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Luis Cofre
Garcia

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Cofre Garcia
DN: cn=Luis Cofre
Garcia, o=UNMSM,
ou=Seccion
Epidemiologia, c=PE
Date: 2005.07.16
15:02:55 Z

NUEVOS METODOS PARA

LA DETECCION DE TB-MDR

Luis Asencios Sols, Mg. SP

Laboratorio Referencia Nacional de Micobacterias
CNSP/INS
lasencios@ins.gob.pe

Cmo se produce la resistencia?

u

El mecanismo
resistencia
es
exposicin
de
medicamentos

de aparici n
independiente
la
bacteria

En M. tuberculosis , la
origina por mutacin.

de la
de
la
a
los

resistencia se

FRECUENCIA DE MUTANTES
DROGO-RESISTENTES

ISONIACIDA

1 x 10 66 bacilos.

RIFAMPICINA

1 x 10 88 bacilos.

ESTREPTOMICINA

1 x 10 77 bacilos.

PYRAZINAMIDA

1 x 10 66 bacilos.

ETHAMBUTOL

1 x 10 55 bacilos.

INH - RFP

14 bacilos.
1 x 10 14

TIPOS DE RESISTENCIA CLINICA

Resistencia Primaria (RP)
Resistencia Adquirida (RA)

CAUSAS DE RESISTENCIA ADQUIRIDA

Prescripci
n de esquemas de tratamiento
Prescripcin

inadecuados

No seguir rrgimen
gimen recomendado
Irregularidad

medicamentos

en

la

ingesti
n
ingestin

Intolerancia a drogas.
Resistencia inicial a las drogas

administradas.

Suspensi
n prematura del tratamiento.
Suspensin

de

Drogas Antituberculosas
u

Drogas primera
lnea

Isoniacida
Estreptomicina
Ethambutol
Rifampicina
Pyrazinamida

(H)
(SM)
(E)
(R)
(Z)

Drogas 2da.
Lnea

Ethionamida ( ETH)
Kanamicina (KM)
PAS
Capriomicina (CAP)
Ciprofloxacina (CPR)
Cicloserina
(CS)
Ofloxacina
(OFLOX)

SITIOS DE ACCION

INH

: Act
a sobre ssntesis
ntesis de cidos
cidos mic
licos
Acta
miclicos

a sobre ssntesis
ntesis de ARN polimerasa
RFP: Act
Acta

SM:

Act
a sobre ssntesis
ntesis de prote
nas
Acta
protenas

ribosomales

a sobre ssntesis
ntesis de
EMB : Act
Acta
polisac
ridos de la pared celular
polisacridos

n
PZA: A
An

no se conoce el lugar de acci

n
accin

Importancia de la prueba de sensibilidad

u

Estudios Epidemiolgicos:
Prevalencia de resistencia primaria
Prevalencia de resistencia adquirida

Clnica Individual (fracaso o recada)

Guiar la eleccin de regmenes de

quimioterapia
(perfil de sensibilidad para elegir la continuacin del
tratamiento)
u

IMPORTANCIA CLINICA DE LAS PS

Decisiones de tratamientos adecuados
Reducci n de morbilidad y mortalidad
Reduce:
-Los costos de atencin de la salud

-El costo de que se siga trasmitiendo la

enfermedad

Indicaciones de la prueba de
sensibilidad

Sospecha de fracaso
Recadas tempranas
Contactos de TB-MDR
VIH
Trabajador de salud
TB infantil

TCNICAS PARA LA PRUEBA DE

SENSIBILIDAD

Mtodo de las Proporciones

(convencional)
Mtodo de proporcin en placas
Mtodo Radiomtrico (Bactec 460 TB)
Mtodo Griess
Mtodo MTT

Mtodo de las Proporciones

Esta tcnica consiste en medir la proporci n
de bacilos resistentes que existen en una
cepa.
uConcentracin

crtica: Es la cantidad

precisa de cada droga que debe contener el

medio, para inhibir la poblacin salvaje.

uProporcin

Crtica : Es la proporcin

de mutantes resistentes de una poblacin

bacilar por encima de la cual la cepa es
considerada resistente

Procedimientos del Mtodo de las

Proporciones

Mtodo

Directo: Se realiza a

Mtodo

Indirecto: se realiza a

partir de la muestra clnica.

partir de aislamientos primarios

Prueba de Susceptibilidad Indirecta

Mtodo Directo
Ventajas

Los resultados se informan dentro de las 3

semanas desde el momento en que se
ejecuta la prueba.
La

proporcin

de

bacterias

resistentes

representa mejor la poblaci n bacteriana

del paciente.

Costos

Mtodo Directo
Desventajas

Difcil de calibrar con exactitud el in culo,

puede resultar en un crecimiento excesivo o
insuficiente.
Posible contaminacin de la prueba y no se
puede interpretar los resultados

Los resultados son vlidos solo si el cultivo

es puro

Mtodo INDIRECTO
Ventajas

Es ms probable obtener el inculo

calibrado en forma apropiado, que en la
prueba directa.

Es menos probable la contaminacin

Mtodo Indirecto
Desventajas

El subcultivo puede ocasionalmente alterar

la proporcin de mutantes resistentes a los
medicamentos lo que resulta en una
interpretacin inexacta de medicamento
sensible.

El tiempo de demora de obtencin de los

resultados es mayor que de la prueba
directa.

Mtodo de proporcin de placa

1. Se compara el nmero de colonias que
crecen en un medio que contiene
medicamentos con el nmero que crece en
un medio sin medicamentos.
2. Determina el porcentaje de organismos
resistentes en una poblacin bacteriana.

Factores que afectan los

resultados de la prueba
1. Medio
2. Estabilidad del medicamento
3. Inculo
4. Incubacin

Mtodo Radiomtrico
(Bactec 460 TB)

Mtodo BACTEC 460 TB

Esta tcnica que mide cuantitativamente

14CO

producido durante el metabolismo del

substrato marcado con

14C

presente en el

medio en una escala de 0 a 999.

TEST SENSIBILIDAD
S.I.R.E
0.1 mL
9.9 mL
Dil = 1/100
0.1 mL

CULTIVO 12B
GI = 300 - 500

S
12 B

0.1 mL

12 B 12 B 12 B

12 B
CONTROL
37 C
MINIMO 4 DIAS
LECTURA DIARIA EN BACTEC 460 TB
MAXIMO 12 DIAS
GI 30

BACTEC 460 TB
ventajas

La lectura es automatizada.

Obtencin de resultados (7 a 10 das)

son

m s

rpidos

convencionales

que

los

mtodos

BACTEC 460 TB
desventajas

Costo

Uso de elemento radioactivo.

No se puede observar las caractersticas de

las colonias, pigmentacin en comparacin
con los medios slidos.

Cultivo contaminado o mezcla puede dar

resultados errneos.

Mtodo Griess
Se basa en la determinacin de
la actividad de reduccin de
nitrato en el cultivo de M.
tuberculosis en medio slido L-J
conteniendo NaN03 (1 g/l) con y
sin droga

Cepa M. tuberculosis H37Rv,

sensible a las cuatro drogas
estudiadas.
C

Cepa M. tuberculosis resistente a

INH y sensible al resto de las
drogas.

INH SM EMB RMP

INH

RMP

INH

RMP

Cepa M. tuberculosis
resistente a INH - RMP .

Interpretacin

El reactivo de Griess (HCl+ sulfanilamida

+ n-1-naphthylethylenediamine
dihydrochloride).

Lectura
Resultado negativo: Sensible
(no se observa cambio de color)

Resultado positivo: Resistente

(se observa cambio de color de rojo o
violeta intenso)

Mtodo MTT
3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil -2-tetrazolio

Es una tcnica para la determinacin de la

resistencia a drogas.

El MTT, es un reactivo de xido-reduccin, que

bajo condiciones de reduccin como las
generadas durante la actividad metablica
bacteriana cambia de color amarillo a violeta al
incorporar el reactivo MTT a los pocillos de la
placa.

Este sistema permite la determinacin de la

concentracin inhibitoria mnima para cada
droga antituberculosa.

ESQUEMA DE LA PLACA DEL MTODO

COLORIMTRICO.
Concentraciones de
las drogas de 1ra
lnea.
INH:

1 g/ml

SM:

8 g/ml

EMB:

32 g/ml

RIF:

2 g/ml

Nuevos mtodos de susceptibilidad a

drogas

Revelado de placa con MTT al 6to. Da

de proceso

INTERPRETACIN
Las
micobacterias
metablicamnete
activas,
producen
la
reduccin
del
compuesto dando como resultado el cambio
de color a violeta.

Las bacterias no viables o inhibidas por

los antibiticos, no inducirn el cambio de
color, permaneciendo el colorante en su
forma oxidada, es decir, amarilla.

MUCHAS GRACIAS