Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

PRCTICA N1: MICROSCOPA

I.

Marco terico:
El microscopio es un instrumento ptico de precisin que nos permite observar
pequeos seres o estructuras que son imperceptibles para el ojo humano. En los ltimos
tres siglos ha permitido ampliar el campo de investigaciones biolgicas y se ha convertido
en la herramienta bsica para abrir nuevas fronteras en biologa.
El primer microscopio fue inventado en Holanda (1590) por Zacharias Janssen, el cual
llegaba a 9x de magnificacin. El microscopio compuesto construido en Inglaterra por
Robert Hook le permiti en 1665 el descubrimiento de las clulas vegetales (celdillas de
corcho), Anton Van Leeuwenhoek construy lentes de gran aumento alcanzando algunas
de ellas hasta 270x. Posteriormente se efectuaron sucesivos perfeccionamientos en el
aparato de iluminacin, en los objetivos y oculares; cabe mencionar adems al microscopio
electrnico de transmisin, el cual es el ms sofisticado desarrollado en nuestros das.

II.

Objetivos:
Reconocimiento de las partes del microscopio de campo claro (ptico)
Efectuar con precisin observaciones microscpicas en diferentes
aumentos.
Preparar de manera correcta las lminas con la muestra de inters

II. Materiales:
Del alumno

Papel lente
Lamina cubreobjetos
Bulbo de cebolla
Frasco gotero
Lamina portaobjetos
Hojas de elodea
Del Laboratorio:

IV.

Microscopio

Procedimiento:
Reconocimiento de las partes del Microscopio
- OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador (por donde se mira). Su misin es
ampliar la imagen del objetivo. Suelen tener dos oculares, por eso se llaman binoculares, si
solo tiene uno se llama monocular.
- TUBO: Parte mecnica que proporciona sostn a los oculares y objetivos.
-REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos. La esfera se suele llamar CABEZAL y contiene los sistemas de lentes oculares.

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

- BRAZO: Es una pieza metlica de forma curvada que puede girar; sostiene por su
extremo superior al Tubo ptico y en el inferior lleva varias piezas importantes.
- PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin que se quiere observar. Tiene en su
centro una abertura circular por la que pasar la luz del sistema de iluminacin.
- OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta determinando
la cantidad de aumentos con la que queremos observar.
- PINZAS DE SUJECION: Parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin. La mayora
de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que
permiten un avance longitudinal y transversal de la preparacin.
- DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
- CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos que inciden sobre la
preparacin.
-TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que
consigue el enfoque correcto.
- BASE: Sujeta todo el microscopio.

Preparacin de la muestra en el portaobjetos o lmina:

1. Limpiar el portaobjetos con papel lente sostenindolo nicamente de los extremos.
2. Verter una gota de agua al portaobjetos con ayuda del gotero y colocar con cuidado la
muestra.
3. Cubrir con una laminilla evitando la formacin de burbujas de aire que podran
dificultar las observaciones, para esto se debe realizar una inclinacin como muestra la
Fig. 1

Fig. 1 Colocacin correcta de la

laminilla
4. Colocar la preparacin sobre la platina y con ayuda de las pinzas sujetarla. La parte
que contiene la preparacin deber estar sobre el orificio de la platina.

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

Manejo del microscopio

5. Encender la fuente de luz del microscopio y observar. El objetivo mediante el cual se
observa debe ser el de menor aumento. Elevar la platina con el tornillo macromtrico
hasta lograr identificar una parte de la muestra.
6. Con ayuda del tornillo micromtrico daremos nitidez a la imagen, para esto, solo
bastara girarlo moderadamente.
7. Rotando el revolver cambiaremos de objetivo a uno de mayor aumento. Un sonido
metlico indicar que el objetivo est en posicin.
8. Nuevamente con el tornillo micromtrico dar nitidez a lo observado.
Guardado del microscopio
9. Al terminar las observaciones y sus respectivos apuntes, apagar la fuente luminosa y
desenchufar.
10. Descender la platina con el tornillo macromtrico hasta el tope.
11. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de observacin y retirar la
preparacin.
12.
Limpiar con papel lente los objetivos, las lentes, etc. antes de enfundar y guardar el
microscopio.

VI. Cuestionario:
1. Explique por qu al hacer la iluminacin e Koehler se requiere enfocar una preparacin
antes de desplazar el condensador.
Porque de esta manera podremos establecer con precisin un ptimo iluminado de la
muestra enfocada al mover el condensador.
2. Por qu y para que se utiliza el aceite de inmersin
El aceite de inmersin es fundamental cuando se requiere observar estructuras de
menos de 10m de tamao para lo cual se utilizar el objetivo de 100x; este no
incrementa el aumento de los lentes, pero mejora la resolucin y nitidez de la imagen
producida por dicho objetivo, ya que el aceite de cedro, al presentar un ndice de
refraccin similar al del vidrio de la lmina, permite que los rayos de luz continen su
camino sin desviarse por accin del aire que est entre el objetivo y la muestra a observar.
3. Explique que es una preparacin en fresco y una fija
Preparacin en fresco: Se utiliza para observar microorganismos vivos.
Existen dos tcnicas:
Preparacin en fresco simple consiste en colocar una gota de lquido con los
microorganismos sobre un portaobjetos y a continuacin cubrirla con una laminilla,

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

Preparacin en gota pendiente. - Se

colocando una gota del material en un
cubreobjetos y cubrindolo con un
portaobjetos (es decir, de manera
con una excavacin central previa en el
portaobjetos.
Hay
que
sellar
la
con vaselina alrededor de la excavacin.
de esta ltima tcnica, es que la
no se seca y puede ser observada
tiempo ms largo.

realiza

invertida)
preparacin
La ventaja
preparacin
durante un

Preparacin fija:
Fijacin por calor: se realiza Una
fina extensin de una gota de muestra
lquida
sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a continuacin, se pasa la preparacin
de Forma rpida sobre la llama de un mechero. El calor de la llama mata las clulas
microbianas por desnaturalizacin de sus protenas. Las protenas coaguladas unen
las clulas al portaobjetos.
Fijacin qumica: Cuando se desea fijar especmenes delicados que es menos lesiva
que el calor. Para ello se aade una gota
del fijador,
por ejemplo, cido smico, formaldehdo,
o
glutaraldehdo, sobre la muestra lquida
con
los
microorganismos.
Despus de la fijacin, se aade el
colorante,
que debe permanecer el tiempo suficiente en
contacto
con el espcimen, para que pueda ser absorbido. A continuacin, se retira el exceso de
colorante, normalmente lavando con agua.
4. Cmo se determina el aumento de lo observado al microscopio?
El aumento total de lo observado en el microscopio se determina mediante el
producto del aumento del ocular por el aumento del objetivo, es decir:
AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular
Aunque esta frmula bsica permite obtener el aumento total de una imagen, con las
tcnicas de fotografa clsica o fotografa digital y el uso de software de procesamiento de
imgenes es posible lograr un aumento suplementario.
5. Qu es el lmite de resolucin?
Esta se define como la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que se
encuentran muy prximos entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno del
otro.

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

Mientras ms corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, ms finos sern los
detalles. La distancia entre esos dos puntos se conoce como Lmite de Resolucin, el cual
es tambin referido como el Poder de Resolucin y puede ser utilizada como un indicador
del rendimiento del microscopio.

Esto se puede comparar vagamente con algunos aspectos de la informtica, el tamao del
pixel por ejemplo; mientras ms pequeo sea el tamao, mayor ser la cantidad de
detalles de la imagen digital.
Lmites de Resolucin aproximados de algunos sistemas pticos:
Ojo humano: 0,2 mm.
Microscopio Fotnico: 0,2 m.
Microscopio electrnico: 0,2 nm.

Conclusiones:

A partir de las observaciones de esta primera prctica aprendimos que la

imagen formada por el objetivo es inversa con respecto a la muestra original, esto fue
gracias a la observacin de la letra e. En cuanto a las clulas del catafilo de cebolla
y la hoja de elodea logramos identificar las diferencias en forma y tamao que existen
entre ellas, siendo las primeras las de mayor longitud.

Ahora ya somos capaces de manipular correctamente el microscopio ptico

compuesto para realizar observaciones en diferentes aumentos, teniendo en cuenta
las reglas

Adems aprendimos puntos importantes para el buen manejo y cuidado del

microscopio tales como la limpieza correcta de los lentes, la manera de sujetarlo para
su traslado, etc.

Bibliografa
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/
56/cap304.htm
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp1/microscopio.html
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo3_4.ht
m
http://www.ugr.es/~agros/ugr/basfis07.htm

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

www.APSnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Microscopio.aspx