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Degradacin de contam

DEGRADACIN

Prctica 2.

DE CONTAMINANTES: CINTICA
DE CRECIMIENTO Y DEGRADACIN

Introduccin
Los fenoles son compuestos aromticos que se caracterizan por tener uno o varios grupos
hidroxilo unidos directamente al anillo aromtico. Por lo general, se nombran como derivados
del miembro ms sencillo de la familia, el fenol. La dbil acidez del grupo fenlico ha
determinado que estas sustancias sean agrupadas qumicamente junto a los cidos
carboxlicos y a los taninos, conformando as el grupo de los cidos orgnicos. Las
concentraciones naturales de compuestos fenlicos son usualmente inferiores a 1 g/l y los
ms habituales son los fenoles, cresoles y los cidos sirngico, vainllico y p-hidroxibenzoico.
Procedencia de fenoles en el ambiente
La presencia de fenoles en el medio ambiente es consecuencia tanto de acciones naturales
como del aporte antropognico, fundamentalmente, de carcter industrial. Desde el punto de
vista de la contaminacin, es de sumo inters la presencia de estos compuestos en aguas y
sedimentos, por lo que es necesario prestar inters al origen, migracin y distribucin de los
fenoles en los distintos tipos de efluentes acuosos.
Principales fuentes de emisin
Las principales fuentes de contaminacin de estos compuestos se producen en la industria
farmacutica, concretamente durante el proceso de fabricacin del cido acetilsaliclico
(aspirina), y en la produccin de resinas fenlicas. Es utilizado tambin en la manufactura del
nylon y otras fibras sintticas; como desinfectante para matar bacterias y hongos; y como
antisptico para combatir los problemas de acn.
Estas sustancias se encuentran presentes en las aguas superficiales, como resultado de la
contaminacin ambiental y de los procesos naturales de descomposicin de la materia
orgnica.
La mayora de los compuestos fenlicos que se pueden encontrar en aguas residuales son de
origen industrial. Son utilizados en industrias de cuero y textiles, coqueras, refineras de
petrleo, destileras de alquitrn, sntesis y formulacin de pesticidas, fbricas de pasta de
papel, plantas de tratamiento de maderas, fbricas de colorantes, etc.
Por ejemplo, el fenol y sus derivados ms simples se utilizan principalmente en la fabricacin
de polmeros sintticos y plsticos entre los que se encuentran la baquelita y polmeros
similares. Algunos fenoles se utilizan como plaguicidas por su accin herbicida, fungicida e
insecticida, lo que provoca su difusin en el medio ambiente a travs de las actividades
agrcolas y su entrada en la cadena alimenticia.
Efectos en el medio ambiente
Respecto de su incidencia con el medio ambiente, es una sustancia nociva para los
organismos acuticos, provocndoles efectos adversos de distinta magnitud en funcin de la
concentracin a la que se encuentren expuestos. Esta sustancia est clasificada como
Compuesto Orgnico Voltil (VOC) y puede contribuir potencialmente a la formacin de ozono
troposfrico, daino para los cultivos, la fauna y el hombre.
La toxicidad de los fenoles vara con la posicin y el nmero de sustituyentes en el ncleo
aromtico. La toxicidad es mayor para los sustituyentes halogenados, siendo los yodofenoles y

bromofenoles ms txicos que los clorofenoles. En cuanto a la posicin relativa, la toxicidad


sigue el orden p- > m- > o-. Tambin se produce un aumento de capacidad txica con el
nmero y el volumen de los sustituyentes. Por otro lado, Schultz y Riggin (1985) atribuyen un
mayor carcter txico a los sustituyentes aceptores de electrones frente a los donadores.
Tambin se ha comprobado que el aumento de la toxicidad de los clorofenoles con el nmero
de sustituyentes Cl est relacionado con la difcil biodegradacin de estos compuestos, y
sta, a su vez, con el aumento de la lipofilia.
La degradacin de los compuestos fenlicos puede ser llevada a cabo por organismos
procariotas y eucariotas, tanto en condiciones aerbicas (oxgeno como aceptor final de
electrones) como anaerbicas (nitrato, sulfato, iones metlicos o dixido de carbono como
aceptores finales de electrones. En este sentido, algunos investigadores han demostrado que
cultivos de Pseudomonas sp. y Spirillum sp., degradan fenol en ausencia de oxgeno libre.
Tambin ha sido reportada la fermentacin metanognica de fenol bajo estas condiciones de
oxigenacin.

Objetivos
Objetivo General
Observar, describir y analizar la degradacin de fenoles en cultivo en lote con un consorcio
microbiano especializado.
Objetivos Especficos
Evaluar la degradacin de un contaminante orgnico como el fenol realizando ensayos a
diferentes concentraciones (50, 100, 200 y 500 mg/L).
Analizar la cintica de crecimiento bacteriano y obtener los parmetros de velocidad de
crecimiento y consumo de sustrato.
Discutir el uso de microorganismo degradadores de fenol.

Materiales y Equipo
Materiales
Matraces Erlenmeyer de 250 ml para
cada concentracin y control
Tubos eppendorf para toma de
muestra de la cintica
Filtros millipore con membrana de 0.22
um
Soluciones
Sol. Stock de Fenol 100 mg/ml
Sales para medio Basal

Equipo
Incubadora con agitacin
Centrfuga
Espectrofotmetro
Celdas plsticas

Celdas de cuarzo

Metodologa
A c tiv a r e l
in o c u lo
(u sa n d o
m e d io 1 0 X y
5X)

In o c u la r
m e d io c o n
10% del
c o n s o rc io
m ic ro b ia n o

A g re g a r 1 2 5
m l d e l m e d io
d e c u ltiv o
e s te ril a l
m a tra z

To m a r
m u e s tra s (la s
p rim e ra s
c o n c e n tra c io
nes deben
to m a r
m u e s tra s
c a d a 4 h o ra s
e l p rim e r d a )

D e te rm in a r e l
consum o de
s u s tra to p o r
e s p e c tro fo to m
e tria

Resultados
Grfica 1. Cintica de crecimiento para diferentes concentraciones de fenol
1.2
1
0.8
0.6

Absorbancia
50 mg/l

100 mg/l

200 mg/l

500 mg/l

0.4
0.2
0

20

40

60

80 100 120 140 160 180

Tiempo (horas)

La

mx

Ks

son

0.01728

1
h

28.9654

mg
l

respectivamente

Grfica 2. Degradacin de fenol


200
180
160
140
120
50 mg (mg/l)
/l
Concentracin

100 100 mg/l

200 mg/l

500 mg/l

80
60
40
20
0
0

10

20

30

40

50

60

70

Tiempo(horas)

ANALISIS DE RESULTADOS
La degradacin del fenol a nivel bitico, esta mediada principalmente por organismos capaces
de utilizar este compuesto como fuente de C y energa.
La reaccin global de degradacin es:

La reaccin oxidacin aerobia del fenol es:

4 C 6 H 6 O+28 O2 24 C O2 +12 H 2 O
Para una concentracin de 50, 100 y 200 mg/L el comportamiento de biomasa se obtuvo de
manera similar, la fase exponencial se present a partir de las 25 hasta las 68.5 horas
aproximadamente, as como en la fase de adaptacin, donde se puede observar que en los
tres casos se adaptaron de manera semejante. Para el caso de la muestra de 500 mg/L, hubo
un mayor retardo, pues en la fase de adaptacin se prolong hasta 52 horas, as como en la
fase exponencial que se dio en 128.5 horas. Es evidente que el aumento de biomasa con el
consorcio utilizado se alarg conforme la concentracin de fenol fue aumentando.
La

mx

Ks

son

0.01728

1
h

28.9654

mg
l

respectivamente, Ks es la concentracin de

sustrato que soporta tasa mxima de crecimiento especfico, para soportar dicha tasa de

crecimiento, se necesita tener una concentracin mnima de

28.9654

mg
l

sustrato, en este

caso fenol.
Las bacterias pueden llevar a cabo el proceso de biodegradacin del fenol, en especial las
Gram negativas, siendo el gnero Pseudomonas sp. el ms reportado con esta capacidad ;
otros gneros de bacterias Gram negativas han sido reportados en la degradacin del fenol,
entre las que se encuentran Agrobacierium, Acinembacter, Burkholderia, Klebsiella, entre
otros; no obstante las bacterias Gram positivas tambin tienen la capacidad de degradar este
compuesto, como por ejemplo el gnero Rhodococcus. Sin embargo, independientemente del
tipo de bacteria, estas poseen gran actividad de monooxigenasas y dioxigenasas que permiten
degradar este compuesto.
La va metablica tpica para la degradacin de fenol se produce a travs de derivados de
catecol, antes de la desciclizacin a travs de una orto- o meta- oxidacin.

Figura 1. Visualizacin esquemtica de las rutas de degradacin de fenol

La degradacin de fenol a diferentes concentraciones iniciales (50, 100, 200, 500 mg / L) se


muestra en grfica 2. Con la concentracin inicial de 50 mg/L hubo una degradacin del
32.91% por el consorcio microbiano en 69 horas. Para el caso la muestra de concentracin de
100 mg/L se obtuvo una degradacin del 42.55%, as como para el de 200 mg/L un 26.6% . Por
el contrario, en la concentracin de 500 mg/L se encuentra un aumento de concentracin de
fenol, esto se puede deber a errores en el proceso de medicin de la concentracin.

Conclusin
Se pudo observar como el fenol en diferentes concentraciones, es degradado por parte de
microorganismos, utilizndolo como nica fuente de carbono, la degradacin es evidenciada
con la reduccin de la concentracin de fenol, aunque este resultado no fue muy claro a una
concentracin inicial de 500mg/L iniciales de fenol. Se observ una adaptacin ms rpida y
un mayor crecimiento a la menor concentracin (50mg/l).

La utilizacin de cinticas de crecimiento, en donde se utiliza como fuente de carbono y


energa el contaminante, permite evidencia la degradacin de dicho contaminante, y no solo
eso, tambin se pueden obtener las bases para el diseo de un proceso a mayor escala que
permita la biorremediacin del suelo o del agua, o simplemente el tratamiento de aguas
contaminadas provenientes de la industria.

Bibliografa
Garca, Jose. (2007). Biodegradacin de fenol en un reactor discontinuo de alimentacin
secuenciada. (Tesis de pregrado). Universidad Autnoma del estado de Hidalgo.
Pachuca, Hidalgo.
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determinacin de compuestos fenlicos (Tesis doctoral). Universidad Complutense de
Madrid. Madrid, Espaa.
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Espaa. Recuperado de: http://www.prtr-es.es/Fenoles,15658,11,2007.html
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synthetic phenol-containing wastewaters by MBR. Journal of Membrane Science, 281(1),
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Pseudomonas putida immobilized in polyvinyl alcohol (PVA) gel. Journal of Hazardous
Materials, 164(2), 720-725.
Guerin, M. R. (1977). Energy sources of polycyclic aromatic hydrocarbons. Environment,
Chemistry and Metabolism, 1, 3-42.

Memoria de clculo
Tabla 1. Resultados obtenidos para la cintica de crecimiento a diferentes concentraciones de sustrato (fenol)

50 mg/l de fenol

Tiempo
(horas)

Absorbanc
ia

0
2
4
6.5
8
20
22
24
26
28
32
47
51.5
53
68.5

0
0.129
0.163
0.183
0.133
0.131
0.132
0.182
0.148
0.184
0.258
0.774
0.836
0.905
1.129

100 mg/l de
fenol
Tiemp
o
Absorban
(horas
cia
)
0
0
5
0.094
7.5
0.02
25
0.044
27
0.007
29
0.068
33
0.15
48
0.634
52.5
0.741
69
1.013
-

200 mg/l de fenol

500 mg/l de fenol

Tiempo
(horas)

Absorbanc
ia

Tiempo
(horas)

Absorban
cia

0
4
22
47
49
51
53
57
68
-

0
0.088
0.199
0.552
0.678
0.708
0.782
0.943
1.048
-

0
4.5
24.5
47.5
52
68.5
77.5
170.5
-

0
0.103
0.171
0.201
0.21
0.429
0.448
0.95
-

Fase log
1.1
f(x) =0.6
0.03x - 0.73
Absorbancia
R = 0.1
0.99
25 35 45
Tiempo (horas)

Grfica 3. Cintica de crecimiento para una concentracin de fenosl(sustrato) de 50 mg/l


1.4
1.2
1
0.8
Absorbancia

0.6
0.4
0.2
0
0

10

20

30

40

-0.2
Tiempo (horas)

50

60

70

Fase log
1
0.5
Absorbancia f(x) = 0.03x - 0.83
R = 1
0
25
35
45
Tiempo (horas)

Grfica 4. Cintica de crecimiento para una concentracin de fenosl(sustrato) de 100 mg/l


1.4
1.2
1
0.8
Absorbancia

0.6
0.4
0.2
0
0

10

20

30

40

-0.2
Tiempo (horas)

50

60

70

Fase log
1.05

f(x)
= 0.03x - 1.02
0.85
AbsorbanciaR = 0.98
0.65
45 50 55 60

Tiempo (horas)

Grfica 5. Cintica de crecimiento para una concentracin de fenol(sustrato) de 200 mg/l


1.4
1.2
1
0.8
Absorbancia

0.6
0.4
0.2
0
0

10

20

30

40

-0.2
Tiempo (horas)

50

60

70

Fase log
0.9

f(x) = 0.01x + 0.06


R = 0.4
1
Absorbancia
80 140
50 110 170
Tiempo (horas)

Grfica 6. Cintica de crecimiento para una concentracin de fenosl(sustrato) de 500 mg/l


1
0.9
0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

20

40

60

80

100 120 140 160 180

Tiempo (horas)

Modelo de Monod

Grfica 7. Modelo de Monod linealizado [1/s vs 1/]

Tabla 2. Velocidades de

Concentra
cin de
fenol

mg
s [ ]
l
50
100
200
500

80

[O.D./
h]
0.032
0.0305
0.0331
0.0052

1
S

75.188

70

60
50

0.02
0.01
0.00
5
0.00
2

34.602
0
40.485
29.154
5
75.187
9

1/

f(x) = - 1675.95x + 57.86

40

31.25

30
20

30.21

32.79

0.01

0.01

10
0
0

1/S

Clculo de las constantes

1
1
=57.862 mx =0.01728
mx
h
Ks
mg
=1428 K s =1428 0.01728=28.9654
mx
l

Degradacin de fenol
Concentraci
n de fenol
[mg/L]
0
50
100
200
500

0.02

Absorban
cia
0
2.7
4.65
9.3
23.9

0.02

0.03

Curva tipo de Fenol


600
500

f(x) = 21.01x - 0.39


R = 1

400

Concentracin de fenol [mg/L]

300
200
100
0
0

10

15

20

25

Absorbancia

Tabla 3. Resultados de la degradacin de Fenol.

50 mg /l
Tiemp
Tiemp
o
Abosrba Concentra o
(hora
ncia
cin
(hora
s)
s)
0
2.028 42.2142
0
2
1.619 33.6211
5
4
1.281 26.5197 7.5
6.5 0.898 18.4729
9
8
1.358 28.1375 21
20 1.538 31.9193 23
22 1.614 33.5160 25
24 1.384 28.6837 27
26 1.419 29.4191 29
28 1.618 33.6001 33
32 1.378 28.5577 48
47 1.306 27.0450 52.5
51.5 1.017 20.9731 54
18.7250 57
53
0.91
56 0.763 15.6365 69
13.8927
68.5 0.68
--

100 mg/l

200 mg/l

500 mg/l

Tiemp
Tiemp
Abosrba Concentra o
Abosrba Concentr
o
Abosrba Concentra
ncia
cin
(hora
ncia
acin (horas
ncia
cin
s)
)

1.902
1.386
1.233
1.578
1.459
1.694
1.581
1.398
1.588
1.193
0.805
0.779
0.769
0.733
0.82

39.5669
28.7258
25.5112
32.7597
30.2595
35.1968
32.8227
28.9779
32.9698
24.6708
16.5190
15.9727
15.7626
15.0062
16.8341

--

--

0
4
22
24
47
49
51
53
57
68
-------

2.283
2.262
1.217
1.07
0.667
0.573
0.648
0.613
0.621
-------

47.5717
47.1305
25.1751
22.0866
13.6196
11.6446
13.2204
12.4850
12.6531
-------

0
0.178
4.5
0.33
24.5 0.198
47.5 0.298
52
0.923
53.5 0.346
56.5 0.305
68.5 0.3969
-----------------

33.4568
65.3920
37.6588
58.6688
189.9813
68.7536
60.1395
79.4477
---------

Balanceo de la reaccin de oxidacin aerobia