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Carrera de Ingeniera en Biotecnologa

Departamento de Ciencias de la Vida


Biotecnologa Animal

NRC:2839

Informe de laboratorio
Nombre: Jos Luis Hernndez Alds
Fecha: 19/05/2016
Prctica N: 1
Ttulo de la prctica: Anlisis Coproparasitario
OBJETIVOS:

Analizar las muestras haciendo uso de los protocolos


establecidos
Comparar los dos mtodos de anlisis y determinar segn los
resultados obtenidos cul de ellos es el ms confiable
Observar e identificar los microorganismos que existen en las
muestras de heces.

INTRODUCCIN
La ciencia de la parasitologa tuvo un gran avance a partir del invento
del microscopio y de los descubrimientos de Leevwenhoeck en el siglo
XVIII. Las enfermedades parasitarias han producido a travs de los
tiempos ms muertes y dao econmico a la humanidad que todas
las guerras. El impacto de las enfermedades parasitarias en el mundo
es muy importante, ya que afectan directamente la salud, la
esperanza de vida, y la productividad de millones de personas y
animales (Sixtos , 2011).
Los parsitos intestinales son una causa importante de enfermedades
en los animales de compaa y trasmisores de enfermedades
zoonticas hacia los dueos de las mascotas. Estos parsitos pueden
ser detectados al examinar muestras fecales con las diferentes
tcnicas, como son: frotis directo, sedimentacin, flotacin y ELISA
fecal. La tcnica de flotacin es la ms utilizada en la prctica clnica
en animales de compaa (Sixtos , 2011).
El examen coproparasitario es un conjunto de tcnicas diagnsticas
que constituyen la indicacin metodolgica para la identificacin de la
mayora de las enteroparasitosis motivadas por protozoarios o
helmintos. Su eficacia y sensibilidad para establecer un diagnstico
correcto dependen de una correcta toma, manejo y conservacin de
la muestra (tomando en cuenta todas las normas de bioseguridad) as
como tambin de la adecuada indicacin y preparacin de la muestra,
los datos clnicos y antecedentes de inters que sean aportados al
laboratorio y de su correcta y completa ejecucin. El examen
coproparasitario es una tcnica no invasiva, sencilla, segura, rpida,

cmoda, eficaz, de bajo coste econmico y simple de realizar en el


laboratorio.
Carece
de
complicaciones,
contraindicaciones,
inconvenientes (Ortigoza & Cruz, 2011).
Los parsitos que se pueden encontrar en el aparato digestivo del
perro, de los cuales algunos son causantes de importantes zoonosis, y
que se pueden diagnosticar coprolgicamente son los siguientes:

Nemtodos: las especies Toxocara canis, Toxascaris leonina


tienen importancia tanto en salud del perro como en salud
pblica (Georgi & Georgi, 1994), produciendo el sndrome de
larva migrans visceral (Noemi & Rugiero, 1998). Otros
nemtodos
importantes
en
los
cnidos
son
los
anquilostmideos, entre los cuales se describen las especies,
Ancylostoma caninum, Ancylostoma braziliense y Uncinaria
stenocephala.
El orden Trichinellida presenta Trichuris vulpis y Capillaria sp.
como nemtodos de importancia veterinaria (Barriga , 2002).
Cestodos: dentro de ellos estn Echinococcus granulosus,
Dipylidium caninum, Multiceps Multiceps, Taenia hydatigena,
Diphyllobothrium latum y Multiceps serialis.
El objetivo principal de la prctica de laboratorio es analizar y
observar muestra de heces de perro (Canis lupus familiaris) para
identificar los microorganismos existentes en las muestras, haciendo
uso de los protocolos establecidos para cada mtodo tanto mtodo de
flotacin como para el mtodo de Ritchie; y a la vez comparar los dos
mtodos de anlisis y determinar segn los resultados obtenidos cul
de los ellos es el ms confiable.
MATERIALES Y MTODOS

Muestras
o Heces de canino
Equipos
o Centrifugadora
o Microscopio
Materiales de proteccin personal
o Mandil
o Guantes
o Mascarilla
Reactivos
o Lugol
o ter etlico
o Solucin de formaldehido al 10%

Materiales e insumos
o 2 Vasos plsticos
o 2 Gasas
o 2 Palos de helado
o Agua destilada
o Solucin glucosada
o 2 Tubos de ensayo
o Pipetas Pasteur
o Porta y cubre objetos
Procedimiento experimental

Para el anlisis coproparasitario de muestra de heces de perro


(Canis lupus familiaris) se coloc 1g de la muestra en un vaso
plstico con ayuda de los palos de helado, se aadi
aproximadamente 10 mL de agua y se mezcl la muestra hasta
que la solucin est completamente homogenizada.
Una vez que se obtuvo la solucin homognea se filtr la misma
usando las gasas que fueron colocadas en un segundo vaso
plstico. La solucin filtrada se traspas a dos tubos de ensayo
correctamente rotulados y taponados los mismos que fueron
centrifugados a 3500 rpm por 5 minutos.
Despus de la centrifugacin se elimin el sobrenadante de los dos
tubos de ensayo con muestra dejando nicamente el precipitado
en el tubo.

Mtodo de Flotacin

A uno de los tubos de ensayo que contena el precipitado obtenido


se agreg una solucin glucosada que se prepar previamente, se
tap y se agit la muestra hasta que se homogenice la solucin
glucosada con el precipitado, despus se destap la muestra y con
ayuda de una pipeta pasteur se agreg ms solucin glucosada
hasta que se form un menisco.
Se coloc encima del tubo de ensayo un cubreobjetos y se observ
que este se encuentre en contacto con la solucin.
Se esper por 10 minutos, se retir con cuidado el cubreobjetos
del tubo y se coloc sobre el portaobjetos.
Finalmente se observ en el microscopio con lentes 10x y 40x y se
anot los resultados obtenidos.

Mtodo de Ritchie

Al segundo tubo de ensayo que contena el precipitado obtenido,


se agreg 10 mL de formaldehdo al 10% y 5 mL de ter etlico. Se
agit energticamente hasta que la mezcla fue homogenizada.

Se centrifug la mezcla por 5 minutos a 3500 rpm. Una vez que


finaliz la centrifugacin se observ 4 capas (ter en la superficie,
tapn de restos fecales, formaldehido, sedimento de elementos
parasitarios); se elimin las tres primeras capas dejando el
sedimento de elementos parasitarios.
En un portaobjetos se coloc una gota de lugol y una gota de agua
destilada.
Se introdujo una pipeta pasteur en el tubo con el sedimento
obtenido y se extrajo con cuidado una gota del mismo. Se coloc la
gota del sedimento en el portaobjetos sobre la gota de lugol y
sobre gota de agua, se cubri con un cubreobjetos y se observ en
el microscopio con objetivos de 10x y 40x y se anot los resultados
de la observacin.
RESULTADOS
Los datos para la identificacin de muestras se detallan en la tabla 1.
Tabla 1. Informacin de la muestra
Especie animal
Identificacin
Raza
Sexo
Edad
Prueba diagnstica
Procedencia

Cannis lupus familiaris


Maximiliano
Mestizo
Macho
1 ao, seis meses
Anlisis coproparasitario, Mtodo
de Flotacin y de Ritchie
Muestra de heces

Observacin macroscpica de la muestra

La inspeccin general de la muestra indico una consistencia pastosa


ligeramente blanda, de coloracin verde, se evidencia restos de
comida. No hubo presencia de progltides o gusanos adultos,
manchas de sangre o moco, como se detalla en la Tabla 2.
Tabla 2. Resultados del anlisis macroscpico de la muestra
Criterios
Olor
Color
Consistencia
Aspecto
Presencia de nematodos adultos

Resultados
Olor penetrante, caracterstico.
Heces verdosas
Pastosa, con restos de comida
NO existe la presencia de mucus
o sangre
No
hubo
presencia
de
proglotides o gusanos adultos.

Observacin microscpica de la muestra

Mtodo de flotacin
El anlisis microscpico por el mtodo de flotacin permiti la
identificacin de dos huevos de parsito, como se puede observar en
la figura 1.

Figura 1. Aumento 40x, muestra de heces, mtodo de


flotacin
Mtodo de Ritchie
El anlisis por el mtodo de Ritchie, no permiti la observacin de
huevos en las placas realizadas con y sin lugol.
DISCUSIN:
Segn (Becker, 2015) la consistencia de las muestras obedece a una
dieta de balanceado con croquetas, el color y olor se pueden
considerar normales. Al no haber presencia de diarrea, se puede
considerar que el perro no presenta problemas graves.
Segn los resultados obtenidos, la tcnica de flotacin es ms
eficiente para el diagnstico de huevos de nematodos (Aguirre, 2006).
Esto se puede deber a dos factores importantes: a) la tcnica de
flotacin permite separar mejor los huevos y ooquistes del resto de la
materia fecal debido a la cantidad de agua que se agrega, en la
tcnica de Ritchie el formol y ter tienen como principal funcin la
fijacin de las formas parasitarias por lo tanto existe una menor
separacin de huevos y ooquistes; b) en la tcnica de flotacin la
cantidad de muestra en contacto con el cubreobjetos es mucho
mayor que la se obtiene en las dos gotas de sediento en el
procesamiento final por el mtodo de Ritchie (Teuscher, 1965).
De acuerdo a la observacin microscpica, los huevos identificados
sugieren que se trata del parsito Ancylostoma spp., este es un

gnero de gusanos redondos que parasitan el intestino de perros,


segn la morfologa del huevo y las caractersticas de infeccin, la
muestra puede contener Ancylostoma caninum, ya que es la especie
ms comnmente afecta a perros y se extiende alrededor del mundo,
a diferencia de otras que son caractersticas de ciertas zonas
especficas (Junkera, 2016); los huevos son ovoidales, miden de 40 a
65 micras y al tiempo de su deposicin en las heces contienen de 4 a
16 clulas, esta descripcin coincide con las morfologas identificas
en el microscopio. En la figura 2, se puede observar una foto al
microscopio de Ancylostoma spp, obtenida de la galera de parsitos
PET INFORMED, comparada con el huevo obtenido en la muestra de
heces (Meavara , 2008).

Figura 2. A) Ancylsotoma spp, obtenida de la galera de parsitos


PET INFORMED; B) Huevo de parsito obtenido de la observacin al
microscopio
Como solo se pudieron observar dos huevos de Ancylostoma en la
muestra procesado podemos decir que se trata de una Infeccin
ligera.
CONCLUSIONES

Los dos mtodos utilizados tanto Flotacin como Ritchie son


mtodos sencillos y sensibles utilizados para diagnosticar los
parsitos del perro. Sin embargo, el mtodo de Flotacin
demostr mayor eficiencia en el diagnstico de huevos de
nemtodo de Ancylostoma caninum en comparacin con el
mtodo de Ritchie.

Los exmenes coproparasitarios nos permiten el hallazgo e


identificacin de huevos, larvas, quistes de los parsitos as
como de sus formas adultas.
Para el examen microscpico de las heces en busca de
parsitos no existe una tcnica nica; tampoco hay una
tcnica ptima para un objetivo determinado. Por ello es til
combinar varias tcnicas. La fiabilidad de los resultados de
un examen depende tambin de la experiencia del
investigador y la preparacin de los tcnicos.

RECOMENDACIONES

Es necesario, conocer una adecuada metodologa del trabajo


de laboratorio para lograr diagnsticos precisos o por lo
menos confiables que orienten las apreciaciones clnicas y
garanticen un buen tratamiento. Es preciso recordar que
cada especie de parsito, o cada grupo necesita una
determinada metodologa.
Deberan
realizarse
estudios
coproparasitarios
con
frecuencia ya que son sencillos, econmicos de realizar y a
su vez permiten conocer los tipos de parsitos prevalentes y
as
poder
establecer
adecuados
programas
de
desparasitacin.
El anlisis puede ser negativo, sin embargo, el paciente
puede estar parasitado. Es por esto, que es conveniente
recordar que son precisos al menos tres exmenes
coproparasitarios sobre muestras obtenidas en das alternos
para descartar la presencia de parsitos intestinales
patentes.

CUESTIONARIO
1. Enumere los factores de los cuales depende la presencia
de parsitos en una muestra
Las caractersticas del suelo influyen en la transmisin de
parsitos, tierras cubiertas de hojas y restos vegetales,
sombreadas, hmedas y con temperaturas entre y 15 y 30C
son las ms adecuadas.
Las condiciones ambientales juegan un papel en la transmisin
ya que favorecen el desarrollo de las larvas hasta su fase
infectante (Quiroz, 1999).
En cuento a las formas de transmisin existen:
a. Transmisin por va cutnea
b. Transmisin por va oral
c. Transmisin placentaria

d. Transmisin a travs del calostro


2. Investigue Por qu es mejor el mtodo de Ritchie?
El empleo de ter y formaldehido, permite con el primero,
liberar las formas parasitarias de las grasas, por disolucin de
las mismas y con el formol se fijan y conservan. La
concentracin se hace por centrifugaciones sucesivas (Claudia,
2008).
3. Investigue a fondo sobre las complicaciones causadas
por uno de los parsitos encontrados en las muestras de
la prctica.
El parsito encontrado fue Ancylostoma, las manifestaciones
clnicas caractersticas y frecuentemente fatales son: una
anemia normocrmica y normoctica aguda seguida por otra
hipocrmica y macroctica. Los cachorros que sobreviven
desarrollan alguna inmunidad y muestran signos clnicos mas
leves. Sin embargo, los animales debilitados y desnutridos
pueden seguir presentando un bajo rendimiento y sufrir anemia
crnica. Perros adultos bien nutridos pueden albergar unos
pocos vermes sin mostrar signos y tienen una importancia
especial como fuente directa o indirecta de la infestacin en
cachorros. Una diarrea de heces oscuras, alquitranada,
acompaa a las infestaciones graves, se produce anemia,
anorexia, emaciacin y debilidad (Aiello, 2000)
La infestacin prenatal y calostral puede producir anemias
graves, acompaadas de coma y muerte, que se produce a las
tres semanas del nacimiento. Esta puede ser aguda y rpida,
fatal en animales susceptibles, aunque otros pueden desarrollar
un determinado grado de resistencia a los efectos de la
infestacin.
El signo clnico ms evidente es la anemia, acompaada de
hidremia, a veces edema, debilidad general y emaciacin. En
las ltimas fases de la enfermedad, los cambios sanguneos
pueden incluir eosinofilia. El crecimiento se ve educido, y el
pelo se hace seco y spero. Puede observarse picazn de la piel
en las reas de dermatitis causada por la penetracin de las
larvas. La muerte se presenta precedida por marcada debilidad
y extrema palidez de las membranas mucosas (Junkera, 2016).

Bibliografa
Aguirre, J. (2006). COMPARACIN DE DOS TCNICAS COPROLGICAS PARA
EL DIAGNSTICO DE ENDOPARSITOS DEL PERRO. Memoria de Ttulo.
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Becker, K. (15 de Julio de 2015). Healthy pets. Obtenido de Mascotas
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Claudia, H. (21 de Junio de 2008). Parasitologa General. Obtenido de
MTODO DE CONCENTRACIN POR SEDIMENTACIN RITCHIE:
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Georgi, J., & Georgi, M. (1994). Parasitologa en Clnica Canina . Mexico D.F.:
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Junkera, P. (18 de Mayo de 2016). ANCYLOSTOMA spp, gusanos nematodos
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