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Accin diabetognica de la estreptozotocina en


un modelo experimental de induccin neonatal
Article in Biomdica: revista del Instituto Nacional de Salud October 2016
Impact Factor: 0.55

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6 authors, including:
Leticia Bequer

Tahiry Gmez

Universidad de Ciencias Mdicas de Villa Cl

Universidad de Ciencias Mdicas de Villa Cl

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Sonia Claps
Universidad de Ciencias Mdicas de La Hab
18 PUBLICATIONS 63 CITATIONS
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Available from: Leticia Bequer


Retrieved on: 24 April 2016

PUBLICACIN ANTICIPADA EN LINEA

El Comit Editorial de Biomdica ya aprob para publicacin este manuscrito,


teniendo en cuenta los conceptos de los pares acadmicos que lo evaluaron.
Se publica anticipadamente en versin pdf en forma provisional con base en la
ltima versin electrnica del manuscrito pero sin que an haya sido
diagramado ni se le haya hecho la correccin de estilo.
Sintase libre de descargar, usar, distribuir y citar esta versin preliminar tal y
como lo indicamos pero, por favor, recuerde que la versin impresa final y en
formato pdf pueden ser diferentes.

Citacin provisional:
Bequer L, Gmez T, Molina JL, Artiles D, Bermdez R, Claps S. Accin
diabetognica de la estreptozotocina en un modelo experimental de induccin neonatal.
Biomdica. 2016;36(2).

Recibido: 03-02-15
Aceptado: 19-10-15
Publicacin en lnea: 21-10-15

Accin diabetognica de la estreptozotocina en un modelo experimental de


induccin neonatal

Streptozotocin diabetogenic action in an experimental model of neonatal induction

Accin diabetognica de la estreptozotocina

Leticia Bequer 1, Tahiry Gmez 1, Jos Luis Molina 1, Daniel Artiles 2, Rosa Bermdez 1,
Sonia Claps 3
1 Unidad de

Investigaciones Biomdicas, Universidad de Ciencias Mdicas de Villa Clara,

Santa Clara, Cuba


2 Departamento

de Anatoma Patolgica, Hospital Universitario Arnaldo Milin Castro,

Santa Clara, Cuba


3 Departamento

de Ciencias Morfolgicas, Instituto de Ciencias Bsicas y Preclnicas

Victoria de Girn, La Habana, Cuba

Correspondencia:
Leticia Bequer, Universidad de Ciencias Mdicas de Villa Clara. Carretera al Acueducto
y Circunvalacin. Santa Clara, Villa Clara, Cuba.
Telfono: incluir un nmero de contacto
leticiabm@ucm.vcl.sld.cu

Contribucin de los autores:


Leticia Bequer y Tahiry Gmez: direccin de la investigacin, protocolo de trabajo,
trabajo de experimentacin, anlisis estadstico e informe de investigacin.

Jos L. Molina: tutel el trabajo de experimentacin animal desde el punto de vista


biotico y prctico; realiz las eutanasias y recogi las muestras biolgicas.
Daniel Artiles y Rosa Bermdez: estudio histopatolgico de los pncreas.
Sonia Claps: interpretacin de los resultados y revisin crtica del manuscrito.

Introduccin. El estudio de la diabetes mediante modelos experimentales es


fundamental para estudiar mecanismos fisiopatolgicos de la enfermedad.
Objetivos. Comparar en la vida adulta de ratas Wistar la accin diabetognica de la
estreptozotocina segn momento y va de inoculacin del frmaco en periodo neonatal
evaluando variables bioqumicas, metablicas e histolgicas.
Materiales y mtodos. Se conformaron ocho grupos con ratas Wistar neonatas
hembras (n=10). Se evalu la induccin con estreptozotocina (100mg/Kg pc) segn el
da (2 y 5) y la va de inoculacin (subcutnea o intraperitoneal). Los controles fueron
inyectados con tampn citrato sdico. Durante 12 semanas se efectu seguimiento de
glucemia, peso, cantidad de alimento y agua consumida. Se realizaron pruebas de
tolerancia a la glucosa oral y hemoglobina glicosilada adems del estudio morfomtrico e
histopatolgico del pncreas.
Resultados. Se observ mortalidad de aproximadamente el 100% de los animales
inoculados con estreptozotocina el quinto da. En los del segundo da la supervivencia
fue total, evidencindose en estreptozotocina-2-sc una tendencia marcada a la presencia
de hiperglucemias, polifagia, polidipsia y disminucin de la ganancia del peso corporal
adems de hemoglobina glicosilada y prueba de tolerancia a la glucosa alterada. Las
lesiones histopatolgicas del pncreas se observan con mayor significacin en
estreptozotocina-2-sc, as como disminucin del nmero de islotes, corroborando mayor
dao por el efecto de estreptozotocina inoculado subcutneamente.
Conclusiones. La inyeccin subcutnea de estreptozotocina en una dosis de 100
mg/Kg pc en el segundo da posterior al nacimiento logra desarrollar con mayor
efectividad una diabetes moderada en ratas Wistar adultas.
Palabras clave: diabetes mellitus experimental, hiperglucemia, estreptozotocina,
glucosa, ratas; islotes pancreticos.

Introduction: Diabetes study using experimental models is essential to study


pathophysiological mechanisms of the disease.
Objectives: To compare life in adult Wistar rats the diabetogenic action of streptozotocin
(STZ) according to life period and administration route of the neonatal period to evaluate
drug biochemical, metabolic and histological variables.
Materials and methods: Eight groups neonatal female Wistar rats (n = 10) were formed.
Induction with STZ (100 mg / kg bw) was evaluated on the days 2 and 5 of life and the
administration route (subcutaneous or intraperitoneal). Controls were injected with
sodium citrate buffer. For 12 weeks monitoring blood glucose level, body weight, food
and water intake. Tolerance tests oral glucose and glycosylated hemoglobin and
histopathological addition pancreas morphometric study was performed.
Results: The mortality rate was about 100% on rats given STZ on the day 5 of life. On
the day 2 of life all rats survival, which showed a marked hyperglycemia, polyphagia,
polydipsia and decreased body weight gain in addition to increased glycosylated
hemoglobin rate and impaired oral glucose tolerance test. Histopathological lesions of the
pancreas were significantly observed in STZ-2-sc as well as a decrease number of islets,
showing a greater damaged by STZ effect subcutaneously administered
Conclusions: Subcutaneous injection of STZ in a dose of 100 mg / kg bw in the second
day after birth achieved more effectively develop moderate diabetes in adult Wistar rats.
Key words: Diabetes mellitus, experimental; hyperglycemia; streptozotocin; glucose;
rats; islets of Langerhans.

La diabetes se ha convertido en un problema mundial de salud en este nuevo siglo. Se


caracteriza por elevados niveles de glucosa en sangre debido a complejos procesos que
involucran tanto defectos en la secrecin de insulina por destruccin autoinmune de las
clulas del pncreas (Diabetes mellitus tipo 1) como desarrollo progresivo de
resistencia a insulina en hgado y tejidos perifricos asociada a la disminucin en la
secrecin de la hormona por parte de dichas clulas pancreticas (Diabetes mellitus
tipo 2). Existen adems otras formas frecuentes de diabetes como la gestacional (1-3).
La diabetes tipo 2 es la forma ms comn de la enfermedad. En el ao 2011 la
Federacin Internacional de Diabetes report que en ese momento cerca de 336
millones de personas presentaban este padecimiento. Dicha enfermedad, adems de
provocar aproximadamente 4,6 millones de fallecimientos cada ao, disminuye
considerablemente la calidad y expectativa de vida de los pacientes sin contar los
elevados costos destinados a tratamientos (4). Como resultado de la hiperglucemia las
personas con diabetes tipo 2 exhiben un alto riesgo de complicaciones cardiovasculares,
neurolgicas y microvasculares. Estas ltimas incluyen prdida de visin, fallo renal y
neuropata perifrica (4,5).
A pesar de que en la ltima dcada ha ocurrido una explosin de informacin cientfica
sobre factores genticos y ambientales que desencadena en la enfermedad,
mecanismos bioqumicos involucrados, complicaciones y tratamientos; es cierto que an
queda mucho por comprender sobre la diabetes. En este punto juegan un papel
fundamental los modelos animales que permiten estudiar mecanismos fisiopatolgicos y
evaluar estrategias diagnsticas y teraputicas que limiten el desarrollo de la
enfermedad y sus complicaciones.
Existen numerosos modelos biolgicos que reproducen en animales varias
manifestaciones clnicas de la diabetes humana mediante diversos mtodos, siendo muy

utilizada actualmente la induccin qumica mediante estreptozotocina (STZ) en roedores.


Este frmaco provoca la destruccin selectiva de las clulas de los islotes
pancreticos, nica fuente de insulina en el organismo (1,3,6).
La sensibilidad a la STZ puede variar en dependencia de la cepa, el sexo, la edad, el
estado nutricional y por supuesto la especie animal. El momento, dosis y va de
administracin resultan determinantes para el tipo de diabetes que se desee inducir. En
la rata adulta la inoculacin de diferentes dosis de STZ causa deficiencia de insulina casi
total y por tanto elevadas cifras de hiperglucemia que simulan una diabetes tipo 1
(1,3,7). Sin embargo, varios autores refieren que una nica dosis elevada de STZ (100
mg/Kg de peso corporal) administrada durante los primeros das de vida del gazapo
provoca en el transcurso de varias semanas un dficit de insulina moderado y valores
medios de hiperglucemia semejantes a una diabetes tipo 2 (12,6,8).
El modelo neonatal que emplea STZ se considera, desde hace muchos aos, una
herramienta confiable para esclarecer los mecanismos asociados a la regeneracin de
las clulas pancreticas y a las complicaciones a largo plazo de la diabetes tipo 2.
Numerosos reportes en la literatura cientfica refieren diferentes momentos (da 0, 2 o 5
de nacidos) y vas de inoculacin [subcutnea (sc), intraperitoneal (ip) o intravenosa (iv)]
de la STZ (3,6,8,9), sin embargo no existen informes de las ventajas de uno u otro
protocolo respecto a las caractersticas de la enfermedad una vez desarrollada en el
animal adulto. Por tanto, el presente estudio tiene como objetivo comparar en la vida
adulta de ratas Wistar la accin diabetognica de la STZ segn el momento y va de
inoculacin del frmaco en periodo neonatal evaluando algunas variables bioqumicas,
metablicas e histolgicas.

Aunque ningn modelo experimental recrea totalmente las particularidades de la


enfermedad en humanos es necesario trabajar en la caracterizacin de estos para que
los resultados obtenidos de su utilizacin sean lo ms valiosos posibles.
Materiales y mtodos
Animales y grupos de experimentacin
Del Centro de Produccin de Animales de Laboratorio (CENPALAB) en la Habana,
Cuba, se obtuvieron ratas Wistar hembras y machos que fueron apareadas para obtener
animales recin nacidos. El da del nacimiento las cras fueron sexadas y las hembras
distribuidas aleatoriamente en ocho grupos de experimentacin de 10 animales cada
uno.
Induccin de la diabetes
La diabetes fue inducida en cuatro de los grupos por la administracin de 100 mg/Kg de
peso corporal de STZ disuelta en buffer citrato 0,1 M (pH 4,5). Se ensayaron dos vas y
dos momentos de inoculacin: subcutnea (SC) e intraperitoneal (IP) y das dos y cinco
de nacidos. A cada grupo tratado (STZ-2-sc, STZ-2-ip, STZ-5-sc, STZ-5-ip) se
correspondi un grupo control (Cont-2-sc, Cont-2-ip, Cont-5-sc, Cont-5-ip) al que se le
administr el vehculo buffer citrato en iguales condiciones.
Cuidado y mantenimiento de los animales
Tanto los padres como sus cras fueron mantenidas en un ambiente estrictamente
controlado: temperatura de 20 +/- 2 oC, humedad de 40 %, ciclo de 12 horas
luz/oscuridad y libre acceso a agua y comida. Las cras permanecieron con sus madres
por 21 das hasta el destete, momento a partir del cual se midi semanalmente el peso
de los animales y diariamente el consumo de agua y comida.

Determinaciones bioqumicas
Para confirmar la induccin de la diabetes se efectuaron determinaciones semanales de
los niveles de glucosa en sangre (glucosa oxidasa) con Glucmetro y Biosensores
SUMA desde la sexta semana de vida, fecha establecida a partir ensayos previos
realizados en nuestro laboratorio. Los animales fueron sometidos a ayunos de 12 horas
y la muestra de sangre fue extrada de la cola del animal. Con la misma metodologa se
realizaron en la semana 12 pruebas de tolerancia a la glucosa (PTGO) luego de
administrar por va oral una sobrecarga de glucosa (dextrosa monohidratada) de 2 g/kg
de peso corporal. Las mediciones se realizaron en ayuno, 30, 60 y 120 minutos luego de
la sobrecarga. En la propia semana se extrajo sangre del plexo retro-orbital para la
determinacin de hemoglobina glicosilada (Hb A1c) por el mtodo de aglutinacin.
Sacrificio de los animales y toma de muestras para estudios morfomtricos e
histolgicos
Al final de las 12 semanas de vida se practic eutanasia por exsanguinacin bajo
anestesia (Tiopental sdico 50-60mg/kg), por puncin de la vena cava inferior. Se extrajo
el pncreas, se pes libre de grasa y ganglios. Las muestras fueron procesadas
histolgicamente y teidas mediante la tcnica de hematoxilina-eosina. Las
observaciones se llevaron a cabo en microscopio ptico binocular marca Olympus BX51
con objetivos de 4, 10, 20, 40 y 100. Se determinaron las principales lesiones existentes
en el pncreas endocrino. Para su cuantificacin los Islotes pancreticos fueron
contados en cuatro campos con lente de menor aumento 4x10 (panormico) y el
resultado se expresa como nmero de islotes por mm2 de pncreas.
Procesamiento estadstico
Las comparaciones cuantitativas se realizaron mediante la prueba no paramtrica U de
Mann Whitney teniendo en cuenta la distribucin de los datos. Los resultados se

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presentan como la media error estndar de la media. La prueba de ji cuadrado se


utiliz para la comparacin de proporciones y los datos estn representados en valores
absolutos y porcientos. En ambos casos las diferencias se consideraron significativas
con valores de p<0,05.
Aspectos ticos
Los animales fueron tratados segn recomienda la gua del National Institutes of Health
para el trabajo con animales de experimentacin. La investigacin fue aprobada por el
Consejo Cientfico y el Comit de tica de la Unidad de Investigaciones Biomdicas en
la Universidad de Ciencias Mdicas de Villa Clara.
Resultados
En este experimento se administr el agente diabetognico a 40 animales, de ellos los
que integran los grupos inoculados con STZ al quinto da de nacidos, mostraron un
ndice de mortalidad de 95 % (solo sobrevivi un animal del grupo STZ-5-ip)
permaneciendo por tanto en la investigacin exclusivamente los de da dos (STZ-2). El
resto de los grupos inoculados con STZ, as como todos los controles, presentaron 100
% de supervivencia.
La medicin semanal de los pesos de los animales inoculados al segundo da de
nacidos (figura 1a y 1b) mostr que en ambas formas de administracin de la STZ no
existieron marcadas diferencias en el peso corporal, no obstante en el grupo diabtico
inoculado por va subcutnea se observ menor ganancia en el peso corporal respecto a
su grupo control. Este mismo grupo tratado exhibi una marcada tendencia al aumento
del consumo de agua y alimento (figura 1c-1f) respecto a su grupo control, mientras el
grupo enfermo administrado por va intraperitoneal present un comportamiento similar a
sus controles.

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Los resultados de las determinaciones semanales de glucemia se observan en la figura


2a y 2b. El grupo STZ-2-sc mostr valores de hiperglucemias moderadas superiores y
ms estables en el tiempo de experimentacin a los presentados por STZ-2-ip.
En las PTGO realizadas se observ que ambos grupos controles mostraron una
recuperacin total de sus niveles de glucosa a los 120 minutos luego de la sobrecarga
(cuadro 1). Sin embargo, en los grupos tratados con STZ, fundamentalmente en el STZ2-sc, se exhibieron valores muy superiores en los 30 y 60 minutos, manifestando muy
poca recuperacin a los 120 minutos. La hemoglobina glicosilada determinada en los
cuatro grupos, confirm un peor control glucmico en STZ-2-sc, aunque en ambas vas
de administracin del agente diabetognico este parmetro fue significativamente mayor
que los respectivos controles (cuadro 1).
El estudio morfomtrico del pncreas mostr que la relacin peso rgano/peso corporal
no se modific de manera significativa en ninguno de los grupos tratados en
comparacin a sus controles: STZ-2-sc (0,68 g 0,039) vs CONT-2-sc (0,77 g 0,066) y
STZ-2-ip (0,75 g 0,118) vs CONT-2-ip (0,80 g 0,055). El anlisis histopatolgico
revel un significativo (*p<0.05) menor nmero de islotes por mm2 de pncreas en los
grupos tratados que en los controles: STZ-2-sc (0,03 0,002*) vs CONT-2-sc (0,12
0,016) y STZ-2-ip (0,05 0,006*) vs CONT-2-ip (0,12 0,015). Las principales lesiones
observadas en los Islotes pancreticos se presentan en el cuadro 2 y las figuras 3a y 3b.
Entre los grupos estudiados no existieron diferencias significativas para la presencia de
linfocitos, fibroblastos y fibrosis; en ningn caso se constat necrosis.
Discusin
En el presente estudio, con la administracin de STZ como agente diabetognico, se
logr obtener un modelo animal en el que se evidenciaron caractersticas del sndrome
diabtico humano. De los frmacos conocidos que desarrollan una diabetes

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experimental es la STZ la ms utilizada, pues posee ventajas en cuanto a estabilidad y


efectividad respecto a otros. Es un antibitico derivado de Streptomyces achromogenes
que adems se emplea como antineoplsico por su accin citotxica altamente selectiva
para las clulas de los islotes pancreticos (2,10).
En el experimento se inocul STZ a ratas Wistar en los das 2 y 5 de nacidas,
obteniendo para las de da 5 un 95 % de mortalidad a pesar de encontrarse descrito en
la literatura la administracin de STZ en el quinto da de vida (6,10). Es conocido que en
la administracin neonatal del compuesto el momento de la inyeccin es un factor crtico
para la regeneracin de las clulas del pncreas endocrino (1,6). Varios autores refieren,
en ratas inoculadas tanto el mismo da del nacimiento como en el da dos, signos de
regeneracin evidentes ya a las dos semanas de evolucin, mientras que las inyectadas
en da 5 a ese tiempo muestran un patrn histolgico alterado. La capacidad de
regeneracin de las clulas del pncreas en la cepa Wistar disminuye rpidamente
durante la primera semana postnatal y luego es insignificante en los roedores adultos
(1,6,11,12) de ah que el momento de la administracin defina el tipo de diabetes
experimental que se desea obtener.
Es posible que las cras inyectadas el da 5, con la capacidad regenerativa de las clulas
disminuida, no hayan tolerado los cambios metablicos que se producen
inmediatamente a la administracin del frmaco, ms aun en una dosis de 100 mg/Kg de
peso corporal. Investigaciones realizadas donde se administra la STZ en dosis de 70
mg/Kg de peso corporal logran la totalidad de la supervivencia en el modelo (9,13).
Los animales tratados al segundo da de nacidos, fundamentalmente los inoculados por
va subcutnea, sobrevivieron la etapa de induccin de la diabetes y presentaron los
signos y sntomas clsicos de la enfermedad: hiperglucemias en ayuno, intolerancia a la
glucosa, polidipsia, polifagia y disminucin en el peso corporal.

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A partir de la sexta semana de vida los grupos enfermos mostraron hiperglucemias


moderadas no permanentes durante el tiempo de experimentacin, sin embargo, a las
12 semanas exhibieron intolerancia a la glucosa, fundamentalmente el grupo inyectado
por va subcutnea. En ratas como en humanos, una elevacin prolongada (> 120
minutos) de la glucosa en plasma constituye una tolerancia alterada a la glucosa oral y
puede ser utilizada en conjunto con hiperglucemia en ayunas en el diagnstico de
diabetes tipo 2 (14). Estos hallazgos concuerdan con lo referido por algunos autores
respecto modelos de diabetes tipo 2, los cuales plantean que seguidamente a la
inyeccin neonatal de STZ ocurre una hiperglucemia que dura pocos das, sin embargo,
a las 3 semanas de edad los niveles de insulina y glucosa son normales pero a las 8
semanas las ratas muestran una hiperglucemia leve y una alterada tolerancia a la
glucosa (11,15).
La determinacin de Hb A1c al final del experimento confirma el establecimiento de la
diabetes en los grupos tratados. Este parmetro es un importante marcador a largo
plazo del estado metablico en pacientes con diabetes (16) y ya es empleado como
mtodo apropiado para su diagnstico (17). Es el producto de una reaccin lenta, no
enzimtica e irreversible, que est directamente relacionada con las concentraciones de
carbohidratos circulantes en sangre y la vida media del eritrocito (de 90-120 das en el
humano y de aproximadamente 45-50 das en la rata) (18). Teniendo en cuenta lo
anterior, las cifras de Hb A1c obtenidas reflejan un mal control glicmico de los animales
en los que se indujo la enfermedad en aproximadamente los dos ltimos meses de
experimento.
La prdida de peso corporal y el aumento en el consumo de agua y comida en los
animales enfermos, principalmente en los inyectados subcutneamente, puede
explicarse desde el punto de vista fisiolgico pues la exposicin del organismo a

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hiperglucemias mantenidas puede provocar un desequilibrio osmtico y traer como


consecuencia la polidipsia y como resultado la poliuria. La falta de glucosa intracelular se
refleja en un cansancio generalizado, mientras que el mecanismo de la polifagia an no
est muy claro, aunque se ha encontrado que es un efecto compensador de la perdida
de glucosa por la orina (19). Todos estos trastornos metablicos se vinculan con una
gluconeognesis anormal a partir de aminocidos que se traduce clnicamente en atrofia
muscular y prdida de peso (20).
En la presente investigacin el estudio morfomtrico del pncreas mostr que no
existieron modificaciones en cuanto al peso del rgano en los animales con diabetes
inducida respecto a los controles. Sin embargo, el anlisis histopatolgico revel una
disminucin del nmero de Islotes pancreticos en los animales diabticos en
comparacin con los sanos. Resultados similares han sido encontrados en estudios
realizados en roedores (21-24), conejos (25) y perros (26); independientemente del
frmaco (STZ o aloxano) y el momento de induccin utilizado en el modelo biolgico.
En los grupos STZ, aunque se observaron diversas lesiones histolgicas concordantes
con daos en la arquitectura pancretica, no se encontr necrosis en el tejido, lesin que
debi aparecer en el momento de la inoculacin del frmaco demostrando la toxicidad
inmediata.
Las lesiones percibidas son la evidencia histolgica de la regeneracin parcial del
pncreas endocrino a las 12 semanas de inoculada la STZ. En los animales tratados los
Islotes pancreticos se observaron atrficos y con bordes distorsionados, congestivos,
con edema y presencia de vacuolas intracitoplasmticas. A pesar de que la accin de la
STZ es especfica contra las clulas , el resto del islote se afecta por los posibles
mecanismos de regeneracin ya demostrados en modelos experimentales similares al
obtenido en este trabajo. La generacin de nuevas clulas puede ocurrir a partir de

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clulas indiferenciadas (neognesis); de clulas ya diferenciadas que se convierten en


otro tipo celular (transdiferenciacin) y de la replicacin de las propias clulas
remanentes (proliferacin) (1,12).
Los hallazgos son coherentes con el mecanismo de accin de la STZ inoculada en
periodo neonatal en roedores. En ratas, y especficamente en la lnea Wistar, se ha
comprobado que los daos causados al pncreas neonatalmente se van reparando y los
animales llegan a edad adulta con una capacidad disminuida de producir insulina, y por
tanto presentan dificultades en el metabolismo de la glucosa (1,11).
Los aspectos hasta el momento analizados evidencian que en los animales de este
experimento, especialmente los del grupo STZ-2-sc, se lograron reproducir algunas
caractersticas fundamentales del sndrome diabtico en el hombre, sin embargo existen
diferencias obvias en la etiologa de la enfermedad humana y la inducida
farmacolgicamente en un modelo animal. Un modelo experimental ideal de diabetes
tipo 2 debe tener resistencia a insulina y alteraciones en la respuesta secundaria
pancretica a dicha resistencia. Los modelos qumicos basan sus fundamentos en la
destruccin de las clulas del pncreas, no obstante, logran simular la enfermedad
humana provocando una reduccin y disfuncin de clulas as como insuficiencia en la
secrecin de insulina, elementos que traen consigo un dficit en los mecanismos de
compensacin de la clula, generando un estado de intolerancia a la glucosa y otras
alteraciones fundamentales en la patognesis de la diabetes moderada (7).
Con el anlisis de los resultados experimentales es indiscutible concluir que la va de
inoculacin subcutnea fue ms efectiva en lograr un estado diabtico en el animal lo
ms semejante posible a la enfermedad en humanos. Estudios realizados en el mismo
modelo animal por nuestro equipo de investigacin corroboran esta conclusin pues
fueron encontradas en el grupo inoculado por va subcutnea alteraciones en

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parmetros oxidativos y metablicos (principalmente en el perfil renal) (27). Sin embargo


en la literatura se reportan resultados concordantes con un modelo de diabetes
moderada con la inoculacin neonatal de STZ por va intraperitoneal, con variaciones en
las dosis, momentos y cepas utilizadas (9,13,28,29). Esto corrobora que el modelo a
utilizar debe ser seleccionado en funcin del propsito de la investigacin y las
condiciones existentes (1,7) por lo que estudios como este son un primer paso
estrictamente necesario antes de efectuar pesquisas con objetivos ms precisos.
Desde el punto de vista del procedimiento con el animal de experimentacin la inyeccin
subcutnea resulta ser sencilla y tolerada de manera general, aunque la absorcin de
sustancias por esta va es relativamente lenta. Por su parte, la administracin
intraperitoneal tiene como inconveniente el riesgo de lesin de los rganos abdominales
pues el punto de inyeccin se localiza en el cuadrante inferior derecho del animal, lateral
a la lnea media para evitar la inyeccin en la vejiga urinaria, y caudal a la ltima costilla
para evitar inyectar en el hgado o estmago. La inoculacin intraperitoneal de STZ a
pesar de ofrecer una va de administracin rpida y fcil, principalmente en animales
adultos, si no es adecuadamente empleada puede aumentar la mortalidad y disminuir el
efecto diabetognico del frmaco (30). La maniobra de inyeccin intraperitoneal con la
cra a los dos das de nacida es difcil y conlleva riesgos que, sumados a los resultados
obtenidos en los animales inoculados por esta va, hacen que se seleccione como
tratamiento para inducir una diabetes moderada en ratas Wistar adultas la inyeccin
subcutnea de STZ en una dosis de 100 mg/Kg de peso corporal en el segundo da
posterior al nacimiento.

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Financiacin
Esta investigacin responde al proyecto institucional Estandarizacin de un modelo de
induccin neonatal de diabetes experimental contratado y financiado por el Ministerio de
Salud Pblica de Cuba.
Conflictos de intereses
Los autores expresan que no hay conflictos de intereses.
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21

Cuadro 1. Prueba de tolerancia a la glucosa oral (PTGO) y hemoglobina glicosilada (Hb


A1c) en los grupos de experimentacin.
Los datos estn representados como la media error estndar de la media.

PTGO (mmol/L)

Prueba U de Mann-Whitney (*p<0,05).


Cont-2sc

STZ-2sc

Cont-2ip

STZ-2-ip

Ayuno

5,70
0,224

6,98
0,354*

5,60
0,264

6,03
0,055

30
min

7,61
0,301

17,30
0,625*

8,60
0,320

13,90
0,710*

60
min

6,50
0,330

16,10
0,754*

7,50
0,311

9,01
0,863*

120
min

5,34
0,222

11,53
0,830*

6,00
0,280

7,02
0,154*

3,12
0,178

4,85
0,335*

3,47
0,091

3,95
0,098*

HbA1c (g/dL)

22

Cuadro 2. Estudio histopatolgico del pncreas. Principales lesiones observadas en los


Islotes pancreticos en los grupos de experimentacin.
Los datos estn representados en valores absolutos y porcientos.
Prueba de Ji cuadrado (*p<0,05).

Cont-2sc
(n=7)

STZ-2-sc
(n=10)

Cont-2ip

STZ-2ip

(n=10)

(n=7)

Edema

1/14,3%

9/90,0% *

1/10,0%

4/57,1%

Vacuolizacin

2/28,6%

9/90,0% *

0/0,0%

3/42,9%

Congestin

0/0,0%

8/80,0% *

4/40,0%

2/28,6%

Atrofia

2/28,6%

9/90,0% *

1/10,0%

6/85,7%
*

Distorsin

1/16,7%

10/100,0%
*

1/10,0%

5/71,4%
*

23

Figura 1. Signos y sntomas clnicos en los grupos de experimentacin. Evaluacin de


peso (g) semanal [a y b], consumo diario de agua (ml) [c y d] y comida (g) [a y b].
Los datos estn representados como la media error estndar de la media.
Prueba U de Mann-Whitney (*p<0,05).

24

Figura 2. Concentraciones de glucosa semanales (mmol/L) en los grupos de


experimentacin [a,b].
Los datos estn representados como la media error estndar de la media.
Prueba U de Mann-Whitney (*p<0,05).

25

Figura 3. Microfotografa de pncreas. HE, 40 X [a,b].


a) Islotes pancreticos con tamao y celularidad conservada en grupo control.
b) Cambios

en

el

estreptozotocina.

Islote

pancretico

caractersticos

de

la

administracin

de

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