Nurr1:

s
una protena que
pertenece
a
los factores
de
transcripcin intracelulares incluidos dentro de la familia de los receptores
nucleares
pEGFP: mutante de GFP
Nurr1-pEGFP
Pst1 Enzima de restriccin tipo 2
Kpn1 Enzima de restriccin tipo 2
Vector de clonamiento
Bacterias DH competente
kit comercial de la empresa FERMENTAS
Replicn: fraccin de DNA de replicacin independiente.
1.- De qu tamao debera ser el fragmento a obtener en el plsmido
recombinante?
En el mapa de restriccin del prctico 1 seala un peso molecular de 4,7 Kb,
este es escindido por las enzimas restrictivas Kpn1 y Pst1, ya que el plasmidio
cdifica para 347 aminocidos se puede colegir que contiene 1041 pares de
base. Por tanto el fragmento el tamao total aproximado de fragmento DNA
Nurr1 es de 5,8 Kb
El plsmido pEGFP-C3 tiene un tamao de 4800 pb aproximadamente, y al
cortarse por ambas enzimas KpnI y PstI se generan dos fragmentos de 20 pb y
de 4780 pb. El fragmento de DNA Nurr1 tiene un tamao de 5,8 kb
aproximadamente, y las enzimas KpnI y PstI, al cortar en un sitio de restriccin
cada una, generan un trozo de 4800 pb y otro de 1000 pb aproximadamente.
La ligacin se produce entre el fragmento de 4780 pb del pEGFP-C3 y el
fragmento de pNurr1 de 1000 pb, por lo que el plsmidio recombinante debera
ser de 5780 pares de bases, aproximadamente.

2.- Qu otros ensayos realizara usted para determinar que el plsmido

codifica para el fragmento de Nurr1 en marco de lectura con GFP?
Nurr1 es una protena, hasta el momento, exclusiva de la clase mastozoa. Por
lo tanto para determinar que el plsmido codifica para el fragmento Nurr1 en el
marco de lectura con GFP debe realizarse una transfeccin a clulas de otro
mamfero, luego se realizan ensayos con microscopia de inmunofluorescencia,

si las clulas emiten luz verde es seal que posee el gen, en caso contrario es
seal que no codifica para el mismo marco de lectura.

3.- Qu experimentos hara para ver si la protena recombinante se produce?