MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE

MICROBIOLOGA AMBIENTAL

Mayra Eleonora Beltrn Pineda Biol. MSc. Microbiologa UNAL.

Jos Castellanos Rozo Mic. MSc. Microbiologa UNAL.
Docentes asistentes FCIN-DBIM-UNIBOYACA

UNIVERSIDAD DE BOYACA - FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERIA- 2016

PRCTICA DE LABORATORIO #13: PORCENTAJE DE INFECCIN DE

RAICES POR MICORRIZAS VESCULO ARBUSCULARES
A. OBJETIVO
Reconocer la presencia de micorrizas en la raz de plantas por medio de la determinacin
del porcentaje de infeccin de races.

B. FUNDAMENTO TERICO

Las micorrizas (del griego myces, hongo y rhiza, raz) representan la asociacin entre
algunos hongos (micobiontes) y las races de las plantas (fitobiontes). El trmino
micorriza fue acuado por Frank, patlogo forestal alemn, en 1877, al estudiar las races
de algunos rboles forestales.

La micorriza es una asociacin constituida por un conjunto de hifas fngicas (micelio) que,
al entrar en contacto con las races de las plantas, las pueden envolver formando un manto y
penetrarlas intercelularmente a travs de las clulas del crtex, como en el caso de la
ectomicorriza o, endomicorrizas como es el caso de la micorriza arbuscular, penetran la
raz, pero no se forma ningn manto. Al mismo tiempo, las hifas se ramifican en el suelo,
formando una extensa red de hifas capaz de interconectar, subterrneamente, a las races de
plantas de la misma o de diferentes especies. Esta red de micelio permite, bajo ciertas
condiciones, un libre flujo de nutrimentos hacia las plantas hospederas y entre las races de
las plantas interconectadas, lo que sugiere que la micorriza establece una gran unin bajo el
suelo entre plantas que, a simple vista, podran parecer lejanas y sin ninguna relacin. As,
la micorriza ofrece a la planta hospedera y al ecosistema diferentes beneficios en trminos
de sobrevivencia y funcionamiento.

En esta asociacin, la planta le proporciona al hongo carbohidratos (azcares, producto de

su fotosntesis) y un microhbitat para completar su ciclo de vida; mientras que el hongo, a
su vez, le permite a la planta una mejor captacin de agua y nutrimentos minerales con baja
disponibilidad en el suelo (principalmente fsforo), as como defensas contra patgenos.

167

Existen dos aproximaciones para el estudio de estos hongos en el suelo, la primera es el

conteo de esporas, pero este no es un mtodo indicativo de su potencial infectivo; por otro
lado se puede determinar el porcentaje de micorrizacin mediante bioensayo lo cual
representa un mejor indicador de su potencial de infeccin.

C. CONSULTA
1. Diligencie el siguiente cuadro que muestra los dos tipos de micorrizas ms comunes
indicando sus caractersticas distintivas.
TIPOS DE MICORRIZAS
ENDOMICORRIZAS

ECTOMICRORRIZAS

2. Indique tres gneros de micorrizas que pueden infectar cultivos de inters agronmico.
1.
2.
3.

3. Investigue el procedimiento de laboratorio para hacer el recuento de esporas micorrticas y

represntelo por medio de un diagrama de flujo.

4. Adems de los beneficios en la absorcin de nutrientes y agua Qu otro beneficio pueden

aportar los hongos micorrticos al suelo? Nombre dos de ellos.
1.

.
2.

.
D.MATERIALES
Materiales por subgrupo de laboratorio
2 lminas
2 laminillas
1 microscopio ptico
3 pipetas pasteur

5 plantas de trbol con races intactas*

1 tubo de ensayo

Materiales de grupo general

cido lctico concentrado al 85%
Agua destilada
Bao termostatado
Frasco lavador
Solucin de alcohol al 70%
Solucin de azul de tripano al 0,05%
Solucin de H202 al 4%
Solucin de HCl al 10%
Solucin de KOH al 10%

Los materiales marcados con un asterisco deben ser trados por los estudiantes.

E. PROCEDIMIENTO
Recoleccin de la muestra
A partir de una planta completa de trbol, remueva el suelo, tome las raicillas que tengan un
dimetro menor a 2mm y lvelas con agua de grifo.

Tincin de races

Corte las raicillas y depostelas en tubos de ensayo. Aplique KOH al 10% y caliente por 15
minutos (60-70C) en el bao termostatado. Lave las races con agua destilada. Aplique HCl
al 10% y agite para neutralizar el KOH hasta que las races tomen un color blanco. En races
con muchos taninos aplicar H2O2 al 4% por 2 minutos a 70C y lave.
Decante el HCl y H2O2 y lave con agua destilada. Aplique el colorante azul tripano (al 0,05%
en lactofenol). Incube el tubo a 70C y en reposo media hora o hasta que tian las raicillas.
170

Decante el colorante y filtre para su reutilizacin, extraiga el exceso de colorante con unas
gotas de cido lctico al concentrado al 85%.

Determinacin del porcentaje de colonizacin

Corte las raicillas previamente coloreadas en segmentos de 1 cm y tome 10 de estos y

dispngalos paralelamente sobre una lmina y cubra con laminilla (Figura 9.)

Figura 9. Disposicin de las raicillas sobre la lmina despus de la tincin con azul de
tripano al 0,05%.

Ubique sobre la platina del microscopio y realice las observaciones en 40X recorriendo en
sentido perpendicular a los segmentos. Observe 50 campos con raicillas, cuente cuntos de
esos 50 campos muestran raicillas colonizadas por estructuras de micorrizas (Colonizacin
positiva+: presencia de hifas cenocticas, arbsculos, vesculas o esporas). Con los datos
obtenidos determine el porcentaje de colonizacin segn la siguiente formula:

% = (

.
.

171

PRCTICA DE LABORATORIO #13: PORCENTAJE DE INFECCIN DE

RAICES POR MICORRIZAS VESCULO ARBUSCULARES
F.REGISTRO DE RESULTADOS
No. de grupo:

No. de subgrupo:

Nombre:

Cdigo:

Nombre:

Cdigo:

Nombre:

Cdigo:

Nombre:

Cdigo:

Nombre:

Cdigo:

1. Registre la observacin microscpica de los segmentos de races indicando las estructuras de

micorrizas vesculo-arbusculares que se evidencian colonizando las races.

40x

2. Realice el clculo del porcentaje de colonizacin diligenciando el siguiente cuadro.

NO. DE
CAMPO
OBSERVADO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25

PRESENCIA DE
ESTRUCTURAS
DE MICORRIZAS
(SI/NO)

NO. DE CAMPO
OBSERVADO

PRESENCIA DE
ESTRUCTURAS DE
MICORRIZAS
(SI/NO)

26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50

3. Aplique la ecuacin para determinar el porcentaje de colonizacin de races.

4. De acuerdo al porcentaje de colonizacin encontrado, podra inferir que las plantas estudiadas
son efectivas en la toma de nutrientes como el fosforo?. Sustente su respuesta.

2. Busque un artculo cientfico en donde se analicen este tipo de poblaciones en un cultivo

de inters agronmico, consulte el porcentaje de colonizacin de micorrizas y comprelo
con el obtenido en este anlisis.

Que podra concluir?

G. ANLISIS DE RESULTADOS

H. CONCLUSIONES

I. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Camargo S, Montao N, De la Rosa C.& Montao S. (2012). Micorrizas: una gran unin
debajo del suelo. Revista Digital Universitaria 13(7):3-19. ISSN: 1067-6079.

Philips, J. y Hayman, D. (1970). Improved procedures for clearing roots and staining
parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection.
Transactions of the British mycological Society. 55: 158161.

Valencia, H. (2010). Manual de prcticas de microbiologa del suelo. Universidad Nacional

de Colombia. Facultad de Ciencias. Departamento de Biologa. Editorial Universidad
Nacional de Colombia.