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Curso a Distancia y Taller

Diagnstico de
Micosis Superficiales

Departamento Micologa
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn
2009

Agradecimientos

Agradecemos a Ivana Maldonado por el suministro de las cepas y las muestras clnicas utilizadas para la
preparacin del presente envo.
Agradecemos muy especialmente a Ruben Abrantes y Julin Fernndez por la preparacin del material
utilizado en la parte prctica del curso.

IMAGEN DE TAPA: Macroconidios de Microsporum canis. Cultivo en lmina, lactrimel, 7 das a 28C,
teido con LF-AA (400X).

CURSO A DISTANCIA Y TALLER DE DIAGNSTICO DE


MICOSIS SUPERFICIALES
Directora del Curso: Lic. Graciela Davel
Coordinador del Curso: Lic. Nicols Refojo
Objetivo: capacitar a los profesionales de laboratorios de los centros de salud de la Red Nacional de
Laboratorios en el diagnstico de las Micosis Superficiales.
Mecnica del curso:
El curso consta de dos instancias: la primera no presencial y la segunda presencial. Tiene una duracin
de 120 horas (60 horas tericas y 60 horas prcticas) y culmina con la realizacin de un taller prctico y
evaluacin final, de 16 horas, luego de lo cual se efectuar la entrega de diplomas.
Este curso se basa en el trabajo de cada uno de los participantes en su institucin de origen, con el
material que le remitimos y el que tiene en su laboratorio:
Instancia no Presencial o Primera etapa: el 6 de julio de 2009 se enviar un CD con la gua del
curso. En la misma se incluy toda la informacin terica necesaria, de un modo resumido y
simplificado, con esquemas, dibujos y fotografas color de los principales agentes causales de micosis
superficiales. Dicho CD va acompaado de preparados microscpicos, muestras clnicas y cepas.
Fecha de inicio del curso: 13 de Julio de 2009.
Para un mejor aprovechamiento del curso se recomienda:
1. Leer la parte terica del manual
2. Realizar la auto-evaluacin prctica y, una vez finalizada, contrastar sus resultados con los de las
respuestas que figuran al final de la gua.
3. Realizar la Evaluacin terica y enviar los resultados por correo electrnico a
nrefojo@anlis.gov.ar o por FAX al 011-4302-5066 int. *30 antes del 21 de agosto de 2009. Esto
nos permitir determinar si las expectativas del curso fueron cumplidas, y si la informacin enviada
fue suficiente.
Instancia Presencial o Segunda etapa: Taller de dos das (3 y 4 de septiembre).
A este taller cada alumno deber asistir con todo el material de trabajo que cre dudas, a fin de
aclararlas. Se realizar una seccin de discusin respecto a las dificultades que se presentaran en las
etapas a distancia y presencial. Asimismo se discutir el ingreso de los participantes al Programa
Nacional de Control de Calidad y a la Red de Laboratorios de Micologa.
Para la aprobacin del curso ser necesario que este Departamento reciba la contestacin a la
evaluacin en la fecha estipulada (21 de agosto) y que el alumno asista al taller donde se
realizar la evaluacin final, previa discusin de la evaluacin prctica, tras lo cual se
entregarn los certificados correspondientes a los alumnos que aprobaron ambas evaluaciones.

ii

AUTORES

Graciela O. Davel
Jefe Departamento Micologa. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. ANLIS Dr. Carlos G.
Malbrn.
Cristina E. Canteros
Jefe Servicio Micosis Profundas. Departamento Micologa. Instituto Nacional de Enfermedades
Infecciosas. ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn.
Nicols Refojo
Servicio Micosis Superficiales y Hongos Miceliales. Departamento Micologa. Instituto Nacional de
Enfermedades Infecciosas. ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn.
Alejandra I. Hevia
Servicio Micosis Superficiales y Hongos Miceliales. Departamento Micologa. Instituto Nacional de
Enfermedades Infecciosas. ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn.

iii

NDICE
Introduccin
El laboratorio y el diagnstico de las micosis superficiales
Medidas de bioseguridad
Clasificacin de las micosis superficiales: Dermatofitosis (Tineas), Dermatomicosis y
Pilonodosis
Infecciones que semejan micosis
Descripcin macroscpica y microscpica de las principales especies patgenas de
dermatofitos
Recoleccin y transporte de las muestras
Indicaciones previas al paciente
Preparacin del sitio para la toma de muestra
Mtodos de obtencin de muestra
Transporte y conservacin de muestras
Eleccin del mtodo de toma de muestra
Esquema del procesamiento y principales estructuras que pueden observarse en el examen
directo de muestras de micosis superficiales
Identificacin de cepas
Consideraciones respecto a la interpretacin e informe de resultados
Descripcin de las tcnicas mnimas para la identificacin de agentes de micosis superficiales.
Pruebas fisiolgicas y bioqumicas para la identificacin de dermatofitos
Pruebas para identificacin de levaduras.
Pruebas bioqumicas para la identificacin de Corynebacterium minutissimum
Reactivos, soluciones y medios de cultivo

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Atlas
Estructuras que se pueden observar en el examen directo de muestras provenientes de
micosis superficiales.
Caractersticas macroscpicas de los principales dermatofitos
Caractersticas macroscpicas de otros agentes fngicos
Estructuras microscpicas caractersticas de los principales dermatofitos agentes de micosis
superficiales.
Pruebas para diferenciar especies de dermatofitos.
Pruebas para identificacin de Candida albicans

Bibliografa

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ANEXOS
Auto-evaluacin prctica (se adjunta material para trabajar en el laboratorio)
Respuestas a la auto-evaluacin prctica
Evaluacin terica

I
IV
XIII

INTRODUCCIN

as micosis superficiales, ampliamente


distribuidas en el mundo, son afecciones
producidas por el parasitismo fngico en
las estructuras crneas de la piel y sus faneras
(pelos y uas). Se excluye de estas infecciones
aquellas donde haya compromiso de mucosas y de
tejidos blandos, que involucran ms all de la
dermis.
Las micosis pasaron a ser un importante
problema sanitario, por lo cual se requiere que
todos los centros de salud y los laboratorios de
diagnstico microbiolgico de cierta importancia,
cuenten con personal capacitado capaz de
diagnosticar patologas de este tipo.
Es el objetivo de este curso capacitar a los
profesionales de los laboratorios de nivel de
complejidades baja e intermedia para que puedan
realizar el diagnstico de las micosis superficiales.
Estas micosis se clasifican en dermatofitosis
(tineas o tias), dermatomicosis (pitiriasis
versicolor,
tinea
negra,
candidiasis
superficiales y otras infecciones por levaduras) y
pilodonosis (piedra blanca, piedra negra).
Las de mayor incidencia en nuestro pas son las
dermatofitosis, las infecciones por levaduras y
pitiriasis versicolor.
El diagnstico micolgico se apoya en tres
puntos:
A. EL CUADRO CLNICO DEL PACIENTE.
Las micosis presentan un cuadro clnico ms o
menos definido, sin embargo muchas veces es
necesario realizar diagnstico diferencial con otras
enfermedades infecciosas o no, debido a la
similitud de su sintomatologa.
B. EPIDEMIOLOGA.
Nicho ecolgico del hongo: los hongos viven
asociados a seres vivos, a sus madrigueras o a los
restos de materia orgnica que ellos producen. En
muchos casos pueden tener reservorios naturales
geogrficamente definidos que son coincidentes
con el rea endmica de la infeccin que
producen.

El estado inmunolgico del paciente: ya sea


por enfermedades de base inmunolgica o por
tratamientos debilitantes o inmunosupresores.
En el caso de las micosis superficiales es necesario
conocer los siguientes datos del paciente:
Trayectoria residencial y ocupacional, a fin de
determinar si visit el rea endmica de alguna
de las micosis.
Hbitos de esparcimiento, para detectar
contacto con el reservorio del agente causal.
Medicacin que recibe o recibi, tanto
antifngica como de otra naturaleza.
Enfermedades que sufre, ya que hay algunas que
estn estrechamente asociadas a las micosis.
Todo esto nos lleva a:
1. Elegir el mtodo adecuado de examen directo
para detectar el agente.
2. Seleccionar los medios y temperaturas de
cultivo ms aptos para el desarrollo del hongo.
3. Interpretar el rol que cumple el agente aislado
cuando este no es un patgeno primario.
4. Sugerir los anlisis complementarios que se
crea conveniente.
C. EL EXAMEN MICOLGICO
En micologa la observacin directa del hongo en
el material tiene valor diagnstico por s sola
debido al carcter de patgeno primario del
microorganismo: ste es el caso de los
dermatofitos. Cuando desarrolla en cultivo un
hongo saprfito o comensal, es necesario
determinar su importancia clnica en base a las
caractersticas del paciente. De esto surge la
importancia de la observacin de la lesin por
parte del miclogo y de la buena toma de muestra
para llegar a un buen diagnstico.
La irradiacin con lmpara de rayos ultravioletas,
filtrados para seleccionar longitudes de onda
correspondientes a 3600 unidades Amstrong o
Lmpara de Wood, es de utilidad para el
diagnstico y control de algunas de las micosis
superficiales. Esta prctica generalmente la realiza
el dermatlogo y tiene un valor diagnstico
diferencial para el laboratorio de micologa.

EL LABORATORIO Y EL DIAGNSTICO DE LAS


MICOSIS SUPERFICIALES
os puntos a tener en cuenta en el anlisis
micolgico son: la recoleccin y transporte
de muestras, el procesamiento de las
mismas, la identificacin de cepas y la
interpretacin de resultados.

cultivo que renen estas condiciones pero el ms


adecuado es el DTM ya que el crecimiento de un
dermatofito produce un viraje del indicador de
pH, facilitado la identificacin y simplificando el
problema del laboratorio.

Los procedimientos para realizar reactivos y


soluciones
se
detallan
en
PRUEBAS
FISIOLGICAS Y BIOQUMICAS PARA LA
IDENTIFICACION DE DERMATOFITOS y
en REACTIVOS Y SOLUCIONES.

Ocasionalmente otros hongos filamentosos


pueden invadir primariamente uas y piel. Estos
hongos saprfitos, pertenecientes a los Gneros
Aspergillus, Scopulariopsis y otros habitualmente no
crecen en medios de cultivo que contienen
cicloheximida como el DTM. Debido a ello es
que las muestras tambin deben inocularse en
medios de cultivo sin cicloheximida pero con
antibiticos. El medio que usamos en el
laboratorio para este propsito es el Lactrimel
porque permite aislar estos hongos saprfitos y en
l los dermatofitos desarrollan sus pigmentos y
estructuras micromorfolgicas caractersticas.

Los elementos fngicos pueden ser reconocidos al


microscopio mediante exmenes directos en
fresco del material, con o sin aclaramiento y/o
tincin con calcoflor o coloraciones similares. El
examen directo en fresco con KOH al 10%-30%
permite observar todos los hongos capaces de
producir micosis superficiales, excepto Malassezia
spp..
Las estructuras que se observan en el examen
directo de estos materiales, el tamao relativo de
las mismas y el posible agente causal a quien
corresponde, se detallan ms adelante.
La coloracin de Azul de Metileno (AM) al 1 % es
eficiente para detectar elementos caractersticos
de Malassezia spp. en las escamas de piel.
La seleccin de los medios de cultivo para cada
espcimen depende del sitio desde donde se
extrajo la muestra, de lo observado en el examen
directo, de la posible contaminacin agregada y
del tipo de agente que se desea aislar.
Las muestras de piel, pelo y fragmentos de uas
son enviadas al laboratorio principalmente para el
aislamiento de dermatofitos. Estos hongos se
aslan fcilmente en medios con antibiticos (que
inhiben el desarrollo de las bacterias que
eventualmente pueden contaminar las muestras) y
con cicloheximida (que inhibe el desarrollo de la
mayora de los hongos miceliales y levaduras
saprfitas que pueden estar tambin presentes
como contaminantes). Existen muchos medios de

Las muestras de lesiones de piel y uas,


especialmente intertrigos y onixis con perionixis
inflamatoria, deben sembrarse adems en medios
de cultivo adecuados para aislamiento de
levaduras ya que pueden afectar estas estructuras
actuando como oportunistas y habitualmente no
crecen en medios con cicloheximida, excepto C.
albicans. El medio semislido de bilis de Feo
permite aislar levaduras de muestras contaminadas
y adems efectuar la identificacin presuntiva de
C. albicans en cultivo naciente.
La pitiriasis versicolor se diagnostica por el
aspecto microscpico que presenta su agente
causal en las escamas de piel y habitualmente no
se cultiva porque Malassezia sp. no crece en los
medios de cultivo de rutina. Si se desea recuperar
el agente etiolgico es necesario utilizar medios de
cultivo que contengan lpidos ya que esta levadura
es lipoflica.
La temperatura de incubacin para el
primocultivo de agentes de micosis superficiales
es 25 C-28 C durante un perodo de cuatro
semanas. Los cultivos para aislamiento de

Malassezia spp. se incuban entre 32 - 37 C,


pudiendo observarse un buen crecimiento a los 5
das.
Todas las muestras deben
cultivarse, hyanse visto o no
estructuras fngicas en los
exmenes directos del material.
Cuando desarrollan levaduras en muestras donde
son normalmente contaminantes, u hongos
ambientales, se asla la cepa y se contina la
incubacin del material hasta la cuarta semana, a
fin de detectar los agentes de micosis
superficiales. Una de las principales causas de
error en el diagnstico de las micosis es descartar
los cultivos cuando se asla Candida sp., Aspergillus
u otros hongos contaminantes ambientales, ya sea
porque errneamente se los considera el agente
causal de la patologa o porque la contaminacin
impide el desarrollo de otros agentes. Esto
generalmente ocurre cuando el cultivo se limita a
medios generales sin antibiticos en los cuales
desarrollan comnmente levaduras y a veces
bacterias induciendo a errores en el informe del
cultivo. Se recomienda incluir siempre un medio
adicionado de cicloheximida a una concentracin
de 400-500 mg/litro a fin de no dar un resultado
falaz.
Cuando en todos los tubos se observa desarrollo
de ms de un hongo contaminante, exgeno o
endgeno, y no queda ningn medio de cultivo
donde continuar el estudio para los agentes de
micosis superficiales, se debe solicitar otra
muestra explicando detalladamente las razones
por las cuales se debe descartar el cultivo o
considerar inadecuada la muestra.

Cada vez que se obtenga desarrollo de uno o ms


hongos en una muestra, se aislarn, purificarn e
identificarn
como
se
indica
en
IDENTIFICACIN DE CEPAS.
La interpretacin de los cultivos, en cuanto a la
significacin clnica de los agentes aislados, es
muy sencilla en el caso de patgenos primarios y
muy difcil cuando se aslan hongos saprfitos o
comensales
de
muestras
habitualmente
contaminadas. Las consideraciones al respecto se
detallan
en
INTERPRETACIN
DE
RESULTADOS.
Los informes para el mdico se realizan en forma
parcial: el primero luego de la observacin
microscpica del material, aunque no se observen
estructuras fngicas. Luego se informa
semanalmente durante el perodo de incubacin, a
menos que se establezca previamente con el
mdico que slo se informar si se observa
desarrollo. Cuando se obtiene desarrollo de
hongos patgenos primarios, u oportunistas que
se correspondan con las estructuras detectadas en
el examen directo se notificar de inmediato,
aunque luego deba confirmarse la identificacin.
En pacientes inmunocomprometidos se deben
informar todos los hongos aislados aunque no se
hayan visto en el examen directo.
Siempre es conveniente aclarar si el aislamiento es
un contaminante habitual exgeno o endgeno de
este tipo de muestra, a fin de evitar el tratamiento
innecesario.
El informe final se enva cuando finaliza el
perodo de incubacin o inmediatamente despus
de concluida la identificacin de las especies
aisladas

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
1. Todos los hongos miceliales aislados de muestras clnicas provenientes de
pacientes bajo sospecha de micosis sistmica deben ser procesados dentro del
equipo de seguridad biolgica Clase II. NUNCA SE TRABAJAN FUERA
DEL EQUIPO hongos aislados de muestras de sangre, esputo, biopsias, orina
y otros fluidos corporales, pus, exudados, secreciones o lquidos de drenaje,
hayan sido enviados o no para diagnstico micolgico.
2. NUNCA OLER LOS CULTIVOS, ni examinarlos abriendo las cajas de
Petri; slo se destapar la caja dentro del equipo de bioseguridad. Si no se
posee un equipo es imprescindible estudiar la cepa agregando al cultivo
solucin fisiolgica estril, introducindola entre el tapn de algodn y la pared
del tubo ayudados de una jeringa y aguja. Se deja reposar el cultivo cubierto de
la solucin unas horas para que decanten las esporas, luego se procede a retirar
el trozo de micelio necesario para realizar el estudio morfolgico o repicar la
cepa. Lo ms conveniente es derivar la cepa al laboratorio de referencia ya que
la humectacin del cultivo disminuye el riesgo pero no lo elimina.

No trabajar con cepas de Histoplasma capsulatum ni Coccidioides spp.


si no se posee equipo de seguridad biolgica clase II.
3. NUNCA PIPETEAR CON LA BOCA, utilizar siempre propipetas.
4. Autoclavar todos los especmenes y cultivos antes de descartarlos y no
conservar ni acumular cultivos innecesarios.
5. Utilizar tubos con tapa a rosca o con tapn de algodn para preparar los
medios para aislamiento primario, subcultivo o conservacin de cepas de
coleccin.
6. Desinfectar diariamente las reas de trabajo
y las mesadas. No dejar acumular polvillo
en las esquinas y/o rendijas donde
puedan acumularse esporas.
7. No tener macetas con plantas en el laboratorio
donde se procesen los especmenes
clnicos o cepas. Los hongos pueden
crecer en la tierra, incluso los patgenos primarios.
8. Evitar que las embarazadas trabajen con
cultivos de C. immitis ya que son ms
susceptibles que el resto de los individuos a este hongo.

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

CLASIFICACIN DE LAS MICOSIS SUPERFICIALES

as micosis superficiales se pueden dividir


en dos grandes grupos: las infecciones
cutneas producidas por especies que
utilizan la queratina y las pilonodosis causadas por
especies que crecen formando concreciones
(granos o ndulos) sobre los pelos. Segn los
autores americanos se dividen en: superficiales,
donde es invadida la superficie externa de la piel y
no hay respuesta celular del husped y las

cutneas,
que
involucran
los
tejidos
queratinizados del cuerpo (capa externa de la piel,
el pelo y las uas).
Junto con estas micosis son tratadas algunas
infecciones bacterianas como tricomicosis axilar y
eritrasma ya que son semejantes a las micosis en
su aspecto clnico y debe hacerse diagnstico
diferencial.

INFECCIONES CUTNEAS

PILONODOSIS (piedras)

(restringidas a las capas crneas muertas, involucran piel, pelos y


uas)

(concreciones en el pelo)

DERMATOFITOSIS (tineas)

DERMATOMICOSIS

(agente: dermatofitos)
Tinea capitis
Tinea corporis
Tinea cruris
Tinea pedis
Tinea unguium
Tinea barbae
Tinea imbricata

(agente: otros hongos)


Pitiriasis versicolor
Candidiasis intertriginosa
Onicomicosis candidisica
Tinea negra

Piedra blanca
Piedra negra

DERMATOFITOSIS (TINEAS o TIAS)


Son infecciones de los tejidos epidrmicos
humanos y animales causados por un grupo de
hongos
queratinoflicos
denominados
dermatofitos. Estos se encuentran distribuidos
taxonmicamente
en
tres
gneros:
Microsporum,
Trichophyton
y
Epidermophyton. A diferencia de otros agentes
de micosis superficiales, estos hongos penetran y
parasitan todos los tejidos queratinizados del
organismo (estructuras crneas de la piel, pelo y
uas), dando lugar a sntomas entre leves y
severos. En pacientes inmunocompetentes, los
dermatofitos son incapaces de invadir los tejidos
subcutneos o ms profundos del cuerpo,
probablemente debido a factores inhibidores del
suero o lquidos corporales.

Las tineas pueden ser desde asintomticas a muy


pruriginosas y dolorosas. Se diseminan por
contacto directo o indirecto interhumano o
animal-hombre.
Los agentes causales de las tineas, los
dermatofitos, son cosmopolitas, pero algunas
especies estn limitadas geogrficamente; muchas
veces tienen huspedes especficos, algunos son
parsitos
humanos
casi
exclusivamente
(antropoflicos), otros son parsitos animales
(zooflicos) y otros son esencialmente
microorganismos del suelo (geoflicos) que
raramente infectan al hombre y los animales.
Debido a las similitudes existentes entre sus
diferentes especies es posible ver que un tipo
clnico de infeccin puede ser causada por

diferentes especies de dermatofitos, o que una


misma especie puede estar involucrada en varios
tipos de enfermedades, cada una de las cuales
tiene una patologa caracterstica.
Las micosis pasaron a ser un importante
problema sanitario, por lo cual se requiere que
todos los centros de salud y los laboratorios de
diagnstico microbiolgico de cierta importancia,

FVICA O
FAVUS.

TRICOFTICA

MICROSPRICA

TINEA CAPITIS: Infeccin fungosa del pelo y cuero cabelludo causada por especies de los gneros
Trichophyton y Microsporum, caracterizada por lesiones eritematosas, escamosas, alopcicas y a veces con
erupciones ulcerosas profundas (querion de Celso).

Tipos clnicos

Distribucin
geogrfica

Asia,
frica,
Europa,
Amrica
del
Norte y Medio
Oriente.
Mundial.
Algunos
agentes tienen
una
distribucin
restringida.

Agentes

T. schoenleinii
T. violaceum
M. gypseum

cuenten con personal capacitado capaz de


diagnosticar patologas de este tipo.
Es el objetivo de este curso capacitar a los
profesionales de los laboratorios de nivel de
complejidades baja e intermedia para que puedan
realizar el diagnstico de las micosis superficiales.

Aspecto de la lesin
Usualmente limitadas a cuero cabelludo.
Producen costras en forma de copa, amarillas,
caractersticas (esctulas) con olor a "ratn". El
proceso produce a menudo grandes cicatrices y
alopecia permanente. En ocasiones puede invadir
la piel lampia. No desaparece llegada la pubertad
y atacan a cualquier edad

Se manifiesta por pequeas lesiones escamosas,


superficiales
crnicas
que
producen
adelgazamiento del pelo. En dichas reas los pelos
T. violaceum
infectados se quiebran al nivel de la superficie del
T. soudanense cuero cabelludo y los muones oscuros persisten
T. verrucosum en los folculos pilosos, lo que da a la lesin el
En Sudamrica T. mentagrophytes aspecto caracterstico de "punto negro". Ocurren
en adultos y nios En adultos se localizan en cara
predominan
y cuello (tambin en brazos). El tipo inflamatorio
Trichophyton
spp.
T. tonsurans y
severo es ms comn que en la tia microsprica
T. mentagrophytes

La distribucin
depende
del
agente.
En
Sudamrica
predomina el
M. canis y M.
gypseum

T. tonsurans

M. canis
M. gypseum
M. audouinii

Comienzan con una ppula eritematosa y


escamosa. Estas ppulas se propagan hacia la
periferia para formar placas; el pelo pierde brillo,
se torna quebradizo, se rompe y cae fcilmente. El
prurito suele ser intenso y con frecuencia aparece
alopecia en la zona infectada. Son muy
contagiosas, curan espontneamente en la
pubertad.
Las infecciones causadas por M. canis y M. gypseum
producen cambios inflamatorios manifiestos,
conocidos como querion de Celso.
Las infecciones causadas por M. audouinii, en
contraste, son lesiones escamosas discretas (M.
audouinii es antropoflico, por lo tanto produce
epidemias de tia). En nuestro pas son ms
frecuentes las tias espordicas, producidas por
M. canis en su gran mayora.

TINEA CRURIS: (Eczema marginado de


Hebra). Infeccin fngica aguda o crnica
localizada en ingle, zona suprapbica, parte
del pliegue perigenital, puede extenderse a
coxis, y regin perianal.

TINEA
IMBRICATA

TINEA CORPORIS: Infeccin


fngica en la piel carente de pelo. Las
lesiones van esde escamosas simples
hasta eritema y granulomas
profundos.

TINEA BARBAE:
Infeccin fngica crnica en
cara y cuello.

Tipos
clnicos

Distribucin
geogrfica

Agentes
T.
mentagrophytes

Europa y
EE.UU, en
regiones donde
se cran y
utilizan bovinos
como alimento.

M. canis
M. gypseum
T. violaceum
T. rubrum
T. verrucosum
T. megninii

T.
mentagrophytes
T. violaceum
Universal.
Frecuentemente
en
climas
tropicales
y
clidos.

M. audouinii
T. verrucosum
M. canis
T. tonsurans
M. gypseum
T. ferrugineum

Aspecto de la lesin

Diferenciar de:

Lesiones escamosas rodeadas de


un borde vesculo pustuloso o de
pstulas foliculares profundas
con pelos quebradizos, sin lustre,
que caen fcilmente.

Infeccin por
microorganismos
pigenos.
Dermatitis por
contacto, alopecia
areata, dermatitis
seborreica,
carbunco y
actinomicosis.

A veces aparecen fstulas que


drenan, pudiendo extraerse pus
de los folculos mediante ligera
presin.

Ppuloescamosa y eritematosa
(bordes bien delimitados), con un
rea central escamosa y periferia
que avanza activamente y suele
estar tachonada de vesculas y
pstulas costrosas. Al agrandarse
pueden convertirse en escamosas
y eritematosas con aspecto de
placa, o eczematizarse y difundir
hacia la periferia en forma
circinada, sin aclaramiento
central. Son pruriginosas. El vello
puede ser invadido y el folculo
actuar como reservorio desde
donde recrudece la infeccin.

Psoriasis, pitiriasis
versicolor,
granuloma anular,
sfilis secundaria
anular,
neurodermatitis
generalizada,
liquen anular
plano.

Oceana,
regiones
de
Lesiones anulares mltiples, con
T. concentricum aspecto de tatuaje.
centro
y
Sudamrica.

Universal

Placas bilaterales de dermatitis


escamosa, de borde policclico
bien delimitado, que se extiende
E. floccosum excntricamente, en su periferia
se ven vesculas o pstulas. La
T.mentagrophytes porcin central adquiere con el
tiempo una pigmentacin parda y
T. rubrum
se halla cubierta de finas escamas
Trichophyton purpreas. Puede haber una ligera
spp
infiltracin de color rojo en los
bordes (eczema marginado)
generalmente muy pruriginosa.
(En raras ocasiones ataca axilas).

Eritrasma,
candidiasis, liquen
simple crnico,
dermatitis por
contacto, psoriasis
y eczema
seborreico.
La luz de Wood
permite diferenciar
tinea cruris de
eritrasma.

TINEA PEDIS: Infeccin


fungosa que invade
especialmente membranas
interdigitales y planta de los pies.
TINEA UNGUIUM :
Invasin de la placa de las uas
por dermatofitos.

Universal.
Frecuente
climas
templados
clidos.

Placas escamosas furfurceas con


aspecto de salvado, vesculas o
vesiculo-pstulas en las plantas,
fisura o epidermis macerada con
T. rubrum
mal olor y hmeda en las
membranas interdigitales (entre el
en
T.
4to. y 5to.y entre el 3ro. y 4to
mentagrophytes dedo), placas hiperqueratsicas
y
var. interdigitale en los talones. Las formas agudas
se deben a infecciones pigenas
de las vesculas. Comnmente
produce reacciones "id" o "ie"
(lesiones distantes del sitio).
T.rubrum
E. floccosum

Universal.

T.
mentagrophytes
T. rubrum
T. mengninii
T. violaceum

Candidiasis
intertriginosa
espacios
interdigitales.

de

Uas
de
color
anormal,
engrosadas y deformes, friables y
quebradizas, separadas del lecho
ungueal, rugosas, cubiertas de
surcos, con abundante detritus
Onicomicosis
epidrmicos y hongos.
Ataca generalmente las uas de candidisica,
psoriasis.
los pies y raramente las manos.
Se puede ver una leuconiquia,
donde la invasin est restringida
a parches u hoyos sobre la
superficie de la ua.

DERMATOMICOSIS

PITIRIASIS VERSICOLOR

Se reserva el nombre de Dermatomicosis a todas


aquellas infecciones cutneas producidas por un
Tipos
Distribucin
Agentes
clnicos
geogrfica

grupo heterogneo de mohos y levaduras


diferentes de dermatofitos.
Sintomatologa

Placas escamosas finamente descamativas, elevadas,


circunscriptas o difusas, irregulares, que puede
agrandarse y fundirse con las adyacentes. En los
individuos de piel blanca los lugares infectados tienden a
ser parduscos y en las pieles oscuras son ms claros. El
Mundial.
sol no broncea la piel infectada como a la piel normal y
Ms comn en Malassezia spp. por lo tanto se detecta luego de la exposicin al sol. Es
climas
asintomtica y generalmente se localiza en el tronco,
tropicales.
aunque puede ocasionalmente afectar al cuello, brazos,
cara, axilas y muslos. Se manifiesta en cualquier edad y
sexo aunque con mayor frecuencia en individuos
jvenes. Una forma rara de pitiriasis versicolor afecta los
folculos pilosos.

INTERTRIGINOSAS

CANDIDIASIS

ONICOMICOSIS POR ONICOMICOSIS


HONGOS MICELIALES
CANDIDIASICA
AMBIENTALES
TINEA NEGRA

Mundial.

Son infecciones primarias o secundarias a lesiones


preexistentes de diversa etiologa en cualquier parte del
cuerpo. Las lesiones son definidas, con reas escaldadas,
Candida spp. y hmedas, con exudados y bordes festoneados. Las
otras especies lesiones ms comunes se ven en pequeos y grandes
de levaduras
pliegues, en zonas del cuerpo donde hay maceracin por
uso de ropas ajustadas o excesiva humedad. Hay que
tener en cuenta que Candida albicans es flora normal de
piel y mucosas y uno de los principales agentes.

Mundial.

La lesin empieza por el borde libre de la ua, con una


invasin primaria de la lmina ungueal. En las formas
Candida spp. y agudas se observa poco engrosamiento, con poco
otras especies detritus y marcada onixis con perionixis. En lesiones
de levaduras
crnicas la placa ungueal cambia de color, se engrosa, se
endurece, presenta estras, puede aparecer detritus y la
perionixis cede.
Scopulariopsis
spp.

Mundial.

La infeccin generalmente es secundaria a uas


distrficas, tanto el comienzo como el agravamiento de
Aspergillus spp. la lesin suelen ser dudosos. El diagnstico debe hacerse
por histopatologa comprobndose fehacientemente el
Fusarium spp. ataque de la lmina ungueal por el agente y a su vez
y
cualquier aislar en cultivo el mismo hongo por lo menos en 3
especie
de oportunidades ya que generalmente se trata de
saprfitos ambientales.
moho.

Se encuentra en
regiones
de
clima
tropical
(zonas costeras
de Venezuela,
Puerto
Rico,
Panam, frica
del Sur, Brasil y
sudeste
de
EE.UU).

Presencia de mculas negras o pardas asintomticas


localizadas especialmente en las palmas de las manos y a
Hortaea
werneckii (antes: veces en pies y otras regiones del cuerpo. Presenta
lesiones planas, lisas, sin bordes inflamados, ni escamas
Exophiala)
ni vesculas.
Cladosporium
El 95-100% de los casos ocurren en pacientes menores
castellanii
de 18 aos, de sexo femenino. No es contagiosa.

PILONODOSIS

PIEDRA
BLANCA

Tipos
clnicos

Distribucin
geogrfica

Agentes

Regiones
tropicales
y Trichosporon
templadas. No beigelii
se han detectado
casos en nuestro (T. cutaneum).
pas.

Sintomatologa
Concreciones blandas, de color amarillento o marrn
claro, alrededor del pelo de la regin axilar, facial, genital
y del cuero cabelludo, preferentemente ataca la barba y
el bigote.

PIEDRA
NEGRA

Zonas tropicales
de frica, Asia y
Amrica Latina. Piedraia hortae
No existe en
nuestro pas.

Ndulos duros de aspecto ptreo que se disponen a lo


largo del tallo del pelo del cuero cabelludo, rara vez se
observan sobre el vello pblico o axilar piloso.

INFECCIONES QUE SEMEJAN MICOSIS

TRICOMICOSIS
AXILAR

ERITRASMA

Tipos
clnicos

Distribucin
geogrfica

Agentes

Sintomatologa

Infeccin bacteriana crnica del


estrato crneo de regiones
axilares, crurales y otras reas
intertriginosas de la piel. Las
Mundial.
lesiones
son
punteadas,
Corynebacterium circunscriptas,
pardorrojizas,
En regiones de
minutissimum
brillantes
y
con
escamas
clima clido y
furfurceas.
Se
realiza
el
hmedo
es (antes: Nocardia
diagnstico
diferencial
con
la
mayor
su minutissima)
tinea cruris utilizando luz de
incidencia.
Wood, con la que se observa una
fluorescencia
que
va
de
anaranjado
a
rojo
coral,
caracterstica del eritrasma.

Diferenciar de:

Tinea
corporis,
eczema,
liquen
simple, dermatitis de
contacto y psoriasis.

Infeccin bacteriana superficial


del vello axilar o pubiano,
blanca,
Ms frecuente Corynebacterium caracterizadas por la formacin Piedra
pediculosis.
en regiones de tenuis
de ndulos amarillos, rojos o
clima tropical.
negros alrededor del tallo piloso.
Mundial.

DESCRIPCIN MACROSCPICA Y MICROSCPICA DE


LAS PRINCIPALES ESPECIES PATGENAS DE
DERMATOFITOS
(La descripcin macro y micromorfolgica se refiere al desarrollo en Agar Sabouraud Glucosado
(ASG) a menos que se especifique otro medio de cultivo)
AGENTE

PATOGENICIDAD

DISTRIBUCIN

Arthroderma otae

Microsporum canis

MUNDIAL

Agente de tinea en
gatos y perros; casi
todas las infecciones
humanas
se
adquieren
por
contagio
de
animales
infectados. Causa en
el hombre tinea
capitis
(tipo
ectotrix) y tinea
corporis.
ZOFILO.

CARACTERSTICAS MACROSCPICAS

CARACTERSTICAS
MICROSCPICAS

ASG: Colonia de crecimiento rpido que presenta


ms de una forma. Algodonosa o lanuda, plana y
blanca, cuando comienza a crecer en el reverso
desarrolla un color naranja brillante en el centro y
amarillo brillante en la periferia.
Con la edad la colonia se torna sedosa y ms tarde
algodonosa (2 a 4 semanas) con micelio areo denso
que se vuelve marrn amarillento a partir del centro
de la colonia. El reverso de la colonia a su vez se
torna marrn anaranjado opaco en los cultivos viejos.
Slo unos pocos aislamientos no presentan reverso
pigmentado.
El tipo disgnico presenta una colonia glabra y
elevada con surcos radiales, de color marrn
amarillento y reverso naranja amarillento.
En agar Lactrimel: la colonia es visible en 3 o 4 das,
aparece como una mancha anaranjada brillante y
luego crece un micelio areo lanudo, blanco-marfilcrema pegado al medio de cultivo. La periferia es
glabra y de borde regular. Luego toma un aspecto
pulverulento, color beige, debido a la produccin de
macro y microconidias. El desarrollo de la colonia
culmina entre la tercera y la cuarta semana. Luego de
este tiempo parte de la colonia puede degenerar
produciendo
penachos
blancos
estriles
(pleomorfismo), el reverso posee un pigmento
amarillo anaranjado intenso y difusible.

Macroconidias:
abundantes, grandes (40150 m x 8-20 m),
fusiformes con un pice
prominente y curvado, de 6
a 15 clulas, de paredes
gruesas
y
verrugosas
(aparecen despus de 7 das
en ASG).
Microconidias: ausentes o
escasas,
piriformes,
claviformes o truncadas,
son
ssiles
y
estn
dispuestas a lo largo de las
hifas. Su tamao es muy
pequeo. Se pueden ver
hifas en raqueta, hifas
pectinadas
y
cuerpos
nodulares.
Clamidosporas:
caractersticas del tipo
disgnico que se asemeja a
M. ferrugineum

ASG: Colonia de crecimiento rpido. Inicialmente


blanca y lanuda, luego se torna granulosa o
pulverulenta (granos finos y gruesos) de color pardo
claro en el centro, con una elevacin central y surcos
radiales, borde irregularmente desflecado.
Otras veces crece plana y pulverulenta, de bordes
desflecados y de color ante a rosado.
El reverso es de color ante rosado a canela,
ocasionalmente rojo en algunas cepas.
Agar Lactrimel: colonia de crecimiento rpido,
plana, apenas elevada en el punto central,
pulverulenta, con bordes irregularmente desflecados,
color champagne con bordes blanquecinos durante la
primera semana; luego integralmente color ante. .El
pigmento no difusible aparece en el reverso de la
colonia despus de la primera semana, como un tinte
amarillento en el centro. Con el tiempo el tono
amarillo del centro de la colonia se intensifica y el
borde se torna color ante.

Macroconidias:
abundantes, elipsoides a
fusiformes con extremos
redondeados (no en punta
como M. canis) de 25-69 m
x 8-15 m; con 4 a 6
clulas,
paredes
moderadamente gruesas (de
1,2 m) equinuladas.
Microconidias:
escasas,
claviformes, uni-celulares,
usualmente ssiles o sobre
cortos pedculos a los lados
de las hifas, pequeas, de
1,7 - 3,3 x 3,3 a 8,4 m.
Pueden observarse tambin
hifas en raqueta, hifas
pectinadas,
cuerpos
nodulares
y
clamidoconidias. Raramente se
observan hifas espirales.

CARACTERSTICAS
FISIOLGICAS

No tiene requerimientos
nutricionales
especiales.
Crece muy bien y con
abundante
esporulacin
sobre granos de arroz a
diferencia de M. andouinii. En
este medio la colonia es
exuberante de color blanco
al principio y tostado
amarillento cuando esporula.
Este dermatofito crece en
agar DTM provocando a
veces poco viraje del
indicador.

DISTRIBUCIN

Arthroderma gypsea
Arthroderma incurvata

Microsporum gypseum

MUNDIAL

Agente de tinea
capitis
(ataque
ectotrix), barbae y
corporis en nios y
adultos.
Se lo ha descripto
causando
tinea
cruris y tinea pedis
en humanos.
Causa tinea en
animales
como
perros y caballos.

No tiene requerimientos
nutricionales especiales.

GEFILO.

11

T. mentagrophytes var. mentagrophytes* (granulosa)


T. mentagrophytes var. interdigitale* (vellosa )

Trichophyton mentagrophytes*

Arthroderma benhaminae Arthroderma vanbreuseghemii

AGENTE

PATOGENICIDAD

CARACTERSTICAS MACROSCPICAS

CARACTERSTICAS
MICROSCPICAS

CARACTERSTICAS
FISIOLGICAS

DISTRIBUCIN

MUNDIAL

Agente de todos
los tipos de tinea
en hombres y
animales.
Se
observa
ataque
tipo ectotrix del
pelo con esporas
pequeas.

ASG: colonias de crecimiento rpido, granulosa


gruesa o fina (pulverulenta), de color crema a tostado.
El reverso de la colonia puede ser amarillo crema,
tostado, marrn o marrn rojizo.
Agar Lactrimel: la colonia aparece a los 3-4 das
como un flculo blanco, crece como un crculo de
color blanco a marfil que rpidamente se cubre con
una costra pulverulenta de color marfil-crema.
El reverso es amarillo y rosado plido, que
posteriormente se funden dando color pardo (caf
con leche), no difusible. La periferia de las colonias o
las paredes de los tubos de cultivo muestran grumos
o grnulos de color blanco y de un dimetro
aproximado de 1 mm.

Macroconidias:
abundantes en la mayora
de las cepas, dispuestas en
racimos,
tienen pared
delgada
y
lisa,
son
alargadas, en forma de
habano o torpedo, de un
tamao aproximado de 2050 m x 4-8 m y de 3-4
clulas.
Microconidias:
abundantes, esfricas y
nacen en racimos sobre un
conidiforo.
Presencia de hifas en
espiral y clamidosporas.

No tiene requerimientos
especiales para crecer, pero
no crecen con nitrato de
amonio como nica fuente
de nitrgeno.
T. mentagrophytes produce
pigmento amarillo-marrn,
es ureasa + y perfora el pelo
"in vitro" a diferencia de T.
rubrum.
No requiere tiamina para
crecer a diferencia de T.
tonsurans.
Puede ser aislado de lesiones
supurativas.

ASG: colonia plana de textura vellosa o flocular y de


color blanco. Con la edad las colonias toman un color
crema amarronado. El reverso de la colonia vara
desde incoloro, amarillo, rosa a marrn rojizo.
Agar Lactrimel: la colonia crece rpidamente (3 o 4
das) y el aspecto es velloso. El anverso presenta un
color amarillo que vira a marrn claro.

Macroconidias:
muy
escasas o ausentes en ASG,
ms abundantes en medios
enriquecidos donde se
presentan
las
mismas
caractersticas
que
las
encontradas en la var.
mentagrophytes.
Microconidias:
abundantes, subesfricas y
nacen en racimos sobre
conidiforos o aisladas a
los lados de las hifas.
Puede tener presencia de
cuerpos nodulares.

Tiene
las
mismas
caractersticas
fisiolgicas
que la var. mentagrophytes.
Generalmente se recupera de
lesiones de tinea pedis
crnica.

ZOFILO.

DISTRIBUCIN

MUNDIAL

Todos los tipos de


tinea en hombres y
animales. El ataque
del pelo es tipo
ectotrix
con
esporas pequeas.
ANTROPFILO.

* Esta especie est siendo revisada en la actualidad. Diversos estudios moleculares proponen elevar las categoras de variedad
a nivel de especie, y as llamar:
 al T. m. var. mentagrophytes: T. mentagrophytes (A. benhaminae/A. Simii): zofilo, suele tener macroconidios e hifas en espiral.
 al T. m. var. interdigitale: T. interdigitale (Arthroderma vanbreuseghemii): antropflo y zofilo, suele perder rpidamente los
macroconidios, suele presentar cuerpos nodulares, puede presentar hifas en espiral.
Esta discusin ser revisada con mayor intensidad durante la etapa presencial.

AGENTE

PATOGENICIDAD

CARACTERSTICAS MACROSCPICAS

CARACTERSTICAS
MICROSCPICAS

CARACTERSTICAS
FISIOLGICAS

ASG: colonia plana, de crecimiento lento, con


depresin central, o compacta e irregular, de textura
aterciopelada, pulverulenta o granular, color amarillo
rosado o marrn rojizo, pigmento amarillo a amarillo
amarronado.
Agar Lactrimel: colonia glabra de crecimiento lento,
plegada, irregular, de color beige, con el tiempo
produce un pigmento marrn claro anaranjado.

Macroconidias: escasas,
de pared delgada lisa,
claviformes, de 12 x 30 m
de 3-9 clulas
Microconidias:
abundantes,
laterales,
habitualmente claviformes,
pero pueden ser de
tamaos y formas variables.
A
veces
presentan
clamidoconidias e hifas en
espiral

No perfora el pelo in
vitro.
Tiene mejor desarrollo en
medios con tiamina, lo que lo
diferencia del
T. rubrum y T. mentagrophytes.

ASG: puede presentar varios tipos de colonias, todas


de crecimiento lento y con un pigmento rojo vivo u
oscuro, difusible o no, en el reverso.
Las colonias de tipo velloso son lanudas con centro
elevado y periferia plana. Las colonias de tipo
granular son de aspecto pulverulento con surcos
radiales
Nota: con el tiempo o los subcultivos la colonia
tiende a cambiar al tipo velloso
Agar Lactrimel: la colonia aparece los 3-5 das
como una mancha morada (rojo vino) sobre la cual
desarrolla luego un flculo blanco. El pigmento del
reverso es difusible y se extiende mas all del
crecimiento areo de la colonia que rpidamente se
vuelve pulverulento, en el borde externo de la colonia
se observa el pigmento moderado y hacia el centro se
ve un halo anaranjado-amarillo verdoso que culmina
en un centro verde. Las colonias viejas se
caracterizan por un oscuro pigmento (casi negro) y
superficie pulverulenta de tinte rosado.

En el tipo velloso las


macroconidias
estn
ausentes y las microconidias
son
escasas,
delgadas, claviformes, de 35 m x 2-3 m y se
disponen lateralmente a los
largo de las hifas.
En el tipo granular las
macroconidias son abundantes, cilndricas, largas y
estrechas,
con
pices
redondeados,
paredes
delgadas y lisas, con 2 a 7
tabiques (3 a 8 clulas). Las
microconidias varan desde
escasas a numerosas.
En agar Lactrimel se
observan microconidias
claviformes dispuestas en
racimos ramificados en
ngulo recto, de tamao
pequeo a medianos. Las
macroconidias son raras,
slo el 3 % de los
aislamientos
producen
abundantes macroconidias.

No tienen requerimientos
nutricionales especiales.
Observaciones: diferenciar
T. mentagrophytes de T. rubrum
es muy difcil si no est
presente el pigmento rojo de
este ltimo. El diagnstico de
T. rubrum se basa en el
pigmento
(que
puede
realzarse en agar glucosa de
LEMCO), la morfologa
microscpica, la inhabilidad
de penetrar pelo "in vitro" y
la prueba de ureasa negativo.
T. rubrum no requiere de
histidina a diferencia de T.
megninii.

ASG: colonia de crecimiento lento, al principio


granulosa, con un pequeo penacho central de
micelio blanco; luego se torna aterciopelada y
pulverulenta, color amarillo intenso o marrn
amarillento, la superficie puede ser plana o
radialmente plegada y con un centro cerebriforme de
pliegues y bordes irregulares. A partir de la tercera
semana generalmente aparecen penachos de
crecimiento blanco (hifas estriles) que se propagan
por el cultivo. El reverso va desde incoloro a marrn.
Agar Lactrimel: colonia de crecimiento lento, a los
3-5 das aparece una mancha mate, color amarilloverdoso y reverso del mismo color, a la semana la
colonia es glabra, chata, pegada al medio de cultivo
de borde irregular y centro blanquecino cubierto de
un fino micelio que le da aspecto pulverulento y el
resto color amarillo. Reverso marrn y borde caqui,
con pigmento que no difunde. A las 4-6 semanas
puede pleomorfizarse.

Macroconidias:
abundantes, claviformes de
paredes lisas, base ancha y
roma y extremo distal
redondeado, con 1 a 4
clulas, que pueden nacer
aisladas o en racimos, al
principio sin tabiques y en
forma de dedos, y cuando
maduran alcanzan un
tamao de 8-15 m x 6-8
m.
No forma microconidias
y las hifas en espiral son
muy raras. En los cultivos
viejos pueden encontrarse
numerosas clamidosporas e
hifas en raqueta.

No tiene requerimientos
nutricionales especiales, lo
que lo diferencia de T.
tonsurans, T. violaceum y T.
megninii.

Trichophyton tonsurans

DISTRIBUCIN

MUNDIAL

Agente causal de
tinea capitis a
punto negro, tinea
corporis y tinea
unguium.
El
ataque del pelo es
endotrix.
ANTROPFILO.

DISTRIBUCIN

Epidermophyton floccosum

Trichophyton rubrum

MUNDIAL

Causa
tinea
corporis,
pedis,
cruris, manum y
onicomicosis, rara
vez invade el pelo
pero si lo hace es
de tipo ectotrix.
Parsito ocasional
de animales.
ANTROPFILO.

DISTRIBUCIN

MUNDIAL

Agente de tinea
corporis,
cruris,
pedis y onicomicosis.
No invade el pelo.
ANTROPFILO.

RECOLECCIN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

a calidad del diagnstico de las micosis


depende de la calidad y cantidad del
material recogido del paciente, de las
condiciones de envo, conservacin, transporte y
procesamiento y de la pericia del miclogo.
Las muestras deben ser representativas,
abundantes,
libres
de
contaminantes
exgenos o endgenos, y de sustancias que
inhiban o alteren la viabilidad de los hongos.
Para asegurar la calidad de la muestra no hay
nada mejor que la toma de muestra la realice el
miclogo, la inocule en los medios de cultivo, y la
procese para la observacin microscpica. En
caso de no ser posible, se debe entrenar al
personal de manera tal que pueda elegir
adecuadamente el sitio ms tpico y activo de la
lesin, y obtener la muestra mediante tcnicas e
instrumental especfico para cada caso. De esta
forma es posible evitar las contaminaciones por

esporas de hongos saprfitos (exgenas) y/o la


microbiota de las diferentes reas del cuerpo
humano (endgenas).
Es conveniente recoger los especmenes en
recipientes estriles, irrompibles, de tamao
adecuado, y conservarlas a temperatura ambiente.
Si las muestras fueron recogidas en un
laboratorio perifrico para ser enviadas a otro
centro es conveniente adjuntar una pequea ficha
con el tipo de material, caractersticas
sobresalientes de la lesin, y edad y sexo del
paciente.
El paciente debe seguir, en lo posible, una serie
de instrucciones detalladas a continuacin. Para
ello conviene explicarle claramente por qu
deben cumplirse esos requisitos y qu sucedera
de no hacerlo, de tal modo que no deje de
cumplirlos por ningn motivo o pueda informar
cuando sucedi algo fuera de lo recomendado.

Indicaciones previas al paciente


 Suspender la medicacin antifngica interna
y/o externa durante un lapso no inferior a
las 72 horas antes de efectuar la toma de
muestra; de igual modo se suspende el uso
de pomadas, talcos, tinturas u otras
sustancias que enmascaren la presencia,
inhiban o alteren la viabilidad de los hongos.

 Lavar la superficie afectada con agua y jabn


blanco no perfumado tres veces por da
durante los tres das previos a la toma de
muestra.
 Las uas deben higienizarse adems con un
cepillo blando y no deben estar pintadas.

Preparacin del sitio para la toma de muestras:


En el momento de la toma de muestra se
desinfecta la zona con alcohol 70 utilizando una
gasa estril. Si se sospecha una infeccin por

levaduras desinfectar con solucin fisiolgica


(SF) ya que estas pueden ser susceptibles a la
accin del alcohol.

Estas indicaciones estn destinadas a garantizar el


estudio micolgico evitando prdidas de tiempo y
dinero.

Siempre es conveniente tener tubos con medios


de cultivo en el lugar de la toma de muestra ya
que a veces el material es escaso y en esos casos
se recomienda realizar directamente la
inoculacin a los medios de cultivo.

En la siguiente foto se observan algunos de los


elementos tiles para la toma de muestra

F
K
I
D
B

C
E

A: cinta adhesiva transparente; B: bistur; C: sindesmtomo (bistur de


hoja pequea, muy til para penetrar en el lecho subungueal); D: pinza
de depilar; E: placa de Petri estril; F: portaobjetos; G: diferentes tipos
de ansa; H: agar Sabouraud; I: agar Lactrimel; J: agar DTM; K:
Mechero.

Mtodos de obtencin de muestras


Para todos los mtodos de toma de muestra es indispensable el uso de guantes como elemento
de proteccin personal.
Existen tres tipos de tcnicas bsicas de recoleccin de especmenes para estudio de micosis
superficiales:
A - Cinta adhesiva transparente: esta tcnica consiste en cortar un fragmento de cinta adhesiva
transparente de aproximadamente 10 cm de largo, que se aplica con
la cara engomada sobre la lesin y se presiona, raspando con el
borde lateral de la ua, la superficie de la cinta que cubre la zona
afectada para que se adhieran las escamas. La cinta se retira
obtenindose as la impronta de la lesin. A continuacin se aplica la
cinta por los extremos sobre una lmina portaobjetos limpia,
rebatiendo los extremos hacia abajo para que no se despegue. La
muestra as preparada puede ser remitida al laboratorio. Es
conveniente tomar dos o tres improntas y montarlas
individualmente.

B - Raspado: se utiliza para todas las lesiones descamativas de la piel glabra (sin pelo), en especial
aquellas de gran tamao. Para obtener el material se raspa el borde
activo de la lesin con un bistur estril colocado
perpendicularmente a la superficie de la piel; si las lesiones son
vesiculosas se remueve el techo de las vesculas con el bistur;
cuando la lesin afecta los pliegues interdigitales el material se
toma del borde de las lesiones, junto a la piel sana de los dedos o
de la planta del pie, evitando las reas maceradas; si la lesin afecta
las uas se raspa la cara profunda de la superficie afectada,
prxima a la regin sana de la ua (si la hay), se recogen los
residuos epidrmicos depositados entre la lmina de las uas y el
lecho subungueal (se elegirn las
zonas friables, de color anormal o
hiperqueratsicas). Se debe recoger
abundante cantidad de material.

- Depilacin: se utiliza en las lesiones de cuero cabelludo y otras reas pilosas, y para recoger el vello
de la piel cuando el folculo est inflamado (tinea corporis).La
muestra se toma con pinza depilatoria estril aplicada
perpendicularmente a la superficie de la piel y siguiendo el sentido
del pelo. Se presiona el cuero cabelludo con la pinza y se retira el
pelo enfermo (deslucido, debilitado, grisceo o los muones
cortos) y las escamocostras adyacentes. Se deben extraer
aproximadamente 20 pelos enfermos y las escamas circundantes.

Transporte y conservacin de muestras


Toda vez que sea posible el material se procesar
directamente en el centro de toma de muestra. De
no ser as, se recogern las escamas de piel y uas
y los fragmentos de cabello en una caja de Petri
descartable estril de 5-6 cm de dimetro, o entre
dos portaobjetos desengrasados, limpios y
estriles; se sellarn los bordes con cinta adhesiva
transparente para evitar la prdida del material, se
envolvern en un papel y se enviarn al
laboratorio junto con una ficha donde se anotarn
los datos del paciente y las caractersticas
macroscpicas de la lesin. Los envos no

necesitan refrigeracin y ningn medio de


transporte, excepto que se especifique lo
contrario.
Es preferible el transporte inmediato al
laboratorio, pero no es imprescindible ya que los
hongos que producen micosis superficiales
pueden ser aislados de las muestras luego de
varias semanas si el recipiente donde se han
recolectado no retiene humedad.

ELECCIN DEL MTODO DE TOMA DE MUESTRA


MATERIAL

LESIONES

Mltiples manchas descamativas color pardo o ms


claras que el color de la piel normal. Generalmente
localizadas en el tronco, raramente en cara, cuello,
brazos, axilas o muslos Presentan fluorescencia desde
rojiza opaca a amarillo anaranjada con Luz de Wood.
Lesiones hmedas, con alteracin de la epidermis, que
provocan prurito y ardor, localizadas preferentemente
en pequeos y grandes pliegues.
Manchas negras o pardas, nicas o no, localizadas
especialmente en la palma de las manos, planta de los
pies y raramente en otras zonas del cuerpo.
Lesiones inflamatorias con alteraciones de la epidermis
Piel
(vesculas, descamacin) y/o de la dermis (eritema,
edema, supuracin); generalmente bordes bien
definidos, anulares o policclicos elevados, con rea
central escamosa y periferia eritematosa que avanza
activamente, con o sin vesculas o vesiculopstulas,
localizadas en cualquier rea del cuerpo o de la cara.
Lesiones localizadas en los pliegues interdigitales, en la
planta y/o dorso del pie, consistentes en fisuras de la
membrana interdigital de color rojo y bordes blancos, o
lesiones hiperqueratsicas ppuloescamosas con
escamas furfurceas que asientan sobre una base
engrosada y eritematosa de planta o dorso del pie, con o
sin vesculas o pstulas.
Uas endurecidas, engrosadas o no, con surcos, con o
sin cambio de color pero con brillo. Sin formacin de
residuos epidrmicos entre la ua y su lecho.
Habitualmente con perionixis inflamatoria, rojiza y
dolorosa.
Uas
Uas endurecidas, engrosadas, con o sin surcos, pero
siempre friables y quebradizas, con prdida del color y
brillo natural. Hay formacin de detritos epidrmicos
caseosos entre la ua y su lecho. La infeccin
generalmente comienza por el borde lateral o distal de la
ua. No hay perionixis.
Presencia de ndulos blancos o blanco-amarillentos,
blandos, que rodean el pelo de la regin axilar, facial,
genital o del cuero cabelludo, aunque preferentemente
de barba y bigote.
Presencia de ndulos oscuros, duros, de aspecto ptreo,
Cuero
que rodean el tallo del pelo del cuero cabelludo o ms
cabelludo y raramente el vello pbico o axilar.
reas pilosas
Lesiones escamosas, eritematosas, con prdida parcial
del pelo del cuero cabelludo, con o sin supuracin y
prurito o lesiones elevadas, fluctuantes y supurativas
(Querion) con prdida de cabello. En todos los casos el
cabello se debilita, se quiebra y cae.

SOSPECHA

Pitiriasis
versicolor

TOMA DE
MUESTRA
Cinta
transparente.

adhesiva

Candidiasis

Raspado y/o hisopado.

Tinea negra

Raspado.

Raspado del borde


activo. Si se observa
Tinea corporis
inflamacin
de
los
Tinea cruris
folculos pilosos se
(dermatofitosis)
tomar muestra del vello
por depilacin.

Tinea pedis Raspado de la periferia


(dermatofitosis) de la lesin.

onixis por
levaduras.

Raspado.
No
descontaminar
con
alcohol
antes
de
recolectar material para
el cultivo.

Tinea
Raspado, recoger
unguium
material caseoso.
(dermatofitosis)

el

Piedra blanca Cortar el pelo con tijera.

Piedra negra

Cortar el pelo con tijera.

Depilacin y raspado.
En caso de Querion
Tinea capitis puncin con jeringa y
(dermatofitosis) aguja estril y realizar
adems un estudio
bacteriolgico.

Es necesario recalcar una vez ms, que las muestras para estudio micolgico deben ser abundantes,
pues su procesamiento insume gran cantidad de material y siempre es conveniente conservar parte de la
misma por si se requiere efectuar estudios adicionales.

PASOS A SEGUIR EN EL EXAMEN MICOLGICO


Preparacin del especimen
10 a 20 fragmentos de piel, pelo o uas. Si fuesen
uas enteras o grandes trozos de ellas (slo en
casos extremos), se debern romper en un
homogeneizador de tejidos con poca cantidad de
solucin fisiolgica.
Las muestras recogidas por hisopado slo se
procesarn cuando provengan de lesiones
hmedas compatibles con candidiasis o de
lesiones mucocutneas.
Examen microscpico directo
Colocar una porcin del material entre
portaobjetos y cubreobjetos con KOH. Observar,
previo calentamiento (sin hervir) o despus de
dejar durante toda la noche (en cmara hmeda o
con el agregado de una gota de agua glicerinada
1:1). A veces el calentamiento produce artefactos.
La ventaja de agregar agua glicerinada es que los
preparados se pueden observar hasta 72 hs
despus sin que se alteren ni se sequen. Tambin
puede adicionarse tinta Parker azul para teir los
hongos.
La primera observacin se hace al microscopio
con luz reducida y objetivo de 10X o 20X y luego
se pasa a 40X para poder distinguir bien las
estructuras fngicas.
El examen directo con KOH al 10-40 % permite
realizar un diagnstico rpido de la mayora de las
micosis superficiales. La nica excepcin es la
infeccin por levaduras, ya que estas pueden estar
presentes en la muestra como contaminantes.
Se considera positivo todo preparado que
presenta elementos fngicos tales como: pelo
rodeado por una vaina de artrosporas o
aisladas sobre su superficie (ataque ectotrix)
(Fig.1); pelo reducido a cortos muones
gruesos y retorcidos, con cadenas de grandes
artrosporas dentro del tallo piloso (ataque
endotrix) (Fig. 2); micelio hialino, ramificado y
tabicado con o sin filamentos artrosporados
(Fig. 3); pseudomicelio y elementos
levaduriformes (Fig. 4); o hifas gruesas
irregulares, tabicadas o no, coloreadas o
hialinas sin conidias (infeccin por hongos
filamentosos oportunistas).

Cuando el especimen a examinar es una impronta


tomada con cinta adhesiva por sospecha de
pitiriasis versicolor, se coloca entre el
portaobjetos y la cinta una gota de azul de
metileno 1%, se deja 10 minutos a temperatura
ambiente, se quita el exceso de colorante con
papel secante y se observa al microscopio con luz
reducida y objetivos de 10X o 20X y 40X. Se
considera positivo cuando se observan racimos
de elementos unicelulares, redondos u
ovalados, de 3 a 7 m de dimetro
(levaduras),
rodeados
de
fragmentos
miceliares cortos, de extremos rectos y
angulares, de 2,5 a 4 m de dimetro (Fig 5).
Si se sospecha eritrasma, se deben digerir las
escamas con KOH 20-40% durante toda la
noche, luego se lavarn las escamas 4 5 veces
con agua destilada y se las colocar sobre un
portaobjetos procediendo a fijarlas por calor con
una gota de suero. Sobre este preparado se
realizarn las coloraciones de Gram y Kinyoun. Se
considera positivo cuando se observan
filamentos finos y elementos cocoides
irregularmente
teidos
Gram
+
o
parcialmente cido alcohol resistentes con
coloracin Kinyoun.
Otras estructuras que se pueden observar en el
examen directo son concreciones alrededor de
la vaina del pelo; la piedra blanca (Fig 7) y
piedra negra (Fig. 8), las primeras blandas y de
color blanco amarillento y las segundas de color
oscuro (marrn a negro).
Otros elementos que pueden observarse en el
examen directo de piel son caros y conidias de
hongos contaminantes (Fig. 6a).
Cultivo
De rutina:
DTM
Sabouraud
Lactrimel
Incubar entre 25-28 C,
observacin semanal.
Medio de bilis de Feo

semanas con

Incubar entre 25-28 C durante 48 hs. y hasta los


5 das para buscar levaduras, pseudomicelio y/o
clamidosporas
Sabouraud sangre o agar sangre
(sospecha de eritrasma)
Incubar a 37 C 5 das en atmsfera de CO2 El
agente causal de eritrasma es una bacteria

Corynebacterium (Nocardia) minutissimun y


identificar con la marcha correspondiente.
Es conveniente seguir incubando los medios en
pico de flauta ya que los dermatofitos pueden
crecer tardamente en los mismos y estn
descriptas infecciones mixtas de levaduras con
dermatofitos.

ESQUEMA DE PROCESAMIENTO Y PRINCIPALES


ESTRUCTURAS QUE PUEDEN OBSERVARSE EN EL
EXAMEN DIRECTO DE MUESTRAS DE MICOSIS
SUPERFICIALES
ATAQUE
ECTOTRIX

M. canis, M. gypseum
T. mentagrophytes
T. rubrum , T.equinum
M. vambreuseghemii
T. verrucosum , M. audouinii

KOH

PELOS

ATAQUE
ENDOTRIX

T. tonsurans, T. rubrum
T. violaceum , T. soudanense
T. yaoundei, T. gourvilli

INVASION
FVICA

T. schoenlenii

(hifas largas dentro del pelo)

FILAMENTOS
HIALINOS

(sospecha de dermatofito)
KOH

ESCAMAS

LEVADURAS Y PSEUDOMICELIO

BLASTOSPORAS Y FILAMENTOS CORTOS


(compatibles con Malassezia spp.)
Azul de Metileno 1%.

HIFAS GRUESAS COLOREADAS O NO


(sospecha de micosis oportunistas)

se

IDENTIFICACIN DE CEPAS
Cuando se observa el desarrollo de una colonia
sobre cualquiera de los tubos del primocultivo, se
procede a determinar a qu grupo de agentes
causales pertenece. Al final del captulo se ve un
diagrama de procedimientos que permite ubicar
presuntivamente a los principales agentes de
micosis superficiales apoyndose en la
observacin macro y microscpica de la colonia y
de su capacidad de crecer en medios con
cicloheximida.
A continuacin se detallan las principales pruebas
diferenciales de cada grupo: levaduras,
dermatofitos
y
hongos
miceliales

oportunistas. Se remarcan aquellas que se


consideran posibles de realizar en todo
laboratorio de micologa mdica a fin de
identificar en forma presuntiva los principales
agentes de micosis superficiales. Las pruebas sin
remarcar requieren mayor infraestructura, son
onerosas, y se centralizan en laboratorios de
referencia.
Antes de realizar las pruebas diferenciales para
cada grupo es necesario purificar la cepa para
evitar prdida de tiempo y dinero o, lo que es ms
grave, identificaciones errneas.

Dermatofitos
Los dermatofitos pueden ser identificados por
sus caractersticas macro y microscpicas
estudiadas
sobre
medios
de
cultivo
predeterminados, y el auxilio de unas pocas
pruebas complementarias.
La batera de medios de cultivo necesarios para
este propsito depende de las necesidades y
limitaciones de cada laboratorio, y del nivel de
complejidad al que pertenece.
Frecuentemente es posible reconocer un
dermatofito por sus caractersticas macroscpicas
(ver atlas fig. 9-14) y microscpicas (ver atlas
fig.19-24). La presencia, forma, tamao y
distribucin de las macro y microconidias, y/o la
aparicin de otras estructuras caractersticas tales
como hifas en espiral, candelabros fvicos, hifas
pectinadas o clamidosporas permite identificarlos.
Cuando no se observan estructuras que permitan
su identificacin es necesario recurrir a otras
pruebas especiales como produccin de ureasa,
perforacin del pelo "in vitro", desarrollo en
medios
vitaminados
para
estudio
de

requerimientos nutricionales, y/o crecimiento en


granos de arroz.
Muchas veces es difcil decidir si el hongo aislado
es un dermatofito, mas an cuando el profesional
cuenta con poca experiencia y los hongos crecen
y viran el DTM pero sus estructuras no son
caractersticas, en estos casos las cepas aisladas y
purificadas deben ser enviadas a centros de mayor
complejidad.
Pruebas diferenciales para identificacin de
dermatofitos:
Disgregados del cultivo en Lactofenol azul
de algodn(LF-AA).
Cultivo en lmina en Lactrimel y Agar Papa
Dextrosa (PDA).
Colonia gigante en Lactrimel, Agar
Sabouraud.
Crecimiento en DTM.
Ensayo de perforacin del pelo in vitro.
Hidrlisis de urea.
Crecimiento en granos de arroz.
Ensayo de requerimientos nutricionales.

Levaduras
La identificacin de las levaduras puede variar
desde unos pocas pruebas simples, para
identificacin presuntiva de Candida albicans a una
gran variedad de pruebas necesarias para
identificar todas las levaduras comnmente
aisladas en los laboratorios de micologa.

Cada laboratorio debe decidir respecto a la


identificacin
de
cepas
de
levaduras.
Consideramos que es suficiente con llegar a
identificar presuntivamente sta especie y derivar
el resto de las cepas a centros de referencia
evitando as costos adicionales innecesarios.

Pruebas diferenciales para identificacin de


levaduras:
Prueba de formacin de tubo germinativo
para identificar C. albicans (Fig.27)
Prueba de formacin de clamidosporas para
identificar C. albicans (Fig.28)
Crecimiento a 28C y 37C.
Crecimiento en Extracto de malta para
estudio micromorfolgico
Cultivo en lmina en agar morfologa
(Difco) para estudio micromorfolgico.
Crecimiento en agar morfologa (Difco)
para estudio macromorfolgico.

Ensayo de asimilacin de fuentes de


carbono y de nitrgeno.
Ensayo de fermentacin de hidratos de
carbono.
Crecimiento en medio libre de vitaminas.
Produccin de ascosporas.
Existen mtodos comerciales para identificacin
de levaduras, los ms difundidos son API 24C y
API 32. Este ltimo es el ms confiable,
acompaado del estudio morfolgico. De todos
modos cuando existen dudas en una
identificacin lo ms conveniente es su derivacin
a un centro de referencia para realizar la marcha
convencional.

Hongos miceliales oportunistas


Los principales hongos filamentosos capaces de
causar micosis superficiales oportunistas son los
pertenecientes a los gneros Aspergillus, Fusarium,
Alternaria y otros.
Muchas veces es difcil identificar los mohos
monomrficos, en especial cuando no forman
esporas u otras estructuras caractersticas en los
medios de cultivo de rutina de micologa, en
estos casos se prueban distintos medios y
condiciones hasta obtener estructuras que
permitan su identificacin.
La mayora de los hongos filamentosos que se
aslan en un laboratorio de micologa esporulan
bien sobre agar harina de maz (HMA), agar papa
dextrosado (PDA), o agar extracto de malta
(MEA). En muchos casos es conveniente realizar

cultivos en lmina de la cepa sobre estos medios,


a fin de poder determinar la disposicin de las
esporas, su forma de unin a las hifas o a los
conidiforos y su conidiognesis.
A posteriori se muestra un esquema de cmo
identificar separndolos en grandes grupos,
donde se consideran los principales hongos
filamentosos oportunistas.
Pruebas para identificacin de hongos
filamentosos:
Disgregados del cultivo en Lactofenol azul
de algodn(LF-AA).
Cultivo en lmina y colonia gigante en
EMA, HMA y PDA.

Bacterias que producen infecciones que semejan micosis


Si bien el agente causal de eritrasma es una
bacteria, Corynebacterium minutissimum
(Nocardia minutissima), generalmente su
aislamiento e identificacin la realizan los
miclogos porque las lesiones que producen
semejan micosis. Su temperatura ptima de
crecimiento es 37 C en una atmsfera de CO2 al
5% en un medio enriquecido con sangre y sin
agregado de antibitico. La identificacin se
realiza en medios convencionales de uso en
bacteriologa. Uno de los principales problemas
con este microorganismo es lo difcil de su
aislamiento ya que forma colonias muy pequeas
y es difcil aislarlo de la flora de piel
acompaante.

Pruebas diferenciales para la identificacin


de
Corynebacterium
minutissimum

(Nocardia minutissima):
Morfologa de la colonia y observacin al
Gram de las formas corineiformes
Produccin de hemlisis en agar sangre.
Produccin de catalasa
Produccin de ureasa
Reduccin de nitratos a nitritos
Hidrlisis de gelatina
Movilidad
Hidrlisis de esculina
Utilizacin de azcares en medio de
Andrade (glucosa, sacarosa, maltosa,
manitol y xilosa)
21

Consideraciones respecto a la interpretacin e informe de


resultados
Desde el punto de vista del laboratorio es
importante establecer el tipo de agente a
investigar en la muestra segn sea el cuadro
clnico. Dejaremos de lado la pitiriasis
versicolor porque su diagnstico se realiza por
examen directo. Slo nos referiremos aqu a las
lesiones compatibles con dermatofitos, levaduras
y las provocadas por hongos miceliales
oportunistas.
Desde el punto de vista del diagnstico es
importante establecer si el hongo aislado es un
dermatofito o no, y en el ltimo caso, si est
causando la infeccin o acta como contaminante
de la muestra, ya que el tratamiento teraputico a
aplicar en cada caso es diferente. Los hongos
saprfitos no responden al tratamiento con que
habitualmente se tratan las dermatofitosis.
Las infecciones de piel y principalmente de las
uas causadas por Fusarium spp., Scopulariopsis
spp., Aspergillus terreus, Aspergillus flavus, Aspergillus
glaucus, y Alternaria spp. son cada vez ms
frecuentes, por lo tanto es importante tener en
cuenta la observacin de hifas coloreadas o con
caractersticas no compatibles con dermatofitos.
Para establecer si la lesin es causada por un
dermatofito es necesario: haber visto las hifas y/o
artrosporas en el examen directo, que haya
crecido y haya virado el color del DTM a rojo en
una semana y la macro y micromorfologa del
aislamiento sea compatible con un dermatofito
(hifas incoloras, presencia de macroconidias y/o
microconidias de dermatofitos). En estos casos el
aislamiento puede ser informado como "presunto
dermatofito" hasta que su identificacin sea
confirmada.
Si el aislamiento es un hongo no dermatofito, ya
sea porque no crece en DTM, por sus
caractersticas macroscpicas (colonias verdes,
negras, grises o azul verdosas) o sus
caractersticas microscpicas, debe ser informado
como "hongo micelial saprfito, no dermatofito"
siempre y cuando haya sido aislado en cultivo
puro en todos los tubos inoculados (con
excepcin del DTM u otro medio de cultivo con
cicloheximida, donde puede no crecer) y en el
examen directo se hayan observado elementos
que no se correspondan con los observados en
las dermatofitosis. En estos casos es necesario

reiterar la toma de muestra hasta obtener


exmenes directos y cultivos positivos del mismo
hongo en tres muestras seriadas.
Debemos recordar que para definir un
diagnstico es necesario que exista correlacin
entre el examen directo de la muestra y el
aislamiento que se obtuvo en el cultivo de la
misma.
En el caso de las levaduras es necesario, que el
cuadro clnico sea compatible con una infeccin
por estos hongos y no se hayan aislado
dermatofitos a partir de la muestra en 4 semanas
de cultivo, ni se hayan observado filamentos
ramificados, tabicados y/o artrosporados de
dermatofitos en el examen directo.

Algoritmo para el diagnstico de micosis superficiales


Material sembrado en agar Sabouraud, Lactrimel y DTM a 28C .
Revisar una vez por semana durante cuatro semanas

Colonia cremosa

Reaislamiento

Filamentacin
Produccin de
clamidosporas
(Medio Bilis de Feo)

Positivo

Informar:
C. albicans

Negativo

Informar:
Levadura
NO C. albicans

Colonia vellosa, micelio


blanco, amarillo o crema, con
o sin pigmento y viraje del
DTM.
Sospecha de dermatofito
Reaislamiento en agar
Lactrimel
Disgregado con LF-AA
Identificar el agente por sus
caractersticas macro y
microscpicas
Si la identificacin no es
exitosa:
Colonia gigante
Cultivo en lmina
Crecimiento en granos
de arroz
Perforacin del pelo "in
vitro"
Produccin de ureasa

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

Colonia vellosa, micelio


negro, verde o marrn, con
o sin pigmento, con y sin
viraje del DTM.

Sospecha de oportunista
Guardar la cepa reaislada y
repetir el anlisis sobre dos
muestras ms.

Si se repite el aislamiento en
tres muestras seriadas
realizar disgregado con LFAA Identificar el agente por
sus caractersticas macro y
microscpicas

Si la identificacin no
es exitosa: derivar la
cepa al laboratorio de
referencia

23

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales

DESCRIPCIN DE LAS TCNICAS MNIMAS PARA LA


IDENTIFICACIN DE AGENTES DE MICOSIS
SUPERFICIALES
Colonia gigante (macrocolonia)
Tcnica:
Utilizar una placa de Petri con agar Sabouraudcloranfenicol o Lactrimel. Dejar secar la
superficie del agar.
Inocular estrilmente, con un pequeo
fragmento de la cepa en estudio, el centro de la
superficie del agar tratando de que quede bien
adherida.
Sellar los bordes de la placa con cinta adhesiva
para evitar la entrada de esporos del aire.
Incubar la placa en posicin invertida durante
15 a 20 das, o hasta que la colonia cubra las
2/3 partes de la placa.
Observaciones generales
Forma
Elevacin
Circular

Plana y extendida

Matar el cultivo con formol sin que ste caiga


sobre la colonia, dejndolo actuar durante 2448hs.
Observar con lupa o directamente.
*Es necesario mantener las placas en la misma
posicin mientras desarrolla la colonia para evitar
que los esporos se diseminen y al germinar
formen colonias satlites que puedan perjudicar
el desarrollo pleno de la colonia central

Margen o borde

Superficie

Liso o entero

Plegada

Pigmento anverso
Rojo

Irregular

Elevada y limitada

Ondulado

Sectorizada
Violeta

Filamentosa

Convexa umbilicada

Lobado

Cerebriformes
Amarillo

Rizoidal

Desflecado

Con surcos radiados


Marrn

Anotar: Medio de cultivo utilizado, tiempo y temperatura de incubacin


Otras caractersticas:
Textura
Granulosa - pulverulenta
Algodonosa
Aterciopelada

Gamuzada
Vellosa
Glabra
Serosa

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

24

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales


Crecimiento
Lento (ms de 15 das, por ejemplo T. tonsurans)
Moderado (10 a 15 das, por ejemplo T. rubrum)
Rpido (menos de 7 das, por ejemplo M gypseum)
Interpretacin:
La colonia gigante o macrocolonia permite
determinar la velocidad de crecimiento del
hongo, el dimetro alcanzado, el perfil y los
bordes, la textura, el color de la superficie y del
reverso, la formacin del pigmento difusible, etc.
La observacin y medicin de la colonia,
generalmente
a
los
15
das,
puede
complementarse con el estudio de la cepa bajo la

lupa para observar con mas precisin la textura


de la colonia, la presencia de exudado, etc.
El
estudio
de
las
caractersticas
macromorfolgicas de la colonia gigante
juntamente con las caractersticas microscpicas
del cultivo permiten diferenciar e identificar los
diferentes gneros y especies de dermatofitos; en
muchos casos estas caractersticas no son
suficientes y es necesario recurrir a pruebas tales
como perforacin del pelo, prueba de la ureasa,
crecimiento en medio de arroz y/o
requerimientos nutricionales.

Preparaciones microscpicas para el examen de cepas


DISGREGADOS DE CULTIVOS
Es un mtodo rpido para observacin de la
micromorfologa de los aislamientos fngicos. El
reactivo contiene fenol para matar la cepa,
glicerina para evitar la desecacin, colorante para
teir la pared de los hongos y cido lctico para
clarificar el preparado.
Tcnica:
Colocar una gota de LF-AA sobre un
portaobjetos limpio.
Colocar un trozo de colonia, preferentemente
del rea granular, sobre la gota de colorante.
Disgregar el material con dos agujas de
diseccin.
Cubrir con un cubreobjetos presionando
suavemente y evitando la formacin de
burbujas de aire. Si qued agar en el preparado
se puede calentar suavemente, esto tambin
ayuda a eliminar las burbujas de aire.
Examinar al microscopio ptico (MO) con luz
reducida y objetivos de bajo y mediano
aumento.
*Si se desean conservar los preparados, se limpia
el borde del cubreobjetos con un hisopo
humedecido con alcohol 70%, se deja secar y se
sella con esmalte de uas o lquido de montaje
para preparaciones permanentes (PERMOUNT,
etc.).
MICROCULTIVO O CULTIVO EN
LMINA
Este mtodo permite observar las caractersticas
micromorfolgicas de los hongos sin alterarlas,
haciendo posible visualizar exactamente la

disposicin de sus estructuras, en particular


aquellas que se destruyen fcilmente con la
manipulacin del cultivo, como ser la disposicin
de los conidios y los conidiforos dentro del
micelio de reproduccin.
Tcnica:
Forrar el fondo de las placas con un papel de
filtro
Colocar sobre el papel una varilla de vidrio
doblada en U y depositar sobre ella dos
portaobjetos limpios segn el esquema.
Esterilizar y conservar hasta su uso.

fragmento de
micelio

porta-objeto

soporte

agar

Fundir el agar Sabouraud u otro que se


considere adecuado.
Con un ansa que termine en un anillo de
aproximadamente 7 mm de dimetro, sacar
estrilmente una gota del medio de cultivo y
distribuirla formando un crculo en el centro
del portaobjetos de la placa de microcultivo;

25

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales

repetir el procedimiento con el otro


portaobjetos.
Con un ansa en forma de esptula doblada en
ngulo recto, transferir fragmentos de cultivo
de uno a dos mm al medio de cultivo del
portaobjetos, colocando un fragmento de
micelio en cada borde.
Con una pinza estril invertir los portaobjetos
teniendo cuidado de no tocar el borde de la U
con el inculo.
Agregar agua destilada estril en el fondo de la
placa de Petri (controlar que no se seque
durante la incubacin).
Incubar a 25 -28 C durante 15 a 20 das.
Controlar el desarrollo y la produccin de las
estructuras
caractersticas
(conidiforos,
conidios, etc.) mediante examen microscpico.
Una vez desarrolladas las estructuras
caractersticas, o a los 30 das, matar el cultivo
agregando dos o tres gotas de formol a la placa.
Dejar actuar 24-48 hs a temperatura ambiente.
Volcar el lquido y dejar secar durante 24 hs. a
37 C.
Pasar el preparado por Colodin, limpiar los
bordes y el reverso del portaobjetos y dejar
secar dentro de la placa 24 hs (el Colodin se
utiliza para fijar las estructuras cuando se desea
hacer preparados permanentes, pero puede
obviarse).
Colocar una gota de LF-AA sobre un
cubreobjetos y cubrir con l el cultivo.
Observar al microscopio.

observar la cantidad relativa, forma, tamao y


disposicin

Macroconidios. Se refiere a un conidio o


esporo de reproduccin asexual, se distingue del
microconidio por su mayor tamao y por ser
pluricelulares. Se debe observar la cantidad
relativa, forma, tamao, disposicin y pared
celular (lisa o equinulada, gruesa o fina)

Otras estructuras. La correcta observacin de


las estructuras microscpicas de los dermatofitos
nos permite diferenciarlos.
En
el
atlas
pueden
observarse
las
microestructuras correspondientes a las seis
especies ms comunes de dermatofitos aislados
en nuestro pas.

*Si se desean preparados permanentes, limpiar


los bordes del cubreobjetos con un hisopo con
alcohol y luego sellar con esmalte de uas.
Interpretacin de la micromorfologa:
Conidios en dermatofitos. En este capitulo nos
abocamos a la descripcin de los diferentes
conidios de los dermatofitos. Las estructuras
presentes en otros hongos oportunistas exceden a
los objetivos del presente curso

Hifas pectinadas

Hifas en espiral

Clamidosporos

Hifas en raqueta

Candelabros fvicos

Cuerpos nodulares

Microconidios. Se refiere a un conidio


(elemento
de
fructificacin)
pequeo,
generalmente unicelular. Es un elemento de
reproduccin asexual (esporo asexual). Se debe
Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

26

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales

PRUEBA DE PERFORACIN DEL PELO


"IN VITRO" (Ajello and Gerog, 1957)
Tcnica:
Se colocan aproximadamente 20 o 30
fragmentos de pelo claro humano (de nio
menor de 9 aos) de aproximadamente 15 a 20
mm de largo en cajas de Petri, se autoclavan a
120 C durante 15 minutos.
Las placas se dejan enfriar y luego se
almacenan hasta el momento de su uso.
En el momento de realizar la prueba se agrega
estrilmente, a la placa de Petri con las hebras
de pelo, 20 ml de agua destilada estril y 0,15
ml (2 o 3 gotas) de extracto de levadura al 10
% previamente esterilizado por filtracin.
Luego se inoculan las placas colocando sobre
el pelo varios fragmentos de la cepa en estudio,
de aproximadamente 2-3 mm de dimetro,
obtenidos a partir de cultivos de 10 das.
Las placas son incubadas a 25 C en oscuridad
y se examinan semanalmente durante cuatro
semanas.

micelio y se colocan sobre un portaobjetos con


una gota de LF-AA, se cubre con una laminilla,
se calienta suavemente a la llama y se observa al
microscopio en busca de grupos organizados de
hifas que forman perforaciones cuneiformes (en
forma de cua) que penetran radialmente el pelo
(ver atlas figura 25).

Pelo perforado 

Pelo sano 

Interpretacin:
Esta prueba es muy til para diferenciar
aislamientos atpicos de T. mentagrophytes y T.
rubrum ya que todas las cepas del primero lo
perforan y las de T. rubrum no lo hacen.
De la misma manera se utiliza para diferenciar
M. equinum de M. canis ya que este ltimo perfora
el pelo y el M. equinum no lo hace.

Lectura:
Para realizar el examen se retiran con pinzas
estriles los fragmentos de pelo cubiertos por

PRUEBAS FISIOLGICAS Y BIOQUMICAS PARA LA


IDENTIFICACIN DE DERMATOFITOS
PRUEBA DE LA UREASA
El medio de urea que se usa contiene rojo de
fenol, que vira al color rojo cuando se hidroliza
la urea y se libera amonio alcalinizando el medio
de cultivo.
Agar urea de Christensen modificado por
Philpot (para diferenciacin de dermatofitos)
Peptona
Cloruro de sodio
Glucosa
Fosfato cido de potasio
Urea
Rojo de fenol al 0,2%
Agar
Agua destilada c.s.p.

1g
5g
5g
2g
20 g
5 ml*
20 g
1000 ml

* Preparar la solucin de Rojo de fenol


disolviendo 0,2 g del indicador en 100 ml de
etanol 50%.
Disolver todos los componentes, excepto el agar,
en 100 ml de agua destilada y esterilizar por
filtracin. Ajustar el pH a 6,8.
Disolver 20 gramos de agar en 900 ml de agua
destilada y esterilizar a 121 C 15 minutos.
Enfriar a el agar 55- 60 C y agregarle la primera
solucin.
Mezclar y distribuir estrilmente a razn de tres
ml por tubo 13 x 100 mm con tapa a rosca.
Tcnica:
Transferir una pequea cantidad de micelio de
un cultivo de 10 das sobre agar Lactrimel o

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

27

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales


Sabouraud de la cepa incgnita en el medio de
agar urea de Christensen modificado por Philpot.
Incubar a 25-28 C y leer diariamente hasta el
sptimo da, pasado este tiempo pueden
observarse falsos positivos.
Simultneamente se deben incubar tres tubos
controles: positivo (inoculado con T.
mentagrophytes), negativo (inoculado con T.
rubrum) y un tercer tubo sin inocular.
Lectura:
Se interpreta como positiva la aparicin de color
rojo magenta en el medio de cultivo donde se
inocul la cepa incgnita. Si el color original no se
modifica o se torna amarillo la prueba es negativa.
Es necesario asegurar la pureza de la cepa en
estudio ya que las bacterias pueden producir
ureasa (ver atlas figura 26).

Interpretacin:
La produccin de ureasa en 7 das es
especialmente til para diferenciar T.
mentagrophytes y T. rubrum y puede utilizarse
adems para estudiar aislamientos atpicos de
dermatofitos. Con respecto a las cepas
mencionadas anteriormente el test tiene una
especificidad del 90%, lo que es coincidente con
el test de perforacin del pelo, de tal modo que
usndolos juntos se obtienen buenos resultados.

CRECIMIENTO EN DTM (Medio para aislamiento e identificacin presuntiva de


dermatofitos)
Sobre este medio se pueden sembrar
directamente los materiales provenientes de las
lesiones o bien inocular estrilmente, con un
pequeo fragmento de la cepa en estudio.
Incubar no ms de 14 das a 22 - 30 C. Es
conveniente realizar una observacin al sptimo
da.
Este medio utilizado para primo aislamiento
permite
una
mayor
recuperacin
de
dermatofitos, sobre todo de muestras
provenientes de zonas muy contaminadas como
uas y pie (Ver atlas fig. 18).
Medio para ensayo de dermatofitos (DTM)
(Taplin D; 1969)
Phytone (BBL)
Glucosa
Agar agar (BBL o Difco)
Rojo de fenol (solucin)
HCl 0,8 M
Cicloheximida (Actidione)
Sulfato de gentamicina
Clortetraciclina
AD c.s.p.

10 g
10 g
20 g
40 ml
6 ml
0,5 g
100 ug/ml
100 ug/ml
1.000 ml

Disolver la fitona, la glucosa y el agar en el AD


calentando en BM.

Adicionar 40 ml de solucin de rojo de fenol*


agitando bien.
Ajustar el pH del medio agregando 6 ml de HCl
0,8 M, mezclando continuamente.
Disolver 0,5 g de cicloheximida en 2 ml de
acetona y agregar a la preparacin anterior,
mezclar bien.
Disolver el sulfato de gentamicina en 2 ml de
AD estril y agregar a la preparacin anterior
agitndolo bien.
Autoclavar a 118 C durante 10 minutos.
Enfriar a 50-55 C y agregar estrilmente la
clortetraciclina disuelta en 25 ml de AD estril,
mezclar y fraccionar estrilmente a razn de 7
ml en tubos de ensayo e inclinar para que se
forme el bisel.
El pH final del medio es 5,5 + 0,1 y su color
amarillo.
Observaciones:en
nuestro
laboratorio
suplantamos la gentamicina y la tetraciclina por
cloranfenicol, el que se usa a una concentracin
de 250 mg por litro de medio de cultivo (**). La
ventaja del uso de ste antibitico es que se
puede agregar al medio antes de esterilizarlo.
* Solucin de rojo de fenol
Disolver 0,5 g de Difco Bacto Phenol Red en 15

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28

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales


ml de NaOH 0,1 N y adicionarle 100 ml de AD
mezclando bien.
**Solucin de cloranfenicol
Disolver 250 mg de cloranfenicol en 10 ml de
alcohol etlico, mezlar bien y agregar al medio de
cultivo.
Interpretacin:
Los dermatofitos viran el color del medio del
amarillo al rojo debido a la produccin de lcalis,

mientras que los contaminantes no producen


este viraje.
Adems, el medio contiene cicloheximida
(actidione), que inhibe el crecimiento de muchos
mohos no dermatofitos; no obstante, algunos
son resistentes a la cicloheximida y adems
pueden virar el indicador ( Ej: Acremonium,
Scopulariopsis, Verticillium, etc).
No es un test confirmatorio sino presuntivo,
ya que algunos dermatofitos tardan ms de 14
das en desarrollar (T. verrucosum).

CRECIMIENTO SOBRE GRANOS DE ARROZ (Conant y Col. 1971)


Incubar a 25 C y examinar el crecimiento
luego de 10 a 15 das.

Medio de arroz
Arroz blanco
AD

8g
25 ml

Colocar los granos de arroz y el AD en un


erlenmeyer de 125 ml, o en un tubo 150x20 mm.
Autoclavar a 120 C durante 15 minutos.
Tcnica:
Inocular un fragmento de la cepa de
dermatofito en estudio, en el tubo con el
medio de arroz.

Lectura:
El resultado se lee como positivo si hay
crecimiento abundante y como negativo si no
hay desarrollo o es escaso.
Interpretacin:
Este medio se utiliza para diferenciar aislamientos
no esporulados de M. canis (da una colonia
exuberante) y M. audouinii (crece muy poco o no
lo hace). Tambin estimula la produccin de
esporos en muchos Trichophyton spp.

PRUEBAS DE REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES


Estas pruebas quedan reservadas para
laboratorios de referencia; no obstante, sus
resultados son variables y no siempre

reproducibles debido a que es muy difcil


estandarizar el inculo. Se utilizan los medios
Bacto Trichophyton Agar Difco 1 al 7

PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACIN DE LEVADURAS


PRODUCCIN DE TUBO GERMINATIVO
Esta prueba es considerada hasta el presente
como una la ms confiable para identificar
presuntivamente a C. albicans, tiene una exactitud
del 95%-100% cuando se compara con la
identificacin convencional y permite realizar una
identificacin rpida.
Tcnica:

Hacer una suspensin ligera (100.000 a 1.000.000


de clulas/ml) de un cultivo de 24 hs. de la cepa
en estudio, en 0,5 ml de suero bovino. La
suspensin puede hacerse tocando la superficie
de una colonia con la punta de una pipeta Pasteur
estril y luego emulsionando suavemente las
clulas adheridas a la pipeta, en el suero.
Incubar a 37C y observar microscpicamente
cada media hora, hasta las tres horas. Es

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29

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales


37C
NO ms
de 3 horas

necesario inocular simultneamente un testigo


positivo (C. albicans) y uno negativo (C.
guilliermondii u otra).
Interpretacin:
El tubo germinativo se ve como una proyeccin
filamentosa delgada, que no presenta constriccin en el
punto de origen. (ver figura 27 del atlas)

Brotacin

PRODUCCIN DE CLAMIDOCONIDIOS (CLAMIDOSPOROS)


La formacin de clamidoconidios en "cultivo
naciente" es caracterstica de C. albicans. Son
esporos de resistencia, redondas, refringentes, de
pared engrosada y ricas en lpidos.

Medio de bilis de Feo


Bilis (Bacto Oxgall)
Agar
Cloranfenicol
AD c.s.p.

20
1
250
1000

g
g
mg
ml

Disolver los 250 mg de cloranfenicol en 10 ml


de alcohol etlico 96.
Mezclar los componentes y fundir en BM.
Ajustar el pH a 6-7.
Fraccionar a razn de 3 ml por tubo de 13 x
100 mm.
Esterilizar a 121 C 15 minutos.

Agar harina de maz

Sin dejar enfriar refiltrar a travs de algodn y


fraccionar.
Esterilizar 15 minutos a 121 C.
Procedimiento:
Inocular con un cultivo en crecimiento activo
un tubo de medio semislido de Bilis de Feo o
por puncin en un medio de harina de maz.
Incubar a 25 -28 C durante 48 hs. y observar;
si es negativo dejar hasta 5 das. Pasado este
lapso de tiempo el ensayo no es apto para
identificar presuntivamente a C. albicans ya que
en cultivos viejos otras levaduras pueden
formar clamidosporas (por ejemplo T.
cutaneum).
Interpretacin:
Esta prueba es positiva en el 68% de las cepas de
C. albicans y solo tiene un error del 3% respecto a
la incorrecta identificacin de otra levaduras no
C. albicans (ver figura 28 del atlas)

Harina de maz amarillo


12,5 g
Agar
3,8 g
AD c.s.p.
300 ml
Disolver la harina en 300 ml de agua destilada
calentando en BM de 60C durante 1 hora.
Filtrar a travs de papel y llevar a volumen con
agua destilada.
Agregar el agar y autoclavar a 121 C 5
minutos.
CARACTERSTICAS FISIOLGICAS Y BIOQUMICAS
Fermentacin de Glucosa, Galactosa,
Sacarosa, Maltosa y Lactosa (Zimograma)
Las pruebas fermentativas se basan en la
propiedad que tienen ciertas levaduras de utilizar

azcares en anaerobiosis. Esta propiedad vara


desde una fermentacin vigorosa a ausencia de
fermentacin segn los gneros de las levaduras
que se traten.

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30

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales


Asimilacin de compuestos carbonados y
nitrogenados por el mtodo auxonogrfico.
La asimilacin de compuestos carbonados
permite determinar qu azcares puede utilizar
por va oxidativa la levadura para crecer. Se
realiza resuspendiendo la levadura en un medio
slido libre de azcares fundido a 45 C que se
deja solidificar y luego sobre su superficie se
colocan discos de papel embebidos con los
azcares. Se interpreta como positiva cuando se
observa un halo de desarrollo alrededor del
disco. La glucosa se utiliza como control positivo
ya que es asimilada por todas las levaduras.
La asimilacin de compuestos nitrogenados se
basa en la capacidad de asimilar compuestos

nitrogenados. La tcnica es similar a la de


azcares, pero se utiliza un medio slido que no
contiene fuentes de nitrgeno y los discos estn
embebidos con fuentes nitrogenadas. Se
interpreta como positiva cuando se observa un
halo de desarrollo alrededor del disco. La
peptona se utiliza como control positivo y
siempre debe ser incluida en la prueba.
Utilizando estas pruebas y complementndolas
con la morfologa macro y microscpica de las
clulas de levaduras se pueden identificar todas
las especies.
La asimilacin de fuentes de carbono y nitrgeno
tambin puede hacerse en medio lquido.

Pruebas bioqumicas para identificacin de Corynebacterium


minutissimum (Nocardia minutissima)
Pruebas bioqumicas*
Resultados
Coloracin de Gram de la colonia:
formas corineiformes Gram +.
hemlisis en agar sangre
Catalasa
+
Ureasa
Reduccin de nitratos a nitritos
Hidrlisis de gelatina
Movilidad
Hidrlisis de esculina
glucosa
+
sacarosa
v
Utilizacin de azcares
maltosa
+
en medio de Andrade
manitol
xilosa
(+) positiva; (-) negativa; (v) variable. Todas las pruebas bioqumicas se incuban durante 5
das, a 37 C en atmsfera de CO2 al 5%, luego de lo cual se realiza la lectura.

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Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales

REACTIVOS, SOLUCIONES Y MEDIOS DE CULTIVO


LACTOFENOL AZUL DE ALGODN (LF-AA)
Para observacin de estructuras microscpicas en
los disgregados de los cultivos fngicos
Solucin de LF-AA
Cristales de fenol.
20 g
Acido lctico
20 ml
Glicerina
40 ml
Agua destilada (AD)
20 ml
Azul de algodn (solucin
2 ml
acuosa al 1%)

Agregar el cido lctico y la glicerina al agua


destilada y mezclar.
Agregar los cristales de fenol y mezclar.
Calentar suavemente en bao Mara (BM) con
frecuente agitacin hasta disolucin completa
de los cristales de fenol.
Agregar 2 ml de una solucin acuosa al 1% de
azul de algodn (azul de Poirrier) y mezclar
bien.

SOLUCIN DE KOH AL 30 % EN GLICEROL


Para observacin de preparados en fresco del
material clnico.
Solucin de KOH 30%
KOH
30 g
Glicerol
20 ml
Agua destilada
80 ml

La adicin de glicerol al 20% impide el rpido


desecamiento del fluido en el portaobjetos y
permite la observacin microscpica del
preparado por perodos superiores a 48 hs.

SOLUCIN DE AZUL DE METILENO AL 1%


Solucin de azul de metileno al 1%
Azul de Metileno
1g
AD c.s.p.
100 ml
AGAR SABOURAUD GLUCOSADO
Glucosa
40 g
Peptona (Difco)
10 g
Agar (Difco)
15 g
AD c.s.p.
1000 ml
Fundir el agar en el agua en BM.
Agregar la glucosa y la peptona y
homogeneizar.
Fraccionar a razn de 7 ml por tubo y
esterilizar a 121 C durante 15 minutos.Dejar
enfriar en bisel.

Agar Sabouraud - cloranfenicol

ml de alcohol etlico 95. Esterilizar a 121 C, 15


minutos.

Agar Sabouraud - cloranfenicol cicloheximida


Al agar Sabouraud glucosado se le agregan 250
mg de cloranfenicol (deltamicetina) disuelto en 10
ml de alcohol etlico 95 y 400 mg de
cicloheximida (Actidione) disuelta en 10 ml de
acetona. Esterilizar a 121 C durante 15 minutos.

Al agar Sabouraud glucosado se le agregan 250


mg de cloranfenicol (deltamicetina) disuelto en 10

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32

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis Superficiales

AGAR SABOURAUD ADICIONADO CON BILIS DE BUEY (para Malassezia spp.)


Glucosa
20 g
Peptona (Difco)
10 g
Agar (Difco)
15 g
Bilis de buey (Bacto
20 g
Oxgall)
AD c.s.p.
1000 ml
Fundir el agar en el agua en BM.

Agregar la glucosa , la peptona y la bilis de


buey. Homogeneizar.
Fraccionar a razn de 7 ml por tubo y
esterilizar a 121C durante 20 minutos.
Dejar enfriar en bisel.
Adems de este medio se puede utilizar Agar
Sabouraud Glucosado adicionado con 3 o 4
gotas aceite de oliva estril en su superficie.

LACTRIMEL (Medio de Borelli)


Miel de abeja
10 g
Harina de trigo
20 g
Agar (Bacto-Difco)
12 g
Leche entera
200 ml
AD c.s.p
1.000 ml
Cloranfenicol
250 mg
Disolver poco a poco la harina en la leche y
luego agregarle la miel y el agua, mezclar bien.
Fundir en BM el agar y agregar los
componentes antes mezclados.

Agregar el cloranfenicol disuelto en 5 ml de


alcohol etlico.
Fraccionar en tubos de ensayo a razn de 7 ml
por tubo o erlenmeyer para luego hacer placas.
Esterilizar a 118 C durante 20 minutos y
estriar los tubos para cultivo primario. Si se
desea hacer placas distribuir estrilmente a
razn de 20 ml por placa de Petri, antes que el
medio de cultivo solidifique.

MEDIO DE DIXON PARA RECUPERACIN DE Malassezia sp.


Extracto de malta
3,6 g
Peptona
0,6 g
Bacto Oxgall
2g
Tween 40
1g
Glicerol
0,5 g
Agar
1,5 g
Agua c.s.p.
100 ml
Fundir el agar en el agua en B.M.
Agregar la glucosa , la peptona, el Bacto
Oxgall , el Tween y el glicerol. Homogeneizar.

Fracionar a razn de 7 ml por tubo y


esterilizar a 121C durante 20 minutos.
Dejar enfriar en bisel
NOTA: en este medio hay una mejor
recuperacin de las especies de Malassezia, sobre
todo de Malassezia globosa que necesita
requerimientos especiales para su desarrollo

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33

Curso y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

ESTRUCTURAS QUE SE PUEDEN OBSERVAR EN EL EXAMEN


DIRECTO DE MUESTRAS PROVENIENTES DE MICOSIS
SUPERFICIALES

Fig. 1. Pelo atacado en forma ectotrix


caracterstico de las tineas microspricas. Examen
directo de la muestra con KOH. MO 200x. Ntese
la presencia de esporas dentro y fuera de la vaina
del pelo.

Fig. 2. Pelo atacado en forma endotrix caracterstica de las tineas tricofticas. Examen directo de la
muestra con KOH. MO 200x. Ntese que slo se
observan dentro de la vaina del pelo.

c
a

Fig. 3. Hifas hialinas tabicadas y ramificadas (a),


hifas artrosporadas (b) y acmulos de artrosporas
(c) compatibles con dermatofitos. Obsrvese la
diferencia con las levaduras de fig 4. Examen
directo de la muestra con KOH. MO 400x.

Fig. 5. Cmulos de blastosporas (a) y filamentos


cortos y flexuosos, de bordes rectos (b),
compatibles con Malassezia sp. MO 400x, previa
coloracin con Azul de Metileno 1%.

Fig. 4. Cmulos de levaduras y pseudomicelio.


Obsrvese que a diferencia de las artrosporas (Fig.
3), en la ampliacin se nota perfectamente la
brotacin. Examen directo de la muestra con
KOH. MO 400x.
Fig. 6. a) Conidia de
hongo contaminante.
En general, estas
esporas aparecen en
el examen directo de
muestras
provenientes de uas
y pies. No tiene
valor diagnstico.
b) Hifas en mosaico,
ARTEFACTO que
comnmente
se
confunde con hifas
de
dermatofitos.
Examen directo de la
muestra con KOH.
MO 400x.

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35

Curso y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

Fig. 7. Pelo con concreciones blandas de


color claro alrededor de la vaina del pelo
caracterstico de piedra blanca (Trichosporon
cutaneum)

Fig.- 8- Pelo con concreciones duras de color


oscuro y aspecto ptreo alrededor de la vaina
del pelo caracterstico de piedra negra (Priedraia
hortae)

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36

Curso y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

CARACTERSTICAS MACROSCPICAS DE LOS PRINCIPALES


DERMATOFITOS
a

Fig. 9. Microsporum canis.


Cultivo de 15 das a 25-28 C en a) agar
Sabouraud b) agar Lactrimel c) agar DTM.

Fig. 10. Microsporum gypseum.


Cultivo de 15 das a 25-28 C en a) agar
Sabouraud b) agar Lactrimel c) agar DTM.

Fig. 11. Epidermophyton floccosum.


Cultivo de 15 das a 25-28 C en a) agar
Sabouraud b) agar Lactrimel c) agar DTM.

Fig. 12. Trichophyton tonsurans.


Cultivo de 15 das a 25-28 C en a) agar
Sabouraud b) agar Lactrimel c) agar DTM.

c
Fig. 13. Trichophyton rubrum.
Cultivo de 15 das a 25-28 C en a) agar
Sabouraud b) agar Lactrimel c) agar DTM.

c
Fig.-14- Trichophyton mentagrophytes.
Cultivo de 15 das a 25-28 C en a) agar
Sabouraud b) agar Lactrimel c) agar DTM.

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Curso y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

CARACTERSTICAS MACROSCPICAS DE OTROS AGENTES


FNGICOS
S

Fig. 15. Levaduras en agar Sabouraud (S) y


DTM (D). Las levaduras pueden crecen y viran
el DTM, crecer y no virarlo, o no crecer en
este medio ya que son inhibidas por la
cicloheximida.

Fig. 17. Hongos miceliales no dematofitos


que pueden crecer en DTM, produciendo o no
viraje del indicador. Obsrvese el parecido de
algunos de micelio blanco con los
dermatofitos.

Fig. 16. Malassezia spp. en agar bilis de buey.


Este hongo crece slo en medios adicionados
con cidos grasos y a 37C.

Fig. 18. El mismo


material sembrado en
agar
Sabouraud
(izquierda) y agar
DTM (derecha)
Diferentes
hongos
contaminantes crecen
en el agar Sabouraud
(), sin embargo
estos son inhibidos
por la cicloheximida .
En el tubo de la
derecha se observan
las colonias aisladas
del dermatofito ().

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38

Curso y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

ESTRUCTURAS MICROSCPICAS CARACTERSTICAS DE LOS


PRINCIPALES DERMATOFITOS AGENTES DE MICOSIS
SUPERFICIALES

Fig. 19. Macroconidias y microconidias


caractersticas de Microsporum canis.
Disgregado con LF-AA. MO 400x.

Fig. 20. Macroconidias y microconidias


caractersticas de Microsporum gypesum.
Disgregado con LF-AA. MO 400x.

Fig. 21. Abundantes microconidias y espirales


caractersticas
de
Trichophyton
mentagrophytes. Disgregado con LF-AA. MO
400x.

Trichophyton rubrum. Disgregado con LF-

Fig. 23. Microconidias de diferentes tamaos y


formas
y
macroconidias
irregulares,
caractersticas de Trichophyton tonsurans.
Disgregado con LF-AA. MO 400x.

caractersticas de
Ntese la
ausencia de microconidias. Disgregado con LFAA. MO 400x.

Fig.

22.

Microconidias

caractersticas

de

AA. MO 400x.

Fig.

24.

Macroconidias

Epidermophyton

floccosum.

Los disgregados fueron realizados a partir de cultivos de 18 das en agar Lactrimel a 25-28 C

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39

Curso y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

PRUEBAS
PARA
DERMATOFITOS

DIFERENCIAR

ESPECIES

DE

a)

b)
Fig. 25. Prueba de perforacin "in vitro" del pelo. La
foto superior (a) muestra un pelo atacado por el hongo,
obsrvese las cuas (rganos perforadores), abajo (b) un
pelo sano.
Esta prueba diferencia T. rubrum de T.
mentagrophytes.

Fig. 26. Prueba de ureasa. (a) tubo


control sin inocular; (b) cepa ureasa
negativa; (c) cepa ureasa positiva.
Esta prueba diferencia T. rubrum de
T. mentagrophytes.

PRUEBAS PARA IDENTIFICACIN DE Candida albicans.

Fig. 27. Formacin de tubo germinativo


caracterstico de C. albicans. Ntese en la
ampliacin que en la zona donde nace el
filamento no hay estrangulacin. Examen directo
despus de 3 horas a 37 C en presencia de suero.
Fresco coloreado con LF-AA. MO 400x.

Fig. 28. Clamidosporas o clamidoconidias


caractersticas de C. albicans en el medio de bilis
de Feo. Fresco coloreado con LF-AA. MO 400x.

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

40

Curso y Taller Diagnstico de las Micosis superficiales

BIBLIOGRAFA
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Instituto Nacional Enfermedades Infecciosas, INEI, ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrn". 1997.

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Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

41

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

AUTO-EVALUACIN PRCTICA
Junto a la gua del curso Ud. recibi una caja con todo el material necesario para responder
estas preguntas prcticas. Las respuestas figuran al final de la gua. Sugerimos que para su
mximo aprovechamiento lea las respuestas correctas una vez que haya resuelto todos los
problemas prcticos que se enumeran a continuacin.
Problema 1- Muestra 1 Escamas proveniente de
una lesin de ua de pie de 10 aos de evolucin,
con marcada hiperqueratosis ungueal y una
coloracin amarilla. Colocar entre porta y
cubreobjetos una porcin de escamas con una
gota de KOH al 20 % - 30%. Calentar
suavemente y observar al microscopio ptico. En
el caso de que el preparado est muy grueso le
sugerimos agregar una gota de agua glicerina 50%
por los bordes del cubreobjeto, dejar en cmar
hmeda y realizar una nueva observacin a las 24
horas.
Indicar qu estructuras observa.
1. Levaduras multibrotadas.
2. Levaduras con brotacin unipolar agrupadas
en racimos y filamentos cortos flexuosos de
extremos romos compatibles con Malassezia sp.
3. Abundantes levaduras y pseudomicelio.
4. Filamentos
tabicados
y/o
artrosporas
compatibles con dermatofitos
Problema 2- Preparado A. Es un disgregado de
una colonia de un dermatofito aislado de una
lesin en forma anular de bordes sobreelevados
en el antebrazo de una paciente adulta que posee
todo tipo de mascotas en su casa. Se enva foto
del desarrollo de la cepa en los diferentes medios
inoculados (DTM, Sabouraud y Lactrimel)
En base a las caractersticas macroscpicas (foto
problema 2) y a las caractersticas microscpicas
(preparado A) indicar de qu hongo se trata:
1. Microsporum canis
2. Microsporum gypseum
3. Trichophyton mentagrophytes.
4. Epidermophyton floccosum
Problema 3- Muestra 2 (cepa a identificar). Se
extrajo muestra de una lesin en pliegue
submamario por raspado con bistur, el paciente
le relata prurito y ardor; la lesin es muy hmeda.
Realiza un preparado con KOH y observa
abundantes levaduras y escaso pseudomicelio. A
las 48 horas se observ desarrollo de levaduras en

los tubos sembrados. Le enviamos un control


positivo (Candida albicans), un control negativo
(Candida guillermondii) y la cepa aislada para su
identificacin presuntiva.
Realice con estas tres levaduras las pruebas de
filamentacin o formacin de tubo germinativo y
el crecimiento en medio de bilis de feo como lo
indica la gua. Para esta ltima prueba se provee 3
tubos con el medio de Feo ya preparado.
Cmo la informara?
1. La cepa aislada fue identificada como levadura
NO Candida albicans
2. La levadura aislada fue identificada como
Candida albicans
3. Se asla Candida sp.
Problema 4- Preparado B - De una muestra
proviene de una lesin descamativa en planta de
pie, se obtiene un desarrollo en Sabouraud y
DTM a los 10 das de un hongo filamentoso de
anverso blanco, de micelio algodonoso, colonia de
borde definido y el reverso sin coloracin en el
ASG y con viraje del indicador en DTM (foto
problema 4). Realiza un repique en Lactrimel
para su estudio, a los 10 das observa el desarrollo
de una colonia algodonosa, extendida con un
pigmento anaranjado en el reverso. De este medio
realiza un disgregado (Preparado B)
En base de las caractersticas micro y
macromorfolgicas, cmo lo informara.
1. Trichophyton mentagrophytes.
2. Trichophyton rubrum
3. Microsporum canis
4. Epidermophyton floccosum
Si quisiera corroborar el aislamiento qu prueba
complementaria realizara:
1. Prueba de urea de Christensen modificada /
perforacin del pelo
2. Crecimiento en DTM
3. Crecimiento en granos de arroz.
4. Formacin de clamidosporas en medio de
bilis de Feo

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 5- Muestra 3. Se realiza una impronta
con cinta scotch de un paciente con lesiones
acrmicas en pecho y dorso y se colorea con azul
de metileno. De acuerdo a lo observado en la
muestra rotulada 3 Cmo lo informara?
1. Se observa levaduras multibrotadas.
2. Levaduras con brotacin unipolar agrupadas
en racimos y filamentos cortos flexuosos
compatibles con Malassezia sp.
3. Filamentos tabicados compatibles con
dermatofitos
4. Se observa abundante pseudomicelio
Problema 6- Preparado C. De una lesin
hiperqueratsica ungueal de 6 aos de evolucin,
indolora, se extrajo una muestra cuyo examen
directo con KOH revel abundantes filamentos
artrosporados. El material se cultiv en ASG con
cloranfenicol y en DTM e incub a 25C. A los 10
das se observa el desarrollo de colonias con las
caractersticas de foto problema 6. Se realiza un
repique en Lactrimel y se ve un pigmento rojo
difusible en el reverso. Se realiza un disgregado
(Preparado C)
De que hongo se trata?
1. Epidermophyton floccosum
2. Trichophyton mentagrophytes.
3. Trichophyton rubrum
4. Microsporum gypseum
Problema 7- Preparado D. Se toma una muestra
de cuero cabelludo de un nio que presenta
mltiples lesiones alopcicas de bordes regulares.
La observacin en fresco con KOH del pelo
muestra un ataque ectotrix del mismo. Como dato
epidemiolgico la madre relata que el nio le teme
a los animales, no los toca nunca, vive en un
departamento, pero suele ir a jugar al arenero de
la plaza.
A los siete das Ud. realiza un control del cultivo y
observa abundante desarrollo de un micelio
blanco beige yesoso en ASG y DTM con viraje
del indicador (ver foto problema 7). Se realiza un
disgregado del mismo (preparado D). Qu
observa?
1. Abundantes macroconidias compatibles con
Microsporum canis
2. Abundantes macroconidias compatibles con
Microsporum gypseum
3. Abundantes macroconidias compatibles con
Epidermophyton floccosum

4. Abundantes microconidias compatibles con


Trichophyton mentagrophytes
Problema 8- Preparado E. Se presenta una
paciente adulta que presenta lesiones en cuero
cabelludo, que no presentan una placa alopcica
definida, sino pequea alopecas donde se ven
muones de pelo dando un aspecto de que el pelo
fue arrancado a mechones. Se extraen los pelos
cortos y enfermizos y se realiza una observacin
microscpica en la que se informa abundantes
esporas atacando el pelo en forma endotrix.
Algunos pelos se cultivan en ASG, DTM y
Lactrimel. A las 3 semanas se observa el
desarrollo de la foto problema 8. Colonias muy
plegadas, con el centro sobreelevado. En base a la
forma de ataque del pelo, y a las caractersticas
macroscpicas (foto problema 8) y microscpicas
preparado E en cul de estas especies pensara:
1. Trichophyton mentagrophytes
2. Microsporum canis
3. Trichophyton tonsurans
4. Epidermophyton floccosum
Problema 9- Preparado F. Se realiza una toma
de muestra de una lesin en regin crural de un
paciente de sexo masculino de 45 aos de edad.
La misma es muy descamativa y en el examen
directo no se observan elementos fngicos. El
paciente relata que la lesin es de larga data y
estuvo en tratamiento, suspendiendo la
medicacin antifngica hace 3 das. A los 12 das
se observa el crecimiento incipiente de un
dermatofito en los tubos inoculados (ASG y
DTM) (ver foto problema 9). Cuando se realiza
un disgregado de la colonia de la cepa se observan
abundantes clamidosporas y unas pocas
macroconidias. Se realiza un reaislamiento en agar
Lactrimel, luego de obtener un buen crecimiento
del cual se realiza el preparado F. Qu observa?
1. Hifas en raqueta y abundantes microconidias
compatibles con Trichophyton rubrum
2. Microconidias abundantes, caractersticas de
Trichophyton mentagrophytes
3. Macroconidias compatibles con
Epidermophyton floccosum
4. Macroconidias y microconidias compatibles
con Microsporum gypseum.

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II

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Foto problema 4

Foto problema 2

Lactrimel

Sabouraud

DTM

DTM

Foto problema 6

Sabouraud

DTM

DTM

Lactrimel

Foto problema 7

Lactrimel

Lactrimel

Foto problema 8

Lactrimel

Sabouraud

Sabouraud

DTM

Foto problema 9

Sabouraud

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DTM

Sabouraud

Lactrimel

III

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

RESPUESTAS A LA AUTO-EVALUACIN PRCTICA


Las respuestas correctas estn subrayadas el resto de las respuestas se encuentran tachadas. En el caso que la
respuesta fuera incorrecta, al lado de cada opcin sealamos las probables causas de error que pueden presentarse y los
detalles a tener en cuenta para llegar al diagnstico micolgico (sombreado en gris).
Esta auto-evaluacin ser posteriormente apoyada con el taller presencial.
Problema 1- Muestra 1. Escamas proveniente de una lesin de ua de pie de 10 aos de evolucin,
con marcada hiperqueratosis ungueal y una coloracin amarilla. Colocar entre porta y cubreobjetos una
porcin de escamas con una gota de KOH al 20 % - 30%. Calentar suavemente y observar al
microscopio ptico. En el caso que el preparado est muy grueso le sugerimos agregar una gota de
agua-glicerina 50% por los bordes del cubreobjeto y realizar una nueva observacin a las 24 horas.
Indicar qu estructuras observa.
1. Levaduras multibrotadas.

En el preparado se pueden observar, a veces, abundantes


artrosporas, que pueden confundirse con levaduras. Sin
embargo recuerde que las levaduras presentan brote (ver
Atlas). Las micosis por levaduras en uas de pie son poco
frecuentes.
Estas estructuras se observan en el caso de
pitiriasis versicolor, son muy caractersticas y
con la sola observacin de las mismas ya se hace
el diagnstico (ver Atlas). Conviene realizar una
coloracin previa con azul de metileno al 1%
para mejor observacin de estas estructuras.

2. Levaduras con brotacin unipolar


agrupadas en racimos y filamentos cortos
flexuosos de extremos romos compatibles con Malassezia sp.

3. Abundantes levaduras y pseudomicelio.

4. Filamentos tabicados y/o artrosporas


compatibles con dermatofitos

El pseudomicelio en lesiones crnicas a veces se


confunde con micelio verdadero, esto pasa
comnmente en lesiones inguinales. Se recalca que las
micosis por levaduras en uas de pie son muy poco
frecuentes.
Tanto por la caracterstica de la lesin como por
epidemiologa y el tiempo de evolucin se puede
sospechar una tinea unguium (infeccin producida
por un dermatofito). Siempre hay que confirmar el
diagnstico clnico con estudios micolgicos
teniendo en cuenta que hay otras afecciones no
infecciosas en uas que se asemejan a estas micosis.

Problema 2- Preparado A. Es un disgregado de una colonia de un dermatofito aislado de una lesin


en forma anular de bordes sobreelevados en el antebrazo de una paciente adulta que posee todo tipo de
mascotas en su casa. Se enva foto del desarrollo de la cepa en los diferentes medios inoculados (DTM,
Sabouraud y Lactrimel).
En base a las caractersticas macroscpicas (ver foto problema 2) y a las caractersticas microscpicas
(preparado A) indicar de qu hongo se trata:
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IV

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

1. Microsporum canis

2. Microsporum gypseum

3. Trichophyton mentagrophytes.

4. Epidermophyton floccosum

Este agente de micosis superficial es muy caracterstico por su macro


y micromorfologa (ver Atlas) adems de las lesiones anulares con
bordes sobreelevados. Es importante saber la epidemiologa ya que
probablemente el paciente se haya contagiado de animales, en cuyo
caso es importante tambin tratar a la mascota para eliminar la fuente.
Este dermatofito posee macroconidias fusiformes semejantes a M.
canis, hay que observar detenidamente la pared y los extremos de la
macroconidia (ver Atlas) caractersticas con los que se diferencian. M.
gypseum produce lesiones similares a M. canis sin embargo M. gypseum se
contagia de la tierra (geoflico).

Este dermatofito posee abundantes microconidias y a veces


macroconidias en forma de cigarro, de pared fina. Las
lesiones caractersticas de piel son de bordes sobreelevados
pero menos definidos y generalmente no son anulares.

Este dermatofito posee SLO MACROCONIDIAS, las que


son muy caractersticas (ver Atlas).

Problema 3- Muestra 2. (cepa a identificar). Se extrajo muestra de una lesin en pliegue


submamario por raspado con bistur, el paciente le relata prurito y ardor; la lesin es muy hmeda.
Realiza un preparado con KOH y observa abundantes levaduras y escaso pseudomicelio. A las 48 horas
se observ desarrollo de levaduras en los tubos sembrados. Le enviamos un control positivo (Candida
albicans), un control negativo (Candida guilliermondii) y la cepa aislada para su identificacin presuntiva.
Realice con estas tres levaduras las pruebas de filamentacin o formacin de tubo germinativo y el
crecimiento en medio de bilis de feo como lo indica la gua. Para esta ltima prueba se provee 3 tubos
con el medio de Feo ya preparado.
Cmo la informara?
1. La cepa aislada fue identificada como
levadura NO Candida albicans

Es la forma correcta de informar ya que la nica


levadura que se puede descartar por las pruebas
realizadas fue sta. La identificacin al nivel de
especie queda reservada para casos de micosis
sistmicas o candidiasis recidivantes de mucosas.

2. La levadura aislada fue identificada como Candida albicans


La levadura incgnita no filamenta ni forma clamidosporas en el
medio de Feo. Tratar de ver la diferencia entre brotacin y
formacin de tubo germinativo observando los controles.

3. Se asla Candida sp.


No es correcto informar as ya que las micosis por levaduras no son
causadas solamente por este gnero, sino tambin por otros gneros.

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 4- Preparado B. Muestra proveniente de una lesin descamativa en planta de pie, se
obtiene un desarrollo en Sabouraud y DTM a los 10 das de un hongo filamentoso de anverso blanco,
de micelio algodonoso, colonia de borde definido y el reverso sin coloracin en el ASG y con viraje del
indicador en DTM (foto problema 4). Realiza un repique en Lactrimel para su estudio, a los 10 das
observa el desarrollo de una colonia algodonosa, extendida con un pigmento anaranjado en el reverso.
De este medio realiza un disgregado (Preparado B).
En base a las caractersticas micro y macromorfolgicas, cmo lo informara.
1. Trichophyton mentagrophytes.

Lo que observa son abundantes microconidias redondas


agrupadas en racimos e hifas en espiral (ver Atlas). Este
dermatofito es el segundo agente causal ms importante de
tinea pedis despus de T. rubrum.

Este dermatofito puede poseer abundantes microconidias en forma de lgrima


(ver Atlas), sin embargo la mayora de los aislamientos posee escasa
fructificacin, y a veces micelio estril. Su principal caracterstica es su pigmento
rojo intenso en los medios de cultivo, sin embargo a veces puede no poseer este
pigmento, en cuyo caso se recurre a pruebas complementarias (ureasa y
perforacin del pelo).

2. Trichophyton rubrum

Lo ms importante a tener en cuenta es que los dermatofitos del gnero


Microsporum poseen abundantes macroconidias caractersticas (ver Atlas). Adems
los agentes de este gnero no son agentes de tinea pedis. A veces se lo puede
encontrar en lesiones de dorso de pie pero generalmente como lesiones satlites de
una tinea corporis.

3. Microsporum canis

Epidermophyton floccosum
Este dermatofito posee SLO MACROCONIDIAS, las que
son muy caractersticas (ver Atlas).

Si quisiera corroborar el aislamiento qu prueba complementaria realizara


1. Prueba de urea de Christensen modificada / perforacin del pelo
Estas seran las pruebas de eleccin ya que diferencian T. rubrum de T.
mentagrophytes (a veces este ltimo presenta un pigmento amarronado naranja que
nos puede confundir entre ambas especies). Siempre hay que realizar la
observacin micromorfolgica ya que la disposicin y forma de las conidias es
importante. En aislamientos sin fructificacin es donde se utilizan estas pruebas.

2. Crecimiento en DTM

No es necesario porque en el primocultivo ya comprobamos que el


hongo es capaz de crecer y virar el DTM, se deben realizar repiques en
este medio para aislar el dermatofito cuando se tiene primocultivos muy
contaminados.

3. Crecimiento en granos de arroz.

Este medio favorece la esporulacin, a veces en cepas de


dermatofitos sin fructificacin es muy til, sobre todo teniendo en
cuenta que la identificacin de estos hongos se basa en las
caractersticas microscpicas y macroscpicas.

4. Formacin de clamidosporas en medio de bilis de Feo

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

Este medio se utiliza en la


identificacin de levaduras.
VI

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 5- Muestra 3. Se realiza una impronta con cinta adhesiva de un paciente con lesiones
acrmicas en pecho y dorso y se colorea con azul de metileno. De acuerdo a lo observado en la muestra
rotulada 3 Cmo lo informara?
1. Se observa levaduras multibrotadas.
Las levaduras comunes tienen mltiples brotes o un brote
que no es paralelo al eje mayor. Es importante saber que
las infecciones en piel por levaduras estn restringidas a
regiones hmedas del cuerpo (pliegues) y slo se ve
infeccin en piel lisa en pacientes con inmunosupresin
severa o con postracin prolongada.

Eje principal
El brote de una levadura comn
puede tomar cualquier direccin

2. Levaduras con brotacin unipolar agrupadas en racimos y filamentos cortos flexuosos


compatibles con Malassezia sp.

Eje principal
Brote unipolar es el
paralelo a la clula
madre

Estas estructuras son caractersticas de la pitiriasis versicolor, la sola


observacin de las mismas tiene valor diagnstico (ver fig. 5 del Atlas).
Conviene realizar una coloracin previa con azul de metileno al 1% para
una mejor observacin, aunque tambin se las puede ver en el fresco.
Otra forma de infeccin producida por Malassezia spp. es la foliculitis,
en cuyo caso lo que predomina son las levaduras sobre los filamentos, la
presencia o ausencia de filamentos en el examen directo no es indicativo
de ninguna de las siete especies descriptas. No informar Pytirosporum ya
que este gnero actualmente no existe.

3. Filamentos tabicados compatibles con dermatofitos


Estas estructuras se ven en tineas de piel lisa, el aspecto de las
lesiones es muy diferente entre una tia y una pitiriasis versicolor.
La pitiriasis versicolor no es una tia.

4. Se observa abundante pseudomicelio


Es difcil que en una muestra slo se vea pseudomicelio, cuando esto ocurre
se puede confundir con micelio verdadero. De todos modos se vuelve a
recalcar que las lesiones por levaduras en piel lisa son infrecuentes y se
deben buscar estos agentes en pliegues y uas de mano.

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

VII

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 6- Preparado C. De una lesin hiperqueratsica ungueal de 6 aos de evolucin, indolora,
se extrajo una muestra cuyo examen directo con KOH revel abundantes filamentos artrosporados. El
material se cultiv en ASG con cloranfenicol y en DTM e incub a 25 C. A los 10 das se observa el
desarrollo de colonias con las caractersticas de la foto problema 6. Se realiza un repique en Lactrimel y
se ve un pigmento rojo difusible en el reverso. Se realiza un disgregado (Preparado C).
De qu hongo se trata?
1. Epidermophyton floccosum

2. Trichophyton mentagrophytes.

3. Trichophyton rubrum

4. Microsporum gypseum

Este dermatofito posee SLO


MACROCONIDIAS, las que son muy
caractersticas (ver Atlas). Este hongo raramente
produce tinea unguium
En el preparado problema C hay microconidias, pero no estn
dispuestas en acmulos que es lo caracterstico de este hongo,
adems de las hifas en espiral. La colonia de este dermatofito a
veces presenta un pigmento amarronado naranja que nos puede
confundir con T. rubrum. Es importante observar siempre la
micromorfologa y, en el caso cepas disgnicas, realizar las pruebas
complementarias. Hay que tener en cuenta que este es el segundo

En el preparado hay microconidias de forma y disposicin


caractersticas compatibles con este hongo. Sin embargo la mayora
de los aislamientos posee escasa fructificacin, y a veces micelio
estril. Es muy importante la observacin de la colonia, sobre todo
la presencia del pigmento rojo difusible, aunque a veces puede no
poseer este pigmento lo que, sumado a la ausencia de fructificacin,
puede hacer difcil la identificacin. En esos casos se lo repica en
medios que inducen la fructificacin como el agar arroz, adems de
recurrir a pruebas complementarias (ureasa y perforacin del pelo).
A veces las colonias pueden presentar una coloracin amarillenta al
principio que luego se torna roja, a veces el color rojo se ve hasta el
anverso.
Este es el primer agente causal de tinea unguium en ua de pie.

Este dermatofito posee abundantes macroconidias y


escasas microconidias al examen microscpico (ver Atlas).
Los dermatofitos del gnero Microsporum no son agentes de
tinea unguium (slo hay unos pocos casos descritos en la
literatura, por lo que hay que confirmar el aislamiento con
una nueva muestra).

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VIII

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 7- Preparado D. Se toma una muestra de cuero cabelludo de un nio que presenta
mltiples lesiones alopcicas de bordes regulares. La observacin en fresco con KOH del pelo muestra
un ataque ectotrix del mismo. Como dato epidemiolgico la madre relata que el nio le teme a los
animales, no los toca nunca, vive en un departamento, pero suele ir a jugar al arenero de la plaza.
A los siete das Ud. realiza un control del cultivo y observa abundante desarrollo de un micelio blanco
beige yesoso en ASG y DTM con viraje del indicador (ver foto problema 7). Se realiza un disgregado
del mismo (preparado D). Qu observa?
1. Abundantes macroconidias compatibles con Microsporum canis
Este dermatofito posee macroconidias fusiformes semejantes en
forma a las de M. gypseum, sin embargo hay que observar
detenidamente la pared y los extremos de la macroconidia (ver
Atlas). Este hongo se contagia de los animales dando lesiones muy
semejantes a M. gypseum y produce ataque ectotrix del pelo.

2. Abundantes macroconidias compatibles con Microsporum gypseum


Si observa las macroconidias de este hongo son de pared delgada y extremos
romos a diferencia de M. canis (ver Atlas); sin embrago, al igual que el M.
canis, produce un ataque ectotrix del pelo. Este dermatofito posee una
colonia de crecimiento muy rpido. Es geoflico, lo que se puede relacionar
con el arenero que visita el nio a menudo. Sin embargo no hay que
descartar M. canis slo por epidemiologa ya que a veces gatos y perros
suelen visitar los areneros. Con esto se quiere recalcar que todos los pasos
del examen micolgico son importantes: desde la observacin de la lesin, la
anamnesis y finalmente el examen micolgico.

3. Abundantes macroconidias compatibles con Epidermophyton floccosum


Las macroconidias NO son compatibles con este dermatofito
(ver Atlas). Pero lo ms importante es que este hongo NO
ATACA EL PELO y no posee microconidias en cultivo.

4. Abundantes microconidias compatibles con Trichophyton mentagrophytes


Este hongo produce ataque endotrix del pelo. En el
preparado no hay abundantes microconidias ni hifas en
espiral caractersticas de este hongo.

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IX

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 8- Preparado E. Se presenta una paciente adulta que presenta lesiones en cuero cabelludo,
que no presentan una placa alopcica definida, sino pequea alopecias donde se ven muones de pelo
dando un aspecto de que el pelo fue arrancado a mechones. Se extraen los pelos cortos y enfermizos y
se realiza una observacin microscpica en la que se informa abundantes esporas atacando el pelo en
forma endotrix. Algunos pelos se cultivan en ASG, DTM y Lactrimel. A las 3 semanas se observa el
desarrollo de la foto problema 8: colonias muy plegadas, con el centro sobreelevado. En base a la forma
de ataque del pelo, y a las caractersticas macro (foto problema 8) y microscpicas (preparado E), en
cul de estas especies pensara.

1. Trichophyton mentagrophytes

2. Microsporum canis

3. Trichophyton tonsurans

4. Epidermophyton floccosum

Este dermatofito es agente de tinea capitis, provocando


ataque endotrix del pelo. Sin embargo las
caractersticas microscpicas del preparado no son
compatibles (ver Atlas).

Las caractersticas microscpicas del preparado no son


compatibles con este dermatofito que presenta
abundantes macroconidios fusiformes. Lo ms
importante es que este hongo ATACA EL PELO en
forma ectotrix, y las lesiones son placas alopcicas bien
definidas.

Este dermatofito es importante agente de tinea capitis,


provocando ataque endotrix del pelo, las caractersticas macro
y microscpicas del cultivo son compatibles (ver Atlas).
Las colonias son muy plegadas y de crecimiento moderado a
lento, algunas cepas necesitan medios adicionados con
tiamina para su crecimiento. En cuanto al pigmento, algunas
cepas presentan un color amarillo-anaranjado intenso y otras
no presentan pigmento alguno.

Las caractersticas microscpicas del preparado no son


compatibles con este dermatofito. Pero lo ms
importante es que este hongo NO ATACA EL PELO.

Departamento Micologa INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales


Problema 9- Preparado F. Se realiza una toma de muestra de una lesin en regin crural de un
paciente de sexo masculino de 45 aos de edad. La misma es muy descamativa y en el examen directo
no se observan elementos fngicos. El paciente relata que la lesin es de larga data y estuvo en
tratamiento, suspendiendo la medicacin antifngica hace 3 das. A los 12 das se observa el
crecimiento incipiente de un dermatofito en los tubos inoculados (ASG y DTM) (ver foto problema 9).
Cuando se realiza un disgregado de la colonia se observan abundantes clamidosporas y unas pocas
macroconidias. Se realiza un reaislamiento en agar Lactrimel y, luego de obtener un buen crecimiento,
se realiza el preparado F. Qu observa?
1. Hifas en raqueta y abundantes microconidias compatibles con Trichophyton rubrum
El T. rubrum tiene una colonia caracterstica con un pigmento
rojo difusible, a veces al principio en el medio (ASG o
Lactrimel) puede tener un pigmento amarillo pero con el
tiempo se torna rojo, adems E. floccosum no tiene
microconidias.

2. Microconidias abundantes, caractersticas de Trichophyton mentagrophytes


En el preparado no hay microconidias, que son caractersticas
de este hongo adems de las hifas en espiral. La morfologa de
la colonia es diferente a la de E. floccosum y el crecimiento es
rpido.

3. Macroconidias compatibles con Epidermophyton floccosum


Tanto la morfologa como las caractersticas microscpicas
del preparado son compatibles con este dermatofito. A veces
en cultivos de este hongo se ven abundantes
clamidoconidios ya que las cepas son muy sensibles a los
cambios de temperatura y cualquier cambio provoca la
formacin de las mismas. Este hongo no presenta
microconidios.

4. Macroconidias y microconidias compatibles con Microsporum gypseum.


Las macroconidias de este dermatofito, si bien son abundantes,
son fusiformes y el hongo posee adems escasas a regulares
microconidias. La morfologa de la colonia y la velocidad de
crecimiento es muy diferente a la de E. floccosum.

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XI

Curso a Distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales

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EVALUACIN TERICA MICOSIS SUPERFICIALES


I- Nio de 5 aos con una lesin de cuero cabelludo en forma de placa, descamativa, con bordes netos,
pelos cortos, quebradizos. Con una pinza de depilar se obtienen algunos muones de pelo que se
colocan entre porta y cubreobjetos con una gota de KOH al 30 %.
Su madre relata que el gato del nio fue tratado 2 meses atrs por una tia provocada por un hongo
muy comn en estos felinos. En base a los datos epidemiolgicos, qu esperara ver:
1. Esporas atacando la parte interna del pelo (ataque endotrix).
2. Esporas en la parte interna y externa del pelo (ataque ectotrix).
3. Pelo perforado por cuas e hifas rodeando el pelo.
4. 1 y 3 son correctas.
II- Usted extrajo muestra de una lesin en la regin crural por raspado con bistur. El paciente le relata
prurito y ardor y la lesin es muy hmeda. Realiza un preparado con KOH y observa abundantes
levaduras y escaso pseudomicelio. A las 48 horas observa desarrollo de levaduras en los tubos
inoculados.
Qu prueba rpida realizara para identificar presuntivamente la levadura?.
1. Ureasa.
2. Prueba de perforacin del pelo.
3. Prueba de filamentacin o formacin de tubo germinativo.
4. Formacin de clamidosporas.
III- Ud obtuvo desarrollo en Sabouraud y DTM, a los 10 das, de un hongo filamentoso de anverso
blanco, de micelio algodonoso, colonia de borde definido y el reverso con una coloracin anaranjada
rojiza. Realiza un repique en Lactrimel para su estudio y en ste medio el hongo produce el mismo
pigmento y en el disgregado no posee ninguna caracterstica micromorfolgica que ayude a
identificarlo. Qu pruebas complementarias realizara?
1. Test de urea de Christensen modificada y test de perforacin del pelo
2. Crecimiento en granos de arroz u otro medio pobre para favorecer la fructificacin.
3. Cultivo en lmina y colonia gigante en medio Lactrimel.
4. Todas son correctas.
IV- Microsporum canis es un hongo zooflico principal causante de tia en nios. Este microorganismo
no se encuentra como agente de:
1. Tia corporis
2. Tia capitis
3. Tia unguium
4. 1 y 2 son correctas
V- El dermatlogo le enva un paciente con lesiones acrmicas en pecho y dorso. El paciente relata que
estas lesiones se acentuaron despus de una exposicin prolongada al sol, no tiene prurito pero si una
marcada descamacin. Ud. realiza un raspado de la lesin y adems una toma con cinta scotch. En el
examen con azul de metileno observa estructuras caractersticas compatibles con Malassezia spp.
Cules son esas estructuras?:
1. Levaduras multibrotadas.
2. Levaduras con brotacin unipolar agrupadas en racimos y filamentos cortos flexuosos de extremos
romos.
3. Pseudomicelio rudimentario
4. Todas son correctas.

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XII

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VI- Usted le extrajo una muestra de ua de pie (onicomicosis) a un paciente, la lesin presentaba una
marcada hiperqueratosis ungueal de 10 aos de evolucin, indolora. En el examen directo en fresco con
KOH 30% se observan abundantes filamentos con artroconidias. Ud. cultiva el material en agar
Sabouraud con cloranfenicol y en DTM e incuba a 25 C, hace una observacin sistemtica durante 3
semanas y a los 20 das observa el desarrollo de tres tipos de colonias. Cul pensara que es un
dermatofito?
1. Colonia de color verde en el anverso que vira el medio DTM.
2. Colonia de lento desarrollo de anverso blanco, pigmento rojo en el reverso, que vira el DTM.
3. Colonia pulverulenta blanca que creci rpidamente en el Sabouraud (4 das) y mas lentamente en el
DTM sin producir viraje.
4. Ninguna de las tres colonias es el agente.
VII- Complete el siguiente cuadro (considerando cepas tpicas):

M. canis
M. gypseum
T. mentagrophytes

T. rubrum
T. tonsurans
E. floccosum

Cantidad de
Cantidad de
Capacidad de Ecologa (fuente
macroconidias
microconidias invadir (piel,
de infeccin)
en el disgregado en el disgregado
pelo y/o
del cultivo
del cultivo
uas)
Piel y pelo
Escasas o
ausentes
Zooflico
(roedores)
antropoflico
Antropoflico
Regular a
abundantes
Piel y uas

VIII- Las especies de Microsporum son capaces de invadir pelo y producir tia corporis. Cuando se
cultivan, producen estructuras microscpicas caractersticas que, junto con las caractersticas
macroscpicas, permiten hacer la identificacin a nivel de especie. Cules son estas estructuras?
1. Macroconidias.
2. Hifas en raqueta e hifas en espiral.
3. Microconidias.
4. Clamidosporas en cultivo naciente.
IX- Un paciente presenta lesiones en planta del pie, pruriginosas, con una marcada descamacin. Ud. le
realiza un examen en fresco con KOH al 30% y no observa elementos fngicos, dando un informe
preliminar negativo. A los cinco das cuando realiza el primer control del cultivo Ud. observa abundante
desarrollo de un micelio blanco algodonoso en Sabouraud y sin desarrollo en el DTM. Hace un
disgregado del Sabouraud y observa micelio estril
Qu conducta tomara?
1. Realizara el test de perforacin del pelo y ureasa porque pensara que es un T. rubrum por el rpido
crecimiento.
2. Hara un repique en DTM del hongo para confirmar que es un dermatofito.
3. Eliminara todos los tubos porque pensara que es un contaminante, ya que el examen directo fue
negativo y no desarroll en DTM a los siete das.
4. Ninguna es correcta.

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XIII

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X- Unir con una flecha las correspondencias


Infeccin fngica en piel lampia
caracterizada por lesiones escamosas con
borde sobreelevado cuyo agente causal puede
ser cualquier dermatofito
Si al realizar un examen directo en fresco con
hidrxido de potasio, de una lesin en forma
de mcula (Mancha) en la palma de las manos
se observan filamentos tabicados flexuosos
de color marrn, pensara en:

Candida albicans

Trichophyton rubrum

Es un dermatofito que se asla con mucha


frecuencia y presenta un pigmento rojo
difusible muy caracterstico
Epidermophyton floccosum
Es el nico dermatofito que NO tiene
capacidad de invadir el pelo
Malassezia ssp.
La pitiriasis versicolor es una infeccin de
distribucin mundial causada por una
levadura
Tia negra
La prueba de filamentacin y formacin de
clamidosporas se usa para identificar
Tia corporis

Estas preguntas nos permitirn realizar una correcta evaluacin de la informacin que le estamos
enviando. Solicitamos la contesten una vez que hayan ledo toda la gua y realizado la parte prctica.
Enviarlas por correo, e-mail o fax, antes del 21 de agosto a:
Curso a distancia y Taller Diagnstico de Micosis Superficiales
Departamento Micologa. INEI. ANLIS. Dr Carlos G. Malbrn
C1282AFF. Av. Vlez Sarsfield 563.
Ciudad Autnoma de Buenos Aires.
FAX 4302-5066 int. *30 e-mail: nrefojo@anlis.gov.ar
Es imprescindible la recepcin de esta evaluacin antes de la fecha estipulada, caso contrario
se dar por NO aprobado el Curso
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