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UNIVERSIDAD AUTONMA

METROPOLITANA
UNIDAD IZTAPALAPA

PROFESORA:
MARIA DE LOURDES ESCAMILLA HURTADO

LABORATORIO DE ALIMENTOS FERMENTADOS

CUESTIONARIO DE LA PRCTICA # 4
FERMENTACIN ACTICA.

EQUIPO No. 4

ELABORADO POR:
Barragn Gutirrez Alva Adriana
Barrera Acosta Jacqueline
Fernndez Vela Jos Luis
Meja Lpez Marcelo
Muiz Ramrez Alethia
Rodrguez Duarte Carelia

Fecha de entrega
1 Marzo 2004

I. Presente grficas de formacin de un producto de inters alimentario formado


en un cultivo sumergido aerobio, con dos diferentes niveles de algn parmetro
relacionado con la oxigenacin. Explique con texto y datos numricos el efecto del
parmetro en ese sistema de cultivo (Consulte libros y artculos cientficos, no
pginas de Internet).
INTRODUCIN
La mayora de los procesos de fermentacin son aerobios, por lo que requieren
el suministro de oxigeno como materia prima la oxidacin completa de glucosa.
Adems de esta demanda global de oxigeno, los procesos metablicos se ven
influenciados por la concentracin de oxigeno disuelto en el medio. La relacin entre la
concentracin de oxigeno disueltos y la velocidad de absorcin especifica de oxigeno
Q02 mmoles de O2 consumidos pro g de peso seco de clulas por hora) sigue la ecuacin
tpica de Michaelis-Menten, por lo que para mantener la produccin de biomasa al
mximo, el nivel de oxigeno disuelto debe estar por encima de la concentracin ctrica.
Los niveles de oxigeno disueltos para que la velocidad de formacin de producto sea
ptima pueden ser totalmente distintos a los de las concentraciones crticas.
En general, para mantener la produccin de metabolitos resultantes del ciclo de
los cidos tricarboxilicos parecen ser necesarias concentraciones de oxigeno disuelto
superiores a la concentracin de ctricos, mientras que para la produccin de
metabolitos no provenientes del ciclo de los cidos tricarboxilicos, a partir piruvato,
parecen necesitarse concentraciones de oxigeno disueltos inferiores a la concentracin
de ctricos. Los efectos de los constituyentes del medio y del oxigeno en el crecimiento
y formacin de producto son complejos y estn frecuentemente interrelacionados. La
observacin de que el rendimiento de biomasa de levaduras a partir de azcar es
superior y el de alcohol es inferior en presencia de oxigeno, comparados con los
obtenidos en condiciones anaerobias, se conoce como efecto Pasteur. Sin embargo, a
concentraciones de glucosa superiores a los 250-300 mg- 1 incluso en condiciones
aerobias, las enzimas oxidantes del ciclo de los cidos tricarboxilicos y de los sistemas
citocromo son reprimidos por los catabolitos y el rendimiento de biomasa baja al
convertirse la mayor parte del azcar en alcohol. En este caso, el menor rendimiento de
biomasa se debe a la represin por el catabolito. En las fermentaciones industriales
destinadas a la produccin de metabolitos primarios y secundarios, la sobreproduccin
de biomasa reduce el rendimiento del producto. En la produccin de metabolitos
primarios, si la proporcin de sustrato convertido en biomasa es demasiado grande, el
rendimiento del metabolito es menor.
La produccin de algunos metabolitos parece necesitar una fisiologa celular
atrofiada. La sobreproduccin de biomasa impide el comienzo de la produccin de
metabolitos secundarios. La concentraciones elevadas de biomasa pueden ser
perjudiciales para los procesos de formacin de producto que requieran oxigeno, al
limitar la velocidad de transferencia de este elemento.
Indudablemente, el oxgeno juega un papel importante en la mayora de los
cultivos sumergidos, por consiguiente, la tensin del oxgeno disuelto es de inters en
tecnologa de fermentacin. Sin embargo, la naturaleza de oxgeno, representanta un
requisito esencial as como una toxina potencial. Los organismos aerobios emplean
oxgeno como el aceptador del electrn terminal en fosforilacin oxidativa, el oxgeno,

por consiguiente, sirve como un substrato para la generacin de energa. Sin embargo,
se confrontan organismos aerbicos con los efectos del lado potencialmente txicos de
O2, Esta amenaza es disminuida por familias de enzimas defensivas que incluyen la
catalasa y peroxidasas, as como por antioxidantes, como ascrbico (Bajo las
condiciones fisiolgicas normales, los efectos txicos de ROS son minimizados por
estas enzimas.
Debido a la solubilidad baja de oxgeno y el traslado de masa limitado en
cultivos viscosos, el oxgeno es a menudo uno de los componentes limitantes en la reaccin. As que los cultivos de oxgeno pueden mostrar a una proporcin de crecimiento
disminuida y a la productividad reducida. Con aire oxgeno-enriquecido podra ayudar
potencialmente a evitar o minimizar estos problemas y llevar a productividad mejorada
en reactores convencionales .
PRODUCTO y MTODO USADO:
Una recombinacin de Nger de Aspergillus (B1-D), diseada para producir la
protena del huevo de gallina con respecto ala susceptibilidad de la oxidacin en un
sistema de cultivo sumergido producido por exgeno y perxido, se examin en
trminos de las actividades de las enzimas: catalasa para tener mxima actividad
especfica. Un cultivo de la fase exponencial temprana, introduciendo O 2 alo largo del
experimento teniendo una correlacin con el oxgeno disuelto en procesos donde indica
que para usar el trmino "oxidativos" para abarcar una contestacin de tensin
producida por suma de un qumico (H2O2) o por oxgeno disuelto elevado porque a cada
uno podra ser bastante diferente.
Las condiciones de la cultivo eran como sigue: P H, 4.0 ; la agitacin, 600 rpm,;
proporcin de aeracin, 1 vvm,; y temperatura, 25 0.5C. Se usaron 2M NaOH y 2M
H3PO4 como pH-titrants. Un inoculo de 1010 esporas por litro del medio.
Para los experimentos se agito con H2O2, inoculando 200 mL de medio del synthetic con esporas (2.109 esporas L -1) y incub a 25C y 220 rpm. Despus de 40 h de
crecimiento, se agreg a los cultivos, y 2 h despus de esto se tomaron muestras para su
determinacin .
Para los cultivos por lote se aumento, la concentracin de la disolucin de
oxgeno mantuviendo a un nivel de 50% saturacin con aire oxgeno-enriquecido (25%
de oxgeno por el volumen y 75% de aire a travs de volumen).
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE OXGENO ELEVADO:
El nivel de O2 enriquecimiento del 25% es escogido porque su enriquecimiento a
las concentraciones ms altas (50%) fue encontrado promover la adhesin de los
elementos llevando a una apariencia del morfolgicamente diferente por otro lado un
25% de O2 enriquecido fue encontrado para ser bastante alto sobre 50% de saturacin
area en lote a lo largo del experimento, dejndose a la fase exponencial para
experimentar con aire normal, as el contraste entre las cultivos aireadas y cultivo con
O2 enriquecido debe estar claro.

O2 A LO LARGO DEL EXPERIMENTO


El O2 aire -enriquecido producido inicialmente de 165% de saturacin area
(Fig. 4). Debido al incremento del oxigeno de los cultivos durante la fase exponencial se
dej caer brevemente a 50%. Entonces, se observo un aument firmemente a 155%.
El aumento en 165% de saturacin area que se esperara para que aumente la
produccin del peroxido en las clulas no produjo ningn cambio mensurable en el
crecimiento de la clula (Fig. 4A). El nivel de actividad extracelular fue encontrado
para ser biomasa asociada durante la fase exponencial. En la concentracin de biomasa
de la actividad mxima en el filtrado del cultivo estaba al doble produciendo un mayor
porcentaje en el gas. La actividad extracelular aument ms all. 12 U/mL -1 alcanzando
7 veces la cantidad a la fase correspondiente en el experimento
La actividad empez a aumentar antes que en el mando y la actividad mxima
se obtuvo en la fase temprana declinndose siendo el doble.
Como puede verse en Figura 4B, la actividad especfica disminuy con un nivel
decreciente aumentando ligeramente cuando aument de nuevo.

Figure 4. Los Efectos de gas con 25% O2 ,-enriquecido con aire a lo largo del
experimento en un cultivo del lote (A). Actividad especfica extracelular de la catalasa
(CAT)(U . mg . protena -1), la actividad extracelular de la catalasa y clula de peso seco
vs. Tiempo, actividad especifica intracelular de la catalasa y sper oxidacin dismutasa
(U . mg . CDW-1) y la tensin disuelta del oxgeno
El O2 empleando como un evento enfatizando en la fase exponencial temprana
(CDW = 4.9 gL"1), no cambi el modelo de crecimiento, y no produca un aumento
significativo inmediato en la catalasa intracelular. Sin embargo, el aumento usual de
estas actividades en la fase estacionaria era ms pronunciado que en ambos as como en
el experimento, donde las clulas eran gases con O2 a lo largo del experimento .

Se observ en este estudio que al llega al mximo en que la biomasa era


moderada, en un momento cuando la glucosa fue vaciada. La limitacin de carbn debe
reducir el flujo a travs de la senda glucolitica, y as causa la concentracin de NADH
para disminuir, y que a su vez, efectuar el proceso de reduccin de O 2 en la cadena
respiratoria y, como una consecuencia, la concentracin intracelular de O2 debe subir.
En contraste con el proceso donde se impuso mas O 2 a lo largo del experimento,
se observo un aumento de la catalasa . Esta exposicin al elevado de un cultivo de la
fase exponencial temprana pareca tener un impacto ms alto como enfatizar que el gas
con O2 a lo largo del experimento. Es posible que el metabolismo pueda trabajar ms
eficazmente evitando dao mintiendo la concentracin de O2 alto a lo largo del
experimento.
CONCLUSIONES
Genticamente se alteran las tensiones de comportamiento cuando se confrontan
con la tensin oxidativa. En estas combinaciones el Aspergillus Nger del lote
cultivado, la H2O2 suma continua, salida en la fase temprano-exponencial, la actividad
de la catalasa aumentaba dramticamente, Esto indica que es imprudente usar el
trmino general para tensin causada por la suma de un qumico (H2O2) o por O2
elevados en un cultivo.

II. Presente la informacin comercial de dos fermentadores aerobios de diferente


tipo, y que se encuentren en pginas de Internet. Si la pgina no est en espaol,
presente su traduccin al espaol.

INTRODUCCION:

Caractersticas de las fermentaciones a gran escala.


El recipiente en el que se realiza en proceso industrial se denomina fermentador. El
tamao de los fermentadores puede variar entre el de los pequeos de 5 a 10 litros, a
escala de laboratorio y los enormes de 500.000 litros a escala industrial. El tamao del
fermentador utilizado depende del proceso y de cmo se va a operar. Los procesos que
operan con medio no renovado, requieren fermentadores ms grandes que los procesos
que funcionan de modo continuo o semicontinuo.
Los fermentadores industriales pueden dividirse en dos clases principales: los usados
para procesos anaerbicos y los usados para procesos aerbicos. Los fermentadores
anaerbicos requieren poco equipamiento especial, excepto el necesario para eliminar el
calor que se genera durante la fermentacin, mientras que los fermentadores aerbicos
requieren un equipamiento mucho ms elaborado, para asegurar que se logra el
mezclado y la aireacin adecuados. Como la mayora de los fermentadores son
aerbicos, la presente discusin se va a centrar en los fermentadores aerbicos.
Construccin de un fermentador aerbico. Los fermentadores industriales a gran
escala se construyen casi siempre con acero inoxidable. Un fermentador de este tipo es
esencialmente un gran cilindro cerrado por arriba y por abajo, en el que se han adaptado
varios tubos y vlvulas. Como la esterilizacin del medio de cultivo y la eliminacin del
calor son vitales para el xito de la operacin, el fermentador posee generalmente una
camisa de refrigeracin a travs de la cual se hace pasar vapor o agua fra. En el caso de
fermentadores muy grandes la transferencia de calor a travs de la camisa es
insuficiente y por ello es preciso disponer de serpentines internos a travs de los cuales
se hace circular vapor o agua fra. Una parte importante del fermentador es el sistema de
aireacin. Con equipos a gran escala es muy difcil el proceso de transferencia de
oxgeno desde el gas al lquido y se deben tomar las precauciones necesarias para
asegurar una aireacin adecuada. El oxgeno se disuelve pobremente en agua y, en un
fermentador con una elevada densidad de poblacin microbiana, hay una tremenda
demanda de oxgeno por parte del cultivo. Para asegurar una adecuada aireacin se
utilizan dos instalaciones separadas: un dispositivo de aireacin llamado difusor y un
instrumento para revolver llamado impulsor. El difusor es un instrumento con una serie
de agujeros en un aro de metal o una boquilla, a travs de los cuales se puede hacer
pasar hasta el fermentador aire, esterilizado por filtracin, a gran presin. El aire entra
en el fermentador en forma de diminutas burbujas, a partir de las cuales el oxgeno pasa,
por difusin, al lquido. Un buen sistema de pulverizacin debe asegurar que las
burbujas sean tan pequeas que el paso del oxgeno al lquido se haga fcilmente. En los
fermentadores pequeos, el uso de un solo difusor puede ser suficiente para asegurar
una adecuada aireacin, pero en los fermentadores de tamao industrial, el agitado del
fermentador con una rueda de paletas es esencial. El agitado cumple dos finalidades:

mezcla las burbujas del gas por todo el lquido y mezcla los organismos por todo el
lquido, asegurando de este modo el acceso uniforme de todas las clulas microbianas a
los nutrientes. Uno de los agitadores ms corrientes es una lmina plana o un disco
plano unido a un eje central, que gira a gran velocidad al girar el eje unido a un motor.
Con el fin de asegurar el mximo de mezclado gracias al impulsor, suelen instalarse
deflectores verticalmente a lo largo del dimetro interior del fermentador. Al ser
revuelto por el impulsor, el lquido pasa al lado de las placas dispersadoras y de este
modo se rompe en fragmentos ms pequeos. La dinmica de los fluidos en los
fermentadores es extremadamente compleja, pero es importante para el microbilogo
industrial conocerla a fondo porque la eficacia en el diseo y en el modo de operar el
fermentador dependen de un mezclado adecuado.
El vstago que hace girar el impulsor est unido al motor a travs de otro eje que debe
penetrar en el fermentador desde fuera. Debido a la necesidad de mantener la
esterilidad, es vital que el cierre hermtico que conecta el eje con el motor est
dispuesto de tal manera que los contaminantes no puedan pasar a travs de l.
Control y vigilancia del proceso. Cualquier proceso microbiano debe ser
monitorizado para asegurar que transcurre adecuadamente, pero es especialmente
importante que los fermentadores industriales estn cuidadosamente monitorizados,
dado el gran gasto econmico implicado en ellos. En la mayora de los casos es
necesario medir no solo el crecimiento y la formacin del producto, sino tambin
controlar parmetros ambientales que se van alterando a medida que el proceso
transcurre. Los factores ambientales frecuentemente monitorizados son la temperatura,
la concentracin de oxgeno, el pH, la masa celular y la concentracin del producto.
Los ordenadores juegan un importante papel en el control de los procesos dentro del
fermentador. Durante el proceso de crecimiento y formacin del producto en una
fermentacin a gran escala, si la fermentacin ha de realizarse adecuadamente, es
esencial que los datos sobre el proceso se obtengan mientras el mismo est
transcurriendo. Por ejemplo, puede ser necesario cambiar uno de los parmetros
ambientales a medida que progresa la fermentacin, o bien aadir un nutriente a un
ritmo que equilibre exactamente el crecimiento. El ordenador puede utilizarse para
procesar los datos recin recogidos y luego responder segn las indicaciones de un
programa respecto a cundo y cunto nutriente hay que aadir. De esta manera, el
nutriente se aade cuando se necesita y no antes, evitando as una potencial desviacin
del nutriente desde el producto deseado a otros productos no deseados.
Los ordenadores pueden utilizarse tambin para modelar los procesos de
fermentacin. Utilizando un modelo matemtico, se puede ensayar el efecto de varios
parmetros sobre el crecimiento y el rendimiento del producto, de forma rpida e
interactiva y luego hacer modificaciones en los parmetros para ver cmo afectan al
proceso. De esta manera, se pueden controlar los factores que afectan a los procesos de
fermentacin y realizar estudios ms baratos en el ordenador, en lugar de realizarlos en
las plantas piloto o en las plantas industriales, lo que originara unos gastos muy
considerables.

http://es.geocities.com/joakinicu/apartado12c.htm

INTRODUCCIN
Muchos grupos de investigacin en biotecnologa alimentaria,
tanto del CSIC como de otras universidades y centros, obtienen,
en el curso de sus investigaciones, nuevos iniciadores, enzimas o
herramientas de diagnstico con potencial aplicacin en la
industria agroalimentaria. Desgraciadamente carecen de la
capacidad de produccin necesaria para proporcionar a las
empresas o clientes potenciales, muestras en los volmenes de
fermentacin requeridos para que stas puedan hacer pruebas
industriales. Por ello, en ocasiones no se puede garantizar la
reproducibilidad de los resultados de laboratorio a escala
industrial, lo que puede dificultar algunas transferencias de
tecnologa.
En pases de nuestro entorno, como Holanda o Finlandia, este
problema se ha resuelto creando Unidades de Fermentacin
asociadas a centros pblicos de investigacin. En esta misma
lnea se inscribe la puesta en marcha de la Planta Piloto de
Biotecnologa Agroalimentaria, adscrita al Departamento de
Biotecnologa del IATA que, para su construccin, ha contado con
financiacin otorgada por la CICYT y la Unin Europea (FEDER).

Vista parcial de la planta piloto: fermentadores de 50 y 25 litros.

Productos procesados / Tipos de procesos


La planta piloto de biotecnologa se ha diseado para generar, a
escala piloto, la cantidad suficiente de productos que permitan
realizar estudios de mercado por parte de las empresas
interesadas. Algunos de los productos procesados en la planta
se detallan a continuacin:

microorganismos (bacterias, levaduras y hongos) para


iniciadores en la industria agroalimentaria
aditivos alimentarios especficos (enzimas, colorantes,
aromas)
herramientas de diagnstico molecular para la deteccin
de contaminantes microbianos o fraudes en alimentos
microorganismos probiticos (de utilizacin en salud,
nutricin del consumidor, etc.)
productos farmacuticos microbianos
insecticidas microbianos, productos fitosanitarios
validacin de procesos (biosensores)

La experiencia adquirida en el uso de las instalaciones permite


trabajar en los siguientes tipos de procesos:

manejo de los distintos microorganismos usados como


iniciadores en la industria alimentaria (bacterias lcticas,
levaduras y hongos filamentosos)
produccin por va microbiana de aditivos
diseo de mtodos de purificacin de protenas a partir de
caldos de fermentacin
adaptacin de tcnicas moleculares en alimentos
crecimiento de microorganismos en fermentadores de
hasta 50 litros
optimizacin de procesos a partir de fermentadores de
laboratorio

manipulacin de los caldos de cultivo tanto para la


recuperacin de clulas como para la separacin de
componentes de alto valor aadido

PROCESO DE PRODUCCIN

Control de los fermentadores: Cada fermentador dispone de control en el


propio aparato. Existe una unidad de control remoto para la visualizacin y el
registro del comportamiento de la microbiota durante todo el proceso de
fermentacin que permite la simultaneidad de trabajo de los distintos equipos.
Sistema fermentador: El biorreactor dispone de sensores especficos que
permiten la medida y el control "in situ" de las variables de una forma
precisa y reproducible.

Variables implicadas: Los microorganismos crecern a una


velocidad caracterstica que depende tanto de la composicin del
medio de cultivo como de la temperatura, pH, oxgeno
suministrado y condiciones de la mezcla. Por este motivo, durante
el proceso de produccin se controlan mediante los oportunos
sensores las siguientes variables:

pH
temperatura
presin parcial de oxgeno
produccin de espumas

Aplicaciones
Los productos y procesos desarrollados en la planta de
biotecnologa agroalimentaria pueden aplicarse a los siguientes
sectores:

Industria agroalimentaria: industrias panaderas y de


bollera, industrias lcteas (quesos, yogures), bodegas
(vinos, sidras, cavas), encurtidos, elaborados crnicos, etc.
Salud y nutricin (microorganismos probiticos)
Industria farmacutica y veterinaria (medicamentos
microbianos)
Industria fitosanitaria

ttp://www.csic.es/mostrar/instalaciones/area7/iata1/piloto3.htm
III. Describa con detalle el funcionamiento y la aplicacin de un sensor de oxgeno
en cultivos microbianos, y su sistema de registro y control (consulte libros o
artculos, no pginas de Internet).

TIPOS DE SENSORES:
Sensores del Ambiente Fsico
Los parmetros mayores del proceso fsico que influyen en funcin celular y en
procesos econmicos y qu puede supervisarse continuamente es la temperatura,
presin, velocidad del impulsor, viscosidad del caldo, gas y proporciones de flujo
lquido, y volumen del reactor o masa. En reactores de laboratorio pequeo, la
temperatura y aire que la alimenta en su flujo son normalmente moderadas.La
regulacin es comn en fermentadores ms grandes.
El sensor de temperatura es un dispositivo que exhibe la resistencia como una
funcin de temperatura. Aunque la relacin de temperatura-resistencia es no-lineal, sta
no es una dificultad ya que esta por encima del rango de la temperatura de inters para
la mayora de las fermentaciones (25~45C).
Otros posibles Sensores de temperatura son el sensor de resistencia de platino,
bulbos de termmetros (Hg. en acero limpio).
Estos instrumentos tienen exactitudes en el orden de 1% de mximo y son muy
tiles para las proporciones de flujo menos de 500 L/min. Tambin disponible es los
laminares que fluyen dispositivos que determinan el flujo basados en la diferencia de
gota de presin por un dispositivo de la matriz que divide el flujo total en el mltiple
los flujos del capilar paralelos. El flujo del gas proporciona medidas importantes
FUNCIONAMIENTO Y APLICACIONES:
Medicin qumica de los Sensores
Electrodos de vapor-pueden esterilizarse repetidamente. Los que se usan
ampliamente y son de forma confiable son el electrodo del pH que generalmente es una
sola unidad vidrio-referencia electrodo plan. Un diagrama esquemtico de un electrodo
del pH diseado para la esterilizacin del autoclave los Electrodos para la esterilizacin
debe proporcionar equilibrio de presin durante la esterilizacin o debe apresurar el
funcionamiento del bioreactor. La medida de potencial de redox es posible usando un
platino combinado y electrodo de la referencia. La Combinacin del pH-redox sondas
estn disponibles. Mientras la influencia de pH en cintica bioqumicas se establece
claramente y la importancia fsica de una medida del pH , la interpretacin de redox las
medidas potenciales y bajo la relacin entre el redox potencial y la actividad de la clula
puede ser dificultoso. Una aplicacin prometedora de medidas del redox est
supervisando bajo volmenes de oxgeno disuelto (<1 ppm) en procesos anaerobios (450 mV <Eh <-150 mV) donde los producto de la formacin puede ser bastante sensible
a Eh
Los potencimetros miden la presin parcial (o actividad) del oxgeno disuelto .
En ambos planes, una membrana oxgeno-permeable normalmente al separarles el
electrodo interno del fluido del medio (Fig. 10.1). Tambin proporciona el rasgo comn
de reduccin de oxgeno al ctodo
Ctodo
02 + H20 + 2e

20H

Fig. 1 el diagrama Esquemtico de componentes mayores de una sonda


electroqumica para la medida. (Aplicacin de la computadora a proceso de
fermentacin )
La reaccin al nodo en un electrodo galvnico
nodo galvanizado

Pb

Pb2+ + 2e

Completa la clula de la que una cantidad pequea de corriente se deduce para


proporcionar una medida de voltaje que a su vez se pone en correlacin al flujo del
oxgeno que alcanza la superficie del ctodo. En un tipo del polarografica del electrodo
de oxgeno, un voltaje constante se aplica por el ctodo [Eq. (10.1)] y nodo
nodo polarograficoAg + CL-

AgCL + e

En estado firme, el flujo del oxgeno al ctodo depende en una serie de pasos de
transporte en que los movimientos de oxgenos del lquido de volumen a la superficie de
la membrana exterior, difunde a travs de la membrana, y finalmente a travs de la
solucin del electrolito a la superficie del ctodo donde la reaccin ocurre eficazmente
A la magnitud que los primeros lmites del paso en la proporcin de transporte global, y
as el flujo del oxgeno al ctodo, el rendimiento del electrodo depender de propiedades
fluidas (Ej., viscosidad) y condiciones hidrodinmicas locales cerca del electrodo. Por
esta razn se ha recomendado, por ejemplo, que la velocidad fluida a la punta de un

electrodo del polarografico debe ser por lo menos 0.55 m/del rendimiento sensitivo del
electrodo a transporte de capa de lmite externo tambin puede ser reducido usando una
membrana menos permeable. (Por qu?) Este acercamiento tiene la desventaja de
introducir retraso de tiempo adicional en la contestacin del electrodo instantnea a las
presiones parciales de oxgenos disueltos. El tiempo caracterstico de los Sensores de
oxgenos disueltos es bastante largo (10-100 s). Sin embargo, como mostrado en el
ejemplo siguiente, todava pueden aplicarse para caracterizar la transferencia de masa de
las propiedades del reactor proporcionadas a travs de la influencia de difusin de la
membrana en el anlisis.
Vapor-esterilizable electro qumicamente para disolucin de CO2 la presin
parcial se ha introducido recientemente. El CO 2 producido , por ejemplo, determina
Pco2 midiendo el pH de una solucin de bicarbonato normal qu est separado del
fluido del proceso por una membrana permeable de gas. La calibracin se cumple
midiendo pH despus de la substitucin de una solucin de referencia para la solucin
de bicarbonato.
Otra clase de mtodos para el ensayo en lnea de componentes voltiles y los
gases disueltos es basado en la inmersin de una longitud de tubera, permeable al
componente de inters, en el fluido para ser analizado. El flujo continuo de un gas del
portador a travs de la tubera barre los compuestos que penetran en la tubera a un
dispositivo de anlisis de gas donde la medida se dirige. Este acercamiento padece
retrasos de la medida sustanciales (2-10min) y, por consiguiente, no es ptimo para
supervisar a los transentes rpidos en concentraciones.
Se han desarrollado varios biosensores para el ensayo de componentes
especficos en la fase lquida. stos son basados en acoplar la accin de enzimas
inmovilizadas o clulas con un dispositivo analtico que descubre un producto particular
de la reaccin del biocatalizador. Ejemplos combinar enzima-catalizador estudiando
extensivamente la enzima en que el calor solt por una enzima-catalizada y la reaccin
es descubierta por un calormetro cercano. Resumiendo algunos de los compuestos que
han sido ensayados por este mtodo y las enzimas correspondientes empleadas. Otras
posibilidades para desarrollo del biosensor que usa enzimas inmovilizadas (transistores)
de la enzima en que los productos de la reaccin (por ejemplo, hidrgeno)a los cambios
de la causa en las propiedades electrnicas de los dispositivos transistorizados
conteniendo clulas enteras inmovilizadas. Tabla 1 resume las propiedades de varios
Sensores de la clula.

Tabla 1 Ejemplos de aplicaciones analticas de transmisores de la enzima


(Adaptedfrom B. Danielsson y K. Mosbach," Las Perspectivas para Enzima de las
Sondas en Fermentacin" en "las Aplicaciones de la Computadora en Tecnologa
de Fermentacin"

Sustancia analizada

Enzima Inmovilizadora

Ac. Ascorbico
Albumina (antigeno)
ATP

cido Ascorbico oxidasa


Anticuerpos Inmobilizadores +
Enzimas antigenas
hexokinasa

Colesterol
Etanol

colesterol oxidasa
Alcohol oxidasa

Galactosa
Glucosa

Galactosa oxidasa
Glucosa oxidasa / catalasa

Insulina (antgeno)

Antgeno inmovilizado +
enzima-uni antgeno

Lactosa

lactosa y glucosa /catalasa

Triglicridos

Lipasa

Concentracin
rango o lmite
mmole/L
0.05-0.6
10 -10
1-8
0.03 0.15
0.1 1
0.1 1
0.002 0.8
0.1 1.0 unit/ml
0.05 - 10
0.1 - 5

.
Los requisitos para este mtodo son un agente especfico para el componente a
ser ensayado, disponiendo de un componente adecuadamente etiquetado que compite
para el mismo agente especfico, y un medios de agente de encuadernacin de
separacin de la solucin . Por ejemplo, una fibra de fluorescencia ptico se ha
construido para el anlisis de glucosa por conconavalina A (Con-A)del inmobilizador ,
una protena de frjol de la soya que selectivamente liga azcares, en las superficies
interiores de una cmara. La cmara de separacin de la solucin ensayada por una
membrana de la dilisis permeable a glucosa, La membrana usada es impermeable al
FITC-dextran que compite con glucosa por ligar a Contra-un:
Glucosa + Con-A
Con-A-glucosa
FITC-Dextran + Con-A
Con-A-FITC-dextran
As, la cantidad de dextran, y la intensidad de emisin de fluorescencia moderada, es
una funcin de la concentracin de glucosa de solucin. En interferencia por otro soluto
que tambin liga al agente de especfico (maltosa, sacarosa, y fructosa a Con-A) Con un
sensor que emplea enzimas, clulas, o otro bioquimico es la desactivacin del sensor
durante la esterilizacin del reactor.
Anlisis de gas

La concentracin de CO2 en el gas en la descarga de un reactor de la clula es


indicativa de respiracin o de la actividad fermentativa de los organismos y es uno de
los ms ampliamente utilizados aplicando medidas y controlando un bioreactor de la
clula. CO2 contenida en el bioreactor normalmente es supervisada usando un
espectrofotmetro infrarrojo.
La presin parcial de oxgeno del gas es usando normalmente por un analizador
quitando, la eliminacin de vapor de agua de la muestra virtiendo la proporcin de flujo
que debe controlarse cuidadosamente para las medidas consistentes. Los analizadores
tambin son realmente sensitivos a los cambios pequeos en presin atmosfrica total,
requiriendo la supervisin simultnea de presin baromtrica para la compensacin en
el anlisis de oxgeno. Esto hace necesario la recalibracin en-lnea es una ocurrencia
frecuente con analizadores cuando aplic a fermentaciones.
La cromatografa de gases (GC) puede aplicarse para analizar varios
componentes de gas de descarga que incluye O 2, CO2, CH4 (en generacin de metano
anaerbico), y H2 (de las culturas de Hydrogenomas). Tambin, de la fase de gas, la
presin parcial de componentes voltiles como etanol, acetaldehdo, y cidos del
carboxlico, las medidas de GC proporcionan informacin til sobre el estado de la
fermentacin y en las concentraciones de la fase lquidas de estos compuestos. El
requisito de inyeccin intermitente de muestras, los lmites la utilidad de medidas de GC
por supervisar a los transentes del proceso.

BIBLIOGRAFIA
CUESTIONARIO DE LA PRCTICA # 4
FERMENTACIN ACTICA

1. Bailey. 1986. Biochemical Engineering Fundamentals. Edit. McGrawHill, Inc. New York pag. 658- 670.
2. Owen 1989. Biotecnologia de la fermentacin, Ed, Acribia ,Zaragoza
Espaa pags. 125-127
3. Kreiner M. 2000. Biotechnology and Bioengineering, Volumen 70,
Number 6 , pags. 661-669
4. http://es.geocities.com/joakinicu/apartado12c.htm

14:54

27-02-2004

5. http://www.csic.es/mostrar/instalaciones/area7/iata1/piloto3.htm 18:21
29-02-2004