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MEDIOS DE CULTIVO.

MEDIOS DE CULTIVOS
Son soluciones estriles que tienen macro y micronutrientes, sustancias que
permiten el crecimiento de organismos.
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el
desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se
debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo al propio medio.
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados.
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de
contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas.
En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias
inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las
reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones
de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la
preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo
provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios
es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible
de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no
suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar
los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade
a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales
como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica.
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Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- Consistencia adecuada del medio.
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que
muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.
3- Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases.
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones
atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de
adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
4- Condiciones adecuadas de humedad.
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas
en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas
en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de
agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y
evitar as que se deseque el medio.
5- Luz ambiental.
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La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
6- pH.
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de
los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se
debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden
el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus
procesos metablicos normales.
7- Temperatura.
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre
15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o
incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los
patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos,
alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios.
8- Esterilidad del medio.
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir
el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en
dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS
POR SU CONSISTENCIA.
1. Lquidos.
Los medios lquidos se usan en principalmente en el incremento de bacterias,
en la determinacin de sus propiedades fisiolgicas, para el incremento masivo
de bacterias y hongos con fines de experimentales (generalmente bajo
agitacin) y para estudios de crecimiento de microorganismos. Industrialmente
tienen uso en la preparacin de productos accesorios al crecimiento los
microorganismos, (cidos orgnicos, antibiticos, etc.).
2. Slido.
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El uso de principal de medios solidos es para el aislamiento de hongos y
bacterias, y para su mantenimiento. Se prepara en frascos, placas Petri y tubos
de prueba.
SEGN SUS PROPIEDADES NUTRITIVAS.
A. CARENTES DE NUTRIENTES.
- Agua
El agua es para el mantenimiento de bacterias en estado latente e inmutable, o
clamidosporas de fusarium (el agua destilada en destiladores metlicos es a
veces txico y letal para las bacterias; es preferible usar agua desmineralizada
o agua potable no clorinada).
Sustancias que son carentes de nutrientes:
Laboratorio
Cao
Destilatorio
Dicionizada
Agar agua (sustancia solida)
Nitrgeno lquido: componente para mantener y preservar sustancias
como semen de animales.
B. NUTRITIVAS.
1. NATURALES.
Constituyen nicamente de material vegetal natural.
2. SEMISINTETICOS COMPLEJOS.
El componente posee 50 % natural y 50 % de sustancias qumicas.
3. SINTTICOS DEFINIDOS.
Es qumicamente definido.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS
A. AGAR PAPA DEXTROSA (APD).

Papas peladas y partidas 200g.


Dextrosa 20g.
Agar 17g.
Agua destilada hasta completar 1000ml.

Se cocinan las papas peladas y partidas en 500 ml de agua por 1 hora.


Simultneamente en otro recipiente en bao mara, se disuelve el agar en 500
ml de agua. Se cuela el extracto de papa a travs de varias capas de tela de
gasa, se mezclan ambos lquidos, se agrega la dextrosa y se agita la mezcla.
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Se restaura el volumen a 1000 ml con agua. Agregamos el medio en
recipientes apropiados y se esteriliza a 15 libras de presin por 20 minutos.
B. PAPA DEXTROSA (PD)
Es igual al agar papa dextrosa, pero sin agar.
C. AGAR NUTRITIVO.

Extracto de carne de res 3g.


Peptona 10g.
Agar 20g.
Agua destilada hasta completar 1000 ml.

Se disuelve el agar en 800 ml de agua destilada utilizando un bao mara.


Luego se agrega los otros ingredientes y se ajusta el volumen de los lquidos a
1000 ml. Se dispensa el medio en recipientes apropiados y se esteriliza a 15
libras de presin por 20 minutos.

D. AGAR JUGO V-8.

Jugo V-8 200 ml.


Carbonato de calcio 3 g
Agar 20g
Agua destilada 800 ml.

Se agrega 200 ml de jugo v-8 a 800 ml de agua tibia, luego se agrega el


carbonato de calcio y el agar agitando la mezcla. Se calienta en bao mara
hasta disolver el agar, una vez que el agar se haya disuelto, se lleva el
volumen a 1000 ml con agua destilada. Despus se deposita el medio en
recipientes adecuados y se esteriliza en el autoclave a 15 libras de presin,
durante 20 minutos.
E. AGAR AGUA.

Agar 20g.
Agua destilada hasta completar 1000 ml.

Se disuelve el agar en 800 ml de agua utilizando un bao mara; y una vez


disuelto, se lleva el volumen con agua 1000 ml. Se deposita el medio en
recipientes adecuados y se esteriliza en el autoclave a 15 libras de presin
durante 20 minutos.
F. AGAR FRIJOL LIMA.

Frijol lima molido 100g.


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MEDIOS DE CULTIVO.

Agar 20g.
Agua destilada hasta completar 1000 ml.

Se remoja en agua los frijoles lima (Phaselous limensis) por 30 minutos. Se


hierve por 30 minutos en bao mara con suficiente agua; se filtra a travs de
tela de grasa, luego se coloca el lquido nuevamente en bao mara, se agrega
el agar y se agita el lquido hasta que el agar se disuelva, se completa el
volumen del lquido a 1000 ml con agua destilada. Se coloca el medio en
recipientes adecuados y se esteriliza en el autoclave a 15 libras de presin por
20 minutos.
G. AGAR HARINA DE MAIZ.

Harina de maz 20g.


Dextrosa 20g.
Agar 20g.
Agua destilada hasta completar 1000 ml.

Se calienta 500 ml de agua a 70C y se agrega la harina de maz manteniendo


la temperatura alrededor de 60C por 1 hora. Luego se filtra a travs de tela de
gasa. Simultneamente se disuelve el agar en 500 ml de agua en bao mara y
una vez disuelto, se mezcla con el filtrado de harina de maz. Se agrega la
dextrosa y se completa el volumen hasta 1000 ml con agua destilada. Se
coloca el medio en recipientes adecuados y se esteriliza en el autoclave a 15
libras de presin por 20 minutos.

MEDIOS A PARTIR DE SEMILLAS


Estos medios son usados para el aislamiento de hongos fitopatogenos a
partir de semillas, los cuales proveen un soporte nutricional para
garantizar la viabilidad de hongo y as lograr su aislamiento.

A. agar pdta composicin cantidad

Papa-Dextosa 100 g
Tergitol 200 ppm
Neomicina 30 ppm
Agar-Agar 10 g
Agua Destilada 1 L
Preparacin: Disolver la papa dextrosa y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a
121C 15 min 15 lbs de presin agregar los dems componentes y
servir.
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MEDIOS DE CULTIVO.
B. agar TCV

Usado para la deteccin de Septoria spp. en semillas


Agar PDA 1 L
Metil Tiofanato 0.02 g
Vancomicina 0.1 g
Tween 2 ml
Preparacin: Autoclavar 1 l de Agar PDA y dejarlo enfriar hasta
alcanzar una temperatura de 60C y agregar 5 ml de la solucion
de metil tiofanato, vancomicina y 4 gotas de Tween.

C. agar guayacol
Medio para detectar Bipolaris (Helminthosporium) oryzae y
Alternaria en semillas de arroz.
Guaiacol 125 g
Estreptomicina 0.5 g
Agar-agar 5.0 g
Agua 1 L
Preparacin: Disolver el guaiacol y el agar en un litro de agua
destilada, mezclar bien, esterilizar en autoclave, posteriormente
adicionar la estreptomicina, servir (Kamal,2009).

MEDIOS A PARTIR DE SUELO Y AGUA


Los medios que se presentan a continuacin son usados para el
aislamiento de hongos fitopatogenos a partir de muestras de suelo
y agua.

A. agar cloruro de sodio - glucosa - dicloran


Usado como medio selectivo para el aislamiento de Aspergillus
flavus de suelo.
Peptona 5 g
KH2PO4 1 g
NaCl 30 g
Glucosa 10 g
MgSO4 x 7 H2O 0.5 g
Agar - agar 20 g
Agua destilada 1L
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MEDIOS DE CULTIVO.
Preparacin: Disolver todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus agregar
50 mg de estreptomicina y servir.

B. agar dextrosa-peptona-extracto de levadura


(dpya)
Para aislamiento y enumeracin de hongos del suelo.

Dextrosa 5 g
KH2PO4 1 g
Peptona 1 g
MgSO4 x 7 H2O 0,5 g
NH4NO3 1 g
Extracto de Levadura 2 g
Propionato de Sodio 1 g
Agar-Agar 20 g
Preparacin: Disolver todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus agregar
30 mg de estreptomicina y servir.

C. agar krigsvold y griffin


Medio de cultivo semiselectivo para aislamientos de
Cylindrocladium spp. del suelo.
Sucrosa 10 g
KH2PO4 1 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
Bacto oxgall 1.0 g
Peptona 15.0 g
Sulfato de estreptomicina 50.0 mg
Tetraciclina HCl 50.0 mg
Quintozene (PCNB) 75.0 mg
Agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparacin: Disolver la sucrosa, el oxgall, la peptona, las sales y
el agar en un litro de agua destilada. Mezclar bien, esterilizar en
autoclave, posteriormente adicionar el sulfato de estreptomicina,
la tetraciclina HCI y el quintozene y servir

D. agar extracto de suelo - acido poligalacturonico


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MEDIOS DE CULTIVO.

Usado para el aislamiento de Colletotrichum sp. del suelo.


K2HPO4 4 g
Extracto de suelo 25 ml
KH2PO4 1.5 g
Acido poligalacturonico 10 g
Agua destilada 1L
Agar - agar 17 g
Preparacin: Agregar todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus agregar
30 mg de estreptomicina y servir.

E. agar martin
Usado para el aislamiento de hongos de muestras de suelo y
agua. RB - O RB - M1
Agua destilada 1000 ml
Agar - agar 20 g
KH2PO4 1 g
K2HPO4 0,5 g
MgSO4 x 7H2O 0,5 g
Peptona 5 g
Dextrosa 10 g
Extracto de levadura 0,5 g
Rosa bengala 0,033 g
sulfato de estreptomicina 0,03 g
Preparacin: Agregar todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus
agregar la estreptomicina y servir.

F. agar oaes
Usado para el aislamiento y recuento de hongos a partir de
muestras de suelo.
Glucosa 5 g
Extracto de levadura 2 g
NaNO3 1 g
MgSO4 x 7 H2O 0.5 g
KH2PO4 1 g
Propionato de sodio 1 g
Agar - agar 20 g
Agua destilada 1000 ml
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MEDIOS DE CULTIVO.
Preparacin: Agregar todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin y servir.

G. agar pcnb

Aislamiento de Fusarium spp. a partir de muestras de suelo.


Peptona 15 g
KH2PO4 1,0 g
MgSO4 x 7H2O 0,5 g
Terraclor 0,5 g
Agar - agar 20 g
Clorotetraciclina HCL 50 mg
Sulfato de estreptomicina 100 mg
Preparacin: Agregar todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a auto
clavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus agregar la
estreptomicina y servir.

H. agar peptona - rosa bengala


Usado para aislamiento y recuento de hongos a partir de
muestras de suelo.
Peptona 5 g
Dextrosa 10 g
KH2PO4 20 g
MgSO4 x 7 H2O 1 g
Rosa bengala 0.5 g
Agar - agar 10 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Agregar todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus
agregar 30 mg de estreptomicina y servir.

I. agar sucrosa - peptona - dicloran


Usado para el aislamiento y recuento de Aspergillus flavus del
suelo.
K2HPO4 0.5 g
Peptona 0.5 g
Sucrosa 20 g
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MEDIOS DE CULTIVO.

Estreptomicina 50 mg
MgSO4 x 7 H O 0.5 mg
Extracto de levadura 0.5 mg
Rosa bengala 25 mg
Agar - agar 17 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Agregar todos los componentes en agua destilada y
calentar suavemente hasta disolverlos por completo llevar a
autoclavar por 15 min a 121C/15 Lbs de presin, despus
agregar la estreptomicina y servir. Ajustar el pH 5.5 usando HCl 1
N o NaOH 1 N.

MEDIOS DE USO GENERAL


Estos medios de cultivos son los ms usados a nivel general para el
aislamiento de los hongos induciendo esporulacin ya sea para el
aislamiento a partir de tejidos enfermos, donde en algunos de ellos se
pueden cambiar algunas de sus caractersticas para favorecer o generar
las condiciones ptimas para el desarrollo del microorganismo patgeno
hongo en estudio ya sea modificando el pH o agregando antibiticos.

agar avena (oma-oatmeal agar) c


Avena 30 g
Agar 15 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Hervir la avena durante 1 hora en un litro de agua,
colar gasa agregar el agar, completar el litro de agua, autoclavar a
121C por 15 min a 15 lbs de presin y servir.

agar extracto de malta


Extracto de malta 20 g
Agar 15 g
Agua destilada 1000 ml

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MEDIOS DE CULTIVO.
Preparacin: Agregar el extracto de malta en el agua destilada
calentar hasta disolver completamente, agregar el agar,
autoclavar a 121C por 15 min a 15 lbs de presin y servir.

agar extracto de malta extracto de levadura


Extracto de malta 30 g
Extracto de levadura 2 g
Fosfato de potasio (KH2PO4) 0.5 g
Sulfato de potasio penta hidratado (MgSO4.7H2O) 0.5 g
Agar 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Agregar el extracto de malta, el extracto de levadura,
las sales de azufre y fosforo en el agua destilada calentar hasta
disolver completamente, agregar el agar, autoclavar a 121C por
15 min a 15 lbs de presin y servir.

AGAR MIEL PEPTONA


Miel 60 g
Bactopeptona 10 g
Agar 25 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Agregar el agar-agar en el agua destilada, agregar
la miel y la bactopeptona, autoclavar a 121C por 15 min a 15 lbs
de presin y servir.

AGAR PAPA DEXTROSA (PDA, POTATO DEXTROSE AGAR)


Es uno de los medios de mayor uso en los estudios fitopatologicos
ya que permite el crecimiento micelial de las mayora de los
microorganismos de diferentes grupos taxonmicos; en algunos
casos limita la esporulacin de algunos gneros por lo cual es
necesario, esperar el crecimiento micelial y luego usar medios que
permitan el desarrollo reproductivo del microorganismo en
estudio.
Papa 200 g
Dextrosa 20 g
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MEDIOS DE CULTIVO.
Agar-Agar 20 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Lavar las papas, cortarlas en cubos y hervirlas en
agua destilada por 10 a 20 minutos, colar, agregar el agar-agar y
completar a 1 litro, autoclavar a 121C por 15 min a 15 lbs de
presin y servir.
AGAR AGUA (AA)
Agar- Agar 15 g
Agua destilada 1000 ml
Preparacin: Disolver el agar-agar en el agua, autoclavar a
121C por 15 min a 15 lbs de presin y servir.
AGAR JUGO V8
Jugo V8 200 ml
CaCO3 3 g
Agar 15 g
Agua destilada 100 ml
Preparacin: Agregar el jugo V8, el CaCO3, el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a
121C por 15 min a 15 lbs de presin y servir.

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