METODO 3 MATERIA GRASA (Mtodo Rose-Gottlieb)

3.1. Principio.Se entiende por contenido en materia grasa delos distintos tipos de
leche evaporada, leche con-centrada o de leche condensada, al contenido
enmateria grasa determinado por el mtodo descri-to a continuacin.El contenido
en materia grasa se determina porextraccin de la materia grasa de una
solucinamoniacal-alcohlica de la muestra con ayuda deEter Etlico y de Eter de
Petrleo, evaporacin delos disolventes, pesada de los residuos y clculoen
porcentaje de la muestra, segn el mtodoRose-Gottlieb.Este mtodo permite
determinar el contenidoen materia grasa de los siguientes tipos de leche:Leche
evaporada rica en grasa.Leche evaporada entera o leche evaporada.Leche
evaporada semidesnatada o parcial-mente desnatada.Leche evaporada
desnatada.Leche concentrada rica en materia grasa (noexiste).Leche concentrada
entera o leche concentrada.Leche concentrada semidesnatada.Leche concentrada
desnatada.Leche
condensada.Leche
condensada
semidesnatada.Leche
condensada desnatada.3.2. Material y aparatos3.2.1. Balanza analtica.3.2.2.
Tubos de extraccin apropiados, dota-dos de tapones de vidrio esmerilado o de
otro tipode cierre, insensible a la accin de los disolventesempleados.3.2.3.
Matraces de fondo plano y pared delga-da, de 150 a 250 mililitros de
capacidad.3.2.4. Estufa de desecacin a presin atmosf-rica, bien ventilada,
controlada por termostato(temperatura a 102 1C).3.2.5. Grnulos destinados a
facilitar la ebulli-cin, exentos de materia grasa, no porosos, nodesmenuzables,
como por ejemplo perlas devidrio trocitos de carburo de silicio (el empleo deestos
grnulos es facultativo; ver al respecto elpunto 3.4.2.1.).3.2.6. Sifn
correspondiente a los tubos deextraccin.3.2.7. Centrfuga.3.3. Reactivos Todos
los reactivos han de conformarse con lascondiciones requeridas en la prueba en
blanco(punto 3.4.1.). Llegado el caso, podrn destilarsede nuevo los reactivos en
presencia de 1 g degrasa de mantequilla por 100 ml de disolvente.131074 Agua
PA-ACS131129 Amonaco 25% (en NH3) PA131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PAACS-ISO131085 Etanol 96% v/v PA132770 Eter Ditlico estabilizado con 6 ppmde
BHT PA-ACS131315 Eter Petrleo 40-60C PA-ISO131542 Potasio Yoduro PAISO3.3.1. Solucin de Amonaco 25% (en NH3) PA(densidad a 20C, unos 0,91
grs. por ml).3.3.2. Etanol 96% v/v PA o, en su ausencia,153973 Etanol 96
totalmente desnaturalizado PR.3.3.3. Eter Ditlico estabilizado con ~ 6 ppmde
BHT PA-ACS, exento de perxidos.Nota 1: Para asegurarse de que el Eter
Dietlicoest exento de perxidos, aadir a 10 ml de Eter Dietlico contenidos en
una pequea probeta contapn, de vidrio, enjuagada previamente con unpoco de
Eter Dietlico, 1 ml de una solucin conun 10% de Potasio Yoduro PA-ISO,
recientemen-te preparada. Agitar y dejar reposar durante unminuto. No ha de
aparecer coloracin amarillaalguna en ninguna de las dos capas.Nota 2: Eter

Ditlico estabilizado con ~ 6 ppmde BHT PA-ACS puede ser mantenido exento
deperxidos adicionando una hoja de cinc hmedapreviamente sumergida durante
un minuto en unasolucin cida diluida de Cobre II Sulfato 5-hidra-to PA-ACS-ISO
y posteriormente lavada con AguaPA-ACS. Para un litro de Eter Dietlico,
utilizarunos 8.000 mm cuadrados de hoja de cinc, cor-tada en bandas
suficientemente largas para llegara la mitad del recipiente, como mnimo.3.3.4. Eter
de Petrleo, de punto de ebullicinentre 30 y 60C. En su defecto usar Eter
Petrleo40-60C PA-ISO.3.3.5. Mezcla de disolventes, preparada inme-diatamente
antes de su empleo y mediante lamezcla de igual volumen de Eter Dietlico
(punto3.3.3.) y de Eter de Petrleo (punto 3.3.4.). (Sepuede sustituir la mezcla de
disolventes, siempreque sea indicado, por el Eter Dietlico o por el Eterde
Petrleo).3.4. Procedimiento.3.4.1. Prueba en blanco: Al tiempo que se efecta la
determinacin de lamateria grasa de la muestra, efectuar una pruebaen blanco con
10 ml de Agua PA-ACS utilizandoel mismo tipo de aparato de extraccin, los mismos reactivos en las mismas proporciones y elmismo procedimiento que el descrito
a continua-cin, salvo el punto 3.4.2.2. Si el valor de la prue-ba en blanco es
superior a 0,5 mg, habr quecomprobar la pureza de los reactivos y en el casode
que sean impuros habrn de ser purificados osustituidos.3.4.2.
Determinacin:3.4.2.1. Secar el matraz (punto 3.2.3.) despusde haber depositado
los grnulos (punto 3.2.5.),para facilitar una ebullicin moderada durante
laevaporacin de los disolventes en la estufa (punto3.2.4.) durante una media hora
a una hora. Dejarenfriar el matraz hasta que adquiera la temperatu-ra ambiente y
pesar el matraz ya enfriado, con unaprecisin de 0,1 mg.3.4.2.2. Agitar la muestra
preparada de 5 grs.y pesar inmediatamente despus con una preci-sin de 1 mg,
directamente o por diferencia, 4 grs.de leche evaporada o de leche concentrada o
2 a2,5g de leche condensada en el tubo de extrac-cin (punto 3.2.2.). Aadir agua
hasta un volumende 10,5 ml y agitar suavemente calentando almismo tiempo
ligeramente (40 a 50C), hasta latotal dispersin del producto. La muestra ha
deestar totalmente dispersa, ya que en caso contra-rio habr de repetir la
determinacin.3.4.2.3. Aadir 1,5 ml de la solucin de Amo-naco 25% (en NH3) PA
(punto 3.3.1.) o un volu-men correspondiente de una solucin ms con-centrada y
mezclar convenientemente.3.4.2.4. Aadir 10 ml de Etanol 96% v/v PA(punto
3.3.2.) y mezclar los lquidos, suave perototalmente, en el tubo de extraccin.
Enfriar con-venientemente, si es necesario, el tubo bajo elagua corriente.3.4.2.5.
Aadir 25 ml de Eter Dietlico (punto3.3.3.). Cerrar el tubo, agitar
enrgicamente,moviendo varias veces, durante un minuto.3.4.2.6. Retirar el tapn
con precaucin y aa-dir 25 ml de Eter de Petrleo (punto 3.3.4.) utili-zando los
primeros mililitros para enjuagar eltapn y el interior del cuello del tubo y
dejandoque se deslicen los lquidos de enjuague al interiordel aparato. Cerrar el
tubo volviendo a colocar eltapn agitar e invertir varias veces durante

treintasegundos. Si no se prev centrifugado durante laoperacin indicada en el

punto 3.4.2.7., no agitardemasiado enrgicamente.3.4.2.7. Dejar reposar el tubo
hasta que la capalquida superior quede transparente y se separentidamente de la
fase acuosa. Se puede realizartambin la separacin con ayuda de una centrfu-ga
adecuada (punto 3.2.7.).Nota: Si se utiliza una centrfuga cuyo motor noes trifsico,
pueden producirse chispas y por ellohabr que estar atento para evitar una
explosin oun incendio como consecuencia de la presenciade vapores de ter (en
caso de ruptura de untubo, por ejemplo).3.4.2.8. Retirar el tapn y enjuagarlo, as
comoel interior del cuello del tubo, con unos ml de mez-cla de solventes (punto
3.3.5.) y dejar que loslquidos del enjuague se deslicen al interior delaparato.
Trasvasar con mucho cuidado, lo mscompletamente posible, la capa superior al
matraz(punto 3.4.2.1.) mediante decantacin o conayuda de un sifn (punto
3.2.6.).Nota: Si el trasvase no se realiza con ayuda deun sifn, puede ser
necesario aadir un poco deagua para elevar el nivel de separacin de las
doscapas con el fin de facilitar la decantacin.3.4.2.9. Enjuagar el interior y el
exterior delcuello del tubo o la punta y la parte inferior delsifn con unos ml de la
mezcla de disolventes.Dejar que los lquidos del enjuague del exterior deltubo se
deslicen al interior del matraz y que los delinterior del cuello y del sifn se deslicen
al interiordel tubo de extraccin.3.4.2.10. Proceder a una segunda
extraccinrepitiendo las operaciones descritas en los puntos3.4.2.5. a 3.4.2.9.,
incluido, pero utilizando nica-mente 15 ml de Eter Dietlico y 15 ml de Eter
dePetrleo.
3.4.2.11. Efectuar una tercera extraccin pro-cediendo tal como se indica en el
punto 2.4.2.10,pero sin realizar el enjuague final (punto 3.4.2.9.).Nota: En el caso
de la leche desnatada evapo-rada, de la leche desnatada concentrada y de laleche
desnatada condensada, no es necesarioefectuar esta tercera extraccin.3.4.2.12.
Eliminar con cuidado por evaporacino destilacin el mximo de disolvente
(incluido elEtanol). Si el matraz fuera de pequea capacidad,habr que eliminar un
poco de disolvente de lamanera anteriormente indicada tras cada extraccin.3.4.2.13. Cuando ya no exista olor alguno dedisolvente, calentar el matraz
inclinado, duranteuna hora, en la estufa.3.4.2.14. Retirar el matraz de la estufa,
dejarenfriar hasta que adquiera la temperatura ambien-te y pesar con precisin de
0,1 mg.3.4.2.15. Repetir las operaciones de los puntos3.4.2.13. y 3.4.2.14.
calentando a intervalos detreinta a sesenta minutos hasta que dos
pesadasconsecutivas no difieran en ms de 0,5 mg o queaumente la masa. En el
punto 3.5. utilizar la pesa-da tomando el valor ms bajo (M1).3.4.2.16. Aadir de 15
a 25 ml de Eter dePetrleo para verificar si la materia extrada estotalmente
soluble. Calentar ligeramente y agitarel disolvente mediante un movimiento
circularhasta que se disuelva toda la materia grasa.3.4.2.16.1. Si la materia

extrada es totalmentesoluble en Eter de Petrleo, la masa de materiagrasa es la

diferencia entre la pesada del punto3.4.2.1. y la pesada del punto
3.4.2.15.3.4.2.16.2. Si aparecieran materias insolubleso siempre en caso de duda,
extraer completa-mente la materia grasa contenida en los matracesmediante
repetidos lavados con Eter de Petrleocaliente, dejando que la materia no disuelta
sedeposite antes de cada decantacin. Enjuagartres veces el exterior del cuello del
matraz. Calen-tar el matraz inclinado, durante una hora, en laestufa y dejar enfriar
tal como se indic anterior-mente (punto 3.4.2.1.) hasta que adquiera la temperatura ambiente; pesar con una precisin de0,1 mg. La masa de la materia grasa
es la dife-rencia entre la pesada del punto 3.4.2.15. y estapesada final.3.5.
Clculos.La masa expresada en gramos de la materiagrasa extrada viene dada
por la siguiente frmu-la :(M1- M2) - (B1- B2) y el contenido en materia grasa de la
muestra,expresado en porcentaje, por la frmula:
(M1- M2) - (B1- B2)
x 100
S
en donde:M
1= masa, en gramos, del matraz M conte-niendo la materia grasa tras la operacin
delpunto
3.4.2.15. M2= masa, en gramos, del matraz M tras laoperacin del punto
3.4.2.1. o, en caso de queaparezcan materias insolubles o en caso de duda,tras la
operacin del punto 3.4.2.16.2.B
1= masa, en gramos, del matraz B de laprueba en blanco tras la operacin del
punto3.4.2.15.B
2= masa, en gramos, del matraz B, tras laoperacin del punto 3.4.2.1. o, en el caso
de queaparezcan materias insolubles o en caso de duda,tras la operacin del
punto 3.4.2.16.2.S = masa, en gramos, de la muestra utilizada.La diferencia entre
los resultados de dos deter-minaciones efectuadas simultneamente o inmediatamente una despus de la otra por el mismoanalista sobre la misma muestra y
en las mismascondiciones, no ha de exceder 0,05 grs. de mate-ria grasa por 100 g
de producto.3.6. ReferenciasPrimera Directiva de la Comisin de 13 deNoviembre
de 1979 (79/1067/CEE); "Diario Oficialde las Comunidades Europeas" nmero L
327/29,de 24 de Diciembre de 1979.

METODO 4: MATERIA GRASA (Mtodo Rose-Gottlieb)

4.1. Principio.Se entiende por contenido en materia grasa delos distintos tipos de
leche en polvo al contenidoen materia grasa determinado por el mtodo des-crito a
continuacin.El contenido en materia grasa se determina porextraccin de la
materia grasa de una solucinamoniacal-alcohlica de la muestra con ayuda
deEter Etlico y de Eter de Petrleo, evaporacin delos disolventes, pesada de los
residuos y clculoen porcentaje de la muestra, segn el mtodoRose-Gottlieb.Este
mtodo permite determinar el contenidoen materia grasa de las siguientes
leches:Leche en polvo rica en grasa o extragrasa.Leche en polvo entera o leche
entera en polvo.Leche en polvo parcialmente desnatada osemidesnatada.Leche en
polvo desnatada o leche desnatadaen polvo.4.2. Material y aparatos.
4.2.1. Balanza analtica.
4.2.2. Tubos de extraccin apropiados, dota-dos de tapones de vidrio esmerilado o
de otro tipode cierre insensible a la accin de los disolventesempleados.4.2.3.
Matraces de fondo plano y pared delga-da, de 150 a 250 ml de capacidad.4.2.4.
Estufa de desecacin a presin atmosf-rica, bien ventilada, controlada por
termostato(temperatura a 102 1C).4.2.5. Grnulos destinados a facilitar la ebullicin, exentos de materia grasa, no porosos, nodesmenuzables, como por ejemplo
perlas devidrio trocitos de carburo de silicio (el empleo deestos grnulos es
facultativo; ver al respecto elpunto 4.4.2.1.).4.2.6. Bao de agua a 60-70C.4.2.7.
Sifn correspondiente a los tubos deextraccin.4.2.8. Centrfuga.4.3.
Reactivos.131074 Agua PA-ACS131129 Amonaco 25% (en NH3) PA131085
Etanol 96% v/v PA132770 Eter Ditlico estabilizado con ~ 6 ppmde BHT PAACS131315 Eter Petrleo 40-60C PA-ISO131542 Potasio Yoduro PA-ISO Todos
los reactivos han de conformarse con lascondiciones requeridas en la prueba en
blanco(punto 4.4.1.). Llegado el caso, podrn destilarsede nuevo los reactivos en
presencia de 1 g degrasa de mantequilla por 100 ml de disolvente.4.3.1. Solucin
de Amonaco 25% (en NH3) PA(densidad a 20C, unos 0,91 g/ml) una solucinms
concentrada de una concentracin conocida.4.3.2. Etanol 96% v/v PA o, en su
ausencia,153973 Etanol 96 totalmente desnaturalizadoPR.4.3.3. Eter Ditlico
estabilizado con ~ 6 ppmde BHT PA-ACS, exento de perxidos.Nota 1: Para
asegurarse de que el Eter Dietlicoest exento de perxidos, aadir a 10 ml de
EterDietlico contenidos en una pequea probeta contapn de vidrio, enjuagada
previamente con unpoco de Eter Dietlico, 1 ml de una solucin conun 10% de
Potasio Yoduro PA-ISO, recientemen-te preparada. Agitar y dejar reposar durante
unminuto. No ha de aparecer coloracin amarillaalguna en ninguna de las dos

capas.Nota 2: El Eter Ditlico estabilizado con ~ 6ppm de BHT PA-ACS puede ser
mantenido exen-to de perxidos adicionando una hoja de cinchmeda previamente
sumergida durante un minu-to en una solucin cida diluida de Cobre II Sulfa-to 5hidrato PA-ACS-ISO y posteriormente lavadacon Agua PA-ACS. Para 1 litro de Eter
Dietlico,utilizar unos 8.000 mm
2 de hoja de cinc, cortadaen bandas suficientemente largas para llegar a lamitad
del recipiente, como mnimo.4.3.4. Eter de Petrleo, de punto de ebullicinentre 30
y 60C. En su defecto usar Eter Petrleo40-60C PA-ISO.4.3.5. Mezcla de
disolventes, preparada inme-diatamente antes de su empleo, mediante la mez-cla
de igual volumen de Eter Dietlico (punto4.3.3.) y de Eter de Petrleo (punto 4.3.4.),
(sepuede sustituir la mezcla de disolventes, siempreque sea indicado, por el Eter
Dietlico o por el Eterde Petrleo).4.4. Procedimiento.4.4.1. Prueba en blanco. Al
tiempo que se efecta la determinacin de lamateria grasa de la muestra, efectuar
una pruebaen blanco con 10 ml de agua utilizando el mismotipo de tubo de
extraccin, los mismos reactivosen las mismas proporciones y el mismo procedimiento que el descrito a continuacin, salvo elpunto 4.4.2.2. Si el valor de la
prueba en blancoes superior a 0,5 mg, habr que comprobar lapureza de los
reactivos, en caso de que seanimpuros habrn de ser purificados o
sustituidos.4.4.2. Determinacin.4.4.2.1. Secar el tubo (punto 4.2.3.) despusde
haber depositado los grnulos (punto 4.2.5.)para facilitar una ebullicin moderada
durante laevaporacin de los disolventes en la estufa (punto4.2.4.) durante una
media hora a una hora. Dejarenfriar el matraz hasta que adquiera la temperatu-ra
ambiente y pesar el matraz ya enfriado, con unaprecisin de 0,1 mg.4.4.2.2. En el
tubo de extraccin (punto 4.2.2.)pesar con una precisin de 1 mg, bien directamente bien por diferencia, aproximadamente 1 gde leche en polvo o 1,5 g de leche
semidesnata-da en polvo o de leche desnatada en polvo. Aa-dir 10ml de agua y
agitar hasta la total dispersinde la leche (en algunas muestras habr que proceder a calentarlas).4.4.2.3. Aadir 1,5 ml de la solucin de Amo-naco 25% (en
NH3) PA (punto 4.3.1.) o un volu-men correspondiente de una solucin ms concentrada y calentar al bao de agua (4.2.6.)durante quince minutos, de 60 a 70C,
agitandode vez en cuando. Posteriormente enfriarlo, porejemplo mediante agua
corriente.4.4.2.4. Aadir 10 ml de Etanol 96% v/v PA(punto 4.3.2.) y mezclar los
lquidos suave, perototalmente, en el tubo de extraccin. Enfriar, convenientemente, si es necesario, el tubo bajo elagua corriente.4.4.2.5. Aadir 25 ml
de Eter Dietlico (punto4.3.3.). Cerrar el tubo, agitar enrgicamente invir-tiendo
varias veces durante un minuto.4.4.2.6. Retirar el tapn con precaucin y aa-dir
25 ml de Eter de Petrleo (punto 4.3.4.) utilizando los primeros ml para enjuagar el
tapn y elinterior del cuello del tubo y dejando que se desli-cen los lquidos de
enjuague al interior del apara-to. Cerrar el tubo volviendo a colocar el tapn,agitar

e invertir varias veces durante treintasegundos. Si no se prev centrifugado

durante laoperacin indicada en el punto 4.4.2.7., no agitardemasiado
enrgicamente.4.4.2.7. Dejar reposar el tubo hasta que la capalquida superior
quede transparente y se separentidamente de la fase acuosa. Se puede
realizartambin la separacin con ayuda de una centrfu-ga adecuada (punto
4.2.7.).Nota.- Si se utiliza una centrfuga cuyo motorno es trifsico pueden
producirse chispas y porello habr que estar atento para evitar una explo-sin o un
incendio como consecuencia de la pre-sencia de vapores de ter (en caso de
ruptura deun tubo, por ejemplo).4.4.2.8. Retirar el tapn y enjuagarlo, as comoel
interior del cuello del tubo con unos ml de mez-cla de solventes (punto 4.3.5.) y
dejar que loslquidos del enjuague se deslicen al interior deltubo. Trasvasar con
mucho cuidado, lo ms com-pletamente posible, la capa superior al matraz(punto
4.4.2.1.) mediante decantacin o conayuda de un sifn (punto 4.2.6.).Nota.- Si el
trasvase no se realiza con ayuda deun sifn, puede ser que necesitemos aadir
unpoco de agua para elevar el nivel de separacinde las dos capas con el fin de
facilitar la decanta-cin.4.4.2.9. Enjuagar el interior y el exterior delcuello del tubo o
la punta y la parte inferior delsifn con unos ml de la mezcla de disolventes.Dejar
que los lquidos del enjuague del exterior deltubo se deslicen al interior del matraz
y que los delinterior del cuello y del sifn se deslicen al interiordel tubo de
extraccin.4.4.2.10. Proceder a una segunda extraccinrepitiendo las operaciones
descritas en los puntos4.4.2.5. a 4.4.2.9. incluido, pero utilizando nica-mente 15
ml de Eter Dietlico y 15 ml de Eter dePetrleo.4.4.2.11. Efectuar una tercera
extraccin pro-cediendo tal como se indica en el punto 4.4.2.10,pero sin realizar el
enjuague final (punto 4.4.2.9.).Nota.- En el caso de la leche desnatada enpolvo no
es necesario realizar la tercera extraccin.4.4.2.12. Eliminar con cuidado por
evaporacino destilacin el mximo de disolvente (incluido elEtanol). Si el frasco
fuera de pequea capacidadhabr que eliminar un poco de disolvente de lamanera
anteriormente indicada tras cada extrac-cin.4.4.2.13. Cuando ya no exista olor
alguno dedisolvente, calentar el matraz, inclinado, duranteuna hora, en la
estufa.4.4.2.14. Retirar el matraz de la estufa, dejarenfriar hasta que adquiera la
temperatura ambien-te y pesar con precisin de 0,1 mg.4.4.2.15. Repetir las
operaciones de los puntos4.4.2.13. y 4.4.2.14. calentando a intervalos detreinta a
sesenta minutos hasta que dos pesadasno difieran en ms de 0,5 mg o que
aumente lamasa. En el punto 4.5. utilizar la pesada tomandoel valor ms bajo
(M1).4.4.2.16. Aadir de 15 a 25 ml de Eter dePetrleo para verificar si la materia
extrada estotalmente soluble. Calentar ligeramente y agitarel disolvente mediante
un movimiento circularhasta que se disuelva toda la materia grasa.4.4.2.16.1. Si la
materia extrada es totalmentesoluble en Eter de Petrleo, la masa de
materiagrasa es la diferencia entre la pesada del punto4.4.2.1. y la pesada del
punto 4.4.2.15.4.4.2.16.2. Si aparecieran materias insolubles osiempre en caso de

duda, extraer completamentela materia grasa contenida en los matracesmediante

repetidos lavados con Eter de Petrleocaliente, dejando que la materia no disuelta
sedeposite antes de cada decantacin. Enjuagar tresveces el exterior del cuello del
matraz. Calentar elmatraz, inclinado, durante una hora en la estufa ydejar enfriar
tal como se indic anteriormente(punto 4.4.2.1.) hasta que adquiera la
temperaturaambiente; pesar con una precisin de 0,1 mg. Lamasa de la materia
grasa es la diferencia entre lapesada del punto 4.4.2.15. y esta pesada final.4.5.
ClculosLa masa expresada en gramos de la materiagrasa extrada viene dada por
la siguiente frmu-la:(M1-M2) - (B1- B2)y el contenido en materia grasa de la
muestra,expresado en porcentaje, por la frmula:
(M1- M2) - (B1- B2)
x 100
S
en donde:M
1= masa, en gramos, del matraz M conteniendola materia grasa tras la operacin
del punto 4.4.2.15.M
2= masa, en gramos, del matraz M tras laoperacin del punto 4.4.2.1. o, en caso
de queaparezcan materias insolubles o en caso de duda,tras la operacin del
punto 4.4.2.16.2.B
1= masa, en gramos, del matraz B de laprueba en blanco tras la operacin del
punto4.4.2.15.B
2= masa, en gramos, del matraz B, tras laoperacin del punto 4.4.2.1. o, en el caso
de queaparezcan materias insolubles o en caso de duda,tras la operacin del
punto 4.4.2.16.2.S = masa, en gramos, de la muestra utilizada.