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REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

UNIVERSIDAD DEL ZULIA


FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGA Y VIROLOGA

TEMA 3: ESTRUCTURA DE LA
CLULA PROCARIONTE Y
GENTICA BACTERIANA
Lic. Liliana Gmez Gamboa (Mg.Sc.)

MARACAIBO, SEPTIEMBRE DE 2013.

Caractersticas Generales de la clula bacteriana


Organizacin celular ms simple.
Microorganismos tpicos: unicelulares, indiferenciados,
con una pared celular rgida.
Organismos procariotas.
Multiplicacin asexual (fisin binaria).
Nutricin absortiva.
Capacidad biosinttica.
Tamao microscpico.
Gran variedad de tipos morfolgicos y fisiolgicos.
Extensamente distribuidos en la naturaleza.
Generalmente saprfitas.
Algunas especies pueden causar enfermedades.

Bacterias: Caractersticas Generales para su Estudio


Caractersticas microscpicas
Examen al fresco o montaje hmedo
Preparaciones coloreadas:
Coloraciones simples: azul de metileno

Coloraciones diferenciales: Gram, Ziehl-Neelsen


Coloraciones especiales: cpsula, flagelos, esporas

CARACTERSTICAS
MORFOLOGICAS DE LA
CLULA BACTERIANA

Tamao
Forma
Disposicin o Agrupacin

Tamao
Unidad de medida: micras (m)
Vara entre 0,2-2 m de dimetro y 2-8
m de longitud
Micrmetro ocular

Epulopiscium fishelsoni
0,5 mm

Thiomargarita namibiensis
750 m (0.75 mm)

Forma
Bsicamente, las bacterias despliegan tres formas:
Cocos: clulas esfricas u ovoides
Bacilos: clulas alargadas. Variaciones en cuanto a la longitud, anchura y forma de los
extremos
Formas incurvadas: bacilos curvos (en forma de coma), espirilos (rgidos y se mueven
por flagelos) y espiroquetas (flexibles y se mueven por filamentos axiales)

Bacterias apendiculadas: presentan


extrusiones, como largos tubos o
tallos

Otras formas: cuadradas, estrelladas

Stella

Haloarcula

Bacilos. Variedades Morfolgicas

Ancho, longitud y forma de los extremos


Bacilos grandes
Coco-bacilos
Fusiformes
Filamentosos
Curvos

Agrupacin
Depende de dos factores:
Plano (s) en que ocurre la divisin celular.
Tendencia de las clulas hijas a permanecer unidas entre s.

Agrupaciones presentes en los cocos

Diplococos: cocos en pares


Estreptococos:
cadenas

cocos

en

Estafilococos: cocos en racimos


Tetracocos: cocos en tetradas
Sarcinas: cocos en disposicin
cbica

Disposiciones presentes en los Bacilos


Bacilos aislados
En cadena
En pares

En empalizada o en paquetes
de cigarrillos (debido a un giro
de 180)
Dos bacilos en ngulo ( en
forma de letra V L)
Varios bacilos formando letras
chinas

Ultra-Estructura de la Clula Bacteriana

Cpsula
Citoplasma
Ribosomas
Pared celular
Membrana celular

Inclusiones
citoplasmticas

Cromosoma

Plsmido

Cpsula
Pared celular
Membrana celular
Fimbrias

Flagelos
Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Envoltura Celular Reino Eubacterias


(Bacterias verdaderas)
Denominada tambin Cubierta celular
Conjunto de capas integrales que rodean a la clula
Tiene a su cargo diversos procesos celulares que se llevan a cabo en los organelos
internos de las clulas eucariotas
Sitio primario de las funciones que protegen a las bacterias contra amenazas
qumicas y biolgicas
Conjuntamente con los apndices, la cubierta hace posible que las bacterias
colonicen superficies

Cpsula
Pared celular
Membrana citoplasmtica

Capa de polmero viscoso, gelatinoso, que rodea a la


clula (externo a la pared celular)

Constituido por polisacridos, polipptidos o ambos


Consistencia compacta y fuertemente unido a la pared
celular, el glicoclix se denomina Cpsula
Red laxa dbilmente unida a la pared celular, se
denomina Capa slime (Capa de Limo)

Cpsula

Cpsula

Cpsula. Funciones
Antgeno capsular (Ag K)
Contribuye a la virulencia bacteriana
Protege a la clula de la fagocitosis
Participa en la adherencia bacteriana a
superficies
Previene la deshidratacin celular
Reservorio de nutrientes

Depsito

de

productos

de

desecho

excretados por el metabolismo celular

Cpsula

Pared Celular. Caractersticas


Estructura compleja y semirgida responsable de la
configuracin de la clula.
Rodea a la frgil membrana plasmtica (citoplasmtica)
subyacente y protege a esta membrana y al interior de la
clula de los cambios adversos del medio externo.
Presente en la mayora de los procariotas
Difcil de observar por microscopa ptica
Grosor variable: 10 a 25 nm.
Representa 10 40% del peso seco celular
Constituyente bsico: peptidoglucano o murena que puede ser una
estructura solitaria o estar combinada con otras sustancias.
Su composicin y estructura qumica permite clasificar las bacterias
en cuatro grupos: Gram positivas, Gram negativas, Gram variables y no
reactivas a la coloracin.

Pared Celular: Funciones


Mantiene la forma celular
Previene la lisis osmtica
Esencial para el desarrollo y divisin bacteriana
Contiene

componentes

que

contribuyen

su

patogenicidad (virulencia de algunas especies de

bacterias)
Puede proteger a la clula frente a sustancias txicas

Es el sitio de accin de ciertos antibiticos

Estructura del Peptidoglucano


N-Acetil-glucosamina (NAG)

Cadena tetrapeptdica lateral

cido N-Acetil-murmico (NAM)

Puente peptdico cruzado

Cadena peptdica lateral


Puentes peptdicos cruzados

Esqueleto
carbonado

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Entrecruzamiento del Peptidoglucano

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Pared Celular Gram Positiva

Varias capas de peptidoglucano (90%)


Protenas
Contiene cidos teicoicos
asociadas
Posee carga
a lanegativa
Pared
Hidroflica

Barrera para molculas con carga positiva

cidos Teicoicos

cido
Lipoteicoico

Peptidoglucano

Membrana
celular

cidos Teicoicos: Pared Celular Gram Positiva.


Caractersticas
Griego teichos (pared)

Polisacridos
presentes
exclusivamente en la pared
celular Gram positiva
Contienen glicerolfosfato o
residuos de fosfato de ribitol,
unidos por steres de fosfato
y, generalmente, se les unen
otros azcares y D-alanina

cidos Teicoicos: Funciones


Aportan la carga negativa neta de la superficie celular

Regulan el movimiento de cationes


Previenen la lisis celular
Especificidad Antignica. Identificacin bacteriana
Pueden ser: cidos teicoicos propiamente dichos
cidos lipoteicoicos

cidos teicurnicos

Pared Celular Gram Negativa

Membrana externa:
Fosfolpidos.

Lipoprotena

(Braun),

Lipopolisacrido(LPS),

Espacio periplsmico: Capa delgada de peptidoglucano (10%)

Membrana Externa (Pared Celular Gram Negativa)


Carga fuertemente negativa
Evade la fagocitosis y la accin del complemento
Provee una barrera para ciertos antibiticos, enzimas, detergentes,
metales pesados, sales biliares y colorantes
Permite el paso de nutrientes (porinas)
Porta receptores para fagos
Propiedades patognicas

Lipoprotena de Braun (Pared Celular Gram Negativa)

Protena ms importante de la membrana externa


Conocida tambin como lipoprotena de murena
Protena pequea (Peso molecular ~ 7.200)
Sirve para anclar la membrana externa a la capa de peptidoglucano

Lipopolisacrido (LPS) (Pared Celular Gram Negativa)


Ncleo polisacrido o centro (KDO)
Polisacrido O: Antgeno somtico.
Identificacin de especies
Lpido A:
Endotoxina

Lipopolisacrido (LPS)
Efecto sobre mamferos

Pirognico
Modificacin en el recuento de clulas sanguneas
Coagulacin intravascular diseminada (CID)
Factor de necrosis tumoral
Disminuye la presin arterial
Colapso vascular
Shock

Espacio Periplsmico

Delimitado por la membrana externa y la interna (membrana celular)


Mide entre 12-15 nm
Consistencia gelatinosa
Contiene:
Capa de peptidoglicano
Protenas que intervienen en el transporte de nutrientes necesarios
para la clula
Enzimas hidrolticas: fosfatasas, proteasas, endonucleasas
Protenas de unin: azcares, aminocidos, iones inorgnicos y
vitaminas
Quimiorreceptores
Enzimas detoxificantes (-lactamasas)
Protenas de proteccin osmtica (solutos compatibles): sintetizadas
en medios hiperosmticos para balancear el stress osmtico.

Comparacin Pared Celular Gram Positiva y Gram


Negativa

Comparacin Pared Celular Gram


Positiva y Gram Negativa
La PCGN es qumicamente ms compleja que la PCGP
La PCGP contiene ms aminocidos que la PCGN
Los cidos teicoicos son exclusivos de las PCGP

El contenido de lpidos de la PCGN es superior al de las PCGP


El LPS, membrana externa y espacio periplsmico son
exclusivos de la PCGN
En las PCGN, el peptidoglucano constituye una fraccin
mucho ms pequea del total de la pared, en comparacin a
la PCGP

Paredes Celulares Atpicas

Micoplasmas: bacterias atpicas desprovistas de pared


celular, presentan pleomorfismo.

Paredes Celulares Atpicas

Arqueobacterias metangenas
Pseudomurena (NAG-Ac N-acetil-talosaminurnico, unidos por enlaces tipo 1,3)

Paredes Celulares Atpicas


Otras Arqueobacterias: polisacridos, glicoprotenas
o protenas (Methanosarcina)

Polisacridos presentes: glucosa, cido glucurnico,


galactosamina, acetato
Residuos de sulfato (Halococcus)

Paredes Celulares Atpicas (Arqueobacterias)

Estructura Qumica de la Pared Celular en Halococcus

Paredes Celulares Atpicas


Micobacterias (BAR)

Micobacterias: Paredes Celulares Atpicas

Pared celular con peptidoglucano y gran cantidad de


cidos miclicos (60%)
NaG es sustituido por N-glucolil-murmico
Peptidoglucano unido al arabinogalactano (polmero de
arabinosa y galactosa) por enlaces glicolpidos

Paredes Celulares Atpicas Micobacterias


Ac. Miclicos unidos a la fraccin murmico por medio de enlaces
fosfo-diester
Dimicolatos de trehalosa (factor cordn)

Sulfolpidos y micsidos

Glicolpidos
Virulencia

Lipo-arabino-manano (LAM): anclado a la membrana celular.


Equivalente al LPS Gram negativo
Cepas virulentas: LAM unido a residuos de manosa (Ara-LAM)
Protenas inmunorreactivas: utilizadas con fines diagnsticos (PPD)

Coloracin de Gram

Coloracin de Zielh Neelsen

Coloracin Ziehl Neelsen

Membrana Celular: Caractersticas

Barrera crtica
Mide aproximadamente 7- 8 nm de espesor
Membrana unitaria tpica

Compuesta por:
60-70% protenas
20-30% lpidos
Hidratos de carbono (pequeas cantidades)
Estructura dinmica

Membrana Celular: Caractersticas


Generalmente, no contiene esteroles (Hopanoides)
Estructura: modelo mosaico fluido

Representa aproximadamente el 30% o ms del peso seco celular


Se tie con colorantes bsicos

Membrana Celular: Estructura


Fosfolpidos

Porina
Protena
integral

Citoplasma

Protena
perifrica

Membrana Celular: Funciones


Permeabilidad selectiva y transporte
de solutos
Transporte de electrones y

Barrera permeable: previene la salida y funciona como


una puerta para el transporte de nutrientes al
interior y exterior celular

fosforilacin oxidativa
Genera la fuerza protn motriz (FPM)
para el movimiento celular
Excrecin de exo-enzimas hidrolticas

Anclaje de protenas: sitio de unin de protenas


involucradas en el transporte, bioenergtica y
quimiotaxis celular

Conservacin de energa: sitio de generacin y uso


de la fuerza protn motriz

Membrana Celular: Funciones


Degradacin de nutrientes y produccin de energa
Porta enzimas y molculas transportadoras que intervienen en la
biosntesis de ADN, polmeros de la pared celular y lpidos de
membrana

Porta receptores de membrana y otras protenas de los sistemas


quimiotcticos y transduccin sensorial
Contiene los cromatforos o tilacoides en las bacterias
fotosntticas

Invaginaciones de la Membrana Celular


Uniones de Bayer

Mesosomas
Cromatforos

Uniones de Bayer
Sitios de adherencia entre la membrana interna y externa

(bacterias Gram negativas)


Fisiolgicamente activas:
Parte externa: sitios de adsorcin de bacterifagos y lisis mediada
por el Complemento
Parte interna: zonas de crecimiento que sirven para la translocacin

de protenas secretoras, membrana celular, LPS y polisacridos


capsulares; sitio de emergencia para pilis sexuales y flagelos

Uniones de Bayer

Mesosomas

Invaginaciones de la membrana celular

Estructuras esfricas (microscopa electrnica)

Se observan con mayor frecuencia en bacterias Gram negativas

Pueden ser:
De tabique (septales): formacin de paredes transversales durante la divisin celular
Laterales: secrecin de protenas extracelulares

Se cree son Artefactos producidos durante el proceso utilizado para la preparacin


de la muestra para microscopa electrnica

Se han observado en preparaciones por criofractura, por lo que podran estar

presentes en clulas vivas.

Mesosomas
Mesosomas laterales

Mesosoma de Tabique

Cromatforos
Presentes en las bacterias purpreas

Albergan el aparato fotosinttico


Adoptan formas variadas dependiendo de la especie

Vesculas huecas
Repliegues concntricos (lminas paralelas)
Tbulos aislados o en haces

Cromatforos

Cromatforos. En sta micrografa de Rhodospirilfum


rubrum (una bacteria purprea) son claramente visibles
los cromatforos.

Matriz interna de la clula bacteriana


Delimitado por la membrana celular (citoplasmtica)
Consistencia acuosa, semi-transparente y elstica
Est dividido en dos regiones:
rea nuclear:
Contiene el cromosoma bacteriano
Rica en ADN
rea citoplasmtica:
Rica en ribosomas
Aspecto granular

Citoplasma
Carece de organelos limitados por membranas unitarias
Carece de cito-esqueleto y corriente citoplasmtica
Constitucin:
80% agua
Protenas (enzimas)
Carbohidratos
Lpidos
Iones inorgnicos
Otros compuestos de bajo peso molecular

Citoplasma
Sitio celular donde ocurren numerosas reacciones del
metabolismo, crecimiento y replicacin celular

Denominado tambin nucleoide, cuerpo


componente nuclear, cuerpo de cromatina

nuclear,

Carece de membrana nuclear que lo delimite


Constituido por una sola molcula de ADN de doble
cadena circular
Compuesto: 60% ADN, algo de ARN y pequea cantidad
de protenas similares a las histonas

Representa slo un 2-3% del peso seco celular


Ocupa el 10% o ms del volumen celular
Contiene la informacin gentica de la especie

Cromosoma
Cromosoma
(Fibrillas de ADN)

Junto con el cromosoma, constituyen el genforo


bacteriano
Elementos genticos extra-cromosmicos
ADN doble cadena circular
Capacidad de replicacin autnoma

Generalmente, contienen 5-100 genes no


indispensables
Pueden transmitirse de una clula a otra

Plsmidos

Plsmidos

Plsmidos
Confieren :
Resistencia a antibiticos
Tolerancia a metales pesados
Produccin de toxinas
Sntesis de enzimas
Produccin de bacteriocinas
Factores de penetracin
(invasividad)
Adherencia

tejidos

Partculas pequeas (70S)*


Visibles por microscopa electrnica
Compuestas por ARN y protenas
Constituidos por dos subunidades:
30S (pequea) contiene ARN 16S
50S (grande) contiene ARN 23S y ARN 5S

*S: Unidades Svedberg

Ribosomas
El nmero de ribosomas vara de acuerdo a las
condiciones de crecimiento
Una clula posee cerca de 10.000 ribosomas
Sitio donde ocurre la sntesis de protenas
Matriz citoplasmtica: protenas intracelulares

Membrana celular: protenas extracelulares

Acmulos
de
sustancias
intracitoplasmticos, insolubles

de

reserva

Agregados de varios compuestos normalmente


involucrados en almacenar reservas energticas o
bloques estructurales para la clula

Se desarrollan cuando la clula est en presencia


de exceso de nutrientes

Frecuentemente observados en condiciones de


laboratorio

Inclusiones Citoplasmticas

Grnulos de azufre

Poli-hidroxibutrico

Grnulos:
Volutina (polifosfatos): grnulos
metacromticos
Lpidos:
cido
poli-hidroxibutrico (PHB), poli-hidroxialcanoatos (PHA),
Hidrocarburos
Carbohidratos:
glucgeno
y
almidn
Azufre
Cianoficina (polmero de arginina
y aspartato)
Sales minerales (carbonatos)
Ficobilisomas

Grnulos
metacromticos

Inclusiones Citoplasmticas

Vesculas
Gasferas: Flotabilidad de bacterias acuticas
Carboxisomas: Enzimas fijadoras del CO2
Magnetosomas: Acmulos de magnetita (Fe3 O4)

Actan como magnetos


Protegen a la clula de la
acumulacin de H2O2 in vivo
Clorosomas:
pigmentos
fotosintticas verdes

Magnetosomas

antena

de

bacterias
Vacuolas de gas

Carboxisomas

Cpsula (Glicoclix)
Flagelos
Pilis o Fimbrias
Cpsula

Pilis

Flagelos

Flagelos
Detectables por:
Microscopa de campo oscuro

Microscopa de contraste de fases


Microscopa electrnica
Microscopa ptica (Preparaciones especiales)
Funciones: Motilidad
Quimiotaxis

Flagelos

Estructura del Flagelo

Flagelos: Disposicin Celular

Monotrica

Lofotrica

Anfitrica

Peritrica

Motilidad Bacteriana
Los procariotas son capaces de moverse y lo
hacen por alguno de estos sistemas:

Flagelos (principalmente)
Filamento axial (espiroquetas helicoidales)
Deslizamiento sobre superficies slidas (in vitro):
mixobacterias, cianobacterias y micoplasmas

Movimiento Flagelar
El mecanismo exacto que dirige la rotacin del
cuerpo basal no se ha establecido con claridad.
El flujo de protones que pasa por los dos anillos o
entre el cuerpo basal y las protenas de membrana

circundantes producen la rotacin.


Las protenas Mot A y Mot B transportan protones y se
piensa que participan en este mecanismo.

Al parecer, el ATP no aporta directamente la energa


necesaria para la rotacin flagelar.

Movimiento Flagelar
Peritrica

Voltereta

Polar

Flagelos
separados
Mechn de Flagelos
Rotacin CSR

Rotacin CSR
Rotacin CSR

Rotacin
SR
Rotacin

SR

Mechn de Flagelos
Rotacin CSR

1.

El filamento tiene forma de hlice rgida y la bacteria se mueve cuando esta hlice gira.

2.

La direccin de la rotacin flagelar determina la naturaleza del movimiento bacteriano

3.

En bacterias monotricas, el flagelo polar gira en direccin contraria a las agujas del reloj.

4.

En bacterias peritricas, ocurre de manera similar, y los flagelos forman un haz giratorio que impulsa la
clula hacia delante.

5.

La rotacin de los flagelos en el sentido de las agujas del reloj, altera la polarizacin y la clula da
volteretas.

Taxis
Movimiento de las bacterias a favor o en contra de un
estmulo en particular

Estmulo: Qumico (Quimiotaxis)


Luz (Fototaxis)
Magntico (Magnetotaxis)
Si la seal quimiotctica es positiva: Atrayente
Si la seal quimiotctica es negativa: Repelente

Quimiotaxis

Movimiento hacia sustancias atrayentes y de alejamiento de repelentes.

Las sustancias atrayentes y repelentes se detectan por quimio-receptores (protenas


especiales) ubicadas en el espacio periplsmico o en la membrana celular
(citoplasmtica)

En ausencia de un gradiente qumico, las bacterias se mueven al azar; mientras que en


presencia de gradiente atrayente, realiza carreras ms largas y da volteretas con
menos frecuencia.
Atrayente

Voltereta

Voltereta
Carrera

Carrera

Filamento Axial
Presente en espiroquetas:

Treponema spp. , Borrelia spp. y Leptospira spp.


Apndices filiformes que se encuentran en el espacio periplsmico
Se originan en polos opuestos y se superponen en el centro sin presentar
conexiones evidentes

Permiten el movimiento por


desplazamiento en ondas

helicoidales

Espiroqueta

Filamento Axial
Penetran en medios viscosos y tejidos

Al rotar contra el cuerpo de la clula, le


imparten un movimiento de arrollamiento
Vaina externa

Pared celular

helicoidal opuesto en rotacin al del giro


del filamento axial.
Movimiento similar al de un sacacorchos.
http://www.youtube.com/watch?v=nD2TuM1EsDc

Filamento
axial

Vaina externa
Pared celular
Filamento axial

Pilis
Flagelos

Denominados tambin: pelos,


fimbrias o fibrillas.
Apndices bacterianos de aspecto
filiforme
Dimetro: 0.004 a 0.008 m
Slo se pueden observar con
microscopio electrnico
Presentes en bacterias Gram
negativas
Composicin proteica: Pilina
Ms numerosos y cortos que los
flagelos

Fimbrias

Pilis
Funciones:
Adherencia (Factores de colonizacin)
Transferencia de material gentico (Pilis sexual)
Categoras: Adhesinas
Lectinas
Evasinas
Agresinas
Pilis sexuales
Pilis sexual

Esporas
Clula en estado de latencia

Espora

Capacidad germinativa
Baja concentracin hdrica
Altamente resistente a la desecacin,
calor y agentes qumicos

Alta concentracin de calcio y cido


dipicolnico

Altos niveles de pequeas protenas


cido-solubles (SASPs)

Clulas vegetativas

Esporas libres

Espora: SASPs
Contiene altos niveles de protenas especficas del core
denominadas Small Acid-Soluble Spore Proteina (SASPs)
Codificadas por genes spo, ssp
Protegen el ADN bacteriano del dao potencial de la
radiacin UV, la desecacin y el calor seco

Sirven como fuente de carbono y energa para el desarrollo


de una nueva clula vegetativa a partir de la endospora
(germinacin)

Esporas
Gneros esporulados:
Bacillus
Clostridium
Localizacin de la espora:
Terminal
Central
Sub-terminal

Espora: Partes Constituyentes


Capa (1)
Corteza (2)

Exosporio (3)
Pared de la espora (4)
ADN

Centro

Ribosomas
1.

2.

3.

5.

(6)

Proteina similar a la queratina, capa


impermeable, confiere resistencia a los agentes
qumicos

Capa ms gruesa, contiene peptidoglucano


especial con menos enlaces cruzados, sensible
a lisozima y su autlisis es clave para la
germinacin

Naturaleza lipoproteica, contiene algunos


carbohidratos
4.
Capa ms interna, contiene peptidoglucano
normal y se convierte en la PC de la clula
Citoplasma de la espora. Contiene cido
en germinacin
dipicolnico y Calcio, posee adems, un
sistema generador de energa (3fosfoglicerato) para la germinacin

Esporulacin: Definicin. Requisitos


Proceso mediante el cual una clula
vegetativa da origen a una clula en
estado de latencia (espora).
La bacteria debe estar vida de
nutrientes importantes (carbono,
nitrgeno y fsforo)
La bacteria debe tener alta densidad
para permitir la secrecin y
reconocimiento del factor 1 de
diferenciacin extracelular (EDF-1)
La bacteria debe encontrarse en fase
estacionaria de crecimiento

Ciclo de Esporulacin

Germinacin: Definicin. Caractersticas


Proceso mediante el cual una espora da origen a una clula

vegetativa metablicamente activa.


Etapas:
Activacin: calor, abrasin, acidez y compuestos con grupos SH
libres
Inicio: condiciones ambientales favorables, efector (L-alanina o
adenosina), activa autolisinas, degradan el peptidoglucano
cortical. Captacin de agua, se libera cido dipicolnico y se
degradan enzimticamente algunos componentes de la espora.
Excrecencia o Crecimiento: aparicin

de una nueva clula

vegetativa, metablicamente activa con capacidad de dividirse

Clula vegetativa y Espora: Diferencias


Caracterstica

Clula vegetativa

Espora

Estructura

Clula Gram positiva tpica

Centro, Corteza, capa, exosporio, pared

Apariencia microscpica

No refringente

Refringente

Contenido clcico

Bajo

Alto

cido dipicolnico

Ausente

Presente

Actividad enzimtica

Alta

Baja

Metabolismo (captacin de O2)

Alto

Bajo o ausente

Sntesis de macromolculas

Presente

Ausente

ARNm

Presente

Escaso o ausente

Resistencia al calor

Baja

Elevada

Resistencia a la radiacin

Baja

Elevada

Resistencia a compuestos qumicos

Baja

Elevada

Capacidad de tincin

Fcil tincin

Difcil, slo con mtodos especiales

Efecto de la lisozima

Sensible

Resistente

Contenido de agua

Elevado, 80-90%

Bajo, 10 25%

Pequeas protenas solubles en agua

Ausentes

Presentes

pH citoplasmtico

Aproximadamente pH 7

Aproximadamente p H 5.5 6.0 (centro)

Otras Diferenciaciones Celulares


Vainas:
Estructuras tubulares
Heteropolmeros (protenas, lpidos y polisacridos)
Engloba conjuntos de clulas bacilares
Presentes en arqueobacterias

Prostecas:
Prolongaciones semi-rgidas
Dimetro menor al celular
Rodeados por membrana y pared celular
Funciones reproductivas y de unin a sustratos

Otras Diferenciaciones Celulares


Botones de Anclaje:
Acmulos de polisacridos
Pared celular, extremos de
pednculos, tallos inertes
Facilitan la unin a sustratos
Presentes en el gnero Caulobacter

prostecas,

Tallos o Pednculos:
Estructuras filamentosas
Terminados
en
botones
de
anclaje
adhesivos)
Secrecin continua de polisacridos
Unin a sustratos slidos (medios acuticos)
Gnero Gaionella

(discos

Otras Diferenciaciones Celulares


Cuerpos
Fructificantes:
presentes
en
mixobacterias. Constituyen estructuras que
contienen en su interior un tipo de clula
especializada, denominada mixospora

Clula madre
Hifa

Hifa

Hifas: filamentos
cenocticos
ramificados de los actinomicetos,
similares a las hifas de los hongos

Capa S
Capa sobre la superficie celular bacteriana
Comn en arqueobacterias

Modelo estructural similar a las baldosas de un suelo


Constituida por protenas y glucoprotenas
Bacterias Gram negativas: se adhiere directo a la
membrana externa
Bacterias Gram positivas: asociadas a la superficie del
peptidoglucano
Proteccin frente a fluctuaciones inicas y de pH, estrs
osmtico, enzimas, bacterias predadoras (Bdellovibrio),
fagocitosis, complemento
Contribuye a la virulencia

Capa S

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UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGA Y VIROLOGA

Lic. Liliana Gmez Gamboa (Mg.Sc.)

MARACAIBO, SEPTIEMBRE DE 2013.

GENOTIPO Y
FENOTIPO

ESTRUCTURA Y
FUNCIN DEL
MATERIAL
GENTICO

ADN Y
CROMOSOMAS
FLUJO DE LA
INFORMACIN
GENTICA

ARN Y SNTESIS DE
PROTENAS

Transcripcin
Traduccin
REPLICACIN DEL
ADN

Represin e
induccin
Mutacin
REGULACIN DE LA
EXPRESIN GENTICA
BACTERIANA

Transformacin
Conjugacin
Transduccin
Plsmidos y
transposones

TRANSFERENCIA Y
RECOMBINACIN
GENTICA

GENES Y
EVOLUCIN

BIOTECNOLOGA Y
ADN
RECOMBINANTE

Gentica
Ciencia de la herencia
que estudia los genes ,
transporte de la
informacin gentica,
replicacin y
transmisin a
generaciones ulteriores
y expresin de la
informacin dentro de
un organismo.

La informacin gentica
contenida en una clula
se denomina GENOMA.

El genoma de una
clula bacteriana
incluye sus
cromosomas y
plsmidos
Los CROMOSOMAS son
estructuras que
contienen ADN y que
fsicamente portan
informacin hereditaria.
Contienen los genes.

Los GENES son segmentos de ADN (excepto algunos


virus) que codifican productos funcionales.

GENOTIPO Y
FENOTIPO

El GENOTIPO de un organismo es su
constitucin gentica (su coleccin de genes,
su ADN completo), la informacin que codifica
la totalidad de las caractersticas particulares
del organismo.

El FENOTIPO se refiere a las propiedades reales y


expresadas, como la capacidad del organismo de
llevar a cabo una reaccin qumica particular.
Es la manifestacin del genotipo. Es la coleccin
de protenas de un organismo.

ADN Y
CROMOSOMAS
Las bacterias tienen un cromosoma circular nico formado por
una sola molcula circular de ADN asociada con protenas.
El genoma bacteriano es el conjunto total de genes que porta
una bacteria tanto en su cromosoma como en sus elementos
genticos extracromosmicos.
E. coli el cromosoma consta de
una sola molcula circular bicatenaria
de ADN que contiene aprox. 4,6
millones de pares de bases y casi 1
mm de longitud, o sea que es 1000
veces ms largo que la clula
completa. Sin embargo, el cromosoma
slo constituye alrededor del 10% del
volumen de la clula porque el ADN
est retorcido o superenrollado.

FLUJO DE LA
INFORMACIN
GENTICA

La replicacin del ADN posibilita el flujo de la


informacin gentica de una generacin a la siguiente.

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

REPLICACIN DEL ADN

En la replicacin del ADN una molcula de ADN


parental de doble cadena se convierte en dos
molculas hijas (primera copia) idnticas.

La clave para entender la replicacin del


ADN es la estructura complementaria de
las secuencias de bases nitrogenadas en
la molcula de ADN una cadena acta
como molde para la formacin de la otra
cadena.

La doble hlice del ADN parental se


separa cuando se rompen los enlaces
de hidrgeno dbiles que unen los
nucletidos en las cadenas opuestas
en respuesta a la accin de las
enzimas de replicacin.
Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

REPLICACIN DEL ADN


A continuacin se forman enlaces de
hidrgeno
entre
nucletidos
complementarios nuevos y cada
cadena del molde parental, para formar
nuevos pares de bases. Ciertas
enzimas catalizan la formacin de los
enlaces azcar-fosfato entre los
sucesivos nucletidos en cada una de
las cadenas hijas (primera copia).

REPLICACIN DEL ADN


Las dos cadenas de ADN son
antiparalelas.
El esqueleto
azcar-fosfato de una cadena
est invertido en relacin con el
esqueleto de la otra.

Tomado de: Microbiology an Introduction.


Tortora y col, 2010

ENZIMAS IMPORTANTES EN LA REPLICACIN, EXPRESIN Y REPARACIN DEL ADN

ADN girasa

Relaja el superenrollamiento por delante de la horquilla de replicacin

ADN ligasa

Forma enlaces covalentes para unir las cadenas de ADN

ADN polimerasa

Sintetiza ADN; corrige y repara el ADN

Endonucleasas

Corta el esqueleto de ADN en una cadena de ADN; facilita la reparacin y las


inserciones

Exonucleasas

Corta el ADN desde un extremo expuesto del ADN; facilita la reparacin

Helicasa

Desenrolla las dos cadenas de ADN

Metilasa

Agrega grupos metilo a bases seleccionadas en el ADN recin sintetizado

Fotoliasas

Utiliza la energa de la luz visible para separar los dmeros de pirimidina inducidos
por la luz UV

Primasa

Forma cebadores de ARN a partir de un molde de ADN

Ribozima

Enzima con ARN que elimina intrones y empalma exones

ARN polimerasa

Copia ARN a partir de un molde de ADN

Topoisomerasa

Relaja el superenrollamiento por delante de la horquilla de replicacin; separa los


crculos de ADN al final de la replicacin del ADN

Transposasa

Corta el esqueleto de ADN y deja extremos cohesivos formados por una sola
cadena

Las protenas
estabilizan el ADN
parental desenrollado

La cadena conductora
es sintetizada de
forma continua por la
ADN polimerasa

Las enzimas
desenrollan la doble
hlice parental

La cadena retrasada se sintetiza


de forma discontinua. La ARN
polimerasa sintetiza un ARN
cebador corto, que luego es
ampliado por la ADN polimerasa

La ADN polimerasa
digiere el ARN
cebador y lo
reemplaza por ADN

La ADN ligasa une los


fragmentos
discontinuos de la
cadena retrasada

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

REPLICACIN DEL ADN


La sntesis de ADN de novo se produce
en horquillas de crecimiento y avanza en
ambas direcciones. La sntesis de ADN
tiene lugar de manera continua en
sentido 5' a 3' (cadena adelantada) o en
fragmentos (cadena rezagada).

Durante la fase logartmica de crecimiento en un medio rico, pueden


tener lugar numerosos inicios del proceso de replicacin
cromosmica antes de que tenga lugar la divisin celular.
Este proceso genera una serie de nidos de burbujas en los
cromosomas hijos, cada uno de los cuales contiene su propio par de
horquillas de crecimiento para efectuar la sntesis de una nueva
molcula de ADN.

Modelo bidireccional alrededor


del cromosoma

Tomado de: Microbiology an Introduction.


Tortora y col, 2010

REPLICACIN DEL ADN

ARN Y SNTESIS DE
PROTENAS
La ARN polimerasa se une
al promotor y el ADN se
desenrolla al comienzo de
un gen.
El ARN se sintetiza por
apareamiento de bases
complementarias de los
nucletidos libres con las
bases nucleotdicas sobre
la cadena molde de ADN.
El sitio de sntesis se
desplaza a lo largo del
ADN; se desenrolla el
ADN que se ha transcrito.
La transcripcin alcanza
el terminador.

El ARN y la ARN
polimerasa se liberan y se
vuelve a formar la hlice
de ADN.

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Se renen los componentes


necesarios para comenzar la
traduccin.

En el ribosoma un ARNt que


transporta el primer aminocido se
aparea con el codn de iniciacin en
el ARNm. Un ARNt que transporta el
segundo aminocido se aproxima.

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

El lugar del ribosoma donde se


asienta el primer ARNt se denomina
sitio P. En el sitio A que le sigue el
segundo codn del ARNm se
aparea con un ARNt que transporta
el segundo aminocido.

El primer aminocido se une al


segundo por medio de un enlace
peptdico y se libera el primer ARNt.

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

El ribosoma se desplaza a lo largo


del ARNm hasta que el segundo
ARNt se encuentra en el sitio P y el
proceso contina.

El
ribosoma
contina
su
desplazamiento a lo largo del ARNm y
se acoplan nuevos aminocidos al
polipptido.

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Cuando el ribosoma alcanza un


codn de terminacin se libera el
polipptido.

Por ltimo, se libera el ltimo ARNt y


el ribosoma se separa. El polipptido
liberado forma una nueva protena.

REGULACIN DE LA
EXPRESIN
GNICA
BACTERIANA

La maquinaria gentica de una clula y


su maquinaria metablica estn
integradas y son interdependientes.

La caracterstica comn de todas las


reacciones metablicas es que son
catalizadas por enzimas y la inhibicin
por retroalimentacin detiene a las
enzimas que ya son sintetizadas.

Los genes, a travs de la transcripcin


y la traduccin, dirigen la sntesis de
protenas, muchas de las cuales
funcionan como enzimas (utilizadas
para le metabolismo celular)

MECANISMOS PARA EVITAR


LA SNTESIS DE ENZIMAS
QUE NO SON NECESARIAS.

La sntesis de protenas requiere un


enorme gasto de energa, por lo que su
regulacin es importante para la
economa de la energa celular.
La clula conserva energa mediante la
sntesis exclusiva de las protenas
necesarias en un momento particular.

REPRESIN E
INDUCCIN

Regulan la transcripcin y por consiguiente la


sntesis de enzimas.
Controlan la formacin y la cantidad de enzimas
en la clula, no las actividades de las enzimas.

Proceso que activa la transcripcin de


un gen o de varios genes.
INDUCTOR sustancia que induce la
transcripcin de un gen.
ENZIMAS INDUCIBLES enzimas que
se sintetizan en presencia de
inductores.
En estado basal, un gen inducible est
inactivado.

Mecanismo que inhibe la expresin


gnica y disminuye la sntesis de
enzimas.
Suele ser una respuesta al exceso de
un producto final de una va metablica
y provoca la disminucin de la
velocidad de sntesis de enzimas que
conducen a la formacin de ese
producto.
Mediada por REPRESORES
bloquean la capacidad de la ARN
polimerasa de iniciar la transcripcin de
los genes reprimidos.
En estado basal un gen reprimible est
activado.

LOS DETALLES DEL CONTROL


DE LA EXPRESIN GNICA
POR INDUCCIN Y REPRESIN

se describen
mediante el

formulado
en 1961 por
ESTUDIOS DE LA INDUCCIN DE
REGULACIN DE LA
LAS ENZIMAS DEL CATABOLISMO
SNTESIS DE
DE LA LACTOSA EN
PROTENAS
ESCHERICHIA COLI
tales enzimas son

-galactosidasa

lac permeasa
Participa en el transporte de la
lactosa a la clula

Los genes para las tres enzimas que participan en la


captacin y la utilizacin de la lactosa estn prximos
entre s en el cromosoma bacteriano y se regulan juntos.

FRANOIS JACOB Y
JACQUES MONOD

acetilasa

Metaboliza
ciertos
disacridos distintos
de la lactosa

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Estructura del opern. El opern consta de los sitios promotor (P) y


operador (O) y de los genes estructurales que codifican la protena.
El opern est regulado por el producto del gen regulador (I).

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Represor activo, opern inactivo. La protena represora se une con


el operador e impide la transcripcin del opern.

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Represor inactivo, opern activo. Cuando el inductor alolactosa se une a la


protena represora el represor inactivado ya no puede bloquear la
transcripcin. Los genes estructurales se transcriben y por ltimo dan
como resultado la produccin de las enzimas necesarias para el
catabolismo de la lactosa.

CONTROL DE LA
TRANSCRIPCIN

Regulacin de la expresin
gentica

En respuesta a un estmulo nutricional, la organizacin de los genes de


una ruta bioqumica en un opern dotado de unos mecanismos de control
gentico adecuados permite la produccin coordinada de las enzimas
necesarias.
La transcripcin del gen es regulada directamente por unas protenas
represoras (que se unen a los operadores) como respuesta a seales
nutricionales en el interior de la clula.

La velocidad de sntesis de las protenas por el ribosoma puede regular el


proceso de transcripcin en los procariotas.

CONTROL DE LA
TRANSCRIPCIN

El inicio de la
transcripcin
puede estar
sometido a unos
mecanismos de
control positivo o
negativo.

Regulacin de la
transcripcin

Los genes
sometidos a un
control negativo se
expresan a menos
que una protena
represora los
desconecte.

Esta protena impide la


expresin del gen al
unirse a una secuencia
especfica del ADN
(operador) lo que impide
que la polimerasa de ARN
inicie la transcripcin en
el promotor.

CONTROL DE LA
TRANSCRIPCIN

Regulacin de la
transcripcin

Los genes cuya expresin se encuentra sometida a un control positivo


tan slo se transcriben en presencia de una protena reguladora activa
(apoinductor) que se une a una secuencia especfica de ADN y colabora
con la polimerasa de ARN en los pasos iniciales mediante un mecanismo
desconocido.

OPERN
INDUCTOR

La introduccin de un sustrato en el
medio de crecimiento induce un aumento
de la expresin por parte del opern de
las enzimas necesarias para el
metabolismo de dicho compuesto.

OPERN
REPRESIBLE

La acumulacin de los productos finales


(corepresores) de una ruta puede sealar
la necesidad de desconectarla o
reprimirla mediante una disminucin de la
sntesis de sus enzimas.

La velocidad y eficiencia de
la sntesis de protenas
pueden estar controladas
por otros factores, como la
estructura del ARNm o las
concentraciones celulares
del ARNt y de ciertos
aminocidos.

MUTACIN: CAMBIO EN
EL MATERIAL GENTICO

TIPOS DE MUTACIONES
MUTGENOS
FRECUENCIA DE LAS
MUTACIONES
IDENTIFICACIN DE MUTANTES
IDENTIFICACIN DE
CARCINGENOS QUMICOS

CUALQUIER MODIFICACIN O CAMBIO EN


LA SECUENCIA DE BASES DEL ADN UN
CAMBIO EN LA SECUENCIA DE BASES DE
UN GEN EN OCASIONES PRODUCIR UN
CAMBIO EN EL PRODUCTO CODIFICADO
POR ESE GEN.

TRANSICIN Cambio de una purina o


pirimidina por otra purina o pirimidina.
TRANSVERSIN cambio de purina por
pirimidina o viceversa.

Una nica base en un


punto de la secuencia
del ADN es sustituida
por otra base diferente

MUTACIN PUNTUAL
(SUSTITUCIN DE
BASES)

Cuando la sustitucin de
bases produce una sustitucin
de aminocidos en la protena
sintetizada

Mutacin de
cambio de
sentido

Mutacin
terminadora
MUTACIONES DE
CAMBIO DEL MARCO
DE LECTURA

Las sustituciones de bases y las mutaciones de cambio del


marco de lectura pueden aparecer de forma espontnea debido
a errores ocasionales durante la replicacin del ADN. Suceden
en ausencia de agentes productores de mutaciones.

Cuando la sustitucin de
bases produce un codn de
terminacin

MUTACIONES
ESPONTNEAS

Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

SUSTITUCIN DE
BASES

TIPOS DE MUTACIONES Y SUS EFECTOS SOBRE LAS


SECUENCIAS DE AMINOCIDOS DE LAS PROTENAS

Molcula de ADN normal

Mutacin de cambio de sentido

Es cuando la sustitucin
de bases produce una
sustitucin
de
aminocidos en la protena
sintetizada.

TIPOS DE MUTACIONES Y SUS EFECTOS SOBRE LAS


SECUENCIAS DE AMINOCIDOS DE LAS PROTENAS
Tomado de: Microbiology an Introduction. Tortora y col, 2010

Cuando una sustitucin de


bases produce un codn
de terminacin.
Mutacin de terminacin

Mutacin de cambio del marco de lectura

Cuando un par de
nucletidos o algunos
pares
de
nucletidos
pesentan delecin o se
insertan en el ADN.

Agentes ambientales que de


forma directa o indirecta
causan mutaciones

cido nitroso
Anlogos de
los nuclesidos

QUMICOS

cido Nitroso (HNO2) como mutgeno

RADIACIN
Rayos X
Rayos gamma
Luz UV

Anlogos de nuclesidos y bases


nitrogenadas que reemplazan

La 2-aminopurina se incorpora al ADN en lugar de la adenina pero puede aparearse con


la citosina de modo que un par AT se convierte en un par CG.

El 5-bromouracilo se usa como droga anticancerosa porque las enzimas celulares lo reconocen
en forma errnea como timina pero se aparea con citosina. En la siguiente replicacin del ADN,
un par AT se convierte en un par GC.

Creacin y reparacin de un dmero de


timina causado por la luz ultravioleta
La exposicin a la luz UV determina que las
timinas adyacentes se entrecrucen y formen un
dmero de timina (enlace covalente lesivo entre
ciertas pares de bases) que altera su
apareamiento normal de bases y pueden causar
daos graves o la muerte de la clula debido a
que sta no puede transcribir o replicar de
manera adecuada el ADN.

Una endonucleasa corta el ADN y una


exonucleasa elimina el ADN daado.

La ADN polimerasa llena la brecha mediante la


sntesis de ADN nuevo, para la que utiliza la
cadena intacta como molde.
La ADN ligasa sella la brecha remanente
mediante la unin de las cadenas nueva y vieja
de ADN.

La tasa suele
establecerse como
una potencia de 10

Es la probabilidad de
que un gen mute
cuando una clula se
divide
Tasa de mutacin

Y debido a que
las
mutaciones
son muy raras, el
exponente
siempre es un
nmero negativo.

Las mutaciones suelen producirse ms o menos al azar a lo largo


del cromosoma.
La aparicin de mutaciones aleatorias con baja frecuencia es un
aspecto esencial de la adaptacin de las especies a su ambiente.

La evolucin requiere que la diversidad gentica se genere al azar y


con una tasa reducida.

Casi todas las mutaciones son


perjudiciales y es probable que
sean eliminadas de la dotacin
gentica cuando la clula
individual muere o que sean
neutras. Sin embargo, algunas
mutaciones son beneficiosas.

Por ejemplo, una mutacin que confiere resistencia a los antibiticos es


beneficiosa para una poblacin de bacterias que est expuesta de manera
regular a los antibiticos.
Una vez que un rasgo de este tipo ha aparecido a travs de la mutacin las
clulas que portan el gen mutado tienen ms probabilidades de sobrevivir y
reproducirse que otras clulas siempre que el ambiente permanezca igual.
Muy pronto la mayora de las clulas de la poblacin tendr el gen; habr
sucedido un cambio evolutivo en pequea escala.

Los mutantes pueden detectarse


mediante la seleccin o la
comprobacin de un fenotipo alterado.

Lo habitual es
realizar
experimentos
con
BACTERIAS.

SELECCIN
POSITIVA
(DIRECTA)

1. Reproduccin rpida pueden utilizarse


grandes cantidades de microorganismos.
2. Las bacterias suelen tener una sola copia de
cada gen por clula los efectos de un gen
mutado no son enmascarados por la
presencia de una versin normal del gen.

Deteccin de clulas
mutantes por
eliminacin de clulas
parentales no
mutadas. Ejm: Seleccin
de bacterias mutantes
resistentes a penicilina.

SELECCIN
NEGATIVA
(INDIRECTA)

Identificacin de
mutaciones en
otros tipos de
genes (rplicas
en placas)

Asa

RPLICAS EN PLACAS

El terciopelo estril se
presiona sobre las
colonias que crecen
en la placa madre

Superficie de
terciopelo
(esterilizado)

La clulas
correspondientes a cada
colonia se transfieren del
terciopelo a las placas
nuevas

Placa madre
con medio
que contiene
histidina

Las placas se
incuban

Placa de Petri con


medio que contiene
histidina

Placa de Petri con


medio carente de
histidina

Mutante auxtrofa

Se compara el crecimiento en las


placas. Una colonia que crece en
el medio con histidina pero que
no pudo desarrollarse en el medio
sin histidina es un auxtrofo
(mutante que requiere histidina)
Colonia faltante

Muchos mutgenos conocidos son


carcingenos, sustancias que causan
cncer en los animales, incluidos los
seres humanos.

SELECCIN
PRELIMINAR DE
CARCINGENOS
POTENCIALES

Cuanto ms mutagnica
sea una sustancia
mayor ser su poder
carcinognico.

1. Varios mutgenos potenciales pueden ser probados


cualitativamente mediante el agregado de las sustancias qumicas
individuales sobre pequeos discos del papel en una nica placa
inoculada con las bacterias.
2. Pueden utilizarse mezclas como vino, sangre, humo condensado y
extractos de alimentos para comprobar si contienen mutgenos.

Se compara la cantidad
de colonias en las placas
experimental y de control.
La placa de control puede
mostrar algunas bacterias
con mutaciones inversas
que sintetizan histidina de
forma espontnea. Las
placas de prueba
mostrarn un aumento
del nmero de bacterias
con mutaciones inversas
que sintetizan histidina si
la sustancia qumica
probada en realidad es un
mutgeno y un
carcingeno potencial.
Cuanto mayor sea la
concentracin de
mutgeno utilizada mayor
ser la cantidad de
colonias que sufran
mutacin inversa.
Se preparan dos cultivos
de Salmonella que han
perdido su capacidad de
sintetizar histidina
(dependientes de histidina)

Se agrega el mutgeno
potencial slo a la muestra
experimental; el extracto de
hgado de rata (un activador)
se agrega a ambas muestras

Cada muestra se vierte sobre una placa de medio sin


histidina. Se incuban a 37C durante 48 h. Slo las
bacterias cuyo fenotipo dependiente de histidina ha
sufrido una mutacin inversa (inversin) a sintetizador
de histidina formarn colonias.

Transferencia
gnica
VERTICAL

RECOMBINACIN
GENTICA
Intercambio de genes
entre dos molculas de
ADN para formar nuevas
combinaciones de genes
en un cromosoma

ENTRECRUZAMIENTO
TRANSFERENCIA GNICA
(Vertical y horizontal)

Transferencia
gnica
HORIZONTAL

Paso de genes entre


bacterias de manera
lateral, es decir, a otros
microorganismos de la
misma generacin.

Transformacin
Conjugacin
Transduccin

ENTRECRUZAMIENTO
El ADN de una clula
se alinea con el ADN en
la clula receptora. El
ADN donante tiene una
muesca.

ADN donante

Cromosoma
receptor

El ADN donante se alinea con los pares


de base complementarios en el
cromosoma receptor.
Esto puede
involucrar miles de pares de bases.

La protena RecA cataliza la


unin de las dos cadenas.

El resultado es que el cromosoma receptor contiene ADN


nuevo. Los pares de bases complementarios entre las dos
cadenas ser resuelto por la ADN polimerasa y la ligasa. El
ADN donante ser destrudo. El receptor puede ahora tener
uno o ms genes nuevos.

Protena RecA

Experimento de Griffith (1928)

Proceso mediante el cual los genes se


transfieren de una bacteria a otra
como ADN desnudo en solucin.

Se le inyectaron al
ratn bacterias vivas
encapsuladas

Se le inyectaron al ratn
bacterias vivas no
encapsuladas

Se le inyectaron al ratn
bacterias encapsuladas
muertas por calor

El ratn muri

El ratn permaneci sano

El ratn permaneci sano

Del ratn muerto se


aislaron colonias de
bacterias encapsuladas.

Se aislaron algunas colonias


de bacterias no
encapsuladas del ratn; los
fagocitos destruyeron las
bacterias no encapsuladas

No se aislaron colonias
del ratn

Se le inyectan al ratn bacterias


vivas no encapsuladas y bacterias
encapsuladas muertas por calor

El ratn muri

Del ratn muerto se


aislaron colonias de
bacterias encapsuladas.

La
transformacin
sucede
naturalmente entre muy pocos gneros
de
bacterias,
como
Bacillus,
Haemophilus, Neisseria, Acinetobacter
y ciertas cepas de los gneros
Streptococcus y Staphylococcus.
Cuando una clula receptora se haya
en un estado fisiolgico en el cual
puede captar el ADN donante, se dice
que es competente. La competencia
es resultado de alteraciones de la
pared celular que la tornan permeable
a las molculas de ADN grandes.

La clula receptora capta el


ADN de la clula donante

El ADN donante se
alinea con bases
complementarias

Se produce la
recombinacin
entre el ADN de la
clula donante y el
ADN de la clula
receptora

Mecanismo por el cual se transfiere material


gentico de una bacteria a otra.
La conjugacin es mediada por una clase de
plsmido (fragmento circular de ADN que se replica
independientemente del cromosoma de la clula).

El ADN bacteriano se transfiere de


una clula donante a una clula
receptora dentro de un virus que
infecta
a
las
bacterias
(bacterifagos o fago)

Fragmentos circulares autorreplicantes de


ADN que contienen genes y que constituyen
entre el 1% y el 5% del tamao del cromosoma
bacteriano. Presentes en bacterias y algunos
microorganismos eucariotas.

Son segmentos pequeos de


ADN que pueden trasladarse
(ser transpuestos) de una
regin de una molcula de
ADN a otra (700 a 40.000
pares de base de longitud).

Una secuencia de insercin (IS), el transposn ms simple, contiene un gen para la


transposasa, la enzima que cataliza la transposicin. El gen de la transposasa se une
a cada extremo por secuencias repetidas invertidas que funcionan como sitios de
reconocimiento para el transposn. IS1 es un ejemplo de una secuencia de insercin,
mostrado aqu como secuencia IR simplificada.

El transposon complejo transporta otro material gentico en adicin a los genes


transposasa. El Tn5 transporta el gen para resistencia a Kanamicina y tiene copias
completas de la insercin de la secuencia IS1 en cada extremo.

La transposasa corta el ADN y deja extremos cohesivos.

Los extremos cohesivos del transposn


y el ADN diana forman una estructura
anular.

La diversidad proporciona la
materia prima para la evolucin y la
seleccin natural la fuerza directriz
La actividad gnica
puede ser
controlada por
mecanismos
reguladores
internos de la clula
Los genes
mismos pueden
ser alterados o
reordenados por
mutacin,
transposicin y
recombinacin

Todos estos
procesos
proveen
diversidad en la
descendencia de
las clulas

La seleccin natural puede actuar


sobre diversas poblaciones para
asegurar la supervivencia de las que
se adapten a ese ambiente particular

Las diferentes clases de


microorganismos que existen en la
actualidad son resultado de una
larga historia de evolucin.
Los microorganismos han sufrido
cambios continuos por alteraciones
en sus propiedades gnicas y la
adquisicin de adaptaciones a
hbitats muy diferentes.

BIOTECNOLOGA
Empleo de
microorganismos,
clulas o
componentes
celulares para
elaborar un producto.
En la actualidad se utilizan
microorganismos y tambin
plantas completas como si
fueran fbricas para producir
sustancias qumicas que los
microorganismos no
sintetizan naturalmente.

Esto ltimo es posibilitado por la


insercin de genes en las clulas
mediante la tecnologa del ADN
recombinante (ADNr), que a
veces se denomina ingeniera
gentica.

El objetivo puede ser


formar copias del gen

El objetivo puede ser formar


un producto proteico del gen

Vectores

Reaccin
en cadena
de la
polimerasa

Enzimas de
restriccin

Clase especial de
enzimas que cortan
el ADN presentes en
muchas bacterias.

Lo importante en las tcnicas de ADN r es que


la enzima de restriccin reconozca y corte,
o digiera, slo una secuencia particular de
bases nucleotdicas en el ADN y que corte
esa secuencia del mismo modo cada vez.

Las enzimas de restriccin


tpicas utilizadas en los
experimentos de clonacin
reconocen secuencias de
cuatro, seis u ocho bases.
Muchas
enzimas
de
restriccin producen cortes
alternados en las dos
cadenas de una molcula
de ADN, es decir cortes en
sitios
que
no
son
directamente
opuestos
entre s.

Molcula de ADN

Capacidad de autoreplicacin.
Tamao: que permita su manipulacin fuera de
la clula durante los procedimientos de ADN
recombinante.
Forma: que proteja de la destruccin.
Presencia de un gen marcador.
Ejemplos: plsmidos, ADN viral.

Es una tcnica que permite


amplificar
rpidamente
muestras pequeas de
cido nucleco, es decir,
aumentar su cantidad de
modo que sea suficiente
para poder analizarlo.

Insercin de ADN extrao en las


clulas
Obtencin del ADN
Seleccin de un clon
Formacin de un producto gnico
Hibridacin de colonias

Tanto el ADN del plsmido como


ADN extrao son cortados con la
misma enzima de restriccin. El
plsmido tiene genes para la hidrlisis
de la lactosa (lacZ) y resistencia a
ampicilina

El ADN extrao se inserta en el


gen lacZ. La bacteria que
recibe el vector plasmdico no
producir la enzima galactosidasa si el ADN
extrao ha sido insertado en el
plsmido.
El plsmido recombinante se
introduce en la bacteria, la
cual se vuelve resistente a
ampicilina.
Todas las bacterias tratadas se
siembran en placas de agar nutritivo
que contiene ampicilina y un sustrato
de -galactosidasa. Se incuban. El
sustrato -galactosidasa se denomina
X-gal.
Slo las bacterias con el plsmido crecern en
presencia de ampicilina. Las bacterias que
hidrolizan el X-gal producen galactosa y un
compuesto ndigo, el cual tie las colonias
bacterianas de color azul. Las colonias blancas
que aparecen deben contener el ADN extrao.
Las colonias azules no contienen el ADN
extrao.

LOS GENES
CLONADOS
PUEDEN
APLICARSE DE
DIVERSOS MODOS

Aplicaciones
teraputicas

Producir
sustancias tiles
de una manera
ms eficiente y
menos costosa

Obtener
informacin del
ADN clonado que
sea til en el marco
de la investigacin
bsica, la medicina
aplicada o la
medicina forense

Utilizar genes
clonados para
alterar las
caractersticas de
clulas u rganos

Produccin de hormonas como la INSULINA


y la
SOMATOSTATINA.
Produccin de Vacunas de subunidades (hepatitis B) y
vacunas de ADN (HIV, SARS, influenza y paludismo)
Preparacin de sangre artificial (transfusiones)
Terapia gnica para curacin de enfermedades genticas
(hemofilia B e inmunodeficiencia combinada grave)
Interferencia por ARN (RNAi) silenciamiento gnico
(silencia la expresin de un gen) se introducen en una
clula ARN bicatenarios (siRNA) que se dirigen contra un gen
particular (gen viral) inhibicin del VHB.