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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

MANUAL PRCTICO DE TOMA Y MANEJO DE


MUESTRAS EN PERROS Y GATOS

TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE:


Trabajo Prctico Educativo
COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TTULO DE

MDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA


PRESENTA:
Erika Gordillo Cabrera
ASESOR:
MVZ. Nancy Prez Cisneros

VERACRUZ, VER.

DEDICATORIAS

JULIO 2010

A Dios
Por permitirme realizar esta meta, por darle salud a mis seres queridos y
principalmente por cuidar a mi Pap que est en el cielo apoyndome y dndome
sus bendiciones en todo momento.
A mi mam Gloria M. Cabrera Zamudio
Por haberme apoyado desde el inicio de mi carrera, dndome sus bendiciones,
sus consejos, y por transmitirme su paz y tranquilidad en los momentos que ms
necesitaba. Por desvelarse conmigo, en mis semanas de exmenes. Gracias
A mis hermanos Armando, Delia y Gloria
Por apoyarme desde siempre, por preocuparse siempre por m, por darme sus
consejos.
A mis Tos y primos
Por su apoyo a lo largo de mi carrera, y por sus consejos.
A mi novio Rogelio Caldern Olmos
Por darme su apoyo, amor y comprensin, durante mis trabajos, exmenes etc.
Por siempre decirme si puedes, por ayudarme a estudiar inmunologa, por
cuidarme y valorarme.

ii
AGRADECIMIENTOS

A mi asesora Mvz. Nancy Prez Cisneros:


Por ayudarme a realizar las tcnicas de cada toma de muestra, por preocuparse

por m trabajo, por haber aceptado ser mi asesora, por estar ah con su cmara
cuando yo no traa la ma, por dejarme realizar las tcnicas y poder aprender, por
su paciencia, apoyo y comprensin. Y sobre todo a su perro roco por su
disponibilidad en las tcnicas.
A mis maestros que estuvieron a lo largo de mi carrera.
Al mdico Canseco (Yopo) por apo yarme en la presentacin del trabajo, por
aclarar mis dudas, por su apoyo, y sobre todo enorme paciencia.
A Mvz. Jacqueline Pantoja O. (Jackita) por dejarme tomar fotos a sus pacientes, y
por dejarme realizar las tcnicas necesarias para este manual, tambin por
proporcionarme informacin sobre el tema.
Al Qumico Francisco J. Lpez Vzquez (Pakito), por dejarme entrar a su
laboratorio y tomar mis fotos. Tambin por ayudarme a conseguir el material
adecuado para mis fotos.
A Mvz. Genaro Cocom P. (Kokis), y a Ren

por ayudarme a tomar las fotos,

incluso por estar en ellas.


A Rogelio Caldern por apoyarme en todo momento.

iii
INDICE GENERAL

Introduccin

Justificacin

Objetivo general

Objetivos especficos

1. Recoleccin, manejo y envo de muestras para hematologa en perros y gatos

1.1. Material

1.2. Tcnica vena yugular

1.3. Toma de muestra vena ceflica

11

1.4. Manejo

12

1.5. Envo

12

2. Toma, conservacin y envo de muestra de heces

14

2.1 Material

14

2.2 Tcnica con asa rectal

15

2.3 Conservacin

16

3. Toma de muestra de semen

17

3.1. Material

17

3.2. Tcnica

17

3.3. Conservacin

19

4. Toma, conservacin y envo de muestras en piel

20

4.1. Raspados

20

4.1.1. Raspado superficial de piel

20

4.1.1.1. Material

20

4.1.1.2. Tcnica

21

4.1.2. Raspados profundos de piel

23

4.1.2.1. Material

23

4.1.2.2. Tcnica

23

5. Toma de muestra de cultivo para dermatofitos

26
iv

5.1. Material
5.2. Tcnica
5.3. Conservacin
5.4. Tricograma
5.4.1 Material
5.4.2 Tcnica

26

6. Examen con lmpara de Word


6.1 Material
6.2 Tcnica
7. Cultivo bacteriano
7.1 Material
7.2 Tcnica
8. Tcnicas de coleccin con hisopos de algodn
8.1 Material
8.2 Tcnica
8.3 Envo
9. Tcnica para muestras en cinta adhesiva
9.1 Material
9.2 Tcnica
9.3 Tincin
10. Obtencin de muestras para citologa
10.1 Aspiracin con aguja fina
10.1.1 Aspiracin de ndulos
10.1.1.1 Material
10.1.1.2 Tcnica
10.2 Aguja fina simple sin aspiracin
10.2.1 Material
10.2.2 Tcnica
10.3 Preparacin de los frotis
10.3.1 Frotis en cruz
10.3.2 Frotis estndar

26
28
29
29
29
30
30
30
32
32
33
34
34
35
38
39
39
39
40
41
42
42
42
42
44
44
44
46
46
46

v
10.3.3 Frotis lineales

47

10.3.4 Impresiones

48

11. Biopsia de piel (tcnica de sacabocados).

50

11.1 Preparacin del sitio

51

11.2 Biopsia excisional o incisional vs. Biopsia de perforacin

51

11.3 Material

52

11.4 Tcnica

52

11.5 Envo

55

12. Obtencin de muestras para biopsia

56

12.1 Tcnica

56

12.2 Tipos de biopsia

60

12.3 Biopsias escisionales e incisionales

61

12.4 Biopsia con aguja y con trocar

61

12.4.1 Material
12.5 Manipulacin de los tejidos y de las biopsias

62
63

12.5.1 Muestras lquidas

63

12.5.2 Muestras histolgicas

64

12.5.3 Fijacin de la muestra

66

13. Toma, conservacin y envo de muestras de orina


13.1 Miccin espontnea

67
67

13.1.1 Material

67

13.1.2 Tcnica

67

13.2 Cistocentsis

69

13.2.1 Material

69

13.2.2 Tcnica

69

13.3 Cateterizacin

71

13.3.1 Material

72

13.3.2 Tcnica

72

13.4 Conservacin

74

14. Obtencin de muestras de cavidades corporales


14.1 Toracocentsis

76
76

vi
14.1.1 Material

76

14.1.2 Tcnica

76

14.2 Abdominocentsis

79

14.2.1 Material

79

14.2.2 Tcnica

79

14.2.3 Conservacin

81

14.2.4 Envo

82

15. Bibliografas

84

vii

NDICE DE FIGURAS Y CUADROS


FIGURAS
Figura 1. Agujas

Figura 2. Tubos

Figura 3. Sistema vacutainer

Figura 4. Vena yugular

Figura 5. Vena ceflica

Figura 6. Vena safena

Figura 7. Embrocado

Figura 8. Presin dedo pulgar

10

Figura 9. Puncin con sistema vacutainer

10

Figura 10. Conservacin y envo de la muestra

13

Figura 11. Material, recoleccin de heces

14

Figura 12. Lubricante

16

Figura 13. Toma de muestra

16

Figura 14. Portaobjetos

16

Figura 15.Cubreobjetos

16

Figura 16. Extremo de vagina artificial bovina, adherida a un tubo estril.

17

Figura 17. Estimulacin del pene

18

Figura 18. Paciente en posicin para eyacular

18

Figura 19. Material, raspado de piel

21

Figura 20. Aceite para inmersin

22

Figura 21. Raspado superficial en gato

22

Figura 22. Portaobjetos

22

Figura 23. Cubreobjetos

23

Figura 24. Observacin al microscopio

23

Figura 25. Presin de la piel

24

Figura 26. Raspado profundo.

24

Figura 27. Extendido de la muestra

25
viii

Figura 28. Cubreobjetos

25

Figura 29. Un cepillo dental estril puede ser empleado para recolectar pelos .

27

Figura 30. La superficie del agar es tocada delicadamente con las cerdas del

27

cepillo.
Figura 31. Inoculando el medio cultural

27

Figura 32. Toma de muestra

29

Figura 33. Toma de muestra

29

Figura 34. muestra en portaobjetos

29

Figura 35. Lmpara de Wood

30

Figura 36. No se muestra fluorescencia en este paciente

31

Figura 37. Material para hisopados

34

Figura 38. Citologa vaginal

36

Figura 39. Hisopado conjuntival

36

Figura 40. Hisopado en mucosa oral

36

Figura 41. Hisopado de odo

36

Figura 42. Hisopado en ano

37

Figura 43. Muestra de mucosa conjuntival

37

Figura 44. Muestra de heces

37

Figura 45. Muestra de citologa vaginal

37

Figura 46. Embrocado

42

Figura 47. Aspirado

42

Figura 48. Liberacin de presin

43

Figura 49. Aspirado para presin

43

Figura 50. Portaobjetos

43

Figura 51. Frotis en cruz

43

Figura 52. Rasurado

44

Figura 53. Embrocado

44

Figura 54. Puncin de masa

45

Figura 55. Puncin en varias direcciones

45

Figura 56. Expulsin del contenido

45

ix

Figura 57. Frotis en cruz

45

Figura 58. Frotis estndar

47

Figura 59. Frontis lineal

48

Figura 60. Se traza un cuadrado alrededor de la muestra para biopsia

53

Figura 61. El anestsico local se inyecta subcutneamente

53

Figura 62. El instrumento de perforacin se coloca verticalmente sobre la

54

superficie y se hace rotacin en una sola direccin.


Figura 63. La muestra es quitada sujetando su base con una pinza y cortndola.

54

Figura 64. Si la muestra de la biopsia es delgada, sta se coloca sobre un cartn o


abate.
Figura 65. Miccin espontnea

68

Figura 66. Material para cistocentsis

69

Figura 67. Se introduce la aguja

71

Figura 68. Obtencin de la muestra

71

Figura 69. Frasco estril de boca ancha

71

Figura 70. Se retrae la piel y se introduce la sonda previamente lubricada

73

Figura 71. Obtencin de muestra

74

Figura 72. Obtencin de muestra

74

Figura 73. Embrocado del paciente

77

Figura 74. Puncin en perro

77

Figura 75. Puncin en gato

77

Figura 76. Toracocentsis en perro

78

Figura 77. Toracocentsis en gato

78

Figura 78. Obtencin de muestra

78

Figura 79. Vlvula de tres vas

78

Figura 80. Embrocado

79

Figura 81. Puncin

80

Figura 82. Obtencin de muestra

80

x
CUADROS

55

Cuadro 1. Tubos para la obtencin de muestras

Cuadro 2. Sistemas orgnicos y sus correspondientes tcnicas de biopsias

57

Cuadro 3. Diferentes tipos de biopsias

60

Cuadro 4. Tipos de agujas de biopsias

62

Cuadro 5. Ventajas y desventajas de las tcnicas con aguja

62

xi

INTRODUCCIN

Diariamente durante la prctica mdica profesional tenemos la necesidad de


establecer diagnsticos precisos que nos permitan seleccionar y administrar la
terapia adecuada, de manera que

est plenamente justificada en una situacin y

una patologa particular. (Aguilar et al, 2005).


En la actualidad para realizar stos diagnsticos contamos con la patologa clnica
veterinaria, que constituye

una disciplina que ha tenido una evolucin muy

significativa en los ltimos treinta aos. (Aguilar et al, 2005).


Con los resultados o diagnsticos que se obtienen a travs del anlisis de
laboratorio,

tambin

se

puede

hacer

un pronstico

para

tomar

decisiones

teraputicas. (Aguilar et al, 2005).


La patologa clnica como especialidad incluye la formacin en hematologa
clnica, bioqumica clnica y citologa clnica, los avances que se han tenido en
stas reas, ahora nos permiten efectuar diagnsticos que, antes, eran muy
difciles. Es importante la participacin de esta disciplina en gastroenterologa,
dermatologa,

endocrinologa,

urologa,

neurologa,

oftalmologa,

neumologa,

neonatologa, infectologa, geriatra, etc. (Aguilar et al, 2005).


La exactitud de las evaluaciones de laboratorio depende, en gran parte, de la
calidad del procedimiento realizado durante la coleccin, la preparacin y el
transporte de las muestras; por tanto, el xito del empleo del laboratorio esta
relacionado con el cuidado que se procure desde la toma de las muestras, hasta la
ejecucin de las tcnicas de anlisis y el informe de los resultados. (Aguilar et al,
2005).

JUSTIFICACIN

Como

se

mencion

anteriormente,

los

exmenes

laboratoriales son una

herramienta indispensable para complementar un diagnstico, por lo que es


necesario conocer las tcnicas adecuadas para la

obtencin, preparacin y

manejo de dichas muestras, con el fin de evitar errores en los

resultados que

conlleven a un diagnstico equivocado.


Aunque existe una gran variedad de libros, revistas, pginas de internet, etctera,
donde podemos encontrar tcnicas para la

toma de muestras,

no siempre

podemos obtenerlas en un mismo texto, y nos vemos en la necesidad de acudir a


varios, esa fue la razn por la cual se decidi realizar un manual donde explique
de manera sencilla y didctica, las tcnicas ms comunes que se utilizan en la
prctica diaria de clnica de perros y gatos.
ste trabajo rene los mtodos necesarios para la obtencin, conservacin y
envo de la muestra en un solo manual, evitando con esto que el mdico tenga
que acudir a diversos textos, que tenga como consecuencia una prdida de tiempo
que podra aplicar al paciente.
Ya que no hay material fotogrfico en un solo texto, que contenga las tcnicas
ms comunes que se practican en clnica de perros y gatos, en este manual se
incluyen imgenes, que explique detalladamente las tcnicas y procedimientos
adecuados para la toma, conservacin y envo de muestras en perros y gatos,
tanto para mdicos que

estn en la prctica profesional, as como para los que

estn en formacin, ya que es la mejor forma de conocer la tcnica y poder


realizarla adecuadamente.

OBJETIVO GENERAL

Reunir en un solo trabajo los procedimientos ms comunes que se realizan


en un consultorio veterinario para la obtencin y manejo de muestras.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Que los profesionistas obtengan una gua para obtencin de

muestras de

manera adecuada.
Un material didctico que sirva de apoyo para las experiencias educativas
de clnica y medicina y ciruga de perros y gatos.
ste manual est diseado con el fin de apoyar a estudiantes que estn
interesados en la clnica de pequeas especies

y a mdicos que ya estn

en la prctica mdica profesional, apoyando con imgenes las tcnicas


ms comunes en la toma de muestras en perros y gatos.

1. RECOLECCIN, MANEJO Y ENVO DE MUESTRAS PARA


HEMATOLOGA EN PERROS Y GATOS.
1.1. MATERIAL

Agujas con tubos al vaco normalmente agujas de calibre 20 G, color


amarillo, 21 G color verde, 22 G color negro con longitudes de 1 a 1
pulgada, a seleccionar de acuerdo con e l vaso sanguneo a puncionar.
(Nez et al, 2007).

Figura 1. Agujas
Tomado de: www.klinika-medical.del/.../venble/kanuelen.jpg

Figura 2. Tubos
Tomado de: www.proveedormedico.com/TUBOSVACUTAINER.jpeg

Tubos con EDTA, tapn lila, de capacidades 3.0 a 10.0 ml.


Tubos con Citrato de Sodio, tapn azul claro, de capacidades de 3.0 a 10.0

ml.
Tubos con heparina, tapn verde.
Tubos sin anticoagulante tienen tapn rojo, y vienen en capacidades de 3.0,
5.0, 7.0 y 10.0 ml.
Tubos de tapn amarrillo.
Si no se tienen Vacutainer disponibles, se pueden utilizar jeringas de 3 ml
con agujas del No. 22 de 1 a 1 1\2 pulgadas. (Nez et al, 2007).

TAPON

ANTICOAGULANTE

SECTOR

MATERIAL
Vidrio

EDTA

Hematologa

o
plstico

Gel separador

Serologa

Vidrio

com ativador de

cogulo

bioqumica

plstico

Citrato
de
Sodio

Hematologa
(Coagulacin)

5
Vidrio

Siliconizado

Serologa

Vidrio

sin

anti-coagulante

bioqumica

plstico

Heparina
Sdica

Fluorato de
sdio + EDTA

Bioqumica
e

Vidrio

Inmunologa
Vidrio
Bioqumica

o
plstico

CUADRO 1. TUBOS PARA OBTENCIN DE MUESTRAS

Tomado de: Hematologa serie blanca, prcticas de laboratorio, Lpez, 2007.

SISTEMA VACUTAINER

AGUJA.

CAMISA.

TAPN.

ETIQUETA. TUBO.

Figura 3. Sistema Vacutainer


Tomado de: Hematologa serie blanca, prcticas de laboratorio, Lpez, 2007.

1.2. TCNICA VENA YUGULAR


Para obtener una muestra de sangre en perros y gatos se recomienda
puncionar las venas ceflicas, safenas yugulares. (Figuras 4, 5, 6).
Dependiendo de la talla de los animales, por ejemplo para perros pequeos
y gatos, se recomienda tomar la muestra sangunea de vena yugular.
(Nez, 2005).

Figura 4. Vena yugular

Figura 5. Vena Ceflica

Figura 6. Vena safena

Un primer ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito esternal


sobre el borde de la mesa de exploracin. (Tachika, 2008).
El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal con una mano y con la
otra mano sujetar ambos miembros torcicos, para evitar que el perro los
mueva durante el procedimiento.
El ayudante debe procurar que el cuello del perro se encuentre extendido
para realizar la preparacin antisptica del mismo y prepararse para la
venopuncin yugular.
Se limpia la zona que va a puncionar con antispticos, como isodine
espuma y alcohol al 70%, este debe secarse con una torunda, para evitar
que penetre por capilaridad y se produzca hemolisis; que afecte la calidad

de la muestra. Esto afecta la calidad de la misma,

tanto para hemograma

como para bioqumica y citologa. (Aguilar et al, 2005).

Figura 7. Embrocado
Para que la sangre se acumule en el interior de la vena seleccionada, se
puede hacer presin sobre la regin lateral a la lnea media del cuello, justo
craneal a la entrada del trax, para hacer que resalte la vena yugular.
9

Figura 8. Presin dedo pulgar


Posteriormente se introduce en la vena, la aguja con el sistema Vacutainer,
y se coloca el tubo segn el examen que se va a realizar, se deja llenar
partes del tubo, y posteriormente se retira la aguja de la vena, y se coloca
un algodn con alcohol, haciendo presin en donde se hizo la puncin.
(Nez et al, 2005).

Figura 9. Puncin con sistema vacutainer.

Cuando se utiliza una jeringa sin anticoagulante para tomar la muestra, la


transferencia al tubo se efecta sin aguja y el Vacutainer color lila sin tapn,
dejando deslizar la sangre por la pared del tubo para evitar la hemlisis.
10

Inmediatamente despus se tapa y se mezcla suavemente con el EDTA k3


con un movimiento

de sube

y baja

unas 10

veces, evitando agitar

vigorosamente para mantener sin hemlisis la muestra.


Si hay presencia de cogulos en la muestra, se debe realizar nuevamente.

1.3. TOMA DE MUESTRA VENA CEFLICA


Un primer ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito esternal sobre
la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal
con una mano y con la otra mano se toma la articulacin del codo del
miembro torcico que le quede ms cmodo, tratando de extender el
antebrazo del perro. (Tachika, 2008).
Se realiza la preparacin asptica (rasurado, lavado y embrocado) de la

regin dorsal del tercio medio distal del radio y ulna, que es la zona que se va
a puncionar. El ayudante que est sujetando el brazo del perro aplica una
ligadura sobre la articulacin del codo para interrumpir el retorno venoso y
hacer resaltar la vena, durante un mximo de diez segundos antes de la
venopuncin, el mantenerlo por ms tiempo, produce un falso aumento del
hematocrito por mayor retencin de eritrocitos que en el plasma y podra
ocultar la presencia de anemia en algunas ocasiones.
Para tomar la muestra se debe tomar con una mano el miembro torcico del
perro, de manera de evitar movimiento indeseable.
La venopuncin se realiza introduciendo la aguja de la jeringa, con el bisel de
la

misma

apuntando

hacia

arriba,

en

un

ngulo

de

45

grados

aproximadamente, sobre la vena ceflica que se encuentra resaltada por la


11

presin. Una vez que se ha atravesado la piel, el tejido subcutneo y la pared


del vaso sanguneo, se realizar una ligera aspiracin del mbolo, para
verificar que efectivamente se introdujo la aguja al vaso sanguneo.
Se colecta la muestra y se deposita inmediatamente en los tubos especficos
para su transporte (con o sin anticoagulante).

1.4. MANEJO DEL PACIENTE

El paciente debe encontrarse lo menos excitado posible para minimizar las


variaciones fisiolgicas que stos estados provocan. (Aguilar et al, 2005).
La adecuada contencin facilita una venopuncin limpia y precisa y evita la
contaminacin de la muestra.

Cuando se requiera muestra de sangre y orina, se deben colectar antes de


cualquier tratamiento. Pero cuando el paciente se encuentra en tratamiento
por va intravenosa (venas ceflicas o safena), la muestra sangunea debe
tomarse del miembro opuesto o de las venas yugulares.

1.5. ENVO
Las muestras deben estar identificadas: Nombre del paciente, especie,
raza, edad, hora y fecha de muestreo. (Aguilar et al, 2005).
Esto para cualquier determinacin, ya sea para hematologa, bioqumica,
urianlisis y citologa de lquidos etc.

12
Sealar con tinta roja si el animal es sospechoso de rabia, tuberculosis,
brucelosis, leptospirosis, salmonelosis u otra enfermedad transmisible al
hombre, para aumentar las precauciones en el manejo.
Describir la historia clnica con los hechos ms relevantes: Diarrea, vmito,
anorexia, hiporexia, fiebre, etc.

Con una duracin de x das.

Indicar si el animal est recibiendo tratamiento y el tiempo de recibirlo.


Particularmente en el caso de fluidoterapia, corticoterapia de larga accin,
transfusiones sanguneas,

etc.,

en

stos

dos

ltimos,

administracin haya sido concluida, sus efectos pueden perdurar por 5 o


ms das.
El envo de la muestra para sangre entera con o sin anticoagulante debe
estar refrigerada entre +4 y +8C, y debe llegar al laboratorio antes de las
24 horas tras su extraccin. Se debe proteger los tubos frente a los golpes.
Se recomienda dejar la muestra a la temperatura de la pieza durante unos

aunque su

15 minutos y no exponerla al sol antes de refrigerarla (4C), para evitar un


choque trmico y hemlisis de la muestra.

Figura 10. Conservacin y envo de la muestra

13

2. TOMA, CONSERVACIN Y ENVIO DE MUESTRA DE HECES

Hay dos formas en las que se puede recolectar excremento en perros y


gatos: (Corona, 2009).
a) Con asas rectales, en el interior del recto del paciente.
b) Del suelo tan pronto como defeque el anima l.

2.1. MATERIAL
Asas rectales de plstico
Recipiente recolector de plstico limpio o estril.
Gel lubricante
Portaobjetos
Cubreobjetos
Solucin salina

Figura 11. Material para recoleccin de heces

14

2.2.

TCNICA CON ASA RECTAL


Un

primer

ayudante debe sujetar

cuadripedestacin

al

perro que deber estar

en

sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el

cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar la
parte caudal del perro, abrazando el abdomen del mismo, para evitar que el
perro se mueva durante el procedimiento. (Tachika, 2008)
Se lubrica el asa rectal

y se introduce en el recto del paciente, dando giros

para

la

poder

extraer

muestra

de

excremento,

se

necesitan

aproximadamente de 1 a 2gr, dependiendo el examen que se va a realizar.


Como se muestra en las figuras 12 y 13. Se retira el asa rectal y la pequea
cantidad de excremento que salga pegada a la punta, se extiende sobre un
portaobjetos.
Posteriormente se coloca la muestra en un recipiente de plstico de tapa
ancha, en caso de ser para un examen para microbiologa debe ser un
recipiente estril.

Se aaden unas cuantas gotas de solucin salina isotnica a la muestra,


con la finalidad de convertirla en una suspensin acuosa, y se coloca un
cubreobjetos

para

poder

visualizar

la

muestra

travs

del

objetivo

panormico y seco dbil (10X) de un microscopio ptico, en busca de


huevos de parsitos. Figuras 14 y 15. (Quiroz, 2002).

15

Figura 12. Lubricante

Figura 13. Toma de muestra

Figura 14. Portaobjetos

2.3.

Figura 15. Cubreobjetos

Conservacin

Se recomienda no refrigerar la muestra, se debe llevar cuanto antes al laboratorio


con el fin de obtener resultados confiables, mantenerse alejada de la luz, y en un
sitio fresco. [consultado el 15 de abril del 2010].
http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la_toma_de_m
uestras_finales.pdf).
16

3. TOMA DE MUESTRA DE SEMEN

3.1. MATERIAL
Vagina artificial
Tubo recolector estril

3.2. TCNICA
El semen se obtiene en una vagina artificial. (Feldman et al, 2000).

Figura 16
Extremo de vagina artificial bovina, adherida a un tubo estril.

La tarea ms difcil es la estimulacin del macho, por lo ge neral no se


necesita una hembra.
Se da masaje al pene y bulbo erctil dentro del prepucio, cuando el bulbo
erctil comienza a aumentar de tamao se desliza el prepucio en direccin
posterior y se exterioriza el pene con el bulbo erctil.
Extrado el pene y el bulbo erctil el recolector sostiene con firmeza la base
del pene en direccin proximal al bulbo, se utilizan los dedos pulgar e ndice

17
proporcionando masaje y presin; durante la ereccin o inmediatamente
despus inician los impulsos plvicos con una duracin de 5-30 seg.

Figura 17. Estimulacin del pene

Figura 18. Paciente en posicin para eyacular

La fase inicial del eyaculado consta de lquido prosttico sin esperma y la


segunda fraccin es rico en esperma.
El semen se obtiene de 2 a 5 minutos, es relativamente resistente al choque
trmico.
Se colectar semen mientras su consistencia sea blanquecina o cremosa y
turbio.
18
3.3 CONSERVACIN
3.3.1. SEMEN REFRIGERADO
Mediante la agregacin de diluyentes es posible refrigerar el semen, disminuyendo
el metabolismo de los espermatozoides mantenindolo a temperaturas de 4 C,
logrando la viabilidad de estos aproximadamente de 24 a 48 hrs ., como mnimo.
Antes de realizar la IA el eyaculado debe alcanzar la temperatura ambiente
lentamente.
Debido a que mediante los diluyentes los espermatozoides se mantienen en
buenas condiciones es factible realizar una IA vaginal.
De esta manera se ampla la posibilidad de uso de un reproductor, permitiendo la
comercializacin de semen y facilitando el intercambio gentico ent re deferentes
establecimientos.
(http://www.foyel.com/cartillas/20/citologiavaginalcanina.html,2008). [consultado el
20 de marzo del 2010].

19

4. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS EN PIEL


4.1 RASPADOS
Son adecuados para las lesiones externas, en biopsias, cirugas y en necropsias.
Cualquier perro o gato con prurito o escamoso puede estar infestado con
Cheyletiella spp., Otodectes cynotis, Scabies scabiei, o Notoedres cati y debe
hacrsele raspado. [Consultado el 7 de abril del 2010].
(http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
Si se sospecha de sarna, las reas preferidas para el raspado son los hombros,
corvejones y vientre. El borde de las orejas debe rasparse minuciosamente si se
observa algn prurito o descamacin en esta rea. Alguna veces, la descamacin
es ligera y solo se hace evidente durante un examen detallado.
Debe hacrsele raspado a cualquier perro o gato con una posible demodicosis.
De esta manera, todo paciente alopcico y todo paciente con ppulas, pstulas,
costras y particularmente con pododermatitis interdigital, debe ser raspado en
busca de demodicosis. Para un raspado profundo eficaz de la piel de las patas
puede necesitarse sedacin o anestesia general.

4.1.1. RASPADO SUPERFICIAL DE PIEL


4.1.1.1. MATERIAL
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersin
Hoja de bistur
20

Figura 19. Material, para raspado de piel

4.1.1.2. TCNICA

Un primer

ayudante

cuadripedestacin

debe

sujetar

al perro

que

deber

estar en

sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el

cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar la
parte caudal del perro, abrazando el abdomen del mismo, para evitar que el
perro se mueva durante el procedimiento. (Tachika, 2008).
Se deben identificar las zonas de la piel que presentan lesiones primarias.
Los sitios son rasurados suavemente con navajas #40. Los caros son
difciles de encontrar (especialmente los caros de la sarna demodcica), de
tal manera que entre ms grande sea el rea raspada, se tendr mayor
oportunidad de obtener un raspado de piel positivo.

Se aplican varias gotas de aceite mineral directamente sobre la piel rasurada


o sobre la hoja de bistur y se distribuye uniformemente en el rea. Como se
muestra a continuacin. [Consultado el 8 de abril del 2010].
(http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

21

Figura 20. Aceite para inmersin


El aceite es raspado con una

hoja de bistur # 11 en direccin del

crecimiento del pelo, la muestra recolectada se coloca sobre una laminilla y


se extiende con la hoja con un movimiento de untar mantequilla al pan. Se
raspa

de

10 a

15 veces

especialmente

cuando

se

sospecha

demodcica, como se muestra en las figuras 21 y 22.

Figura 21. Raspado superficial en gato

Figura 22. Portaobjetos

Se recomienda realizar de 3 a 5 laminillas por cada sitio de muestreo.

sarna

Se utiliza un cubreobjetos para permitir una evaluacin rpida y completa


de los restos recolectados y se examinan la(s) lmina(s) sistemticamente
con bajo aumento (x10 x40) del ngulo superior izquierdo al ngulo inferior
derecho, como se muestra en las figuras 23 y 24 .

22

Figura 23. Cubreobjetos

Figura 24. Observacin al microscopio

4.1.2. RASPADOS PROFUNDOS DE PIEL


4.1.2.1. MATERIAL
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersin
Hoja de bistur
Mquina para rasurar

4.1.2.2. TCNICA
Puesto que los caros de Demdex canis y felis viven en el folculo piloso, es til

presionar la piel tan fuerte como lo tolere el paciente antes del raspado con el fin
de sacar a los caros de la profundidad de los folculos. Como se muestra en la
figura 25. [Consultado el 8 de abril del 2010].
(http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

23

Figura 25. Presin de la piel


Se

utiliza

una

hoja

recubierta

con

aceite

mineral

en

direccin

del

crecimiento del pelo hasta que se observe sangrado capilar.

Figura 26. Raspado profundo


Para evaluar un paciente con demodicosis, el raspado debe ser profundo,
hasta que se observe sangrado capilar. La piel debe ser presionada al
mximo para maximizar la recoleccin de caros.

Los miembros y la cara son raspados fuertemente, de tal manera que

pueda ser til el raspar las reas eritematosas adyacentes a las ppulas y
costras interdigitales para maximizar el material recolectado y minimizar el
sangrado asociado con el raspado.

24
La muestra recolectada se coloca sobre una laminilla y se extiende con la
hoja con un movimiento de untar mantequilla al pan. Y se le coloca un
cubreobjetos para observar al microscopio en el objetivo 10x y 40x.

Figura 27. Extendido de la muestra

Figura 28. Cubreobjetos

Los raspados negativos o el depilado de pelos de las reas interdigitales no


descartan la pododemodicosis; puede ser necesaria una biopsia para
confirmar o descarta el diagnstico.

El hallazgo de ms de un caro debe considerarse como diagnstico.

25

5. TOMA DE MUESTRA DE CULTIVO PARA DERMATOFITOS

Est indicado un cultivo de hongos en cualquier perro o gato con posible infeccin
por hongos y por ello en cualquier paciente con alopecia, ppulas, pstulas y/o
costras. [Consultado el 8 de abril del 2010].
(http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

5.1. MATERIAL
Portaobjetos
Hoja de bistur
Cinta adhesiva
Papel higinico

5.2. TCNICA
Deben tomarse pelos y escamas del borde de la lesin (preferiblemente
aquellos que fluorescan bajo la lmpara de Wood).
Si las lesiones no estn bien circunscritas o si se sospecha de un portador
asintomtico, se recomienda el mtodo McKenzie del cepillo de dientes.
En sta tcnica, el pelo es cepillado con un cepillo de dientes estril
(cualquier

cepillo de dientes nuevo en una caja sellada est lo

suficientemente

estril

micolgicamente).

Las

escamas

los

pelos

desprendidos

recolectados

en

el

cepillo

de

dientes

son

colocados

suavemente en agar. Figura 29.

26

Figura 29. Un cepillo dental estril puede ser empleado para recolectar pelos.

Figuras 30 y 31. La superficie del agar es tocada delicadamente con las cerdas del
cepillo, inoculando el medio cultural. Tomado de:
(http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
El medio agar Sabouraud es el medio para cultivo de hongos ms comn.
En la prctica se usa frecuentemente el medio de prueba para dermatofito
(DTM). El DTM es esencialmente un agar Sabouraud con indicador de color
e ingredientes adicionados que inhiben el sobrecrecimiento de saprfitos y

bacterias.

27

5.3 CONSERVACIN
Despus de ser inoculado, la caja de cultivo debe ser incubada entre 25C
y 30C con 30% de humedad, o en un rincn oscuro y calientito, sin cerrar
la tapa de rosca completamente hasta abajo.
Los cultivos deben ser incubados durante 2 a 3 semanas y ser evaluados
diariamente. [Consultado el 8 de abril del 2010].
(http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

28
5. 4. TRICOGRAMA
Los tricogramas pueden ser tiles en cualquier animal alopcico as como tambin
en

animales sospechosos de dermatofitosis ppulas,

pstulas o costras

asociadas. (Ackerman, 2008).


5.4.1. MATERIAL
Pinzas sin diente
Portaobjetos
cubreobjetos
Aceite mineral
5.4.2. TCNICA
Se utilizan unas pinzas para arrancar fuertemente los pelos de la piel
afectada. Ver figuras 32 y 33.
Los pelos son colocados sobre una lmina y se evala con bajo aumento.
Se coloca aceite mineral y cubre objeto para prevenir que la muestra de
pelo se vuele sobre la mesa en vez de permanecer bajo el microscopio.
Figura 34.

Figura 32 y 33 Toma de muestra

Figura 34 Muestra en portaobjetos


29

6. EXAMEN CON LMPARA DE WOOD

Cualquier perro o gato con posible infeccin con Microsporum canis debe ser
examinado con la lmpara de Wood.
Cualquier

paciente con

alopecia,

ppulas, pstulas

y/o costras pueden

beneficiarse de este procedimiento. (Ackerman, 2008).

6.1.

MATERIAL
Lmpara de wood

6.2.

TCNICA
La lmpara de Wood debe entibiarse por 5 minutos antes de utilizarse pues
la estabilidad de la longitud de onda de la luz y la intensidad dependen de la
temperatura.
El animal se examina bajo la lmpara en cuarto oscuro.

Figura 35. Lmpara de wood

30

Los pelos invadidos por M. canis pueden mostrar una fluorescencia amarilla
verdosa. Esta fluorescencia se presenta lo largo del tallo del pelo, a
diferencia de la fluorescencia discreta de escamas individuales ocasionales
que puede verse en animales y humanos normales.
Algunos medicamentos, jabones y bacterias tales como la Pseudomonas
aeruginosa pueden tambin producir fluorescencia pero usualmente no est
asociada con los tallos del pelo.
La fluorescencia positiva es diagnstico de dermatofitosis y el M. canis es
por mucho el dermatofito fluorescente ms comn en medicina veterinaria.
Figura 36.
Otros

dermatofitos

pueden mostrar

fluorescencia,

pero

estos

no

son

relevantes en dermatologa veterinaria.


La ausencia de fluorescencia no debe descartar la dermatofitosis. Los
siguientes pasos son el cultivo de hongos y/o la biopsia.

Figura 36. Fluorescencia de los metabolitos dermatofticos sobre la cola de un


paciente felino, utilizando la lmpara de Wood.
Tomado de: Atlas de dermatologa en pequeos animales, 1 ed. B uenos aires:
Inter-Mdica, Ackerman, Lowell 2008.

31

7. CULTIVO BACTERIANO

Los

cultivos

bacterianos

se

emplean con poca

frecuencia

en dermatologa

veterinaria. La mayora de las afecciones bacterianas de la piel son causadas por


Staphylococcus intermedius. Si los cocos se identifican citolgicamente, la terapia
antibacteriana

emprica

es

suficiente

en

la mayora

de

los pacientes.

[Consultado el 20 de abril del 2010].


(http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

La terapia emprica en dosis apropiadas por un tiempo apropiado no ha logrado


resolver la pioderma (las lesiones estn an presentes y la citologa an revela
cocos). Numerosas bacterias en forma de bastn son identificadas en

las

muestras citolgicas de los canales auditivos. Estos organismos juegan rara vez
un papel importante en las infecciones cutneas de los pacientes que clnicamente
no responden a la terapia emprica.

7.1. Material
Gasas
Solucin salina
Recipiente estril

32

7.2. TCNICA
Los frotis son tomados de los canales auditivos como se describe en las
muestras para citologa. [consultado el 25 de abril del 2010].
(http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
Los aspirados de pstulas intactas son tiles en pacientes con pioderma
superficial.
Los frotis de la superficie de la piel para el cultivo de organismos de
pacientes con pioderma profundo no son convenientes. Las muestras son
tomadas de manera similar a la que se utiliza en biopsias bajo condiciones
aspticas (lavado de la superficie de la piel y la utilizacin de instrumentos y
guantes estriles). La mitad superior de la muestra de tejido con la
epidermis y el pelo se corta y la mitad inferior se introduce en un recipiente
estril colocado sobre una compresa de gasa estril empapada en solucin
salina estril para cultivo de macerado. Esto previene el sobrecrecimiento
en el cultivo de bacterias superficiales no relevantes a la infeccin profunda.
Cada muestra para cultivo y sensibilidad debe estar acompaada por un
examen citolgico y los resultados del cultivo deben ser interpretados en
relacin a los hallazgos citolgicos.

33

8. TCNICAS DE COLECCIN CON HISOPOS DE ALGODN

Se usan en sitios donde no hay fcil acceso para las otras tcnicas de coleccin,
como en el canal del odo, en la vagina, prepucio, ano, mucosa conjuntival,
mucosa oral o en lesiones fistulosas. (Feldman y Nelson, 2000).

8.1. MATERIAL
Hisopos estriles
Portaobjetos
Solucin salina

Figura 37. Material para hisopados

34

8.2. TCNICA
Se introduce el hisopo dentro del canal lentamente, en los pacientes con
piel seca, (Figuras 38, 39, 40, 41 y 42), el hisopo de algodn puede
humedecerse con solucin salina y frotarlo sobre la superficie de la piel
afectada antes de ser rotada sobre la lmina. (Aguilar et al, 2005).
Se hace girar rotndolo con los dedos ndice y pulgar, y se retira con
cuidado para no contaminarlo con otros tejidos.
Estar bien tomada si observamos un ligero color caf en el hisopo. Una
vez tomada la muestra se introduce el hisopo hasta el fondo en un tubo con
medio de transporte Cary-Blair que debe estar bien tapado (tapn de
rosca).
Despus, se rueda el hisopo sobre una laminilla, ejerciendo una ligera
presin con el dedo sobre la varilla para hacer impresiones lineales. Y se
deja secar al aire. Figuras 43, 44 y 45.
Se recomienda realizar dos o tres impresiones en cada laminilla.
En pacientes con piel hmeda o grasosa, se puede frotar la lmina o tomar
directamente la impresin sobre la piel afectada.

35

Figura 38. Citologa vaginal

Figura 40. Hisopado en mucosa oral

Figura 39. Hisopado conjuntival

Figura 41. Hisopado de odo

36

Figura 42. Hisopado en ano

Figura 43. Muestra de mucosa conjuntival Figura 44. Muestra de heces

Figura 45. Muestra de citologa vaginal


37

8.3 ENVO
Para estudios bacteriolgicos se enva inmediatamente despus de haberse

tomado. No hay que refrigerar la muestra. [consultado el 2 de mayo del


010].(http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la
_toma_de_muestras_finales.pdf).
En caso de ser para estudios virales mandarlo en refrigeracin, aunque no
se recomienda usar hisopo para el caso de virus, en sta tcnica s se
recomienda refrigerar la muestra.

38

9. TCNICA PARA MUESTRAS EN CINTA ADHESIVA

9.1. MATERIAL

Cinta adhesiva
Portaobjetos
Azul de metileno
Cubreobjetos
Aceite de inmersin

9.2. TCNICA
La tcnica de impresin directa utiliza cinta adhesiva transparente para recolectar
desechos de la superficie de la piel. Aunque rpido, este mtodo necesita prctica
para establecer que es "normal." (Ackerman, 2008).
La cinta se presiona con el lado adhesivo hacia abajo sobre la piel.
La cinta se presiona por el lado pegante sobre la piel afectada.
Luego, se presiona (de nuevo con el lado adhesivo hacia abajo) sobre una
gota de azul de metileno o tincin azul de DiffQuick sobre una laminilla.
Se presiona luego con el lado pegante hacia abajo sobre una gota de azul
de metileno sobre una lmina.

39
La cinta sirve como cubreobjeto: La lmina puede ser evaluada an bajo
aceite de inmersin

(con una pequea gota de aceite colocada

directamente encima de la cinta).


Esta tcnica es especialmente til para la evaluacin de Malassezia. Otros
elementos

de

inters

que

pueden

ser

identificados

incluyen

clulas

inflamatorias tales como neutrfilos (los cuales pueden haber pasado a

travs de la epidermis en respuesta a una infeccin superficial), clulas


epiteliales nucleadas (lo cual no es normal y reflejan una anomala de
queratinizacin), cocos (bacterias esfricas), bacilos (bastones rectos),
macrfagos,

caros

de

Demdex de

cuerpo

pequeo,

Cheyletiella

ocasionalmente caros de Sarcoptes.


9.3. Tincin
Se puede utilizar una coloracin de Wright modificada (por ejemplo, Diff Quick)
para colorear las laminillas secadas al aire. Es mucho ms rpida y ms fcil que
la coloracin de Gram y suficiente para evaluar casi todas las muestras citolgicas
de piel. Sin embargo, la coloracin de Gram es igualmente adecuada. (Ackerman,
2008).

40

10. OBTENCIN DE MUESTRAS PARA CITOLOGIA


La tcnica para la coleccin de muestras en citologa depende de la localizacin y
de las caractersticas del tejido. (De buen et al, 2001).
Para las diferentes muestras el envo es el mismo:

Los portaobjetos que han de enviarse a un laboratorio deben secarse al aire


y colocarse en contenedores adecuados para el transporte de portaobjetos,
los cuales por lo general son provistos por el laboratorio.
Los portaobjetos deben transportarse a temperatura ambiente para evitar
que el agua se condense en la superficie y produzca la lisis de las clulas.
Lo ideal sera que las muestras citolgicas se enven al laboratorio en forma
separada de los tejidos fijados en formalina para evitar el contacto con los
vapores de formalina, los cuales pueden inhibir la ptima tincin de los frotis
secados al aire.
Las muestras citolgicas deben entregarse al laboratorio junto con la
siguiente informacin:
a) Descripcin detallada
b) Breve historia clnica
c) Hallazgos relevantes del examen fsico,
d) Terapia previa,
e) Resumen de los resultados de los exmenes
f)

Diagnsticos pertinentes,

g) Diagnstico tentativo, y sitio donde se tom la muestra.


h) Esta informacin es til para que patlogo realice la interpretacin.

41
10.1. ASPIRACIN CON AGUJA FINA
10.1.1.

ASPIRACIN DE NDULOS

Esta tcnica ayuda a obtener muestras de masas, lquidos y lesiones cutneas.


Mientras ms blando sea el tejido a muestrear, menor ser el calibre de la aguja y

menor, tambin, la presin negativa que se ejerza al momento de la aspiracin.


(El mbolo se retrae hasta la marca de 3 a 7ml). (Aguilar et al, 2005).
10.1.1.1 MATERIAL
Jeringas de 10, 12 ml y aguja calibre 21 a 25.
Mquina para rasurar
Alcohol al 70%
Torundas de algodn o gasas estriles.
10.1.1.2 TCNICA
El sitio de la aspiracin, se rasura y se limpia bien con alcohol, se agarra
firmemente el ndulo y entonces se inserta la aguja , aspirando varias
veces, en varias direcciones en el centro y en la periferia de la masa (hasta
la marca de 10 ml si es posible), se libera la presin y se saca la jeringa con
la aguja an adherida. (Aguilar et al, 2005).

Figura 46. Embrocado

Figura 47. Aspirado


42

Es importante liberar la presin antes de retirar la aguja, si no el aspirado


puede ser succionando dentro del tubo de la jeringa, de la cual este puede
no ser recuperado. (Davidson et al, 2000).
Se desconecta la aguja, el mbolo se jala hacia atrs y la aguja se vuelve a
reconectar, como se muestra en las figuras 48 y 49.

Figura 48. Liberacin de presin

Figura 49 Aspirado para presin

Las clulas son vertidas sobre un portaobjetos. Figura 50.


Y se realiza un frotis lineal o en cruz, posteriormente se tie, se deja secar
al aire y se observa al microscopio. En un objetivo de 10x, 40x, 100x. Ver
figura 51.

Figura 50. Portaobjetos

Figura 51. Frotis en cruz

43
10.2 AGUJA FINA SIMPLE SIN ASPIRACIN

10.2.1 MATERIAL
Jeringas de 3ml, 5ml y aguja calibre 21 a 25.
Mquina para rasurar
Alcohol al 70%

Torundas de algodn

10.2.2. TCNICA
ste mtodo se ha convertido en una prctica muy comn hoy en da.
(Aguilar et al, 2005).
Se inicia rasurando la zona donde se va a puncionar, se desinfecta el rea
con isodine espuma y se retira con alcohol al 70%, con torundas de
algodn, como se muestra en las figuras, 52 y 53.

Figura 52. Rasurado

Figura 53. Embrocado

44
Se realiza en forma similar al aspirado, con la diferencia de que la aguja no
est conectada a una jeringa no se ejerce una presin negativa.
Solamente se introduce la aguja al tejido de inters y se imprime un
movimiento de vaivn para obtener una muestra limpia y sin contaminacin
sangunea, como se muestra en la figura 54.
Se punciona en varias direcciones y posteriormente se retira y se coloca el
contenido en un portaobjetos conectando la jeringa a la aguja para expulsar

el contenido obtenido, como se muestra en la figura 55 y 56.


Se realiza un frotis lineal en cruz, se tie y se observa al microscopio en
10x, 40x.100x (con aceite de inmersin), como se muestra en la figura 57.

Figura 54. Puncin de masa

Figura 56. Expulsin del contenido

Figura 55. Puncin en varias direcciones

Figura 57. Frotis en cruz


45

10.3. PREPARACIN DE LOS FROTIS


10.3.1 FROTIS EN CRUZ
Las dos laminillas se mantienen en forma de cruz y sin ejercer presin.
La laminilla superior se desliza hacia donde marca la flecha, para efectuar
el extendido de las clulas, y el frotis se obtiene en la laminilla inferior,
como se muestra en la figura 57.

Se debe secar al aire para la fijacin de los frotis.


Se recomienda realizar siempre un mnimo de tres a cinco frotis de cada
muestra obtenida. Los frotis no se refrigeran.
Si el material es de viscosidad moderada, como la sangre, se puede hacer
un frotis estndar, cuya fuerza de separacin celular es ligeramente inferior
a la de las laminillas en cruz. (Aguilar et al, 2005).

10.3.2 FROTIS ESTNDAR

Se coloca una pequea gota de material sobre una laminilla portaobjetos.


Con otra laminilla se forma un ngulo de aproximadamente 45.
La laminilla superior se desliza hacia atrs, hasta tocar la muestra, y
despus hacia delante, para efectuar el extendido de las clulas.

46
El resultado es un frotis en forma de pluma que muestra tres diferentes
densidades, como el frotis sanguneo. Vase figura 58. (Davidson et al,
2000).

Figura 58. Frotis estndar


Tomado de: Manual de patologa clnica en pequeos animales, Davidson et al,
2000.

10.3.3 FROTIS LINEALES


Se mantiene la laminilla superior en un ngulo cercano a los 80.
El extendido sobre la laminilla inferior se suspe nde a la mitad del camino.
Con este procedimiento se obtiene un frotis que, en su eje horizontal,
contiene pocas clulas, mientras que en su eje vertical (el frotis lineal,
propiamente dicho) hay ms clulas. En la mayora de los casos, se
recomienda centrifugar previamente la muestra, con lo cual se obtienen
mejores resultados.
Se recomienda realizar rutinas de tres a cinco frotis por cada muestra
obtenida.
47

Este mtodo se recomienda si la muestra es un lquido no viscoso y casi


transparente, ya que no hay fuerza de separacin de las clulas o es
mnima. Ver figura 59.

Figura 59. Frotis lineal


Tomado de: Manual de patologa clnica en pequeos animales, Davidson
et al, 2000.

5.3.4. IMPRESIONES
Son las huellas que quedan en una laminilla cuando se pone en contacto con un
tejido. Resultan adecuadas para las lesiones externas o durante cirugas, biopsias
o necropsias. (Aguilar et al, 2005).
Cuando

la lesin cutnea esta ulcerada, hay que tomar tres impresiones

antes de limpiar la lcera y tres despus de limpiarla.


En el caso de las biopsias o de material de necropsias, se cortan cubos de
tejido de 0.5 a 1.0 cm de dimetro. Cuando hay lesiones con exceso de
lquido o de sangre que impiden la adhesin adecuada de las clulas a la
laminilla, se sugiere hacer impresiones suaves sobre papel absorbente
(toallas de papel para secar las manos).
48
Las impresiones se efectan hasta que el papel absorba poco lquido, esto
indica que la muestra esta lista para realizar las impresiones sobre las
laminillas.
Una vez que el tejido esta seco, se recomienda realizar varias impresiones
sobre la misma laminilla para tener mayor superficie de evaluacin.
Se sugiere hacer de tres a cinco laminillas de diferentes cortes, para tener
una mejor idea del tipo de poblacin celular que se encuentra en el tejido, y
para efectuar coloraciones especiales en los casos que lo requieran.

49

11. BIOPSIA DE PIEL (tcnica de sacabocados).

La biopsia para examen histopatolgico (evaluacin microscpica de los tejidos)


es de especial importancia en dermatologa, puesto que e l tejido de inters (la piel)
es de acceso inmediato. Si bien es una herramienta valiosa, no se debe aguardar
que la biopsia defina todo el cuadro. Revela cambios en una regin diminuta de la
superficie cutnea en un momento temporal particular.
Las biopsias pueden ser obtenidas mediante escisin de toda la patologa, incisin
lesional y remocin de una parte representativa o, con mayor frecuencia, con
sacabocados.

Cuando

se

realiza

el

procedimiento,

preferencias a lesiones primarias o secundarias tempranas.

es

importante

brindar

Los cambios ms profundos, como ulceracin, fibrosis y alopecia completa,


tienden a resultar menos diagnsticos. Por este motivo, es mejor remitir varias
secciones para evaluacin, a partir de una variedad de diferentes lesiones y
estadios de desarrollo. Junto a la muestra, el patlogo debe recibir el historial
clnico con los posibles diagnsticos diferenciales.
No deben hacerse biopsias de lceras ni erosiones. No hay que esperar que un
patlogo sea capaz de describir en forma ms especfica "una lcera" si hace
biopsia de una lcera o "erosin costrosa" si se selecciona un rea excoriada.
(Ackerman, 2008).

50
11.1. Preparacin del sitio
Con excepcin de la biopsia incisional de los ndulos, no se emplea la
preparacin quirrgica del sitio. An la aplicacin tpica de alcohol y el
secado al aire puede alterar la epidermis.
Si hay presencia de costras, estas deben dejarse sobre la piel. Si stas son
desalojadas accidentalmente stas deben ser colocadas en formalina y se
debe aadir una nota "por favor corte en la costra" en el formulario de
solicitud.
Las costras pueden contener microorganismos o clulas acantolticas que
pueden ayudar a obtener el diagnstico. La infeccin como resultado de
una ausencia de preparacin quirrgica no parece ser

un problema.

(Ackerman, 2008).

11.2. Biopsia excisional o incisional vs. Biopsia de perforacin


Hay dos tcnicas de biopsia utilizadas comnmente en medicina veterinaria
1. Biopsia incisional
2. Biopsia de perforacin
La segunda se emplea corrientemente como una tcnica de extirpacin cuando se
quitan ndulos solitarios. Tambin est indicada para vesculas (las cuales son
tpicamente ms frgiles para sobrevivir a la biopsia de perforacin sin que se
rompan), en casos sospechosos de paniculitis (en la cual la suficiente profundidad
de la biopsia no puede lograrse con la puncin) y cuando se biopsia el extremo de
una lesin en forma de huso (lo cual permite la orientacin correcta de la lesin en

51
el

laboratorio

donde

las

lesiones

en

forma

de

huso

se

cortan

siempre

longitudinalmente).
La biopsia de perforacin es rpida, relativamente atraumtica y generalmente se
emplea cuando se sospecha de dermatosis infecciosa, inflamatoria y endocrina.
Los instrumentos desechables para la biopsia de perforacin estn disponibles en
varios tamaos. Estos pueden ser esterilizados al fro y utilizados nuevamente.
Con excepcin de la biopsia de cara y patas, se debe utilizar un instrumento de 8
mm. Se emplean los instrumentos de perforacin ms pequeos con un dimetro
de 4 o 6 mm para biopsias de cara y pie. Los instrumentos de perforacin muy
pequeos (por ejemplo 2 a 3 mm) no son tiles en la prctica de pequeos
animales con excepcin de biopsias de prpado. (Ackerman, 2008).

11.3. MATERIAL
Mquina para rasurar
Marcador de agua
Jeringas de 3ml
Gasas
Sacabocados
Formalina al 10%

11.4. TCNICA
Se rasura la capa de pelo retirando suavemente y el sitio donde se har la
biopsia se delimita con un marcador a prueba de agua . Si hay presencia de
costras, puede ser menos traumtico usar tijeras. (Ackerman, 2008).

52

Figura 60. Se traza un cuadrado alrededor de la muestra para biopsia.

Figura 61. El anestsico local se inyecta subcutneamente.


Se debe aplicar anestesia local, inyectar como mnimo 0.5 cc o ms de
lidocana en el espacio subcutneo.
Utilizar sacabocados del tamao adecuado (4 a 8 mm) para muestrear la
lesin, manteniendo el rea de inters en el centro del instrumento, como
se muestra en la figura 53.
Aplicar presin mientras se gira el instrumento, a los efectos de avanzar con
mnimo retorcimiento del tejido. Para evitar el dao del tejido subyacente,
es mejor levantar un pliegue de piel para alejarse de aquel.
Alcanzar el espacio subcutneo con pinza, socavar el subcutis por debajo
de la muestra y recortar con tijera de ciruga. No asir el tejido de inters.

53
Sacar la muestra

y colocar en un recipiente con formol.

El

volumen

requerido de formalina es de por lo menos 10 veces el volumen de la


muestra.
El defecto que queda se puede curar con suturas o grapas.
Los ndulos deben ser seccionados en pedazos de 1 cm de grosor para
permitir la adecuada penetracin de la formalina al centro de la lesin.

Figura 62
El instrumento de perforacin se coloca verticalmente sobre la superficie y se hace
rotacin en una sola direccin.
Tomado de: Atlas de dermatologa en pequeos animales, Ackerman 2008.

Figura 63
La muestra es quitada sujetando su base con una pinza y cortndola.

54

Figura 64
Si la muestra de la biopsia es delgada, sta se coloca sobre un cartn o abate
11.5. ENVO
Para aumentar las posibilidades de recibir un reporte que sea diagnstico,
es importante el completar cuidadosamente los formularios apropiados para
solicitar el examen de la biopsia de la piel, incluyendo la historia clnica y el
examen fsico.

Es importante una lista de diagnsticos diferenciales en cualquier caso


clnico pero es esencial en pacientes dermatolgicos. La seborrea o tractos
de drenaje pueden ser el resultado de un amplio rango de procesos de
enfermedad. Esta lista es importante para que el clnico este seguro que l
o ella ha considerado todas las opciones y ha obtenido tanta informacin
como sea posible tanto de la mascota como del propietario ya antes de
tomar la biopsia. Es igualmente importante para el patlogo y puede ayudar
en la eleccin de la tincin especial para descartar o confirmar afecciones
inusuales. (Ackerman, 2008).

55

12. OBTENCIN DE MUESTRAS PARA BIOPSIA


Obtenidas a partir de pacientes vivos para establecer la naturaleza de un tejido
anormal que puede observarse macroscpicamente, detectarse clnicamente o
mediante el uso de tcnicas de imagen (radiografa, tomografa o ecografa).
El

examen

enfermedad,

histolgico

puede

ayudar

establecer

la

es

puede

ayudar

diferenciar

una

decir,

naturaleza
neoplasia

de una
de

una

inflamacin o de un cambio degenerativo. (Davidson et al, 2000).


La recogida de muestras y el examen citolgico implican la obtencin y la
preparacin de clulas individualizadas o de pequeos grupos de clulas. Estas
clulas se obtienen in vivo a travs de distintas vas.
Estas incluyen: desprendimiento o exfoliacin natural (por ejemplo, descamacin a
partir de la piel o de las mucosas oral, vaginal, anal etc.); eliminacin natural a
travs de la orina, esputos u otras secreciones (por ejemplo, oculares, nasales,
auriculares); o aspiracin mediante agujas de varios calibres, cnulas o catte res

(por ejemplo, a partir de cavidades corporales o de rganos macizos).


12.1. TCNICA
Las muestras celulares se depositan sobre portaobjetos inmediatamente
despus de recogerlas. (Davidson et al, 2000).

Se extienden y se secan rpidamente al aire o se fijan en alcohol al 95%,


antes de teirlas y examinarlas con el microscopio.
Cuando

las

centrifugarse

muestras

suavemente

son

predominantemente

para

concentrar

mediante el uso de una citocentrfuga.

las

liquidas

clulas

suelen

se

procesan

rgano o localizacin

Tipo de biopsia

Piel

Escisional
Incisional
Exfoliacin (improntas)

Ndulos linfticos
perifricos

Incisional (aguja)
Escisional (impronta)
Escisional
Incisional (aguja fina)

Aparato reproductor:
Macho: Testculos

Comentarios
-Consideraciones de lugar y
tamao.
-Lesiones solitarias, mltiples
o generalizadas
-Agujas normalmente no tiles.
-Perforador de keyes.
-til en ulceraciones o
neoplasias.
-Las agujas son tiles

-Se acostumbra a realizar una


orquidectoma bilateral.
-Dificultad para interpretar la
aspiracin con aguja fina.

Exfoliacin
Incisional (aguja)
Prstata
Exfoliacin
Escisional/incisional
Hembra: Vagina

Mamas

Escisional; incisional
Escisional
Incisional
Exfoliacin (secreciones)

Aparato urinario:
Rin

Incisional
Escisional

Vejiga

Exfoliacin

Masaje prosttico a travs del


recto
Las tcnicas con aguja son
difciles; evitar va recto.
-Consideraciones de lugar y
tamao.
-Incluir ndulos linfticos
cuando sea necesario.
-Problemas de cicatrizacin.
-Agujas tiles si el paciente es
de avanzada edad o est
debilitado.
-til en mastitis o neoplasias.
-Normalmente con agujas Vimsilverman; posible hemorragia.
-Si todo el rgano es
claramente anormal.
-Centrifugar o sedimentar la
muestra completa; rpido
56

Incisional
Hgado

Incisional

Tracto digestivo:
Cavidad oral

Exfoliacin (improntas)
Escisional; incisional

Tracto superior:
Esfago

Estmago

Tracto intermedio:
Intestino delgado

Tracto inferior:
Colon
Recto
Ano

Tracto respiratorio:
Cavidad nasal

Exfoliacin
Escisional

Escisional; incisional

Escisional
Pocas veces incisional

Escisional
Pocas veces incisional

deterioro.
-Consideraciones de tamao y
lugar
-La reseccin en forma de
cua requiere laparotoma.
-til aguja de gran calibre
(Menghini)
-Dificultad para interpretar la
aspiracin con aguja fina.

til si hay abrasin de la


superficie.
Consideraciones de lugar y
tamao.
Endoscopia y fibra ptica con
recogida de muestras con
cepillo de citologa o con
pinzas de biopsia.
Consideraciones de tamao;
endoscopia con pinzas de
biopsia si es pequea.
Normalmente requiere
laparotoma.
No es posible usar la
endoscopia; requiere
laparotoma o capsulas de
biopsia.
Puede alcanzar el leon distal.
Consideraciones de tamao;
endoscopia con pinzas de
biopsia si es pequea.

Escisional; incisional
Exfoliacin (improntas)

Consideraciones de lugar y
tamao.
til si es accesible o mediante
legrado de la lesin.

Exfoliacin

Secreciones nasales o

57

58

Escisional; incisional

Vas areas

Exfoliacin
Escisional; incisional

Pulmones

Escisional
Incisional

irrigacin con solucin


isotnica.
Consideraciones de tamao y
grado de invasin.
Esputos o irrigacin mediante
broncoscopio.
Muestreo con pinzas de
biopsia mediante
broncoscopio.
Lobectoma va toracotoma
Agujas (de gran calibre o

finas) mediante la tcnica


abierta o percutnea.
Reseccin va toracotoma
Tipos deTomado
biopsia de: Manual deBreve
descripcin
y caractersticas
patologa
clnica veterinaria
en pequeos animales,
Escisional

Incisional

Con trocar

Con aguja

Endoscpica

Exfoliativa

Davidson et al, 2000.


-Extirpacin quirrgica
-A menudo requiere anestesia general
-Son importantes las consideraciones de lugar
y
-Eliminacin nicamente de una parte representativa de
la lesin.
-Problemas de cicatrizacin si es una neoplasia
-Permite la planificacin de abordajes teraputico
s
adicionales. de un cilindro de tejido
-Eliminacin
-Normalmente uso limitado a la piel
-Eliminacin de un pequeo ncleo cilndrico de tejido o
nicamente de clulas.
-Es importante la precisin; es til guiarlas mediant
e
ecografa
-Poco invasiva
-Eliminacin
de pequeas muestras por avulsin o por
escisin mediante pinzas de biopsia de los tracto
s
digestivo y respiratorio y de los orificios corporales.
-Pequeas muestras de tejido
-Poco invasiva
-Requiere sedacin o anestesia general en funcin del
lugar
de muestreo.
Recogida
de clulas descamadas (de forma natural
por legrado) procedentes de superficies externas
o
internas.
Normalmente se realiza un estudio citolgico.
Simple y fcil, en funcin de la localizacin.

12.2. TIPOS DE BIOPSIA


CUADRO 3. Diferentes tipos de biopsia

59

Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales,


Davidson et al, 2000.
A continuacin se explica de forma general como se obtienen las muestras por
biopsia.

60
12.3. BIOPSIAS ESCISIONALES E INCISIONALES
La biopsia escisional permite extirpar la lesin entera en una sola operacin. En
cambio

la

biopsia

incisional

elimina

de

forma

deliberada

solo

una

parte

(idealmente representativa) de la lesin. Por lo general basta con este tejido para
los propsitos diagnsticos o de planificacin, ya que es posible que la lesin
est situada cerca de un tejido u rgano vital y la extirpacin comprometa la
integridad

del

rgano,

que

la

lesin sea

infiltrativa

que

sea

necesario

determinar su naturaleza (neoplsica, maligna o benigna) antes de ir ms all.


No se necesitan instrumentos especiales para las biopsias escisionales o

incisionales; es suficiente con el instrumental quirrgico estndar, es decir,


bistur, pinzas con dientes, tijeras, mosquitos e instrumental de sutura. Hay que
tener cuidado con la biopsia escisional cuando existe alguna duda sobre la
capacidad de coagulacin sangunea del paciente.
Denominacin

Gran calibre

c
p

Aguja fina

Nombre

Vim-silverman
modificada
Tru-cut

14

Osgood

15/16

Jamshidi

15

Menghini
Hipodrmica

15
21-25

Ventajas

14

Muestra

Cuando
se
Cilindro de tejido (todos los obtiene
rganos y tejidos).
una
Medula
sea
(tejid biopsia
o
medular + sangre).
Trepano seo (hueso + por in
medula).
isin
Cilindro de tejido
(hgado) de ara
Clulas
(aspiracin
cualquier rgano).
realizar
Desventajas
Cilindro de tejido (rin).

un estudio
-Poco
invasivas pero
depende de -Tamao de muestra pequeo; puede
estarsefragmentada.
la
histopatolgico
antes de planificar una ciruga ms radical,
recomienda que el
localizacin.
tejido incluya un margen de tejido normal siempre que sea posible. (Davidson et
-Es posible que no sea representativa de
toda la lesin.
-Rpidas,
citologa
por
aguja
fina
en
menos
al, 2000).
de una hora.
-Es posible que no se muestree la lesin
focal, a menos que sea guiada mediante
-Repetibles;
depende
del
ecografa.
12.4. BIOPSIA
CON AGUJA Y CON TROCAR
tamao,
-puede dar falsos negativos.
localizacin y naturaleza de la lesin.
-Anestesia;
con anestesia
localobtener ncleos circulares
El trocar de
keyes, quesedacin
es ampliamente
utilizado para
-La interpretacin requiere un experto
ms que anestesia general.
de epidermis y dermis de 5 mm de dimetro o menores. Estos instrumentos son
(especialmente la aspiracin con aguja
adecuados
para la obtencin
mltiples debilitados
muestras cutneas de perros y gatos y
-Adecuadas
para de
pacientes
tambin cuando la lesin es pequea, focal y puede ser abarcada por el trocar de
biopsia. Las biopsias elpticas pueden realizarse bajo sedacin y anestesia local,
al igual que se hacen normalmente las biopsias de sacabocados. (Davidson et al,
2000).

61
12.4.1. MATERIAL
Las agujas para realizar biopsias son de dos tipos: las de gran calibre y las de

pequeo calibre, y su longitud vara entre los 12 mm y los 15 cm.


CUADRO 4. Tipos de aguja de biopsia

Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales,


Davidson et al, 2000.
CUADRO 5. Ventajas y desventajas de las tcnicas con aguja

62
fina).
-Relacin coste-eficacia,
ya que
a
instrumental de muestreo no es caro.

el -diseminacin

de

las

neoplasia maligna (raro).

clulas

de

un

Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos a nimales,


Davidson et al, 2000.

12.5. MANIPULACIN DE LOS TEJIDOS Y DE LAS BIOPSIAS


El manejo correcto de las muestras liquidas y tisulares despus de realizar la
biopsia o la extraccin es una fase importante a la que a menudo no se le presta la
suficiente atencin.
El manejo inicial tras su obtencin, la fijacin y el transporte de la muestra pueden
influir en el xito del diagnostico; las muestras mal fijadas o mal manipuladas,
especialmente si

son pequeas (por ejemplo, biopsia endoscpica), pueden

impedir que se realice un diagnostico lgico. (Davidson et al, 2000).

12.5.1. MUESTRAS LQUIDAS


La clave del xito est en que sean procesadas rpidamente, idealmente en el
mismo

da.

examinadas

Cuando
el

mismo

las
da

muestras
de

pueden

llevarse

su obtencin,

debe

al

laboratorio

disponerse

para

un

ser

volumen

representativo, no ms de 20 ml, en un contenedor estril sin fugas.


Si el lquido tiende a coagularse, debe emplearse EDTA o un anticoagulante
similar.
Cuando no sea posible procesar un lquido fresco sin fijar, deben realizarse
extensiones sobre portaobjetos. Si el lquido tiene una

de gran densidad celular,


63

puede extenderse una pequea gota de la suspensin utilizando la tcnica


hematolgica convencional. Es un mtodo similar a la tcnica estndar utilizada
para hacer extensiones sanguneas, las clulas ms grandes y los agregados
celulares tienden a distribuirse en el rea con forma de pluma de la extensin. Por

consiguiente,

el

extremo

portaobjetos.

Si

se

coloca

con

forma

de

demasiado

pluma

material

debe

se

terminar

perdern

dentro

estas

del

clulas,

especialmente si la viscosidad es baja o se aplica un ngulo o una velocidad


incorrectos a la hora de hacer avanzar el portaobjetos superior.
Cuando la densidad celular sea baja, el contenido celular debe concentrarse, si es
posible, mediante centrifugacin a 1.500 rpm durante 3-5 minutos o, si no hay una
centrifuga disponible, mediante la sedimentacin por gravedad de la muestra
durante unos 30 minutos. Las muestras de lquido cefalorraqudeo requieren un
manejo especial (Jannison y Lumsden, 1988) y deben estar listas para su examen
antes de pasada una hora desde su extraccin para evitar las alteraciones
morfolgicas.
Las

extensiones

deben secarse

lo

ms

rpido

posible

al

aire

agitndolas

vigorosamente o utilizando un pequeo secador de manos a baja temperatura.


Entonces pueden ser enviadas al laboratorio en un contenedor apropiado. No es
recomendable realizar la fijacin y el transporte en alcohol al 95%. (Davidson et al,
2000).

12.5.2. MUESTRAS HISTOLGICAS


El tamao de las muestras histolgicas vara desde unos pocos milmetros de
dimetro, en el caso de las biopsias endoscpicas y de los fragmentos exfoliados,
hasta grandes masas neoplsicas de 15-20 cm de dimetro o ms.

64
Las muestras histolgicas pequeas deben colocarse en una placa de Petri sobre
un soporte de espuma no vellosa o una base similar y deben humedecerse con
suero salino isotnico estril o con medio de cultivo para tejidos hasta el momento
de su fijacin, alternativamente, y si es posible, se fijan dentro de los 5-20 minutos
posteriores a su obtencin.

Las muestras grandes se colocan sobre placas o bandejas limpias y estriles (por
ejemplo, placas de petri o bandejas de acero inoxidable) antes de seleccionar las
reas que van a ser fijadas para el examen histopatolgico o utilizadas para otros
exmenes (por ejemplo, bacteriolgico o bioqumico).
Las muestras grandes siempre plantean un problema para los clnicos remitentes,
ya que el dogma tradicional de la fijacin de las muestras de tejido con formalina a
razn de un volumen de tejido por 10 volmenes de formalina, dejado de lado
por los anatomopatologos, a menudo queda anulado por el tamao y complejidad
de estas muestras. En el caso de masas bien definidas o encapsuladas, como las
neoplasias de la superficie cutnea de unos 3-4 cm de dimetro, la fijacin con
formalina a razn 1:10 todava es factible, pero permanece el problema de la
penetracin adecuada del fijador en la muestra. Si no se produce una correcta
penetracin, la muestra de tejido sufre una autolisis, lo que dificulta o imposibilita
la interpretacin histopatolgica.
El problema tiene una solucin lgica que puede aportar una informacin til
adicional para el diagnostico. En el caso de masas pequeas o de lesiones bien
definidas, nicamente con una biseccin es suficiente y la muestra puede fijarse
en forma de dos mitades (preferiblemente seccionadas de forma longitudinal). Si la
lesin debe ser dividida en dos, hay que hacerlo completa y uniformemente.
Muy a menudo el anatomopatolgico recibe muestras deformadas, que son
difciles de orientar y de convertir en bloques porquela muestra fresca fue
seccionada de forma incorrecta. Es posible que las lesiones de mayor tamao y
65
las lesiones irregulares tengan que ser sometidas a ms de una seccin o
seccionadas en ms de un plano. En estos casos es importante que el clnico
remitente informe al anatomopatlogo sobre lo que se ha hecho y de que partes
de la lesin, si no es completa, se han enviado. Esto puede hacerse mediante una
descripcin escrita, pero probablemente la mejor forma y la ms fcil de hacerlo es
enviando un diagrama comentado.

Nunca deben colocarse en un mismo contenedor las diferentes muestras tisulares


de un mismo animal (por ejemplo , una verruga cutnea, un pulis oral y un tumor
anal no deben depositarse juntos). La colocacin de mltiples muestras sin
identificar y procedentes de distintos lugares en un mismo contenedor provoca una
gran inquietud a los anatomopatlogos. (Davidson et al, 2000).

12.5.3. FIJACIN DE LA MUESTRA


La fijacin es el proceso por el cual se evitan o se previenen los cambios
autolticos que se producen en los tejidos, a menudo favorecidos por agentes
infecciosos, inflamaciones y por un mal manejo fsico despus de obtener la
muestra. El objetivo es utilizar un producto para fijar y conservar la arquitectura
celular para la interpretacin y la valoracin histopatolgica.
El mejor fijador para la mayora de propsitos diagnsticos es aun la solucin de
formalina, relativamente barata, fcil de usar y, si se maneja prudentemente, no es
toxica ni irritante para sus usuarios. Una gran ventaja es que la formalina es tan
buen conservante como fijador, por lo que los tejidos fijados con esta sustancia
pueden guardarse durante meses si es necesario. (Davidson et al, 2000).

66

13. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS DE ORINA

La orina es una sustancia potencialmente peligrosa porque pueden haber en ella


organismos causantes de zoonosis como, por ejemplo, los del gnero Leptospira;
por lo tanto hay que llevar guantes desechables durante la obtencin y el manejo
de las muestras de orina. (Davidson et al, 2000).

Es importante emplear el mtodo adecuado para la obtencin de orina.


Los principales son:

13.1. MICCIN ESPONTNEA


13.1.1. MATERIAL
Tubo recolector estril
13.1.2. Tcnica
La orina se recoge durante la miccin o mientras se exprime manualmente
la vejiga de la orina. La primera fraccin de orina es la mejor muestra
cuando se sospecha que la lesin se enc uentra en la parte

ms distal del

tracto urinario, por lo que sirve para obtener e identificar tapones uretrales,
cristales,
embargo,

urolitos,
tambin

bacterias,

infeccionesvricas

o hemorragias.

Sin

es la muestra con ms probabilidad de estar

contaminada con clulas, bacterias y restos celulares/ espermatozoides del


tracto genital y pelo circundante. Figura 65. (Davidson et al, 2000).

67

Figura 65. Miccin espontnea


La fraccin intermedia es la mejor muestra para la mayora de pruebas, y la
fraccin final de orina resulta optima para evaluar la existencia de una
enfermedad prosttica y, en algunos casos para obtener el sedimento o la
hemorragia que puede estar depositada en el suelo de la vejiga.
Hay que recoger la mayor cantidad de orina posible en un recipiente inerte y
estril de plstico, acero o cermica y luego transferido a un recipiente
estril.
La orina obtenida por miccin espontanea esta casi siempre contaminada
por bacterias; sin embargo es un mtodo aceptable para realizar el examen
fsico, examen qumico, medir el pH y evaluar el aspecto microscpico.
Este mtodo no es adecuado para realizar un cultivo urinario. (Davidson et
al 2000).

68
13.2. CISTOCENTSIS
13.2.1. MATERIAL
Jeringas de 5ml 10ml
Torundas de algodn
Alcohol al 70%
Yodo

Recipiente estril de plstico


Mquina para rasurar

Figura 66. Material para cistocentsis


13.2.2. TCNICA
Se debe sujetar al perro en posicin decbito lateral sobre la mesa de
exploracin. Es necesario que el perro o gato cuente con la vejiga pltora o
lo suficientemente llena como para palparse con facilidad a travs de la
pared abdominal. (Tachika, 2008).
Se prepara de manera antisptica la regin del abdomen caudal y ventral
(rasurado, lavado y embrocado).

69

Para realizar la cistocentsis, se debe ubicar perfectamente bien la vejiga


urinaria, a travs de palpacin abdominal externa , la vejiga llena de orina se
identifica por palpacin y se encuentra apoyada sobre la pared abdominal
ventral caudal.
Una vez que se ha localizado la vejiga urinaria, se procede a realizar la

puncin trans-abdominal con la jeringa de 5 o 10ml, en un ngulo de 45


grados, con un movimiento firme, pero cuidadoso y delicado. Ver figura 67.
Se succiona un poco el mbolo de la jeringa, para verificar si se obtiene
lquido (orina) y en caso de una muestra positiva, se termina de llenar la
jeringa, para despus retirarla del paciente rpidamente. Posteriormente se
coloca por unos segundos una torunda de algodn mojada con alcohol en
el sitio de puncin abdominal
La orina se recoge con una jeringa o en un recipiente estril, de tal modo
que pueda emplearse para el anlisis y/o para el cultivo microbiolgico y el
antibiograma. Ver figuras 68 y 69. (Davidson et al, 2000).
La cistocentsis se considera el mtodo de eleccin para la obtencin de
orina debido a que proporciona muestras no contaminadas por bacterias y
clulas procedentes de la uretra distal, lo que permite interpretar de forma
ms exacta los resultados de los cultivos y de los antibiogramas. (Elliot,
1996; Scott-Moncrieff, 1996).

70

Figura 67. Se introduce la aguja

Figura 68. Obtencin de muestra

Figura 69. Frasco estril de boca ancha

13.3. CATETERIZACIN
Es un mtodo til para identificar la localizacin de las obstrucciones parciales o
totales de la uretra, especialmente cuando son debidas a urolitos, estenosis o
cuerpos extraos. (Davidson et al, 2000).
La cateterizacin tambin se emplea en los estudios diseados para controlar el
volumen de orina y la tasa de produccin en estudios sobre insuficiencia renal,

71
para administrar el medio de contraste radiogrfico y para determinar el volumen
de orina que queda en la vejiga tras la miccin.
La cateterizacin es un procedimiento poco invasivo y bien tolerado por muchos
perros adultos, pero las perras, gatas y los gatos enteros requieren con frecuencia
la administracin de sedantes o de anestsicos generales. (Smarick et al, 2004).
Aunque es un procedimiento muy utilizado,tiene sus inconvenientes, pueden
transportarse los organismos presentes en la parte distal de la uretra y del tracto
genital

la

vejiga

y provocar

con ello

una

infeccin del

tracto

urinario.

(Biertuempfel et al, 1981).

13.3.1. MATERIAL
Mquina para rasurar
Sondas flexibles rgidas
Rin de plstico o metal
Tubo recolector estril
Gasas estriles
Solucin salina

13.3.2. TCNICA
Un ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito lateral sobre la
mesa de exploracin. (Tachika, 2008).
Un segundo ayudante debe limpiar con una gasa que contenga un poco de
solucin salina isotnica la punta del prepucio del perro. Con otra gasa, se
realiza el mismo procedimiento sobre la punta del pene.
72

El ayudante, quien previamente se ha puesto guantes estriles, recibe el


catter uretral estril y sin tocar al paciente, calcula la longitud que va a
introducir del mismo. Esto se realiza trazando de manera imaginaria el
trayecto que seguir el catter a travs de la uretra peneana, la uretra
prosttica hasta llegar finalmente a la vejiga urinaria.
Se retrae la piel del prepucio de manera que quede expuesta la punta del
pene y se visualice el orificio uretral, por donde se introducir gentilmente el
catter urinario, previamente lubricado con gel estril. Ver figura 70

Figura 70. Se retrae la piel y se introduce la sonda previamente lubricada.

Una vez que se ha introducido el catter y comienza a salir la orina a travs


del mismo, se obtiene la muestra en un recipiente estril. Figuras 71 y 72.

73

Figura 71. Obtencin de muestra

Figura 72. Obtencin de muestra

13.4. CONSERVACIN
El mtodo de conservacin es igual en las tres tcnicas mencionadas
anteriormente. (Aguilar et al, 2005).
Una vez que se ha obtenido, la muestra de orina debe ser analizada lo ms
pronto posible.
Existen diferencias de criterio entre autores, pero en ningn caso se
recomienda que se analice despus de dos horas cuando se dispone a
temperatura ambiente; si no se va a cumplir esta condicin, es necesario
refrigerarla y realizar el anlisis antes de cuatro horas. Si se requiere
mantener la muestra por ms tiempo, se deber dividir en dos porciones, y
conservar cada una de la siguiente forma:

74
-Formalina amortiguada al 40%. Se agrega 1 gota por cada 20 ml de orina. Se
utiliza para el examen del sedimento, con el fin de conservar las clulas y otros
componentes del sedimento; produce cambios pequeos en el pH, sin embargo,
interfiere con algunas determinaciones qumicas.
-Congelacin: se emplea para llevar a cabo los exmenes fsico y qumico. Este
mtodo

es

til

cuando

se
fotomtricas

van

hacer

determinaciones

colorimtricas como urea, creatinina y minerales.


Es muy importante que cuando se vaya a analizar una muestra que ha estado en
refrigeracin, se permita que esta alcance nuevamente la temperatura ambiente

(15-25C) para que se disuelvan los solutos que se precipitaron con la baja
temperatura. Antes de implementar cualquier tipo de terapia, es necesario realizar
un urianlisis o cualquier otra prueba de laboratorio.

75

14. OBTENCIN DE MUESTRAS DE CAVIDADES CORPORALES

El lugar y el modo de eleccin para recoger la muestra varan en funcin de la


especie, del lugar donde se sospecha que se encuentra la lesin y del operador.
Hay que utilizar tcnicas aspticas, incluyendo la preparacin quirrgica de la
superficie cutnea. Pueden usarse sedantes y anestsicos locales, pero suelen
ser muy necesarios. (Davidson et al, 2000).

14.1. TORACOCENTSIS

14.1.1. MATERIAL
Mquina para rasurar
Torundas de algodn
Alcohol al 70 %
yodo
Agujas de calibre 20-22 G
Tubo recolector estril

14.1.2. TCNICA
La toracocentsis se lleva a cabo con el animal de pie o en decbito
esternal. Suele realizarse en el tercio ventral del sptimo o el octavo
espacio intercostal. Se rasura y se embroca al paciente con isodine espuma
y alcohol al 70%. Ver figura 73.

76

Figura 73. Embrocado del paciente


Se introduce una aguja de 20-22 G de calibre cerca del borde anterior de la
costilla para reducir la probabilidad de lesionar los vasos sanguneos y los

nervios localizados en el borde caudal de cada costilla. Ver figuras 74 y 75.

Figura 74. Puncin en perro

Figura 75. Puncin en gato


77

Para disminuir el riesgo de lacerar los pulmones se utiliza una granula. Si


hay que drenar mucho liquido, se emplea una vlvula de tres vas para
evitar en lo posible un neumotrax. Ver figuras 76, 77, 78, 79.

Figura 76. Toracocentsis en perro

Figura 77. Toracocentsis en gato

Figura 78. Obtencin de muestra

Figura 79. Vlvula de tres vas

78

14.2. ABDOMINOCENTSIS
14.2.1. MATERIAL
Mquina para rasurar
Torundas de algodn
Alcohol al 70%
yodo
Aguja de 20-22 G catter negro
Rin de plstico o metal
Tubo recolector estril

14.2.2. TCNICA
La abdominocentsis se lleva a cabo con el animal de pie o en decbito
lateral. (Davidson et al, 2000).
Se rasura toda el rea abdominal del paciente, y posteriormente con
torundas de algodn se embroca con isodine espuma y alcohol al 70%.

Figura 80. Embrocado


79

La puncin suele realizarse 1-2 cm por detrs del ombligo en la lnea media
ventral.
Se utiliza una aguja de 20-22 G, con una longitud suficiente para penetrar el
grosor de la pared abdominal, catter color negro.
Se introduce la aguja y se obtiene el lquido por gravedad. Puede utilizarse
una branula y una vlvula de tres vas. Ver figuras 81, 82.

Figura 81. Puncin

Figura 82. Obtencin de muestra


80
14.3. CONSERVACIN
En las tcnicas de toracocentsis y abdominocentsis se utiliza el mismo mtodo
de conservacin y envo.
El

recuento

de

clulas

nucleadas

se

hace

mediante

mtodos

manuales

automticos. Si el recuento celular determinado ya sea por recuento ya sea por el


grado de turbidez del lquido es elevado, es decir, superior a 10 x 109 clulas por
litro, deben realizarse frotis directos para teir y examinar. Si no es as, hay que
concentrar las clulas

centrifugando la muestra y realizar una extensin a partir

del sedimento. Todo esto debe realizarse lo antes posible para que se conserve la
morfologa celular. Si las clulas no pueden ser concentradas en la clnica ni ser
procesadas en un laboratorio de referencia al cabo de pocas horas, hay que
realizar frotis directos inmediatamente.

La concentracin de hemoglobina y /o el valor hematocrito se utilizan para estimar


la cantidad de sangre presente en los lquidos cavitarios.
La concentracin de protenas se determina con un refractmetro o haciendo un
anlisis qumico.
Las muestras para realizar otras pruebas de bioqumica clnica deben depositarse
en tubos sin anticoagulante.
Hay que anotar el aspecto del lquido aspirado. El color y la turbidez indican la
presencia de pigmentos y de clulas respectivamente; hay que anotar y tener en
cuenta

el

aspecto

original

para

poder

realizar

una

interpretacin correcta.

(Davidson et al, 2000).

81
14.4. ENVO
Las muestras de lquidos hay que depositarlas en tubos con acido etilendiamino tetractico (EDTA) para poder realizar el recuento celular y el
examen citolgico. (Davidson et al, 2000).

Los frascos, viales, tubos, etc., deben estar tapados lo ms hermticamente


posible, colocando bien las tapas y tapones los cuales se asegurarn con
tela

adhesiva.

[consultado

el

de

mayo

del

2010].

ttp://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la_toma
_de_muestras_finales.pdf.

Cuando se manden varios tubos se aseguran con ligas y se colocan en

bolsas cerradas.

Los frascos se colocan en bolsas de plstico resistentes y hermticamente


cerradas.

Las laminillas se deben enviar secas, envueltas individualmente en papel de


China y cada una estar bien identificada con un nmero o el nombre del
paciente.

Las muestras se colocan en cajas trmicas resistentes empaquetndolas


con relleno de papel, plstico o madera (viruta), para amortigua r los golpes.

82
No olvidar que las muestras deben estar acompaadas de una carta u oficio
en el que se especifique claramente que tipo de prueba se solicita y un
resumen clnico enfatizando la fecha de inicio del padecimiento y la fecha
de la toma de la muestra, edad y sexo, estos documentos (original y copia),
se colocan dentro del paquete en una bolsa de plstico sellada para evitar
la prdida de esta informacin.

83
15. BIBLIOGRAFIAS
LIBROS
Aguilar, B. J. Arias, C. L. Arzate, B. A. Mndez, A. R. E. Nez O. L. Padilla,
S.J. Tachika, O. Y. 2005. Mtodos y tcnicas de diagnstico, Mdulo 1, ed.
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Davidson, M. Roderick, E. Lumsden, J. 2000. Manual de patologa clnica
veterinaria en pequeos animales, ed. Harcourt.
Ackerman, L. 2008. Atlas de dermatologa en pequeos animales, ed. Intermdica. 510 p.
Nez, O. Bouda, J. L. 2007. Patologa clnica
Medicina Veterinaria y Zootecnia, 1era ed. 345 p.

veterinaria, Facultad de

De buen, A. N. Maldonado, H. G. Romero R. L. 2001. Citologa diagnstica


veterinaria, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia UNAM, 1era ed. El
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Quiroz, H. 2005. Parasitologa

y enfermedades parasitarias de animales

domsticos, ed. Limusa, S.A. de C.V. 876 p.


Feldman, C. E. Nelson, W. R. 2000. Endocrinologa y reproduccin en perros y
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Lpez, V. F. J. 2007. Manual de prcticas de parasitologa clnica; Facultad de
Bioanalisis.
Corona, C. G. 2009. Diagnstico de la parasitosis gastrointestinal; especialista
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Tachika, O. Y. V. 2008. Manual de prcticas de la asignatura, prctica de
medicina de perros y gatos; UNAM.

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