Inmovilizacin de clulas microbianas:

El comportamiento hidrodinmico de una poblacin microbiana que se

dispersa como clulas individuales dentro del continuo de un lquido se rige
por el comportamiento de ese lquido. Esto impone una severa limitacin en
el funcionamiento biolgico de los sistemas en los que se utilizan clulas
microbianas para un propsito en particular, si se trata de la produccin de
un bioqumico o el tratamiento de un residuo peligroso. Esta limitacin
podra conducir a la reduccin de la productividad y la eficiencia y es
causada por la eliminacin de las clulas del sistema cuando se retira la
corriente principal. Esta limitacin se puede evitar si de alguna manera el
comportamiento hidrodinmico de las clulas se desacopla de la del lquido,
por ejemplo mediante la inmovilizacin de las clulas. En ese inmovilizacin
celular contexto puede ser simplemente definida como la "restriccin de la
movilidad de clulas dentro de un espacio definido [3] o, como elaborado
por Webb y Zervakos, como el "confinamiento o localizacin de clulas
microbianas viables a una cierta regin de espacio definida de una manera
tal como para exhibir caractersticas hidrodinmicas que difieren de las de
los ambientes circundantes "
1. Tcnicas de inmovilizacin:
Durante los aos o variedad de tcnicas se han desarrollado y
utilizado para la inmovilizacin de clulas microbianas, con muchas
habiendo sido tomada directamente de la tecnologa de
inmovilizacin de enzimas. Tcnicas de inmovilizacin de la clula se
pueden clasificar ampliamente como tcnicas pasivas y activas. En el
enfoque pasivo, el proceso de inmovilizacin ocurre de forma natural
debido al crecimiento de las clulas microbianas en las superficies
internas o externas de un soporte slido (matriz de soporte),
resultando en la formacin de pelculas biolgicas [3, 4]. La formacin
de biofilms es comn en la naturaleza y ha sido utilizado
industrialmente en el tratamiento biolgico de aguas residuales,
produccin de vinagre y la fermentacin del molde, as como
sistemas experimentales a escala de laboratorio usado para los
propsitos de investigacin. En las tcnicas activas, la inmovilizacin
de clulas es inducida por medios fsicos o qumicos. En un enfoque
general que se ha adaptado ampliamente, tcnicas de inmovilizacin
se clasifican de acuerdo a los procesos fsicos que intervienen,
independientemente de la naturaleza pasiva o activa del proceso.
Estos incluyen el apego, atrapamiento, agregacin, y la contencin
como se representa esquemticamente en la Figura 2.
1.1Adhesin:
Es el trmino utilizado para cualquier forma de inmovilizacin en
la que las clulas forman una unin a la superficie de un soporte
slido, ya sea de forma natural (adsorcin y la adherencia) o como
resultado del tratamiento de la superficie de las clulas y el
material de soporte (unin covalente ). Adhesin Natural
(adsorcin) de las clulas a las superficies es un fenmeno
generalizado y proporciona un mtodo simple y suave para la
inmovilizacin de las clulas [4, 5]. El tipo de fuerzas involucradas
depende principalmente de las propiedades de la superficie del

soporte y las clulas. Con superficies cargadas positivamente,

tales como resinas de intercambio inico o gelatina, las fuerzas
electrostticas son dominantes, mientras que con superficies
cargadas negativamente unin se produce a travs de unin
covalente o enlace de hidrgeno [3]. Materiales de apoyo con gran
superficie como arena o materiales porosos como el carbn
activado son la opcin preferida, ya que suelen permitir altas
cargas de celulares, a pesar de las resistencias de difusin
intrapartcula podran convertirse en un obstculo importante en
estas cargas celulares elevadas. Las otras matrices de soporte
comn incluyen vidrio poroso, almina, cermica, gelatina,
quitosano, virutas de madera, resinas de intercambio inico, y
Sepharose [3, 6]. La principal ventaja que la adsorcin ofrece es el
contacto directo entre las clulas y el medio que contiene los
nutrientes. Sin embargo, el contacto directo de las clulas con el
entorno y su exposicin a las fuerzas de cizallamiento existentes
en conjuncin con las fuerzas dbiles de unin implicados en la
adsorcin puede resultar en el desprendimiento de las clulas del
soporte. La reticulacin de las clulas despus de la adsorcin se
ha sugerido como un medio para fortalecer la unin.
Unin covalente, como su nombre indica, implica la formacin de
enlaces covalentes entre las clulas y la superficie de apoyo. El
tratamiento de las superficies de unin con agentes de
acoplamiento tales como glutaraldehdo (apoyo con el grupo
-NH2), carbodiimida (compatible con el grupo -COOH), y CNBr
(soporta con el grupo -OH) es un paso esencial en la promocin de
la unin covalente, como el funcional grupos en las superficies
celulares y de apoyo en general no son adecuados para la unin
covalente [3]. La naturaleza txica de estos promotores de unin
es una desventaja, y como resultado de una serie de materiales
de soporte con un grupo funcional adecuado se han desarrollado y
utilizado para la inmovilizacin celular. Estos incluyen
carboximetilcelulosa plus carbodiimida, los portadores que
contienen aldehdo, amina, epoxi, Zr (IV), xido de Ti (IV) xido, y
celulosa plus cianrico.
1.2Atrapamiento:
La inmovilizacin de las clulas por atrapamiento se consigue
utilizando materiales de soporte preformados con estructuras de
micro o macroporosas. El atrapamiento de las clulas individuales
y su ventaja de crecimiento natural a la colonizacin del material
de soporte. El atrapamiento dentro de la estructura preformada
podra ocurrir a nivel microscpico usando partculas microporosas
tales como cermica, vidrio sinterizado, o gel de slice o a nivel
macro a travs de la utilizacin de partculas con poros
relativamente grandes, tales como malla de acero inoxidable o de
partculas de soporte de biomasa espuma reticulada [3 , 6]. Para
comparar con sus homlogos adjuntos, clulas atrapadas estn
protegidas de las fuerzas de cizallamiento existentes en el
biorreactor pero de ninguna manera estn confinados dentro de la

estructura y es poco probable que permanezca libre de clulas del

medio lquido. Las fuerzas de cizallamiento existentes, sin
embargo, actan sobre las clulas que crecen ms all de los
lmites del apoyo y en conjuncin con la atricin de partculapartcula controlan la biomasa hold-up en el material de soporte.
El atrapamiento de las clulas dentro de las estructuras porosas
que se forman in situ alrededor de las clulas se consigue
mediante la mezcla de las clulas microbianas, en la forma de una
suspensin o pasta, con un compuesto adecuado, que luego se
gelifica o polimeriza para formar la estructura porosa que contiene
las clulas. Atrapamiento en la red polimrica formada in situ
alrededor de las clulas es de hecho la simulacin de un fenmeno
natural
en
condiciones
controladas.
Ciertos
tipos
de
microorganismos con la capacidad para excretar polisacridos
extracelulares existen normalmente unidos a superficies o incluso
en forma de flculos grandes (por ejemplo, lodo activado),
mientras atrapado dentro de la limo o gel secretada por s mismos
o los dems miembros de la poblacin. La diversidad de los
materiales y mtodos que podran utilizarse para la construccin
de tales redes polimricas permite el diseo de un sistema con
retencin mxima de las clulas y el transporte eficaz del sustrato
y de los productos [5]. Sin embargo, el xito de un sistema de este
tipo depende de la seleccin de un precursor polimrico con la
menor toxicidad y realizar el proceso de polimerizacin bajo
condiciones ambientales suaves (pH apropiado, la temperatura, y
el disolvente), de modo que se conserva la viabilidad celular. Las
matrices polimricas comunes utilizados para el atrapamiento de
clulas incluyen poliacrilamida, resinas epoxi, agar, alginatos,
carragenina -celulosa, carboximetil celulosa, quitosano y [5, 7-9],
que se sintetiz usando la gelificacin, precipitacin, intercambio
de iones de gelificacin, y policondensacin como se describe
brevemente en las secciones siguientes [3].
La gelificacin:
Este es un mtodo simple y suave que implica transicin de
fase en una mezcla de una solucin de polmero y las
clulas a causa de un cambio en la temperatura [5]. Para
lograr esto, las clulas microbianas recogidas se mezclan
primero con la solucin de polmero (por ejemplo, agar o
agarosa) a temperatura elevada. La mezcla preparada se
pasa luego a travs de una plantilla mientras se somete a
enfriamiento, lo que resulta en la formacin de una red
tridimensional slido en forma de perlas que contienen
clulas. El uso de un soporte de ncleo duro esfrica
cubierto con una capa de gel que contiene clulas podra
superar la naturaleza blanda y frgil de las perlas de gel y
proporcionar la resistencia mecnica requerida [3]. Aunque
la biomasa de retencin de partculas individuales podra
ser menor que un cordn hecho enteramente de polmero,
la productividad general por partcula no puede ser tan

diferente, como limitaciones difusionales que obstaculizan

la actividad de las clulas en el ncleo interno de una perla
polimrica se eliminan en un soporte de ncleo duro
cubierto por una capa de gel.
Precipitacin:
En este mtodo el polmero designado, tpicamente
poliestireno, triacetato de celulosa, o colgeno, se disuelve
en un disolvente orgnico tal como etanol o acetona. Las
clulas recogidas se aaden entonces a esta solucin, y
mediante la manipulacin de pH o adicin de un segundo
disolvente que se alcanza la precipitacin del polmero. El
contacto directo de los disolventes con las clulas puede
provocar la desactivacin o la muerte y debe ser
minimizado.
Gelificacin de intercambio de iones:
La reaccin de polielectrolitos solubles en agua (geles
ionotrpicos) con un contrain o un reticulantes resultados
agente en la formacin de una red polimrica slida que
podra mantener las clulas. Los polielectrolitos adecuados,
que en general son baratos y no imponen un efecto txico
grave, son aquellos con carboxilo o sulfonilo grupos
(alginato, pectina, carragenina) o aquellos con grupos
amino tales como quitosano obtenidos a partir de la quitina
por desacetilacin [5]. Una variedad de contraiones, tanto
aninico y catinico, podra ser utilizado como agentes de
reticulacin. El ejemplo ms comn es la inmovilizacin de
clulas microbianas en calcio-alginato, que se forma como
resultado de la adicin de iones de Ca2 + (en forma de
solucin de CaCl2) a una suspensin de clulas en sodio de
alginato. Uno de los principales problemas con la
inmovilizacin de clulas en alginato es la desestabilizacin
de calcio-alginato en presencia de agentes quelantes tales
como fosfato, citrato, y cido etilendiaminotetraactico
(EDTA).
Policondensacin:
Una red polimrica estable con resistencia qumica y
resistencia mecnica tales como los de resinas epoxi puede
formarse por reacciones de policondensacin [3, 5]. Las
resinas epoxi, poliuretano, gel de slice, gelatinaglutaraldehdo, albmina-glutaraldehdo, y el colgeno en
glutaraldehdo son ejemplos tpicos de polmeros obtenidos
por policondensacin [3]. La elaborada la qumica de la
polimerizacin, alta temperatura y pH bajo o alto requerido
para estas reacciones, y la toxicidad de los grupos
funcionales han sido los principales obstculos en la
aplicacin generalizada de policondensacin para la
inmovilizacin celular.
1.3Agregacin:

La agregacin y floculacin de las clulas microbianas resultantes

en la formacin de flculos grandes es un fenmeno natural que
se puede observar en muchos tipos de microorganismos en alguna
etapa de su ciclo de vida. Los polmeros en la superficie celular y
sustancias polimricas extracelulares son factores importantes en
el desarrollo natural de flculos microbianos y su integridad [3, 5].
Agentes de reticulacin tal como glutaraldehdo podran ser
utilizados para promover la formacin de grandes aglomerados en
especies que no se consideran normalmente como floculante. La
formacin de flculos grandes como resultado de la agregacin o
bien se produce de forma natural o se promueve artificialmente;
se considera una forma de inmovilizacin en el sentido de que
estas grandes flculos se pueden mantener en los biorreactores
operados continuamente. La formacin de grandes agregados
tambin facilita la separacin de clulas a partir del efluente, que
luego puede devolverse al biorreactor. La formacin de flculos
microbianos con buenas propiedades de sedimentacin es
instrumental en el tratamiento de aguas residuales municipales e
industriales por el proceso de lodos activados.
1.4Contencin:
Inmovilizacin de la clula microbiana tambin podra lograrse
mediante la contencin de la clula detrs de una barrera. La
barrera adecuada que debera permitir el flujo de los productos de
sustrato y metablicos, mientras que el mantenimiento de las
clulas, podra ser preformado tales como membranas
semipermeables utilizadas para micro y ultrafiltraciones o podra
estar formada in situ alrededor de las clulas. Encapsulacin y
microencapsulacin son ejemplos tpicos de inmovilizacin por la
formacin in situ de una barrera alrededor de las clulas [8, 9].
Microencapsules son partculas esfricas huecas con lmites
hechas de una membrana semi-permeable, que mantiene las
clulas dentro de su volumen hueco y permite el transporte de los
productos y nutrientes desde y dentro de la cpsula. Una variedad
de compuestos polimricos que incluyen nylon, colodin,
poliestireno, acrilato, hidrogel de alginato-polilisina, celulosa
celulosa-acetato de etilo, y el polister puede ser usado como la
membrana de encapsulacin en [3]. Para comparar con perlas
polimricas con clulas atrapadas, mayores de biomasa atracos se
pueden lograr mediante microencapsulacin. Adems, las
resistencias difusionales intrapartcula en una microcpsula que
son ms bajos porque las clulas se suspenden en un lquido
dentro de una cpsula en oposicin a una red polimrica. La
interfaz de dos lquidos inmiscibles tambin podra servir como
una barrera para la contencin de las clulas. En este caso las
clulas cosechadas o una suspensin de clulas se emulsionan en
un lquido orgnico y se resuspendieron como una gotita en una
fase acuosa [3]. La contencin de las clulas detrs de la
membrana semi-permeable preformado es otro enfoque para la
inmovilizacin de las clulas y la funcin subyacente de los
biorreactores de membrana.