BACTERIANO CELDA DIVISIN 136 6.

1 Crecimiento Celular y fisin binaria

136 6.2 Fts protenas, la divisin celular, y Plano Morfologa de la clula 137
6.3 El peptidoglicano divisin celular y sntesis 139 CRECIMIENTO II de
origen bacteriano POPU Lations 140 6.4 Crecimiento de terminologa y el
concepto de Crecimiento exponencial 140 6.5 Las matemticas de
crecimiento exponencial 142 6.6 El ciclo de crecimiento 142 III DE MEDICIN
MICROBIANO CRECIMIENTO 144 6.7 Mediciones directas del crecimiento
microbiano: Total y recuentos viables 144 6.8 Las mediciones indirectas de
crecimiento microbiano: Turbidez 147 6.9 Cultura continua: La Chemostat
148 La divisin celular es la serie de eventos que genera dos IV AMBIENTAL
EFECTOS EN clulas de un. MICROBIANO CRECIMIENTO: yo TEMPERATURA
150 te- yo 6.10 Efecto de la temperatura sobre el crecimiento 150 IR- l
6.11 crecimiento microbiano a bajas temperaturas 152 yo nordeste 6.12
crecimiento microbiano a altas temperaturas 154 1iA ! p- V AMBIENTAL
EFECTOS EN MICROBIANO CRECIMIENTO: l- pH, la osmolaridad, Y OXGENO
157 6.13 crecimiento microbiano a pH bajo o alto 157 6.14 Efectos
osmticos en Microbiana Crecimiento 158 6.15 El oxgeno y el crecimiento
microbiano 160 6.16 Formas de oxgeno txico 163 III 135 'YO .5 re yo Y yo r
yo 'P es decir R- F- yo r marido yo mi- . r s . r MICROBIANO CRECIMIENTO
Pgina 2
yo 136 . Captulo 6 . Crecimiento microbiano RABAJAR GLOSARIO . acidfilo
un organismo que crece mejor a bajo pH Aerobe un organismo que puede
utilizar el oxgeno (02) en la respiracin; algunos requieren oxgeno para el
crecimiento aerotolerant un microorganismo anaerobio incapaz de respirar
oxgeno (02), pero cuya crecimiento no se ve afectada por la presencia de
oxgeno Alcalfilo un organismo que crece mejor a pH alto Anaerobio un
organismo que no puede utilizar oxgeno en la respiracin y cuyo
crecimiento puede ser inhibida por el oxgeno La autolisis de lisis celular
espontnea, por lo general debido a la actividad de las protenas lticas
llamado autolisinas Un cultivo discontinuo microbiana sistema cerrado
cultura de volumen fijo La divisin celular despus de la fisin binaria enlargement de una clula a dos veces su tamao mnimo Cardenal
temperaturas el mnimo, mxima y temperatura ptima de crecimiento
turas para un determinado organismo Chemos tat un dispositivo que
permite la cultivo continuo de microorganismos en que tanto la tasa de
crecimiento y el nmero de clulas pueden ser controlados de forma
independiente Compatible soluto una molcula que es ac- acumulada en el
citoplasma de ajuste cin de la actividad de agua, pero que no lo hace
inhibir la bioqumica procesos Oivisome un complejo de protenas implicadas
en procesos de divisin celular en procariotas Exponencial crecimiento el
crecimiento de un nismos orga- donde el nmero de clulas dobles dentro
de un perodo de tiempo fijo Extremo halfila un microorganismo ese
requiere muy grandes cantidades de sal (NaCl), generalmente mayor de
10% y en algunos casos cerca de la saturacin, para el crecimiento
extremfilos un organismo que crece opcin timally bajo una o ms
sustancias qumicas o fsico extremos, tales como alta o baja temperatura o

pH Facultativo Con Respeto al oxgeno, un organismo que puede crecer en

cualquiera sus presencia o ausencia FtsZ una protena de divisin celular
clave que las formas un anillo a lo largo del plano de divisin para iniciar
elongacin celular Generacin momento en que el tiempo requerido para
poblacin las clulas microbianas de duplicar Crecimiento un aumento del
nmero de clulas halophile un microorganismo eso requiere Naci para el
crecimiento halotolerant un organismo que no re- cuadernillo de NaCl para
el crecimiento, pero que puede crecer en presencia de sal, en algunos
casos, sub- stantiallevels de sal hyperthermophile un microorganismo ese
tiene un crecimiento temperatura ptimo de . yo BACTERIANO CELDA
DIVISIN En los ltimos tres captulos hemos discutido la estructura tura de
macromolculas celulares (Captulo 3), clula estructura y funcin (Captulo
4), y el general principios de microbiana nutricin y el metabolismo
(Captulo 5). Antes de comenzar nuestro estudio de la biosyn- tesis de
macromolculas y la gentica molecular de microorganismos (Captulo 7),
consideramos aqu algunos aspectos del crecimiento microbiano. El
crecimiento es la ltima proceso en la vida de una clula de clulas-uno
convertirse en dos. El crecimiento celular y la divisin binaria En
microbiologa, el crecimiento se define como una incrementar en el nmero
de clulas. El crecimiento es un componente esencial de la crculo de la
vida. Cualquier clula tiene una vida til finita, y la especies se mantiene
slo como resultado de un crecimiento continuo de la poblacin. Adems de
la comprensin lo bsico ciencia de crecimiento microbiano, muchas
situaciones prcticas llaman para el control del crecimiento microbiano. El
conocimiento de cmo poblaciones microbianas puede expandirse
rpidamente es til para "," ,, ----- mayor SODCor Retardo de fase de un
perodo anterior a la expOi fase de crecimiento nential cuando las clulas
pueden bi metabolizacin pero an no estn creciendo mesfilos un
organismo que crece mejor una temperaturas entre 20 y 45De microaerfilo
tha un organismo aerobio puede crecer slo cuando las tensiones de
oxgeno ar reducido de que en el aire pH el logaritmo negativo de la
hydroge de iones (H +) concentracin de una solucin de psychrophile un
organismo con un growt temperatura ptimo de 15De o Lowe y un mximo
crecimiento temperatu a continuacin 20DC psicrotolerantes un organismo
capaz de crecimiento a bajas temperaturas pero cuya temperatura ptima
de crecimiento es superior a 20 '( Estacionario fase el perodo
inmediatamente siguiendo exponencial crecimiento cuando el tasa de
crecimiento de la poblacin cae a cero termfilo un organismo cuyo
crecimiento temperatura ptimo se encuentra entre 4j y Sode
transpeptidacin formacin de pptido entrecruzamientos entre restos de
cido murmico en peptidoglicano sntesis Viable capaz de reproducir
xerophile un organismo que es capaz de vivir, o que vive mejor, en
ambientes muy secos el diseo de mtodos para controlar el crecimiento
microbiano. Lo haremos estudiar estos mtodos de control en el captulo 20.
La clula bacteriana es una mquina viviente capaz de do plicatura de s
mismo. El proceso de crecimiento de la clula bacteriana en. implica
actividad tanto como 2.000 reacciones qumicas de una amplia variedad de

tipos. Algunas de estas reacciones implican la energa transformaciones.

Otras reacciones implican la biosynthe- sis de pequeas molculas de la
bloques de construccin de macro molculas. Todava otros proporcionan los
diferentes cofactores y coenzimas necesarios para las reacciones
enzimticas. Sin embargo, las principales reacciones de sntesis de clulas
son re polimerizacin acciones, los procesos por los cuales las
macromolculas son a partir de monmeros. como macromolculas
acumular en el citoplasma de una clula, que se ensamblan en nuevo
estructuras, tales como la pared celular, membrana citoplasmtica, flagelos,
ribosomas, los cuerpos de inclusin, complejidad de la enzima ES, y as
sucesivamente, que finalmente llevan a la divisin celular. Fisin binaria En
la mayora de los procariotas, el crecimiento de una clula individual
contingencia UES hasta que la clula se divide en dos clulas nuevas. Esto
es un proceso llamado fisin binaria (binario para expresar la hecho
Pgina 3
xpo- y el arreglo Este a ese s son plasmingeno owth ower tura de cuyo mi
20 C diatamente en el ta cero recimiento es 45 eptide sidues yo r a lve,
mentos . LE de du- 'Delgado- amplio 'nergy rnthe- rlacro- : s y nunca, todos
los re- s son M tarde nuevo Rane, plex- ) ntin- s es una e hecho do: o "; DO
do: Q) CJ) Q) do: o separacin de clulas la replicacin del ADN - elongacin celular .. Pulpa formacin Terminacin de pulpa con formacin de
distinto paredes . Figure6.1 El general proceso de binario fisin en una de
varilla procariota forma. Por simplicidad, el nucleoide se representa como
una singlecirclein verde. ese dos clulas han surgido de uno). En un cultivo
de crecimiento de una bacteria en forma de varilla tales como Escherichia
coli, clulas alargar a aproximadamente el doble de su longitud original y
luego formar una particin que separa la eventual cellinto dos clulas hijas
(Figura 6.18). Esta particin es llamado septu / 1 / y es un resultado del
crecimiento hacia el interior de thecytoplasmic membrana y la pared celular
de oponerse direcciones hasta que las dos clulas hijas se pellizcan
(Figure6.1). Por definicin, cuando una clula se divide para formar dos, una
generacin se ha producido (Figura 6.1). Durante el ciclo de crecimiento de
todos los constituyentes celulares in- creaseproportionally. Cada clula hija
recibe una cro- mosome y copias suficientes de los ribosomas y todos los
dems macromolecular complejos, monmeros, e inorgnica ionsto existen
como independiente celda. Distribucin del molcula de ADN replicado entre
los dos hija cellsdepends en el ADN que permanezcan unidas a los miembranas durante la divisin, con la formacin de tabique que lleva
toseparation de los cromosomas, uno a cada hija celular (Figura 6.1). El
tiempo requerido para una generacin que se producen en bacterias
ishighlyvariable y depende de una serie de factores, bothnutritional y
gentica. En el mejor nutricional 6.2. Fts protenas, la clula Divison avin. y
Morfologa celular. 137 condiciones de la bacteria E. coli pueden completar
el ciclo en unos 20 min. Unas bacterias pueden crecer incluso ms rpido
que esto, pero muchos crecen mucho ms lento. Como veremos ms
adelante, divisin celular sin est ntimamente ligada a los eventos de

replicacin cromosmica. _ 6.1 concepto Llegada El crecimiento microbiano

implica un aumento en la IlIIlIlber de Clulas. Crecimiento de la mayora de
los microorganismos se produce por la proceso de fisin binaria. . Definir el
trmino generacin. Las protenas ns, el plano de divisin celular, y la
morfologa celular Varias protenas llamadas protenas son esenciales para
Fts celular divisin. El acrnimo FTS es sinnimo de "filamentosa sensible a
la temperatura ", que describe las propiedades de clulas que albergan
mutaciones en los genes que codifican Fts protenas. Estas clulas tienen
una gran dificultad en la divisin. FtsZ, una protena clave en el grupo, ha
sido bien estudiado en Escherichia coli y varias otras bacterias. protenas fts
son universalmente repartido entre procariotas, incluyendo las arqueas, y
de tipo FtsZ pro- protenas, incluso se han encontrado en las mitocondrias y
cloro- plastos, haciendo hincapi adems en la evolucin lazos que estos
orgnulos tienen que las bacterias (Secciones 2,3, 14.4 y 14.5).
Curiosamente, FtsZ muestra simi- estructural laridades a la tubulina, la
protena de divisin celular importante en eucariotas (Seccin 14.4). Fts
protenas y la divisin celular Protenas fts interactan para formar un
aparato de divisioll en el clula llamada divisome. En las clulas en forma de
varilla, la formacin de la divisome comienza con la unin de molculas de
FtsZ en un anillo alrededor del cilindro celda de la precisin centro de la
clula (Figura 6.28). Este punto de tiempo se convertido en el plano de la
divisin celular. En una clula de Escherichia coli alrededor de 10.000
molculas FtsZ se polimerizan para formar el anillo, y luego el anillo atrae a
otras protenas de la divisin celular, in- INCLUYENDO FtsA y Zipa (Figura
6.2). FtsA es un ATP-hi- drolyzing enzima que proporciona energa para el
montaje de las muchas protenas en la divisome. ZIPA es un ancla que une
el anillo de FtsZ a la membrana citoplasmtica (Figura 6.2). El divisome
tambin contiene protenas que participan en Fts la sntesis del
peptidoglicano, tales como ICES (Figura 6.2). FTSI es tambin llamada una
protena de unin a penicilina, debido a que su actividad es bloqueada por
el antibitico penicilina (vase la Seccin 6.3). los divisome se piensa para
orquestar la sntesis de nuevos cito- la membrana plasmtica y el material
de la pared celular, tanto en direccin ciones hasta que una clula alcanza
una longitud el doble de su longitud original. Despus de esto, se produce la
constriccin para formar el septum produciendo dos clulas hijas como se
muestra en la Figura 6.1.
pgina 4
138 . Captulo 6 . Microbiano Crecimiento ' Membrana externa '
peptidoglicano ' Membrana citoplasmtica - -...----- - --- -..._-- Membrana
citoplasmtica--:: plano de divisin .... .... .... (un) ..- alii. 11_. 11_.
(segundo) . Figura 6.2 El anillo y la divisin celular NSZ. Lal Vista Transversal
de un en forma de varilla celular que muestra el anillo de molculas de todo
el FtsZ plano de divisin. Explosin muestra la disposicin de divisome
individuo protenas. ZIPA es un ancla FtsZ, ICES es una biosntesis del
peptidoglicano protenas, FtsK asiste en la separacin de los cromosomas, y
FtsA es una ATPasa. (b) Aspecto y la ruptura del anillo de FtsZ durante el

ciclo celular de las . Escherichia coli Microscopa: fila superior, contraste de

fase; segunda fila, nucleoide mancha; tercera fila, las clulas se tieron con
un reactivo especfico contra FtsZ; cuarta fila, combinacin nucleoide y FtsZ
tincin. La divisin celular eventos: la primera columna, el anillo de FtsZ an
no formadas; segunda columna, anillo de FtsZ aparece como nucleoides
comienzan a segregar; tercera columna, anillo completo de FtsZ formas
como se alarga clula; cuarta columna, la ruptura del anillo de FtsZ y
divisin celular. Barra de marcadores en la foto superior izquierda, I / Lm.
Divisin de las clulas de la rplica y La replicacin del ADN se produce
antes de la formacin de la Anillo de FtsZ. De hecho, el cese de la sntesis
de ADN parece ser la seal para la formacin del anillo de FtsZ. Las formas
de anillo en el espacio entre los nucleoides duplicados. Localizacin de el
punto medio real de la celda por FtsZ es asistido por una serie de protenas
llamadas protenas Min, especialmente MinC y la ma. MinC es un inhibidor
de la divisin celular que previene la Anillo de FtsZ se formen hasta que el
centro de la celda precisa tiene ha encontrado. El mo es un inhibidor de la
actividad y al MinC taches a s mismo en el centro de la celda. Este evento
desencadena la r reclutamiento de FtsZ y el inicio de la divisome. A medida
que se produce la elongacin celular, las dos copias de la CDH mosome se
separan, cada uno a su propia hija ce (Figura 6.1). Una protena Fts llamado
FtsK, as como sever otras protenas, ayudan en este proceso (Figura 6.2).
Como lata. restriccin se produce, el anillo de FtsZ comienza a
despolimerizar, trig. gering el crecimiento hacia el interior de los materiales
de la pared para finalmente sellar una clula hija de la otra. FtsZ tiene Enzy.
actividad matic y puede hidrolizar trifosfato de guanosina (GTP) para
producir la energa necesaria para alimentar el polmero zacin y la
despolimerizacin de FtsZ y posterior como montaje y desmontaje del anillo
de FtsZ (Figura 6.2). El correcto funcionamiento de las protenas Fts son
cruciales a th proceso de la divisin celular bacteriana. Mucha informacin
nueva sobre la divisin celular se ha convertido en los ltimos aos, y
genmica Los estudios han confirmado que las protenas son altamente Fts
pueden. servido a travs de amplias lneas filogenticas. No es grande en.
inters en la comprensin la divisin celular bacteriana en el nivel
molecular, no slo por razones bsicas, pero tambin ser- causar tal
entendimiento podra conducir al desarrollo de nuevos frmacos dirigidos a
pasos especficos en la divisin proceso. Al igual que la penicilina (un
frmaco que se dirige bacteriana celda sntesis de la pared, ver la seccin
6.3), frmacos que interfieren ingenio la funcin de Fts especficas u otra
divisin celular bacteriana protenas podran ser de gran utilidad en la
medicina clnica. Celular de la forma y la actina-como las protenas en
procariotas Aunque FtsZ juega un papel importante en la clula divisin
proceso, qu factor (s) afecta a la morfologa de un prokary. tica celular?
Durante muchos aos se pens que peptidogly- puede se sintetiz de una
manera tal como para definir la la morfologa de una clula. Ahora est claro
que las protenas especficas existir en procariotas que definen la forma
celular y que Pepti. doglycan desempea slo un papel menor.
Curiosamente, estos la forma de determinacin protenas muestran una

homologa significativa a la protena actina clula eucariota, un componente

clave de el citoesqueleto de las clulas eucariotas (Seccin 14.4). La
principal forma de determinacin protenas en procariotas se llama MreB.
Esta protena forma un cytoskele- actina-como tonelada en especies de
bacterias y, probablemente, tambin en Archaea, Formas filamentosas en
MreB en forma de espiral alzacuello alrededor del interior de la celda, justo
debajo de la cito- la membrana plasmtica. Presumiblemente, el
citoesqueleto MreB define por la forma celular en la generacin de una
fuerza de alguna manera contra la membrana citoplsmica. Curiosamente,
CoC bacteria con forma de cus-carecen MreB y el gen que codifica eso. Esto
indica que la forma "default" para una bacteria es una esfera. Las
variaciones en la disposicin de filamentos MreB tos en las clulas de
bacterias no esfricas son probablemente re- responsable de la varilla y
otras morfologas celulares encontrado entre los diversos procariotas (Figura
4.11). Entre FtsZ y MreB, clulas procariotas producen protenas
estructuralmente similares a la tubulina y actina, res- tivamente, las
protenas eucariotas clave involucrados en divisin celular sin e interna
andamiaje celular. Debido a la
pgina 5
a- re- cro- rcell Veral estafa- ,trigonometra- dualmente nzy- odio
comerciabilidad t AS el en mie en- estao- el ser- ent sin celda ITH sin TES
visin kary- iogly- e la oteins pepti- estas 010gy ent de ). yotes esqueltica
CHAEA. alzacuello cito- eleton fuerza , CoC lcodes erium Bfila- Ly reencontr oduce espec- 1divi- f del importancia de la divisin celular a la
biologa de la clula, que es no es sorprendente que las soluciones
biolgicas de la divisin celular y la forma en las clulas eucariotas tienen su
evolutiva races en clulas procariotas. Al igual que otras funciones bsicas
de replicacin de clulas-ADN, la transcripcin, y con la traduccin
mecanismos celldivision era probable invento bastante temprano ciones en
la evolucin microbiana. 8 6.2 concepto Llegada La divisin celular y la
replicacin de los cromosomas son coordinadamente reguladas, y las
protenas Fts son las claves para estos procesamiento ES. La protena FtsZ
define el plano de divisin en prokary- otas, mientras que las protenas Mre
ayudar a definir la forma celular. . Cundo se replica el cromosoma
bacteriano en el bi- nario proceso de fisin? . Cmo encontrar el punto
medio FtsZ celular? . Qu protenas eucariotas son homlogos de FtsZ y
MreB? peptidoglicano Sntesis y Divisin celular Antes de la divisin celular
puede ocurrir, sntesis de la pared celular nuevo debe llevarse a cabo. Y lo
ms importante, la nueva pared mate- rial debe ser aadido a la pared
celular preexistente sin prdida de la integridad estructural. Este proceso
celular crtico se produce como se muestra en la Figura 6.38. FtsZrio, . .. .
([p bandas de pared zonas de crecimiento (un) (segundo) . Figure6.3
Sntesis de la pared celular en gram-positiva Bacterias. (Alabama
Localizationof sntesis de la pared celular durante la divisin celular nuevo.
En cocos, sntesis de la pared newcell (en verde) se localiza en un solo
punto. El anillo de FtsZ (vase la Figura 6.2) define el plano de la divisin

celular. (licenciado en Derecho Micrografa electrnica de barrido de clulas

de Streptococcus hemoltico showingwall bandas (flechas). Una sola clula
es de aproximadamente I / Lm de dimetro. 6.3 + peptidoglicano Sntesis y
divisin celular + 139 yo Comenzando en el anillo de FtsZ (Figura 6.2a y la
figura 6.3), pequeas aberturas en la pared son creados por enzimas
llamado autolisinas, las enzimas similar en funcin a liso- enzima (Seccin
4.8). Autolisinas estn presentes dentro de la divisome complejo de
protenas. Nuevo material de la pared celular es despus se aadi a travs
de las aberturas (Figura 6.3a). El junc- cin entre la nueva y vieja
peptidoglicano forma un reborde en la superficie celular de las bacterias
gram-positivas (Figura 6.3b), anloga a una cicatriz. Es esencial en
peptidoglicano sin- tesis de que los nuevos precursores de la pared celular
(cido murmico / glu cosamine / tetrapptido unidades, vase la Figura 6.5)
empalmar en peptidoglicano existente de manera coordinada para prevenir
una brecha en la integridad de peptidoglicano en el empalme punto. Si esto
no ocurre, un proceso de espon- lisis celular nea puede ocurrir llamado
autolisis. Biosntesis de peptidoglicano Discutimos la estructura general de
peptidoglicano en Captulo 4 (Seccin 4.8). La capa de peptidoglicano puede
ser considerado como un tejido que soporta esfuerzo, al igual que una
delgada hoja de goma. Sntesis de peptidoglicano nueva durante
crecimiento requiere un corte controlado de pepti- preexistente doglycan
por autolisinas junto con la in- simultnea insercin de peptidoglicano
precursores. Un vehculo lipdico molcula llamada bactoprenol (Figura 6.48)
juega un importante papel en este proceso. Bactoprenol es un Css muy
hidrfobo alcohol que se adhiere a la N-acetil glucosamina / N-acetilmurmico cido / pentapptido peptidoglicano precursor (Figura 6.5a8).
Bactoprenol transporta pre peptidoglicano cursores travs de la membrana
citoplasmtica de renderizado ellos suficientemente hidrfobo para pasar a
travs de la interioridad o de la membrana citoplasmtica. Una vez en el
periplasma, bactoprenol interacta con enzimas que insertan pared celular
precursores en el punto de la pared celular y creciente catalizar la formacin
del enlace glicosdico (Figura 6.5b). transpeptidacin: La penicilina Target El
paso final en la sntesis de la pared celular se denomina transpeptid- acin.
Este proceso implica la formacin del pptido entrecruzamientos entre
restos de cido murmico en adyacentes cadenas de glicano (Seccin 4.8 y
las figuras 4.29 y 4.30). transpeptidacin es mdicamente significativo, ya
que es [cido N-acetilmurmico] 8 Figura 6.4 bactoprenol (undecaprenol
difosfato). Esta molcula altamente hidrofbico lleva precursores de
peptidoglicano de la pared celular a travs de la membrana citoplasmtica.
Pgina 6
. 140 . Captulo 6 . Crecimiento microbiano dt D-Ala J L-Ala-D-Glu DAP-D-LF]
-D-GIU-L-A1A 1 1 D-Ala transpeptidacin , Ala-o-GI " - OAP- O-Ala - 1 li) con
BIG " -'- Ala yo D-Ala (segundo) . Figura sesenta y cinco peptidoglicano
sntesis. (al transporte de precursores de peptidoglicano travs de la
membrana citoplsmica a la creciente punto de la pared celular. IBL La
reaccin de transpeptidacin que conduce a la reticulacin definitiva de dos

cadenas de peptidoglicano. Penicilina inhibe esta reaccin. Los trminos

OUT e IN representan el medio ambiente y el citoplasma, respectivamente.
la reaccin inhibida por el antibitico penicilina. Varios penicilina vinculante
protenas se han identificado en la periplasma de las bacterias gramnegativas, incluyendo la ante- ormente mencion ICES (ver Figura 6.2a).
cuando la penicilina se une a estas protenas, que ya no son catalticamente
activo. En ausencia de sntesis de la pared nueva, la contingencia actividad
UED de autolisinas finalmente debilita la clula pared y conduce a la lisis
celular. La penicilina ha sido tal una ampliamente utilizado medicamento en
la medicina clnica por dos razones. En primer lugar, los seres humanos son
Eukarya y por lo tanto carecen de peptidogly- poder; el frmaco de este
modo se puede administrar en dosis altas. Y en segundo lugar,
prcticamente todos los patgenos bacterianos contienen peptidoglicano y
son por lo tanto posibles objetivos de la droga. transpeptidacin implica la
formacin del enlace peptdico con uno de varios aminocidos diferentes,
dependiendo de la estructura de la pared celular del organismo en cuestin.
en gramtica Las bacterias negativas tales como Escherichia coli, la
reticulacin typ- camente se produce entre el cido diaminopimlico en un
pptido y D-alanina en el pptido adyacente (Figura 6.5b). Initiative
cialmente, hay dos residuos de D-alanina en el extremo de la precursor de
peptidoglicano, pero una molcula de D-alanina isre- movido durante la
reaccin de transpeptidacin (Figura 6.5b). Esto suministra la energa
necesaria para conducir la reaccin hacia delante (transpeptidacin se
produce fuera del citoplasmtica membrana en la ATP no est disponible).
En E. coli, el pro- FTSI protena (Figura 6.2a) se piensa que es la protena
clave in- implicados en transpeptidacin. En gram-positiva Las bacterias,
donde un interbridge glicina es comnmente presentes ( Seccin 4.8 y
Figura 4.31), los enlaces cruzados se producen a travs de la interbridge,
tpicamente a partir de un L-lisina de un pptido toa D-alanina en el otro. _
6.3 concepto Llegada Nueva pared celular se sintetiza durante el
crecimiento bacteriano por in- sercin nuevas unidades de glicanos en
material de la pared preexistente. Ahy- alcohol drophobic llamada
bactoprenol facilita el transporte de nuevas unidades de glicanos a travs
de la membrana citoplasmtica de Be- llegado parte de la pared celular en
crecimiento.
transpeptidacin
cautiverio
los
precursores
en
el
peptidoglicano tela. . Cules son autolisinas y por qu son necesarias? .
Cul es la funcin de bactoprenol? . Cul es transpeptidacin y por qu es
importante? II " CRECIMIENTO de origen bacteriano POBLACIONES Como ya
hemos mencionado, el crecimiento microbiano se define como una
aumentar en el nmero de clulas en una poblacin. Nosotros ahora pasar
de crecimiento y la divisin de una clula individual a considerar la dinmica
de crecimiento de las poblaciones bacterianas. Terminologa de crecimiento
y el Concepto del crecimiento exponencial Durante el ciclo de divisin
celular (Figura 6.1), todos estructural componentes de la doble celular.
Mientras que el intervalo para la formacin de dos clulas de uno se llama
una generacin, el tiempo necesario para que esto ocurra se llama la
generacin tiempo (vase la Figura 6.1). El tiempo de generacin es el

tiempo de re- rido para la poblacin de clulas para duplicar (la clula masa
duplica durante este perodo, as). Debido a esto, la tiempo de generacin
tambin se llama el tiempo de duplicacin. Los tiempos de generacin
varan ampliamente entre los microorganismos ismos. En general, la
mayora de las bacterias tienen ms breves la generacin de veces que lo
hacen la mayora de los eucariotas. la generacin tiempo la de un
organismo dado es bastante dependiente de la medio de crecimiento y las
condiciones de incubacin de realizacin pleados. Muchas bacterias tienen
tiempos mnimos de generacin de 1-3 h en las mejores condiciones de
crecimiento, pero unos pocos muy organismos de crecimiento rpido son
conocidos cuya duplicacin los horarios son menos de 10 minutos y unos
pocos nizacin de crecimiento lento ismos cuyos tiempos de duplicacin son
tan largos como varios das.
pgina 7
4 x 107 yo 1 1 mi 1 ...... t = 6 h 1 ! Q Q) 2 x 107 n = 1 1 0 9 = 1. = 6 h 1
norte yo Poblacin yo 1 dobles en 6 h t 1 0 2 3 4 5 6 (un) 1 x 108 yo 8 x 107
t = 2 yo norte = 1 1 2h g == 1 6 x 107 yo - - - - - - - - - \ : 1 yo Cuesta abajo
= 0,1511 4 x 107 1 yo mi 1 1 ...... 1 ! Q 1 Q) 3 x 107 1 1 0 yo 1 1 yo t 1 2 x
107 y L-2H del eis re- 6.5b). accin lasmic epro- ein in- cteria, t ( SSthe e a
una Y in- Ahy- rt de o BE- onds s una ahora ll de ons. t: EPT tural r el cin,
acin e re- masa s, la rgan- mam nera- el em- s de Ery abadejo un- S. 6.4.
GrowthTerminology y el concepto de crecimiento exponencial . 141 yo En la
naturaleza, los tiempos de duplicacin microbianas pueden ser mucho
longerthan los obtenidos en cultivos de laboratorio. Esto es becausein la
naturaleza, condiciones ideales de crecimiento para un determinado
organismo puede existir slo de manera intermitente. Por lo tanto,
dependiendo Ingon la disponibilidad de recursos, fsico-qumico condiciones
(temperatura, pH, y similares), la disponibilidad de humedad, y los cambios
estacionales, las poblaciones bacterianas en naturaleza maydouble slo una
vez cada pocas semanas, o incluso ms tiempo. Crecimiento exponencial
Agrowth experimento a partir de una sola clula que tiene un tiempo de
duplicacin de 30 minutos se presenta en la figura 6.68. Thispattern del
aumento de la poblacin, donde el nmero ofcells dobles durante un
intervalo de tiempo regular, se llama crecimiento exponencial. Cuando el
nmero de clulas de dicha un experimento se representa grficamente en
la aritmtica (lineal) coordinacin nates como una funcin del tiempo, se
obtiene una curva con una aumentando continuamente pendiente (Figura
6.6b). Bycontrast, cuando el nmero de clulas se representa en una
logartmica (loglo) y la escala de tiempo se representa aritmticamente
camente (un grfico semilogartmico), como se muestra en la figura 6.6b,
los puntos siguen una lnea recta. Esta funcin de lnea recta cin indica que
las clulas estn creciendo exponentially- la poblacin de clulas se duplica
en un perodo constante de hora. Semilogartmica grficos tambin son
convenientes y uso simpleto para estimar generationtimes de un conjunto
de 1 x 107 o 2 3 4 5 Tiempo (h) (segundo) 8 Figura 6.7 parmetros
Calculatinggrowth. Mtodode estimacin apareamiento los tiempos de

generacin (91 de las poblaciones en crecimiento exponencial con tiempos

de generacin de (a) 6 h y (b) 2 h a partir de datos representa en grficos
semilogartmica. La pendiente de cada lnea es igual a 0.301 / gy n es igual
al nmero de generaciones que se han producido en el tiempo, t. Todos los
nmeros se expresan en notacin cientfica; es decir, 10000000 es IX 107,
60000000 es 6 X 107, y as sucesivamente. los datos de crecimiento. El
tiempo de generacin puede leerse directamente de la grfica (Figura 6.78;
ver tambin la figura 6.12b). En crecimiento exponencial, la tasa de
aumentar en la celda nmero es lenta al principio, pero aumenta a un cada
vez ms rpido tarifa. En las ltimas etapas de crecimiento, esto resulta en
una explosin aumento sive en el nmero de clulas. Por ejemplo, en el
experimento Ment en la figura 6.6, la tasa de la produccin de clulas en la
primera 30 min de crecimiento es una clula por 30 min. Sin embargo, BEentre 4 y 4,5 h de crecimiento, la tasa de celda la produccin es
considerablemente ms alta, 256 clulas por 30 min (Figura 6.6). UN
implicacin prctica de crecimiento exponencial es que cuando un producto
alimenticio rico en nutrientes y no estril, como la leche se dej reposar
bajo crecimiento bacteriano ideales condicin ciones, un par de horas
durante las primeras etapas de la exponencial el crecimiento no son
perjudiciales, mientras que standingfor lo mismo perodo de tiempo durante
las ltimas etapas es desastrosa.
pgina 8
, 142 . Captulo 6. Crecimiento microbiano _ 6.4 concepto ClIeck Las
poblaciones microbianas muestran un tipo caracterstico de crecimiento
patrn llamado crecimiento exponencial, que se ve mejor por PLOT ting el
nmero de clulas con el tiempo en un grfico semilogartmico. . Por qu la
ventaja de un crecimiento exponencial de gran poblacin celular ciones en
un perodo tan corto de tiempo? . Qu es un grfico semilogartmico? Las
matemticas de la exponencial Crecimiento El aumento en el nmero de
clulas que se produce en una exponencial cialmente creciente cultivo
bacteriano es una progresin geomtrica sin del nmero 2 (Figura 6.6a). A
medida que una clula se divide a convertirse en dos clulas, expresamos
esto como 20 21.As dos clulas convertido en cuatro, expresamos esto
como 21 22, y as sucesivamente (Figura 6.6a). Existe una relacin
matemtica entre el nmero de clulas presentes en un cultivo inicialmente
y el nmero de los presentes despus de un perodo de crecimiento
exponencial: norte = N0211 donde N es el nmero de clulas final, No es la
clula inicial nmero, y n es el nmero de generaciones que han OC- curred
durante el perodo de crecimiento exponencial. los tiempo de generacin g
de la poblacin en crecimiento exponencial cin es estao, donde t es la
duracin del crecimiento exponencial expresado en das, horas o minutos,
dependiendo de la organismo y las condiciones de crecimiento. A partir del
conocimiento de los nmeros de clulas iniciales y finales en una forma
exponencial crecimiento de la poblacin celular, es posible calcular n, y a
partir de n y el conocimiento de t, el tiempo de generacin g. La relacin de
N y no a n La ecuacin N = N0211can ser expresada en trminos de n como

siguiente: N = N0211 log N = log n + n log 2 log N - log n = n log 2 log N log n log N - log n n = - log 2 0,301 = 3,3 (log N - log n) Con esta frmula,
podemos calcular los tiempos de generacin en trminos de cantidades
fcilmente medibles, N y N A modo de ejemplo, considere los datos reales
del grfico inferior en La figura 6.7, en la que N = 108, n = 5 X 107, y t = 2:
n = 3,3 [log (108) - Log (5 x 107)] = 3,3 (8-7,69) = 3,3 (0,301) = 1 Por lo
tanto, en este ejemplo, el tiempo de generacin de estao = 2/1 2 h. Si el
crecimiento exponencial se produjo durante otras 2 h, TH el nmero de
clulas sera 2 X 108. Parmetros de crecimiento relacionados El tiempo de
generacin g de un crecimiento exponencial Cui tambin puede calcularse a
partir de la cuesta abajo de theline obtiene ' la trama semilogartmica de
crecimiento exponencial. el SLO es igual a 0.301n / t (log 2 N / t) y en el
exampl anteriormente sera 0,301 (1) / 2, o 0.15. Como g es igual a 0.301 /
s10pe, llegamos al mismo valor de 2 para g. La O.301n trmino / t es el
llamado especfico growthrate, abbreviatedl Otro ndice de crecimiento es el
recproco del gen! tiempo de acin, llamada tasa de divisin, abreviado II.
los divi sin tasa es igual a 1 / g y tiene unidades de hou recproca (h-1).
Mientras que el trmino g es una medida del tiempo que tarda una
poblacin al doble del nmero de clulas, II es una medida 01 ofgenerations
los nmeros que se producen por unidad de tiempo en un ex.
exponencialmente creciente cultura. La pendiente de la recta que relaciona
ingrese el nmero de clulas con el tiempo (Figura 6.7) es igual a 11 / 3.3.
Armados con el conocimiento de la nand t, se puede calcular g, k, y II para
diferentes microorganismos creciendo bajo diferentes condiciones de
cultivo. Esto es a menudo til para opti. mizar condiciones de cultivo para
un organismo particular y tambin para ensayar el efecto positivo o
negativo de algunos tratamiento en el cultivo bacteriano. _ sesenta y cinco
concepto ClIeck Desde el conocimiento de los nmeros inicial y final de
clulas y la tiempo de crecimiento exponencial, el tiempo de generacin y el
crecimiento constante de velocidad de una poblacin de clulas se puede
calcular directamente. Los parmetros clave aqu son n, g, II, k y t. .
Distinguir entre los trminos especfico crecimiento andge- tasa neracin
tiempo. . Si en 8 h una poblacin de clulas en crecimiento exponencial en.
arrugas de 5 X 106 clulas / ml a 5 X 108cells / ml, clculo tarde g, n, II, y k.
El ciclo de crecimiento Los datos presentados en la Figura 6.6 reflejan slo
una parte de la ciclo de crecimiento de una poblacin microbiana, la parte
llamada crecimiento exponencial. En un recipiente cerrado, tal como un
tubo o un frasco, una enfermedad que se denomina cultivo discontinuo,
exponenciales crecimiento no puede ocurrir de forma indefinida. En lugar de
ello, un tpico se obtiene la curva de crecimiento de una poblacin de
clulas, como fig. trado en la figura 6.88. La curva de crecimiento describe
un cuarto. ciclo de crecimiento de los neumticos, incluido el de latencia,
exponencial fase, fase estacionaria y fase de muerte. Fase de latencia
Cuando una poblacin microbiana se inocula en un fresco medio, el
crecimiento por lo general comienza slo despus de un perodo de
pgina 9

fases de crecimiento Lag-tExponential-J Estacionario yo Muerte 9.0 recuento

viable / Q) E 8.0 Turbiedad/ -...... .om " mi (densidad ptica) > m o'ctIS e e
7.0 O ... 10 6.0 5.0 Hora 1.0 6 ' 0.75 P. "en do 0.50 Q) "0 CI3 u MI. 0 0.25 = ,
el lture d de correr a paso largo mple l de los ted k. ga divisin la nuestra s
de re de n ex CIONES llegas tarde nder ptima y algunos 6.6 El ciclo de
crecimiento + + 143 yo 0,1 . Figura 6.8 curva de crecimiento tpica para una
poblacin bacteriana. Recuento Aviable mide las clulas en el cultivo que
son capaces ofreproducing. SeeSections6.5 y 6.6 para una descripcin ms
detallada de los mtodos de recuento empleadas. La turbidez o la densidad
ptica, es una medida cuantitativa de iluminacin scatteringby un cultivo
lquido (vase la Figura 6.121. el wth ctly. timecalled el retraso fase. Este
intervalo puede ser breve o ex tendido, dependiendo de la historia de la
cultura y la las condiciones de crecimiento. Si un cultivo en crecimiento
exponencial es transferido en el mismo medio con el mismo condicin
ciones de crecimiento, un retraso no se produce y exponencial crecimiento
comienza inmediatamente. Sin embargo, si el inculo es tomado de una
vieja cultura y la transmisin (fase estacionaria) ferredinto el mismo medio,
un retraso por lo general se produce incluso si allthe clulas en el inculo
son viables, es decir, capaz de re- Produce. Esto es porque las clulas se
agotan de diversos essentialconstituents y el tiempo se requiere para su
resyn- thesis.A retraso tambin se produce cuando el inculo consiste en
cellsthat haber sido daado (pero no muerto) por tratamiento mentwith
calor, radiacin o sustancias qumicas txicas, debido thetime necesaria
para las clulas para reparar el dao. Un retraso tambin se observa cuando
una poblacin se trans- ferredfrom un medio de cultivo rico para una ms
pobre. por crecimiento que se produzca en un medio de cultivo particular,
las clulas Musthave un complemento completo de enzimas para la
sincronizacin tesis de los metabolitos esenciales no existentes en su
medio. Por lo tanto, despus de la transferencia a un medio donde
biosntesis ser requerida, se necesita tiempo para que sintetizan sisofthe
nuevas enzimas que llevarn a cabo estas reacciones. nd ge- n in- alcu- del
llamado un tubo ential ypical Sillus- un en- lential onential Fase Aswehave
visto, durante la fase exponencial de crecimiento cada celldivides para
formar dos clulas, cada una de las cuales tambin di- videsto forma dos
clulas ms, y as sucesivamente, para una breve o ex tendedperiod,
dependiendo de los recursos disponibles y otros factores. Las clulas en
crecimiento exponencial son por lo general en su estado ms saludable. Por
lo tanto, las clulas en "exponencial media" fase areoften deseable para los
estudios
de
enzimas
u
otra
cellcomponents.
Mostunicellular
microorganismos crecen exponential- Ly, butrates de crecimiento
exponencial varan en gran medida. La tasa de crecimiento exponencial se
ve influenciada por el medio ambiente condiciones (temperatura,
composicin de la cultura medio), as como por las caractersticas genticas
de la or- orga- s mismo. En general, los procariotas crecen ms rpido que
microorganismos eucariotas, y pequeas eucariotas crecen ms rpido que
las grandes. Esto se remonta a la superficie- a-volumen relacin de la
discusin en el captulo 4 (Seccin 4.4). All vimos cmo las clulas

pequeas tienen una mayor capacitancia dad de nutrientes y el intercambio

de residuos en comparacin con larg- clulas er, y esta ventaja metablica
puede drsticamente afectar su tasa de crecimiento. Fase estacionaria En
un cultivo discontinuo, como por ejemplo en un tubo o un frasco,
exponencial crecimiento es limitado. Considere el hecho de que un solo
bacteriologa um con un tiempo de generacin de 20 minutos podra
producir, si al- guido creciendo exponencialmente durante 48 h, una
poblacin de clulas que pes 4000 veces el peso de la Tierra! Esto es particularmente impresionante porque una sola clula bacteriana pesa slo
alrededor de un billonsima (10-12) de un gramo (Tabla 3.2). Obviamente,
este escenario es imposible. Alguna cosa debe suceder para limitar el
crecimiento de la poblacin a largo BE- fore esto ocurre. Normalmente, uno
o ambos de dos cosas OC- curs para limitar el crecimiento: (1) un nutriente
esencial de la. medio de cultivo se utiliza para arriba, o (2) un poco de
producto de desecho (s) del organismo se acumula en el medio para inhibir
crecimiento. De cualquier manera, el crecimiento exponencial cesa, y el
poblacin alcanza la fase estacionaria. En la fase estacionaria, no hay
aumento neto o disminucin en el nmero de clulas. Aunque el crecimiento
suele hacer no se producen en la fase estacionaria, muchas funciones
celulares puede continuar, incluyendo el metabolismo de energa y algunos
procesos biosintticos. En algunos organismos, crecimiento lento en
realidad puede ocurrir durante la fase estacionaria, pero no aumento neto
en el nmero de clulas se produce. Esto es debido a que algunos
pgina 10
, 144 . Captulo 6 . Crecimiento microbiano clulas en la poblacin crecen,
mientras que otros mueren, los dos procesos de equilibrio entre s. Este es
un fenmeno no llama crecimiento crptica. Fase de muerte Si la incubacin
contina despus de una poblacin llega a la estacin fase nario, las clulas
pueden permanecer vivos y continan metabolizan, pero eventualmente
morirn. Cuando esto ocurre, la poblacin entra en la fase de muerte del
ciclo de crecimiento. En algunos casos, la muerte se acompaa de la lisis
celular real. Figura 6.8 indica que la fase de muerte del crecimiento ciclo
tambin es exponencial. Tpicamente, sin embargo, la tasa de clulas la
muerte es mucho ms lento que el de crecimiento exponencial. Las fases de
crecimiento de las bacterias que se muestran en la Figura 6.8 son reflejos de
los eventos en una poblacin de clulas, no enclulas individuales. Los
trminos retraso de fase, la fase exponencial, fase estacionaria, y la fase de
muerte no tienen ningn significado conrespecto a las clulas individuales,
sino nicamente a las poblaciones de clulas. _ 6.6 concepto Llegada Los
microorganismos mostrar un patrn de crecimiento caracterstico cuando se
inocularon en un medio de cultivo fresco. Por lo general hay un retraso fase,
y luego comienza en el crecimiento exponencial de una fash- ion. Como
nutrientes esenciales se agotan o productos txicos la acumulacin, el
crecimiento cesa, y la poblacin entra en la estacin fase nario. Si la
incubacin contina, las clulas pueden comenzar a morir. . En qu fase de
la curva de crecimiento son clulas que se dividen en una proceso regular y

ordenada? . Cuando por lo general una fase de latencia no se produce? .

Por qu las clulas entran en la fase estacionaria? _ III MEDICIN
MICROBIANO CRECIMIENTO El crecimiento demogrfico se mide siguiendo
los cambios en el nmero de clulas o en el peso de algn componente
demasa celular. Este ltimo podra ser protenas, cidos nucleicos, o el peso
seco de clulas mismas. Diferentes mtodos para Crestas que apoyan
cubreobjetos \ \ Muestra adicional aqu; El cuidado debe ser tomado de no
permitir el desbordamiento; espacio entre cubreobjetos y el tobogn es de
0,02 mm (Fc> mm). Todo el grid tiene 25 grandes cuadrados, una superficie
total de 1 mm2 y un volumen total de 0,02 mm3. Microscpico observacin;
todas las clulas son contados en la gran plaza: 12 clulas (en la prctica,
varios cuadrados se cuentan y se los nmeros se promediaron.) yo Nmero /
cm3 (ml) el recuento de clulas o estimar las que la masa de clulas que se
encuentran traje. ed a diferentes organismos o diferentes problemas, y
nosotros considerar estos mtodos aqu. Las mediciones directas de
Microbiana Crecimiento: totales y viables Condes 8 Figura 6.9 procedimiento
de recuento directo al microscopio utilizando la Petroff-Hausser cmara de
recuento. Un microscopio de contraste de fase es tpicamentecamente
utiliza para contar las clulas para evitar la necesidad para la tincin.
mtodos de recuento total y viables son dos ampliamente prc ' ticed
procedimientos
para
enumerar
unicelular
nismos
nismos.
Los
procedimientos tienen sus puntos fuertes y debilidades y a menudo pueden
producir resultados muy diferentes para cargos de un solo cultivo
bacteriano. Recuento total de la clula El nmero de clulas en una
poblacin se puede medir por contando una muestra bajo el microscopio, un
mtodo llamado el conteo microscpico directo. Hay dos tipos de directa
conteos microscpicos se hacen, ya sea en muestras secas de diapositivas o
en muestras de lquido. Con muestras lquidas, spe. cial cmaras de
recuento debe ser utilizado. En un conteo tal cmara, una cuadrcula se
marca en la superficie del vidrio diapositivas, con los cuadrados de rea
conocida (Figura 6.98). Encima cada cuadrado de la cuadrcula es un
volumen de cantidad conocida, muy pequeo pero medido con precisin. El
nmero de clulas por unidad de superficie de la rejilla puede ser contado
en el marco del micro- alcance, dando una medida del nmero de clulas
por pequea volumen de la cmara. La conversin de este valor al nmero
de clulas por mililitro de suspensin se hace fcilmente mediante mltiples
navegan por un factor de conversin basado en el volumen de la muestra
de la cmara (Figura 6.9). recuento microscpico directo es una forma
rpida de estimacin apareamiento nmero de clulas microbianas. Sin
embargo, tiene varias limitaciones: (1) Las clulas muertas no se distinguen
de liv- ing clulas; (2) clulas pequeas son difciles de ver bajo la microscope, y algunas clulas son probablemente perdido; (3) precisin es
difcil de alcanzar; (4) un mi- de contraste de fase Se requiere croscope
cuando la muestra no est manchada; (5) el mtodo no suele ser adecuado
para las suspensiones de clulas de baja densidad. (Con bacterias, si una
suspensin de clulas con menos de 106 clulas / mililitro (ml), pocos o
ninguno de bacterias ser Calcular nmero por mililitro de muestra: 12

clulas x 25 cuadrados grandes x 50 x 103 1.5x107 . yo Nmero / mm2 yo

Nmero / mm3
pgina 11
Incubacin . . La muestra se pipete en Muestra se extiende uniformemente
sobre Tpico Resultados de la propagacin de placa superficie de agar plato
superficie de agar usando estril (0,1 ml o menos) esparcidor de vidrio yo yo
yo Incubacin yo yo yo yo . . . yo yo Muestra se pipetearon en se aade
medio estril y Tpica placa de vertido resultados placa estril se mezcl
bien con inculo traje- nosotros l tica roor- y ct para por sobredosis rect en
espe- En g muchacha ver Nuevo Testamento, ells lcro- centro comercial
berof en ltima f del f estimacin Veral liv- e mi- ; (3) t mi- re; (5) ns de
Menos Yo ser Yo estar tpicamente 6.7 + mediciones directas de
crecimiento microbiano: Total y recuentos viables + 145 yo seenin el campo
del microscopio; Sin embargo, diluir suspensin sionsmay ser contados si
una muestra se concentra primero y se resuspendieron en un volumen
pequeo.), (6) clulas mviles mustbe inmovilizada antes de contar. En la
ecologa microbiana, el total de clulas son a menudo per- formado en
muestras naturales utilizando general o especfica manchas para visualizar
las clulas. La mancha-DNA especfica llamada DAFI tie todas las clulas en
una muestra (Figura18.6). Bycontrast, manchas fluorescentes se pueden
hacer muy especfica- icfor ciertos organismos o grupos de organismos por
AT- tachingthem a sondas de cido nucleico (Figura 18,11). Si cellsare
presentes en bajas densidades, por ejemplo, en un proceso abierto
oceanwater muestra, por primera vez se pueden concentrar en una filterand
despus se contaron despus de la tincin. ViableCount En el conteo
microscpico directo, tanto vivos como muertos cellsare cont. Sin
embargo, en muchos casos somos inter Ested en contando slo las clulas
vivas, y para este propsito, mtodos de recuento de viables son las
adecuadas. Una clula viable es onethat es capaz de dividirse y formar
descendencia. Lo normal wayto realizar un recuento viable es determinar el
mero berofcells en la muestra capaz de formar colonias en unsuitableagar
medio. Por esta razn, el recuento viable es a menudo llamado el nmero de
grmenes, o recuento de colonias. el AS el consumo realizado en este tipo
de procedimiento es que el conteo eachviable celular puede crecer y
dividirse para producir una colonia. Algunos procedimientos de tincin
tambin pueden indicar la viabilidad ( Figure18.7), pero el mtodo de
colonias es la forma habitual VI- ablecounts se llevan a cabo. Hay dos
maneras de realizar una concentracin de grmenes: la mtodo spreadplate
y el Vertido en placa (Figura 6.108).el modo de extensin de la placa En el
mtodo de extensin en placa, un volumen (generalmente 0,1 ml o menos)
de un cultivo diluido de manera apropiada se esparce encima el superficie
de una placa de agar usando un esparcidor de vidrio estril. los placa se
incub hasta que aparezcan las colonias, y el nmero de colonias se cuenta.
Es importante que la superficie cara de la placa sea bastante seco de
manera que el lquido de propagacin empapa. volmenes superiores a 0,1
ml rara vez se utilizan en este mtodo debido a que el exceso de lquido no

penetre y puede causar que las colonias se unen como se forman, MAK- ing
difciles de contar. En el mtodo de placa de vertido (figura 6.10), un
conocido en volumen ume (normalmente 0,1-1,0 ml) de la cultura se
pipetean en una ster- ile placa de Petri. A continuacin se aade medio de
agar fundido y se mezclaron bien girando suavemente la placa sobre la
mesa de trabajo. Debido a que la muestra se mezcla con el fundido agar
Medi um, un volumen ms grande puede ser utilizado que con la
propagacin plato. Sin embargo, con este mtodo el organismo para ser
contadas debe ser capaz de resistir la temperatura brevemente tura de agar
fundido (45-50 C). En este mtodo, colonias se forman a lo largo de la
placa, y no slo en la superficie de agar como en el mtodo de la placa
propagacin. El plato Por lo tanto, debe ser examinada de cerca para
asegurarse de que todo recuento de colonias (Figura 6.10). La dilucin de
las suspensiones celulares antes Chapado Con tanto la placa de
propagacin y verter mtodos placa, se importante que el nmero de
colonias en desarrollo en elplacas no sea demasiado grande. En las placas
de hacinamiento algunas clulas no podrn formar colonias, an.d algunas
colonias pueden fusionarse, dando lugar a mediciones errneas. Tambin es
esencial que el nmero de colonias que no sea demasiado pequea, o la
estacin significacin estadstica del recuento calculado ser baja. . Figura
6.10 El recuento viable. Dos mtodos para realizar un recuento de viables
(countl plato. En cualquiera de los casos por lo general se debe diluir la
muestraantes de la siembra. Ntese cmo en el mtodo de placa de vertido.
forman colonias dentro el agar, as como en la superficie del agar.
pgina 12
yo II YO' YO, yo II II yo yo , yo , yo yo yo II yo yo yo yo yo II yo yo 146 .
Captulo 6 . Crecimiento microbiano La prctica habitual, que es la
estadsticamente ms vlida, es para contar las colonias solamente en las
placas que tienen entre 30 y 300 colonias. Por otra parte, es habitual para
determinar la condiciones de incubacin (medio, temperatura, tiempo) que
dar el mximo nmero de colonias de un determinado o- orga- y luego usar
estas condiciones en todo momento. Para obtener el nmero de colonias
caso, el muestreo PLE para ser contados debe casi siempre ser diluida.
Desderara vez se conoce el recuento viable aproximada por delante de
tiempo, por lo general es necesario realizar ms de una dilucin cin. Varias
diluciones de 10 veces de la muestra son com- comnmente utilizado
(Figura 6.118). Para realizar una 10 veces (10-1) dilucin, uno puede
mezclar 0,5 ml de la muestra con 4,5 ml de diluyente, o 1,0 ml de la
muestra con 9,0 ml de diluyente. Si un 100- doblar se necesita (10-2) de
dilucin, 0,05 ml se pueden mezclar con 4,95 ml de diluyente, o 0,1 ml con
9,9 ml de diluyente. alternativo tivamente, una dilucin 10-2 puede hacerse
haciendo dos xito excesivas diluciones de 10 veces. En la mayora de los
casos, tales de serie dilucin ciones son necesarias para llegar a la dilucin
final deseada. As, 9-ml caldo - 1/10 1/100 (10-1) (10-2) yo 159 17 2 0
Demasiadas colonias colonias de colonias colonias colonias para contar 159
x 103 = de dilucin en placa factor de recuento 1,59 X 105 Las clulas

(formadoras de colonias unidades) por mililitro de muestra original 8 Figura

6.11 Procedimiento para el recuento viable usando serial diluciones de la
muestra y el Vertido en placa. La estrillquido utilizado para preparar las
soluciones, puede ser simplemente agua, pero un equilibrado solucin
salina o medio de crecimiento pueden producir una recuperacin superior.
los factor de dilucin es el recproco de la dilucin. Para las planchas
propagacin ! Diluciones Figura 6.101.further pueden ser necesarios con el
fin de difundir muestras de 0,1 m !. si se necesita un (1/106) dilucin 10-6,
puede lograrse haciendo tres sucesivas 10-2 (1/102) diluciones o seis xito
excesivas 10-1 diluciones (Figura 6.11). Fuentes de error en el conteo de
placa El nmero de colonias obtenidas en un recuento viable experiencia
cin depende no slo del tamao del inculo y su via- bilidad, sino tambin
de la idoneidad del medio de cultivo y las condiciones de incubacin. El
nmero de colonias tambin puede cambiar con la duracin de la
incubacin. Por ejemplo, si una Se utiliza un cultivo mixto, las clulas
depositadas sobre la placa se no todos desarrollan en colonias a la misma
velocidad; si un corto in- tiempo de incubacin se utiliza, menos que el
nmero mximo de colonias se obtendr. Adems, el tamao de colonias
vara a menudo. Si algunas colonias diminutas se desarrollan, puede ser
perdido durante el conteo. Con los cultivos puros, desarrollo de la colonia es
un proceso ms sncrono. los recuentos de viables pueden estar sujetos a
bastante grandes errores por varias razones. Estos incluyen pipeteo
inconsistente tencias, la falta de homogeneidad de la muestra, mezcla
insuficiente ING, y varios otros factores. Por lo tanto, si los recuentos
precisos se han de obtener, gran cuidado y coherencia debe tomada en la
preparacin de muestras y pipeteo, y replicacin cate placas de diluciones
clave deben estar preparados. Nota tambin que dos o ms celdas de un
grupo sern ms que una forma una sola colonia. As que si muchos grupos
estn presentes en una mues- PLE, un recuento de viables de la muestra
puede ser errneamente bajo. Para indicar ms claramente en los
resultados de un recuento viable, los datos se expresan a menudo como el
nmero de colollY- unidades formadoras (ufc) obtenido, ms que como el
nmero de viabilidad Clulas (Desde una unidad formadora de colonias
puede contener una o ms clulas). A pesar de las dificultades asociadas
con la cuenta atrs viable ING, el procedimiento da la mejor informacin
sobre la nmero de clulas viables en una muestra y por lo que es
ampliamente utilizado en muchas reas de microbiologa. Por ejemplo, en
los alimentos, productos lcteos, mdico, y la microbiologa acutica, los
recuentos viables se emplean de forma rutinaria. El mtodo tiene la virtud
de alta sensibilidad, como una muestra que contiene slo un nico VIclulas capaces en teora se puede contar. Esta caracterstica permite la
deteccin sensible de la contaminacin microbiana de productos
alimenticios o de otros materiales. Por otra parte, el uso de altamente
selectivo medios de cultivo y condiciones de crecimiento (Secciones 5.2 y
24.2) en los procedimientos de conteo viables permite el recuento de slo
especie en particular en una poblacin mixta de microorganismos presentes
en el muestreo PLE. Por ejemplo, en aplicaciones prcticas, tales como en el

industria de la alimentacin, el recuento viable en medios selectivos permite

tanto para las evaluaciones cuantitativas y cualitativas de la contenido
microbiano de un producto alimenticio. La gran concentracin de grmenes
Anomala Aunque una tcnica muy sensible, los recuentos de placa se
puede muy poco fiable cuando se utiliza para evaluar el nmero de clulas
totales de muestras naturales como el suelo y el agua. En efecto, directa
micro farml dado Algunos plato: V thanl scoj SAO! yo VER) j hombres ( yo
gro de t! yo eXaJ 1091 de marido Coe mi abl "tJ Naciones Unidas 1
pgina 13
DBY xito recuentos microscpicos de muestras naturales suelen revelar
mucho ms organismos que son recuperables en placas de cualquier medio
de cultivo dada (Secciones 18.3 y 18.4). Algunos microbilogos han referido
a este gran tan gil concentracin de grmenes anomala ". " Por qu los
recuentos de placas revelan un menor nmero de clulas que el conteo
microscpico directo? Un factor es que micro- mtodos microscpicos
cuentan las clulas muertas, mientras met viable SAO no. Adems, los
diferentes organismos, incluso en una muestra muy pequea puede tener
muy diferentes requisito mentos de recursos y las condiciones de cultivo de
laboratorio (captulos 5, 6, 17-19). Por lo tanto, un medio y un conjunto de
las condiciones de crecimiento se permitir el crecimiento de slo unos
subconjunto fopulation del total. Si este subconjunto constituye, por
ejemplo, 10 clulas / ginebra una poblacin total viable de 109cells / g, la
concentracin de grmenes revelar en el mejor de slo el 0,1% de la
poblacin total, una vasta subestimacin de la accin tual nmero de
clulas viables. La conclusin aqu, debera estar claro. placa de Targeted
recuentos utilizando medios altamente selectiva, como en, por ejemplo, el
anlisis microbiano de las aguas residuales o los alimentos, puede dar lugar
confiable datos capaces (Secciones 28.1, 29.1 y 29.4). A diferencia de, "El
total de clulas" de las mismas muestras usando un solo Medi um y un
conjunto de condiciones de crecimiento puede ser, y por lo general son,
subestima por uno a varios rdenes de magnitud. en- va- Dakota del Norte
adems si una ser estao- BER e de ellos res, rrors! msis- 'mezcla- Junts
1stbe replicacin Nota mlya muestreo ormente : Porte, 'Jlony- Imber Tain 8
6,7 concepto Clzeck El crecimiento se mide por el cambio en el nmero de
clulas con hora. Los recuentos de clulas realizan microscpicamente
medir el total de nmero de clulas en una poblacin, mientras que los
recuentos de clulas viables (Recuentos de placas) medida slo la poblacin
que vive. . Por qu es un cOllnt viables ms sensible que una microscpica
cOllnt? ount- el usado comida, ounts ue de Le VI- s de en de SE de itions
mientos un pecado muestreo en el llows del . Cul es el primer supuesto de
hecho en placa relativa contar con resultados al nmero de clulas? .
Describehow que diluira un cultivo bacteriano por 10-7. . Cul es la "gran
concentracin de grmenes anomala"? Las mediciones indirectas de
Microbiana Crecimiento: Turbidez Un mtodo rpido y muy til de estimar
mero celular fibras es por mediciones de turbidez. Una suspensin de
clulas se venublado (turbia) al ojo porque las clulas se dispersan la luz

contrasea ing travs de la suspensin. Los ms clulas que son la presin

ent, ms luz se dispersa, y por tanto la ms turbia de la suspensin. La
turbidez se puede medir con un fotmetro o unaespectrofotmetro,
dispositivos que pasan la luz a travs de una clulasuspensin y detectar la
cantidad de luz dispersada que emerge (Figura 6.128). La principal
diferencia BE- entre estos dos instrumentos es que un fotmetro de
realizacin puede ser mbers directo 6.8 . Indirectos, las mediciones de
crecimiento microbiano: turbidez. 147 estratagemas un solo filtro de paso
de banda ancha para generar incidentes la luz, mientras que un
espectrofotmetro emplea un ms pre- CISE prisma o red de difraccin para
generar luz incidente (Figura 6.12a). Longitudes de onda utilizadas
comnmente para bacterianamediciones de turbidez incluyen 540 nm
(verde), 600 nm (Naranja), o 660 nm (rojo). Como se mencion, tanto espectrophotometers y fotomtricos comparten el hecho de que se medir
nicamente no dispersada la luz. La disminucin en dispersadala luz que se
produce como clulas aumentan en nmero se mide enfotmetro unidades
(por ejemplo, "unidades Klett" para la Klett-Summerson fotmetro) o
densidad ptica (00) unidades para un espectrofotmetro (Figura 6.12b).
Generacin de una curva estndar Para los organismos unicelulares,
unidades fotmetro o 00 son proporcional (dentro de ciertos lmites) al
nmero de clulas. tur- Por lo tanto, las lecturas de morbilidad se pueden
utilizar como un sustituto de mtodos de recuento directo. Sin embargo,
antes de hacerlo, un curva estndar primera debe estar preparado relatan
cierta di-rect la medicin del nmero de clulas (microscpico o viable
count) o la masa (peso seco) a la indirecta de medicinobtenido por la
turbidez (Figura 6.12c). Por ejemplo, elcurva estndar puede contener datos
tanto para el nmero de clulas y la masa celular, lo que permite una
estimacin de ambos parmetro tros de una sola lectura de la turbidez
(Figura 6.12c). A concentraciones altas de clulas, la luz dispersada de
distancia de la fotoclula por una clula se puede volver por redispersados
otro. Para la fotoclula esto hace que parezca como si la luz Nunca se
haban dispersado en el primer lugar. A tan alta densidades celulares, la
correspondencia entre el nmero de clulas y turbidez Por lo tanto, derivas
de la linealidad (Figura 6.12c). Sin embargo,dentro de los lmites, medicin
de turbidez mentos pueden ser razonablemente precisa, y tienen la virtud
de ser rpida y fcil de realizar. Las mediciones de turbidez por lo general se
pueden hacer con- fuera destruir o perturbar significativamente la muestra.
Por estas razones, las mediciones de turbidez son ampliamente empleado
para seguir la tasa de crecimiento de cul- microbiana turas. La misma
muestra se puede comprobar repetidamente y las mediciones trazan en un
grfico semilogartmico versin tiempo SUS (Figura 6.12b). De estos, es fcil
de calcularel tiempo de generacin y otros parmetros de crecimiento de la
cultivo en crecimiento. _ 6.8 concepto Clzeck Las mediciones de turbidez
son una indirecta pero muy rpida y mtodo til para medir el crecimiento
microbiano. Sin embargo, en Para relacionar un recuento celular directo a un
valor de turbidez, un Stan- primero debe establecerse curva de Dard. .
Enumerar dos ventajas de utilizar la turbidez como una medida de

crecimiento celular. . Describe cmo se puede utilizar una medicin de la

turbidez de decir cuntos colonias que cabe esperar de un chapado la
cultura de un determinado 00.
pgina 14
(un) 400 Un organismo 0,8 300 0,6 200 0,4 $) 150 0,3 'MI : J (j) 100 0,2 00
S2 80 60 0,1 40 400 350 $) 300 'MI : J 250 - (j) S2 200 150 100 50 0 (do)
148 . Captulo 6 . Microbiano Crecimiento Incidente luz, 10 Muestra que
contiene las clulas (0) filtro o prisma (540 nm) 20 o 5 10 15 20 25 30 35 cal
(h) (segundo) Clula fotoelctrica (medidas no dispersada luz, f) Grabadora
+ unidades / " '- Spectrophotometer- photometer- Klett densidad ptica (00)
unidades Klett = 1 0,002 = Entrar ... Q 1 m fresca de re . \ Sten , otro conce
es co b conjunto 8 Figura 6.12 Turbiedad mediciones de microbiana
crecimiento. Las mediciones lal de turbidez se realizan en un
espectrofotmetro o fotmetro. los fotoclula mide la luz incidente
dispersada por las clulas en suspensin y da lecturas de densidad ptica o
fotmetro unidades. (Crecimiento tpico bl curva los datos obtenidos en
unidades Klett o densidad ptica (DOL por dos organismos creciendo a tasas
de crecimiento diferentes. Para la prctica, el clculo del tiempo de
generacin 1m de las dos culturas utilizando la frmula norte = 3.3 (log N log n) , donde N y N son dos diferentesLos valores Klett o 00 lecturas
tomadas entre un momento intervalo t. Cual organismo esta creciendo Ms
rpido, A o B? (do) Relacin Entre numero de celular o el peso seco y
turbidez lecturas. Tenga en cuenta que la de uno a una correspondencia
Entre estas relaciones descansos abajo en alto turbiedades. El cultivo
continuo: El Chemostat Nuestro anlisis del crecimiento de la poblacin
hasta el momento ha sido confinado en cultivos discontinuos. Un cultivo
discontinuo es una en volumen fijo ume del medio de cultivo que est
siendo continuamente alterado por las actividades metablicas de
crecimiento los organismos y es por lo tanto, una cerrado sistema. En las
primeras etapas de exponencialcial de crecimiento en cultivos discontinuos,
las condiciones pueden permanecer rel- tivamente constante, pero en
etapas posteriores, cuando el nmero de clulas convertido en cambios
bastante grandes, drsticos en la composicin qumica posicin del medio
de cultivo se produzca. Para muchos estudios que es deseable mantener en
culturas ambientes constantes durante largos perodos. Por ejemplo, si que
se est estudiando un proceso fisiolgico, como el sn- tesis de una enzima
en particular, la disponibilidad de ex exponencialmente clulas en
crecimiento pueden ser muy tiles. Tal sistemas slo son posibles con un
cultivo continuo. A con- 0,8 0,7 0,6 0,5 00 0,4 0,3 0,2 0,1 El nmero de
clulas o peso seco cultura continua es un sistema abierto de volumen
constante dese aade medio fresco que continuamente y pas medio de
cultivo retira continuamente, tanto a con- tasa constante. Una vez que un
sistema de este tipo est en equilibrio, la quimiostato volumen, nmero de
clulas, y volver a la situacin de nutrientes principal constante, y el
sistema se dice que estn en estado estacionario.el chemostat El tipo ms
comn de dispositivo de cultivo continuo es las quimioterapias TAT (Figura

6.138). Los controles chemostat tanto el crecimiento tarifa y la

populationdensity de la culturatura simultneamente. Dos factores son
importantes en tales Control: la tasa de dilucin y la concentracin de una
limitacin de nutriente, tal como una fuente de carbono o nitrgeno.En un
cultivo discontinuo, la concentracin de nutrientes puede afectar tanto la
tasa de crecimiento y el rendimiento de crecimiento de un cultivo
pgina 15
s; Q) 4 01 . J5 : J 0 2 0 R- 02 los RVE g) de ime -a- e para ent estafa- ,el recomi. hielo es troles e cultura tal 11iting afectar lture Freshmedium__
desde el depsito Gaseoso espacio de cabeza / "" ' Tasa de flujo regulador El
aire estril o _ otro gas - Cultura buque Cultura Rebosar El efluente que
contiene cells_6 microbiana 8 Figura 6.13 Esquemtica de un dispositivo de
cultivo continuo (Chem STAT). En un dispositivo de este tipo, la densidad
de poblacin es controlada por elconcentracin de nutriente limitante en el
depsito, y la tasa de crecimiento est controlada por la velocidad de flujo
(vase la figura 6.151. Ambos parmetros pueden ser fijado por el
experimentador. (Figura 6.148). A concentraciones muy bajas de un nudado trient, la tasa de crecimiento se reduce, probablemente porque el
nutriente no puede ser transportado en la clula lo suficientemente rpido
para satisfacer la demanda metablica. En nu- moderado o ms alto Trient
niveles, el crecimiento de la tasa , mientras que no puede verse afectadala
clula rendimiento sigue aumentando (Figura 6.14). en con-contraste a un
cultivo discontinuo, en una, la tasa de crecimiento y quimiostato
rendimiento del crecimiento puede ser controlado de forma independiente el
uno del otro, el anterior mediante el ajuste de la tasa de dilucin y el
segundo yo y la tasa t- Solo el rendimiento afectada -YO rendimiento
afectada 1 T o 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 concentracin de nutrientes (mg / ml) 8
Figura 6.14 El efecto de los nutrientes en el crecimiento. Relacinentre la
concentracin de nutrientes, la tasa de crecimiento (curva verde), y el
crecimiento Curva de rendimiento Ired) en un cultivo discontinuo (systeml
cerrado. A bajas de nutrientes concentraciones de tanto la tasa de
crecimiento y el rendimiento de crecimiento se ven afectados. 6.9 +
Continua Cultura: La Chemostat + 149(-Estable Estado - l concentracin
bacteriana do o C 4 Q) u do o u 3 (ij . t) mi 2 Q) ro "0 > - '1J (\ J Q) U5 6 o o o
0.75 1.0 -, IWA! 1out, 0.25 0,5 El grado de dilucin (h-1) 8 Figura 6.15
Estado estable relaciones en el quimiostato. La tasa de dilucin se
determina a partir de la velocidad de flujo y el volumen de el recipiente de
cultivo. Por lo tanto, con un recipiente de 1000 ml y una velocidad de flujo a
travs del recipiente de 500 Milh, la tasa de dilucin sera de 0,5 h-1. Tenga
en cuenta que a altas tasas de dilucin, el crecimiento no puede equilibrar
la dilucin, y la poblacin hace desaparecer. Tenga en cuenta tambin que,
aunque la poblacin densidad permanece constante durante el estado
estacionario, la tasa de crecimiento Idoubling timel puede variar en un
amplio intervalo. Por lo tanto, el experimentador puede obtener poblaciones
con muy diversas tasas de crecimiento sin que afecta a la densidad de
poblacin. variando la concentracin de un nutriente presente en una

limitacin de cantidad. . Los efectos de la variacin de velocidad de dilucin

y concentracin del nutriente que limita el crecimiento se muestran en la
Figura 6.158. Como se ve, hay lmites bastante amplios sobre las que la
dilucin la tasa controla la tasa de crecimiento, aunque a la vez muy baja y
muy alta tasas de dilucin del estado de equilibrio se rompe. A altas
velocidades
de
dilucin,
el
organismo
no
puede
crecer
rpidamentesuficiente para mantenerse al da con su dilucin, y la cultura
es lavado de la quimiostato. Bycontrast, a muy bajo dilucin tasas de, una
gran fraccin de las clulas pueden morir de inanicin cin, porque no se
est aadiendo rpidamente el nutriente limitante suficiente para permitir
el mantenimiento del metabolismo celular. los celda densidad (clulas / ml)
en el quimiostato escontrolado por el nivel del nutriente limitante, tal como
la clula rendimiento fue controlada en un cultivo discontinuo (Figura 6.14).
Si la concentracin de este nutriente en el Medi entrante um se eleva, con la
tasa de dilucin que permanece constante, la densidad celular se
incrementar. Por lo tanto, el ajuste por dilucin ritmo y nivel de nutrientes,
el experimentador puede obtener di- lad (por ejemplo, 105cells / ml),
moderado (por ejemplo, 107cells / ml), o denso (por ejemplo, 109cells / ml)
cin ciones que crecen a tasas de crecimiento lento, moderado o rpido.
EKerimental Usos del Chemostat Como se ha mencionado anteriormente, el
quimiostato permite al riencia imenter para controlar la tasa de crecimiento
y la densidad de poblacin independientemente el uno del otro. Como se
muestra en la figura 6.15,incluso por encima de los rangos bastante
amplios, diferentes tasas de crecimiento puede lograrse simplemente
variando la tasa de dilucin. Similar,
pgina 16
150 . Captulo 6 . Microbiano Crecimiento la densidad de poblacin se puede
ajustar mediante la variacin de la con- centracin de un solo nutriente (la
nutricin que limita el crecimiento ENT) en el contenedor de medios.
Independiente control de estos dos parmetros de crecimiento cruciales es
imposible con cultivos discontinuos debido a que el cultivo discontinuo es un
ma cerrada tem donde las condiciones de crecimiento estn cambiando
constantemente con tiempo. Una ventaja prctica para el quimiostato es
que un emergente ulacin puede mantenerse en el crecimiento exponencial
fase durante largos perodos, por das e incluso semanas. Ser- hacer que las
clulas en fase exponencial son por lo general ms deseable para los
experimentos fisiolgicos, el experimentador utilizando el quimiostato
puede tener este tipo de clulas disponibles en cualquier momento. Por lo
tanto, los experimentos se pueden planificar en detalle y luego per- formado
cada vez ms conveniente. Por otra parte, la repeticin de experimentos se
pueden hacer con el conocimiento de que la poblacin de clulas ser tan
cerca de ser el mismo cada tiempo como sea posible. Para algunas
aplicaciones, tales como el estudio de una enzima en particular, actividad
de las enzimas puede ser bastante menor en clulas en fase estacionaria
que en exponencial clulas de fase y cultivos as CHEMOS tat-crecido son
ideales. El chemostat tambin se puede utilizar en ecologa microbiana. Por

ejemplo, debido a que el quimiostato puede imitar fcilmente la bajas

concentraciones de sustrato que a menudo prevalecen en la naturaleza, es
posible estudiar las poblaciones de bacterias mezcladas en una Chemostat y
hacer preguntas acerca de la competitividad de las diferentes organismos
en determinadas concentraciones de nutrientes. El uso de mtodos
culturales, as como las poderosas herramientas de ecologa molecular, tal
como manchas y filogenticos gen seguimiento (Captulo 18), los cambios
en la composicin microbiana comunidad puede monitorizarse como una
funcin de con- chemostat condiciones. Tales experimentos revelan a
menudo interacciones entre componentes individuales de la poblacin que
no son observados ante- partir de los estudios de crecimiento en cultivo
discontinuo. Quimiostatos tambin se han utilizado para el enriquecimiento
y Aislamiento de bacterias (Secciones 1.7, 18.1 y 18.2 de discusin de
enriquecimiento y aislamiento de bacterias). De un inculo mixto, se puede
seleccionar una poblacin estable bajo las condiciones de nutrientes y la
tasa de dilucin elegidos y luego poco a poco aumentar la tasa de dilucin
hasta que una sola organismo permanece. De esta manera, los
microbilogos recientemente una bacteria aislada con una duplicacin de 6
minutos de tiempo de la bacteria de ms rpido crecimiento conocido. _ 6.9
concepto Llegada Continuo dispositivos de cultivo (quimiostatos) son un
medio de ANTENIMIENTO poblaciones de clulas en crecimiento exponencial
para larga perodos. En un quimiostato, la velocidad a la que el cultivo es
diluyendo ed regula la tasa de crecimiento y el tamao de la poblacin est
gobiernos pendientes regidas por la concentracin de la que limita el
crecimiento nutritivo entra en el recipiente. . Cmo hacer un
microorganismsin chemos tat difieren de mi-croorganismos en un cultivo
discontinuo? . Qu ocurre en un tat quimioterapias si la tasa de dilucin es
superior la tasa de crecimiento mximo del organismo? . Hacer cultivos
puros tienen que ser utilizados en un quimiostato? II IV AMBIENTAL EFECTOS
EN MICROBIANO CRECIMIENTO: TEMPERATURA Hasta ahora hemos descrito
el crecimiento de microorganismos ismos en condiciones ideales de
laboratorio. Sin embargo, la accin actividades de los microorganismos se
ven afectados en gran medida por el condiciones fsicas de sus entornos y
qumicas. Comprensin ambiental ayuda a explicar las influencias la
distribucin de los microorganismos en la naturaleza y marcas permitir idear
mtodos para controlar o potenciadores ing actividades microbianas.
muchos ambiental factores pueden ser considerados. Sin embargo, cuatro
factores clave que juegan un papel importante en el control de el
crecimiento de todos los microorganismos: temperatura, pH, agua
disponibilidad, y oxgeno. Algunos otros factores potencialmente
puedeafectar el crecimiento de microorganismos, tales como la presin y
radiacin. Estos factor ambiental ms especializado res sern consideradas
ms adelante en este libro cuando ES- contrarrestar los hbitats
microbianos en el que juegan un papel importante. Efecto de la temperatura
sobre el crecimiento La temperatura es uno de la mayora, si no la mayora,
importantefactor ambiental que afecta el crecimiento y la supervivencia de
mi- croorganismos. Al demasiado fro o demasiado caliente una

temperatura, microorganismos no sern capaces de crecer. Pero la minimum temperaturas mximas y varan mucho entre las diferentes
microorganismos, por lo general reflejan la temperatura gama tura y la
temperatura media de sus hbitats. Las temperaturas cardinales La
temperatura puede afectar los organismos vivos en cualquiera de dos
maneras opuestas. A medida que la temperatura se eleva, qumica
yreacciones enzimticas en la clula proceden en ms rpida tarifas, y el
crecimiento se vuelve ms rpido. Sin embargo, por encima de un certemperatura
Tain,
protenas
particulares
puede
ser
irreversible
desnaturalizado. De este modo, como se aumenta la temperatura dentro de
de un rango determinado, el crecimiento y el aumento de la funcin
metablica hasta un punto en el que las reacciones de desnaturalizacin
establecen en. Por encima de este punto, las funciones celulares caen
bruscamente a cero. Por cada organismo hay as un mnimo raturatura por
debajo del cual el crecimiento ya no se produce, una ptima temperatura en
la que crecimiento es ms rpido, y una mxima temperatura superior a la
que el crecimiento no es posi-ble (Figura 6.168). La temperatura ptima es
siempre ms cerca del mximo que el mnimo. Estas tres temperaturas,
llamado el cardenal temperaturas, son caracterstica de cada organismo
pero no son completamente entidades fijas, ya que pueden ser modificados
ligeramente por otra factores del entorno, en particular, por parte de la
composicin la del medio de crecimiento. Las temperaturas cardinales de
diferentes microorganismos ismos diferir ampliamente -algunos organismos
tienen temperatura Optima tan bajo como 4 C y algunos ms alta que lOO
e. los rango de temperatura a lo largo de la que el crecimiento se produce
por 8 Fi Topo Atures , Variot freezi Ganis] la ty T ms sen ti, troUi] son n la C
apuntalar tura mem 8 F DIF golondrina de mar
pgina 17
Alabama RE enzimtica reacciones que ocurre en el perodo mximo posible
tasa enzimtica reacciones que ocurre en cada rpidas tasas rgan- que aCy la entos. llanura akes Congreso Nacional Africano- Mximo "" Temperatura
lered. Iling agua cialmente ssure Alabama factor , E en- roles. Membrana
gelificante; transporte procesos tan lento que el crecimiento no puede
ocurrir desnaturalizacin de las protenas; colapso de la citoplasmtica
membrana; trmico lisis . Figura 6.16 Efecto de la temperatura en el
crecimiento y la tasa consecuencias moleculares de la clula. La tem- tres
cardenalaturesvary por el organismo. rtante fmi- tura, tiva ong peradiversos organismos es an ms amplio que esto, desde abajo la
congelacin hasta ms de ebullicin. Sin embargo, hay una sola o- orgapuede crecer en este intervalo de temperatura de conjunto, y El rango tpico
para cualquier organismo dado es de 30-40 grados. La mxima temperatura
de crecimientode un organismo muy probablemente refleja la
desnaturalizacin de uno o ms es- protenas esen- en la clula. Sin
embargo, los factores de con- curricn un organismo de mnimo de
temperatura de crecimientono son tan claros. Como se mencion
anteriormente (Seccin 4.5), la membrana citoplasmtica debe estar en un

estado fluido para funcionamiento adecuado. temperatura mnima de un

organismo tura puede ser el resultado de la rigidez de su citoplasma la
membrana de tal manera que ya no funciona correctamente en ,. FTWO y
APID cer- blemente entro facilitar Bove termfilo Ejemplo: Bacilo
stearothermophilus Ejemplo: Ejemplo: Celer Thermococcus fumarii
Pyrolobus por- mam da osificacin ays hree 2 .t = mi (9 Ejemplo:
Polaromonas vacuolata son tely Ther osi- o 10 20 30 40 50 Temperatura (0C)
un- re l por 6.10 + Efecto de la temperatura sobre el crecimiento + 151o el
transporte de nutrientes en el desarrollo un motivo de protones fuerza. Esta
explicacin se apoya en experimentos in que la temperatura mnima para
que un organismo pueda ser alterada en cierta medida por los ajustes en
cytoplas- composicin lipdica de la membrana del micrfono (vase la
Seccin 6.11). En A este respecto, las temperaturas mximas y mnimas
secundario crecimiento de un organismo son ms altos y inferior,
respectivamente, cuando se ensaya en el complejo en lugar de medios
definidos. Clases de temperatura de Organismos Aunque hay un continuo de
organismos, de las con muy baja temperatura optima para las personas con
alto ptimos de temperatura, es posible distinguir ampliamente cuatro
grupos de microorganismos en relacin con su temperatura tempe- Optima:
psicrfilos, con baja temperatura Optima, mesfilos, con la temperatura
ptima de gama media ma, termfilos, con ptimos de temperatura alta, y
hyperthermophiles, con muy alta temperatura ptima ma (Figura 6.178).
Mesfilos se encuentran en los animales de sangre caliente-y en ambientes
terrestres y acuticos en templado y latitudes tropicales. Psicrfilos y
termfilos son encontrado en ambientes inusualmente fras y calientes
inusualmente, respectivamente. hyperthermophiles se encuentran en muy
hbitats calientes, tales como aguas termales, giseres y aguas profundas
hi- respiraderos drothermal (vanse las Secciones 6.12, 13.8 y 19.8). En
Escherichia coli, una mesfilos tpico, una detalladaestudio de crecimiento
como una funcin de la temperatura tiene precisa- Ly defini sus
temperaturas cardinales. La temperatura ptima tura de E. coli en un medio
complejo (Seccin5.2) es 39 C, el mximo es de 48 C, y la mnima de 8
e. Por lo tanto, la temperatura de gama para E. coli es de 40 grados, cerca
el extremo superior de las clulas procariotas promedio. 60 70 80 90 100
110 120 . Figura 6.17 Relacin de la temperatura crecer tarifas de un tpico
psychrophile, un tpico mesfilos, un tpico termfilo, y dos diferentes
hyperthermophiles. La temperatura ptima de los organismos de ejemplo se
muestran en el grfico. Muestran un crecimiento hyperthermophilesoptima
temperatura por encima de 80 C.
pgina 18
152 . Captulo 6 . Microbiano Crecimiento 8 6.10 concepto Llegada La
temperatura es uno de los principales ambiental factor de control mi- el
crecimiento microbianas. Las temperaturas cardinales describen el mini- Las
temperaturas de la mam, ptimos y mximos en los que cada uno
organismo crece. Los microorganismos se pueden agrupar por el rangos de
temperatura que requieren. . Cules son las temperaturas cardinales para

Escherichia coli? Paralo que la clase de temperatura pertenece? . Cmo

funciona un hyperthermophile differfrom unapsycJzrophile? . Escherichia coli
puede crecer a una temperatura mayor en un medio complejo que en un
medio definido. Por qu? El crecimiento microbiano a bajas temperaturas
Debido a que los seres humanos viven y trabajan en la superficie de la
Tierra donde las temperaturas son generalmente moderada, es natural
considerar ambientes muy calientes o muy fras como "ex treme. "Y ellos
son extremas para la vida humana BE- hacer que los seres humanos
moriran rpidamente si se sumerge en ebullicin o congelacin del agua.
Sin embargo, el hbitat natural de muchos mi- croorganismos pueden ser
muy caliente o muy fros, y los organismos que viven all, a que se refiere
como EXT remophiles (Seccin 2.4 y la Tabla 2.1), han evolucionado hasta
crecer de manera ptima bajo estas condiciones. Consideramos primero onismos que crecen a temperaturas fras. yo yo (un) (segundo) ambientes
fros Gran parte de la superficie de la Tierra experimenta bajas
temperaturas. Los ocanos, que constituyen ms de la mitad de la
superficie de la Tierra, tiene una temperatura promedio de SOC y las
profundidades de los ocanos abiertos tienen una temperatura constante de
1-3 e. vastas reas de tierra del rtico y la Antrtida son nente
nentemente congelado o descongelado son slo unas pocas semanas en
verano (Figura 6.188). Estos ambientes fros no son estril, y algunos
microorganismos pueden encontrarse vivo y creciendo a cualquier
temperatura mnima a la cual el agua lquida todava existe. Incluso en
muchos materiales congelados no son pequeas bolsas de agua lquida
presente donde los microorganismos puede metabolizar y crecer. Dentro de
glaciares, por ejemplo, existe una red de pequeos canales de agua lquida
en el cual procariotas prosperan y se reproducen. Al considerar ambientes
fros, es importante distinguir entre los entornos que son constantemente
fro y aquellos que estn fros solamente en invierno. El ltimo,
caracterstica de continental climas templados, mayo tienen temperaturas
de verano de hasta 40 C y en invierno Las temperaturas de -20 C o
menos. Un lago templado, para ejemplo, puede tener un perodo de
cobertura de hielo en el invierno, pero el tiempo que el agua est a O C es
relativamente breve. Tales ambientes altamente variables son menos
favorables para organismos adaptados al fro que son la constante fro
biente am- encuentran en las regiones polares, a gran altura, y en las
profundidades de los ocanos. Por ejemplo, el agua dulce lagos en los valles
secos de la Antrtida contienen una permanente de hielo w 0] C.A do s 1 < t
F (do) 8 Figura 6.18 Hbitats microbianos Antrtico. (Col Un ncleo de perpermanentemente congelado el agua de mar desde el estrecho de
McMurdo. Antrtida. El ncleo es de unos 8 cm de ancho. Tenga en cuenta la
coloracin densa debido a la micro pigmentacin organismos. IBL
micrografa de contraste de fase de nismos fototrfico nismos del ncleo
mostrado en la (al. La mayora de los organismos son o bien diatomeas o
algas verdes (ambos microorganismos eucariticos, Seccin 14.131. (Cl de
fotos de la superficie del lago Bonney, Valles Secos de McMurdo, Antrtida.
Al igual que muchos otros lagos antrticos, lago Bonney, que es a unos 40

metros de profundidad, que queda permanentemente congelado y tiene un

hielo cubierta de unos 5 metros. La columna de agua del lago Bonney
permanece cerca de O C y contiene ambas zonas xicas y anxicas
(Seccin 19.5 y la figura 19.91, por lo que ambos microorganismos aerobios
y anaerobios son presente. Sin embargo, los organismos eucariotas no
superiores habitan Valle Seco lagos, lo que los ecosistemas microbianos
nicos.
pgina 19
turas. Tu cara, mls de 1-3 C. erma- EKS en No es ey agua pequea ismos
mple, els en aNT para tante ltimo, mayo enterrar (E, para enterrar, breve.
LE para r ambiente y ater t hielo - mi - - s ). , portada de varios metros de
espesor (Figura 6.18c). los columna de agua por debajo del hielo en estos
lagos se mantiene a O C orcolder el ao y es por lo tanto un hbitat ideal
para fro organismos adaptados. Psyhrophilic y Psych! Otolerant Los
microorganismos Asnoted anterior, los organismos con baja temperatura
ptima psicrfilos arecalled. A psychrophile se puede definir como
anorganism con una ptima temperatura de crecimiento de 15 C o inferior,
una temperatura de crecimiento mxima por debajo de 20 C, y
unatemperatura de crecimiento mnimo en O C o inferior. organismos que
crezca a O C, pero tienen grados ptimos de 20-40 C se denominan
psicrotolerantes. Psicrfilos se encuentran en ambientes que son
constantemente fro, como en las regiones polares o en marina sedimentos
de las regiones polares, y pueden ser rpidamente muertos por
calentamiento a temperatura ambiente. Por esta razn, su estudio de
laboratorio que requiere un gran cuidado para aseguran que nunca se
calientan durante el muestreo, trans- puerto al laboratorio, el aislamiento, u
otras manipulaciones. Algunos de los psicrfilos mejor estudiados han sido
algas que crecen en masas densas dentro y bajo el hielo inpolar regiones u
otros campos de hielo permanentes (Figura 6.18). psicroflicas algas
tambin se ven a menudo en las superficies de campos de nieve y glaciares
en tales densidades que impartir una coloracin roja o verde distintiva a la
superficie (Figura 6.19ae). La alga nieve ms comn es Chlamydomonasnivalis; sus brillantes esporas rojos son responsables deel color rojo
(Figura 6.19b). Esta alga verde crece dentro dela nieve como un verde
pigmentado clula vegetativa y luego esporulados. A medida que la nieve
se disipa por fusin, erosin, y la vaporizacin, las esporas se concentran en
el superficie. algas de nieve se ve con ms frecuencia en fusin neveros
permanentes en pleno verano a finales de verano y son especialmente
comunes en zonas soleadas y secas. Adems de nieve algas, varias
quimioorganotrficas psychrophilic bacterias son conocidos, muchos de ellos
de la Antrtida (Figura 6.18). Algunos de ellos, particularmente los aislados
de hielo marino (congelado el agua de mar que se forma por temporadas en
las regiones polares), espectculo la temperatura mxima de crecimiento
ms bajo de todos conocida microorganismos. psicrotolerantes
microorganismos son mucho ms ampliamente distribuida que psicrfilos y
puede ser isolat- ed de los suelos y el agua en los climas templados, as

como de la carne, la leche y otros productos lcteos, sidra, vegetacin bles,

y la fruta se almacena a la refrigeracin temperaturas (40C). Como se ha
sealado, t microorganismos psychrotoleran crecen mejor a una
temperatura entre 20 y 40 C. Ser- causar ambientes templados en calor
en verano, que no pueden soportar los psicrfilos sensibles al calor BEhacer que el calentamiento proporciona una seleccin en contra de ellos.
Eso hay que destacar que aunque psicrotolerantes microorganismos crecen
en O C, la mayora no crece muy bien a esta temperatura, y a menudo se
debe esperar gravedad AL semanas antes de un crecimiento visible se ve en
los medios de cultivo. Varios gneros de bacterias, hongos, algas y
protozoostener miembros que son psicrotolerantes. 6.11 + Microbiana
Crecimiento A bajas temperaturas + 153"'UN. ... '- : #. .T ".. ..... "...
(segundo) e Figura 6.19 algas de nieve. la) banco de nieve en la Sierra
Nevada, California, con coloracin roja causada por la presencia de algas de
nieve leukaryotic clulas, c: nieve JCI :: ISection14.131.Pink como esto es
comn en los bancos de nieve de verano a gran altura en todo el mundo.
(segundo) microfotografa de color rojo-pigmentada esporas del nieve alga
Chlamydomonas nivalis. Las esporas germinan para producir verde
mvilesclulas de algas. especies de algas de nieve relacionados contienen
diferentes carotenoides pigmentos (c: JCI :: ISection17.3). y por lo tanto, los
campos de algas de nieve pueden ser tambin verde, naranja, marrn o
prpura en color.
pgina 20
154 . Captulo 6 . Microbiano Crecimiento Las adaptaciones moleculares a
Psychrophily Psicrfilos producen enzimas que funcionan de manera ptima
en el fro y que a menudo son desnaturalizados o de otra manera in- incluso
activado a temperaturas muy moderadas. La mo- lecular base de esto no se
entiende completamente, pero es sabido que las enzimas activas fras
tienen mayores cantidades de una hlice y cantidades menores de, Blmina secundaria estructura (Seccin 3.7 y Figura 3.16) que las enzimas
que son inactivos en el fro. Debido a que el B-hoja tiende a formar una
estructura ms rgida, el contenido de la mayor a-hlice enzimas de froactivos permite a estas protenas mayor flexibilidad en el fro. enzimas
activas en fro tambin tienden a tener mayor polar y el contenido de
aminocidos hidrfobos menores que su homlogos mesfilas y termfilas.
Esto tambin AS- consiste en mantener la protena flexible (y por lo tanto
enzimticamente camente activa) a temperaturas fras. Por otra parte,
activo en fro protenas tienden a tener niveles disminuidos de enlaces
dbiles (Seccin 3.1) y la disminucin de las interacciones Entre sus
dominios en comparacin con protenas de organismos que crecen mejor a
temperaturas ms altas. De nuevo, estos modificacin ciones
probablemente favorecen la flexibilidad de protenas. Otra caracterstica de
psicrfilos es que en comparacin con mesfilos, los procesos de transporte
(Seccin 4.7) ocurrir de manera ptima a baja temperatura, una indicacin
de que la cito- Las membranas plasmticas de psicrfilos se construyen en
de tal manera que las bajas temperaturas no inhiben bro branas funciones.

membranas citoplasmticas de psych- rophiles tienden a tener un mayor

contenido de insaturados grasoscidos (Seccin 5,17). Esto ayuda a
mantener un semiflu- Identificacin del estado de la membrana a bajas
temperaturas (bro branas compuesto de cidos grasos saturados
predominantemente convertido cerosa y no funcionales a bajas
temperaturas). Los lpidos de algunas bacterias contienen tambin
psicroflicas poliinsaturados cidos grasos e hidrocarburos de cadena
largacon mltiples dobles enlaces. Por ejemplo, un hidrocarburo con nueve
dobles enlaces (C31: 9) se ha identificado a partir de los lpidos de algunas
bacterias antrticas, y la bacteria Psychroflexus se ha demostrado que
contienen cidos grasos concuatro y cinco dobles enlaces. Estos cidos
grasos se mantienen ms fluido a bajas temperaturas que hacer saturado o
mo- nounsaturated cidos grasos. Congelacin A pesar de la capacidad de
algunos organismos para crecer a baja temperaturas, hay un lmite inferior
por debajo del cual repro- la produccin es imposible. El agua pura se
congela a O Cand mar- agua a -2.5 C, pero la congelacin no es un
proceso continuo. bolsillos microscpicos de agua continan existiendo en
estos y temperaturas an mucho ms bajo. Mientras lquido el agua est
disponible, el crecimiento microbiano es posible. Aunque congelacin impide
el crecimiento microbiano, lo hace no necesariamente causar la muerte
microbiana. adems, el medio en el que se suspenden las clulas
considerablemente afecta a la sensibilidad a la congelacin. lquidos
miscibles en agua tales como glicerol y dimetilsulfxido (DMSO), cuando se
aade a aproximadamente 10% (concentracin final) a la suspensin medio,
penetrar en las clulas y protegerlas por reduccin ing la gravedad de los
efectos de deshidratacin y la prevencin de hielo formacin de cristales.
De hecho, la adicin de tales agentes, llamados crioprotectores, es una
forma comn de preservar mi-culturas microbianas a temperaturas muy
bajas (por lo general a -70 a -196 C). clulas congeladas preparadas
adecuadamente pueden permanecer VI- poder por largos perodos (dcadas
o ms). _ 6.11 concepto Llegada Los organismos con temperatura fra
Optima se llaman psi- chrophiles, y los representantes ms extremoshabitar
persona ambientes fros permanentemente. psicrfilos han evolucionado
biomolculas que funcionan mejor a temperaturas fras, pero que puede ser
inusualmente sensibles a las temperaturas clidas. . Cmo psicrotolerantes
organismos difieren de psychro- pHILIC organismos? . Qu adaptaciones
molecular a la membrana citoplasmtica se ven en psicrfilos, y por qu son
necesarias? El crecimiento microbiano a altas temperaturas La vida
microbiana florece en alta temperatura reinar- mentos, hasta e incluyendo
el agua hirviendo. Por encima de aproximadamente 65 C, slo se
procariotas formas de vida se encuentran, pero incluso en este caso,una
enorme diversidad tanto de bacterias y arqueas existe. Nosotros considerar
algunos de estos ambientes calurosos y su mi- crobiallife aqu. ambientes
trmicos Recordemos que los organismos temperatura ptima cuyo
crecimiento mam es encima 45 C se llama thermophiIes, y aquellos cuyo
ptimo es por encima de 80 C se denominan hypertherm-ophiles (Figura
6.17). Temperaturas tan altas como estos son encontrado en la naturaleza

slo en ciertas reas. Por ejemplo, los suelos sujetos a plena luz del sol se
calienta a menudo a temperaturas por encima de 50 C al medioda, y
algunos pueden llegar a ser sqils se calent a 70 C, incluso, aunque unos
pocos centmetros debajo la superficie de la temperatura es mucho menor.
La fermentacin materiales tales como las pilas de compost y ensilado
puede alcanzar temperaturas de 70 C. Sin embargo, la ms extensa y
extrema alta temperatura ambientes que se encuentra en nacional tura se
encuentran en asociacin con fenmenos volcnicos. Estas incluir, en
particular, resortes, calientes. Muchas aguas termales tienen temperaturas
en o cerca de ebullicin ING, y orificios de vapor (fumarolas) pueden llegar a
150-500 C. Las fuentes hidrotermales en el fondo del ocano han temperaturas de 350 C o superior (Seccin 19.8). Caliente muelles se
producen en todo el mundo, pero son especialmente concentrada en el
oeste de Estados Unidos, Nueva Zelanda, Islandia, Japn, Italia, Indonesia,
Amrica Central, y cen- frica tral. mayor concentracin nica del mundo de
calor manantiales se encuentra en el Parque Nacional de Yellowstone,
Wyoming (EE.UU.). Aunque algunas fuentes termales varan en temperatura,
OTHERS ERS son muy constante, no variando ms de I-2 C a lo largo
muchos aos. Adems, los diferentes muelles tienen diferente che] Tain cfte
org. Mal (92- SPR: (Fi llamada IED retr TIOR 6.2 ( tha SPR Congreso Nacional
Africano ed. Tair
pgina 21
educ- hielo ng entos, g mi-t -70 en vi- psi- por- lved ese Rane ? Ures hierrocombate aqu, . Nosotros r mi- pti- ose metro- son leos res yo er En g ch re
n / A- ESE hervir- Jefe. tura Caliente cialmente y, cen- f caliente SA). OTHERS
:encima rentes chemicalcompositions y los valores de pH, pero en general
con- tainsufficient niveles de nutrientes a las poblaciones de apoyo,
oftenvery poblaciones grandes, de quimio hipertermoflico organotrophsand
quimiolitotrofos. erthermophiles en Hot Springs muelles Manyhot estn en el
punto de ebullicin para la altitud (92-93 Cat Yellowstone, 99-100 C en
lugares donde el muelles estn cerca del nivel del mar). En hirviendo aguas
termales (Figure6.208), una variedad de hyperthermophiles son tpicamente
callypresent. El crecimiento de tales organismos puede ser BORNE iedby
sumergiendo portaobjetos en la primavera y el recuperarlos despus de
unos pocos das. examen microscpico tionof los portaobjetos revela
colonias de procariotas (Figura 6.20b) que se han desarrollado a partir de
clulas bacterianas individuales thatattached a y creci en la superficie del
vidrio. Estudios ecolgicos de organismos que viven en ebullicin
manantiales han demostrado que las tasas de crecimiento son bastante
rpida, y los tiempos de tan corto como 1 h duplicar haber sido grabacin
ed.Cultures de muchos de estos procariotas se han observado contenida, y
una variedad de morfolgica y fisiolgica (segundo) . Figura 6.20
Crecimiento de hyperthermophiles en agua hirviendo. lalBoulder primavera,
una pequea fuente de ebullicin en el Parque Nacional de Yellowstone. Esta
primavera se sobrecalienta, tiene una temperatura de I-2 C por encima de
la punto de ebullicin. Los depsitos minerales de todo el muelle se

componen principalmente de silicaand de azufre. IBL Microfotografa de un

microcolonias de procariotas thatdeveloped en un portaobjetos de
microscopio sumergidos en un muelle de punto de ebullicin tales asthat se
muestra en la). 6.12 + + MicrobialGrowthatHighTemperatures l Existen tipos
(Captulo 13). Los estudios filogenticos utilizando secuenciacin de ARN
ribosomal (Secciones 2,3, 11,5, y 11.6) han demostrado una gran evolutiva
la diversidad entre estos hyperthermophiles. Las especies de ambos Las
bacterias y Arqueas estn presentes. algunos hipertermoflicoarqueas
muestran un crecimiento de la temperatura optima MayorQue lOO C y
deben ser cultivadas en recipientes a presin en el laboratorio con el fin de
alcanzar temperaturas por encima del punto de ebullicin. termfilos
Muchos termfilos (Optima 45-80 C) tambin estn presentes en
manantiales de agua caliente, as como otros ambientes trmicos. en
caliente muelles, como el agua hirviendo se desborda de los bordes de la
primavera y fluye lejos de la fuente, se enfra gradualmente, el
establecimiento un gradiente trmico. A lo largo de este gradiente, varios
mi-croorganismos crecen (Figura 6.218), con diferentes especies creciente
en los diferentes intervalos de temperatura. Mediante el estudio la
distribucin de las especies a lo largo de tales gradientes trmicos y
mediante el examen de las aguas termales y otros hbitats trmicos en
diferentes temperaturas en todo el mundo, ha sido posi- ble para determinar
los lmites superiores de temperatura para cada tipo de organismo (Tabla
6.1). A partir de esta informacin nos se puede concluir que (1) los
organismos procariotas en general son capaz de crecer a temperaturas
superiores a aquellas a las cuales eucariotas pueden crecer; (2) el ms
termfila de todos Figura 6.21 El crecimiento de las cianobacterias
termfila en un hot primavera en el Parque Nacional YeUowstone. patrn
caracterstico en forma de Vformada por las cianobacterias a la temperatura
superior para la vida fottrofas, 70-74 C, en el gradiente trmico formado
a partir de una fuente termal hirviendo. los patrn se desarrolla debido a
que el agua se enfra ms rpidamente en los bordes que en el centro del
canal. El resorte fluye desde la parte posterior de la imaginar hacia el primer
plano. El color verde claro es de un mximo temperatura cepa de la
cianobacteria Synechococcus. como el agua fluye hacia abajo del gradiente,
la densidad de las clulas aumenta, menos termfilo cepas entran, y el color
se vuelve ms verde intenso.
pgina 22
1 . Captulo 6 . Crecimiento microbiano T bl 6 1 Actualmente conocido
lmites de temperatura superiores un correo. para el crecimiento de los
organismos vivos Grupo Superior temperatura lmites (JEFE) animales Los
peces y otros vertebrados acuticos insectos Ostrcodos (crustceos)
plantas Plantas vasculares musgos microorganismos eucariticos protozoos
Algas hongos Los procariotas Las bacterias Las cianobacterias fototrofas
anoxignicas quimioorganotrficas / chemolithotrophic Las bacterias
arqueas quimioorganotrficas / chemolithotrophic arqueas 38 45-50 49-50
45 50 56 55-60 60-62 70-74 70-73 95 113 " un El lmite superior de

temperatura para el crecimiento del organismo PyrolobllsIll / llarii. Especies

de relacionados Pyrodictilllll pueden ser capaces de crecer hasta un mximo
de 121 C.procariotas son ciertas especies de arqueas; y (3) no organismos
fototrficas son capaces de crecer en mayor tem- turas que pueden
fototrofos formas. procariotas termfilas tambin se han encontrado en el
ar- ambientes trmicos ficiales. El calentador de agua caliente domstica o
industrial, tiene una temperatura de 55-80 C y por lo tanto es un hbitat
favorable para el crecimiento de prokary- termfila otas. Organismos que se
asemeja Themzus aquaticus, una comntermfilo de aguas termales
(Seccin 12,34), han sido iso- RELAClONADAS de los calentadores de agua
caliente. plantas de energa elctrica, la industria las descargas de aguas
termales de prueba, y otra artificial trmica fuentes tambin proporcionan
sitios donde pueden crecer los termfilos. Muchos de estos organismos
pueden aislarse fcilmente usando el tcnicas de enriquecimiento
adecuadas. Las adaptaciones moleculares a termfilo . Cmo puede
termfilos y hyperthermophiles prosperar en altas temperaturas? En primer
lugar, sus enzimas y otras protenas son mucho ms estables al calor que se
encuentran los de mesfilos y, de hecho funcionar de manera ptima a altas
temperaturas.
Cmo
se
consigue
la
estabilidad
de
calor?
Sorprendentemente, los estudios de varios enzimas termoestables han
demostrado que a menudo difieren muy poco en la secuencia de
aminocidos de las formas termolbiles de las enzimas que catalizan la
misma reaccin en mesfilos. Parece que una sustitucin de aminocido
crtico en solamente una pocos lugares en la enzima permite que se pliegan
de una manera que es compatible con la estabilidad de calor. estabilidad
trmica de las protenas en hyperthermophiles es tambin mejorado como
resultado de un mayor nmero de enlaces inicos entre las cargas positivas
y negativas de varios aminocidos y debido a la densamente empaquetadas
interiores altamente hidrfobas de las protenas, que naturalmente rally de
resistir que se desarrolla en el citoplasma acuoso. Finalmente, el fosfato de
solutos di-inositol, diglicerol fosfato, y manosilglicerato que se producen en
niveles altos en el citoplasma de ciertas hyperthermophiles puede ayudar
para estabilizar sus protenas contra la degradacin trmica. Adems de las
enzimas y de otros componentes de la celular, las membranas
citoplasmticas de termfilos y hyperthermophiles debe ser estable al calor.
mencionamos anteriormente que tienen psicrfilos lpidos de membrana
ricas en insaturados cidos grasos, con lo que las membranasfluido y
funcional a bajas temperaturas. A la inversa, termfilos tienen tpicamente
lpidos ricos en saturado grasocidos, lo que permite que las membranas se
mantienen estables y funcional a altas temperaturas. cidos grasos
saturados formar un entorno hidrfobo ms fuerte que hacer UN- Los cidos
grasos saturados, lo que ayuda a explicar el miembro de la estabilidad
brana. hyperthermophiles, la mayora de los cuales son Archaea, hacerno
contienen cidos grasos en absoluto en sus membranas, pero in- lugar tiene
hidrocarburos C40 compuesto de repetir unidades del compuesto isopreno
de cinco carbonos (Figura 4.19c) unida por enlace ter de glicerol
fosfato.Adems, la estructura general de estos citoplsmica membranas

forman una monocapa de lpidos (Figura4.19d), y esta estructura es, sin

duda mucho ms estable al calor ble de la bicapa lipdica de especies de
bacterias yEukarya. Hemos discutido los detalles de la nica broarquitectura
brana de hipertermoflico arqueas enSeccin 4.5 y tendr en cuenta otros
aspectos de la estacin de calor bilidad, incluida la de ADN, en
hyperthermophiles en Seccin 13.12. Thermophily y Biotechnolo termfilo y
hipertermoflico microorganismos son interesantes por ms razones
biolgicas bsicas justas. Estos organismos ofrecen algunas ventajas
importantes para la industria procesos de ensayo y biotecnolgicos, muchos
de los cuales discurren ms rpida y eficaz a altas temperaturas. enenzimas de termfilos y hyperthermophiles son ca- Pable de catalizar
reacciones bioqumicas a alta temperatura turas (Seccin 30.9 y la Figura
30.15b) y estntpicamente ms estables que las enzimas de mesfilos,
prolongando as la vida til de las preparaciones de enzimas. Un ejemplo
prctico de una enzima termoestable de gran importancia aplicada es la
ADN polimerasa aislado de la termfilo Thermus aquaticus. Taq polimerasa,
como se conoce a esta enzima, ha sido utilizado para automatizar el pasos
repetitivos en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) tcnica, un
mtodo muy importante para amplify- ing secuencias especficas de ADN
(Seccin 7.9). Varios otros usos de termoestables enzimas y otros terproductos de clulas resistente a la deformacin tambin son conocidos o
estn siendo de- desarrollado para aplicaciones industriales. 1I oq 80 decir
ah sp decir ah Educacin fsica . . . . Tern croc amc ese GRM exis Begi ismo'
mi Aci, un sc UES 7aR, Es un un 11 vin diff, pH Eac POS Mes Mes Congreso
Nacional Africano estafa Les 10 \ '\ ser]
pgina 23
pH Ejemplo Moles por litro de: H + AY : yo Vol "o ;," II '. wat, rn 10-14 10-1
10-13 fluidos gstricos Jugo de limon 10-2 10-12 II) 21 Drenaje de cido
minero Vinagre :do 31 Ruibarbo 10-3 10-11 DO. 0 duraznos "DO 41 Acidsoil
10-4 10-10 '(3 octubre Tomates 5 Queso americano 10-5 10-9 Repollo 10-6
10-8 Chcharos El maz, salmn, camarones .- Neutralidad Agua pura 8Agua de mar 10-8 10-6 9 muy alcalino 10-9 10-5 II) 100 suelo natural lagos
alcalinos 10-10 10-4 :do .9- 111 soluciones de jabn cij Amonaco 10-11 103 12- extremadamente alcalino <i: lagos de sosa 10-12 10-2 131 Lime
(solucin saturada) 10-13 10-1 141 10-14 es es r de es de cked atu- aliado,
comi, vels ayuda . fthe y Ned h en Anes sely, Lic y CIDS Naciones Unidasmetro- hacer en- ng re te. ic re), ejrcito de reserva- re metro- en un- en Sra
ns. NOS- correr en- un- metro- son les, comer ted Plaza burstil
norteamericana, el RY ify- Rai ER- Delaware- _ 6.12 concepto Llegada Los
organismos con temperatura ptima de crecimiento entre 45 y 80 C son
llamados termfilos, mientras que aquellos con mayor optimade 80 C son
llamados hyperthermophiles. Estos organismos in-environp1ents calientes
hbito hasta e incluyendo hirviendo muelles, as como hidrotermal
submarina rejillas de ventilacin que pueden tener temperaturas por encima
de 100 C. Termfilos y hi- perthermophiles producen macromolculas
termoestables. . Cul es el lmite superior de temperatura actual para el

crecimiento de un procariota? Es el organismo que crece en este tem- tura

un miembro de las bacterias o la Archaea? . Cul es la estructura de las
membranas de hipertermia mophilic Archaea, y por qu podra ser esta
estructura uso-ful para el crecimiento a alta temperatura? . Cul es
Taqpolymerase y por qu ha sido de utilidad parabiotecnologa? IIV
AMBIENTAL EFECTOS EN MICROBIANO CRECIMIENTO: pH, oSMOLARIDAD, Y
OXGENO La temperatura tiene un efecto importante en el crecimiento de
mi- croorganismos. Sin embargo, muchos otros factores hacen as; jefe entre
ellos estn el pH, la osmolaridad, y oxgeno. Veremos que al igual que los
organismos mostr optima distinto para temperatura de crecimiento, optima
para estos otros parmetros existiendo as, corriendo de un extremo al otro.
Nosotros comenzar con el pH, la expresin de la acidez en un orga- el
entorno del ISM. El crecimiento microbiano en el pH bajo o alto La acidez o
alcalinidad de una solucin se expresa por su pH en una escala en la que la
neutralidad es pH 7 (Figura 6.228). Val- pH UES menos de 7 se dice que son
cidos, y los superiores a7 son alcalino (o bsica). Es importante recordar
que el pHisa logartmica funcin de unacambio de 1 unidad de pH
representa un lOjold cambio en la concentracin de iones de hidrgeno. As,
vinagre (pH cercano a 2) y amonaco (pH cercano a 11) concentracin de
iones de hidrgeno differin por un mil millones de veces. El crecimiento
microbiano Phand Cada organismo tiene un intervalo de pH dentro del cual
el crecimiento es posible y por lo general tiene un pH ptimo bien definido.
La mayora de los organismos muestran un rango de pH de crecimiento de
2-3 unidades. La mayora de los entornos naturales tienen valores de pH
entre 5 y 9, y los organismos con los ptimos de esta gama son la mayora
comn. Slo unas pocas especies pueden crecer a valores de pH de lessthan
2 o superior a 9. Los organismos que crecen mejor a lowpH son llamados
acidfilos. Los hongos, como grupo, tienden a bemore cido tolerantes que
las bacterias. Muchos hongos crecen opcin 6.13. El crecimiento microbiano
en el pH bajo o alto . 157 8 Ngure 6.22 La escala de pH. Tenga en cuenta
que aunque algunos micro- organismos pueden vivir a muy bajo o muy alto
pH. pH interno de la clula permanece cerca de la neutralidad. timally a un
pH de 5 o inferior, y unos pocos crecer bien a pH Val- ues de tan solo 2.
Varias bacterias tambin son acidfilas. En De hecho, algunos de estos son
obligados acidfilos, incapaz de crecera pH neutro. Obligately bacterias
acidfilas incluyen SeV especies va- de Acidithiobacillus (Seccin12.4) y SeV
gneros erales de Archaea, incluyendo Sulfolobus, Thermoplasma, y
Ferroplasma (Secciones13.5 y 13.9). Un factor crtico que rige es la
estabilidad acidophily de la membrana citoplasmtica. Cuando el pH se
eleva a neutralidad, las membranas citoplasmticas de ACI fuertemente
dophilic bacterias son destruidas y las clulas se lisan. Esta indica que altas
concentraciones de iones de hidrgeno son requerido para la estabilidad de
la membrana. Por ejemplo, la mayor parte acidfilo procariotas conocido,
Picrophilus oshimae, crece de manera ptima a un pH de 0,7. Por encima de
pH 4, las clulas de P. oshi- Mae espontneamenteLyse. P. oshimae habita
extremadamentesuelos cidos trmicos asociados a la actividad volcnica
(Seccin 13.5). Unos extremfilos tienen muy alto pH ptimos para el

crecimiento, a veces tan alto como pH 10; estos son conocido como
alcalfilos. alkaliphilic microorganismos se encuentran tpicamente en
hbitats altamente bsicos como lagos de sosa y suelos con alto contenido
de carbonato. El ms bien estudi alkaliphilic procariotas tienen sido Bacillus
especies, tales como B. jirmlls. Este organismo es alcalfilaspero tiene una
gama excepcionalmente amplia de pH para el crecimiento, a partir de 7,5 a
11. Algunas bacterias extremadamente alcalfilas son tambin halfilas
(amantes de la sal), y la mayora de stos son Archaea
pgina 24
158 . Captulo 6 . Microbiano Crecimiento (CIQ: :) Seccin 13.3). algunos
alcalfilos han encontrado in- industrial utiliza porque producen hidroltica
en- enzimas, tales como proteasas y lipasas, que funcionan bien a pH
alcalino y se utilizan como suplementos para detergentes para el hogar
(Seccin 30.9). Alcalfilos tambin son de inters debido a la bioen- Ergetic
problemas que se exponen a vivir en tan alto pH. por ejem- amplio, puede
una fuerza motriz de protones (Seccin 5.12) ser establecido cuando la
superficie externa de la citoplasmtica membrana es tan alcalina? A partir
de estudios de B. firmus que tienehan demostrado que un Na + gradiente
(en lugar de la habitual protones fuerza motriz) suministra la energa para el
transporte y la motilidad, pero que una fuerza motriz de protones es
tambin esta- cado y es responsable de la conduccin de ATP respiratoria
sntesis. Exactamente cmo se produce esto es una probabilidad interesante
lem en la investigacin Alcalfilo hoy. pH interno de la clula El pH ptimo
para el crecimiento representa el pH de la ex- extracelular medio ambiente
solamente. La intracelular del pH del mostosiendo relativamente cercano a
la neutralidad a fin de evitar de- construccin de macromolculas cido o
lcali-lbiles en el celda. Para la mayora de los microorganismos cuyo pH
ptima mam para el crecimiento es pH entre 6 y 8 (llamada neu- trophiles),
el citoplasma permanece neutral o casi de modo (Figura 6.22). Sin embargo,
en los acidfilos y alcalina liphiles el pH interno puede variar de esto. Por
ejemplo, en la ya mencionada acidfilo P. oshimae, lapH interno se ha
medido a pH 4,6, y en ex- treme alcalfilos un pH intracelular de tan alto
como 9,5 se ha medido. Si estos no son inferiores y superiores lmites de pH
citoplasmtico, respectivamente, deben ser ex- extremadamente cerca de
los lmites, ya macromolecular estabilizacin Ty casi con toda seguridad se
ve comprometida por encima o por debajo de estos valores de pH. Los
tampones En un cultivo discontinuo, el pH puede cambiar durante el
crecimiento como el resultado de reacciones metablicas que consumen o
pro- Duce sustancias cidas o bsicas. As, tampones son cuencia
consiguiente aadi a los medios de cultivos microbianos para mantener el
pH relativamente constante. Sin embargo, un bfer dado obras slo sobre
un rango de pH estrecho. Por lo tanto, diferentes tampones debe ser usada
para buffer a diferentes valores de pH. Para intervalos de pH casi neutro (pH
6-7,5), potasio fosfato (KH2P04) es una excelente memoria intermedia.
Muchos otros tampones para uso en medios de crecimiento microbiano o
para la ensayo de enzimas extradas de las clulas microbianas son

disponible, y el mejor sistema de almacenamiento en bfer para una orgaISM o enzima pueden ser considerablemente diferente de la de otro. Por lo
tanto, la memoria intermedia ptimo para su uso en un particular lar
situacin por lo general se debe determinar empricamente. por el ensayo
de enzimas in vitro, sin embargo, un tampn que funcionabien en un ensayo
para la enzima de un organismo se generalmente funcionan bien para el
ensayo de la misma enzima de otros organismos. _ 6.J3 concepto Llegada La
acidez o alcalinidad de un entorno pueden afectar en gran medida
crecimiento microbiano. Algunos organismos han evolucionado para crecer
mejor a pH bajo o alto, pero la mayora de los organismos crecen mejor BEentre pH 6 y 8. El pH interno de? clula debe mantenerse relacin tivamente
cercano a la neutralidad a pesar de que el pH externo es altamente cido o
bsico. . Cul es el aumento de la concentracin de protones cuando al
pasar de pH 7 a pH 4? . Qu son tampones y por qu son necesarias?
Efectos osmticos sobre el crecimiento microbiano El agua es el disolvente
de la vida. Por lo que se sabe, todos los orga- ismos requieren agua, y la
disponibilidad de agua es un impor- factor de tant que afectan el
crecimiento de microorganismos en naturaleza. La disponibilidad de agua no
slo depende de el agua el contenido de un entorno, es decir, la cantidad de
humedad o secar una hbitat microbiano slido puede ser, pero es tambin
una funcin de la concentracin de solutos tales como sales, azcares, o
otras sustancias que se disuelven en agua. Esto se debe a sustancias
causan disuelto tienen una afinidad por el agua, lo que hace que el agua
asociada con los solutos no disponibilidad capaz de organismos. Actividad
de agua y smosis La disponibilidad de agua se expresa generalmente en
fsica trminos tales como la actividad del agua. La actividad de agua,
abreviado aw, es la relacin de la presin de vapor del aire en librioRIUM
con una sustancia o solucin a la presin de vapor agua de puro. Por lo
tanto, los valores de aw varan entre 0 y 1,y algunos representante los
valores se dan en la Tabla 6.2. actividades de agua en los suelos agrcolas
en general oscilan BE- entre 0,90 y 1. Tabla 6.2 Agua actividad de varias
sustancias Agua actividad (Aw) 1.000 0,995 0,980 0,950 0,900 Material
ejemplo organismsG Caulobacter, Spirillum Estreptococo, Escherichia
Pseudomonas, Vibrio La mayora de bacterias gram-positivas varillas Gram
positivas cocos tales como Estafilococo Saccharomyces rouxii (levadura)
Saccharomyces bailii, Penicillium (hongo) Halobacterium, Halococcus
Xeromyces bisporus yotra xerophi1ic hongos Agua pura Sangre humana
Agua de mar Pan de molde El jarabe de arce, el jamn 0,850 0.800 Salami
pastel de frutas, mermeladas 0.750 0.700 lagos de sal, pescado salado Los
cereales, dulces, fruta seca un Ejemplos seleccionados de los procariotas u
hongos capaces de crecer en cultivo medios ajustados a la actividad de
agua indicado. tra Washington pre yo cor DIF sai es del ria Decir ah En] Wi1
3% ele como GRC 6.2 de] Val hal fi qui ROR cor Decir ah el el sor org el
vaivn dw mam yo yo 01 segundo fr RVT METRO
pgina 25

fect Ay ser- la- Hly norte gan- porcin pecado ater ry una n de s / o ser- ater,
vail- SICAL ado ilib- ssure 1 / Le 6.2. SE BE- R.- ls como YO. [. El agua se
difunde desde una regin de alta concentracin de agua tracin (baja
concentracin de soluto) a una regin de menor concentracin de agua
(mayor concentracin de soluto) en el proceso de smosis (Seccin4.8 y
Figura 4.32). En la mayora de los casos, el citoplasma de una clula tiene
un soluto mayor concentracin que la del ambiente, por lo que el agua
tiende a difundir en la clula. En tales condiciones, la clula esdice que est
en equilibrio de agua positivo. Sin embargo, cuando una clulaISIN un
entorno de baja actividad de agua, hay una tensin dencia para que el agua
fluya fuera de la clula. Esto puede causar se- riousproblems si una clula
no tiene manera de tratar con l. Los halfilos y organismos semejantes
EnNature, efectos osmticos son de inters principalmente en hbitats
concentraciones withhigh de sales. El agua de mar contiene
aproximadamente 3% de NaCl, ms pequeas cantidades de muchos otros
minerales y elementos. Los microorganismos que se encuentran en el mar
suelen tener un requisito especfico para el ion de sodio, adems de
creciente de manera ptima en la actividad de agua del agua de mar (figura
6.238) .Estos organismos halfilos son llamados. El crecimiento ofhalophiles
requiere por lo menos algunos de NaCl, pero la ptima vara con el
organismo. Por ejemplo, los trminos leve halfila yhalfila moderada se
utilizan para describir halo- philes con baja (1-6%) y moderada (7-15%) de
NaCl re- requisitos / respectivamente (Figura 6.23). La mayora de los
microorganismos no son capaces de hacer frente a ambiente am- de muy
baja actividad de agua y mueren o BE- venir deshidratada y en estado
latente bajo tales condiciones. halotolerant organismos pueden tolerar una
cierta reduccin de la aw de su entorno, pero generalmente crecen mejor
entheabsence del soluto aadido (Figura 6.23). En contraste, algunos
organismos se desarrollan en la actividad de agua muy baja. Estas
organismos son de inters no slo desde el punto de vista su adaptacin a
la vida en estas condiciones, pero tambin desde un punto de vista
aplicado, por ejemplo, en el in- comida industria / donde solutos tales como
la sal y sacarosa son com- comnmente usado como conservantes para
inhibir el crecimiento microbiano. Los organismos capaces de crecer en
ambiente muy salada mentos se llaman extremos halfilos (Figura 6.23).
Estas 6.14 + efectos osmticos sobre el crecimiento microbiano + 159 yo
mm: mmmmJc: mmmmI Ejemplo: Ejemplo: Estafilococo Vibrio fischeri
aureus IBI Ejemplo: halobacterium salinarum o NaCl . Figura 6.23 Efecto de
la concentracin de cloruro de sodio en el crecimiento de microorganismos
de diferentes tolerancias o requisitos de sal. LaNaCIconcentration ptima
para los microorganismos marinos como V.tischeri es de aproximadamente
3%; para los halfilos extremos. es entre 15 y 300 / 0.depending en el
organismo. organismos requieren 15-30% de NaCl, dependiendo de la
especie, para un crecimiento ptimo (Seccin 13.3). Los organismos
capaces de vivir en ambientes con alto contenido de azcar que se llama
osmophiles, y aquellos capaces de crecer en ambientes muy secos (hecho
seca por falta de agua) son llamados los xerfilos. Ejemplos de estos

diversos organismos se dan en la Tabla 6.2. Los solutos compatibles Cmo

crecen los organismos en condiciones de estiaje actividad? Cuando un
organismo crece en un medio con una baja actividad de agua, se puede
obtener agua de su entorno Ment slo aumentando su interior la
concentracin de soluto.Un aumento en la concentracin de soluto interno
puede ser ac- complished por cualquiera de iones inorgnicos (1) de
bombeo en la clula del medio ambiente, o (2) sintetizar o con- centrating
un soluto orgnico. Se conocen muchos organismos que emplean uno o el
otro de estos mecanismos, y varios ejemplos se dan en la Tabla 6.3. solutos
compatibles Table6.3 de microorganismos Organismo Las bacterias,
nonphototrophic de agua dulce cianobacterias cianobacterias marinas alga
marina Salt Lake cianobacterias fototrfico anoxignica halfilas Las
bacterias
(Ectothiorhodospira
/
HalorllOdospira
y
RllOdovibrio
especies)extremadamente halfilas Archaea (por ejemplo,Halobacteriwll) y
algo Las bacterias (por ejemplo, Haloallaerobium) Dunaliella (Alga verde
halfilas) levaduras xerfilas filamentosos xerfilo hongos Owfor crecimiento
mnimo 0,97-D.90 Mayor soluto (s) acumulado betana glicina, prolina
(principalmente gram-positiva), el glutamato (Principalmente gramnegativa) Sacarosa, trehalosa a-glucosilglicerol Manitol, varios glucsidos,
prolina, dimethylsulfoniopropionate glicina betana 0.98 0.92 0.92 0.9OD.75
glicina betana, ectona, trehalosa 0.90-D.75 KCl Glicerol Glicerol Glicerol
0.75 0.75 ,83--0,62 0,72-D.61
pgina 26
160 . Captulo 6 . Crecimiento microbiano El soluto utilizado dentro de la
clula para el ajuste de la ci- actividad de agua debe ser no inhibidor
toplasmic de bio- procesos qumicos dentro de la clula. Tales compuestos
son llamado solutos compatibles. Existe una gran diversidad compatibles
solutos son conocidos en microorganismos (Tabla 6.3 y Figura 6.248). Estas
sustancias son altamente solucin de agua azcares bles o alcoholes de
azcar, otros alcoholes, o amino cidos o sus derivados (Figura 6.24). En el
caso de ex- extremadamente halfilas Archaea y muy pocos
extremadamentehalfilas bacterias, el soluto compatible es K + (como
KCl).solutos compatibles son o bien sintetizados por el mi- croorganismos
directamente o en algunos casos (tal como glicina betana o KCl) acumulada
en el medio ambiente. los concentracin de solutos compatibles en la clula
es una funcin cin del nivel de solutos externos, y en cada organismo la
cantidad mxima de soluto (s) compatible hizo o que puede ser acumulada
es una caracterstica dirigida genticamente. Por lo tanto, diferentes
organismos pueden tolerar diferentes rangos de el potencial hdrico (Tablas
6.2 y 6.3). Nonhalotolerant, ha- lotolerant, halfilas, y nismos
extremadamente halfilas nismos son a una importante medida definida por
su composicin gentica capacidad de producir o acumular solutos
compatibles.
Cocos
grampositivos
del
gnero
Staphylococclls
sonnotoriamente halotolerant (De hecho, un aislamiento comn
Procedimiento para ellos es utilizar un medio que contiene 7,5% NaCl), y
estos organismos utilizan el aminocido prolina comoun soluto compatible.

glicina betana es un derivado de laaminocido glicina en el que los

hidrgenos en el amino grupo se sustituyen por grupos metilo. Esto deja una
persona carga positiva permanente en el tomo de N (Figura 6.24), lo que
aumenta su solubilidad. betana glicina es ampliamente repartido como un
soluto compatible, especialmente entre halfilas Las bacterias y
cianobacterias (Table6.3). Algunas bacterias extremadamente halfilas
producen la compatible soluto ectona (Figura 6.24), que es un
cclicoderivado del aminocido aspartato. Una variedad de Gly- cosides y el
compuesto dimethylsulfoniopropionate (Figura 6.24) son producidas por
algas marinas, pero con raras excepcin que se acumulan slo en
cantidades bajas porque las propias clulas no son muy halfilas. xerfilo
levaduras y halfilos algas verdes producen principalmente glicerol como un
soluto compatible. Otros ejemplos de com- solutos incompati- se enumeran
en la Tabla 6.3, y las estructuras son se muestra en la Figura 6.24. _ 6.J4
concepto Llegada La actividad de agua se vuelve limitante para un
organismo cuando la concentracin de soluto disuelto en sus aumentos de
entorno. Para contrarrestar esta situacin, los organismos producen o
acumulacin I (! Solutos compatibles intracelulares del te que funcionan
para man- ner la clula en el balance hdrico positivo. Algunos
microorganismos han evolucionado para crecer mejor en el potencial de
agua reducida, y algunos incluso requieren altos niveles de sales con el fin
de crecer. . Cul es la aw de agua pura? . Qu es un soillte compatibles y
por qu se necesita? . Cul es el soluto compatible para Halobacterilllll
especie?1. aminocidos de tipo cido y relacionados solutos:
Dimethylsulfoniopropionate CH3 0 yo II H3C-S-CH2CH2C -0- + 2. Hidratos de
carbono de tipo solutos: sacarosa La trehalosa 0- CH20OH2C MARIDO
MARIDO 0 MARIDO OH OH OH 3. De tipo alcohol solutos: Glicerol CH20H yo
CHOH yo CH20H manitol CH20H yo HO-CH yo HO-CH yo HC-OH yo HC-OH yo
CH20H 8 Figura 6.24 Las estructuras de algunas comunes y altamente
soluble compatible solutos en los microorganismos. Las estructuras de
glutamato y prolina, otros solutos comunes, se muestra en la Figura 3.12.
los nombre formal de ectona es 1,4,5,6-tetrahidro-2-metil-4-pirimidina
carboxilato. glicina betana y dimethylsulfoniopropionate son solutos
comunes en las algas marinas. El oxgeno y el crecimiento microbiano Dado
que los humanos requieren absolutamente oxgeno molecular (02) para la
vida, es fcil suponer que todas las formas de vida requieren oxi- gen. Sin
embargo, esto no es cierto, ya que muchos microorganismos ismos pueden
y algunos han de vivir en la total ausencia de oxgeno. El oxgeno es
dbilmente soluble en agua, y debido a las actividades respiratorias de los
microorganismos en los animales acuticos o otros hbitats hmedos
(especialmente los que contienen una abundancia de materiales orgnicos),
O2 puede convertirse rpidamente agotado. Por lo tanto, anxicas hbitats
microbianos son comunesen la naturaleza, incluyendo lodos y otros
sedimentos, pantanos y pantanos, suelos anegados, tracto intestinal de los
anipgina 27

Grupo Relacin de O2 Tipo de metabolismo Exampleo Habitatb aerobios

Obligar Necesario Respiracin aerbica MicrococClls luteus (SEGUNDO) La
piel, el polvo Facultativo No es necesario, pero el crecimiento La respiracin
aerbica, anaerbica Escherichia coli (B)mamferos grandes mejor con O2 la
respiracin, la fermentacin intestino microaerophilic Pero a niveles
requeridos Respiracin aerbica Spirillu1 / 1 volutl1lls (B)agua de lago
menor que la atmosfrica anaerobios aerotolerant No es necesario, y el
crecimiento Fermentacin Streptococcus pyogenes (B)Tracto respiratorio
superior no es mejor cuando O2 presente Obligar Daino o letal La
fermentacin anaerbica o Methl1llObacteriu1 / 1 (A)digestores de lodos de
aguas residuales, respiracin jor1 / 1icicu1 / 1 sedimentos anxicos lago
mals, lodos de depuradora, la profundidad bajo la superficie de la Tierra, y
muchos otros entornos. En estos hbitats anxicos, mi- croorganismos,
particularmente diversos procariotas, prosperar. Clases de oxgeno de los
microorganismos Los microorganismos varan en su necesidad de, o la
tolerancia de, oxygen.In hecho, los microorganismos se pueden dividir en
SeV erales grupos dependiendo de cmo el oxgeno les afecta, como se
indica en la Tabla 6.4. Aerobios son especies capaces de el crecimiento en
las tensiones de oxgeno (aire completos es el 21% de O2) y respire oxgeno
en su metabolismo. Muchos aerobios puede incluso rancia erateelevated
concentraciones de oxgeno hiperbrico (oxi- gen) .Microaerophiles, por el
contrario, son aerobios que pueden useoxygen solamente cuando est
presente a niveles reducidos de que en el aire (microoxic condiciones). Esto
es debido a sucapacidad limitada para respiran o porque contienen algunos
molcula sensible al oxgeno, tal como un en- lbiles en oxgeno enzima.
Muchos aerobios son facultativos, significa que, bajo las condiciones de
nutrientes y de cultivo apropiadas, theycan crecer bajo cualquiera de
aerbicos o anaerbicos.Algunos organismos no pueden respirar oxgeno;
tales orga- ismsare llama anaerobios. Hay dos tipos de anaerobios EFC:
anaerobios aerotolerantes, lo que puede tolerar el oxgeno y crecer en su
presencia a pesar de que no lo pueden utilizar, y obligados (o anaerobios
estrictos), que son inhibidas o incluso asesinados por O2 (Tabla 6.4). La
razn obliga anaerobios obesare matado por el oxgeno es desconocida,
pero puede ser BE- causethey son incapaces de desintoxicar algunos de los
productos de el metabolismo del oxgeno (vase la Seccin 6.16). Por lo que
se sabe, obligan anaerobiosis se presenta slotres grupos de
microorganismos: una amplia variedad de procariotas, algunos hongos, y
algunos protozoos. El mejor- grupo conocido de anaerobios obligately
bacterias pertenece adel gnero Clostridium, un grupo de bacterias grampositivas en- varillas dospore formador. Los clostridios son muy extendida en
el suelo, sedimentos lacustres, y tracto intestinal, y son a menudo reresponsables de la descomposicin de los alimentos enlatados (Secciones
12.20 uble comi los cenar son 6.15 . Oxgeno y microbiana Crecimiento .
161 yo y 29.2). Otras bacterias anaerobias obligately se encuentran entre
los metangenos y muchas otras especies de Ar- CHAEA (Captulo B), el
sulfato de reduccin y homo- bacterias acetognicos (Captulos 12 y 13), y
muchos de las bacterias que habitan en el intestino de los animales

(Seccin cin 21.4). Entre anaerobios obligados, sin embargo, la sensibilidad

tividad al oxgeno vara en gran medida. Algunas especies son capaces de
tolerar trazas de oxgeno o incluso una completa exposicin al oxgeno,
mientras que otros no lo son. Las tcnicas de cultivo para aerobios y
anaerobios Para el crecimiento de muchos microorganismos aerobios, es
necesario pro- vide extensa aireacin. Esto es porque el oxgeno que es
consumido por los microorganismos durante el crecimiento no es recolocado lo suficientemente rpido por difusin desde el aire. aireacin
forzada acin de las culturas, por tanto, con frecuencia se necesita y puede
lograrse ya agitando vigorosamente el frasco o tubo en un agitador o
mediante burbujeo de aire esterilizado en el medio a travs de un tubo de
vidrio fino o disco de vidrio poroso. Aerobios por lo general crecen mucho
mejor con aireacin forzada que cuando el oxgeno es suministrado por
difusin simple. Para el cultivo de anaerobios, el problema consiste en
excluir, No proporcionar, oxgeno. Y debido a que el oxgeno es presente en
el aire, se necesitan mtodos especiales para la cultura microorganismos
anaerobios. Anaerobios obligados varan en su sensibilidad al oxgeno, y una
serie de procedimientos estn disponibles para la reduccin del contenido
de oxgeno de las culturas. Algunas de estas tcnicas son simples y
adecuados principalmente por organismos menos sensibles, mientras que
otros son ms com- compleja, pero necesaria para el crecimiento de
anaerobios estrictos. Las botellas o tubos llenos por completo hasta el tope
con cultura tura medio y provisto de tapones que cierren hermticamente
proporcionar condiciones anxicas adecuada para los organismos no
demasiado sensible a pequeas cantidades de oxgeno. Tambin es posible
aadir al medio de cultivo una sustancia qumica llamada reduccin agente
que reacciona con el oxgeno y lo reduce a H20. Un tpico ejemplo es
tioglicolato, que se aade a un medio derelaciones de oxgeno Table6.41 de
microorganismos (02) oxi- gan- gen. SE de ic o un ome lunes pantanos aniun Las letras entre parntesis indican el estado filogentico (B, bacterias; A,
Archaea). Representantesde cualquiera de los dominios de los procariotas
son conocidos en cada categora. Ms eucariotas son aerobios obligados,
pero aerobios facultativos (por ejemplo, levadura) y anaerobios obligados
(por ejemplo, ciertos protozoos y hongos) son conocidos. segundo Listedare
hbitats tpicos del ejemplo organismo.
pgina 28
- yo ;. :: J .,., ] -0.-7 : Oxiczone : .. ::: . :: F;:. R; . . , .: ':, YO.::. : : . 0 " 0 .
0.0 :. ..0 0 ',' 0 .... zona anxica .. '. " '. .. ......, , . "... 0 . . :;.: . ' . . . ". :::} r..r "
'1 '' '. . . '. , .. ' , "JIII (un) (segundo) (do) (re) (mi) 162 . Captulo 6 .
Crecimiento microbiano 8 Figura 6.25 Crecimiento frente a la concentracin
de oxgeno. Aerobio. anaerbico. facultativo. microaeroflico y anaerobio
aerotolerant crecimiento. como lo revelan los ofmicrobialcolonies de
posicin (representado aqu como dotsl negro dentro de tubos de
tioglicolato de medio de cultivo de caldo. UN pequea cantidad de agar se
ha aadido para mantener el lquido frombecoming perturbado y el
colorante redox. resazurina. que es de color rosa cuando se oxida e incoloro

cuando se reduce. se aade como un indicador redox. (A) El oxgeno

penetra slo una corta distancia en el tubo. aerobios obligados por lo crecer
solamente en la superficie. (B) Los anaerobios. ser sensible al oxgeno,
crecer solamente de la superficie. (Aerobios facultativos cl son capaces de
crecer en la presencia o ausencia de oxgeno y por lo tanto crecer a lo largo
del tubo. Sin embargo, un mejor crecimiento se produce cerca de la
superficie debido a que estos organismos pueden respirar. (Microaerfilos dl
crecen lejos desde la zona ms xica. (e) anaerobios aerotolerant crecen a
lo largo el tubo. Sin embargo. crecimiento no es mejor cerca de la superficie
debido a que estos Los organismos slo pueden fermentar. r , "II -... - .
llamado caldo de tioglicolato, comnmente utilizado para probar una orrequisitos de orga- de oxgeno (Figura 6.258). Despus de tioglicolato
reacciona con el oxgeno por todo el tubo, el oxgeno puede penetrar
solamente cerca de la parte superior de la tubo donde el aire contactos
medianas. obligar a los aerobios crecer solamente en la parte superior de
dichos tubos. nizacin facultativa ismos creciendo a lo largo del tubo, pero
lo mejor cerca de la parte superior. Mi- croaerophiles crecen cerca de la
cima, pero no justo en la parte superior. Anaerobios slo crecen cerca de la
parte inferior del tubo, donde el oxgeno no puede penetrar (Figura 6.25). Un
indicador redox tinte llamado resazurina se aade al medio porque
elcolorante cambia de color en presencia de oxgeno (rosa cuando
oxigenada, incolora cuando se reduce) y por lo tanto in- Cates el grado de
penetracin de oxgeno en la medi- um (Figura 6.25). Para eliminar todos los
rastros de O2 para el cultivo de anaerobios, es posible colocar un sistema
que consume oxgeno en un frasco que sostiene los tubos o placas. Uno de
los dispositivos ms simples para se trata de un tarro anxica, un frasco de
paredes gruesas con una junta estanca a los gasesdentro de los cuales
tubos, placas, u otros recipientes a ser incu- bated se colocan (Figura
6,2008). El aire en el frasco es re-colocado con una mezcla de H2 y C02, y
en presencia de un catalizador qumico las trazas de O2 en la tinaja y
cultural tura medio son consumidos por el H2 (H2 + O2 H20), llevando
eventualmente a condiciones anxicas. Para anaerobios estrictos, tales
como los metangenos ( Secciones 13.4 y 17.17), es necesario no slo
cuidadosamente eliminar por completo todos los rastros de O2 sino tambin
para llevar a cabo todas las ma- nipulations de culturas en un ambiente
anxico. Estricto anaerobios pueden ser asesinadas por incluso una breve
exposicin a la oxi- gen. En estos casos, un medio de cultivo se hierve
primero a hacerla libre de oxgeno, y luego un agente reductor tal como se
aade H2S, y la mezcla se sell en un oxi- Gen-gas libre. Todas las
manipulaciones se llevan a cabo bajo una chorro de hidrgeno libre de
oxgeno o nitrgeno gaseoso que es directa- w_ , 8 Figura 6.26 Incubacin
en condiciones anxicas, lal anxico tarro, una reaccin qumica en el sobre
en el frasco genera Hz + COz. el H2 reacciona con Oz tarro in'the en la
superficie de un catalizador de paladio para producir HZO; la atmsfera final
contiene Nz. Hz. y la bolsa de guantes Coz, Ib) anxico para manipulacin e
incubacin de cultivos en condiciones anxicas. La esclusa de aire a la
derecha. que puede ser evacuado y llenado de gas libre de 0z, sirve como

un puerto para la adicin y la eliminacin de materiales hacia y desde la

bolsa de guante, . - (un) (segundo) -..... ......
pgina 29
o- fuera fthe OBE gan- .Mi- parte superior. aqu ator el gallina ndi- edi experiencias fuera del cuerpo, un frasco s de tseal ncu- s re- cia cultura I20),
cuidado- nma- Estricto oxi- d para tiene 0xy- der una directo telfono - l Hz
g durante erves ed en el recipiente de cultivo cuando es abierta,
conduciendo por lo tanto a cabo cualquier cantidad de oxgeno que pudieran
entrar. Para una extensa investigacin en anaerobios, cajas especiales
equipados con guantes, llamados cajas de guantes anxicas, permiso de
trabajo con cultivos abiertos en ambientes anxicos por completo (Figura
6.26b). _ 6.J5 concepto Llegada Aerobios requieren oxgeno para vivir,
mientras que no lo hacen anaerobios e incluso puede ser matado por el
oxgeno. organismos facultativos puede vivir con o sin oxgeno. Las tcnicas
especiales son necesaria para el crecimiento de microorganismos aerobios y
anaerobios. . Qu es un aerobio facultativo? . Cmo funciona un agente
reductor? Formas de oxgeno txico El oxgeno es un poderoso oxidante y el
mejor de electrones accin Ceptor para la respiracin (Seccin 5,11). Pero,
al mismo tiempo, el oxgeno puede ser un veneno para algunos
microorganismos. Por qu? Resulta que el oxgeno, per se, no es el
veneno,pero en cambio es ciertos derivados del oxgeno que son txicas
para microorganismos. Consideramos que este tema aqu. Qumica de
oxgeno El oxgeno en su estado fundamental se conoce como triplete oxiGen EOZ). Sin embargo, otras configuraciones electrnicas de son posibles
oxgeno. Una forma importante de oxgeno txico es singlete de oxgeno
llamada EOZ), una forma de energa ms alto de oxgeno en el que
electrones de la capa exterior que rodea el ncleo convertirse en altamente
reactivo y son capaces de llevar a cabo una variedad de espontnea e
indeseable oxidaciones dentro de la clula. El oxgeno singlete se produce
tanto foto- qumica y bioqumicamente, este ltimo a travs de la accin
cin de diversos peroxidasa enzimas. Los organismos que con frecuencia
encontrar con oxgeno atmico, tales como el aire bacterias y fottrofas
microorganismos, menudo con- tainpigments llamados carotenoides, que
funcionan para con- vert de oxgeno singlete a las formas no txicas
(Seccin 17.3). otro altamente formas txicas de oxgeno incluir anin
superxido (Oz -), perxido de hidrgeno (HzOz), y el radical hidroxilo (OH)..
Todos estos son producidos Asby subproductos de la reduccin de 02 a H20
en respirador cin (Figura 6.27.). Flavoprotenas, quinonas, tioles, y
protenas hierro-azufre (Seccin 5.11), que se encuentra en prcticamente
allcells, CQN tambin llevan a cabo la reduccin de 02 a 02- ' Por lo tanto, si
tienen o no pueden utilizar el oxgeno (Tabla 6.3), prcticamente todas las
clulas se enfrentan a la exposicin al oxgeno txico speciesfrom vez en
cuando. El superxido es un agente oxidante fuerte y puede oxidizevirtually cualquier compuesto orgnico en la clula, incluyendo ing
macromolculas. perxidos tales como H202 puede dao celular
componentes pero generalmente no son tan txicos como superxido o

radical hidroxilo. El ltimo es el ms re- activeof todas las especies txicas

de oxgeno y, como puede superox- ide, oxidar rpidamente cualquier
sustancia orgnica en la clula. 6.16 + formas txicas de oxgeno + 163 yo
0z + e- - Cl.t superxidooz "- + e + 2 W _ El perxido de hidrgeno HzOz
HzOz + e- + H + _HzO + OH. Radical hidroxilo OH. + E- + W _ HZO agua .
Figura 6.27 reduccin de cuatro electrones de Oz a HZO por etapas Adems
de electrones. Todos los compuestos intermedios formados son reactivos y
toxicto clulas con excepcin de agua, por supuesto. Sin embargo, el radical
hidroxilo es slo una especie transitoria en la mayora de las clulas, ya que
su fuente principal es ionizante radiacin cin, una sustancia a la que la
mayora de las clulas son rara vez expuestos. Pequeas cantidades de
radical hidroxilo tambin se pueden producir de H202 (Figura 6.27). Pero si
se eliminan los perxidos de la clula (a travs de la actividad de la enzima
cata- lase, que se discute ms adelante), esta fuente de hidroxilo radical se
elimina virtualmente. En captulos posteriores se ver que algunas especies
de oxgeno txicas pueden ser producidos por ciertas clulas inmunes en el
cuerpo del animal y se usa para matar invasores microbianos (Seccin
22.2). Enzimas que destruyen txicos oxgeno Con una serie de derivados
de oxgeno txicos tales, no es sorprendentes enzimas que los organismos
han evolucionado que determinan STROY estos compuestos (Figura 6.28.).
Los ms comunes enzima en este sentido es la catalasa, que ataca hidroperxido de gen. La actividad de la catalasa se ilustra en la figuras 6.28a y
la enzima que destruye 6.29.Another hi- perxido de hidr- es peroxidasa
(Figura 6.28b), que difierede catalasa en que requiere un reductor de la
actividad, por lo general NADH, produciendo H20 como un producto. El
superxido es de- stroyed por la superxido dismutasa de enzima (Figura
6.28c), que combina dos molculas de superxido para formar (a)
Catalasa:tlz9z. + HzQz, - 2 HZO + 0z (b) la peroxidasa:I:! Z9z + L \ DB + W 2 HZO + NAD + (c) Superxidosuperxido: 2 ;;:, +: qz: 2 + W - 'HzOz + 0z
(d) Superxido dismutasa / catalasaen combinacin: 4 0;:. + 4 W __ 2 + 3
HZO 0z (e) Superxidoreductasa: Antiguo Testamento + 2 H + + cyt
creduced-- HzOz '+ cyt coxidized . Figura 6.28 Las enzimas que destruyen
las especies de oxgeno txicas. (Alabama Catalasas y peroxidasas (b) son
porfirina que contiene protenas, aunque algunos flavoproteinsISection
5.111 puede consumetoxic especies de oxgeno tambin. (C) las superxido
dismutasa son metal- protenas que contienen, los metales son el cobre y el
zinc, manganeso, o hierro. (Dl reaccin de la superxido dismutasa y
catalasa combinado. (El superxido reductasa cataliza la reduccin de un
electrn de Oz de HzOz usando reducida del citocromo c como el donador
de electrones.
pgina 30
Delaware cel di \ Delaware sio 3. en Naciones Unidas tHT Wisconsin 4. Hola
(do 5. W (k (do 6. D CE en 7. D rr rr 8. B un 164 . Captulo 6 . Crecimiento
microbiano . Figura 6.29 Mtodo de ensayo de un cultivo microbiano para la
presencia de catalasa. Una pesada asa de siembra de clulas de un cultivo
de agarse mezcl en un portaobjetos (derecha! con una gota de perxido de

hidrgeno 30%. La aparicin inmediata de burbujas es indicativa de la

presencia de catalasa. Las burbujas se Oz producidos por la reaccin HzOz +
HzOz -> 2 + HZO Oz. una molcula de perxido de hidrgeno y una
molcula de oxgeno. superxido dismutasa y catalasa en el trabajo tndem
para llevar a cabo la conversin de superxido de nuevo en oxgeno (figura
6.28d). Aerobios y facultativos aerobios contienen tpicamente tanto la
superxido dismutasa y catalasa, aunque algunos intervencin alguna sobre
aerobios carecen de catalasa. La superxido dismutasa es indispensable
para las clulas aerbicas, y la ausencia de esta en- enzima en anaerobios
obligados se pens originalmente para ser la razn por la cual el oxgeno es
txico para ellos (pero vase la siguiente prrafo). Algunos anaerobios
aerotolerantes, tales como lctico bacterias de cido, tambin carecen de la
superxido dismutasa, pero utilizar complejos de protenas libre de
manganeso (Mn2 +) para llevar la dismutacin de Oz - a HzOz y Oz. una
reaccin tales cin puede haber funcionado como una forma primitiva de
supervisin superxido dismutasa en organismos antiguos. Esto es apoyado
por el hecho de que todas las superxido dismutasas conocidos contienen
un cofactor de metal, por lo general Mn2 +, sino tambin Fez + o + Cuz
adems de Zn2 +, en el sitio activo de la enzima. Otro medio de la
eliminacin de superxido est presente en ciertos procariotas anaerbicos
obligadamente. en PyrococcllS jllrioslls (un miembro de la Archaea), por
ejemplo, super-superxido dismutasa est ausente, pero una enzima nica,
reductasa dismutasa, est presente y es responsable de eliminacin de
superxido. A diferencia de la superxido dismutasa, Suo reductasa de
perxido reduce superxido para HzOz sin la produccin de Oz (Figura
6.28e), evitando as la exposicinSeguro del organismo a Oz. P.jllrioslls
tambin carece de catalasa,una enzima que como la superxido dismutasa,
tambin gene- Ates Oz (Figura 6.28a). En P.jllrioslls, el HzOz producidopor la
reductasa de superxido se elimina por la actividad de enzimas peroxidasa
como HZO que producen como productos finales UCT (Figura 6.28b).
Superoxidereductase Podr estar ampliamente distribuida entre anaerobios
obligados, ya que los estudios genmicos tienen re- revel genes
superxido-reductasa como en los genomas de varios anaerobios obligados.
Esto significa que estos orga- ismos, que anteriormente se consideraban
estrictas debido a los anaerobios una falta de superxido dismutasa, de
hecho tienen una nismo nismo para tratar con el anin superxido
altamente txico. los sensibilidad de estos organismos al oxgeno en medios
de cultivo por lo tanto, puede ser por completo al otro y an desconocido
razones. Curiosamente, muchos hipertermia anaerbica obligately Hiles
fregona son bastante tolerantes a las condiciones fras, xica. A pesar de
que no crecen en tales condiciones, super- reductasa xido
presumiblemente impide su muerte. Es pens que esta tolerancia de
oxgeno es importante en el transferencia de estos organismos de una
hidrotrmica de aguas profundas sistema trmico a otro (Seccin 19.8). '8
6.J6 concepto Llegada Varias formas txicas de oxgeno se pueden formar
en la clula, pero en- enzimas estn presentes que pueden neutralizar la
mayora de ellos. Superox- ide, en particular, parece ser una especie de

oxgeno txicos comunes. . Cmo funciona el superxido superxido

proteger a una clula a partir de oxgeno txico? . Cmo funciona la
actividad de superxido dis111utase diferir de de la de superxido
reductasa? P segundo 9. 1 norte 1. 2. 3.
pgina 31
para su- fuera CORREOS- Plaza burstil norteamericana, ER- Seccin de la
economa de sobredosis- ted re- s de un- e de Cha- los edia arista su- iones.
por- Es el ter- en- rox- IES. ROM iffer REVISIN PREGUNTAS 1. Describir los
procesos moleculares clave que se producen cuando una clula crece y se
divide. Lo protenas ayudar en esta celda proceso de divisin (Seccin 6.1)?
2. Describir el papel que desempean las protenas Fts en la divisin celular
proceso de Sion (Seccin 6.2). 3. De qu manera los derivados de la
bacteriologa en forma de varilla um Escherichia coli que llevan mutaciones
que inactivan la protena MreB un aspecto diferente al microscopio de De
tipo salvaje (no mutada) Clulas? Cul es la razn de esta seccin 6.2)? 4.
Cmo funciona el antibitico penicilina mata a las clulas bacterianas
(Seccin 6.3)? 5. Cul es la diferencia entre la tasa de crecimiento
especfico (k) de un organismoy su generacin tiempo (g) (Secciones 6,4 y
6,5)? 6. Describir el ciclo de crecimiento de una poblacin de bacterias las
clulas desde el momento en esta poblacin se inocula primero en medio
fresco (Seccin 6.6). 7. Describa una directa y otra indirecta mtodo por el
cual el crecimiento microbiano puede ser medido. Asegrese de que el
mtodos tu eliges de acuerdo con su definicin (Secciones 6.7 y 6.8). 8.
Describa brevemente el proceso por el cual un solo rrollo celular ops en una
colonia visible en una placa de agar. Con esta ex- explicacin como un
fondo, describir el principio detrs del mtodo de recuento de viables
(Seccin 6.7). 9. Cmo puede un quimioterapias tat regular la tasa de
crecimiento y clulas nmeros de forma independiente (Seccin 6.9)?
SOLICITUD PREGUNTAS 1. A partir de cuatro clulas bacterianas por mililitro
en una rica medio nutritivo, con una fase de latencia de 1 hora y 20 minutos
tiempo de generacin, el nmero de clulas habr en 1 litro de este cultivo
despus de 1 h? Despus de 2 h? Despus de 2 h, si una de las cuatro
clulas iniciales estaba muerto? 2. Calcular g y k en un experimento de
crecimiento en el que un medi-umwas inoculados con 5 x 10 clulas / ml de
Escherichia coli las clulas y, despus de un retraso de 1 h, crecieron
exponencialmente durante 5 h, despus de lo cual la poblacin fue de 5,4 X
109cells / m !. 3. Volver a Captulo 3 y localizar una figura que mejor deescribas lo que sucede a las enzimas de una clula de una .
ApplicationQuestions . 165 yo 10. Examinar la grfica que describe la
relacin entre tasa de crecimiento y la temperatura (Figura 6.17). D un ex
explicacin, en trminos bioqumicos, de por qu la ptima temperatura
para un organismo es por lo general ms cerca de su mximo de su valor
mnimo (Seccin 6,10). 11. Describir un hbitat donde se encontrara un
psychrophile. Ahyperthermophile (Secciones 6.11 y 6.12). 12. En relacin
con el pH del medio ambiente y de la clula, de qu manera son acidfilos y
alcalfilos diferente? De qu manera se parecen (Seccin 6,13)? 13.

Escribir una explicacin en trminos moleculares de cmo una clula de un

halfila es capaz de hacer que fluyan las molculas de agua dentro s
(Seccin 6,14). 14. Lista de tres clases qumicas solutos compatibles de proproducida por diversos microorganismos. Lista de al menos dos cosas que
todos tienen en comn (Seccin 6,14). un 15. Contraste aerotolermzt y un
obliga anaerobia En trminos de la sensibilidad y la capacidad de crecer en
presencia de oxi- Gen (02), Cmo hace un aerotolerant anaerobio difieren
de un microaerfilo (Seccin 6,15)? 16. Comparar y contrastar las enzimas
catalasa, sllperoxide dismlltase, y redllctase sllperoxide de la siguiente
puntos de vista: sustratos, productos de oxgeno, organismos los contienen,
papel en la tolerancia de oxgeno de la clula (Seccin 6,16). mesophile
como Escherichia coli cuando se coloca en una cultura medio a 80 C.
Contrasta esto con una figura del cap- 6 ter que mejor describe lo que
sucedera si las clulas de fllmarii Pyroloblls fueron colocados bajo la misma
condicin ciones. Describir por qu ni organismo crecera. 4. Es de esperar
para encontrar un microorganismo psychrophilic viva en una fuente termal?
Por qu? Con frecuencia es posible aislar hipertermoflico finales
microorganismos a partir de agua fra ambientes. Suministrar una
explicacin para esto.