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Universidad de Colima

Doctorado en Ciencias; rea: Biotecnologa


Presencia de hongos micorrzicos arbusculares y contribucin de Glomus
intraradices en la absorcin y translocacin de cinc y cobre en girasol
(Helianthus annuus L.) crecido en un suelo contaminado con residuos de
mina
Tesis
Que para obtener el grado de
Doctor en Ciencias; rea: Biotecnologa
Presenta
Rosario Pineda Hernndez
Asesores
Dr. Sergio Aguilar
Dra. Luca Yolanda Varela Fregoso
Coasesores
Dra. Mara del Roco Flores Bello
Dr. Javier Faras Larios
Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre
Tecomn, Colima., Noviembre de 2004

AGRADECIMIENTOS
A mi padre Dios, en el poderoso nombre de Jesucristo te doy gracias por sostenerme en
mis momentos de desalientos, por ser mi fortaleza, mi gua y mi luz en el camino
hacia mi meta y por lograrla con xito.

A la Direccin General de Educacin en Ciencia y Tecnologa del Mar, por la confianza


depositada al otrgame la beca comisin

para la realizacin de este estudio,

especialmente al Bilogo Manuel Lpez Yaes por su valioso apoyo en todos los
trmites de la beca.

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACYT) por proporcionarme apoyo


econnico con una beca, que sin duda, sin ella, no hubiera sido posible la
realizacin de este proyecto.

A los directores del CET-MAR # 12, MVZ Martn Palomera Todd, y M. en C. Ramn
Ramos Crespo por el consecuente e invaluable apoyo manifestado durante el periodo
de la realizacin de este estudio.

A todos mis compaeros que laboran en el CET- MAR # 12 por todo el apoyo.

A la Universidad de Colima y autoridades que laboran en la Facultad de Ciencia Biolgicas


Agropecuarias (FCBA) Campus Tecomn, por haberme permitido interactuar con
todos los investigadores que participan el posgrado y desarrollar el proyecto de
investigacin.

A la Dra. Ma. del Roco Flores Bello y el Dr. Sergio Aguilar Espinosa por ser quienes me
iniciaron en ese mundo maravilloso de los hongos micorrzicos, por su asesora en
las mltiples actividades de campo y de laboratorio, sus constantes asesoras, sus
acertadas sugerencias y por su apoyo moral, durante la realizacin de este proyecto.

A la Dra. Luca Varela Fregoso por haber formado parte de mi comit tutorial (como
directora adjunta) por compartir su amplia experiencia y conocimientos
relacionados con los hongos, por su tiempo dedicado en la elaboracin de este
documento y sobre todo por su amistad.

Al Consejo Acadmico asignado al Programa donde realic mis estudios de postgrados: Dr.
Sergio Aguilar Espinosa, Dra. Ma. del Roco Flores Bello, Dr. Javier Faras Larios
y Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre, por sus acertados observaciones e indicaciones
que de manera sustancial contribuyeron al enriquecimiento de este trabajo.

A las Dra. Marilu Lpez Lavn, M. en C. Edelmira Galindo Velasco y al Dr. Oscar
Rebolledo Domnguez, por el apoyo brindado en esos momentos de angustia y
desaliento.

Al M. en C. Csar Andrs Angel Sahagn por su valiosa asesora en el anlisis estadstico e


interpretacin de los datos generados de la evaluacin de todos los bioensayos.

Finalmente expreso mi reconocimiento a quienes de alguna forma contribuyeron en el logro


de la culminacin de este proyecto. Entre ellas me refiero a las siguientes
personalidades:
Dr. David Crowley del Department of Environmental Science of University of California
en Riverside.
Dra. Corinne Leyval del Centre de Pdologie Biologique de Universit de Nancy.
Dra. Ma. del Pilar Ortega Larrocea del Instituto de Geologa de la Universidad Nacional
Autonoma de Mxico.
Dr. Abdul Khan del College of Science, Technology and Environment, University of
Western Sydney,Campbelltown Campus, Locked Bag 1797. Penrith South NSW
1797 Australia.
Dr. Jos Miguel Barea Navarro de la Unidad Experimental del Zaidin en Granada Espaa

DEDICATORIAS
A mis padres:
Sara y Rafael gracias por traerme a este maravilloso camino de la vida, pap se que estas
con Dios muy contento porque alcance mi sueo.

A mis amados hijos Zyanya y Mixtli


Amados hijitos quiero decirles que son lo ms valioso que Dios me ha dado, les
agradezco infinitamente toda su comprensin en esas largas de ausencia y por su
valiosa ayuda en la culminacin mi trabajo.

A mi esposo Ing. Ramn Campos Mosqueda


Por todo su amor, paciencia y apoyo en todo el camino de este proyecto

A mis hermanos Connie, Teresa, Roma, Rafael, Primo, Bernardo y Rudy.

TODO LO PUEDO EN CRISTO QUE ME FORTALECE


(Filipenses 4: 13)

NDICE

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NDICE DE CUADROS
NDICE DE FIGURAS
ABREVIATURAS
RESUMEN
ABSTRACT
1. INTRODUCCIN
2. ANTECEDENTES
2.1 Metales pesados
2.1.1 Metales pesados en el ambiente
2.1.2 Efecto de los metales pesados en suelos
2.2

2.3

2.4
2.5

2.6

Estrategias de remediacin de suelos por mtodos fsicos y


qumicos
2.2.1 Extraccin
2.2.2 Sellado
2.2.3 Incineracin
2.2.4 Tratamiento qumico
2.2.5 Tratamiento electroqumico
Remediacin de suelos por mtodos biolgicos
2.3.1. Biorremediacin
2.3.2. Fitorremediacin
2.3.3. Plantas hiperacumuladoras
2.3.4. Categoras de fitorremediacin
Contribucin de los microorganismos en la remediacin de suelos
2.4.1. Interaccin de microorganismos con los metales pesados
en la remediacin de suelos
Hongos micorrzicos
2.5.1. Generalidades de los hongos micorrzicos
2.5.2. Clasificacin de los diferentes hongos micorrzicos
Contribucin de los HMA como mecanismo de recuperacin de
suelos contaminados por metales pesados
2.6.1. Interaccin de los HMA y los metales pesados
2.6.2. Funcin de los HMA en la fitorremediacin de suelos
contaminados con metales pesados
2.6.3. Contribucin de los HMA en la absorcin y translocacin
de los metales pesados por las plantas hiperacumuladoras

VII
VIII
IX
X
XI
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6
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42
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47
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52
54
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2.7

Importancia del cultivo de girasol (Helianthus annuus L.)


2.7.1. Origen
2.7.2. Caractersticas botnicas
2.7.3. Requerimientos edafoclimaticos
2.7.4. Particularidades del cultivo
2.7.5. Caractersticas del girasol como planta acumuladora para
ser escogida en este estudio

3 MATERIALES Y MTODOS
3.1 Muestreo
3.1.1. Localizacin y descripcin de los sitios de muestreo
3.1.2. Muestreo de suelos
3.1.3. Muestreo de races
3.2 Anlisis fsico y qumicos del suelo colectado
3.2.1. Textura del suelo
3.2.2. pH del suelo
3.2.3. Conductividad elctrica
3.2.4. Materia orgnica
3.3 Determinacin de la concentracin de metales pesados en suelo
3.4

3.5
3.6

3.7

3.8
3.9

colectado
Hongos micorrzicos arbusculares y colonizacin de las
plantas
3.4.1. Cuantificacin de esporas
Determinacin del porcentaje de colonizacin micorrzica
3.4.2. arbuscular
Seleccin del suelo de estudio
Propagacin de los hongos micorrzicos arbusculares nativos
3.6.1. Cultivos trampa
3.6.2. Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo
de estudio
Contribucin de Glomus intraradices en la absorcin y
translocacin de cinc y cobre
3.7.1. Desinfeccin de la semilla del girasol
3.7.2. Germinacin de la semilla del girasol
3.7.3. Transplante
3.7.4. Inoculacin
3.7.5. Duracin del experimento
3.7.6 . Preparacin y anlisis de muestras
Variables evaluadas
Anlisis estadstico

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85

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4

RESULTADOS
4.1 Anlisis fsicos y qumicos de suelo
4.2 Concentracin de metales pesados en los suelos muestreados
4.3 Cuantificacin de esporas y determinacin de la colonizacin
micorrzica arbuscular
4.4 Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo de estudio
4.5 Contribucin de G. intraradices en la absorcin y translocacin del
Cu y Zn por plantas de girasol inoculada y no inoculadas
4.6 Nmero de esporas y colonizacin micorrzica al finalizar el
experimento

DISCUSIN
5.1 Anlisis fsicos y qumicos de suelo
5.2 Concentracin de metales pesados en los suelos muestreados
5.3 Cuantificacin de esporas y determinacin de la colonizacin
micorrzica arbuscular
5.4 Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo de estudio
5.5 Contribucin de G. intraradices en la absorcin y translocacin
del Cu y Zn por plantas de girasol inoculadas y no inoculadas
5,6 Nmero de esporas y colonizacin micorrzica al finalizar el
experimento

6 CONCLUSIONES
7 LITERATURA CITADA

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112
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NDICE DE CUADROS

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Cuadro 1. Intervalos de lmites normales y mximos permisibles
de metales pesados en suelo

19

Cuadro 2. Clasificacin de contaminacin y polucin de suelos


contaminados

20

Cuadro 3. Clasificacin actual de los hongos formadores de


micorriza arbuscular

52

Cuadro 4. Sitios muestreados

73

Cuadro 5. Caractersticas fsicas y qumicas de los suelos


muestreados

86

Cuadro 6. Concentracin de metales pesados de los diferentes


sitios muestreados

88

Cuadro 7. Valores de la colonizacin micorrzica y el


nmero de esporas de los sitos muestreados

89

Cuadro 8. Absorcin y translocacin del Zn y Cu en plantas de


girasol inoculadas y no inoculadas, a los 40, 55 y 70 das
de crecimiento

98

NDICE DE FIGURAS
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Figura 1. Ruta de incorporacin de contaminantes del suelo a la
cadena alimenticia

Figura 2. Esquema mostrando la contaminacin del suelo por metales


pesados

21

Figura 3. Categoras de fitorestauracin de suelos contaminados

40

Figura 4 Esquema representativo de la asociacin simbitica entre


HMA-planta-metales pesados en suelos contaminados

47

Figura 5 Estructuras morfolgicas de la micorrza arbuscular

50

Figura 6. Fenologa de la planta de girasol

68

Figura 7. Mapa de la rivera del Ro Marabasco, donde se indica la


ruta de los sitios muestreados

71

Figura 8. Panormica de los diferentes sitios muestreados: Laguna de


Oxidacin, vila Camacho, El Charco y El Centinela

72

Figura 9. Cultivo trampa utilizada en la propagacin de los HMA


nativos de suelo con mayor concentracin de Cu y Zn

79

Figura 10. Etapas de crecimiento de la planta de girasol: creciendo en


maceta con suelos

82

Figura 11. Planta de girasol creciendo en maceta con suelos despus


del segundo muestreo a los 60 das de crecimiento

83

Figura 12. Espora globosa aprecindose hifa sustentora bulbosa


extrada de vila Camacho

90

Figura 13. Conjunto de esporas extradas del sitio muestreado no


cultivado

91

Figura 14. Espora aprecindose la hifa en forma de embudo obtenida


de la zona no cultivada El Centinela, Jalisco, Mxico

91

Figura 15. Hifas y vesculas de las races extradas del suelo


muestreado Centinela no cultivado

92

Figura 16. Micelio externo y esporas extrado del suelo muestreado


Centinela no cultivad0

92

Figura 17 Arbusculos del sitio muestreado extradas del sitio


muestreado Charco no cultivado

93

Figura 18.Espora globosa y espora subglobosa con hifa de sostn


extrada del suelo muestreado Centinela no cultivado

95

Figura 19.Espora rota mostrando doble pared extrada del suelo


muestreado Centinela no cultivado

95

Figura 20.Espora aprecindose hifa en forma de embudo extrada del


suelo muestreado Centinela no cultivado

96

Figura 21.Espora aprecindose hifa en forma de embudo, con pared


gruesa extrada del suelo muestreado Centinela no cultivado

96

ABREVIATURAS

Cd

Cadmio

Cr

Cromo

Cu

Cobre

HCl

cido clorhdrico

HNO3

cido ntrico

H2 O2

Agua oxigenada

HMA

Hongos micorrzicos arbusculares

FAA

Formol-alcohol-cido

Gramo

Kg

Kilogramo

Km

Kilmetro

KOH

Hidrxido de potasio

MO

Materia orgnica

Pb

Plomo

pH

Potencial de hidrgeno

PVLG

Alcohol polivinilico lacto-glicerol

Zn

Cinc

RESUMEN
En el presente estudio se llevo a cab un experimento en maceta con plantas de girasol
(Helianthus annus.L), inoculadas y no inoculadas con Glomus intraradices, para
determinar la contribucin de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) en la absorcin
y la translocacin de Zn y de Cu, as mismo se determin la presencia de HMA en suelos
irrigados con agua del ro Marabasco, contaminada con metales pesados por filtraciones a
su cauce procedentes de la laguna de jales en donde se depositan residuos de mina. Se
muestrearon suelos de cuatro sitios seleccionados al azar a lo largo de un gradiente de 74
Km de longitud entre la laguna de oxidacin situada en el municipio de Minatitln, Colima
y la zona agrcola del municipio de Cihuatln, Jalisco.
Se escogi el suelo con mayor concentracin de Zn y Cu y con presencia de HMA nativos,
los cuales fueron propagados para su identificacin. Posteriormente este suelo fue
esterilizado y en l se sembraron plantas de girasol inoculadas y no inoculadas con Glomus
intraradices. Al finalizar el experimento se cuantific la concentracin de Cu y Zn en la
raz y en la parte area de las plantas de girasol inoculadas y no inoculadas. De acuerdo con
los resultados, se encontr una diferencia significativa entre los dos tratamientos y se
determin que G. intraradices contribuye de manera positiva en la absorcin de esos
metales por la raz y redujo su paso hacia la parte area de la planta. El metal que se
absorbi en mayor cantidad fue el Cu y disminuy su translocacin hacia la parte area de
las plantas de girasol inoculadas. De la propagacin de los HMA nativos se identific
Glomus mosseae como la especie ms representativa.

Palabras clave: Hongos micorrzicos arbusculares, Glomus, metales pesados,


fitoextraccin, recuperacin de suelos.

ABSTRACT
In the present study a pot experiment was conducted with plants of sunflower (Helianthus
annus L.), inoculated and not inoculated with Glomus intraradices, to determine the
contribution of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) in absorption and translocation of Zn
and Cu; also the presence of AMF in soils irrigated with water of the Marabasco river,
contaminated with heavy metals by filtrations to its channel coming from the jales dam of a
mine wastes, was determined. Soils from four sites randomized throughout a gradient of 74
km in length, between the lagoon of oxidation located in the municipality of Minatitln,
Colima and the agricultural zone of the municipality of Cihuatln, Jalisco were sampled.
The soil with greater concentration of Zn and Cu and with presence of native AMF, was
chosen and native AMF were propagated for identification. Afterwards the soil was
sterilized and plants of sunflower inoculated and not inoculated with Glomus intraradices
were seeded in it. When finalizing the experiment the concentration of Cu and Zn in the
root and the aerial part of the inoculated and not inoculated plants of sunflower was
quantified. According with the results, a significant difference between both treatments was
found, and it was observed that G. intraradices contributed in a positive way in the
absorption of these metals by the root and reduced the passing towards the aerial part of the
plant. The metal that was absorbed in greater amount in the root was Cu, diminishing its
translocation towards the aerial part of the inoculated sunflower plant. The propagation of
the native populations of AMF, Glomus mosseae was identified as the most representative
species.
Keywords: arbuscular mycorrhizal fungi, Glomus, heavy metals, phytoextraction, soil
amendment

1. INTRODUCCIN

Uno de los problemas ms sealados por la sociedad a nivel mundial que ocupa un lugar
prominente en los programas sociales y polticos es la de destacar la progresiva
degradacin de los recursos naturales causada por la gran diversidad de contaminantes
txicos orgnicos e inorgnicos, tanto en la atmsfera, agua, suelo y subsuelo, procedentes
de diversas actividades naturales y antropognicas, generando un irremediable deterioro en
el ambiente (Jensen et al., 2000; Khan et al., 1997; Adriano, 1992; McNeill y Waring.,
1992; Adriano, 1986).

Entre los contaminantes inorgnicos ms nocivos para los seres vivos estn los metales
pesados derivados principalmente de actividades mineras (Khan et al., 1997; Chen et
al.,1993; Alloway, 1990) que dan lugar a la prdida irreversible de los recursos naturales
por no son biodegradables. Es necesario reducir los niveles de contaminacin, minimizar
los elevados costos de restauracin de suelos y cuerpos de agua contaminados, lo que
representa un enorme reto para la humanidad (McEldowney et al., 1993).

Con base en lo anterior existe la necesidad de desarrollar nuevas alternativas que permitan
recuperar los suelos altamente contaminados por metales pesados (Chaney et al., 2001;
Comis, 1996; Cunninghan y Lee, 1995; Chaney, 1983). Actualmente existen estudios
tendientes a resolver la contaminacin originada por metales pesados en suelos, mediante
estrategias basadas en el uso de plantas que tienen la propiedad de acumular metales
pesados; proceso denominado fitorremediacin que consiste en la remocin,
transferencia, estabilizacin y/o degradacin y neutralizacin de compuestos orgnicos,
1

inorgnicos y radioactivos que resultan txicos en suelos y agua. Esta definicin incluye
cualquier proceso biolgico, qumico o fsico, inducido por las plantas, que ayude en la
absorcin, degradacin y metabolizacin de los contaminantes, ya sea por las plantas
mismas o por los microorganismos que se desarrollan en la rizsfera (Kabatas-Pendias y
Pendias, 2000; Gonzlez, 1999; Kumar et al., 1995; Salt et al., 1995; Anderson y Coats,
1994; Baker et al., 1994; Raskin et al., 1994; Adriano, 1990).

Las limitantes que dichas plantas pueden encontrar en la recuperacin de suelos


contaminados es la dificultad para establecerse y prosperar en situaciones adversas por la
contaminacin; as como tambin su lento crecimiento y poco volumen radicular, por lo
que la importancia y beneficios de la simbiosis con los hongos micorrzicos en este sentido
es ampliamente reconocida (Khan et al., 2000; Leyval et al., 1997; Pawloswska, 1996;
Weissenhorn et al., 1995; Weissenhorn et al.,1993).

La capacidad de ciertos microorganismos de degradar contaminantes orgnicos como


hidrocarburos origin el trmino biorremediacin, aplicado genricamente a un grupo de
tcnicas que utilizan procesos biolgicos para la remediacin de suelos y aguas, que
representan una de las tcnicas ms efectivas y de bajo costo en la recuperacin de suelos y
aguas contaminadas (Besthelin et al., 1995; Lovley et al., 1995). Los procesos biolgicos
involucran bacterias, hongos, algas, enzimas, as como plantas superiores incluyendo
rboles. Adems de metabolizar y degradar compuestos orgnicos, los microorganismos
son capaces de absorber compuestos inorgnicos txicos, inmovilizndolos, y pueden
inhibir y/o catalizar diversas reacciones, amplindose por lo tanto su campo de aplicacin

(Meagher, 2000; Salt et al., 1999; Chaudhry et al., 1998; Raskin et al., 1997; Berthelin et
al.,1995; Brown et al., 1995; Chaney, 1983).

Los hongos micorrzicos arbusculares son microorganismos que habitan el suelo y


establecen una simbiosis de tipo mutualista con las races de una gran cantidad de plantas
(Turnau, 2002; Dodd, 2000; Barea et al., 1997; Turnau, 1993). Con respecto a la
importancia de la micorriza en la fitorremediacin de suelos contaminados con metales
pesados, se ha comprobado que esta simbiosis tienen un efecto benfico, ya que inmoviliza
los metales en la raz reduciendo su translocacin a la parte area de la planta y en
consecuencia, el flujo de metales a la cadena trfica (Pawlowska et al.,2000; Del Val et al.,
1999; Pawlowska et al.,1996; Barea et al., 1995; Leyval et al.,1995).

En el estado de Colima, concretamente en la regin agrcola que colinda con el valle de


Cihuatln, Jal., existen cultivos irrigados con afluentes del Ro Marabasco que de acuerdo
con el resultado de anlisis sobre la concentracin de metales pesados realizados en sus
aguas presentan el contenidos de estos. Como consecuencia de esto, en la regin agrcola
los lugareos denunciaron un pobre desarrollo de las plantas que ah se cultivan.

Este suceso puede ser cientficamente explicable tomando en cuenta que la literatura
reporta que en los afluentes de las industrias mineras existen concentraciones de metales
pesados ms all de las permisibles para un buen desarrollo de los cultivos. Estas altas
concentraciones causan fitotoxicidad interfiriendo con el desarrollo vegetal (Lasat, 2002;

Berti et al., 1995; Chaudhry et al., 1997a; Baker y Brooks, 1989). Una de las limitantes de
utilizar plantas para remediar suelos contaminados es la pobre masa radicular y entre las
poblaciones de microorganismos rizsfericos del suelo que contribuyen a aumentarla son
los hongos micorrzicos arbusculares. Por lo que el lograr maximizar la colonizacin
radicular por HMA en ambientes adversos como son los suelos contaminados con metales
pesados es ahora de gran inters (Khan et al., 2000; Chaudry et al.,1997b).

Con base en estos antecedentes en el presente trabajo, el inters de utilizar un modelo hasta
ahora no experimentado, que es la utilizacin de plantas de girasol asociadas con hongos
micorrzicos nativos para tratar de contrarrestar los efectos txicos de los metales pesados
Zn y Cu, presentes en suelos contaminados con filtraciones de residuos de minas.

Para abordar este problema se plante el siguiente cuestionamiento: La presencia de HMA


y la asociacin de Glomus intraradices con girasol (Helianthus annuus L.) crecido en un
suelo contaminado con residuos de mina, aumentar la absorcin y la translocacin de
metales pesados?

Para dar respuesta a la pregunta anterior, se estableci la siguiente hiptesis: La presencia


de HMA y la contribucin de Glomus intraradices en girasol (Helianthus annuus L.)
crecido en un suelo contaminado con residuos de mina, aumenta la absorcin y
translocacin de metales pesados.

Objetivo general

Evaluar la presencia de los hongos micorrzicos arbusculares y la contribucin del Glomus


intraradices en girasol (Helianthus annuus L.) crecido en un suelo contaminado con
residuos de mina.

Objetivos particulares

Determinar las caractersticas fsicas y qumicas; as como la concentracin de metales


pesados en suelos contaminados con residuos de mina.
Determinar el nmero de esporas de HMA en el suelo de los sitios muestreados y la
colonizacin micorrzica presente en la planta ms representativas de cada sitio.
Identificar a nivel de especie, la poblacin de HMA nativos ms representativa del suelo
seleccionado.
Evaluar la contribucin de Glomus intraradices en la absorcin y translocacin de cinc y
cobre en la biomasa area y radicular de plantas de girasol inoculadas y no inoculadas.

2. ANTECEDENTES
2.1 Metales pesados
2.1.1. Metales pesados en el ambiente

Los metales pesados, son convencionalmente definidos como elementos con propiedades
metlicas (conductibilidad, ductilidad, etc), nmero atmico mayor de 20, y cuya densidad
es mayor a los 5 g / cm3. Se consideran metales pesados el cadmio, cromo, mercurio, zinc,
cobre, plata y arsnico. Estos elementos constituyen un grupo de gran importancia, ya que,
pese a que son esenciales para las clulas, en altas concentraciones pueden resultar txicos
para los seres vivos, como humanos, organismos del suelo, plantas y animales (Spain et al.,
2003; Liao et al., 2003).

En las ltimas dcadas con el acelerado desarrollo industrial y crecimiento de las


poblaciones, han generado serios problemas de contaminacin por metales pesados,
provocando un incremento de su concentracin en el ambiente y su migracin a suelos no
contaminados, que deterioran su calidad del suelo, del aire y del agua. La exposicin a estos
metales en los humanos, causa una amplia gama de enfermedades entre las que destacan:
enfermedad de Minamata, Itai-Itai, cncer, anemia, daos hepticos, renales, pulmonares y
en vas respiratorias (Hasler, 1998; Adriano, 1986).
.
Las principales fuentes de metales pesados son actividades naturales, como desgastes de
cerros, volcanes, que constituyen una fuente relevante de los metales pesados en el suelo,
as como tambin actividades antropognicas como la industria minera que est catalogada

como una de las actividades industriales ms generadora de metales pesados. Adems de


refineras, aguas residuales, procesos nucleares y de la manufactura de una gran variedad
productos como de bateras, componentes elctricos, aleaciones de metales, plaguicidas y
fertilizantes (Roane et al.,1996; Alloway, 1990; Chaney, 1994; Chaney, 1993).

En la atmsfera, los metales originados por las fuentes de emisin como la combustin de
nafta con plomo, se encuentran como material suspendido en el aire que respiramos. Por
otro lado, las aguas residuales no tratadas y las provenientes de minas y fbricas,
contaminan a los ros y las aguas subterrneas, y los desechos que contienen metales
txicos simplemente abandonados en el ambiente contaminando el suelo y se acumulan en
las plantas y los tejidos orgnicos (Liesko et al., 1999; Chen et al., 1992) (Fig. 1).

Figura. 1. Ruta de incorporacin de contaminantes del suelo a la cadena alimenticia


(Martn, 2000).

Debido que los metales pesados no son qumica ni biolgicamente degradables y una vez
emitidos pueden permanecer en el ambiente durante cientos de aos. Adems, su
concentracin en los seres vivos aumenta a medida que son ingeridos por otros, por lo que
la ingesta de plantas o animales contaminados puede provocar sntomas de intoxicacin
(Chaney et al., 2001; Licsko et al., 1999; McEldowney et al., 1993).

De acuerdo con Cabrera, (1999); Tunnell et al., (1996); Alloway, (1990); Sopper, (1988) la
actividad minera genera el desprendimiento de sustancias txicas, algunas de ellas
asociadas con la roca, otras utilizadas para la separacin de los minerales que se extraen y
son difundidos en el ambiente las cuales se bioacumulan en el organismo humano
ocasionando envenenamiento y una amplia variedad de enfermedades al trabajador as
como tambin

a los habitantes de las comunidades prximas a una mina y en

concentraciones elevadas ocasionan la muerte.

Por ejemplo los polvos de plomo provocan alteraciones al sistema nervioso central,
desestabilizando el carcter, irritabilidad, insomnio, afecta las clulas reproductivas
derivndose de esto malformaciones congnitas, abortos, partos prematuros, insuficiencias
renales. En las familias mineras los nios son principalmente afectados, ocasionndoles
prdidas de la capacidad de aprendizaje, y lento crecimiento. El plomo se acumula en los
huesos impidiendo la produccin de la sangre.

El cadmio por su semejanza qumica con el cinc provoca sntomas similares y su principal
va de acceso es la digestiva, debido al consumo de alimentos y agua contaminada. Otra va

es la respiratoria por inhalacin de aire contaminado, la intoxicacin crnica causa severos


daos renales, debido a que este elemento se acumula en los riones, disminuye la actividad
pulmonar causando cncer pulmonar. Se han registrado, adems, alteraciones genticas
como malformaciones cerebrales y craneofaciales y complicaciones en el embarazo y parto.

El mercurio es un metal sumamente txico que puede permanecer en el ambiente


circundante a las minas durante cien aos, es conocido como un txico celular porque
afecta la accin enzimtica evitando as la catlisis deseada, o eliminando la funcin de la
enzima. Aproximadamente el 80% es absorbido por los pulmones, rin, cerebro, hgado,
glbulos rojos de la sangre y la leche materna.

El cinc est situado en el 26 lugar de la lista de los elementos ms comunes. Desde el


punto de vista ecolgico, se califica al cinc de la misma manera que al aluminio, plomo,
cadmio, mercurio, talio, etc. Participa con un 0.0058% en la formacin de la corteza
terrestre. Su uso ms difundido es el de aleacin para piezas de fundicin, como proteccin
superficial (galvanizado o cincado) de chapas y alambres de hierro y bienes de uso en
general (canaletas de desage, cubos (baldes), abrevaderos, materiales para techado, etc.).

El cobre es un elemento qumico de smbolo Cu, con nmero atmico 29; uno de los
metales de transicin e importante metal no ferroso. Su utilidad se debe a la combinacin
de sus propiedades qumicas, fsicas y mecnicas, as como a sus propiedades elctricas y
su abundancia. El cobre fue uno de los primeros metales usados por los humanos.

El cobre metlico se encuentra en mezclas (llamadas aleaciones) con otros metales tales
como latn y bronce, se encuentra como parte de otros compuestos formando sales. Las
sales de cobre ocurren naturalmente, pero tambin son manufacturadas, la ms comn es el
sulfato de cobre. La mayora de sus compuestos son de color azul-verde, son usados
comnmente en la agricultura para tratar enfermedades de las plantas, como el moho, para
tratar agua, y como preservativos para alimentos, cueros y telas.

De acuerdo con Kabata- Pendias y Pendias (2000) el cobre puede entrar al ambiente desde
minas y de otros metales y desde fbricas que manufacturan o usan cobre metlico o
compuestos de cobre, a travs de aguas residuales domsticas, la combustin de materiales
combustibles fsiles y desechos, la produccin de madera, la produccin de abonos de
fosfato, y de fuentes naturales (por ejemplo, por polvo del suelo esparcido por el viento,
volcanes, vegetacin en descomposicin, incendios forestales y del roco de agua de mar).
El cobre en el suelo se adhiere firmemente a materia orgnica y a minerales, se disuelve en
agua se une rpidamente a partculas suspendidas en el agua, generalmente no entra al agua
subterrnea. El cobre que es transportado por partculas emitidas por fundiciones y plantas
que procesan minerales regresa al suelo por la gravedad o por la lluvia o nieve.

El cobre no se degrada en el ambiente y por eso se puede acumular en plantas y animales


cuando se encuentra en suelos. En suelos ricos en cobre slo un nmero pequeo de plantas
pueden vivir. Por esta razn no hay diversidad de plantas cerca de las fbricas o minas de
cobre, debido a su efecto sobre las plantas, por lo que es una seria amenaza para la cadena
alimenticia. El cobre puede seriamente influir en el proceso de ciertas suelos agrcolas,
dependiendo de la acidez del suelo y la presencia de materia orgnica, puede interrumpir la
10

actividad en el suelo, su influencia negativa en la actividad de microorganismos y


lombrices de tierra. Cuando el suelo est contaminado con cobre, los animales pueden
absorber concentraciones que daan su salud. Principalmente las ovejas sufren un gran
efecto por envenenamiento con cobre, debido a que los efectos se manifiestan a bajas
concentraciones.

La acumulacin de cobre en el hgado lleva a un dao progresivo de este rgano cuya


expresin ms severa es la cirrosis heptica. El depsito de cobre en el sistema nervioso
central produce un dao neurolgico, que en algunos aspectos se parece a la enfermedad de
Parkinson, y que puede acompaarse de manifestaciones psiquitricas. Al nivel de la crnea
la acumulacin de cobre se aprecia como un anillo parduzco pericrneal (anillo de KayserFleisher). El dao a los tejidos se puede disminuir sometiendo en forma temprana a los
pacientes a una dieta con bajo contenido de cobre, junto con una terapia con compuestos
que disminuyan su absorcin (el ms usado es el cinc) y medicamentos que favorezcan la
eliminacin del exceso utilizando agentes quelantes como el EDTA.

2.1.2. Efecto de los metales pesados en los suelos

Los metales pesados son elementos qumicos, presentes en todo tipo de suelo y sus niveles
de abundancia se reporta en porcentajes y partes por milln. Cuando el nivel de su
contenido en el suelo es por abajo de los lmites permitidos como se muestra en el cuadro
1. Presenta un efecto inocuo en la vegetacin y en las poblaciones microbianas, adems
tambin desempea un papel biolgico en diversas funciones de las clulas, lo que les ha

11

permitido estar agrupados bajo el nombre general de micro-elementos. Cuando el suelo


tiene un nivel alto dentro de los lmites permitidos de estos elementos, el trmino que se usa
es el de metal pesado, provocando contaminacin de suelos, en este caso se afecta a largo
plazo a las plantas y a los microorganismos. Cuando el contenido de metales pesados en el
suelo alcanzan niveles que rebasan los mximos permitidos causando efectos inmediatos
como inhibicin del crecimiento normal y el desarrollo de las plantas, y causa un disturbio
funcional en otros componentes del ambiente as como la disminucin de las poblaciones
microbianas del suelo, el trmino que se usa o se emplea es polucin de suelos (Martn,
2000; Kabata-Pendias, 1995).

En el suelo, los metales pesados estn presentes como iones libres, compuestos metlicos
solubles, compuestos insolubles como xidos, carbonatos e hidrxidos. Su accin directa
sobre los seres vivos ocurre a travs del bloqueo de las actividades biolgicas, es decir, la
inactivacin enzimtica por la formacin de enlaces entre el metal y los grupos -SH
(sulfhidrilos) de las protenas, causando daos irreversibles en los diferentes organismos.

Para que los metales pesados puedan ejercer su toxicidad sobre un ser vivo, stos deben
encontrarse disponibles para ser captados por ste, es decir que el metal debe estar
biodisponible. El concepto de biodisponibilidad se encuentra ntimamente relacionado con
las condiciones fisicoqumicas del ambiente, que determinan la especiacin y por lo tanto la
concentracin de metal libre y lbil. Por ello es fundamental al determinar el grado de
contaminacin por metales pesados de un ambiente, conocer su biodisponibilidad, es decir,
la concentracin de metal libre presente en la muestra (Lloyd y Lovley, 2000).

12

Aproximadamente en un 10% de los metales se encuentran

como contenido nativo

pertenecientes a materiales de algunos suelos, pero ms del 90% llegan al suelo por
deposiciones atmosfricas secas y hmedas y como resultado de algunas prcticas
agronmicas (Adriano, 1986). Algunos de estos metales como Cr, Cu, Co y Mo, son
elementos traza esenciales para animales, microorganismos y plantas, mientras otros no lo
son como Pb, Cd, Zn; sin embargo en altas concentraciones todos ellos son considerados
txicos. Su biodisponibilidad y toxicidad a microorganismos incluyendo hongos
micorrzicos, plantas y animales son influidos por diversos factores particularmente pH,
temperatura, potencial redox, capacidad de intercambio catinico de la fase slida y
competencia entre iones (Leyval et al., 1994; Schmit y Sticher, 1991).

La contaminacin en suelos por metales pesados ocurre cuando estos son irrigados con
aguas procedentes de desechos de minas, aguas residuales contaminadas de parques
industriales y municipales, filtraciones de presas de jales (Zier et al., 1999; Wang et al.,
1992). Estos contaminantes pueden alcanzar niveles de concentracin que provocan efectos
negativos en las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas como: reduccin del contenido
de materia orgnica, disminucin de nutrimentos, variacin del pH generando suelos
cidos, amplias fluctuaciones en la temperatura, efectos adversos en el nmero, diversidad
y actividad en los microorganismos de la rizsfera. Tambin dificultan el crecimiento de
una cubierta vegetal protectora favoreciendo la aridez, erosin del suelo, y la dispersin de
los contaminantes hacia zonas y acuferos adyacentes y como consecuencia aumenta la
vulnerabilidad de la planta al ataque por insectos, plagas y enfermedades, afectando su
desarrollo (Zhang et al., 2000; Cabrera et al., 1999).

13

El pH es un factor esencial, para que la mayora de los metales tiendan a estar ms


disponibles en un pH cido, excepto As, Mo, Se y Cr, los cuales tienden a estar ms
disponibles a pH alcalino es una variable importante para definir la movilidad del catin,
debido a que en medios con pH moderadamente alto se produce la precipitacin como
hidrxidos. En medios muy alcalinos, pueden nuevamente pasar a la solucin como
hidroxicomplejos. La adsorcin de los metales pesados est fuertemente condicionada por
el pH del suelo y por tanto, tambin su biodisponibilidad de sus compuestos (Alloway,
1993).

La textura favorece la entrada e infiltracin de la contaminacin de metales pesados en el


suelo, por ejemplo la arcilla tiende a adsorber a los metales pesados, que quedan retenidos
en sus posiciones de cambio, por el contrario los suelos arenosos carecen de capacidad de
fijacin de los metales pesados, los cuales pasan rpidamente al subsuelo y pueden
contaminar los niveles freticos.

La materia orgnica, reacciona con los metales formando complejos de cambio y quelatos.
Los metales, una vez que forman quelatos o complejos, pueden migran con mayor facilidad
a lo largo del perfil del suelo. La materia orgnica puede adsorber tan fuertemente a
algunos metales, como es el Cu, que pueden quedar en forma no disponible por las plantas,
motivo por el cual, algunas plantas crecidas en suelos ricos en materia orgnica, presentan
carencia de elementos como el Cu., Pb y el Zn, eso no significa que los suelos no estn
contaminados ya que las poblaciones microbianas se reducen notablemente.

14

La complejacin por la materia orgnica del suelo es una de los procesos que gobiernan la
solubilidad y la bioasimilacin de metales pesados. La toxicidad de los metales pesados se
potencia en gran medida por su fuerte tendencia a formar complejos organometlicos, lo
que facilita su solubilidad, disponibilidad y dispersin. La estabilidad de muchos de estos
complejos frente a la degradacin por los organismos del suelo es una causa muy
importante de la persistencia de la toxicidad. Pero tambin la presencia de abundantes
quelatos puede reducir la concentracin de otros iones txicos en la solucin del suelo
(Adriano, 1986; Alloway, 1990; Jackson y Alloway, 1993; Licsko et al., 1999).

Los metales pueden acumularse en tejidos vivos (bioacumularse) y luego ser transmitidos
de una especie animal a otra a travs de la cadena alimenticia. Por ejemplo, un rbol puede
alimentarse de aguas subterrneas contaminadas con metales, acumular algunos de estos
metales en sus hojas, y luego hay pjaros que se alimentan de estas hojas y que pueden
verse afectados por la toxicidad de este metal (Cobb et al., 2000; Cabrera et al., 1987). La
toxicidad de los metales en la plantas pueden causar reduccin en las races, quemaduras
en las hojas, deficiencia en los nutrimentos e incrementa su vulnerabilidad al ataque de
enfermedades e insectos (Angle et al., 1997; Kumar et al., 1995; Roane et al., 1994).

La utilizacin del lodo de aguas residuales en las regiones agrcolas aumenta la


concentracin de metales pesados en suelo. Los estudios sugieren que las cosechas de
leguminosas, que dependen de la fijacin simbitica del N2, puedan ser sensibles a los
efectos txicos de los metales pesados presentes en dichos lodos. As, se ha observado la
reduccin en la nodulacin, tamao de la planta y actividad de la nitrogenasa en las plantas

15

del trbol blanco crecidas en un suelo altamente contaminado con Cd, Pb, y Zn (Rother et
al., 1993). Otros estudios han demostrado los efectos txicos de metales pesados en la
nodulacin y actividad de la nitrogenasa (Vigue et al.,1991).

Dado que el arsnico es relativamente soluble en los cidos y sales de arsnico el mayor
factor por controlar en la toxicidad del arsnico es su biodisponibilidad en el suelo y en la
planta; el arsnico soluble en agua es ms fitotxico que otras formas estrechamente
relacionadas (Sharpley, 1994). Los cidos y sales de arsnico han sido usados en la
elaboracin de plaguicidas durante muchos aos, sin embargo esta prctica actualmente ha
dejado de utilizarse en el mundo.

La qumica y disponibilidad del cadmio en plantas de suelos agrcolas han sido estudiados,
un extenso parmetro de ndices de la actividad biolgica en suelos como la actividad
enzimtica, fijacin de nitrgeno y desnitrificacin son ampliamente investigados (Chaney
et al., 2000), comparado con otros metales, el cadmio, es ms movible en suelos en relacin
a la lixiviacin y disponibilidad en las plantas. Pero el cadmio es menos absorbido por el
suelo que el cobre, el nquel y el cinc, afortunadamente se encuentra presente en ms bajas
concentraciones en fertilizantes, estircol y bioslidos que otros metales (Vigue et al.,
1991).

Segn Chaney et al., (2000) entre los factores ms importantes encontrados que influyen en
absorcin del cadmio por las plantas son las propiedades del suelo como materia orgnica,
pH, proporcin Cd:Zn, niveles de hidruros de fierro, xidos de manganeso, el nitrgeno
16

aplicado, niveles de cadmio en fertilizantes con fosfatos. El cinc provee proteccin contra
la transferencia del cadmio hacia la cadena alimenticia, por medio de su potencial para la
fitotoxicidad e inhibicin de la absorcin y translocacin del cadmio en las plantas. Debido
a que el cinc y el cadmio son acumulados por las plantas en la proporcin que se presentan
con elevadas concentraciones de cinc y cadmio, la mxima concentracin foliar de cadmio
es limitada por la fitotoxicidad del cinc.

Aunque el cinc limita la mxima concentracin de cadmio en las plantas y protege la


cadena alimenticia, la proporcin Cd:Zn acerca de 0.010, solo el arroz y el tabaco son
capaces de transferir altos niveles de cadmio del suelo en forma biodisponible por ejemplo
cuando se fuma el tabaco se puede transferir cadmio hacia los pulmones (Chaney et al.,
2000).

El Cd y el Zn pueden llegar a las plantas y de ah pasar al resto de la cadena trfica. Son


elementos bastante mviles. La contaminacin por cadmio sin contaminacin por cinc o
cobre es rara, el cadmio es incapaz de alcanzar los niveles fitotxicos en suelos agrcolas
antes de que lo haga el cinc, reportndose concentraciones de metales en las plantas fuera
de los lmites permisibles. De una manera u otra, la salud animal y humana son amenazadas
con las concentraciones de cadmio y cinc (Chaney et al., 2001; Chaney, 1993). Se han
realizado numerosas revisiones de literatura con respecto a la fitotoxicidad provocada por
metales. Steinborn (1999) estudi la fitotoxicidad por arsnico y encontr que diferentes
concentraciones de este elemento reducen la produccin vegetal. Por ejemplo < 25 mg/kg
de arsnico en el suelo reducen la produccin de frijol en un 14%; mientras que en otro
estudio se encontr que 414 mg/kg de As la redujo en un 30%.
17

El cobre, nquel y cinc

pueden ser tomados del suelo por las plantas a niveles

potencialmente txicos. Existen varios reportes acerca de la toxicidad de estos elementos:


(Chaney et al., 1997; Chaney, 1990) expres una ligera evidencia de toxicidad por Cu o Zn
en pruebas de campo con aplicaciones por arriba de 213 mg Cu/ha y 1610 mg Zn/ha. Por
su parte Bert y Huang (1995) reportaron toxicidad severa de Zn y Ni en maz, sorgo y frijol
por acumulacin de metal de 2100 mg Ni/ha y 11300 mg Zn /ha. El maz es altamente
sensible a los metales pesados y la produccin puede verse reducida hasta en un 50%.

En la agricultura debe prestarse atencin a la contaminacin por cinc con los lodos de
clarificacin que se distribuyen sobre terrenos a cultivar, si es necesario, debe desistirse de
la explotacin agrcola, ya que las plantas pueden acumularlo y llevar de esta manera la
contaminacin al ser humano a travs de la cadena alimentara, lo que significa un riesgo
para su salud (Chaney, 1994), se puede detectar su acumulacin en los suelos hasta un radio
de varios kilmetros de distancia de las plantas metalrgicas, la acumulacin en las plantas
produce necrosis y clorosis e inhibe el crecimiento.

Con el propsito de interpretar el nivel de los metales pesados en el suelo, solo han sido
considerados los valores iniciales de su contenido: valores analticamente determinados
tanto en suelos normales no afectados por el impacto antropognico como en suelos
afectados. Los valores que representan los lmites mximos permitidos de concentracin de
metales pesados en suelos fueron establecidos, principalmente aplicable al crecimiento y
desarrollo de plantas. Los lmites mximos permitidos fueron establecidos en Alemania, de
acuerdo con los resultados obtenidos de laboratorio, invernadero y experimentos de campo

18

(Cuadro 1). De acuerdo con Kloke (1980) y Chumbley (1991) los lmites mximos
permitidos siguen siendo utilizadas en muchos pases, como Holanda, Austria, Canada,
Japn y Estados Unidos de Amrica.

Cuadro 1. Intervalos del contenidos de los lmites normal y mximo permitidos de los
metales pesados en los suelos (Kloke 1980).
Intervalo de contenido normal

Lmites mximos permitidos

Elementos
p.p.m.

qumicos
Cadmio

0.1 - 1.0

3.0

Cobalto

1 - 10

50

Cromo

2 - 50

100

Cobre

1 - 20

100

Nquel

2- 5

50

Plomo

0.1 - 20

100

3 - 50

300

Cinc

En Polonia se ha evaluado la contaminacin estableciendo un ndice de contaminacin/


polucin (c / p) que se obtiene dividiendo la concentracin de metal en el suelo y el lmite
permitido, dando como resultado cinco clases de polucin en suelos: 1) Ligera 2)
Moderada, 3) Considerable, 4) Muy contaminados y 5) Extremadamente contaminados,
(cuadro 2). La clase 3, suelos considerablemente contaminados, presentar riesgo de

19

contaminacin en cultivos. La clase 4 corresponde a suelos que no deben usarse para la


produccin de plantas utilizadas en alimentacin, sobre todo si se trata de suelos cidos y
de textura ligera. La clase 5 debera excluirse de cualquier uso agrcola y proceder, dentro
de lo posible, a su limpieza (Raskin et al., 1994; Kabata - Pendias, 1995).

Cuadro 2. Clasificacin de contaminacin y polucin (c/p) de suelos (Kabata - Pendias


1995).

ndice c/p
0.1
0.10 0.25
0.26 0.50
0.51 0.75
0.76 1.00
1.1 2.0
2.1 4.0
4.1 - 8.0
8.1 16.0
16.0

Significado
Contaminacin muy leve
Contaminacin leve
Contaminacin moderada
Contaminacin severa
Contaminacin muy severa
Polucin leve
Polucin moderada
Polucin severa
Polucin muy severa
Polucin excesiva

.
Los metales pesados incorporados al suelo pueden seguir cuatro diferentes vas:

pueden quedar retenidos en el suelo, ya sea disueltos en la solucin del suelo o bien
fijados por procesos de adsorcin, complejacin y precipitacin

pueden ser absorbidos por las plantas y as incorporarse a las cadenas trficas

pueden pasar a la atmsfera por volatilizacin

pueden movilizarse a las aguas superficiales o subterrneas (Fig. 2 ).

20

Figura 2. Esquema mostrando la contaminacin por metales pesados en el suelo (Calvo de


Anta, 1997).

2.2. Estrategias de remediacin de suelos por mtodos qumicos y fsicos

La contaminacin del suelo por metales pesados representa un grave problema a nivel
mundial, debido a ello se han desarrollado tecnologas para reducir y/o enmendar el riesgo
de la contaminacin de agua y suelos contaminados con metales pesados. La contaminacin
de suelos por metales puede ser remediada por tcnicas qumicas, fsicas y biolgicas y son

21

agrupadas en dos categoras: a) in situ, este mtodo remedia el suelo contaminado sin la
remocin del mismo y b) tcnicas ex situ, las cuales por el tratamiento los suelos
contaminados requieren ser removidos del sitio. Las tcnicas in situ tienen mayores
ventajas que las de ex situ debido a su bajo costo y a su reducido impacto en el
ecosistema (Chen et al., 1997).

La remediacin del suelo es necesaria para eliminar o disminuir los riesgos a los humanos y
al ambiente de la toxicidad de los metales. Las enfermedades en el hombre son el resultado
de la alta concentracin de Cd , Se, Zn, Cu, Cr, y Pb en suelo (Chaney et al., 1999), el
ganado y la fauna son daados por estos metales (Raskin et al., 1994). La contaminacin
del suelo con Zn, Ni y Cu causada por desechos de minas y fundidoras es conocida la
sensibilidad de las plantas (Chaney et al., 1999).

Las estrategias fsicas y qumicas de remediacin ms utilizadas para eliminar y/o reducir
los contaminantes del suelo son: extraccin, sellado, incineracin, excavacin, tratamiento
qumico y tratamiento electroqumico. No obstante, muchas de estas tecnologas son
costosas ya que su precio estimado de la recuperacin de suelos en el mercado en Estados
Unidos de Amrica fue aproximadamente de1-2 millones en 1997 incrementndose a 15-25
millones en el 2000 y probablemente 70 100 millones en 2005 (Cunninghan, 1996; Glass,
2000; McGrath et al., 2001).

Ciertas tcnicas especializadas pueden exceder sus costos de 1000 dlares por tonelada, la
excavacin de contaminantes, tiene un costo promedio de 1000 000 dlares por acre y su

22

eficacia es moderada, destruyendo la estructura del suelo as como su fertilidad, o la ms


lamentable esparciendo la contaminacin a sitios no contaminados (Adriano, 1996;
Alloway, 1993; McGrath et al., 1997; Raskin, 1997; Chaney et al., 2001). El problema es
ms severo particularmente cuando grandes areas estn contaminadas

con

radionucletidos, como por ejemplo las reas alrededor del reactor nuclear de Chernobyl.

2.2.1. Remediacin de suelo por extraccin

La extraccin entre las ms conocidas son el Soil Washing lavado de suelos, se realiza
habitualmente en depsito. Se basa en una separacin o una reduccin del volumen. El
rendimiento depende de la solubilidad de los compuestos contaminantes en la solucin de
lavado que se utilice. Otra de las tcnicas es conocida como Soil Vacuum. Se produce
una extraccin de los contaminantes y se utiliza para eliminar compuestos orgnicos
voltiles y mercurio. Para potenciar la eficacia se puede utilizar adems vapor de agua, una
modificacin es la tcnica de Soil Venting, donde se combina el efecto de extraccin con
la inyeccin de aire. En este tipo de tcnicas las caractersticas fsicas y qumicas del suelo
pueden alterar la eficacia de la tcnica (Burns et al., 1996).

2.2.2. Remediacin de suelo por sellado

La tcnica del sellado trata al suelo con un agente que lo encapsula y lo asla. El suelo es
excavado, la zona se sella con un impermeabilizante y se redeposita el suelo. Para
desarrollar las barreras de aislamiento se ha utilizado diversas sustancias, como el cemento,

23

cal, plsticos, arcilla, etc. El procedimiento tiene el inconveniente que se pueden producir
grietas por las que los contaminantes pueden fugarse. Sometiendo al suelo a altas
temperaturas (1600-2300C) se consigue su vitrificacin con lo que se llegan a fundir los
materiales del suelo, produciendose una masa vtrea similar a la obsidiana. Durante el
proceso hay que controlar la volatilizacin de numerosos compuestos. La propia filosofa
de estas tcnicas (persigue la eliminacin del suelo) las hace slo recomendable en
situaciones extremas. En otras ocasiones se realiza el aislamiento directamente sobre los
niveles de aguas freticas y mediante bombeos exhaustivos se consigue deprimir los niveles
freticos para alejarlos del suelo y subsuelo contaminados (Huang et al., 1998).

2.2.3. Remediacin de suelo por incineracin

La incineracin es una tcnica apropiada para el tratamiento de residuos principalmente


para la fraccin orgnica y combustible. Esta tcnica reduce considerablemente el volumen
y la peligrosidad de los residuos. Sin embargo, debe considerar el tratamiento de las
emisiones atmosfricas, de los residuos lquidos; as como mismo la disposicin apropiada
de las cenizas y escorias que se generan en el proceso.

La incineracin de residuos no slo se utiliza como una alternativa de tratamiento sino que
tambin para el aprovechamiento del poder calorfico contenido en los residuos. Algunos
procesos productivos, especialmente los de produccin de cemento y de cal, presentan a
nivel mundial una experiencia importante en coincineracin de residuos como combustibles

24

alternativos, en forma complementaria al combustible tradicional. En nuestro pas, algunas


instalaciones ya realizan operaciones de coincineracin de residuos y en el futuro se espera
que otras empresas productoras de cemento, cal y de productos forestales comiencen a
utilizar residuos como combustible, debido al menor costo que implica la utilizacin de
estos compuestos en la generacin de calor (Adriano, 1992).

La incineracin genera emisiones atmosfricas de contaminantes orgnicos e inorgnicos,


en forma de gases y partculas presentando un riesgo a la salud de la poblacin expuesta. Su
dispersin puede darse a escala local y regional y su posterior deposicin puede significar
un riesgo al patrimonio ambiental o a otras actividades productivas. Dependiendo de los
residuos utilizados, las emisiones a la atmsfera correspondern a partculas totales en
suspensin cuya composicin qumica puede estar formada por metales pesados y sus
compuestos u otras sustancias orgnicas e inorgnicas. Asimismo, las emisiones pueden
corresponder a sustancias en forma de gases, entre ellos los compuestos clorados y
fluorados (Cunningham et al., 1996).

2.2.4. Tratamiento qumico

De acuerdo con Adriano (1986) el tratamiento qumico es un mtodo til para:


hidrocarburos, aldehdos, cidos orgnicos, fenoles, cianuros y plaguicidas organoclorados.
ste trata de depurar el suelo mediante la degradacin de los contaminantes por reacciones

25

qumicas. Frecuentemente se trata de reacciones de oxidacin de los compuestos orgnicos.


Como agente oxidante se emplea el oxgeno y el agua oxigenada. Este tratamiento se utiliza
preferentemente in situ, inyectando el agente depurador a zonas profundas mediante
barrenas huecas, o a veces, simplemente mediante un laboreo apropiado del terreno.

Otro procedimiento qumico es la descloracin. Esta tcnica se utiliz, en un principio, para


la estabilizacin de productos del petrleo. En suelos se ha empleado para la descloracin
de PBC. Consiste en la inyeccin de CaO, Ca(OH)2 o NaOH. El suelo al reaccionar se
calienta y al aumentar el pH hasta valores de 9 a 11 se produce la descloracin de los PBC
(Adriano, 1986).

2.2.5. Remediacin de suelo por tratamientos electroqumicos

El tratamiento electroqumico es un procedimiento a realizar in situ, el desplazamiento de


los contaminantes se logra mediante la creacin de campos elctricos. Consiste en
introducir, a suficiente profundidad electrodos en el suelo. Los contaminantes fluyen desde
un electrodo a otro siguiendo las lneas del campo elctrico. En el tratamiento de desechos
peligrosos, la electrlisis se usa ampliamente para los metales como cadmio, cobre, oro,
plomo, plata y cinc. La recuperacin de metales por electrolisis por la electro-deposicin
directa, reduciendo particularmente metales. Un ejemplo especfico es la remocin

26

electroltica de cadmio y nquel en agua contaminada por desechos de bateras usando


electrodos fibrosos de carbono (Abda y Oren, 1993).

2.3. Remediacin de suelos por mtodos biolgicos

2.3.1. Biorremediacin

Los mtodos tradicionales para la remediacin de sitios contaminados se ha demostrado


que adems de ser costosos a menudo no son eficaces. La biorremediacin aparece como
una tcnica alternativa efectiva y de bajo costo en el intento de mitigar y reducir la
contaminacin de compuestos orgnicos e inorgnicos, recurriendo a sistemas biolgicos,
tales como plantas, hongos, enzimas y bacterias que sustituyan a las actuales estrategias de
enmienda de suelo y agua (Chaney et al., 1999; Garbisu y Alkorta, 1997; Rao et al., 1996).
El biorremedio aprovecha la diversidad y versatilidades genticas de los microorganismos
para producir rupturas o cambios moleculares en los contaminantes generando compuestos
de menor o ningn impacto ambiental (Khan, 2000; Saxena et al., 1999; Wenzel et al.,
1999; Brown, 1998; Cunningham, 1996; Meeussen et al., 1994; Alloway, 1993; Adriano,
1992; Adriano, 1986).

Estos cambios ocurren usualmente en la naturaleza, sin embargo su velocidad es baja,


mediante una adecuada manipulacin estos sistemas biolgicos pueden ser optimizados
para aumentar la velocidad de cambio o degradacin y as usarlos en sitios con una elevada
concentracin de contaminantes de importancia ambiental en suelos, aguas y aire

27

(McGrath, 2001; Khan, 2000; De Oliveira y Narasimha, 1999). Una gran cantidad de
contaminantes como plaguicidas, herbicidas, petrleo, gasolina y metales pesados pueden
ser eliminados por biorremediacin (Lasat, 2002; McGrath et al., 2001; Reed, 1992).
Al incremento del uso de la biorremediacin como una estrategia sostenible y econmica,
se le est prestando una particular atencin, principalmente en Europa y Estados Unidos de
Amrica (Khan y Kuek et al., 2000 ).

2.3.2. Fitorremediacin

El concepto de usar plantas para limpiar suelos contaminados no es nuevo, desde hace 300
aos las plantas fueron propuestas para el uso en el tratamiento de aguas residuales
(Hartman,1975). En Rusia en los aos 60s se realizaron investigaciones utilizando plantas
para recuperar suelos contaminados con radionucletidos. Existen reportes sobre el empleo
de plantas acuticas en aguas contaminadas con plomo, cobre, cadmio, hierro y mercurio.
La remediacin de la acumulacin de metales pesados en suelos utilizando plantas es
tambin ampliamente reconocida (Ernst, 2000).

La fitorremediacin (el prefijo fito- significa planta) es una estrategia que se utiliza en la
remediacin de suelos contaminados (Chaney, 1997), es un proceso de descontaminacin
que involucra el empleo de plantas que pueden remover, transferir, estabilizar,
descomponer y/o degradar contaminantes de suelo, sedimentos y agua, como solventes,
plaguicidas, hidrocarburos poliaromticos, metales pesados, explosivos, elementos

28

radiactivos, fertilizantes, para hacerlos ms biodisponibles para la planta (McGrath et al.,


2001; Macek et al., 2000; Mench et al.,1999; Raskin et al., 1994; Chen, et al.,1990).
Esta tcnica se encuentra todava en su etapa inicial de investigacin y de desarrollo, el
nmero de pruebas de campo realizadas hasta la fecha es no obstante pequea (Brown et
al., 2003; Chen, 2000; Chaney et al., 1999), est surgiendo como un mtodo teraputico
atractivo debido a su simplicidad el costo relativamente bajo. Adems de la remocin de
contaminantes, la limitacin de ofrecimientos de tcnicas de lixiviacin del suelo,
facilitando su mejora o el mantenimiento de estructura y propiedades, as como su
fertilidad, hay tambin la posibilidad de bio-recuperacin de ciertos contaminantes como
por ejemplo metales pesados (Chaney et al., 2000; Watanabe, 1997). Aunque el
conocimiento bsico de que las plantas pueden ser usadas para remediacin del ambiente ha
sido desde dcadas pasadas, solo recientemente ha sido reconocido completamente el valor
de las plantas acumuladoras de metales en la recuperacin de suelos contaminados (Salt et
al., 1997).

Despus de una minuciosa investigacin, la fitorremediacin se esta convirtiendo en una


tecnologa alternativa de remediacin de suelos contaminados realmente til econmica y
efectiva (Watanawe, 1997). Esta nueva tcnica de enmienda esta basada en prcticas
agronmicas, es rpida y eficiente, y consiste en cultivar plantas en un lugar contaminado,
despus cosecharlas y estas plantas llenas de metales pesados, ests podran venderse a
compaas de energa elctrica como fuente de biomasa para generar energa, la que a su
vez podra generar una ganancia. Las cenizas resultantes de la incineracin tambin se

29

podran ser llevadas a una fundicin para recobrar el metal y nuevamente crear un flujo de
ingresos (Raskin et al., 1997; Salt et al., 1995; Crowley et al., 1991).
Segn Jentschke (2000), los rboles pueden realizar una accin de bombeo orgnico cuando
sus races se extienden hacia la capa fretica, formando una masa densa de races que
absorbe una gran cantidad de agua. Los lamos, por ejemplo, absorben 113 litros de agua
por da, y hay una variedad de lamo (Populus deltoides) que absorbe hasta 1325 litros por
da. La accin de bombeo de las races disminuye la tendencia de los contaminantes
superficiales al descender hacia el agua subterrnea y el agua potable.

En zonas agrcolas, los lamos plantados a lo largo de cursos de agua reducen el excedente
de fertilizantes y herbicidas que contienen dichas aguas. Asimismo, los rboles plantados
en vertederos como sustitutos orgnicos de la tradicional capa de arcilla o de plstico
absorben agua de lluvia que, de lo contrario, se filtrara por el vertedero y llegara al fondo
en forma de "lixiviado" contaminado (Drake et al., 1999; El-Dermerdash et al., 1994).

Esta novedosa tecnologa, tiene muchas ventajas con respecto a los mtodos
convencionales de tratamientos de lugares contaminados; en primer lugar es una tecnologa
econmica, de bajo costo, en segundo lugar posee un impacto regenerativo en lugares en
donde se aplica y en tercer lugar su capacidad extractiva se mantiene debido al crecimiento
vegetal. Adems es capaz de ser modificada para aumentar su capacidad y selectividad
extractiva, un caso bien conocido es la modificacin gentica de Arabodopsis thaliana para
reducir ion mercurioso (Pawlowska et al., 2000; De Olivera, 1999; Salt et al., 1998; Kumar
et al., 1995; Baker et al.,1994).
30

Los beneficios derivados de esta estrategia de fitoenmienda abarcan los sectores del
ambiente, la salud, industria y energa. Las pruebas cientficas han confirmado la validez de
esta estrategia y se han emprendido gestiones para obtener financiamiento para los
crecientes esfuerzos puestos en marcha en varios pases (Chaney, 1997).

Es importante reconocer que la fitorremediacin ofrece ventajas adicionales a la limpieza


de suelos y mantos freticos al emplear alguno de los siguientes mecanismos:
Incremento de la actividad y poblacin microbiana en el subsuelo, que eleva la cantidad de
carbn orgnico. Mejoras en la aeracin del suelo por la liberacin de oxgeno por las
races. El retraso del movimiento e intercepcin de compuestos orgnicos y algunos
metales. Estimulacin de las transformaciones de compuestos txicos a compuestos de
menor toxicidad. Captacin de hidrocarburos voltiles por las hojas, que sirven de
tapadera a los lugares contaminados. Los suelos contaminados por metales son
notoriamente difciles de remediar, debido al alto costo, no saben que hacer con el suelo
contaminado, por lo que la fitorremediacin es una alternativa con un costo efectivo; varios
anlisis han demostrado que el costo de fitoextraccin de metales es slo una fraccin de
aquellos asociados con tcnicas de ingeniera convencionales. Adems, debido a que
remedia el suelo in situ, la fitorremediacin evita una ruptura dramtica del terreno y
preserva el ecosistema (Lasat, 2002).

La fitorremediacin no es un remedio para todos los suelos contaminados, antes de que esta
tecnologa pueda volverse tcnicamente eficiente y costo-eficaz, hay algunas limitaciones
que necesitan ser superadas como por ejemplo, sus mecanismos tanto moleculares,
bioqumicos y fisiolgicos son pocos conocidos e insuficientemente entendidos, sus
31

procesos como hiperacumuladoras, un gran nmero de plantas hiperacumuladoras todava


pueden descubrirse e identificarse (Freitas et al., 2004; Prasad y Freitas, 2003; Raskin et
al., 1994).

El proceso del fitorremediacin es lento porque el ndice de acumulacin es directamente


proporcional al de crecimiento de la planta, porque no hay planta con todas las
caractersticas adecuadas con los criterios ideales de una hiperacumladora eficaz
(crecimiento rpido y races extensas de biomasa alta, fciles de cosechar, plantas
acumuladoras de una amplia gama de metales txicos), por lo que es necesario introducir
sistemas biolgicos como la simbiosis entre hongos micorrzicos y las plantas para
coadyuvar en la recuperacin de suelos contaminados, o ms aun modificarlas
genticamente para mejorarlas y sean empleadas satisfactoriamente como agentes en el
proceso de fitorremediacin (Clemens et al., 2002; Maagher et al., 2000; Lovley y Coates,
1997).

2.3.3. Plantas hiperacumuladoras de metales pesados

Todas las plantas poseen un potencial para absorber una amplia variedad de metales del
suelo pero la mayor parte de las plantas tienden solamente a absorber los que son esenciales
para su supervivencia y desarrollo. Existe una notable excepcin de esta regla de un
pequeo grupo de plantas que pueden tolerar, absorber, y translocar altos niveles de ciertos
metales, estas plantas reciben el nombre de hiperacumuladoras (Chen et al., 2001).

32

El concepto de "planta hiperacumuladora" fue establecido por R.R. Brooks y sus


colaboradores en 1977, quienes fueron los pioneros en el estudio de plantas que pueden
acumular metales. Una definicin propone que si una planta contiene ms de 0.1% de Ni,
Co, Cu, Cr y Pb o 1% del Zn en sus hojas sobre una base del peso seco, sta puede ser
llamada una hiperacumuladora, independientemente de la concentracin del metal en el
suelo (Robinson et al., 2003; Chaney et al., 2000; Chaney et al., 1997; Peters y Shem,
1994; Baker y Brooks, 1989; Baker et al., 1988; Chaney, 1983; Brooks et al., 1979). Las
primeras plantas hiperacumuladoras caracterizadas son miembros de las familias
Brasssicaceae y Fabaceae. La idea de usar plantas para extraer metales de suelos
contaminados fue reintroducida y desarrollada por Chaney (1983) y el primer ensayo en el
campo de la fitoextracin fue conducido en 1991. La especie Thlaspi caerulescens
(carrespique) y Viola calaminaria son especies de plantas documentadas por acumular
elevados niveles de metales en sus hojas (Baumann, 1985).

De acuerdo con Salt et al., (1998), se establece que el botnico A. Baumann, trabajando en
los lmites entre Blgica y Alemania observ las hojas de ciertas especies de plantas que
crecan en suelos enriquecidos naturalmente con cinc y conteniendo altas concentraciones
de este elemento. Las especies que particularmente registr fueron la violeta (Viola
aclamaria ) y la mostaza (Thlaspi calaminare) recientemente clasificada como Thlaspi
caerulescens. Las cuales contenan cerca de 1 y 1.7% de cinc en el peso seco de las hojas.
Estas fueron comparadas con los niveles de cinc entre 0.001 y 0.02% del peso seco de hojas
de otras plantas.

33

Los estudios realizados en Estados Unidos de Amrica reportaron al selenio como un


componente de la planta responsable de trastornos en ciertos animales en Dakota del Sur.
Esta investigacin indujo al descubrimiento de plantas capaces de acumular selenio arriba
de 0.6% en la biomasa seca de los brotes. Una dcada mas tarde dos botnicos italianos,
Minguzzi y Vergnano (1948) descubrieron plantas que acumulaban nquel, ellos observaron
que las hojas secas de Alyssum bertolonii que crecan en suelos serpentinos ricos en nquel,
cerca de Florencia Italia contenan alrededor de 1% de nquel, por arriba de 100 a 1000
veces ms alto que otras plantas que crecan cercanas al sitio.

El Dr. Rufus L. Chaney encabeza en los Estados Unidos de Norteamrica los estudios para
evaluar plantas llamadas hiperacumuladoras que absorben grandes cantidades de metal de
los suelos. En esas investigaciones se encontr una especie

conocida como Thlaspi

caerulencens, que acumula hasta 30 000 partes por milln (ppm) de zinc y hasta 6000 ppm
de cadmio en sus hojas, sin reducir el rendimiento de la planta (Brown et al., 1995).

Tambin se ha demostrado la tolerancia al cadmio en el diente de len (Taraxacum


officinale) (Kabir y Koide, 2000; Kuleff y Djingova, 1991). Otras especies como
Chichorium intybus, Erigeron canadensis y Eupatorium capillifolium han sido investigadas
como especies indicadoras de cadmio, cromo, nquel o vanadio, es decir como especies que
indican la biodisponibilidad de estos metales contaminantes, por incorporarlos sin mostrar
sntomas de toxicidad. El Amaranthus reflexus ha demostrado ser efectiva en absorber el
amenazador cesio-137 radiactivo, tambin resulta muy prometedora como hiperacumulador
de plomo, por su parte el helecho originario de Florida, Pteris vittata es capaz de absorber

34

el peligroso arsnico, lo ms curioso es que el helecho crece mejor en suelos que contienen
elevadas cantidades de arsnico que en los que carecen de l (Martn et al., 1996)

El cadmio se puede acumular en girasol, Helianthus annuus (Davies et al., 2001; Simn,
1998). El girasol es una rizofiltradora potencial de cadmio, nquel, cobre, cinc, cromo y
plomo; as como de radioistopos (Brooks, 1998). Existen plantas que al mismo tiempo que
son hiperacumuladoras de cobre, lo son del cobalto, entre ellas algunas especies de la
familia Asteraceae (Brooks 1998). El girasol (Helianthus annuus L.) es la especie que
absorbe los metales pesados en mayor cantidad en sus races que en sus brotes si se cosecha
la biomasa entera de la planta, por lo que se considera una planta hiperacumuladora
favorable en la fitoextraccin de Cd, Zn, Pb y elementos radiactivos (Christie et al., 2004;
Reeves, 2003; Davies, 2002; Cabrera et al., 1999; Kumar et al., 1995).

Desde el punto de vista ecolgico el papel de las plantas hiperacumuladoras no est aun
completamente claro, pero se ha sugerido que stas suministran proteccin contra el ataque
de hongos patgenos e insectos. Las recientes evidencias han confirmado la funcin de
proteccin de la acumuladora de nquel contra hongos y bacterias patgenos en Steptanthus
polygaloides e insectos herbvoros en S. polygaloides y T. montanum (Li et al., 2003). El
efecto contra los insectos herbvoros est bien demostrado en Thlaspi caerulescens, que es
una planta hiperaculadora de cinc.

Con esta extraordinaria habilidad las plantas hiperacumuladoras de metales pueden ser
usadas en actividades de remediacin en el ambiente, adems que constituyen un
importante recurso biolgico en las futuras revegetaciones y fitorremediaciones de reas
35

contaminados con metales pesados. Sin embargo las aplicaciones mximas todava no se
han logrado, una razn importante es la falta de conocimientos de los mecanismos
moleculares y procesos biolgicos involucrados que permiten tolerar, la adquisicin, el
transporte y acumulacin de los metales en las planta, incluso que se puedan alimentar de
los metales (Lovley, 1997).

En las ltimas dcadas, la intensa bsqueda se ha conducido a investigar la biologa de


fitoextracin de metal, pero a pesar de los sucesos significativos, la comprensin del
mecanismo de las plantas que permiten la extraccin del metal emergen lentamente. El
suceso natural de especies de plantas capaces de acumular extraordinariamente altos niveles
concentraciones hace de la investigacin un proceso particularmente interesante. Como
resultado, se estn obteniendo los primeros avances para la comprensin de los mecanismos
a nivel molecular por los cuales las plantas son capaces de tolerar los excesos y absorber
metales pesados, que seran venenos peligrosos para otras especies, mientras que las
hiperacumuladoras los incorporan como nutrientes (Huang et al., 1997)

Hasta el momento, se ha descubierto que algunas molculas facilitan el transporte de los


metales pesados al interior de la planta a travs de las races, por procesos de absorcin en
las vacuolas que aumentan su biodisponibilidad para las plantas, son conocidas como
agentes quelantes como EDTA y DTPA (Chen et al., 2001; Khan et al., 2000; Turnau et al.,
1998; Huang et al., 1997; Leyval et al.,1995), que son capaces de formar iones complejos
con el metal facilitando en gran medida la absorcin, estas sustancias pueden ser
producidas por la propia planta y liberadas al suelo a travs de las races. De acuerdo con

36

Leyval et al., (1997) la absorcin de los metales pueden ser ayudadas por microorganismos
como hongos micorrzicos.

Los genes responsables de la hiperacumulacin de los metales en los tejidos finos de la


planta se han identificado y se han reproducido. El metabolismo del glutatin y de los
cidos orgnicos desempean un papel dominante en plantas en tolerancia de los metales.
El glutatin es un componente de bacterias, plantas y animales. En el proceso de
fitorremediacin de metales en el ambiente, los cidos orgnicos desempean un papel
importante en tolerancia del metal (Hall, 2002)

De acuerdo con Pilon-Smits et al., (2002) las estrategias genticas en la produccin de las
plantas transgnicas y el papel que desempean los microorganismos contribuyen a la
importancia en el proceso de fitorremediacin, as como el desciframiento completo del
genoma de Arabidopsis, adems de los intensos estudios moleculares que se estn llevando
a cabo sobre Thlaspi, y el conocimientos de algunos genes implicados en las absorcin y
en la tolerancia a algunos metales especficos, resultan muy prometedores en la obtencin
de las primeras variedades de plantas transgnicas con capacidades hiperacumuladoras
mejoradas (Zhu et al., 1999).

A pesar de los subsecuentes reportes de investigaciones que afirman la identificacin de


plantas acumuladoras de elevados niveles de cobalto, cobre, manganeso y plomo estn bien
descritas (Baker y Brooks, 1989). Sin embargo la existencia de plantas hiperacumuladoras
de metales como nquel, cinc y selenio son cuestionadas continuamente y requieren futuras
investigaciones (Salt, 1998).
37

En fitorremediacin se necesitan plantas de rpido crecimiento con una alta capacidad de


incorporacin de metales y una rpida ganancia de biomasa, para que puedan interferir en la
biodisponibilidad de metales txicos en suelos y las limitaciones de las plantas
hiperacumuladoras son pequea biomasa radicular, su restringida selectividad de los
elementos, el minsculo conocimiento acerca de la agronoma, la gentica y las
enfermedades de stas plantas. En su gran mayora las plantas que acumulan metales son
especies silvestres pequeas en tamao y tienen las tasas de crecimiento lento como
ejemplo se tiene a Thlaspi caerulescens, que es una planta no micotrfica y de lento
crecimiento son caractersticas que limitan el porcentaje de la fitoextraccin. (Baker y
Walker, 1997).

Otras plantas acumuladoras con abundante biomasa son micotrficas tales como girasol y
sauce, por lo que ahora reciben mayor atencin que asociadas con HMA son tolerantes a
metales y pueden por lo tanto ser consideradas para descontaminar suelos levemente
contaminados. La asociacin de las plantas con hongos micorrzicos representa una serie
de importantes ventajas entre las que destacan proteccin contra ataque de parsitos y
enfermedades, mayor rea de extensin de las races facilitando la absorcin de nutrimentos
as como tambin contaminantes inorgnicos y orgnicos (Leyval et al., 2001; Ernst, 2000).

Actualmente las plantas hiperacumuladoras identificadas son 397, este nmero puede ser
cambiado en el futuro, ya que ms plantas que crecen en suelos ricos en metales son
investigadas, en la mayora de los casos, no se trata de especies raras, sino de cultivos
comunes que se han ensayado con xito como posibles especies fitorremediadoras en el
futuro como son la alfalfa, la mostaza, el tomate, la calabaza, el esparto, el sauce y el
38

bamb. Las principales familias a las que pertenecen las plantas hiperaculadoras se
mencionan a continuacin: Asteraceae, Aceraceae, Poaceae, Brassicaceae, Betulaceae,
Convolvulaceae, Cyperaceae, Fabaceae, Malvaceae y Oleaceae. (De Oliveira y Vara,
1999)

El gran inters despertado por las plantas hiperacumuladoras, especialmente para


destoxificar un ambiente contaminado, obliga tambin a resolver otros problemas relativos
a otras disciplinas, hace hincapi en ello y destaca que, cuando se potencie la investigacin
conjunta de diversos campos como botnica, fisiologa vegetal, agronoma, qumica y
gentica, probablemente se inicie un brillante futuro para la fitorremediacin. El entorno de
las plantas hiperacumuladoras revela la necesidad de impulsar mayores conocimientos
multidisciplinarios que aumenten la rentabilidad y eficacia de dichas plantas: sus
aplicaciones son interesantes en muchas reas, y particularmente importantes en la
proteccin del ambiente (Lasat, 2002).

Los recientes investigaciones sobre la glomalina que es una glucoprotena que se encuentra
en las hifas de los hongos micorrzicos (Wright y Upadhayaya, 1996), han contribuido de
manera considerable en la recuperacin de suelos contaminados por metales pesados, ya
que acuerdo con (Gonzlez-Chvez et al., 2002) la glomalina puede atrapar elementos
potencialmente txicos. El glutation es un antioxidante constituido por aminocidos
cisteina, glicina y cido glutmico que fijan los metales pesados, los cidos orgnicos
forman los complejos con los metales, un proceso de la desintoxicacin del metal por lo
que la glomalina, el glutatin y los cidos orgnicos desempean un papel dominante en
tolerancia del metal por las plantas. Las estrategias genticas y las plantas transgnicas, las
39

pruebas en la produccin y el campo microbiolgico traern la importancia del campo de


recuperacin de suelos contaminados (Hall, 2002).

2.3.4. Categoras de la fitorremediacin

La fitorremediacin de acuerdo con Salt et al., (1998) generalmente se divide en las


siguientes reas: Fitoextraccin, fitovolatilizacin, rizofiltracin fitodegradacin, y
fitoestabilizacin que se describen a continuacin (Fig. 3).

Fig. 3. Categoras de fitorremediacin de suelos contaminados (Lasat, 2002).

La fitoextraccin, conocida tambin como fitoacumulacin, es la captacin de metales


contaminantes por las races de las plantas y su acumulacin en tallos y hojas. Algunas
plantas absorben cantidades extraordinarias de metales en comparacin con otras. Se
40

selecciona una de estas plantas o varias de este tipo y se plantan en un sitio segn los
metales presentes y las caractersticas del lugar. Despus de un tiempo, cuando las plantas
han crecido, se cortan y se incineran o se deja que se transformen en abono vegetal para
reciclar los metales. Este procedimiento se puede repetir la cantidad de veces que sea
necesario para reducir la concentracin de contaminantes en el suelo a lmites aceptables. Si
se incineran las plantas, las cenizas deben colocarse en un vertedero para desechos
peligrosos, pero la cantidad de ceniza ser slo alrededor del 10% del volumen de los
desechos que habra que eliminar si se excavara el suelo contaminado para tratarlo
(Robinson et al.,2002; Khan et al., 2001; Chaney et al., 1997).

La fitovolatilizacin se produce a medida que los rboles y otras plantas en crecimiento


absorben agua junto con contaminantes orgnicos. Algunos de los contaminantes pueden
llegar hasta las hojas y evaporarse en la atmsfera. Los lamos, por ejemplo, evaporan el
90% de los contaminantes que absorben (Raskin et al., 1997)

La rizofiltracin es una tcnica prometedora para abordar el problema de la contaminacin


del agua con metales. La rizofiltracin es similar a la fitoextraccin, pero las plantas que se
usan para la limpieza se cultivan en invernaderos con las races en agua, en lugar de suelo.
Cuando las plantas tienen un sistema radical bien desarrollado, se recoge agua contaminada
de un vertedero, se transporta hasta el lugar donde estn las plantas y las plantas se colocan
en esta agua, las races absorben el agua junto con los contaminantes. A medida que las
races se saturan de contaminantes, se cortan y se eliminan. Adems de extraer metales del
agua, la rizofiltracin puede ser til para descargas industriales, escorrenta de tierras
41

agrcolas, drenaje de minas de cidos y contaminantes radiactivos. Las plantas de girasol


fueron utilizadas con xito en la extraccin de contaminantes radiactivos del agua de una
laguna en una prueba realizada en Chernobyl Ucrania (Duschenkov et al., 1995).

La fitoestabilizacin es un proceso mediante el cual se reduce la movilidad de los


contaminantes y previene la migracin de metales a aguas subterrneas o al aire, tambin
reduce su biodisponibilidad hacia la cadena alimenticia. Esta tcnica tambin se utiliza para
reforestar sitios disturbados que carecen de vegetacin debido a las altas concentraciones de
contaminantes, las plantas tolerantes a los metales se utilizan para restaurar la vegetacin y
de esa manera disminuir la migracin potencial de la contaminacin con la erosin del
viento y de la lixiviacin de contaminantes del suelo a aguas subterrneas. En algunos
casos de fitoestabilizacin, los metales pueden ser transformados a menos biodisponibles y
por consiguiente a formas menos txicas (Reeves, 2003; Berti y Cunningham, 2000).

2.4. Contribucin de los microorganismos en la remediacin de suelos

2.4.1. Interaccin de microorganismos con los metales pesados en la remediacin


El suelo provee un hbitat para una gran variedad de organismos desde microbios hasta
especies superiores como plantas. Las propiedades biolgicas del suelo incluyen la
actividad y diversidad de microorganismos del suelo. Las bacterias son los organismos ms
pequeos y numerosos en el suelo con ms de 400 gneros y un estimado de 104 especies.
En un gramo de peso seco de suelo rizosfrico existe una gran cantidad de

42

microorganismos de aproximadamente de 108 para bacterias, 106 actinomicetos, y 105 para


otros hongos (Karthikeyan et al.,2003). La biomasa de microorganismos puede exceder 500
mg de carbn por kilogramo de suelo sin embargo, los microorganismos solo comprenden
menos del 3% del carbono orgnico del suelo y ocupan slo 0.001% del volumen total
(Zhang et al.,1997).

La densidad de las poblaciones microbianas vara significativamente verticalmente y


horizontalmente en el suelo. La dispersin de la biomasa microbiana dentro de una muestra
de suelo est relacionada con diversos factores como la distancia de la superficie del suelo
debido a la difusin de oxgeno, la locacin y disponibilidad de materiales orgnicos como
fuentes potenciales de comida (Lovley, 2000).

El trmino rizsfera fue introducido por primera vez en 1904 para descubrir la
interaccin especfica entre la bacteria y las races de las leguminosas. El trminos se ha
refinado desde entonces para referirse a la regin bajo la influencia inmediata de las races
de plantas donde haya una abundante poblacin microbiana (Karthikeyan et al.,2003).

Dentro de la amplia diversidad microbiana, existen microorganismos resistentes y


microorganismos tolerantes a metales. Los resistentes se caracterizan por poseer
mecanismos de destoxificacin codificados genticamente, inducidos por la presencia del
metal. En cambio, los tolerantes son indiferentes a la presencia o ausencia de metal. Tanto
los microorganismos resistentes como tolerantes son de particular inters como captores de

43

metales en sitios contaminados, debido a que ambos pueden extraer los contaminantes. La
resistencia o tolerancia experimentada por microorganismos es posible gracias a la accin
de

diferentes

mecanismos.

Estos

fenmenos

son:

biosorcin,

bioacumulacin,

biomineralizacin, biotransformacin y quimiosorcin mediada por microorganismos


(Lovley, 2000).

Por lo anterior los microorganismos pueden ser considerados como reactores bioqumicos
que conducen el proceso de biodegradacin de contaminantes del suelo, esta idea es una
extensin lgica de varios estudios que demuestran que numerosos procesos bioqumicos se
llevan a cabo con la ayuda de microorganismos (Lovley, 2000).

Se conoce muy poco acerca de la enorme diversidad de las poblaciones microbianas del
suelo, sus propiedades, su comportamiento en el entorno del suelo, los microorganismos
que habitan en la rizsfera interactan con las races de las plantas formando tiles
asociaciones simbiticas que hacen posible la supervivencia de las plantas bajo condiciones
de estrs como deficiencia de nutrimentos, alta concentracin de metales pesados, sequedad
del suelo, afectan la asociacin de las races de las plantas por los hongos micorrzicos y
Rhizobium (Khan, 1997).

Algunos metales pesados son esenciales para el ser humano porque suministran cofactores
bsicos para diversas funciones de protenas y enzimas, pero en altas concentraciones los
metales pesados pueden actuar en forma nociva bloqueando los grupos funcionales

44

esenciales desplazando los iones modificando la conformacin activa de las molculas


biolgicas, por otra parte los metales pesados son txicos tanto para organismos superiores
como para microorganismos. El efecto de los metales pesados a las comunidades
microbianas han despertado la atencin en la recuperacin de suelos contaminados
(Simonton et al., 2000).

Los microorganismos como hongos y bacterias consumen y digieren sustancias orgnicas,


de las cuales se alimentan y obtienen energa. Algunos microorganismos pueden digerir
sustancias orgnicas tales como combustibles o solventes, que son peligrosas para los seres
humanos, y descomponerlas en productos inocuos mediante un proceso llamado
biodegradacin. Las sustancias naturales liberadas por las races de las plantas (azcar,
alcohol y cidos) contienen carbono orgnico, del cual se alimentan los microorganismos
del suelo, y los nutrimentos adicionales intensifican su actividad. Adems, las plantas
aflojan el suelo y transportan agua al lugar, facilitando as la biodegradacin (Karthikeyan
et al.,2003).

De acuerdo con Guider et al., (1999); Garbisu y Alkorta, (1997) los metales pesados que se
encuentran depositados en los suelos no son degradados biolgicamente ni ocurren cambios
en su estructura molecular, pero si son transformados de un estado de oxidacin a otro.
Como consecuencia de la alteracin del estado de oxidacin, los metales pueden convertirse
en: ms solubles en agua y pueden ser removidos por lixiviacin, inherentemente menos
txicos, menos solubles en agua de tal manera que se precipitan y se convierten en menos

45

biodisponibles y finalmente pueden ser volatizados, esto sucede cuando se cambia el estado
de oxidacin de los metales pesados.

Los microorganismos del suelo desempean un papel importante en la movilizacin e


inmovilizacin de cationes metlicos, siendo cada vez ms aparente la reduccin de los
metales pesados por los microorganismos, adems pueden ser manipulados para ayudar en
la remediacin de los sitios contaminados por metales pesados. Los microorganismos
pueden recuperar suelos contaminados con metales pesados por transformacin de valencia,
precipitacin extracelular qumica o volatilizacin (Lovley, 1993).

Los factores fisicoqumicos como pH, superficie o radio de accin, temperatura, salinidad,
materia orgnica, disponibilidad de oxgeno, afectan el hbitat microbiano. Es fundamental
el rol de los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos de los metales y su utilizacin
en los procesos de biorremediacin de desechos slidos y lquidos es esencial para el
cuidado del medio ambiente (Karthikeyan et al., 2003; Nies, 1999).

En la interaccin suelo-planta destacan los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) esta


simbiosis mutualstica (Fig. 4) ejerce gran influencia en la nutricin y tolerancia de las
plantas a estrs biticos y abiticos (Siquiera y Saggin, 1995). Los HMA son los
microorganismos del suelo ms comunes y constituyen un importante componente
funcional del sistema suelo-planta suceso presente en casi todos los hbitats y climas
(Barea et al., 1997), incluyendo suelos disturbados. Sin embargo los suelos degradados

46

pueden sufrir cambios en la diversidad y abundancia en las poblaciones de los HMA. En


este contexto, cuando las poblaciones de microorganismos degradativos como los hongos
micorrzicos arbusculares son inoculados en sitios contaminados, estos deben poseer
enzimas que ayudan a transformar el estado de oxidacin de los metales, hacindolos
menos txicos (Leyval et al., 2000; Loth, 1996).

Plantas

Metales pesados en

acumuladoras

suelos

.
HMA

Fig. 4. Esquema representativo de la asociacin simbitica entre planta-HMA-metales


pesados en suelos contaminados fuente (Leyval et al., 1997).

2.5.

Hongos micorrzicos

2.5.1. Generalidades de los HMA

La simbiosis micorrzica se refiere a la asociacin o simbiosis entre plantas y hongos como


un estado de interdependencia fisiolgica equilibrada de dos o ms organismos en el que
no se estimulan permanentemente los mecanismos de reaccin defensiva, la relacin
hongo-suelo es la simbiosis del suelo ms comn y las respuestas principales ante la
presencia de la inoculacin es en suelos deficientes en nutrientes o en humedad. La

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simbiosis micorrzica incrementa la efectividad en la absorcin de nutrientes mejorando el


crecimiento o aumento en la biomasa en las plantas (Abbott y Robson, 1992).

Los hongos micorrzicos son microorganismos que han permanecido asociados a las races
de las plantas desde que stas existen en el mundo, el trmino micorriza fue utilizado por
primera vez por el cientfico alemn Albert Frank en 1885, del griego: mykes (hongo) y
rhiza (races) (Harrinson, 1997). Cincuenta aos antes de Frank, estas asociaciones ya
eran consideradas, de naturaleza parastica, hasta que en 1987 se pudo demostrar que la
colonizacin de las races era ms bien simbitica en lugar de parasitaria (Hayman, 1987).

Las estructuras producidas por los hongos (HMA) dentro de la raz del hospedero incluyen:
un sistema de hifas contiguo, a travs del punto de penetracin inicial, con la red de hifas
que se extiende en el interior del suelo, arbsculos pequeos, intracelulares, cuya funcin es
la transferencia de nutrimentos entre los simbiontes; y alargadas vesculas intercalares o
terminales cuya funcin parece ser de almacn orgnico del endofito (Carlin y Brown,
1982).

La fisiologa de las micorrizas arbusculares es compleja y acompaada de su formacin, se


puede explicar en las siguientes etapas: Activacin de los propgulos que son bsicamente
esporas, fragmentos de races colonizadas e hifas, la penetracin e iniciacin de la
colonizacin se realiza cuando las hifas hacen contacto con un punto en la superficie de la
raz, la posibilidad de que sta penetre e inicie la colonizacin depende de diversos factores
como: el hongo debe ser capaz de formar un haustorio y penetrar inmediatamente, quiz

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necesite crecer un poco sobre la superficie de la raz, tal vez el nmero de propgulos para
iniciar la colonizacin deba ser pequeo, o bien, quiz deba haber un nmero mximo de
invasiones, etc. (Smith et al., 1997; Barea, 1995).

Se ha demostrado que la infeccin inicia con una serie de unidades infectivas discretas,
extendindose cada una hasta 5 mm hacia los lados del punto de entrada. estas unidades se
unen para formar la colonizacin continua. En otros reportes se ha observado una extensin
de hasta 10 mm desde el punto de entrada, independientemente del patrn seguido, los
hongos pueden ocupar ms de la mitad de la raz en 3 y 4 semanas despus de la entrada
(Carlin y Brown, 1982).

Aunque la absorcin del fsforo parece ser uno de los principales efectos que facilita la
inoculacin, existen otros nutrimentos, minerales y metales pesados que pueden estar
disponibles a travs de la asociacin planta-hongo, as como la translocacin del agua. La
produccin de hormonas y otros cambios celulares son tambin incluidos como parte de la
respuesta de la planta ante la colonizacin (Cox y Tinker, 1976).

2.5.2. Clasificacin de los diferentes tipos de hongos micorrzicos

Las plantas inoculadas son ms resistentes al estrs ambiental que las plantas no
inoculadas. Aunque en general se reconocen dos tipos de micorrizas: las endotrficas
(endomicorrizas) y las ectotrficas (ectomicorrizas), se menciona la existencia de un tercer

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grupo, las ecto-endomicorrizas considerado como un grupo intermedio entre las otras dos
asociaciones que es frecuente en los viveros (Quilambo, 2003).

De las endomicorrizas, el 90% de las especies vegetales existentes sobre la corteza terrestre,
forman este tipo de asociacin. La caracterstica de esta asociacin es la penetracin
intracelular en las clulas corticales y epidrmicas de la raz para formar arbsculos y
vesculas que aseguran una gran superficie de contacto entre ambos asociados. El
abundante micelio, que se ramifica a travs de la raz y se extiende hacia fuera del suelo,
formando una maraa (Fig.5). Carecen de manto fngico externo visible (Morton y Benny,
1990).

Figura 5. Representacin de la estructura morfolgica de la micorriza vesculo arbuscular


(Barea y Azcon, 1997).

De acuerdo con Scnnerini y Bonfante-Fasolo (1982) las endomicorrizas se subdividen en:


Micorriza de ericoides de la familia Ericaceae. Se desarrollan principalmente en tierras
rticas en clima boreal, sus principales caractersticas son: sin manto de hifas, sin red de

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Hartig, hifas retorcidas en las clulas radicales, hongos asociados Ascomycetes


(Basidiomycetes).

Las micorrizas de orqudeas se desarrollan principalmente en tierras calientes con pH cido


y en suelo pantanoso. Con estructuras caractersticas: sin manto de hifas, sin red de Hartig,
hifas en las clulas radicales, posiblemente haustorio no ramificado micelio hialino, hongos
asociados Ascomycetes (Basidiomycetes).

La micorriza arbuscular, la ms extendida sobre el planeta, tanto por el nmero de


hospederos, como por su distribucin geogrfica. Ocurren en el 96% de las plantas
vasculares, desde el punto de vista como biofertilizante. Morton y Benny (1990) definen
dos estructuras que son caractersticas de las micorrizas arbusculares: Las vesculas que son
grandes hifas infladas, en forma globosa usualmente llenas de lpidos, los cuales son
necesarias durante la etapa de crecimiento y sirven como rganos de energa y
almacenamiento, o como estructuras reproductivas. Los arbsculos son minsculas
dicotmicas, muy finas intracelulares los cuales invaginan la membrana plasmtica,
sirviendo como sitio de intercambio nutrimental entre el hongo y el hospedero, presentan
una vida media de 9 a15 das, al cabo de los cuales se colapsan o son digeridos por la clula
hospedera. Forman abundante micelio que ramifica a travs de la races y se extienden
hacia fuera. Los hongos micorrzicos arbusculares pertenecen a la clase Glomeromycetes
(Cuadro 3).

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Cuadro 3. Clasificacin actual de los hongos formadores de micorriza arbuscular (Oehl,F.,


y Sieverding, 2004)
Subdivisin: Glomeromycota
Clase: Glomeromycetes
ORDEN

FAMILIA

GNERO

Glomerales

Glomeraceae
fam. ined.
Gigasporaceae
Acaulosporaceae
Gerdemanniaceae
Diversisporaceae fam.
ined.
Paraglomeraceae
Geosiphonaceae
Archaeosporaceae

Glomus (Glomus Group A or B)


incertae sedis (Glomus Group A or B)
Gigaspora & Scutellospora
Acaulospora & Entrophospora
Pacispora (=Gerdemannia)
incertae sedis (Glomus Group C)

Diversisporales

Paraglomerales
Archaeosporales

Paraglomus
Geosiphon
Archaeospora

2.6. Contribucin de los HMA como mecanismo de recuperacin de


suelos contaminados por metales pesados

2.6.1 Interaccin de los HMA en la contaminacin con metales pesados

De acuerdo con Atimanav (2004) la simbiosis micorrzica se presenta en todos los hbitats
incluyendo en suelos contaminados ya sean estos, producidos o derivados de actividades
mineras y de acuerdo con con experimentos realizados por Leyval et al., (1997) pueden
mejorar la revegetacin de suelos con desechos de minas u otros sitios degradados. Las
especies de hongos que son aislados de reas contaminadas las cuales son enriquecidos
naturalmente por metales pesados o de viejos sitios de desechos industriales mineros son
ms resistentes a los metales pesados que los HMA reproducidos de sitios no contaminados

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por lo que constituyen un componente funcional importante en la interaccin suelo-plantahongo en la recuperacin de suelos degradados por metales pesados.

Los HMA son importantes en la recuperacin de suelos contaminados debido a que juegan
un papel vital en la tolerancia (Del Val et al., 1999) y en la acumulacin (Zhu et al., 2001;
Joner et al., 1997) de metales por las plantas. El micelio externo de los HMA explora un
amplio volumen de suelo al esparcirse ms all de la zona de exploracin de las races
(Malcova et al., 2003; Khan et al., 2000) proporcionando de este modo acceso a un mayor
volumen de metales pesados presentes en la rizsfera. Una alta cantidad de metales
pesados tambin pueden almacenarse en las estructuras micorrzadas de races y en las
esporas, por ejemplo concentraciones de ms de 1200 mg / kg de cinc han sido reportados
en tejido de Glomus mosseae y sobre 600 mg / kg en G versiforme (Chen et al., 2003;
Leyval et al., 1996; Dehn y Shuepp, 1989).

Otro aspecto importante de esta simbiosis es que los HMA pueden incrementar el
establecimiento y el crecimiento de plantas sin importar los altos niveles de metales
pesados (Weissenhorn et al., 1993; Enkhtuya et al., 2002) en el suelo. Adems de una
mejor obtencin de nutrimentos del suelo, disponibilidad de agua y propiedades de
agregacin de suelo (Rilling et al., 2002; Kabir et al., 2000) aspectos asociados con la
simbiosis, los HMA son significativos en los mejoramientos ecolgicos de la rizsfera
(Medina et al., 2003; Azcn-Aguilar et al., 2003).

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De acuerdo con numerosas investigaciones se ha observado que la simbiosis de los HMA


con las plantas acumuladoras puedan proteger a sta de los efectos de las altas
concentraciones de los metales pesados y se ha reportado la disminucin de la toxicidad de
cinc y cadmio en suelos contaminados (Tao et al., 1997; Weissenhorn et al., 1995). Varios
mecanismos biolgicos y fsicos han sido propuestos para explicar la contribucin de los
HMA a la tolerancia al metal de las plantas hospederas. La inmovilizacin del metal en la
biomasa de los hongos es uno de los mecanismos involucrados (Li et al., 2000).

2.6.2. Funcin de la simbiosis micorrzica en la recuperacin de suelos contaminados


con metales pesados

Ante la necesidad de reforestar o la posibilidad de usar plantas en un proceso de


descontaminacin del suelo (Backer et al., 1994), mediante el empleo de tecnologas
emergentes conocidas como remediacin verde o fitorremediacin (Salt et al.,1995), las
interacciones entre micorrizas y metales pesados se ha tornado de gran importancia en la
restauracin de ecosistemas. La interaccin entre los hongos micorrzicos arbusculares
(HMA) y los minerales, particularmente los metales pesados, ha sido el objetivo de una
variedad de recientes estudios debido a un efecto benfico de la micorriza sobre la
tolerancia de las plantas contra la toxicidad de dichos metales pesados (Leyval et al., 2002)

Es bien conocido que los HMA pueden ser afectados por la toxicidad de los metales en la
disminucin de su nmero de esporas en el suelo; as como en la colonizacin de las races
de las plantas, pero se ha observado que en muchos casos stas plantas acumuladoras son

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micotrficas y se han detectado colonizacin en sus races y esporas en el suelo rizsferico


aunque en un nmero muy reducido comparado con otras plantas que crecen en suelos no
contaminados (Khan et al., 2002; Harrier, 2001; Leyval et al., 2001; Leyval et al., 1997;
Weissenhorn et al., 1995; Haselwandter et al., 1994).

En los ltimos aos el inters de la investigacin se ha centrado en la diversidad y


tolerancia de los HMA a los metales pesados en los suelos contaminados, tratando de
entender sus mecanismos de adaptacin y tolerancia de HMA a metales pesados en suelos,
debido a que esto podra facilitar el manejo de estos microorganismos de suelo, para
programas de restauracin / Biorremediacin. Autores como Jeffries et al., (2003); Del Val
et al., (1999) mostraron que la diversidad los hongos micorrzicos asociada con plantas de
maz en un experimento de campo a largo plazo, no defiri entre tres parcelas que haban
recibido diferentes niveles de lodos de caera que contenan metales pesados. Sin
embargo, el nmero de esporas de cada especie fue menor en el suelo con la concentracin
ms alta de metales pesados. Usando el mismo experimento de campo a largo plazo y la
misma variedad de planta, pero suelos ms cidos; Weissenhorn (1996) encontr una
reduccin del nmero, pero adems de diversidad de esporas de HMA en el suelo que
reciba la cantidad ms alta de lodo.

En un suelo altamente contaminado en el norte de Francia donde solo plantas adaptadas


podan crecer, fueron recogidas races de Arrhenaterum elatius a lo largo de una pendiente
de concentracin de metales pesados. Hasta tres especies diferentes de Glomus fueron
identificadas dentro de las races de Arrhenaterum, las cuales defirieron a lo largo de la

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pendiente de metales (Leyval et al., Datos no publicados). La contribucin de estos HMA a


la tolerancia de las plantas a metales pesados o la acumulacin de metales pesados por las
plantas no ha sido establecida. Cuatro especies de Glomus fueron encontradas adems en la
rizsfera de otra planta tolerante al metal, Viola calaminaria, creciendo en un suelo
altamente contaminado con metales pesados (21 y 41 mg kg-1 Zn y Cd, respectivamente)
(Tonin et al., 2001). stas especies de Glomus incrementaron la concentracin de Cd y Zn
en las races de trbol, pero no en los retoos, y no afect el crecimiento en las plantas. Por
el contrario, una especies de Glomus aislada de la rizsfera de Viola calaminaria
increment el crecimiento de maz y alfalfa en suelos contaminados por metales pesados y
redujo la concentracin de Zn en races y retoos (Hildenbrandt et al., 1999; Kaldorf et al.,
1999).

Se han reportado plantas micorrizadas que crecen en los sitios contaminados por metales
pesados (Chaudhry et al.,1998; Shetty et al., 1995; Weissenhorn et al.,1995; Pawlowska et
al., 1996; Chaudhry et al., 1980); indicando que estos hongos han desarrollado una
tolerancia a los metales pesados y que pueden desempear un papel en la fitorremediacin
del sitio. Tambin se ha observado que la asociacin entre los HMA con races de las
plantas incrementan la absorcin, translocacin, metabolizacin y acumulacin de algunos
elementos traza como Cu (Gildon y Tinker, 1983), Pb (Daz et al., 1996), Cd (Guo et al.,
1996; Joner et al.,1997), Ni (Killham et al.,1983), Zn (Lambert et al., 1979; Davies et al.,
1987; (Galli et al., 1994), Zn y Ni (Jamal 2002), otros metales como Hg y Cr (Galli et al.,
1994) y Co (Killham y Firestone, 1995).

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Killham y Firestone (1995) determinaron la influencia de la colonizacin de Glomus


fasciculatum en la absorcin metales pesados y crecimiento de pasto perenne (Ehrharta
calycina) en un suelo areno arcilloso con metales pesados como: Cu, Ni, Pb, Zn, Fe y Co,
que fueron aplicados simulando lluvia cida con pH 3.0, 4.0 y 5.6. Los porcentajes de las
deposiciones fueron similares a los efluentes de fundidoras. La concentracin de los
metales pesados en los brotes de las plantas micorrizadas fue mayor que en las plantas
testigo expuestas a la lluvia cida simulada.

Cuando Gildon y Tinker (1983) analizaron el efecto de metales pesados en la extensin y


desarrollo de la colonizacin de cebolla por Glomus mosseae, ellos encontraron que la
intensidad de la colonizacin se reduca progresivamente cuando se incrementaba la adicin
de Cu o Zn. Los dos metales tuvieron sorpresivamente efectos similares. Sin embargo las
plantas de trbol que crecieron en reas fuertemente contaminadas con metales pesados
mostraron niveles de colonizacin de alrededor del 30%, mientras que en niveles con
menos concentracin de contaminacin con metales pesados se ha manifestado una alta
colonizacin en la races de cebolla en experimentos en maceta. De acuerdo con el
porcentaje de raz colonizada, Glomus mosseae aislado de un suelo contaminado fue ms
tolerante con el Zn y Cd que Glomus mosseae aislado de suelo no contaminado.
Concluyendo que el peso seco de brotes y la concentracin de fsforo fueron
significativamente aumentados por los hongos tolerantes a los metales en comparacin a la
cepa no tolerante.

Dueck et al., (1986) examinaron el efecto de G. fasciculatum en dos pastos (Festuca rubra
y Calamagrostis epipejos) en dunas costeras con presencia de cinc, ellos encontraron que la
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colonizacin de HMA puede reducir el efecto negativo del Zn en el crecimiento de la


planta. As tambin ambos el Zn y los HMA influyen en el crecimiento de la planta,
mientras que el Zn inhibe el crecimiento, los HMA estimulan el desarrollo radicular y de
los brotes, especialmente en el caso de F. rubra. Con respecto al crecimiento de las races,
ambas especies mostraron una interaccin significativa entre el efecto de Zn y HMA.

Posteriormente Leyval et al., (1991) y Weissenhorn et al., (1993) confirmaron los


resultados de Gildon y Tinker (1983). En suelos contaminados por deposiciones
atmosfricas de fundidoras encontraron HMA ms tolerantes al Cd que una cepa de G.
mosseae aislada de suelo no contaminado. Esta tolerancia de Cd fue observada en el
nmero de esporas (Weissenhorn et al., 1993) y en el porcentaje de colonizacin
micorrzica. De acuerdo con Weissenhorn et al., (1996), la prolongada exposicin de los
metales pesados puede desarrollar tolerancia en los HMA, pero el mecanismo es poco
conocido, por consiguiente es posible mejorar la capacidad de las plantas en la recuperacin
de suelos, inoculndolas con HMA.

Griffioen et al., (1994) reportaron altos niveles de colonizacin micorrzica en Agrostis


capillaris creciendo en suelos contaminados por Zn y Cd colindantes a una refinera de Zn.
En contraste, en el rea alrededor de una vieja mina de cobre encontraron una correlacin
negativa entre la colonizacin de A. capillaris por HMA y el contenido total de cobre en el
suelo. Desafortunadamente no analizaron

sus resultados sobre la relacin entre la

biodisponibilidad de los elementos y las propiedades fsicas y qumicas de los diferentes


suelos. Noyd et al., (1996) sealaron que la colonizacin de los HMA de las plantas
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nativas en una pradera contaminada con hierro, se incrementaron lo cual ayud a establecer
a una comunidad sostenible de hierba nativa que significara considerables logros en la
recuperacin del sitio.

Varios autores han reportado la extraccin de esporas de HMA tales como Glomus y
Gigaspora asociadas a la mayora de las plantas que crecan en ambientes contaminados
con metales pesados. Christie (2004) y Raman et al., (1993) identificaron a Glomus y
Gigaspora spp. en micorrizsferas de catorce especies de plantas que colonizaban un
desecho de mina de magnesita en la India. Mientras que Weissenhorn y Leyval et al.,
(1994) aislaron solo a Glomus mosseae; Dueck et al., (1986) aislaron Glomus fasciculatum
de los suelos contaminados por metales pesados. Pawlowska et al., (1996) examinaron
grandes cantidades ricos en Cd, Pb y Zn en Polonia y recuperaron esporas de Glomus
aggregatum, G. fasciculatum y Entrophospora spp. de las micorrizsferas de las plantas
que crecan en los suelos.

Galli et al., (1994) dichos autores sugirieron que las micorrizas pueden desempear un
papel crucial en la proteccin de la planta contra los metales pesados. La eficacia de la
proteccin, sin embargo, difiere entre los distintos aislados de hongos micorrzicos y los
diferentes metales pesados. Joner y Leyval (1997) sealaron que las hifas extra- radicales
de los HMA Glomus mosseae pueden transportar el Cd del suelo a las plantas de trbol
creciendo en macetas seccionadas. Los autores no sealaron ninguna restriccin en el
crecimiento de las hifas en suelos con altos niveles de Cd extrable.

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La captacin de metales por la simbiosis micorrizca obedece a varios factores tales como
las propiedades fsicas y qumicas del suelo (Wang y Chao, 1992), particularmente su nivel
de fertilidad (Lambert et al., 1979; Thompson, 1990), su pH (El-Kherbawy et al.,1989;
Killham y Firestone, 1983), la planta hospedera (Griffioen y Emst, 1989; Kucey y Janzen,
1987), el tipo de hongos involucrados (Gildon y Tinker, 1981) y, sobre todo, la
concentracin de los metales en los suelos. Bajo condiciones de deficiencia, la mayora de
los estudios sealan un aumento en la captacin de metal por las plantas micorrizadas. En
este contexto, se ha observado un aumento en la concentracin de Zn en las hojas, causada
por HMA, en suelos con altas concentraciones de este elemento (Christie, 2004; Thompson,
1990; Faber et al., 1990).

La acumulacin de cadmio, plomo y cinc, en cultivos irrigados con desechos de la industria


minera y elctrica; las muestras del suelo superficial analizadas mostraron que las races de
zanahoria son afectadas ya que sus hojas contenan altas concentraciones de metales
pesados, ya que estos son absorbidos por las plantas llegando a los frutos y transfirindose a
la cadena alimenticia. Por lo que es necesario la recuperacin de suelos contaminados
utilizando la simbiosis entre plantas acumuladoras con los hongos micorrzicos por lo que
el maximizar una colonizacin radicular en plantas que crecen en ambientes adversos,
como son los suelos contaminados con metales pesados es ahora de gran inters, porque se
considera que las micorrzas arbusculares son clave en estrategias destinadas a frenar la
contaminacin de suelos, la erosin y desertificacin, basadas en la revegetacin con
especies arbustivas autctonas (Kugonic y Graman, 1999; Kothari et al., 1990).

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2.6.3. Contribucin de los HMA en la absorcin y translocacin de los metales pesados


por plantas hiperacumuladoras

Cuando los suelos contienen altas cantidades potencialmente txicas de metales pesados, la
simbiosis micorrzica induce bajas concentraciones de estos metales en la parte area de la
planta y por consiguiente un efecto benfico en su crecimiento. Daz y Honrubia (1995)
detectaron un aumento en la acumulacin de plomo en las plantas micorrizadas, utilizando
poblaciones de hongos nativos, ellos observaron una disminucin en la concentracin de
plomo en la parte foliar de A. cytisoides micorrizadas creciendo en suelos con altas
concentraciones de plomo y cadmio. (Chen, 2000 y Weissenhorn et al., 1995) tambin
informaron una reduccin en la concentracin de plomo en plantas micorrizadas.

Los efectos provocados por los HMA en las plantas colonizadas en la absorcin y
traslocacin de metales son poco conocidos; pero la absorcin de metales pesados depende
de la especie de la planta, de la concentracin del metal, del medio de crecimiento y
posiblemente de la especie de hongo, pudiendo aumentar o disminuir la absorcin de
ciertos metales (Heggo et al., 1990).

Con respecto al significado de las micorrizas en fitorremediacin de suelos contaminados


con metales pesados, se ha comprobado que las plantas micorrizadas tienen un efecto
benfico, basado en la capacidad que confiere a la planta para inmovilizar metales en la raz
reduciendo as su translocacin a la parte area y, en consecuencia, el flujo de metales a la
cadena trfica (Del Val et al., 1999). En este contexto, dos aspectos principales deben

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considerarse: el primero trata de los efectos de los metales pesados sobre los hongos
micorrzicos y su simbionte, el segundo se refiere al efecto provocado en los hongos en la
absorcin del suelo para la planta y transferencia a los brotes y la tolerancia de las plantas
un exceso de metales pesados en el suelo (Nogueira, 1996; Leyva et al., 1997).

Los reportes de las altas concentraciones de metales muestran variaciones en la


acumulacin de metal y la translocacin dentro de la planta dependiendo del hongo, de la
planta hospedera, densidad de la raz, caractersticas del suelo, metales y su disponibilidad
(Joner y Leyval, 2001; Leyval et al., 1997; El-Kerbawy et al., 1989). Las micorrizas
arbusculares pueden subsistir en suelos altamente contaminados con metales pesados, sin
embargo la colonizacin a menudo es reducida en esas condiciones. Varios metales pesados
son fungitxicos, reduciendo la germinacin de las esporas, el crecimiento micelial y
consecuentemente la colonizacin micorrzica (Jamal, 2002).

Los HMA aislados de suelos contaminados son ms tolerantes a metales pesados y pueden
disminuir la concentracin en retoos y races, o disminuir la traslocacin de races a
retoos (Joner y Leyval, 1997; Diaz et al., 1996). Lo ltimo puede ser debido a la alta
capacidad de absorcin de metal de estos hongos, lo cual podra filtrar iones de metal
durante la absorcin (Joner et al., 2000). En otro estudio realizado por Weissenhorn et al.,
(1994), la colonizacin radicular de maz en suelo contaminado aument la masa vegetal y
redujo la absorcin de Cd, Zn y Cu en la parte area y races.

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Los HMA pueden disminuir los efectos adversos de la fitotoxicidad inducida por el exceso
de metales que no solo revisten importancia ecolgica y, ms recientemente, tecnolgica;
considerando la necesidad de rehabilitar reas contaminadas con metales pesados dispersas
por todo el mundo (Leyval et al., 1997).

Se ha prestado poca atencin al papel de la MA en ambientes que contienen un elevado y


potencialmente nivel txico de elementos minerales, si bien la inoculacin con hongos
micorrzicos reduce la concentracin de cinc y cadmio en las hojas de la planta que crecen
en suelos con alta concentracin de estos metales (Heggo et al., 1990) mencionan que la
toxicidad del Zn para las races de Betula pendula puede ser reducida por la colonizacin
con hongos micorrzicos y la influencia en el mejoramiento fue positivamente asociada con
la compatibilidad entre la filtracin del hongo y la planta.

Un mejoramiento similar se ha observado en Betula papyrifela asociada con varios


simbiontes micorrzicos expuestos a cobre y a nquel. Autores como Joner y Hutchinson,
(1986), Gildon y Tinker, (1989) demostrarn que las micorrzas arbusculares pueden
tambin afectar la incorporacin de metales pesados por las plantas y que los hongos
arbusculares son tolerantes a las altas concentraciones en el suelo.

Numerosos estudios han mostrado ahora que bajo condiciones moderadas de contaminacin
de cinc, las plantas hospederas de los HMA se encontraba colonizada. Los trabajos
realizados por Griffionen et al., (1994) en una parcela prxima a una refinera de cinc,
contaminada con cinc y cadmio, la especie de Agrostis capilaris utilizada en programas de
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rehabilitacin de suelos contaminados con metales pesados se encontraba colonizada,


debiendo por lo tanto beneficiarse de la simbiosis.

La colonizacin con los hongos nativos tolerantes a los metales ha mostrado que puede
proteger a las plantas contra los efectos txicos de concentraciones excesivas de metales
pesados. Los hongos MA mejoraron la incorporacin de Zn en el melocotn en los suelos
deficientes en California en maz (Zea mays L.) y trigo (Triticum aestivum L.) en algunos
suelos deficientes en la India (Christie et al., 2004).

Una reciente contribucin de los HMA en la ecologa de los suelos, se relaciona con el
descubrimiento de la glicoprotena llamada glomalina. Wright y Upadhyaya (1998)
mostraron que la abundante concentracin (comnmente varios mg/kg) de protena en el
suelo, esta altamente correlacionada con los agregados.

2.7. Importancia del cultivo del girasol

2.7.1. Origen

El origen del girasol se remonta a 3000 aos a.c. en el norte de Mxico y oeste de Estados
Unidos de Amrica, ya que fue cultivado por las tribus indgenas de Nuevo Mxico y
Arizona, fue uno de los principales productos agrcolas empleados en la alimentacin de
muchas comunidades americanas antes del descubrimiento. La semilla de girasol fue
introducida en Espaa por los colonizadores y despus se extendi al resto de Europa, pero
64

fue durante el siglo XIX cuando comenz la explotacin industrial de su aceite destinado a
la alimentacin.

2.7.2. Caractersticas botnicas

Perteneciente a la familia de las Asteraceae cuyo nombre cientfico es Helianthus annuus.


Es una planta anual, con un desarrollo vigoroso en todos sus rganos, dentro de esta especie
existen numerosos tipos o subespecies cultivadas como plantas ornamentales, oleaginosas y
forrajeras, cada una de las partes de la planta se describen a continuacin.

Raz: esta formada por una raz pivotante y un sistema de races secundarias de las que
nacen las terciarias que exploran el suelo en sentido vertical y horizontal, normalmente la
longitud de la raz principal sobrepasa la altura del tallo.

Tallo: es de consistencia semileosa y maciza en su interior, siendo cilndrico y con


dimetro variable entre 2 y 6 cm y a una altura hasta el captulo entre 40 cm y 2 m. La
superficie exterior del tallo es rugosa, asurcada y vellosa, excepto en su base (Alba y
Llanos, 1990).

Hojas: son alternas, grandes, trinervadas, largamente pecioladas acuminadas, dentadas y de


spera vellosidad tanto en el haz como el envs. El nmero varia entre 12 y 49, de acuerdo
con las condiciones de cultivo y la variedad, el color tambin es variable y va de verde
oscuro a verde amarillento.

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Inflorescencia: el receptculo floral o captulo puede tener forma plana, cncava o convexa,
el captulo es solitario y rotatorio y esta rodeado por brcteas involcrales. Las flores del
exterior del captulo (ptalos amarillos) son estriles, estn dispuestos radialmente y su
funcin es atraer a los insectos polinizadores. Las flores del interior estn formadas por un
ovario inferior, dos spalos, una corola en forma de tubo compuesta por cinco ptalos y
cinco antenas unidas a la base del tubo de la corola.

Fruto: es un aquenio de tamao comprendido entre 3 y 20 mm de largo y 2 y 13 mm de


ancho. El pericarpio es fibroso y duro, quedando pegado a la semilla, la membrana seminal
crece en el endospermo y forma una pelcula fina que recubre al embrin y asegura la
adherencia entre el pericarpio y la semilla (Alba y Llanos, 1990).

2.7.3. Requerimientos edafoclimticos

Suelo: es un cultivo poco exigente en el tipo de suelo, aunque prefiere los arcillo-arenosos y
ricos en materia orgnica, es muy poco tolerante a la salinidad y contenido de aceite
disminuye cuando sta aumenta en el suelo. En suelos neutros o alcalinos la produccin de
girasol no se ve afectada, adems es una de las plantas con mayor capacidad para utilizar
residuos qumicos (Alba y Llanos, 1990).
Temperatura: es un factor muy importante en el desarrollo del girasol, adaptndose muy
bien a un amplio margen de temperatura que van desde 25-35C a 13-17 C.

Fotoperiodo y luz: las diferencias en cuanto a la aparicin de hojas, fecha de floracin y a la


duracin de las fases de crecimiento y desarrollo son atribuidas al fotoperiodo. Durante la
66

fase reproductiva el fotoperiodo deja de tener influencia y comienza a tener importancia la


intensidad y la calidad de la luz, por tanto un sombreo en plantas jvenes produce un
alargamiento del tallo y reduce la superficie foliar (Alba y Llanos, 1990)..

2.7.4. Particularidades del cultivo

La poca de la siembra es variable y depende de las caractersticas climatolgicas de cada


regin. El conocimiento de la forma que tiene la planta de crecer y desarrollarse sus
rganos, desde la germinacin de la semilla hasta la maduracin de sus semillas, permite
una correcta utilizacin de los medios de produccin, y una interpretacin acertada de la
forma de reaccionar de la planta frente a la influencia del medio ambiente y a las prcticas
agrcolas utilizadas para su produccin (Carter, 1987).

La semillas de girasol, presentan un hbito de crecimiento (Fig. 6) como se explica a


continuacin: la germinacin de la semilla es aproximadamente de 10 a 20 das, entre los
15 y 25 das se produce el enraizamiento de la planta, el perodo de crecimiento ms activo
de la planta es alrededor de 40 y 50 das, aparecen de cinco pares de hojas al principio de
floracin en el cual se presenta la mxima absorcin de elementos minerales del suelo. La
floracin puede durar de 10 a 12, das comienza con la apertura de las primeras flores
liguladas y finalmente la maduracin puede durar entre 35 y 50 das. Esta fase comienza
con el final de la floracin y llega hasta el estado de madurez fisiolgica (Alba y Llanos,
1990) (Fig. 6).

67

Fig. 6. Fenologa de la planta del girasol, tomada de (Alba y Llanos, 1990).

2.7.5. Caractersticas del girasol como planta fitorremediadora

El girasol fue escogido para este estudio por las siguiente razones:

Facilidad de manejo en su cultivo

Se adapta fcilmente a un amplio intervalo en la variacin de temperatura.

La poca de la siembra es variable y depende de las caractersticas


climatolgicas de cada regin.

Es una planta hiperacumuladora de una variedad de metales pesados como:


Cr (III), Cr (IV), (Davies et al., 2001), de As, Bi, Cd, Cu, Mn, Pb, Sb, TI y

68

Zn (Christie et al.,2004; Cabrera et al., 1999), tambin metales radioactivos


como uranio (De Oliveira 1999; De Oliveira et al., 2003)

Es una planta micotrfica (Davies et al., 2001; Cabrera et al., 1999;


Chandrashekara et al., 1995)

Puede remediar tanto suelos como aguas contaminadas.

Como se mencion anteriormente una de las limitaciones de la utilizacin de plantas para


recuperar suelos contaminados es su lento crecimiento y su poca biomasa radicular (Raskin,
1995; Chaudhry et al., 1998) pero de acuerdo con Xiong, (1997) y Davies (2001) las
Asteraceae toleran altos niveles de algunos metales en comparacin con otros grupos
taxonmicos y se les ha propuesto como especies fitoremediadoras.

El girasol es reportado con una alta biomasa radicular y capacidad de acumular metales, no
obstante una baja tolerancia al cromo comparado con otras plantas acumuladoras
(Shahanden y Hossner, 2000). Es una planta micotrfica ya que el gnero Glomus puede
colonizar al girasol (Chandrashekara et al., 1995; Davies et al., 2001). Los HMA ayudan a
desarrollar el volumen y extensin radicular aumentando el rea de descontaminacin de
suelos con metales pesados. Sin embargo el estudio de la interaccin de los HMA y el
girasol con los suelos contaminados puede proveer informacin del papel ecolgico de los
HMA en los suelos contaminados por metales pesados especialmente cinc y cobre y su
participacin en la tolerancia de estos metales.

69

3. MATERIALES Y MTODOS

El trabajo experimental se realiz en las instalaciones de la Facultad de Ciencias Biolgicas


y Agropecuarias de la Universidad de Colima, Campus Tecomn, localizada en el Km. 40
de la autopista Colima-Manzanillo a 1854 LN y 10352 LW.

3.1. Muestreo de suelos

3.1.1. Localizacin y descripcin de los sitios de muestreo

En este trabajo se estudiaron cuatro suelos seleccionados completamente al azar, a lo largo


de un gradiente de 74 Km de longitud, entre la laguna de oxidacin situada en el municipio
de Minatitln, Colima con una altura de 740 msnm y la zona agrcola del municipio de
Cihuatln, Jalisco, que cuenta con una altura de 13 msnm. En la laguna de oxidacin o de
jales son depositados los desechos que resultan de la extraccin de hierro del consorcio
minero Pea Colorada Benito Jurez, ubicado en el municipio de Minatitln, Colima a
una altura de 850 msnm.

Contiguo a la presa de jales transita el caudal del Ro Marabasco tambin llamado


Cihuatln, Chacala o Paticajo, el cual recibe filtraciones de la laguna de oxidacin por lo
que sus aguas contienen metales como: plomo, hierro, cinc, cobre, cromo y cadmio (Meyer
et al., 1999), su cauce recorre la pendiente hasta llegar a la zona agrcola del municipio de
Cihuatln del estado de Jalisco. En el transcurso del ro, los habitantes aledaos utilizan sus
aguas para riego y consumo para ganado bovino y aves. La ubicacin de los sitios
seleccionados se muestran en la (Fig. 7).
70

2
4

Fig. 7 Mapa de la rivera del Ro Marabasco, sealando los sitios muestreados.


1.- Laguna de Oxidacin, 2.- vila Camacho, 3.- El Charco y 4.- El
Centinela.

El sitio 1 se localizasita en la laguna de oxidacin del Consorcio Minero Pea Colorada


Benito Jurez, en la cual se vierten los residuos del proceso de extraccin de hierro. En
esta rea, el tule y el diente de len son las plantas representativas. El sitio 2, se encuentra
ubicado en la parte media entre la laguna de oxidacin y el valle de Cihuatln, y
corresponde con el lugar conocido como Manuel vila Camacho perteneciente al
municipio de Minatitln. En esta zona crecen plantas silvestres y las ms representativas
son conocidas comnmente como diente de len y tule.
El sitio 3 se encuentra en la regin llamada El Charco, de donde se tomaron muestras de
una rea con cultivo de pltanos y chile jalapeo y una zona no cultivada con presencia de
plantas silvestres. El sitio 4 llamado El Centinela de Arriba del municipio de Cihuatln,
71

Jalisco en donde se colect un suelo cultivado con pltano y limn; as como un suelo no
cultivado con presencia de plantas silvestres (Fig. 8; Cuadro 4).
.

C)
B

D)

E)
F)

Figura 8. Panormica de los diferentes sitios muestreados: A) y B) Laguna de Oxidacin,


C) vila Camacho, D) El Centinela no cultivado, E) El Centinela Cultivado y F) El
Charco no Cultivado.

72

Cuadro 4. Sitios de colecta del suelo para el estudio.


Sitios

Laguna

Municipio

Estatus

Nmero de
muestras

de Minatitln

No cultivada

Manuel vila

Minatitln

No cultivada

El Charco

Cihuatln

Pltano

El Charco

Cihuatln

No cultivada

El Centinela

Cihuatln

Pltano

El Centinela

Cihuatln

No cultivada

oxidacin

3.1.2 Muestro de suelos

El muestreo de suelo se llev a cabo bajo una metodologa completamente al azar, en un


transecto de 74 Km de longitud, empleando el mtodo de muestreo en zig-zag, sugerido por
Sieverding (1991), colectando el suelo rizsferico de las plantas dominantes a una
profundidad de 0 a 25 cm. De cada sitio se tomaron cinco submuestras las cuales se
mezclaron para formar una muestra compuesta de aproximadamente un 1 kg. Las muestras
obtenidas se secaron al ambiente bajo sombra, posteriormente se tamizaron en malla de 4
mm de apertura y se guardaron a 5 C en bolsas de polietileno debidamente selladas y
etiquetadas, hasta su anlisis fsico y qumico; as como la determinacin de la

73

concentracin de metales pesados y determinar el porcentaje de colonizacin micorrzica en


las races de las plantas dominantes, en los sitios de colecta.

3.1.3. Muestreo de races

Las races se tomaron entre 0-25 cm de profundidad fueron colectadas de las plantas
dominantes de cada uno de los sitios muestreados. Cinco muestras de races fueron tomadas
de puntos al azar. Las races fueron cuidadosamente extradas del suelo y colocadas en
bolsas de plstico debidamente etiquetadas, posteriormente fueron llevadas al laboratorio,
una vez ah se colocaron en frascos con formol-alcohol-cido actico (FAA) hasta su
procesamiento.

3.2. Anlisis fsicos y qumicos de suelos

Las caractersticas fsicas y qumicas que se determinaron fueron: Textura, conductividad


elctrica, potencial de hidrgeno (pH) y el contenido de materia orgnica. Los cuales se
realizaron de la siguiente manera.

3.2.1. Textura del suelo

La textura se determin por el mtodo del hidrmetro de Bouyoucos (Day, 1963). Se tom
una muestra de 100 g de suelo, se le agregaron 5 ml de solucin dispersante
(hexametafosfato de sodio). Despus se pas esta suspensin a una batidora y luego se pas

74

a una probeta de 250 ml. Inmediatamente se realiz la primera lectura de densidad, la cual
corresponde a la densidad de la suspensin de arcilla ms limo. Se dej en reposo y se
realiz la segunda lectura que corresponde a la arcilla. Se hicieron los clculos
correspondientes y se determin la textura utilizando el tringulo de las texturas.

3.2.2. pH del suelo

El pH del suelo se determin por el mtodo propuesto por Rayment y Higginson (1992), se
pesaron 10 g de suelo el cual fue mezclado con 20 ml de agua destilada, la suspensin
suelo-agua se agit por una hora a 25 C, se dej reposar por 15 min, la medicin fue
tomada empleando un electrodo de vidrio (McLean, 1982).

3.2.3. Conductividad elctrica del suelo

La conductividad elctrica del suelo fue determinada para medir la salinidad del suelo. Se
tom una relacin suelo agua (1:1) utilizando 100 g de suelo al cual se agregaron 100 ml
de agua destilada, la suspensin suelo-agua se agit por una hora a 25 C, se dej reposar
por 15 min. La lectura fue tomada con la ayuda de un conductmetro calibrado.

3.2.4. Materia orgnica

El contenido de materia orgnica fue determinado por el mtodo de oxidacin del carbono
de la materia orgnica por la combinacin del dicromato de potasio y el cido sulfrico

75

(Walkley-Black, 1976). Se tomaron 10 g de suelo muestreado, se trata con 5 ml de


dicromato de potasio 1N y con el doble de cido sulfrico concentrado. Despus de media
hora de reposo se aaden 100 ml de agua, 5 ml de cido fosfrico y 6 gotas de fenilamina,
para titular con solucin sulfato ferroso.

3.3. Determinacin de la concentracin de metales pesados

Se examin el contenido de los siguientes elementos: plomo, cadmio, arsnico, cinc,


cromo, cobre y hierro. Se emple el mtodo de extraccin con reflujo con agua regia (HCL:
HNO3 2:1 v/v)

(Berrow y Stein, 1983), y posteriormente fueron determinados por

espectrofotometra por absorcin atmica (Schlichting et al., 1995). Estos anlisis se


realizaron en el Laboratorio de Alta Tecnologa de Xalapa (LATEX).

3.4. Hongos micorrzicos arbusculares y colonizacin en plantas silvstres

3.4.1.Cuantificacin de esporas

Las esporas fueron extradas en 100 g de suelo, empleando el mtodo de tamizado en


hmedo y decantacin de acuerdo con Gerdemann y Nicolson, (1963), continuando con la
centrifugacin en una solucin de sacarosa al 50% (Walker et al., 1992). Las esporas as
obtenidas se observaron en el microscopio estereoscpico para realizar el conteo,
contndose solamente esporas turgentes y brillantes.

76

Para reportar el nmero de esporas en suelo seco se determin el contenido de humedad de


cada suelo. El peso seco se obtuvo despus de pesar el suelo hmedo y secarlo a 60 C,
hasta peso constante volver a pesar hasta obtener el peso seco por la diferencia de pesos y
finalmente reportar el nmero de esporas en 100 g de suelo seco (Anderson e Ingram,
1993).

3.4.2. Determinacin de la colonizacin micorrzica

Las races fueron lavadas con agua para eliminar el FAA y cortadas en fragmentos de
aproximadamente 1 cm de longitud. Una vez lavadas se procesaron de acuerdo con la
tcnica de Phillips y Hayman (1970) modificada por Kormanik et al., (1978). Las races se
colocaron en una solucin de hidrxido de potasio (KOH) al 10% hasta cubrirlas y se
metieron en autoclave, posteriormente se enjuagaron por los menos tres veces con agua
destilada para retirar el KOH y se enjuag 3 veces con agua corriente. A continuacin las
races se sumergieron en cido clorhdrico (HCl) al 1% y finalmente se agreg la solucin
colorante fucsina cida al 0.05 % y se llevaron a una temperatura de 121 C por 10 min.
Para determinar la colonizacin micorrzica arbuscular de las races, se utiliz el mtodo
sistemtico del portaobjeto (McGonigle et al. 1990). Esta evaluacin se realiz con un
microscopio compuesto Olympus modelo 1x70-MO81. Los valores se expresaron en
porcentaje de colonizacin micorrzica.

Los segmentos de races, fueron seleccionados al azar a partir de las muestras teidas y se
colocaron en lminas portaobjetos, con la ayuda de un microscopio compuesto Olympus
modelo 1x70-MO81 con un aumento de 40 X, se pudo observar la presencia de estructuras
77

fngicas. Se hicieron tres repeticiones para cada sitio. La longitud de la colonizacin


cortical fue estimada en milmetros (valor promedio) y expresada como el porcentaje de
races colonizadas.

3.5. Seleccin del suelo de estudio

Para la seleccin del suelo a utilizar en el experimento final, se eligio el que present el
mayor contenido de metales pesados y adems en el que se constat la mayor presencia de
estructuras morfolgicas de hongos micorrzicos arbusculares en las plantas silvestres.

3.6.

Propagacin de HMA nativos de suelos contaminados

3.6.1. Cultivo trampa

Para la identificacin de los HMA se propagaron utilizando como cultivo trampa una
mezcla de sorgo (Sorghum vulgare. L) y pasto de guinea (Panicum maximum). Para este
ensayo se us el suelo con mayor concentracin de metales pesados y con presencia de
hongos micorrzicos arbusculares. El suelo se mezcl con arena en una proporcin 2:1. Se
coloc en macetas de 350 g y se sembraron con una mezcla de semillas de pasto baha
(Paspalum notatum) y alfalfa (Medicagato sativa). Las macetas se colocaron en bolsas sun
bags de acuerdo con la tcnica de Walker (2001) y se mantuvieron en condiciones
semicontroladas de invernadero con una temperatura promedio de 22 C en el da y de 15
C por la noche, con una humedad relativa (H.R.) del 60-80% y con un intervalo de
78

oscuridad y luz de 10/12. Despus de 1618 semanas de crecimiento se suspendi el riego


para estimular la produccin de esporas. Una vez secas las plantas se cort la parte area y
el suelo se guard en bolsas de plstico en un lugar seco y fresco hasta su procesamiento
(Fig. 9).

Fig. 9. Cultivo trampa utilizado en la propagacin de HMA nativos del suelo con
mayor concentracin de Cu y Zn.

3.6.2. Diversidad morfolgica de HMA nativos presentes en el suelo de estudio

Para la identificacin de las esporas se extrajeron del suelo siguiendo la tcnica de tamizado
hmedo y decantacin (Gerdemann y Nicolson, 1963) seguida de centrifugacin en
gradiente de sacarosa (Walker, 1997). Las esporas se colocaron en una caja de Petri y
fueron observadas bajo el microscopio estereoscpio Olympus SZ40. Se separaron de
acuerdo con sus caractersticas morfolgicas principalmente color, tamao, forma,
presencia de hifas de sostn como sugieren Walker (1983) y Schenck et al., (1990).
79

Posteriormente se seleccionaron los morfotipos ms representativos, se realizaron


preparaciones permanentes colocando esporas intactas usando alcohol polivnilico lactoglicerol (Morton et al., 1993). Se observaron en el microscopio para su identificacin. En la
identificacin se utilizarondo los criterios taxonmicos de Schenck y Perez (1990).

3.7.

Contribucin de Glomus intraradices en la absorcin de cinc y cobre

El diseo experimental consisti en una distribucin completamente al azar con dos


tratamientos: inoculacin con hongos micorrzicos y sin inoculacin, con diez repeticiones.
Este estudio se efecto bajo condiciones de invernadero, utilizando como planta
hiperacumuladora el girasol (Helianthus annuus L.). El hongo usado en este experimento
fue Glomus intraradices procedente de un suelo no contaminado de Campeche que fue
propagado como se describe en la seccin 3.6.1.

3.7.1. Desinfeccin de la semilla

Las semillas de girasol (Helianthus annuus L.) se desinfectaron en su superficie, por


inmersin en alcohol al 70% por un minuto, a continuacin se sumergieron en hipoclorito
de sodio al 10% por quince minutos, posteriormente la semilla se enjuag ocho veces con
agua destilada estril (Talukdar y Germida, 1994; Duncan y Howard, 2000; Zhu et al.,
2000).

80

3.7.2. Germinacin de la semilla de girasol

Una vez esterilizadas las semillas, se sembraron utilizando como sustrato polvillo de coco
se coloc en charolas de germinacin de 48.5 x 35 x 13.5 cm de polietileno de alta densidad
y con perforaciones de 3/8 de pulgadas en la base para drenaje y aireacin. Las semillas se
mantuvieron hmedas utilizando agua destilada estril y permanecieron en condiciones
semicontroladas de invernadero hasta que las plntulas presentaron el primer par de hojas
verdaderas, aproximadamente a los 15 das despus de la siembra, posteriormente se
procedi al transplante.

3.7. 3. Transplante de girasol

Se seleccionaron plntulas con caractersticas semejantes en tamao, color, dimetro del


tallo y nmero de hojas, se transplantaron a macetas de plstico 1.5 kg de capacidad
previamente desinfectadas. El sustrato de crecimiento que se utiliz en las macetas fue el
suelo seleccionado. Dicho suelo fue esterilizado mediante vapor con anterioridad a la
siembra. En cada maceta se trasplantaron tres plntulas lo que represent una unidad
experimental, stas fueron colocadas en condiciones semicontroladas de invernadero (Fig.
10 y 11).

81

b)
a)

c)

Fig. 10. Diversas etapas de la planta de girasol: creciendo en maceta con suelos
a)germinacin b) nascencia c) despus del primer muestreo a los 40 das de
crecimiento.

82

Fig.11. Planta de girasol: creciendo en maceta con suelos despus del segundo muestreo a
los 60 das de crecimiento.
3.7.4. Inoculacin micorrzica

Al momento del transplante, las plntulas se inocularon con 1.5 g de inculo, el cual
consista de una mezcla suelo/ raz de Glomus intraradices. El inculo fue puesto en una
capa 5 cm debajo de la superficie del suelo. Las macetas se mantuvieron en condiciones de
invernadero por ocho semanas, las plantas fueron regadas con agua corriente segn se
necesit y no se aplico fertilizante, ni solucin nutritiva. La superficie de las macetas fue
cubierta con discos de papel aluminio para reducir la transpiracin del suelo y eliminar la
contaminacin.

83

3.7.5 Duracin del experimento

De acuerdo con Davies, (2001) el lapso de tiempo para completar el estudio con plantas de
girasol es de aproximadamente 50 das, pero la duracin del presente experimento fue de 70
das con el fin de registrar el comportamiento de la absorcin del cinc y cobre por la planta
posteriormente a su fase de mayor absorcin de nutrimentos. Las fechas programadas
fueron las siguientes:

A los 25 das despus del trasplante, contando con 40 das. de crecimiento, en este
periodo la planta presenta una mayor absorcin de nutrimentos.

A los 55 das despus de la siembra.

A los 70 das despus de la siembra.

3.7.6 Preparacin y anlisis de muestras

Al trmino del experimento, las plantas fueron cuidadosamente extradas de las macetas,
separndose la parte area y radicular, se lavaron con agua corriente para eliminar los
residuos de suelo, posteriormente se procesaron cada una de las partes de las plantas para
determinar la concentracin de los metales pesados.

84

3.8.

Variables evaluadas

Las variables evaluadas fueron: concentracin de metales pesados en la parte area y en las
races de las plantas inoculadas y no inoculadas, concentracin de metales pesados en el
suelo con la planta inoculada y no inoculada, colonizacin micorrzica y la poblacin de
esporas, al finalizar el experimento.

3.9.

Anlisis estadstico

Se efectu un anlisis de varianza (ANOVA) para una distribucin de los tratamientos


completamente al azar con dos tratamientos, mediante el programa estadstico

SAS

(Statistical Analysis System) (SAS, 1990) y se utiliz la prueba de Tukey al 0.05 de


probabilidad para la separacin de los promedios y determinacin del mejor tratamiento.

85

4.

RESULTADOS

4.1. Anlisis fsicos y qumicos de los suelos

Los resultados obtenidos de los anlisis fsicos y qumicos de los suelos colectados y
estudiados se presentan en el Cuadro 5. Con respecto al pH, los valores se indican que los
suelos varan dentro de un intervalo de 6.4 a 7.1. El de pH 6.4 es considerado como
ligeramente cido y los que presentan un pH de 7.0 y 7.1 son neutros, por lo que de acuerdo
con Daub y Seese (1996) estos suelos se clasifican como ligeramente cidos a neutros.
Cuadro 5. Caractersticas qumicas y fsicas de los diferentes suelos muestreados. Los
datos son promedio de 3 repeticiones.
Sitio
pH (H2 O)

Laguna de oxidacin.

6.4

Materia
orgnica

CE
(mScm-1)

0.8

0.70

Textura

Areno-limo-arcilloso
(15 % arcilla 13% limo 72 %arena)

vila Camacho

7.0

1.6

0.1

Arena
(5 % arcilla 5 % limo 90% arena)

El Charco con cultivo

7.1

2.8

0.8

Franco Arenoso
(14% arcilla 12 % limo 74%arena)

El Charco no cultivado

6.9

1.9

0.1

Arena
(5 % arcilla 5 % limo 90% arena)

El Centinela con cultivo

7.1

2.9

0.5

Areno limo arcilloso


(15 % arcilla 13 % lino 72% arena)

El Centinela no cultivado

6.9

2.1

0.2

Franco arenoso
(14% arcilla 12% limo 74% arena)

Nota: Anlisis realizados en el laboratorio de la Facultad de Ciencia Biolgicas y Agropecuarias de la


Universidad de Colima, utilizando mtodos estandarizados de suelo y las especificaciones del .PROYNOM-021-RECNAT-2000 (SEMARNAT,2000). Estos anlisis fueron ratificados por el Laboratorio de
Alta Tecnologa de Xalapa, Ver. (LATEX).

86

El valor de pH, dentro del cual se encuentra el suelo de la Laguna de Oxidacin (6.4) es
considerado como ligeramente cido. Mientras que en los otros suelos muestreados como
El Charco y El Centinela no cultivados, El Charco y El Centinela cultivados a s como
tambin el suelo de vila Camacho presentan un pH neutro.

Con respecto a los contenidos de materia orgnica, se estableci que en la Laguna de


Oxidacin, el suelo es muy pobre en materia orgnica (0.8); adems con un pH ligeramente
cido; ambos factores intervienen en la solubilidad de los metales pesados. En los sitios
muestreados de vila Camacho, El Charco y El Centinela no cultivado son moderadamente
altos en materia orgnica, pero son ricos en esa propiedad qumica los suelos de El Charco
y El Centinela cultivados, considerando que estos suelos son neutros se limite la movilidad
y disponibilidad de metales pesados (Termminghof et al., 1997).

La textura de suelo es otro factor importante que influye en la movilidad y disponibilidad


de los metales pesados. De acuerdo con los resultados de los anlisis realizados a los
suelos colectados, se observa que la textura que presentan los suelos muestreados de vila
Camacho y El Charco sin cultivar son arenosos, mientras en El Charco cultivado y El
Centinela con cultivo son franco arenosos y los suelos de la Laguna de Oxidacin y El
Centinela cultivado son areno-limo-arcilloso.

Recordando que la conductividad elctrica de un suelo nos indica la salinidad del mismo y
de acuerdo con los resultados obtenidos de los suelos muestreados, nos sealan que estos
suelos no son salinos.

87

4.2. Concentracin de metales pesados en los suelos muestreados.


En el Cuadro 6 se muestran los resultados de la concentracin de metales pesados de los
sitios muestreados, que se obtuvieron en el laboratorio y adems se exponen como
referencia los lmites mximos permitidos en los pases Europeos, Estados Unidos de
Amrica y Canad (Kloke, 1980).

Cuadro 6. Concentracin de metales pesados (ppm) en cada uno de los suelos colectados.
Sitios
Laguna de
Muestreados oxidacin

vila
ElCharco
Camacho (cultivado)

El Charco
(sin cultivo)

ElCentinela El Centinela
( cultivado)
(sin cultivo)

Plomo
100 L.M.P

22.9

12.90

15.21

14.78

17.23

20.01

Cromo
100L.M..P

4.47

49.06

42.00

39.87

27.27

25.10

Cadmio
3.0L.M..P

2.0

1.18

1.98

2.01

1.99

2.01

Cinc
300L.M..P

270.60

72.86

64.59

69.06

69.93

89.71

Cobre
100L.M..P

592.92

42.36

54.60

88.46

110.01

44.10

Fuente: Anlisis realizados en el laboratorio de Alta Tecnologa de Xalapa (LATEX), utilizando mtodos
estandarizados de suelo y las especificaciones del PROY-NOM-021-RECNAT-2000.
(SEMARNAT,2000). Lmite mximo permitido (LMP).

En el suelo de la laguna de oxidacin se registraron las concentraciones ms altas de Cu y


de Zn, sin dejar de ser importante la presencia de Pb, Cd y C. Con respecto a los otros
suelos muestreados, se observa tambin una considerable concentracin de metales
pesados, siendo el sitio El Charco con cultivo mostrando las concentraciones mas bajas
88

exceptuando el Pb y en El Centinela no cultivado se denota la mayor presencia de Cu y Zn


por lo que este sitio fue seleccionado para el estudio de investigacin.

4.3 Cuantificacin de esporas y determinacin de la colonizacin


micorrzica de los sitios muestreados

Los resultados obtenidos de la colonizacin micorrzica y el nmero de esporas en los


sitios muestreados se exponen en el Cuadro 7.

Cuadro 7. Colonizacin micorrzica expontna en los suelos de los sitios muestreados. Los
datos son promedios de tres repeticiones.
Sitios

Colonizacin
micorrzica (%)

Nmero de esporas por


100 g suelo seco

1 0.45

00

vila Camacho

59.0 9.18

505 3.62

El Charco (con cultivo)

43.3 7.41

418 2.23

El Charco (no cultivado)

48.9 2.35

432 1.48

ElCentinela (con cultivo)

43.6 5.67

402 1.35

ElCentinela (no cultivado)

32.8 6.45

344 1.14

Laguna de oxidacin

Es importante hacer notar que en suelo de la laguna de oxidacin, present una mayor
concentracin de metales pesados, no se registr la presencia de esporas y una colonizacin
radicular pobre, que no es relevante. Con respecto a los dems suelos estudiados el de vila
Camacho, como observa en el Cuadro 7 es el que muestra un mayor nmero de esporas
(505esporas/ 100g de suelo seco), as como tambin de vesculas, estableciendose que en

89

los dems sitios estudiados con el aumento de la concentracin de metales pesados en sus
suelos se disminuye el porcentaje de colonizacin y el nmero de esporas de HMA.

Una muestra de las esporas extradas de los suelos colectados se presentan en la Fig. 12.

Figura 12. Espora globosa que muestra la hifa sustentora bulbosa, extrada del suelo de
vila Camacho.

En los sitios restantes como El Charco y El Centinela con cultivo y sin cultivar, tambin se
observ la presencia de esporas (Fig. 13 y 14).

90

Figura 13. Esporas extradas del sitio El Centinela no cultivado en donde se aprecian
hifas de sostn (Fotografa tomada a 10x ).

Figura 14. Espora aprecindose la hifa en forma de embudo extrada del sitio El Centinela
no cultivado (Fotografa tomada a 20x.).

Las tinciones realizadas en las races de las plantas de los sitios muestreados, se observ la
presencia de estructuras como hifas (Fig. 15), micelio (Fig. 16) y arbsculos (Fig. 17).

91

a)
(b

Figura 15. Estructuras de HMA en la races de plantas ms representativas del sitio El


Centinela no cultivado: a) hifas y b) vescula.

a)

b)

Figura 16. Ilustracin que muestra a) micelio externo y b) esporas en el suelo colectado en
vila Camacho.

92

Figura 17. Detalles de los arbsculos del sitio El Charco (no cultivado).

4.4. Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo de estudio

Las esporas de los HMA nativos extrados del suelo con mayor contaminacin de Zn y Cu
fueron propagadas de donde se distinguieron cuatro diferentes morfotipos

de HMA,

identificndose solamente el ms ampliamente representado y de acuerdo con las


caractersticas morfolgicas denotadas en el manual de Schenk y Prez (1992) realizada por
la Dra. Luca Varela Fregoso, las esporas identificadas corresponden a Glomus mosseae.

De acuerdo con el INVAM las caractersticas morfolgicas que presenta Glomus mosseae
se describen a continuacin. Algunos cultivos en las macetas producen esporas en
agregados de 2-8 rodeado por un estrecho perdio, el color del esporocarpo vara de cafamarillas a cafs. El perdio alrededor de estas esporas es de unos 10-38 m de espesor,
con robustas hifas (con paredes de 8-18 m de ancho y unos 1.6-3.5 m de espesor)
93

mezclado con muchas finas ramificaciones de hifa (2-5 m de ancho, paredes de < 1 m de
espesor). El peridio no altera la estructura de la pared de la espora, y parece ser un carcter
inestable (generalmente se pierde despus de muchas sucesiones o cultivos sucesivos).

En las esporas completas el color varia de naranja a caf oscuro, siendo en su mayora
amarillos-caf con forma globosa a subglobosa algo irregulares, la distribucin de tamao
es de 100-260 m con un promedio de 195 m. Con respecto a la pared de la espora: estas
poseen tres capas que la forman consecutivamente, pero con diferencias (secuencia baja, de
izquierda a derecha). Las dos superficiales seguido mudan la piel, variando los grados de
madurez, o indican las esporas mas viejas. La forma de la hifa varia de acampanada a una
forma de embudo de ancho 16-32 m como promedio 24 m.

En el suelo de estudio se encontraron esporas en su mayora de un color amarillo claro a


caf oscuro de forma globosa a subglobosa, el tamao fue de 100 a 260 m de dimetro en
promedio 150 m (Fig. 15) y con paredes de 7.5 a 12.5 m (Figs. 18 y 19) con hifas
sustentoras que presentan un septo recurveado con forma de embudo que es una
caracterstica particular de Glomus mosseae (Figs. 20 y 21).

94

a)

b)

Figura 18. a) Espora globosa b) Espora subglobosa con hifa de sostn. Esporas montadas
en PVLG (Fotografas tomadas a 20x).

Figura 19. Espora rota mostrando doble pared, montada en PVLG (Fotografa tomada a
40x).

95

Figura 20. Espora con hifa en forma de embudo, fijadas en alcohol polivinilico lactoglicerol (PVLG), (Fotografa tomada 20x)

Figura 21. Espora montada en PVLG aprecindose una hifa en forma de embudo, con
pared gruesa (Fotografa tomada a 40x).

96

4.5. Contribucin de Glomus intraradices en la absorcin y translocacin


del cinc y cobre por el girasol

El suelo muestreado de El Centinela no cultivado fue elegido como sitio de estudio porque
fue el que present una mayor concentracin de cinc (89.71ppm) y cobre (110.01 ppm)
adems se observo la presencia de HMA nativos, pero debido a que su propagacin no fue
suficiente para ser empleado como inculo; se tomo la decisin de usar a Glomus
intraradices, para cuantificar su contribucin en la absorcin y translocacin del cinc y
cobre por las plantas de girasol inoculadas.

Se calendarizaron tres muestreos de acuerdo con las etapas de crecimiento de esta planta
con el fin de cuantificar la concentracin de estos metales en la raz y la parte area de la
planta; estos muestreos se realizaron en las siguientes fechas.

A los 40, a los 55 y 70 das despus de la siembra se analiz la absorcin de cobre y del
cinc en la parte area y radicular en las plantas de girasol. Los resultados de la absorcin y
la translocacin del cobre y cinc por las plantas de girasol inoculadas y no inoculadas se
muestran en el Cuadro 8.

97

Cuadro 8. Contenido del cobre y cinc en plantas de girasol M y NM en ppm a los 40, 55 y
70 das de crecimiento, como los medios de diez replicas.
Fechas

Raz

Parte area

Planta Completa

ZnM
CuM

66.6 0.84b
75.0 6.83a

38.6 2.52b
46.0 6.33a

105 1.71b
121 6.58a

ZnNM
Cu NM

43.0 2.82b
57.0 7.67a

25.5 0.78b
37.0 5.90a

68.5 1.80b
94.0 6.78a

ZnM
CuM

16.6 0.57b
26.6 0.73a

17.1 0.67a
11.6 0.94b

33.7 0.62a
36.2 0.82a

ZnNM
Cu NM

16.8 0.57b
22.4 1.27a

16.1 0.68a
11.1 0.91b

32.9 0.68a
33.5 1.09a

ZnM
CuM

15.9 0.70b
26.1 1.17a

16.3 0.91a
11.0 1.22b

32.2 0.80b
37.1 1.95a

ZnNM
Cu NM

16.3 1.06b
21.8 2.48a

15.8 1.38a
10.8 1.28b

32.1 1.22a
32.6 1.88a

40 das

55 das

70 das

Letras distintas presentan diferencia significativa (P<0.05; prueba-t) entre tratamientos (Zn y Cu Micorrizado a los 40
das; Zn y Cu no Micorrizado a los 40 das; Zn y Cu Micorrizado a los 55 das; Zn y Cu no Micorrizado a los 55
das; Zn y Cu Micorrizado a los 70 das; Zn y Cu no Micorrizado a los 70 das).

De los resultados que se exponen en el Cuadro 8, se observa a los 40 das (primer muestreo)
el anlisis estadstico mostr diferencia significativa para la absorcin y la translocacin del
cobre entre las plantas de girasol inoculadas (M) y no inoculadas (NM).

En las races de las plantas inoculadas (M) se muestra que el Cu fue absorbido en mayor
proporcin con respecto al Zn. Con referencia a las plantas no inoculadas (NM) se observa
que la absorcin de los metales fue en menor cantidad. Si se compara la absorcin de los

98

metales en las plantas completas con inculo y sin inoculacin se manifiesta las diferencias
entre los tratamientos.
Con respecto a la translocacin, es notorio que tanto el Zn como el Cu permanecieron en
mayor proporcin en la parte radicular disminuyndose as la translocacin hacia la parte
area de las plantas (M) y en menor cantidad de las plantas (NM).

Con referencia a los resultados que se muestran a los 55 y 70 das, segundo y tercer
muestreo, respectivamente; en la absorcin de Cu por las plantas de girasol inoculadas (M)
se observa que existen mnimas diferencias entre el segundo y tercer muestreo con 26.6 a
26.1 mg / kg; mostrndose diferencia significativa con el primer muestreo de 75 mg / kg.
En la translocacin tambin existen diferencias mnimas entre el segundo y tercer muestreo
entre las plantas inoculadas y no inoculadas.
Con respecto al Zn, no existi diferencia significativa entre el segundo y tercer muestreo,
entre las planta inoculadas (M) y no inoculadas (NM).

4.6. Colonizacin micorrzica del suelo de estudio al trmino del

experimento

De acuerdo con la concentracin de metales registrada en el suelo de estudio, se considera


como levemente contaminado, por ese hecho la colonizacin micorrzica y el nmero de
esporas en el suelo sustrato al finalizar el experimento fue la siguiente: Como promedio de
tres repeticiones, la colonizacin micorrzica present (61.7 2.56) y el nmero de esporas
por 100 g de suelo seco se registr (472 3.69).

99

5. DISCUSIN
5.1 Anlisis fsicos y qumicos de los suelos colectados

De acuerdo con Alloway (1995) el pH es un factor importante para determinar la


solubilidad de los metales como el Cu y el Zn en el suelo; as como tambin su movilidad
y disponibilidad para las plantas, especficamente a medida que disminuye el pH aumenta
la solubilidad del Cu y Zn, as como tambin otros metales pesados. De esta manera, el
suelo de la Laguna de Oxidacin que present un pH ligeramente cido, y de acuerdo con
Weissenhorn et al., (1994) este suelo presenta una mayor movilidad y disponibilidad de
metales pesados, convirtiendo un suelo con una mayor concentracin de ellos. Con respecto
a los otros suelos muestreados son considerados como neutros y de acuerdo con Alloway,
(1993), Kabata-Pendias (2000) en este tipo de suelos la concentracin movilidad de los
metales pesados es menor, lo que se refleja en la movilidad de estos elementos en sus
suelos que son menores que en la laguna de oxidacin.

Un aspecto relevante de la materia orgnica es su atraccin por los metales pesados cuando
stos se encuentran en disolucin, tiene propiedades secuestradoras ya que contiene una
gran cantidad de cargas negativas y a menudo forma complejos orgnicos solubles, que
pueden polimerizarse sobre los complejos moleculares del humus. De esta forma, la materia
orgnica del suelo a menudo acta como almacn de estos elementos, si bien puede
transferirlos a la vegetacin o a la fase acuosa si se produce su descomposicin en medio
cido u oxidante. Debido a la capacidad de la materia orgnica para formar complejos
estables con los iones metlicos, la relacin entre la materia orgnica del suelo y los
100

metales pesados es muy importante, especialmente en suelos neutros y tendientes a


alcalinos, donde su afinidad es an mayor. De acuerdo con Alloway, (1995) una de las
asociaciones materia orgnica-metal pesado ms estrecha se da con el cobre, lo que redunda
en una fuerte disminucin de su potencial txico.

Un suelo con alto porcentaje de materia orgnica y un pH neutro son factores bsicos que
representan una alta capacidad amortiguadora en la disponibilidad de los metales pesados
por las plantas. De lo anterior se destaca que el sito de la Laguna de Oxidacin, es pobre en
materia orgnica y su pH tiende a cido por lo que la movilidad de los metales pesados es
elevada como se refleja en los resultados, mientras que en los suelos restantes, muestran
contenidos de materia orgnica normal y un pH neutro por lo que de acuerdo con Alloway
(1995) y Kabata-Pendias (2000) son suelos que amortiguan la disponibilidad de los metales
pesados lo que se refleja en los resultados en donde la concentracin de ellos es menor que
en la laguna de oxidacin motivo por el cual muestran una menor toxicidad debido a la
menor solubilidad de los metales.

De acuerdo con Kabata-Pendias (2000), la entrada e infiltracin de los metales pesados en


el suelo est regulado por la textura de los suelos. En los resultados se observa que
solamente dos suelos arenosos carecen de la capacidad para fijar los metales pesados en el
suelo, lo cual pasa rpidamente al subsuelos y contaminan los mantos freticos, en cambio
con respecto a los otros suelos colectados, presentan en su textura una mayor cantidad de
limo y arcilla por lo que tienden a fijar los metales pesados.

101

Los resultados de los anlisis fsicos y qumicos realizados a los suelos colectados en este
estudio, muestran concordancia con los resultados de los experimentos realizados por
lderes en la recuperacin de suelos contaminados con metales tales como: Haselwandter et
al.,(1994); Leyval et al., (1991); Turnau, (1998); Chaney et al., (1998); Jamal et al., (2002);
Leyval et al., (2002) en donde sealan que los suelos en donde son depositados los residuos
de minas presentan un pH cido, con pobre contenido de materia orgnica. En nuestro
estudio el suelo colectado de la laguna de oxidacin, en donde son depositados los residuos
de la mina Benito Jurez muestra un pH (6.4) ligeramente cido y un pobre contenido
(0.8) de materia orgnica.

5.2 Concentracin de metales pesados en los suelos colectados

Se compararon con los mximos permitidos del Cuadro 1, en donde se muestran la


concentracin normal y los lmites permisibles de la concentracin de metales pesados en
suelos de los pases europeos y norteamericanos, debido a que en Mxico, segn la
SEMARNAT, actualmente est en elaboracin la Norma Mexicana que establece los
criterios para determinar los mximos permitidos, se espera que a principios del 2005 est
en consulta pblica (comunicacin va correo electrnico), razn por la cual los resultados
solamente se compararon con normas europeas y norteamericanas.

En el suelo de la laguna de oxidacin, el cadmio, cobre y cinc rebasan el lmite permitido,


mientras que el plomo y el cromo se encuentran dentro del contenido normal. Siendo el
cobre el que rebasa el lmite mximo permitido.

102

El suelo de vila Camacho muestra que los contenidos de cadmio, cinc, cobre, cadmio cinc
rebasan el contenido del lmite permitido, pero ningn metal se sobrepasan de los lmites
mximos permitidos.

Los suelos de los sitios de El Charco y El Centinela cultivados, as como El Charco no


cultivado reportan que el plomo y el cromo se encuentran dentro de los lmites del
contenido permitido, pero el cadmio rebasa ligeramente este lmite, en cambio el cobre y el
cinc se encuentran excesivamente fuera de ese lmite sin salirse de los lmites mximos
permitidos.

Analizando los resultados del sitio El Centinela no cultivado, se observa que solamente el
cromo se encuentra dentro del limite permitido, en cambio el cadmio, cinc, y plomo se
encuentran extralimitados de este intervalo, se reporta solamente que el cobre se encuentra
fuera del lmite mximo permitido. Por lo que este suelo se presenta como el sitio con la
mayor concentracin en cinc, cobre y el cadmio en menor proporcin, debido a que las
propiedades fsica y qumicas del Zn y Cd son muy semejantes y de acuerdo con Chaney et
al., (2000) el Zn suministra proteccin contra la transferencia del Cd

a la cadena

alimenticia, motivo por el cual se tom solamente el Cu y el Zn en la evaluacin con


Glomus intraradices en la absorcin y translocacin por las plantas de girasol.

Recordando la relacin inversa entre el pH, la movilidad y disponibilidad de metales


pesados en el suelo, a mayor pH menor movilidad y disponibilidad y viceversa; en los
suelos de los sitios muestreados que tienen un pH neutro se presenta una menor movilidad
103

y disponibilidad de metales pesados. Por lo anterior se deber considerar ese factor en los
resultados obtenidos de la concentracin de metales pesados de los suelos muestreados, y
debido a que presentan un pH neutro la concentracin de metales pesados no es elevada.

Comparando los resultados de los suelos muestreados que se presentan en el Cuadro 2 en


donde se muestra la clasificacin de contaminacin y polucin de los suelos colectados, se
puede establecer que el suelo de la Laguna de Oxidacin, con respecto al cobre presenta
una severa polucin, una leve polucin en cinc, mientras que el plomo, cadmio y cromo se
muestran levemente contaminados. En los suelos El Centinela y El Charco cultivados, El
Charco no cultivado presentan una leve contaminacin. No as el suelo El Centinela no
cultivado con respecto al cobre y al cinc se muestra como un suelo con una leve polucin.

5.3 Cuantificacin de esporas y determinacin de la colonizacin


micorrzica

Aun bajo condiciones de contaminacin es importante hacer notar que aunque los suelos de
los sitios muestreados contenan concentraciones de metales pesados se constato la
existencia de esporas en el suelo y de vesculas en las races de las plantas endmicas
En el suelo de la laguna de oxidacin, no se encontraron esporas y el porcentaje de
colonizacin en las races no fue significativa, estos resultados muestran una semejanza con
los obtenidos por Leyval et al., (1991); Haselwandter et al., (1994); Weissenhorn et al.,
(1995); Turnau, (1998); Jamal et al., (2002); Leyval et al., (2002); Malcova et al., (2003),
ellos reportaron que en suelos en donde son depositados residuos de minas son afectadas las
poblaciones de HMA reduciendo el nmero de esporas en el suelo y la colonizacin en las

104

plantas endmicas del lugar, lo anterior tambin depende del nivel de contaminacin. Como
se observa en los resultados a medida que aumentan la concentracin de los metales
disminuyen la poblacin de hongos micorrzicos.

Los resultados sugieren que en el establecimientos de programas de fitorremeiacin es


necesario incluir la inoculacin con HMA en las plantas hiperacumuladoras. Es interesante
destacar que en este suelo se observ la presencia de plantas registradas como formadoras
de micorriza como el diente de len y el tule, las cuales se han reportado como plantas
hiperacumuladoras de metales pesados.

El suelo de la laguna de oxidacin es el que presenta, una severa polucin, relacionando


con la nula presencia de poblaciones de HMA y escasa materia orgnica y con un pH
tendiendo a cido que de acuerdo con la literatura aumenta la solubilidad de los metales
pesados. Con respecto a los dems suelos del sitio El Centinela y El Charco cultivados, as
como El Charco no cultivado presentan una colonizacin promedio del 39% y un nmero
de esporas en 100 g de suelos seco son un promedio de aproximadamente de 400 esporas,
de lo cual se puede decir que aunque exista una moderada contaminacin en estos suelos es
interesante decir que los HMA presentan una tolerancia a estos metales.

El suelo de El Centinela no cultivado presenta con respecto a los sitios del Centinela y El
Charco cultivados y El Charco no cultivado un menor nmero de esporas y porcentaje de
colonizacin micorrzica, por lo que es significativo hacer notar que la concentracin de los
metales pesados en este suelo es mayor que en los sitos anteriormente mencionados con
excepcin al suelo de la laguna de oxidacin por lo que, de acuerdo con Leyval et al.,
105

(2002) y Malcova et al., (2003) tambin mostraron resultados similares a los obtenidos en
este estudio con relacin al porcentaje de colonizacin y el nmero de esporas en donde se
coincide que cuando en el suelo aumenta la concentracin de metales pesados entonces se
disminuyen las poblaciones de los HMA nativos de estos suelos.

Recordando que los sitios muestreados se encuentran ubicados a lo largo de una pendiente
y es el sitio de la Laguna de Oxidacin el que se ubica en la cima, siguiendo el sitio vila
Camacho continuando con el sitio llamado El Charco y finalizando el Centinela, de acuerdo
con ellos se detecta que a medida que disminuye la pendiente se aumenta la concentracin
de Zn y Cu y disminuye el porcentaje de colonizacin micorrzica y el nmero de esporas;
tal como se menciona anteriormente el nmero de esporas de los suelos rizsfericos
disminuyen de acuerdo con el aumento de la concentracin de metales pesados de esos
suelos.

Sin embargo, aunque los suelos muestreados, con excepcin del suelo de la Laguna de
Oxidacin, presentan una leve contaminacin, pueden afectar la largo plazo al crecimiento
de las plantas, el crecimiento de las poblaciones microbianas, y el paso los metales hacia la
cadena alimenticia.

5.4. Diversidad morfolgica de HMA en el suelo de estudio

En los mirfotipos de esporas de los HMA propagados en cultivo trampa y de acuerdo con
las observaciones de las preparaciones en PVLG en el microscopio estereoscopio no se

106

encontr una diversidad de especies, pero la ms representativas pertenece al orden


taxonmico de los Glomales, de acuerdo con sus caractersticas morfologicas la
identificacin se trata de Glomus mosseae, que segn autores como Gildon y Tinker (1983);
Leyval et al., (1995); del Val et al., (1998); Jarausch-Wehrheim et al., (1999); Pawlowska
et al., (2000), Christie et al., (2004), esta especie ha sido aislada de diversos suelos
contaminados, donde ha mostrato mayor tolerancia al Zn, Cd y Cu, que las especies
aisladas de suelos no contaminados y de acuerdo con la literatura es el que ha demostrado
la mayor capacidad de tolerar la toxicidad de metales pesados como el Zn y Cu en las
plantas.

En el presente estudio, no fue posible utilizar esta especie de Glomus mosseae ya que su
propagacin no se logro contar con el inculo necesario para inocular las plantas de
girasol, hecho que se lamenta por lo anteriormente mencionado.

Los principales factores que probablemente afectarn la reproduccin de los HMA nativos
pudieron ser los que se mencionan a continuacin: la concentracin de los metales pesados,
el cultivo trampa que se utilizo en la propagacinde los HMA y el tiempo de crecimiento
del cultivo trampa.

5.5. Contribucin de Glomus intraradices en la absorcin y translocacin


del cinc y cobre.
El primer muestreo realizado a los 40 das, como se mencion anteriormente fu el
periodo de mxima absorcin por las plantas, y es interesante hacer notar, que los
resultados establecen una marcada diferencia entre plantas inoculadas y las no inoculadas
107

con G. Intraradices; ya que en las primeras la absorcin del cinc y cobre es


considerablemente mayor que en las plantas sin inocular (Cuadro 8). Tambin es
importante apreciar que la mayor concentracin de los metales pesados permaneci en las
races disminuyendo as la translocacion hacia la parte area de las plantas inoculadas.
Estos resultados no coinciden con los reportados con Leyval et al., (1995) y Christie et al.,
(2004) quienes sealan en sus resultados una reducida absorcin de Cu y Zn por plantas de
maz inoculadas Esto puede atribuirse a que el suelo empleado en sus estudios, existi una
elevada concentracin de estos metales, excedia a los mximos permisibles. Tambin puede
adscribirse al decrecimiento de la colonizacin (ma) en la planta acumuladora debido a las
elevadas concentraciones de metales pesados en suelos, esto ha sido reportado por Schuepp
et al., (1989); Leyval et al., (1991); Christie et al., (2004). Los resultados obtenidos en este
estudio, coinciden con lo sealan por Li, (2002) y Davies, (2001) quienes reportan
diferencias significativas para la absorcin de metales pesados entre las plantas
acumuladoras inoculadas (M) y no inoculadas (NM).

Por otra parte en nuestro estudio, la notable absorcin de Cu y Zn en las plantas inoculadas,
se deba a que el suelo fue considerado como levemente contaminado sugn Kabata Pendias, (1995), y se ha demostrado que los efectos primarios de los metales pesados se
producen en las races, lo que se traduce en una menor elongacin despus de ser expuestas
a estos metales (Lamber et al., 1998) tambin puede atribuirse al importante papel que
desempea la simbiosis micorrzica en la mejora de la disponibilidad de estos metales en el
suelo de estudio.

108

El anlisis de los resultados que se muestran en el Cuadro 8, con respecto a la absorcin del
Zn y el Cu, se denota que el cobre muestra una mayor presencia que el Zn en las races de
las plantas inoculadas. Con respecto a la translocacin del Cu y del Zn a la parte area de
las plantas inoculadas se percibe una reduccin en el transito de la raz hacia la parte area.

La comparacin entre las plantas M y las plantas NM, establece que la mayor absorcin de
cinc y cobre por las races, as como tambin la disminucin de la translocacion a la parte
area ocurri en las plantas inoculadas, estos resultados se atribuyen a la importante
funcin que desempean los HMA en la tolerancia a los metales pesados en la recuperacin
de suelos contaminados, por otra parte, la glomalina que es una glucoprotena atrapa a los
metales pesados, est puede ser la razn por la cual los contaminates permanecen la mayor
parte en las races.

Con respecto a los resultados de los dos muestreos restantes a los 55 y 70 das que se
muestran en el Cuadro 8, coinciden con lo reportado por autores como Leyval et al.,(1995),
quienes sealan concentraciones de metal significativamente ms bajas; lo cual puede
atribuirse a diversos factores que pudieron estar involucrados como son: el trmino del
periodo de mxima absorcin de la planta acumuladora, el aumento de la biomasa radicular
y area de las plantas inoculadas. Probablemente en nuestro estudio, los resultados de los
dos ltimos muestreos la concentracin del Cu y del Zn sea debido a que estos metales se
almacenaron en el micelio especficamente en la glomalina siendo esta una glicoprotena la
cual puede atrapar metales pesados. Estos resultados demuestran el delicado balance entre
los efectos micorrzicos en el crecimiento de la planta y la adquisicin de estos metales, tal
como lo establecen autores como Leyval et al., (1997); Christie et al., (2004). La
109

comprensin de la absorcin y de la translocacin del cinc y del cobre por las plantas
inoculadas es importante y se requiere resaltar diversos factores como la disponibilidad de
estos metales en el suelo para ser absorbidos por la planta y los sitios de almacenamiento en
los rganos de las plantas, su evolucin durante el ciclo de crecimiento y su fisiologa;
como es sugerido por autores como Weissenhorn et al., (1995) y Zhu et al., (2001).

Si se preguntara para que utilizar los HMA en nuestro modelo de estudiosi la planta de
girasol ya por si sola puede absorber y disminuir el paso de estos metales hacia la parte
area, la respuesta es que los HMA pueden proveer una capacidad adicional para retener
metales en la raz contribuyendo a optimizar la absorcin y la translocacin, adems de
conferir una proteccin a las plantas contra la toxicidad del Zn y Cu. Se ha demostrado que
los efectos primarios de los metales pesados se producen en las races, lo que muestra una
menor elongacin despus de ser expuestas a estos metales cuando stos superan los lmites
permisibles, lo que origina el aspecto achaparrado de las plantas por lo que es esencial el
inculo de los HMA que contribuye a aumentar la biomasa radicular, extendiendo as su
radio de accin en la absorcin de metales pesados, adems que protegen a la planta contra
el estrs presentado por la toxicidad de los metales. Por lo que las plantas de girasol
inoculadas presentan una tolerancia a estos metales y pueden ser consideradas para la
recuperacin de suelos contaminados para mejorar el crecimiento, viabilidad de las plantas
y su resistencia a stos metales.

110

5.6. Colonizacin micorrzica al trmino del experimento


De acuerdo con los resultados obtenidos la colonizacin micorrzica present (61.7 2.56)
y el nmero de esporas por 100 g de suelo seco se registr (472 3.69), indican que la
colonizacin micorrzica muestra sensibilidad al cobre y al cinc, pero no se muestra
afectada de manera drstica, ya que comparada con la colonizacin de un suelo no
contaminado que dependiendo de factores abiticos es de aproximadamente del 80- 90%
(Pawlowska et al.,2000) por lo que se deduce, que la colonizacin sigue ocurriendo incluso
en estos niveles de contaminacin, De acuerdo con Weissenhorn y Leyval (1996);
Weissenhorn et al., (1994), dichos autores sealan que los HMA del gnero Glomus son
tolerantes a metales pesados como Zn y Cu en suelos levemente contaminados.

111

6. CONCLUSIONES
La concentracin de metales determinada en los suelos colectados, se concluye que el suelo
de la laguna de oxidacin puede ser considerado como un suelo con severa polucin;
mientras que los restantes de acuerdo con los lmites permitidos son clasificados como
ligeramente contaminados.

En los suelos de la laguna de oxidacin no se confirm la presencia de esporas y la


colonizacin no fue significativa. En los suelos restantes colectados, si se registr una
significante presencia de HMA, por lo que se concluye que son tolerantes a los metales
pesados aunque en elevadas concentraciones su presencia es minma.

De acuerdo con las caractersticas morfolgicas la identificacin la poblacin de HMA ms


representativas en el suelo de estudio El Centinela sin cultivo fue el Glomus intraradices,
por lo que se concluye que una de las especies de HMA ms tolerante a los metales
pesados.

Los resultados del estudio en maceta muestran que la hiptesis planteada debe ser aceptada;
ya que estos indican que la inoculacin de G. intraradices contribuye de manera positiva en
la absorcin y la translocacin de Cu y de Zn en las plantas de girasolTambin demuestra
que en las races hubo una mayor absorcin de Cu que de Zn y se encontr en estas, una
cantidad mas elevada que en la parte area, por lo que se concluye que s contribuy en la
disminucin de la translocacin de estos metales hacia la parte foliar del girasol.

112

Con respecto a las plantas de girasol no inoculadas, por ser una especie catalogada como
acumuladora de metales pesados, si se registr absorcin y translocacin de metales;
aunque en menor grado que las plantas inoculadas con G intraradices. Esto indica que la
planta tiene sus propios mecanismos de proteccin contra la toxicidad de los metales, tales
como la acumulacin en los plstidos de las clulas de las races o secuestracin por
protenas inducibles de bajo peso molecular retenedoras de metales como fitoquelatinas y
metalotioneinas.

La funcin que desempean los HMA en la resistencia de las plantas en particular de las
hiperacumuladoras, al estrs provocado por los metales y en la proteccin de la cadena
alimenticia, no debe ser ignorada por lo que es necesario realizar mas investigacin para
una mejor comprensin de la participacin de los HMA en suelos contaminados. As como
para elucidar su contribucin en los procesos de absorcin y translocacin de los metales
pesados, a travs de las hifas, al sistema radicular y posteriormente a las hojas y dems
orgnos areos de las plantas.

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