CLASE : 4

DRA. GIOVANNA ALBAN JACOME

MASTER EN BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA

REQUERIMIENTOS MINIMOS

Sitio adecuado
Instrumental para la toma de las muestras
Tcnicas para bsqueda de anticuerpos
Estudios moleculares
Medidas de bioseguridad

MATERIAL ADECUADO

INDICACIONES PREVIAS

CONDICIONES

TIPO DE MUESTRA
AFECCIONES

MATERIAL

Piedras

Pelos

Tricomicosis axilar

Pelos

Pitiriasis versicolor

Escamas

Eritrasma

Escamas

Tia nigra

Escamas

Onicomicosis

Concreciones subungueales profundas

Tia del cuero cabelludo

Pelos partidos (anormales)

Herpes circinado

Escamas del borde de la lesin

Eczema marginado

Escamas del borde activo o totales en lesin

comenzantes.

Epidermofitosis de pies

Escamas secas o maceradas y techo de las vesculas

Sicosis parasitica

Pelos de las lesiones

TIPO DE MUESTRA
AFECCIONES

MATERIAL

Perionixis (Candidiasis)

Pus y escamas del pliegue supraungueal

Onixis (Candidiasis)

Raspado de la porcin afectada de la ua

De las membranas
mucosas (Candidiasis)

Raspado de las zonas afectadas, en especial la superficie

blanco cremosa

De los pies (Candidiasis)

Raspado del macerado interdigital y de las escamas

Granulomatosa
(Candidiasis)

Escamas, vegetaciones, pus

Querion

Pelos y pus

Cromoblastomicosis

Escamas, pus, vegetaciones, tejidos por biopsia

Rinosporidiosis

Biopsia, raspado de lesiones

Actinomicosis

Granos o pus, esputo, lavado bronquial, LCR,

Pie de madura

Granos

TIPO DE MUESTRA
AFECCIONES

MATERIAL

Esporotricosis

Pus, abscesos, gomas o lceras

Histoplasmosis

Sangre perifrica o de la medula esternal

Pus de ulceras y tractos fistulosos
Raspados de lesiones cutneas o mucosas
LCR
Esputos o lavados bronquiales
Frotis de biopsia ganglionar
Punciones esplnicas
Lavados gstricos

Candidiasis sistmicas

Heces fecales, esputos, lavados bronquiales, orina, LCR.

Proceso pre analtico

Escamas de piel

TECNICA DE LA CINTA SCOTCH

Cortar una tira de 5cm de cinta scotch

Colocar sobre la lesion haciendo una ligera presion
Retirarla y colocarla sobre un porta objetos con las
escamas hacia abajo, previa aplicacin del aclarante.

Proceso pre analtica

Muestra de cabello

Proceso pre analtica

Muestra de Ua

Proceso Analtico

EXAMEN DIRECTO

El material opaco obtenido como, pelos, escamas, uas y a

veces pus, deben ser aclarados antes del examen
microscpico.
Las sustancias aclarantes son:
Hidrxido de potasio al 10, 20 0 40 %; una gota sobre la
lamina se cubre con la laminilla, se flamea sin dejar que
hierva, se espera de 30 a 60 minutos para observarla al
microscopio.
Las laminas deben ser montadas por triplicado y de forma
fina.

INTERPRETACION: SOLO PERMITE DETERMINAR LA PRESENCIA

O NO DE ESTRUCTURAS MICOTICAS

EXAMEN DIRECTO

Errores por presencia de artefactos

Crsitales de potasio
Globulos de grasa
Burbujas de aire
Fibras de tejido
Granulos queratohialinos de palmas y plantas
(mosaic fungus).

EXAMEN DIRECTO

Mtodos de coloracin
Tincin de Gram (todos los hongos son gram positivos)
Azul de metileno
Borato de sosa
Cotton blue (azul de algodn de lactofenol)
Tinta china
Acido peryodico de Schiff
Giemsa
Wrigth
Zielhl Nelsen
Hematoxilina y eosina
Gomori-Grocott
Sulfito de sodio

EXAMEN DIRECTO
Cabello y Escamas

CULTIVO

Material solido: pelos, uas, escamas, biopsias.

Sern sembrados con una asa o aguja de platino
sobre la superficie y tambin profundizando el
medio seleccionado.
Material blando: pus, sangre, exudados se colocan
sobre la superficie del medio .
Se debern cultivar a 26 y 37 grados para
obtener su desarrollo.

Medios de Cultivo

Medios empleados
Sabouraud (glucosado o maltosado)
Dextrosa
20 g
Peptona
10 g
Agar bacteriolgico 20 g
Agua destilada 1000 ml pH 6.5
Preparar, autoclavar a 121 C durante 15
minutos

Sirve para el primo aislamiento, transporte y

revitalizacin de diversas cepas.

Medios de Cultivo

Medios empleados
Agar harina de maz
Czapek
Gorodkowa
Littman
Caseina
Arroz
Tioglicolato Brewer
Pollacci
Agar infusin cerebro corazn
Papa
Lowenstein Jensen
Alpiste negro
ChroMagar candida

Pruebas bioqumicas
Sistemas Api
Microscan
Vytec
Zimogramas
Auxonogramas

Pruebas de susceptibilidad
Micro dilucin en caldo
Tiras LE
Discos
Azul d alamar
E test
Equipos automatizados

Pruebas Inmunolgicas
Determinacin de antgenos
Intradermorreacciones
Fijacin del complemento
Inmunodifusin radial (Ouchterlony)

Pruebas de biologa molecular

Reaccin de cadena de la polimerasa (PCR)

PCR con cebadores arbitrarios AP-PCR
PCR con cebadores que hibridan REP-PCR
PCR con enzimas de restriccin de genes amplificados
PCR- RFLP
AFLP polimorfismo de la longitud de fragmentos
amplificados
Gel de campo pulsado
Electroforesis en geles de agarosa y la transferencia a
membranas de ADN ( Southern Blot)
Secuenciacin

Tcnicas aplicadas

RFLP
Hibridacion Southern Northern
RAPD
PCR
RT-PCR Q-PCR
AFLP
MLST
Secuenciacin de ADN

Pruebas especiales
Luz de Wood
Dermatoscopia
Inoculacin en animales

Pruebas especiales
Inoculacin en animales