molcula constituida por el grupo HEM, una ferroporfirina,
que se une a la protena globina constituida por 574 a.a dispuestas en dos
cadenas alfa y dos beta en el adulto. Las cadenas alfa son ms sensibles que las
beta, se estabilizan durante su formacin gracias a la accin de una protena
chaperona denominada AHSP o protena estabilizante de cadena alfa. Respecto al
grupo hem, su principal efecto ejerce en la iniciacin de la traduccin, donde
bloquea la accin del inhibidor de la produccin de globina. Las cadenas
polipeptdicas por su parte, tienen una estructura secundaria constituida por 8
segmentos helicoidales designados con las letras A hasta H, de los cuales resulta
crucial para la unin con el oxgeno, los segmentos E y F.
La hemoglobina una protena tetramrica de los eritrocitos, transporta O 2 hacia los
tejidos, y favorece el transporte de de CO2 y protones hacia los pulmones. El
cianuro y el monxido de carbono son letales porque alteran la funcin fisiolgica
de las protenas Hem citocromo oxidasa y hemoglobina, respectivamente. La

estructura tetramrica de la hemoglobina permite interacciones cooperativas


fundamentales para su funcin. (Robert K. Murray, 2010)
Por otra parte, la sangre normal y completa de los varones contiene una media de
15g de hemoglobina por 100ml de clulas; en las mujeres contiene una media de
14g por 100 ml de clulas. Cada gramo de hemoglobina es capaz de combinarse
con 1,34ml de oxgeno. Luego un varn, puede transportar un mximo de 20ml de
oxgeno combinados con hemoglobina por cada 100ml de sangre y una mujer,
19ml de oxgeno. Los eritrocitos tienen la capacidad de concentrar la hemoglobina
en el lquido celular hasta unos 34g por cada 100 ml de clulas. (Hall, 2011)

ESTRUCTURA, DESARROLLO Y FORMAS DE HEMOGLOBINA


La hemoglobina es una protena con estructura cuaternaria, es decir, est
constituida por cuatro cadenas polipeptdicas: dos y dos (hemoglobina
adulta- HbA); dos y dos (forma minoritaria de hemoglobina adulta- HbA2normal 2%); dos y dos (hemoglobina fetal- HbF). En el feto humano, en un
principio, no se sintetizan cadenas alfa ni beta, sino zeta (z ) y epsilon (x) (Hb
Gower I). Al final del primer trimestre la subunidades han reemplazado a las
subunidades z (Hb Gower II) y las subunidades a los pptidos x. Por esto, la
HbF tiene la composicin 22. Las subunidades comienzan su sntesis en el
tercer trimestre y no reemplazan a en su totalidad hasta algunas semanas
despus del nacimiento.
Las cadenas polipeptdicas alfa contienen 141 aminocidos, las no alfa 146 (b, g,
d) y difieren en la secuencia de aminocidos. Se conoce desde hace dcadas la
estructura primaria de las cuatro cadenas de Hb normales.
La estructura secundaria es muy similar: cada una exhibe 8 segmentos
helicoidales designados con las letras A a la H. Entre ellos se encuentran 7
segmentos no helicoidales.
Cada cadena esta en contacto con las cadenas , sin embargo, existen pocas
interacciones entre las dos cadenas o entre las dos cadenas entre s.
Las cuatro cadenas polipeptdicas de la Hb contienen cada una un grupo
prosttico, el Hem, un tetrapirrol cclico, que les proporciona el color rojo a los
hemates. Un grupo prosttico es una porcin no polipeptdica que forma parte de
una protena en su estado funcional. El tomo de hierro se encuentra en estado de
oxidacin ferroso (+2) y puede formar 5 o 6 enlaces de coordinacin dependiendo
de la unin del oxigeno a la Hb (oxiHb, desoxiHb). Cuatro de estos enlaces se

producen con los nitrgenos pirrlicos de la porfirina en un plano horizontal. El


quinto enlace de coordinacin se realiza con el nitrgeno del imidazol de una
histidina denominada histidina proximal. Finalmente, el sexto enlace del tomo
ferroso es con el O2, que adems est unido a un segundo imidazol de una
histidina denominada histidina distal.
Tanto el quinto como el sexto enlace se encuentran en un plano perpendicular al
plano del anillo de porfirina. La parte porfirnica del Hem se sita dentro de una
bolsa hidrofbica que se forma en cada una de las cadenas polipeptdicas.
La biosntesis de la Hb guarda estrecha relacin con la eritropoyesis. La
expresingentica y el contenido de Hb acompaan la diferenciacin de las
unidades formadoras de colonias eritroides en precursores eritroides. Cada una
de las cadenas polipeptdicas de la Hb cuenta con genes propios: , , , , . Los
genes , son independientes y se ubican en cromosomas distintos. El grupo ,
se localiza en el brazo corto del cromosoma 16 y contiene adems los
codificadores de la cadena z. El grupo se localiza en el brazo corto del
cromosoma 11 e incluye a los genes de las cadenas , , ..
La causa ms comn de las hemoglobinopatas es la mutacin puntual, es decir, la
sustitucin de un nucletido de ADN por otro, lo que modifica el cdigo gentico y
puede inducir un cambio en un aminocido de la
globina resultante.
La traduccin es un proceso ribosmico, en donde
se sintetiza una cadena polipeptdica de acuerdo al
patrn de codones del ARNm. La terminacin se
produce cuando se llega a un codn de finalizacin
UAA, la cadena polipeptdica se completa y se
separa del ribosoma. Los polipptidos libres forman
de inmediato dmeros y tetrmeros
El grupo Hem se sintetiza virtualmente todos los tejidos, pero su sntesis es ms
pronunciada en la mdula sea y el hgado, debido a la necesidad de incorporarlo
en la Hb y los citocromos, respectivamente. Es un factor fundamental en la
regulacin de la tasa de sntesis de la globina. Su principal efecto se ejerce en la
iniciacin de la traduccin, donde bloquea la accin de un inhibidor de la
produccin de globina. Tambin participa en la
transcripcin y el procesamiento del ARNm.
Normalmente los eritrocitos envejecidos se degradan
hacia el da 120 de vida en la mdula sea, el hgado y
el bazo. En algunas circunstancias sin embargo, los

eritrocitos sufren lisis intravascular, liberando Hb, que puede ser txica para los
tejidos a menos que se remueva rpidamente. La haptoglobina (Hp) es una
protena plasmtica que une Hb libre, a travs de la formacin de un complejo HpHb. Este complejo es reconocido a travs de una protena situada en la superficie
de los macrfagos y monocitos denominada CD163, permitiendo su digestin y la
seguida liberacin de hierro y bilirrubina. (Brandan, 2008)

HEMOGLOBINA E INTERCAMBIO GASEOSO


La hemoglobina es el transportador de O 2, CO2 e H+. Sin un transportador de O 2
como la Hb, la sangre tendra que circular 87 veces ms rpido para satisfacer las
necesidades corporales.
La relacin entre la tensin de O2 y la saturacin de la Hb se describe mediante la
curva de saturacin de la OxiHb. La curva de disociacin de la hemoglobina es
sigmoidea. De esta forma, la Hb est saturada 98% en los pulmones y slo 33%
en los tejidos, de manera que cede casi 70% de todo el Oxgeno puede
transportar.
La porcin ms empinada de la curva se encuentra en las zonas de baja tensin
de O2 de los tejidos, lo que significa que disminuciones relativamente pequeas
en la tensin de O2 dan lugar a grandes incrementos en la cesin de O 2.
Cuando la Hb esta oxigenada se dice que esta relajada (R), y cuando la Hb esta
desoxigenada se dice que esta tensa (T).
La afinidad de la Hb por el O2, est influenciada por:

Aumento de la concentracin de H+
Aumento del CO2
Aumento de la temperatura
La disminucin del pH
El 2,3 DPG (difosfoglicerato)
Compuestos orgnicos con fsforo

Provocando un desplazamiento de la curva de saturacin hacia la derecha,


facilitando lacesin de O2. (Brandan, 2008)
La caracterstica ms importante de la hemoglobina es su capacidad de
combinarse en forma laxa y reversible con el oxgeno. Se combina rpidamente en
los pulmones gracias a que existe una alta PO 2 que permite la captacin del gas y

lo libera en los tejidos donde dicha presin es mucho menor. Tambin tiene
capacidad de transporte del CO2 desde los tejidos a los pulmones. Tanto uno
como otro gas, estn sujetos a diferentes leyes de los gases, para cumplir con
este intercambio fisiolgico.

La Ley de Boyle establece que la presin de un gas en un recipiente cerrado es


inversamente proporcional al volumen del recipiente. Esto quiere decir que si el
volumen del contenedor aumenta, la presin en su interior disminuye y viceversa.
Esta ley permite explicar el hecho, de que el aire entre en los pulmones, por que la
presin interna de estos es inferior a la atmosfrica y por lo tanto existe un
gradiente de presin. En forma inversa, el aire es expulsado de los pulmones
cuando estos ejercen sobre el aire contenido a presin superior a la atmosfrica.

La Ley de Charles establece que l volumen de un gas es directamente


proporcional a la temperatura absoluta asumiendo que la presin se mantiene
constante. Cuando el aire entra en los pulmones generalmente ms caliente que el
ambiente se expanden aumentando el volumen pulmonar.

La Ley de Dalton.- por su parte indica que en una mezcla de gases cada gas
ejerce su presin como si los restantes no estuvieran presentes. La presin
especfica de un determinado gas en una mezcla se denomina presin parcial. Por
ejemplo el oxgeno ejerce una determinada presin parcial PO2 y el CO2 su propia
presin PCO2

La Ley de Henry por su parte nos indica que la solubilidad de un gas en el lquido
es proporcional a su presin parcial y a su coeficiente de solubilidad. Esta ley
permite explicar, el porque de los buceadores tienen que salir escalonadamente a
la superficie, para permitir que el nitrgeno disuelto en la sangre se libere al
disminuir la presin. De no hacerlo as, el buceador corre el riesgo de
experimentar los sntomas de descomprensin resultante de las burbujas de gas
que se forman al retornar a la presin atmosfrica, crendose un estado de
narcosis nitrogenada.

FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRA

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las


investigaciones qumicas y bioqumicas, (Shields) es utilizada para el anlisis
cuantitativo de muchas sustancias que son mismo coloreadas o que producen
color cuando reaccionan con otras sustancias. El color de una sustancia se
corresponde con las longitudes de onda de la luz que es transmitida a travs de
dicha sustancia o que es reflejada por ella.
La luz presenta tres bandas de emisin: radiacin ultravioleta comprendida entre
200 a 400 nm, banda visible al ojo humano comprendida entre 400 a 700 nm y la
banda infrarroja entre 700 a 2000 nm registrada por fotodetectores especiales.

Por otra parte, la luz emitida esta constituida por diferentes longitudes de onda, a
la que se denomina luz policromtica, la cual puede ser descompuesta por medio
de prismas o rejillas de dispersin, en varios segmentos conocidos como
espectros de color. Por ejemplo, el violeta se registra entre 400 450 nm, el azul
entre 450 y 500 nm, el verde entre 500 570 nm, el amarillo entre 570 590 nm,
etc.
En la regin del espectro visible, la luz se descompone en colores bsicos y
complementarios. Si hacemos incidir un haz de luz blanca o policromtica sobre
una solucin que absorbe luz a una determinada longitud de onda, esta transmitir
las dems longitudes de onda, apareciendo a la vista del color complementario al
que corresponde la longitud de onda absorbida.

Colorimetra.- La medida de la intensidad de color como ndice de concentracin.


Colorimetros.- Los aparatos en los que se hace la comparacin de colores.
En la prctica lo que se hace es comparar el color de una solucin problema, con
el color de una solucin de concentracin conocida. Por ejemplo una solucin de
cobre al absorber luz blanca, se absorben las radiaciones de longitud entre 500 y
700 nm y solo pasan en el calormetro las radiaciones de longitud entre 450 y 50
nm que son azules.
Fotmetros.-Los procedimientos que se basan en la medida de la intensidad de
color, en trminos de longitud de onda.

La diferencia entre colormetro y fotmetro radica en que el uno mide solo la


intensidad de color y el segundo la longitud de onda de onda de ese color.

Transmitancia.- Es la capacidad de una solucin de transmitir la luz, u en otras


palabras es la relacin entre la luz emergente y la luz incidente. La transmitancia
suele expresarse en trminos de porcentaje, que nos expresan la cantidad de luz
que emerge de una solucin.

Absorbancia.- Por el contrario que la transmitancia, la absorbancia nos expresa la


cantidad de luz que absorbi la sustancia a ser medida.

Un espectrofotmetro esta constituido por los siguientes elemento:


A. Fuente d energa radiante dado por una lmpara de tungsteno de
radiacin continua .
B. Monocromador utilizado para extraer del sistema porciones no
deseables de energa radiante. Se utiliza como monocromador
diversos componentes como filtros de vidrio, prismas y redes de
difraccin, que renen en un solo haz las longitudes de onda.
C. Cubetas de absorcin de cristal o de slice. Pueden ser cilndricas o
cuadradas en los equipos manuales .En los aparatos automatizados
son sustituidos por mangueras de plstico.
D. Detectores de energa radiante en los cuales la energa radiante o
luminosa es transformada en energa elctrica, es decir los fotones
se trasforman en electrones.
E. Dispositivos de lectura. Son pantalla de registro sea de unidades de
transmitancia o absorbancia y en los quipos modernos sale
directamente el valor de medicin.

MARCHA EXPERIMENTAL

Mtodo de Cianometahemoglobina (HiCN)

1. En un tubo de ensayo dispense 5 ml de reactivo de trabajo el cual consta


de ferrocianuro de K y cianuro de K.

2. Con una pipeta Sahly dispense 20ul de sangre total (o control). Enjuague
varias veces la pipeta con la solucin hasta que sta quede completamente
limpia.
3. Mezcle las dos sustancias con ayuda del vrtex
4. Deje reposar la mezcla durante 5 minutos
5. Leer la absorbancia de la muestra y del estndar frente a un blanco de
reactivo a 546nm.
PREGUNTAS

1. Explique brevemente las ms importantes hemoglobinopatas.


2. Enumere las principales precauciones y advertencias ante el uso del
reactivo de trabajo a base de ferrocianuro de K y cianuro de K.
3. Cmo la oxigenacin de la Hemoglobina aumenta la acidez? (Efecto
Bohr).

CUARTA PRCTICA

COAGULACIN
OBJETIVOS

Al terminar la prctica, el estudiante ser capaz de:


1. Conocer las diversas teoras de la coagulacin
2. Comprender las diversas pruebas bioqumicas que evalan la
coagulacin.
3. Determinar la normalidad o anormalidad de sus propias muestras.
INTRODUCCION
El trmino hemostasia significa prevencin de la prdida de sangre. En
circunstancias de ruptura de vasos, se llega a la hemostasia por varios
mecanismos:
1.
2.
3.
4.

Espasmo Vascular
Formacin del tapn plaquetario
Formacin de un coagulo sanguneo
Proliferacin final de tejido fibroso, para cerrar el agujero de
manera permanente.

En la sangre y en los tejidos se han encontrado ms de 50 sustancias


importantes que causan y afectan a la circulacin sangunea: unas que
estimulan la coagulacin (PROCOAGULANTES) y otras que inhiben la
coagulacin (ANTOCOAGULANTES).
El que la sangre se coagule o no depende del equilibro entre estos dos grupos
de sustancias. (Hall, 2011)

TEORAS DE LA COAGULACIN: Se han descrito cuatro teoras para


explicar el mecanismo de la coagulacin:
1. Teora de la cascada de Biggs y Douglas: las molculas que integran la
coagulacin sangunea, circular en estado inerte. La coagulacin se
desencadena por activacin de una molcula a otra en forma secuencial.
Por este sistema se observ que si se toma sangre sin anticoagulante en un
tubo de ensayo la sangre coagula, lo que se debe a la presencia de productos
dentro del plasma que activan la coagulacin a los que se denominan
intrnsecos. Por el contrario si tomamos plasma y le aadimos anticoagulantes,
la coagulacin se desencadena rpidamente por lo que deben existir
mecanismo extrnsecos no presentes en la sangre.
2. Teora del Shunt: varios autores propugnan que parte del sistema intrnseco
puede activarse a partir de la activacin del sistema intrnseco, por lo que solo
existe un solo mecanismo de accin in vivo, el sistema extrnseco.

3. Teora de los complejos: es una reciente teora que presupone que la


coagulacin sangunea tiene lugar por etapas sobre la superficie de la clula,
aunque puede existir una activacin plasmtica lenta. La produccin de
trombina es el resultado de la produccin de varios complejos y su posterior
interaccin.

Existen cuatro complejos definidos por cuatro elementos:

Factor que en su forma inactiva se une a los fosfolpidos de la


membrana plaquetaria mediante enlaces de calcio.
Factor precedente activado tambin unido a la membrana por enlaces
de calcio.
Cofactor que acelera la activacin del factor inactivo por su precedente y
mantiene cercano a ambos.
Doble capa de fosfolipidos de membrana, fundamentalmente
plaquetaria. La activacin plaquetaria determina la aparicin de la
fosfatidilserina y fosfatidiletanolamina procedentes de las capas
profundas de la plaqueta que entonceces en la superficie impulsan la
activacin de los factores de la coagulacin.

PRUEBAS BIOQUMICAS QUE EVALUAN LA COAGULACION

Para el diagnstico de la mayora de los trastornos de la coagulacin, es


esencial una historia clnica completa, pero tambin deben ser realizados una
serie de exmenes de laboratorio para establecer la naturaleza precisa del
defecto hemosttico.
En la historia clnica se debern recabar datos referentes a sangrados
quirrgicos, en cirugas menores, como las extracciones dentarias, o en
cirugas mayores, la presencia de sangrados menstruales exagerados, la
presencia de epistaxis, la historia familiar en cuanto a trastornos de la
coagulacin, y el empleo de medicaciones con posibles efectos sobre la
coagulacin, en particular aspirina y antiinflamatorios no esteroides. En el
examen fsico se debern reconocer la presencia de petequias, anormalidades
vasculares, ictericia, palidez o equimosis, colecciones articulares, etc.

a)

Pruebas que valoran la coagulacin en forma global:


(unne)

Tiempo de coagulacin de Lee Whte (5-15 minutos). Tiempos


superiores indican tendencia hemorrgica y sobre 20 enfermedad
hemorrgica.

Tiempo de Sangra (3 8 minutos): El tiempo de sangrado es una


prueba que sirve para evaluar la integridad de los vasos, plaquetas y la
formacin del cogulo. Posee baja sensibilidad y especificidad debido a
que se ve afectado por mltiples factores desde una mala tcnica de
realizacin del examen, uso de antiplaquetarios o enfermedad
concomitante de la hemostasia primaria (Enfermedad de von Willebrand,
enfermedad de Glanzmann, sndrome de Bernard-Soulier).

Tiempo de coagulacin: Es una prueba poco sensible que indica el


estado de los factores plasmticos que intervienen en la coagulacin
como la globulina antihemoflica, la protrombina y el fibringeno, o que
la dificultan como la antitrombina. Es normal de 5 a 10 minutos.

Resistencia capilar. Se la denomina tambin prueba del lazo o de


Rumpel-Leed. Consiste en apreciar la resistencia o fragilidad de los
capilares del pliegue del codo mediante el recuento del nmero de
petequias que aparecen despus de una compresin con manguito de
presin, de intensidad conocida (100 mm Hg) durante un tiempo
predeterminado de cinco minutos. La aparicin de petequias con una
presin inferior a 100 mm Hg se considera un signo de fragilidad
vascular.
La prueba del lazo es el nico procedimiento disponible en la clnica
para la evaluacin del componente vascular del sistema hemosttico.
(Lovesio)

Retraccin del cogulo. Este mtodo consiste en la valoracin,


cualitativa o cuantitativa, de la intensidad de la retraccin del cogulo de
fibrina, despus de la coagulacin de la sangre en un tubo de vidrio.
La retraccin normal del cogulo, expresada de 0 a +++, est en
funcin, a la vez, del nmero de plaquetas, la tasa de fibringeno y el
porcentaje del hematocrito. (Lovesio)

Tiempo de plasma recalcificado. El tiempo de coagulacin del plasma


citratado y luego recalcificado, que se conoce como tiempo de Howell, es
una prueba simple, pero poco sensible, de la coagulabilidad global. El
tiempo de recalcificacin en tubo de vidrio del plasma normal rico en
plaquetas vara entre 90 y 150 segundos; se encuentra alargado, y llega
a tres a cuatro minutos, en ausencia de plaquetas. (Lovesio)

b)

Pruebas que valoran la integridad de vasos y plaquetas:

Prueba del torniquete: insuflar el manguito de un tensimetro hasta


alcanzar 100 mm Hg por 5 minutos. Esto origina a la aparicin en el
brazo de menos de cinco petequias en un dimetro de 2.5 cm del
antebrazo Un nmero mayor indica aumento de la fragilidad capilar,
disfuncin de pequeos vasos o probable trombocitopenia

Tiempo de hemorragia a mtodo de Duke: La duracin del tiempo de


sangra por el mtodo de Duke, que consiste en la realizacin de una
incisin en el lbulo de la oreja, vara entre 2 y 4 minutos. Se lo
considera alargado cuando es superior a 6 minutos; si oscila entre 4 y 6
minutos deber realizarse otra prueba. (Lovesio)

Recuento de plaquetas 150.000- 350.000/mm3

Prueba de la colgena: plasma mas alcuota de colgena de tendones


Normal 15 minutos.

Prueba de la adrenalina

Prueba de la ristocetina

c) Pruebas que valoran la va intrnseca y va comn de la coagulacin:

ATTP o tiempo parcial de tromboplastina activado. Mide el tiempo


que se requiere para formar el coagulo de fibrina, empezando con la
activacin del factor XII, hasta la conversin del fibringeno en fibrina. El
tiempo vara segn el mtodo de laboratorio.
Recientemente, Reddy y col. han evaluado la importancia del
acortamiento del APTT, observando que los pacientes con un APTT
anormalmente corto (< 23 segundos) tienen un riesgo aumentado de
muerte, trombosis, sangrado y morbilidad total. (Lovesio)

d) Pruebas que valoran la va extrnseca y comn de la coagulacin:

TP o tiempo de protrombina 12-14 segundos Es el tiempo que se


requiere el plasma para coagular, cuando se aade tromboplastina y
calcio.

e) Pruebas que valoran la fibrinolisis

Fibringeno: valor normal 200 - 400 mg/100 ml


Tiempo de trombina: es el tiempo requerido para que el plasma
coagule cuando se aade trombina bovina. Valor normal 15-20
segundos.

En la clnica lo ms usual es l uso de del TP, TTP y fibringeno. No hay que


olvidar que existen muchas otras pruebas consideradas de especialidad.
Ante la presencia de un presunto trastorno hemosttico, es habitual que se
soliciten una serie de pruebas de laboratorio, que debern ser adecuadamente
interpretadas para poder establecer el diagnstico etiolgico ms apropiado.
En este sentido, conviene citar a Penner, referido por Hassouna: El propsito
del laboratorio es proveer respuestas, no nmeros, y aplicar estas respuestas
al diagnstico, el pronstico y la seleccin de la teraputica. (Lovesio)

Ejemplos de interpretacin:

TP normal y TTP prolongado = deficiencia de factores VIII, IX, XI o XII del


mecanismo intrnseco

TP prolongado y TTP normal = deficiencia de factor VII del mecanismo


extrnseco. Ocasionalmente deficiencia leve a moderada de fibringeno,
factores II, V, X del mecanismo comn.

TP y TTP prolongados = deficiencia de fibringeno, factores II, y, X del


mecanismo comn

MARCHA EXPERIMENTAL

MATERIALES

A.

Hipodrmicas de 5ml
Lanceta
Torundas
Torniquete
Gradillas
Guantes quirrgicos
Alcohol
Papel absorbente
PRACTICA DE TIEMPO DE COAGULACION

1. Extraccin de 5ml de sangre venosa.


2. Colocamos la sangre en tres tubos de ensayo a los que previamente
nombramos 1, 2 y 3.
3. En los 2 primeros colocamos 1,5 ml de sangre y en el tubo numero 3
colocamos los 2 ml sobrantes.
4. Dejamos reposar los tubos y tomamos el tiempo que toma en coagularse.
B.

PRACTICA DE TIEMPO DE SANGRIA

1. Realizamos una puncin en el lbulo de la oreja con una lanceta.


2. Con el papel absorbente procedemos a limpiar la sangre producto de la
puncin
3. Tomamos el tiempo en que cesa completamente el flujo de sangre, es decir
cuando el papel ya no se manche.

PREGUNTAS

1. Esquematice el mecanismo intrnseco y extrnseco de la coagulacin.


2. Explique brevemente la accin de los anticoagulantes intravasculares.
1. Enumere los diagnsticos diferenciales en presencia de una
prolongacin del tiempo de sangra.

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