CDIGO: IIL-LAB-01

UCE- FAC.CCQQ
LABORATORIO
DE PRODUCTOS NATURALES
II

Versin: 01
Fecha de vigencia: Junio 2016

DETECCIN DE CIDOS
FENLICOS EN UN
EXTRACTO VEGETAL

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INFORME DE LABORATORIO
NOTA

Laboratorio 50%
Informe 50%
TOTAL

NMERO: 2
TTULO: Evaluacin de la concentracin de compuestos fenlicos en un extracto vegetal y su relacin
con la actividad antioxidante.
FECHA: 2015-11-23
INTEGRANTES: Noguera N.
Snchez J.

GRUPO: 6

RESUMEN:
El propleo es una sustancia resinosa que las abejas (Apis mellfera) adultas colectan para garantizar la
total asepsia de la colmena, es ampliamente utilizado en la medicina tradicional por sus reconocidas
propiedades teraputicas. En el presente estudio se realiza la determinacin y la cuantificacin de
compuestos fenlicos utilizando una tintura etanlica de propleo comercial y a su vez encontrar la
relacin existente entre la concentracin de compuestos fenlicos presente en el producto con la actividad
antioxidante, mediante la determinacin del contenido de fenoles totales y la actividad antioxidante in
vitro, la cual es determinada empleando las tcnicas de captura de los radicales DPPH (1,1-difenil-2picrilhidracilo). El contenido total obtenido compuestos fenlicos se encuentra en una concentracin de
0,4127 mg/ ml y La actividad antiradicalaria presente en el producto comercial es de 41.33% de
inhibicin del radical DPPH. Los resultados muestran una correlacin lineal positiva entre la capacidad
antioxidante y el contenido de compuestos de naturaleza fenlica. La actividad antioxidante de algunos
propleos indica su potencial como producto nutracutico.
Palabras clave: propleo, compuestos fenlicos, flavonoides, DPPH.
ABSTRACT:
Propolis is a resinous substance that bees (Apis mellifera) adults collected to ensure complete asepsis of
the hive, it is widely used in traditional medicine for its known therapeutic properties. In this study the
identification and quantitation of phenolic compounds is carried out using an ethanolic propolis tincture
commercial and in turn find the relationship between the concentration of phenolic compounds present in
the product with antioxidant activity, by determining the phenol content and total antioxidant activity in vitro,
which is determined using the techniques of capturing the DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radicals.
The total phenolic content is obtained at a concentration of 0.4127 mg / ml and the antiradical activity
present in the commercial product is 41.33% inhibition of DPPH radical.
The results show a positive linear correlation between the antioxidant and content of phenolic
compounds. The antioxidant activity of some propolis indicates its potential as a nutraceutical.
Keywords: propolis, phenolic compounds, flavonoids, DPPH.

CDIGO: IIL-LAB-01

UCE- FAC.CCQQ
LABORATORIO
DE PRODUCTOS NATURALES
II

Versin: 01
Fecha de vigencia: Junio 2016

DETECCIN DE CIDOS
FENLICOS EN UN
EXTRACTO VEGETAL

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INTRODUCCIN:
El propleos es una sustancia resinosa que las
abejas adultas producen para garantizar la
asepsia de la colmena, sellar grietas y
embalsamar intrusos que no puede expulsar por
su tamao. Entre las especies de abejas que
producen propleos estn Apis mellfera,
Melipona
quadrifasciata,
Melipona
compressipes, Tetragonisca angustula y
Nannotrigona sp.
La composicin qumica del propleos es
compleja y variable y depende del lugar de
origen, pero se conoce que posee terpenos,
polisacridos, cidos aromticos, polifenoles,
steres de cidos fenlicos, minerales,
vitaminas y aminocidos.
(Gil &
Perelli, 2012)
Los flavonoides en conjunto con los cidos
fenlicos y sus steres, son denominados
compuestos
fenlicos,
actualmente
considerados los principales componentes
bioactivos del propleos. Ambos absorben
radiacin en la regin UV del espectro
electromagntico protegiendo de la radiacin
solar a los tejidos vegetales ms sensibles.

Entre los principales cidos fenlicos son: el

cafeico, ferlico, cumrico y cinmico, comunes
en los vegetales y en el propleos.
Se han reportado varias propiedades
farmacolgicas, tales como: bactericida,
antiviral, hepatoprotectora, antiinflamatoria,
inmunomoduladoras, antioxidativa y analgsica.
Adems, a algunos steres de cidos fenlicos
se les atribuye propiedades antitumorales.
Estas propiedades antioxidantes minimizan la
peroxidacin lpidica y el efecto de los radicales
libres, contribuyendo de esta manera a reducir
el riesgo de enfermedades cardiovasculares.
(Maldonado & Alvarez, 2004)
OBJETIVO

Determinar la concentracin de fenoles

totales presente en una muestra
(extracto vegetal).
Determinar la capacidad antioxidante
mediante el mtodo de DPPH de una
muestra (extracto vegetal).
Obtener la concentracin de la

actividad antioxidante que se

requiri para el 50% de inhibicin
del radical DPPH.

MATERIALES Y MTODO
Compuestos fenlicos
Para el estudio se utiliz una tintura de propleo comercial al 70%, Los compuestos fenlicos totales se
determinaron mediante el Mtodo de Folin-Ciocalteu. Para ello se trat 0.5 ml de la tintura de propleos
(0.1% v/v) con 3.5 ml de agua ms 0.25 ml del reactivo de Folin -Ciocalteau, se esper por 2 minutos y se
agreg 0.75 ml de carbonato de sodio al 20% y se procedi a dejar reposar en la oscuridad y a
temperatura ambiente durante dos horas. sta ltima se disolvi en etanol al 96% con una relacin 1/5 y
Finalmente se determin la absorbancia a 765nm, mediante un espectrofotmetro.
La concentracin de fenoles totales se obtuvo a partir de la curva de calibracin construida con
concentraciones conocidas de soluciones patrn de cido tnico. Se expresa en porcentaje (mg/g).
Actividad antioxidante
Actividad inhibidora del radical libre 1,1-difenil-2-picril hidracilo (DPPH).
La actividad antioxidante de la tintura se evalu mediante la capacidad captadora del radical DPPH. Un
volumen de 2.9 ml de una solucin etanlica de DPPH con concentracin de 0,5mM se mezcl con 20 L
de la tintura de propleos ms 80 L de etanol al 96% previamente recubierta el tubo con papel de
aluminio, la mezcla se agito a 200rpm durante 30 minutos a temperatura ambiente mediante una
centrifuga. Transcurrido este tiempo se ley la absorbancia a 517 nm en un espectrofotmetro
utilizndose etanol como blanco. El antioxidante, cido ascrbico, se us como control positivo.
Los resultados fueron convertidos a porcentaje de inhibicin y expresados como capacidad antioxidante
en g/ml.
RESULTADOS
Tabla N1. Valores de absorbancia correspondiente a cada estndar.
c.
Tnico
Conc. (mg/ml)

Absorbancia

0,1
0,2
0,5
1
2

0,079
0,161
0,366
0,716
1,388

Tabla N2 Absorbancia de la muestra analizada.

Muestra analizada
Propleo

Absorbancia
0,302

Grfico N1 Concentracin de cido Tnico Vs. Absorbancia.

Absorbancia Vs Concentracin de c. tnico

1.6
1.4
1.2
1
Absorbancia 0.8
0.6
0.4
0.2
0

f(x) = 0.69x + 0.02

R = 1

0.5

1.5

Concentracin c. tnico (mg/ml)

Clculo de fenoles totales

y = 0,6864x + 0,0204

x=

( 0,302 0,0204 )
0,6864

x=0,4127 mg /ml
Actividad antioxidante del Propleo
Tabla N3: Preparacin de los estndares.

Estndar
N

Vitamina C
(ul)

DPPH (ml)

Etanol 96
(ul)

1
2
3
4
5
6
7

1
2
5
10
20
50
80

2,9
2,9
2,9
2,9
2,9
2,9
2,9

99
98
95
90
80
50
20

Clculo de la concentracin de los estndares de vitamina C

1000 mg Vitamina C
5 L=1,67 ppm
3000 L
1000 ml1,67 mg

1 ml

2.5

=1,67 10 mg/ml
=1,67 ug/ml
Tabla N4: Concentracin de cido ascrbico de los estndares

N
Estndar

Concentracin de c.
Ascrbico (ug/ml)

1
2
3
4
5
6
7

0.33
0,66
1,67
3,33
6,67
16,67
26,67

Absorbancias de Abm:
Vit. C + etOH
0,001
0,003
0,003
0,005
0,006
0,008
0,009

Clculo del porcentaje de inhibicin del radical DPPH

%inhibicin del radical DPPH=(1

Absorbancias de
Am: Vit. C + DPPH
+ etOH
0,143
0,132
0,127
0,099
0,088
0,071
0,059

A m A bm
) 100
A DPPH

Clculo del porcentaje de inhibicin del Estndar 1

%inhibicin del radical DPPH= 1

0,1430,001
100
0,225

%inhibicin del radical DPPH=36,89

Tabla N4: Porcentaje de Inhibicin
N
Estndar
1
2
3
4
5
6
7

Concentracin de c.
Ascrbico (ug/ml)
0.33
0,66
1,67
3,33
6,67
16,67
26,67

Absorbancias de
Am: Vit. C + DPPH
+ etOH
0,143
0,132
0,127
0,099
0,088
0,071
0,059

Absorbancias de
Abm: Vit. C +
etOH
0,001
0,003
0,003
0,005
0,006
0,008
0,009

Grfico N2: Absorbancia Vs concentracin de cido ascrbico

%
Inhibicin
36,89
42,67
44,89
58,22
63,56
72,00
77,78

Absorbancia Vs. Concentracin de c. scrbico

0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
Absorbancia
0.06
0.04
0.02
0

f(x) = - 0x + 0.13
R = 0.8

10

15

20

25

30

Concentracin de c. ascrbico (ug/ml)

Grfico N3: Porcentaje de Inhibicin Vs concentracin de cido ascrbico

% Inhibicin Vs Concentracin de cido ascrbico

100.00
80.00

f(x) = 1.4x + 45.38

R = 0.81

60.00

% Inhibicin del radical DPPH

40.00
20.00
0.00

10

15

20

25

30

Conc de c. Ascrbico ug/ml

Clculo del porcentaje de inhibicin del radical DPPH

%inhibicin del radical DPPH= 1

0,1410,009
100
0,225

%inhibicin del radical DPPH =41,33

Clculo de la actividad antioxidante como una concentracin IC50 en g/mL

y = 1,3992x + 42,378

x=

( 41,33 40,378 )
0,8067

x=0,952 ug/ml
DISCUSIONES
El valor de fenoles totales en la muestra de propleo corresponde a una concentracin de

0,4127 mg/ml , la cual se asocia a la reactividad de los compuestos fenlicos presentes

en la tintura, con el reactivo de Folin-Ciocalteau, debido a que estos compuestos presentan una
estructura qumica diferente.
La capacidad antioxidante de nuestra muestra se realiz mediante la estabilidad del radical 1,1difenil-2-picrilhidrazil (DPPH), la cual se atribuye a la deslocalizacin del electrn desapareado,
esta deslocalizacin se visuliza al generarse una coloracin violeta caracterizada por una banda
de absorcin, en solucin etanlica, centrada alrededor de 520 nm.
La actividad antioxidante de este producto apcola se atribuye principalmente a los flavonoides:
acacetina, apigenina, crisina, galangina, kaempferol, naringenina, pinobanksina, pinocembrina y
quercetina.
La descoloracin que se efecta durante la reaccin de los diferentes estndares y la muestra
analizada con una disolucin de DPPH, se debe a que una vez mezclado radical y sustancia
antioxidante, a mayor captacin del radical libre por parte del antioxidante, habr una mayor
disminucin de la absorbancia inicial del radical DPPH, lo que conlleva una decoloracin del
color violeta inicial. Esta diferencia de absorbancia nos indicar la capacidad antioxidante del
extracto en estudio.
La capacidad antioxidante se relaciona con porcentaje de inhibicin, por lo tanto, en la tintura de
propleos el valor obtenido de porcentaje de inhibicin es de 41,33 %, lo que nos indica que en
esta muestra evaluada se encuentran presentes compuestos que puedan estabilizar al radical
DPPH, es decir compuestos que permiten otorgar a la tintura cierta capacidad antioxidante.

CONCLUSIONES
Se determin el contenido de fenoles totales mediante mtodos espectrofotomtricos, y la
actividad antioxidante por el mtodo de DPPH de propleos en el producto comercial.
Se determin la concentracin de fenoles totales presente en la muestra analizada (tintura de
propleo) corresponde a un valor de 0,4127 mg/ ml.
Se determin la capacidad antioxidante presentando un valor de 41.33% que corresponde a la
cantidad de radical DPPH neutralizado por el extracto a una determinada concentracin.
Se determin la concentracin de la actividad antioxidante que se requiri para el 50% de

inhibicin del radical DPPH es de 0.0952g/ ml.

Los valores encontrados cumplen con aquellos establecidos por diferentes normatividades
tcnicas para la fijacin de identidad y calidad de propleos. En general, los propleos con
actividad antioxidante presentan actividad captadora de los radicales DPPH; se encontr una
buena correlacin entre estas actividades y el contenido de fenoles en la tintura comercial.
Los resultados preliminares obtenidos permiten afirmar que el Propleos presenta un elevado
contenido de polifenoles y flavonoides, comparados con los datos reportados en la bibliografa.

BIBLIOGRAFA
Fundazioa, E. (27 de Octubre de 2009). El propoleo ha demostrado ser un producto con
capacidad para ejercer acciones beneficiosas sobre la salud. Obtenido de
http://www.eurekalert.org/pub_releases_ml/2009-10/aaft-r102709.php

Gil, M., & Perelli, A. (Diciembre de 2012). Actividad bacteriosttica y bactericida de la tintura de
propoleo. Obtenido de Revista de la Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad de Carabobo:
http://servicio.bc.uc.edu.ve/fcs/vol16n3/art05.pdf

Gimeno, E. (2004). Compuestos fenlicos: un anlisis de sus beneficios para la salud. OFFARM,
80-84.

Jmenez, A. (28 de Noviembre de 2012). Capacidad de Capatacin del radical DPPH para
evaluar
actividad
antioxidante.
Obtenido
de
http://revistas.um.es/analesvet/article/viewFile/188731/155461

Maldonado, L., & Alvarez, A. (8 de Abril de 2004). Contenido de Fenoles y Flavonoides del
Propoleos
Argentino.
Obtenido
de
http://www.latamjpharm.org/trabajos/23/3/LAJOP_23_3_2_2_5OA9K8V7K9.pdf

Normas IRAM sobre propleo. (17 de Noviembre de 2000). Normas IRAM sobre propleo.
Obtenido
de
INSTITUTO
ARGENTINO
DE
NORMALIZACIN:
http://www.oocities.org/sitioapicola/notas/propoleos-iram.htm

Vargas, R. (2014). Mecanismos involucrados en la actividad antioxidante de propleos. Revista

de Ciencias Biolgicas y de la Salud , 35-37.

ANEXOS
NORMAS IRAM SOBRE PROPLEOS
INSTITUTO ARGENTINO DE NORMALIZACIN
PROPLEOS Y SUS EXTRACTOS
4.2 Extracto de propleos
4.2.1 Requisitos sensoriales
Aroma: Caracterstico de ese producto: resinoso o balsmico, dependiendo de su origen botnico.
Color: Variable, dependiendo de su origen botnico y de su concentracin.
Sabor: Variable, de suave a fuerte, amargo y picante.
4.2.2 Requisitos fsicos y qumicos
Cuantitativos
Extracto seco (o materia seca). Mnimo, 10% (m/v).
Cera. Mximo, 2% del extracto seco (m/m).
Flavonoides. Mnimo, 0,25%(m/m).
Compuestos fenlicos (expresados como cido glico). Mnimo, 0,25% (m/m).
ndice de oxidacin. Mximo, 22 s.
Cualitativos
Espectrograma de absorcin de radiacin ultravioleta. Debe presentar un pico de absorcin entre 270 nm
y 310 nm.
Reaccin con acetato de plomo. Positiva.

Reaccin con hidrxido de sodio: Positiva.

Reaccin de magnesio en presencia de cido clorhdrico. Positiva.
Formacin de emulsin en agua. Positiva
Las prcticas de higiene deben cumplir con la norma IRAM 14102, sobre buenas prcticas de
manufactura en las industrias de alimentos.
(Normas IRAM sobre propleo, 2000)