Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
GENERAL Y ESTOMATOLGICA
GUIA DE PRCTICA
DOCENTES COLABORADORES:
Dr. CD CARLOS ENRIQUE GUILLEN GALARZA
Mg Blga. CARMEN LUISA AQUIJE DAPOZZO
RECOMENDACIONES GENERALES
1. El estudiante deber asistir a las clases prcticas correctamente uniformado de blanco y
llevando consigo mandil blanco, gorro, mascarilla y guantes descartables. Adems plumn
indeleble para escritura en vidrio y lpices de colores.
2. El alumno que incumpla el tem anterior no podr ingresar a sala de prcticas.
3. Est prohibido comer, beber y fumar en sala de prcticas.
4. Sobre la mesa de trabajo slo colocar materiales, gua prctica y libreta de apuntes.
5. Antes y despus de cada prctica el estudiante desinfectar la mesa de trabajo, para lo
cual deber contar siempre con un frasco de alcohol yodado, algodn y gasa.
6. Finalizada la prctica el estudiante eliminar los materiales de desecho al depsito
correspondiente.
7. Las lminas preparadas debern ser colocadas en una caja para su archivo.
8. Todas las placas y tubos con medios de cultivo ya usados sern colocadas en las canastillas
para su autoclavado y desecho.
9. Las lminas coloreadas a desecharse debern ser colocadas en recipientes con boca ancha
conteniendo desinfectante.
10. Los cultivos a incubarse debern rotularse con los siguientes datos:
a. Nombre o iniciales del estudiante.
b. Nombre del microrganismo, nmero de mesa, seccin y fecha.
c. Las placas se colocarn en forma invertida, salvo indicacin contraria del docente.
d. Los tubos debern estar bien tapados y colocados en gradillas.
e. Los alumnos son responsables de colocar los cultivos en las estufas a temperatura
y tiempo adecuados.
f. Los alumnos son responsables de la observacin macroscpica tras la incubacin.
11. Al finalizar la prctica, el estudiante se responsabiliza de:
a. Limpiar los objetivos y platina del microscopio con algodn y alcohol isoproplico.
b. Ubicar el objetivo de menor aumento frente al condensador y verificar que no
queden lminas sobre la platina.
c. Desinfectar la mesa de trabajo.
d. Cerrar la vlvula de gas.
e. Lavarse las manos con jabn carblico.
12. El protocolo ser controlado por el docente al final de cada prctica.
PRCTICA N 01
EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y MATERIALES DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
OBJETIVOS:
Identificar y reconocer los principales equipos, instrumentos y materiales
utilizados en el Laboratorio de Microbiologa.
Familiarizar al estudiante con el manejo y uso adecuado de los equipos,
instrumentos y materiales usados en las diversas prcticas de microbiologa.
I.
EQUIPOS:
MICROSCOPIO
Aparato ptico formado por un juego de lentes que permiten la observacin de la imagen
de un objeto amplificado. Existen varios tipos, siendo los ms usados el ptico de campo
claro (hasta 2000x) y el electrnico (hasta 100000x), adems existen otros con fines
especficos como los microscopios pticos de inmunofluorescencia, el de campo oscuro y
el de contraste de fases. Es usado para reconocer caractersticas morfolgicas, tintoriales y
detectar las diferentes estructuras que poseen los microrganismos.
Partes.
Mecnica.
ptica.
Sistema de Iluminacin.
A. Mecnica:
a) Pie.
b) Platina (Circular o rectangular fija o mvil, el vernier y el sistema de movimiento o tren)
c) Tubo ptico, Revlver.
d) Sistema de Enfoque: Tornillos Micromtricos y Macromtricos (Cremallera)
B. Sistema ptico:
a) Oculares: 05 10 20x
b) Objetivos: 05 10 40 100x
Objetivos de observacin en seco y en inmersin.
C. Sistema de Iluminacin:
a) Espejo: Plano y Cncavo
b) Condensador.
c) Diafragma filtros.
AUTOCLAVE
Destinado para la esterilizacin con calor hmedo y presin (121C x 15 a 15 Lbs/pulg2 ).
Permite la esterilizacin demateriales de desecho, medios de cultivo, ropa quirrgica, agua
destilada, etc.
HORNO (Horno Pasteur o Poupinel)
Destinado para la esterilizacin a calor seco. La temperatura usual es 160 180C por 1 2
horas. Se esteriliza material de vidrio, de laboratorio e instrumentos metlicos.
ESTUFA O INCUBADORA
Permite obtener temperaturas fijas permanentes gracias a un termostato. La temperatura
se elige segn el requerimiento del microrganismo a cultivar. Generalmente es de 37C.
REFRIGERADOR O NEVERA
Permite obtener temperaturas bajas y se utiliza con fines de conservacin de
microorganismos, medios de cultivo, muestras, reactivos, etc. Por lo general se usa a
temperatura de 0 a 4C.
CENTRIFUGA
Equipo de diversas capacidades y que permite separar una sustancia slida en suspensin
del lquido respectivo. Se puede centrifugar orina o sangre para obtener el sedimento
urinario o suero respectivamente.
BALANZA
Se usa en bacteriologa para pesar colorantes, medios de cultivo, reactivos, etc. Existen de
diferentes tipos segn su aplicacin y sensibilidad.
BAO MARIA
Permite la transmisin indirecta y atenuada de calor, de un lquido sobre una sustancia a
travs de un recipiente contenedor. Evita el calor directo. Se usa entre otras cosas para
licuar medios de cultivo y para inactivar sueros. Existen diversos modelos segn aplicacin.
AGITADOR MECNICO
Equipo de diseo diverso y con frecuencia variable por el nmero de veces que oscilan por
minuto. Se utilizan para agitar tubos, frascos, pipetas y lminas excavadas.
POTENCIOMETRO
Equipo destinado a determinar la concentracin de iones H (pH en una solucin).
BOMBA DE VACIO
Produce presin negativa y se utiliza de preferencia para filtrar muestras de agua potable,
a travs de una membrana filtrante donde se retienen las bacterias contaminantes.
CONTADOR DE COLONIAS
Utilizado para el recuento de colonias en una placa de cultivo, de manera ms exacta y con
mayor facilidad.
II.
MATERIALES DE VIDRIO
Materiales que deben ser de buena calidad, resistir acciones mecnicas y cambios bruscos
de temperatura, tener bajo coeficiente de dilatacin y una mnima cantidad de lcali libre.
PLACA PETRI
Formado por dos cristalizadores, haciendo de tapa el ms grande y de base el ms
pequeo. Existen en medidas de 10x60 y 15x100, encontrndose en el mercado incluso
con divisiones internas.
PLACAS BREWER
Son ms gruesas y pesadas que las anteriores. La tapa encaja perfectamente sobre la base,
dejando espacio slo el necesario para colocar el medio de cultivo. Es usado generalmente
para el aislamiento y cultivo de microrganismos anaerobios.
TUBOS DE PRUEBA (Tubos de ensayo).
Presentes en tamaos variados y cuyas medidas se dan en mm del dimetro de la boca y el
largo del tubo. Los ms frecuentes son de 13x100 mm, 16x150 mm y 18x150 mm. Una
variante de ellos posee tapa de bakelita y se emplea para realizar pruebas bioqumicas,
cepario, estudios de fermentacin, reacciones diversas, etc. Los tubos para centrfuga son
de paredes gruesas y de fondo cnico, pueden tener graduacin y sirve para reunir el
sedimento de los lquidos.
MATRACES Y BALONES
Recipientes de base esfrica con fondo plano y forma cnica o de globo, con cuello de
boca ancha que termina en reborde. Existen con medidas volumtricas desde 50 ml hasta
5000ml, y son empleados para la preparacin de medios de cultivo, colorantes, soluciones,
reactivos diversos, etc.
PIPETAS
De forma tubular y abierta en ambos extremos, graduado en su extremo proximal y son
usados para medir soluciones en cantidades pequeas y exactas. Son de diversas clases:
Pipetas con bulbo, llamadas as por el abultamiento que presentan en su parte intermedia;
Pipetas de sangre, que poseen un pequeo bulbo y graduaciones que permiten relaizar
diluciones en citometra hemtica; tambin estn las Pipetas Pasteur que no poseen
marcas ni graduaciones y son utilizadas para medir volmenes pequeos.
Las pipetas poseen las siguientes abreviaturas: TC (Tocontainer), las que contiene un
determinado volumen , pero al vaciar no suministra la totalidad del lquido; y TD
(Todeliver), al vaciar la pipeta suministrar la totalidad del volumen especificado.
PROBETA
De paredes gruesas y graduadas, con base para estabilidad. Existen de diferentes
capacidades, de 10 a 1000ml, y son usadas para medir soluciones o sustancias lquidas.
FIOLAS
Matraces volumtricos con cuello largo y base globosa, poseen una lnea de aforo y son
usados para la preparacin de reactivos valorados.
MATRAZ DE PRECIPITADO
Recipientes cilndricos de boca ancha y con pico en el borde. Generalmente se usa para
preparar soluciones diversas.
LAMINAS PORTA Y CUBREOBJETOS
Lminas de vidrio rectangulares o cuadrangulares con diferentes dimensiones, las ms
comunes son de 65x35 mm y 22x22mm. Son usadas para hacer extensiones y coloraciones
de muestras biolgicas y observaciones en fresco.
En otros materiales de vidrio pueden considerarse embudos, jeringas hipodrmicas,
frascos, goteros, baguetas, perlas de vidrio, etc.
III.
OTROS MATERIALES
MANGOS DE KOLLE
Vstagos de metal con cubierta de ebonita (aislante de calor), en cuyo extremo distal
presenta una tuerca para insertar el alambre de platino o micrn que formar el asa de
siembra. Usado en la toma de muestras de microrganismos y en la siembra de los mismos.
ESPTULAS DE METAL
Usado para pesar medios de cultivo y reactivos. Los de nquel no se oxidan.
TRIPODE
Soporte de tres pies generalmente de metal, empleados para soportar recipientes durante
el calentamiento.
Entre otros materiales tambin se consideran: soportes universales, agujas hipodrmicas,
gradillas para tubos de ensayo, rejillas de asbesto, tapones de jebe, mangueras de jebe,
papel indicador de pH, etc.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
PRCTICA N02
MEDIOS DE CULTIVO.
SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS LECTURA E INTERPRETACIN DE COLONIAS
OBJETIVOS
MEDIOS DE CULTIVO
INTRODUCCIN
El trmino Cultivo hace referencia al crecimiento de microrganismos, por lo que los medios de
cultivo son sustancias nutritivas lquidas o solidas, que sirven en laboratorio para proporcionar
sustrato nutritivo para el crecimiento y multiplicacin de los microorgansimos. Sus componentes
bsicos deben satisfacer las exigencias nutricionales para el crecimiento microbiano y varian segn
el tipo de bacteria.
Las condiciones que deben tomarse en cuenta para el crecimiento en medio de cultivo son:
Temperatura.
Grado de humedad.
Presin de oxgeno.
pH.
Para su crecimiento los microrganismos deben tomar del ambiente que lo rodea, todas las
sustancias que requiere para la sntesis de sus materiales celulares y energa. A estas sustancias se
les denomina nutrientes y un medio de cultivo debe tener la concentracin adecuada de los
mismos acorde a los requerimientos especficos de los microrganismospara los que han sido
preparados. Y siendo los microrganismos extraordinariamente diversos, los medios de cultivo son
tambin muy diversos en cuanto a nmero y caractersticas nutricias.
AGUA
Para la preparacin de medios de cultivo y reactivos diversos, slo debe utilizarse agua destilada o
agua desmineralizada, libres de metales disueltos y compuestos bactericidas o bacteriostticos.
EXTRACTO DE CARNE
Se puede usar cualquier marca de extracto de carne siempre y cuando produzca resultados
positivos, lo que no se debe usar es la infusin de carne.
PEPTONA
Es una protena degradada para su fcil asimilacin por los microrganismos. Se puede utilizar
cualquier peptona que previas pruebas conduzcan a resultados satisfactorios en el crecimiento de
microrganismos.
AZUCARES
Todos los azcares usados para la preparacin de medios de cultivo deben ser qumicamente
puros y adecuados para propsitos bacteriolgicos.
AGAR
Agente gelatinoso obtenido de algas marinas y que se emplea de forma granular o fragmentado
para la preparacin de medios de cultivo.
REACTIVOS GENERALES
Todos los reactivos generales utilizados como ingredientes en los medios de cultivo deben ser de
grado ACS o de calidad analtica.
COLORANTES
Para la preparacin de los medios de cultivo slo deben emplearse colorantes certificados.
A partir de estos ingredientes es posible preparar un medio de cultivo capaz de permitir el
crecimiento y desarrollo de diversos microrganismos hetertrofos.
II.
el
crecimiento
de
Neisseria
meningitis
(meningococo)
Neisseriagonorrhoeae (gonococo).
Actynomicesnaeslundi
Actynomicesodontolyticus.
2.3. MEDIOS DIFERENCIALES: Son los medios que permiten evidenciar las
actividades bioqumicas de un microrganismo frente a sustrato determinado,
cambiando sus caractersticas observables y permitiendo su identificacin.
Ejemplos:
Agar Urea.
Agar SIM.
Medio Stuart.
Medio Amies.
Caldo Hajna.
Caldo de Tioglicolato.
A veces se combina las caractersticas de cada un de estos medios y por lo tanto el medio
resultante ser Enriquecido, Selectivo y Diferencial. Esta clasificacin es flexible y se plantea con
fines didcticos.
Placas Petri.
Tubos de ensayo.
Mechero.
Algodn.
Gasa.
Papel kraft.
Hilo pavilo.
Matraces o balones.
Cocina elctrica.
Plumn marcador.
PROCEDIMIENTO
Repartir en placas y tubos dentro del rea de seguridad que brinda el mechero.
a)
b)
c)
d)
De lquido a slido.
De lquido a lquido.
De slido a lquido.
De slido a slido.
a)
b)
Giro de placa
45
45
45
45
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
MATERIALES
PROTOCOLO
TCNICA DE SIEMBRA
DESCRIPCIN DE LA SIEMBRA
OBSERVACIN DE COLONIAS
ESTRA SIMPLE
DISPERSIN AGOTAMIENTO
PUNTURA
INOCULACIN
CARACTERISTICAS DE LA COLONIA
FORMA
ELEVACIN
BORDES
SUPERFICIE
TAMAO
CONSISTENCIA
CROMOGNESIS
GRADO DE TRANSPARENCIA
RESULTADO DE SIEMBRAS REALIZADAS:
CUESTIONARIO
1. Investigue y seale la composicin del Agar Nutritivo y Agar Sangre.
2. Indique 05 medios de cultivo selectivos y su importancia.
3. esquematice las precauciones que se debe tener en la preparacin de los medios de
cultivo: pesado, preparado y autoclavado.
4.
5.
6.
7.
PRCTICA N 03
TINCIONES BACTERIANAS
OBJETIVOS
INTRODUCCION
COLORANTE: Sustancia qumica de origen natural o sinttico que otorga color.
Por su naturaleza, se clasifican en colorantes naturales y artificiales.
Por su afinidad tintorial, es decir de acuerdo al comportamiento qumico del colorante, se clasifica
en:
a) Colorantes cidos
b) Colorantes Bsicos.
c) Colorantes Neutros.
a) Colorantes cidos: Se dice que un colorante es cido o aninico, cuando la parte bsica o
catinica es incolora y la parte cida o aninica es coloreada, teniendo afinidad poe le
citoplasma. Ejemplo: cido pcrico, Eosina, Fucsina cida, etc.
b) Colorantes Bsicos: Son los colorantes que tienen la parte bsica o catinica coloreada y la
parte cida o aninica incolora. Tienen afinidad por el ncleo. Ejemplo: Violeta de
genciana, Fucsina bsica, Tionina, etc.
c) Colorantes Neutros: Son los colorantes que tienen la parte cido y bsica coloreada y
tien al ncleo de un color y al citoplasma de otro. Ejemplo: Leishman, Giemsa, Wright,
Eosinato azul de metileno, etc.
COLORACIN O TINCIN
Proceso en el que se produce un intercambio de iones entre los colorantes y los sitios activos de la
superficie o del interior de la clula.
PROTOCOLO
COLORACION SIMPLE
MORFOLOGA DEL
MICROORGANISMO
ESQUEMA DE LA
OBSERVACIN
AZUL DE METILENO
COLORACIN GRAM
1. Dividir la lmina en 3 partes: 1/3 para rotular y 2/3 para la preparacin del frotis.
2. Con el asa bacteriolgica previamente esterilizada, tomar la muestra y realizar un frotis en
el centro de la lmina portaobjeto, extendindola en espiral del centro a la periferia, para
obtener una preparacin en capa fina.
3. Fijar la muestra, mediante el secado completo del frotis por flameado con la ayuda del
mechero.
4. Colocar la lmina sobre la varilla o puente de coloracin.
5. Cubrir el frotis con 03 gotas de Cristal Violeta (colorante primario), dejar actuar por 2
minutos.
6. Lavar con agua corriente (evitar la cada directa del chorro sobre el frotis).
7. Cubrir con Lugol durante 1 2 minutos.
8. Lavar con agua.
9. Decolorar el frotis con la solucin de Alcohol Acetona (inclinar la lmina y decolorar hasta
que no arrastre colorante), mximo por 30 segundos.
10. Lavar con agua.
11. Cubrir con 03 gotas del colorante de contraste Safranina durante 2 minutos.
12. Lavar con agua.
13. Secar a temperatura ambiente o con la ayuda de la llama del mechero.
14. Observar al microscopio con el objetivo de inmersin.
CATEGORA BACTERIANA
GRAMPOSITIVAS
GRAMNEGATIVAS
MORFOLOGA BACTERIANA
ESQUEMA DE LA
OBSERVACIN
LMINA
COLORACIN DE ZIEHL
NEELSEN
MORFOLOGA DEL
MICROORGANISMO
ESQUEMA DE LA
OBSERVACIN
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
PRCTICA N04
INMUNOLOGIA
REACCION ANTIGENO ANTICUERPO - FAGOCITOSIS
OBJETIVOS:
INTRODUCCION
La aglutinacin es un proceso inmunolgico resultante de una reaccin antgeno anticuerpo, en
el que uno de los reactantes es de naturaleza particulada, de tamao grande. Estas partculas
pueden ser bacterias, eritrocitos, partculas de ltex, etc., y se encuentran recubiertas en forma
natural o artificial por antgenos o anticuerpos. Al ser suspendidas en un medio salino y mezclarse
con antisueros o antgenos especficos, formaran los respectivos complejos Ag-Ac observables a
simple vista o con lentes de poco aumento.
Existen muchos mtodos para demostrar la aglutinacin, de los ms conocidos son la
Determinacin del Grupo Sanguneo y la Prueba de Widal (aglutinacin bacteriana).
REACCION ANTIGENO ANTICUERPO
I.
Es un mtodo para decirle cul es el tipo especfico de sangre que usted tiene. El tipo de sangre
que usted tenga depende de si hay o no ciertas protenas, llamadas antgenos(Aglutingenos), en
sus glbulos rojos, los cuales al ponerse en contacto con los Anticuerpos (Aglutininas), van a
formar el complejo Ag-Ac que ser visible a travs de la aglutinacin.La sangre a menudo se
clasifica de acuerdo con el sistema de tipificacin ABO. Este mtodo separa los tipos de sangre en
cuatro categoras:Tipo A, Tipo B, Tipo AB y Tipo O.
El tipo de sangre (o grupo sanguneo) depende de los tipos que haya heredado de sus padres.
MATERIALES
01 Lanceta.
01 Micropipeta.
01 Placa de toque.
Antisueros Anti A, Anti B y Anti D.
Palitosmondadientes.
Alcohol yodado.
Algodn.
PROCEDIMIENTO
Con una lanceta realizar un pequea injuria en el pulpejo del ndice derecho.
Con una micropipeta tomar 03 gotas de sangre y colocarlas en la placa de toque.
Colocar una gota de cada uno de los antisueros (Anti A, Anti B y Anti D) en las gotas
respectivas.
Mezclar con la ayuda de un mondadiente distinto para cada una de las gotas.
Rotar la placa de toque durante 2 o 3 minutos y observar la presencia de aglutinacin.
INTERPRETACION
Tipificacin ABO:
Si sus glbulos sanguneos se pegan o aglutinan al mezclarse con:
Si los glbulos sanguneos no se pegan o aglutinan cuando se agrega suero anti-A y anti-B, usted
tiene sangre tipo O.
Tipificacin del Rh:
Si los glbulos sanguneos se pegan o aglutinan al mezclarlos con suero anti-Rh (Anti D),
usted tiene sangre de tipo Rh positivo.
Si la sangre no coagula al mezclarse con suero anti D, usted tiene sangre de tipo Rh
negativo.
PRUEBA DE WIDAL
La reaccin de Widal demuestra la presencia de anticuerpos aglutinantes (aglutininas) contra los
antgenos H (flagelar) u O (somtico) de la Salmonella typhi en el suero de los pacientes con fiebre
tifoidea.
En la reaccin de Widal, tambin hay que considerar los falsos negativos como toda prueba
de laboratorio, entre sus causas tenemos:
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Con la pipeta colocar una gota del suero problema, en cada uno de los pocillos de una
lmina de vidrio excavada.
Agregar una gota de cada uno de los antgenos a cada gota de suero del paciente.
Mezclar con ayuda de un mondadiente distinto para cada gota.
Hacer rotar la lmina por espacio de 2 a 3 minutos y realizar observacin.
INTERPRETACION
La aglutinacin se observa por la aparicin de grumos de tamao variable que tienden a agruparse
en la periferia de la gota.
II.
FAGOCITOSIS
Esun
tipo
de endocitosis por
el
cual
algunas clulas rodean
con
sumembrana
citoplasmtica partculas slidas y las introducen al interior celular, formando alrededor de l
una vescula, llamada fagosoma, la cual se fusiona posteriormente con lisosomas ( fagolisosoma)
para degradar el antgeno fagocitado.
Es un fenmeno inespecfico, que se incrementa cuando intervienen anticuerpos especficos y
complementos. Entre las clulas fagociticas se encuentran los polimorfonucleares y los
macrfagos (monocitos libres). A estas sustancias que demuestran habilidad para hacer a los
antgenos ms susceptibles a la fagocitosis de les denomina Opsoninas.
Las fases de la fagocitosis son:
a) Quimiotaxis: las clulas fagocitarias se acercan a los antgenos.
b) Adherencia: La unin a receptores sobre la membrana de los leucocitos y otros fagocitos
actan como mecanismos de adherencia sobre los microorganismos, sea a productos
microbianos especficos o sobre opsoninas del sistema inmune del hospedador.
c) Ingestin:La unin a receptores de adherencia promueve seales de comunicacin
intracelular que resultan en la evaginacin de la membrana del fagocito rodeando al
receptor y su ligando patognico, formando el Fagosoma.
d) Digestin:Intervienen los lisosomas, los cuales se unen al fagosoma conformando
un fagolisosoma, y liberando enzimas hidrolticas que destruirn al antgeno.
e) Excrecin: La forma de deshacerse de estos residuos es mediante la exocitosis.
FAGOCITOSIS IN VIVO
MATERIALES
Cultivo de Candida.
Ratones.
Estuche de diseccin.
Lminas portaobjetos.
Jeringa de tuberculina.
Cmara de ter.
Colorante Wright.
Agua tamponada.
Alcohol yodado.
Algodn.
PROCEDIMIENTO
Inocular un ratn albino con 0.5 ml de cultivo de candida calentado por viaintraperitoneal.
Dejar el ratn en reposo por unas 03 horas, controlndosele peridicamente.
Sacrificar el ratn con la ayuda de la cmara de ter y ubicarlo de cubito dorsal sobre un
campo e papel kraft de 30x30.
Realizar una incisin vertical a lo largo del abdomen y exponer las vsceras.
Con la lmina portaobjeto hacer una impronta del lquido peritoneal y fijarla a
temperatura ambiental.
Realizar Coloracin Wright.
Observar al microscopio con el objetivo de inmersin.
Identificar las clulas fagocitarias y las fases de la fagocitosis.
CUESTIONARIO
1. Elabore un cuadro con los resultados obtenidos en la prctica.
2. Grafique los procedimientos realizados en la prctica de laboratorio.
PRCTICA N05
PRIMERA PRCTICA CALIFICADA
PRCTICA N06
PRUEBAS BIOQUIMICAS BACTERIANAS
OBJETIVOS:
INTRODUCCIN
La identificacin bacteriana en forma inicial pude realizarse mediante la determinacin de las
caractersticas de las colonias y a travs de las diferentes tinciones; sin embargo para identificar
una bacteria desconocida a nivel de gnero y especie, no basta con un aislamiento, sino que deben
llevarse a cabo ciertos estudios de los sistemas enzimticos que son nicos para cada gnero y
especie y sirvan como marcadores de identificacin.
A nivel de laboratorio, estos sistemas enzimticos se van a identificar sembrando una porcin de
colonia bacteriana aislada en los diferentes medios de cultivos que contienen sustrato e
indicadores qumicos especficos que nos permiten detectar cambios de pH o la presencia de
subproductos especficos, caractersticas que nos permitirn la identificacin bacteriana.
I.
PROCEDIMIENTO
Con el asa de kolle, haga una siembra por puntura en el tubo con TSI.
Rotular e incubar a 37C por 24 horas.
INTERPRETACION
1. FERMENTACIN DE AZUCARES
2. PRODUCCION DE H2S
Produccin de pigmento negro en fondo de tubo:
No pigmento negro en fondo de tubo:
H2S (+)
H2S (-)
3. PRODUCCION DE GAS
Presencia de burbujas, grietas o desplazamiento en medio :
No burbujas, no grietas, no desplazamientos:
II.
Gas (+)
Gas (-)
PRUEBA DE LA CATALASA
La Catalasa es una enzima que posee la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas y que va a convertir el perxido de hidrgeno (H2O2) en agua y oxigeno, de
acuerdo a la siguiente reaccin:
2H2O2
2H2O + O2
El perxido de hidrogeno es uno de los productos finales del metabolismo oxidativo de los
carbohidratos y si se acumula es letal para el microorganismo.
Esta prueba es vital para la diferenciacin de los estreptococos (catalasa negativa) y los
estafilococos (catalasa positiva)
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Con el asa de siembra estril, transferir parte el inculo a una lmina portaobjeto.
Aadir 1 o 2 gotas de H2O2 al 3%.
Observar si se forman burbujas o no inmediatamente despus de aadir las gotas
de H2O2 al 3%.
Descartar la lmina en un recipiente con desinfectante.
Precauciones: La prueba debe realizarse en cultivos hasta de 24 horas, cultivos
ms viejos pueden perder su actividad catalasa dando un falso negativo. Adems
evitar el contacto de perxido de hidrogeno con la piel.
INTERPRETACION
: Catalasa Positiva.
: Catalasa Negativa.
Los Citocromos son hemoprotenas que actan como ltimo eslabn de la cadena
respiratoria aerobia, transfiriendo electrones (H) al oxigeno con formacin de agua. Este
sistema de citocromos se encuentran en los microrganismos aerobios y anaerobios
facultativos, permitindonos identificar a los microrganismos que carecen de la enzima y
los anaerobios anaerobios estrictos.
En laboratorio se ahce reaccionar a la bacteria con un sustrato oxidable como el dimetil o
tetrametil - p fenilendiamina (Reactivo de Kovacs), y que se presenta en solucin, discos
o tiras llamados comnmente oxidasa.
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
Mtodo Directo: Se aade directamente a las placas sobre las colonias bacterianas
02 o 03 gotas del reactivo oxidasa.
INTERPRETACION
IV.
Para esta prueba se utiliza el agar manitol salado, medio de cultivo selectivo y diferencial
que permite el crecimiento de estafilococos, y que en su composicin cuenta con el
sustrato Manitol, el cual tras su fermentacin se libera cidos que sern detectados por el
indicador rojo fenol el cual har viraje a color amarillo.
Esta prueba permite diferenciar Staphylococcusaureus del Staphylococcusepidermidis y
otras especies perteneciente a este gnero bacteriano.
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
V.
Cepa bacteriana.
Placas con Agar Sangre.
PROCEDIMIENTO
Con el asa de klle realizar una siembra por estria simple en una placa con agar
sangre.
Incubar a 37C por 24 horas.
INTERPRETACION
Hemlisis Parcial ------- Presencia de halos verduzcos grisceos -------- Hemlisis Alfa
Hemlisis Total ------- Presencia de halos transparentes
-------- Hemlisis Beta
No hemlisis ------- No presencia de halos
-------- Hemlisis Gamma
En la hemolisis alfa, el enverdecimiento del medio se debe a la salida de un derivado del
tipo de la metahemoglobina, que al ser oxidado ser convierte en un compuesto del tipo de
la biliverdina.
VI.
PRUEBA DE LA COAGULASA
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Con el asa de klle, realizar una siembra por inoculacin en los tubos de plasma
sanguneo.
Incubar a 37C por 4 horas.
INTERPRETACION
VII.
Coagulasa Positivo
Coagulasa Negativo
PROTOCOLO
PRUEBA BIOQUIMICA
MEDIO DE CULTIVO
REACTIVO O
INDICADOR
LECTURA
TSI:
a)
b)
c)
d)
Glucosa:
Lactosa:
H2S
Gas
CATALASA
CITOCROMO OXIDASA
MANITOL
HEMOLISINAS
COAGULASA
CUESTIONARIO:
Esquematice y grafique los resultados obtenidos en la lectura de las pruebas bioqumicas
anteriormente realizadas.
PRCTICA N07
PRUEBA DE DIAGNOSTICO VIROLOGICO
PRUEBA DE DIAGNOSTICO MICOLOGICO
OBJETIVOS
Reconocer la metodologa para diagnosticar micosis en el laboratorio.
Reconocer las principales caractersticas macro y microscpicas de los hongos.
Identificar las especies de inters mdico estomatolgico.
Reconocer la metodologa para el diagnstico de laboratorio para virus.
Identificar virus de inters mdico estomatolgico.
INTRODUCCION
MICOLOGIA
Ciencia que estudia a los hongos, organismos eucariotas, cuyas paredes celulares estn
compuestas principalmente por Quitina, y adems porglucano, manano, celulosa, etc; es decir
carbohidratos complejos. Adems son seres hetertrofos, no realizan fotosntesis (no tiene
clorofila). Existen aproximadamente 150000 especies de hongos, de ellos 100 ms o menos son
patgenos, otros son no patgenos y un gran grupo son utilizados en diversas industrias.
Desde el punto de vista celular, los hongos pueden ser de dos tipos:
Unicelulares o Levaduriformes.
Pluricelulares o Miceliales.
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
VIROLOGA
Ciencia que estudia a los virus, organismos parsitos intracelulares obligados, que poseen un solo
cido nucleico (ADN o ARN), protegido por una estructura denominada Cpside y algunos
presentan Envoltura.
Para estudio en laboratorio se utiliza a los bacterifagos, descubiertos en 1915 por Twort, quien
aport mucho en los estudios de organizacin y replicacin del material gentico. Existe un
bacterifago para cada especiebacteriana, debida a los receptores especficos existente en las
bacterias. La accin de los bacterifagos en ellas puede ser:
Los virus respiratorios son los principales responsables de las afecciones respiratorias, que
incluyen:
Va Amnitica:
Usando una jeringa de 01 cc con aguja calibre 22, inocular a travs de la perforacin de la
cscara y en direccin del embrin, inyectar 0.1 de safranina como muestra.
RESULTADO
Observar sus resultados depositando el contenido del huevo embrionado en una placa
Petri.
CUESTIONARIO
1. Esquematizar los resultados de los procedimientos realizados en Micologa.
2. Esquematizar los resultados de las inoculaciones realizadas.
PRCTICA N08
PRUEBAS DE DIAGNSTICO PARASITARIO
OBJETIVOS
INTRODUCCION
Las enfermedades asociadas a protozoos tienen en la actualidad una elevada incidencia en
la poblacin mundial algunas de ellas acompaadas de una alta tasa de mortalidad, tal es el caso
del paludismo y la tripanosomiasis africana, entre otras. Algunos protozoos intestinales
como Giardialamblia y Entamoebahistolytica son causa de mal nutricin, prdida de peso
y diarreas severas; otros, como Plasmodiumsp, Trypanosomasp y Leishmaniaproducen afecciones
cardacas y del SNC, daan las membranas mucosas, la piel y diferentes rganos de la economa.
Los ciclos de vida de los protozoos son muy variados y complejos. El conocimiento de stos
permite realizar una toma de la muestraen el momento adecuado con el fin de observar el agente
biolgico y con ello realizar el diagnstico certero de la enfermedad. Demostrar e identificar el
agente infectante se considera la regla de oro en el diagnstico parasitolgico.
Diagnstico de los protozoos sanguneos: Dentro de los protozoos sanguneos se destacan por su
incidencia e importancia epidemiolgica Plasmodiumsp, Trypanosomacruzi, Trypanosomabrucei y
Leishmaniadonovanii.
Dentro
de
los
protozoos
intestinales
se
destacan
por
Toma de la muestra: La muestra ideal son las heces las que deben ser colectadas
preferiblemente en un recipiente de cristal o plsticocorrectamente lavado y seco. Deben
ser adems frescas (recin emitidas) y procesadas rpidamente en particular cuando
queremos observar los trofozotos de estos parsitos. De no ser posible el procesamiento
inmediato se deben conservar por diferentes medios que pueden ser:refrigeracin a 4C,
en formol al 5 10 %, alcohol polivinlico (PVA) en una solucin de Mertiolato-yodoformol (MIF). La muestra debe ser recogida directamente sobre un papel limpio colocado
en el suelo para evitar que se mezcle con la orina ya que las sustancias aqu presentes
pueden daar los trofozotos. En los parasitismos es comn que no se excreten
constantemente las formas parasitarias, este fenmeno est estrechamente relacionado
con el ciclo de vida del parsito y se conoce como fase de excrecin negativa, por tal
motivo se recomienda siempre indicar de tres a seis exmenes de heces con un periodo de
dos a tres das entre uno y otro (exmenes seriados). En los casos de alta sospecha clnica
de giardiosis se puede obtener tambin una muestra de aspirado duodenal o de biopsia
duodenal para realizar el diagnstico, siempre que los anlisis de las heces hayan
resultado negativos.
Mtodos de diagnstico:
o
Examen directo entre cubre y portaobjeto: Se coloca una pequea porcin de las
heces en un portaobjeto mezclada con una gota de eosina, lugol o solucin salina
Los metazoarios o helmintos son mucho ms complejos que los protozoos, sus clulas se agrupan
formando rganos y tejidos; se reproducen sexualmente pudiendo ser hermafroditas o presentar
sexos separados. Son ovparos con excepcin de filarias, Dracunculusspp y Trichinellaspp, que son
vivparos.
Los helmintos incluyen dos Phylum o clases:
Platelmintos: gusanos de cuerpo plano, entre los que se incluyen:
Nematelmintos o Nematodos: Son gusanos cilndricos, tienen sexos separados. Su cuerpo est
recubierto por una cutcula, con cavidad pseudocelmica, tubo digestivo completo que se inicia en
la boca y termina en el ano. La boca est rodeada por tres labios, salvo en las uncinarias que
presentan una cpsula bucal con elementos cortantes; estas estructuras producen pequeos pero
mltiples traumas en la mucosa intestinal que contribuyen a la produccin de la anemia
macroctica que suele asociarse a estas parasitosis. Los huevos tienen diferentes caractersticas
que son tiles para el diagnstico de las diversas especies. Del huevo se liberar una larva, en el
tubo digestivo o en el medio ambiente. Los estadios larvarios son varios y se producen mudas
entre estadio y estadio. El hombre se infecta por va oral, como en el caso de Ascarislumbricoides,
por va cutnea, como en el caso de las uncinarias o por va parenteral, como por ejemplo las
filarias. Slo unas pocas especies son parsitos del hombre y existen, a diferencia de los cestodes y
trematodes, muchos nematodos de vida libre.
MATERIALES
Microscopio ptico
Aplicadores
Guantes
Lugol
PROCEDIMIENTO
Para el examen de las heces, guarde las medidas adecuadas de bioseguridad, colquese los
guantes y mascarilla antes de proceder:
Con un aplicador tome una pequea porcin de heces y mezclela con la gota de lugol en el
portaobjetos haciendo un pequeo crculo. (Utilice una lmina para cada muestra).
RESULTADOS
Realice un esquema de lo observado en cada una de las preparaciones.
CUESTIONARIO
1. Cules son las formas infectantes de Giardialamblia y Entamoebahistolytica y cules son
sus caractersticas ms sobresalientes?
2. Qu requisitos deben cumplir las muestras de heces para estudio parasitolgico y en
particular para la bsqueda de protozoos intestinales? Qu otra muestra puede ser til
para el diagnstico de la giardiosis?
3. Ante un paciente con sospecha clnica de paludismo, Qu examen usted indicara? qu
muestra sera necesaria para el estudio? Basado en el ciclo de vida de este parsito, qu
formas parasitarias pudiera encontrar en dicha muestra?.
4. Elabore un cuadro comparativo entre los platelmintos y nematelmintos.
5. Elabore un cuadro comparativo entre cestodos y trematodos.
PRCTICA N09
EXAMEN PARCIAL
PRCTICA N10
BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS DE INTERES ORAL Y GENERAL
OBJETIVOS:
INTRODUCCION
GNERO STAPHYLOCOCCUS
Los estafilococos pertenecen a la Familia Micrococcaceae, y son microorganismos grampositivos
en cultivos jvenes, de forma esfrica o redonda, agrupados generalmente en forma de racimos,
no esporulados y anaerobios facultativos. Son habitantes naturales de la flora nasofarngea, piel e
intestinos; y relacionado con procesos infecciosos supurativos (fornculos y abscesos),
intoxicaciones alimentarias hasta septicemias mortales.Las especies ms conocidas son S. aureus,
S. epidermidis y S. saprophyticus; siendo la primera la ms patgena y la nica en producir
Coagulasa.
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Sembrar la muestra problema en placas con agar manitol salado y agar sangre, empleando
el mtodo de estra por agotamiento.
Llevar las placas sembradas a incubacin a 37C por 24 horas.
Realizar un frotis de la muestra y colorearla con Gram.
Sembrar por inoculacin los tubos con caldo plasma e incubar a 37C, para la prueba d
elacoagulasa.
Realizar la prueba de la catalas
Observar las placas incubadas, identificando las caractersticas de las colonias (tamao,
forma, borde, cromognesis, manitol, hemlisis, etc).
RESULTADOS
PROTOCOLO
Realizar un protocolo de trabajo indicando: especie bacteriana, tamao de la colonia, forma,
pigmento, hemolisis y otras caractersticas que crea conveniente.
Complete el cuadro con lo realizado durante la prctica.
CEPA
BACTERIANA
TRABAJADA
MS
AS
COAGULASA
CATALASA
GRAM
MORFOLOGIA
GNERO STREPTOCOCCUS
Este gnero comprende muchas especies agrupadas segn la clasificacin de Lancefield en los
grupos A (S. pyogenes), B (S.agalactiae), C (S.equi), D (Enterococos), G (S.canis), H (S.sanguis), K
(S. salivarius) y Streptococcuspneumoniae (no pertenece a ningn grupo). Son esfricos o
redondos, grampositivos, adoptan forma de cadenas y son generalmente anaerobios facultativos
pero tambin existen algunas especies anaerobias estrictas (Peptoestreptococcus). Algunos son
patgenos para el hombre y los animales, otros forman parte de la flora normal o transitoria del
cuerpo humano y otros son saprofitos.
Los estreptococos se desarrollan en medios enriquecidos como el agar sangre, que permite
diferenciar algunas especies en base a la hemlisis producida ( hemlisis, hemlisis o
hemlisis). Asimismo son numerosas las pruebas bioqumicas que permiten la diferenciacin de las
especies de Streptococcus.
Es necesario destacar la existencia del Grupo Estreptococos Viridans donde se incluyen a todos los
estreptococos de la cavidad oral. Son hemolticos
MATERIALES
Cultivo de Estreptococos.
Placas con agar sangre.
Hisopos estriles.
Bajalenguas.
Viales estriles.
Set de coloracin Gram.
Asas de siembra.
Microscopio y aceite de inmersin.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
Observar las placas con agar sangre y determinar que colonias son sospechosas de
estreptococcus. Realizar frotis y colorear con Gram.
Determinar el tipo de hemlisis.
A la observacin microscpica determinar tipo de Gram y morfologa.
PROTOCOLO
MICROORGANISMO
AS
TIPO DE
HEMLISIS
MORFOLOGA
DE COLONIA
GRAM
MORFOLOGIA
BACTERIANA
S. pyogenes
S.agalactiae
S. pneumoniae
Grupo Viridans
INTRODUCCION
GNERO NEISSERIA
El gnero Neisseria agrupa a microorganismos de inters estomatolgico ya que se les encuentra
en gran nmero en la mucosa orofarngea, adems la especie N. gonorrhoeae puede producir
lesiones a nivel de la mucosa oral.
Son cocos gramnegativos que se disponen en pares (diplococos) de aspecto arrionado de 0.6 a
1.5 micras, poco resistentes a las condiciones ambientales y de requerimientos nutricionales
exigentes y requieren de temperatura ptima de 37C. Son aerobias estrictas (en su mayora),
microaerfilas y anaerobias facultativas.
Todas las Neiserias son Oxidasa positiva, no esporulados, no presentan movilidad y algunas
especies son encapsuladas y presentan fimbrias. La mayora fermentan carbohidratos, producen
cidos y no producen gas.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
PROTOCOLO
MUESTRA
BIOLOGICA
MEDIO DE
CUTLIVO
MORFOLOGA
DE COLONIA
GRAM
MORFOLOGIA
BACTERIANA
FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE
En el intestino del hombre existe una flora bacteriana constituida por Enterobacterias
(Escherichiacoli, Salmonella, Shigella, Klebsiela, entre otras), microorganismos anaerobios
faculattivos y aerobios, algunos de los cuales son patgenos para el hombre y causantes de
diferentes enfermedades.
El diagnstico y aislamiento del microorganismo causante de la enfermedad se realiza mediante el
Coprocultivo, es decir el cultivo de heces en la fase evolutiva de la enfermedad, para el aislameinto
del agente patgeno bacteriano.
La mayora de las enterobacterias tiene una accin invasiva penetrando en la mucosa intestinal
produciendo ulceraciones o abscesos, y el modo de transmisin es generalmente por ingesta de
alimentos contaminados con heces humanas.
Escherichiacoli, es un bacilo gramnegativo no esporulados, es miembro de la flora intestinal y en
determinadas condiciones patgena para el hombre, poseen factores de virulencia que les permite
causar infecciones en el tracto gastrointestinalasi como en el sistema urinario. La
E.colienterotoxigenico (ECET) es la causa comn de la Diarrea del viajero y produce en el
organismo enterotoxinas potentes y poseen factores de colonizacin; la E.colienteroinvasiva (ECEI)
y la E.colienterohemorragica (ECEH) son causantes de diarrea sanguinolenta.
Klebsiellapneumoniae, bacilos gramnegativos a veces con capsula, producen infecciones
oportunistas en el husped comprometido. El tracto respiratorio y urinario son loslugares de
infeccin ms frecuentes. Es difcil distinguir entre colonizacin e infeccin y son productoras de
endotoxinas.
Salmonella typhi, bacilo gramnegativo mvil peritrico. Son exclusivas del hombre y causan fiebre
tifoidea; otras, causan infecciones intestinales y a veces septicemias como la Salmonella paratyphi
A, B o C.
Muestra de heces
Muestras bacterianas diversas
Placas con Agar McConkey.
Placas con Agar SS.
Tubos con Agar TSI
Tubos con Agar LIA.
Set de coloracin Gram
Lminas portaobjetos.
Microscopio con aceite de inmersin.
Asas de siembra en aro y en aguja.
Agua destilada.
Suero fisiolgico.
Goteros.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
ENTEROBACTERIA
ESPECIE
BACTERIANA
TSI
Glu
Lac
H2S Gas
LIA
MC
SS
Colonia
Desc. Desa.
Lactosa
Crec.
Morfologa
E. coli
Klebsiella
Salmonella typhi
Shigella
Proteus
CUESTIONARIO
1.
Qu factores determinan la patogenicidad de Staphylococcusaureus?
2.
Qu caractersticas fisiolgicas identifican aStaphylococcusaureus?
3.
Mediante un mapa conceptual identifique los cuadros infecciosos producidos por las
especies de estafilococos.
4.
Fundamente Usted los tipos hemlisis producidas por los Streptococcus.
5.
Qu patologa producen los estreptococos hemolticos?
6.
Mediante un mapa conceptual identifique los cuadros infecciosos producidos por las
especies de estreptococos.
7.
Realice esquemas de los procedimientos y resultados de lo observado en la prctica de
bacterias gramnegativas.
8.
Fundamente mediante mapas conceptuales las pruebas bioqumicas referidas en la
presente prctica de laboratorio para bacterias gramnegativas
PRCTICA N11
DIAGNOSTICO MICROBIOLGICO DE CARIES DENTAL
OBJETIVOS
INTRODUCCION
La caries es una enfermedad multifactorial que se caracteriza por la destruccin de los tejidos del
diente como consecuencia de la desmineralizacin provocada por los cidos que genera la placa
bacteriana a partir de los restos de alimentos, que se exponen a las bacterias que fabrican ese
cido, de la dieta. La destruccin qumica dental se asocia a la ingesta de azcares y cidos
contenidos en bebidas y alimentos. La caries dental se asocia tambin a errores en las tcnicas de
higiene as como pastas dentales inadecuadas, falta de cepillado dental, ausencia de hilo dental,
as como tambin con una etiologa gentica. Se estudia an la influencia del pH de la saliva en
relacin a la caries. Tras la destruccin del esmalte ataca a la dentina y alcanza la pulpa dentaria
produciendo su inflamacin, pulpitis, y posterior necrosis (muerte pulpar). Si el diente no es
tratado puede llevar posteriormente a la inflamacin del rea que rodea el pice (extremo de la
raz) producindose una periodontitis apical, y pudiendo llegar a ocasionar un absceso, una
celulitis o incluso una angina de Ludwig.
MATERIALES
01 Incubadora
06 Microscopios pticos
01 Jarra Gaspak
06 pH metros
12 Tubos estriles.
06 Cajas metlicas con 03 curetas para dentina y 03 espejos bucales c/u esterilizadas para
la toma de muestra en paciente(tem 4.1). Por mesa de trabajo.
06 Cajas metlicas con 05 curetas para dentina y 05 espejos bucales c/u esterilizadas para
la toma de muestra in situ(tem 4.3). Por parejas.
06 goteros
PROCEDIMIENTO
A. TOMA DE MUESTRA DE CARIES DENTAL EN PACIENTE
A cuatro manos y dentro del rea de seguridad otorgada por el mechero de alcohol, con
03 curetas para dentina y espejos bucales estriles diferentes, se tomar 03 muestras de
caries dental: La primera de caries de esmalte, la segunda de caries de dentina y la tercera
de caries radicular.
Cada una de las muestras, siempre dentro del rea de seguridad del mechero, sern
colocadas en frascos estriles conteniendo caldo de tioglicolato, que sern recogidos 24
horas antes de la toma de muestra.
Cada frasco conteniendo la muestra ser rotulado y llevado al Laboratorio Central para ser
ingresados a la Incubadora (Estufa) a 37C por 48 horas.
Cada una de las muestras de caries dental se siembran por la tcnica de estra por
agotamiento sobre 01 placa petri con agar sangre y 01 placa con agar mitis salivarius (con
telurito de potasio al 1% y bacitracina al)
La placa con agar sangre ser colocada en la estufa (incubadora) a 37C por 48 horas.
Pasada las 48 horas se realizar la observacin macroscpica y microscpica de las
colonias crecidas en el medio de cultivo.
La placa con agar mitis salivarius, ser colocada en la Jarra Gaspak, para lograr
anaerobiosis, y llevada a la estufa a 37C por 48 horas. Pasada las 48 horas se realizar la
observacin macroscpica y microscpica de las colonias crecidas en el medio de cultivo.
De cada una de las muestras, se har extendido y fijacin al calor en una lmina
portaobjeto, y se realizar Tincin Gram, para luego realizar la observacin microscpica a
1000x con el objetivo de inmersin.
Preparacin de la mesa de trabajo: Por pareja colocar sobre la mesa 01 campo, 02 lminas
portaobjeto, 01 frasco con agua destilada estril, 01 gotero y 01 caja metlica estril
conteniendo 02 curetas para dentina y 02 espejo bucal estriles; y 02 pares de guantes
descartables.
Cada miembro de la pareja dentro del rea de seguridad que brinda el mechero y con la
ayuda de una cureta para dentina y un espejo bucal tomar una muestra de lesin cariosa
de preferencia de dentina, la cual ser colocada en el centro de una lmina portaobjeto y
a la cual con el gotero se le agregar una gota de agua destilada, hacindose el extendido
y fijacin.
Una vez fijada la muestra se le realizar coloracin GRAM, tras la cual se observar al
microscopio a 1000x con el objetivo de inmersin.
Tomar nota de las caractersticas de los microorganismos observados y comprelas con las
observaciones del tem 4.2.Emitir conclusiones.
El participante, dentro del rea de seguridad que brinda el mechero, verter saliva en un
primer tubo de ensayo estril, procedindose de inmediato a determinar el pH salival
inicial.
CUESTIONARIO
1. Mencione y describe los factores de virulencia del Streptococcus mutans en la
cariognesis.
2. Mencione y describa los factores de virulencia del Actinomyces spp en la cariognesis.
3. Mencione y describa los factores de virulencia del Lactobacillus spp en la cariognesis
4. Describa la lesin cariosa en esmalte
5. Describa la lesin cariosa en dentina
6. Describa la lesin cariosa radicular
7. Fundamente el concepto de pH crtico en la cariognesis.
SEMINARIO: DESINFECCION Y ESTERILIZACION. MECANISMO DE ACCION DE LOS AGENTES
FISICO QUIMICOS FRENTE A LOS MICROORGANISMOS.
PRCTICA N12
DIAGNOSTICO MICROBIOLGICO DE ENFERMEDAD PERIODONTAL
OBJETIVOS
ENFERMEDAD PERIODONTAL
Las enfermedades periodontales son un conjunto de patologas que afectan al Periodonto, es
decir al conjunto de tejidos que rodean y sujetan a los dientes de los maxilares. Son
enfermedades de naturaleza inflamatoria y de causa infecciosa (causadas por bacterias) y
dependiendo de su grado de afectacin denominamos gingivitis, cuando slo afecta al
periodonto superficial (enca) o periodontitis cuando se destruye hueso y ligamento que
sujetan a los dientes. Si la periodontitis no se trata evoluciona destruyendo todo el soporte del
diente y se acaba perdiendo la pieza dentaria.
PROCEDIMIENTO
A. TOMA DE MUESTRA DE ENFERMEDADES PERIODONTALES EN PACIENTE
A cuatro manos y dentro del rea de seguridad otorgada por el mechero de alcohol,
con 02 pinzas para algodn, 02 espejos bucales estriles diferentes y 02 conos de
papel estriles, se tomar 02 muestras de enfermedades periodontales: La primera de
surco gingival de un cuadro de gingivitis y la segunda bolsa periodontal producida por
un cuadro de periodontitis. Dejando el cono de papel 5 minutos en los lugares
mencionados para que tenga contacto con los microorganismos y lquido gingival.
Cada cono de papel con la muestra, siempre dentro del rea de seguridad del
mechero, ser colocado en un frasco estril conteniendo caldo de tioglicolato, que
sern recogidos 24 horas antes de la toma de muestra en el Laboratorio Central.
Cada una de las muestras se siembran por la tcnica de estra por agotamiento sobre 02
placa petri con agar sangre
Una placa con agar sangre ser colocada en la estufa (incubadora) a 37C por 48 horas.
Pasada las 48 horas se realizar la observacin macroscpica y microscpica de las
colonias crecidas en el medio de cultivo.
La segunda placa con agar sangre, ser colocada en la Jarra Gaspak, para lograr
anaerobiosis, y llevada a la estufa a 37C por 48 horas. Pasada las 48 horas se realizar la
observacin macroscpica y microscpica de las colonias crecidas en el medio de cultivo.
De cada una de las muestras, se har extendido y fijacin al calor en una lmina
portaobjeto, y se realizar Tincin Gram, para luego realizar la observacin microscpica a
1000x con el objetivo de inmersin.
Cada miembro de la pareja dentro del rea de seguridad que brinda el mechero y con
la ayuda de una pinza para algodn y un espejo bucal, colocar un cono de papel en el
surco gingival de la pieza 3.6 o 4.6, dejndola 5 minutos; despus de retirarla ser
colocada dentro de un vial con caldo de tioglicolato, rotulado y llevado a la incubadora
por 30 minutos a 37C. Luego con la ayuda de un asa de siembra, parte de la muestra
ser colocada en el centro de una lmina portaobjeto y a la cual con el gotero se le
agregar una gota de agua destilada, hacindose el extendido y fijacin.
CUESTIONARIO
1. Mencione los principales microorganismos asociados con las diferentes
formas clnicas de enfermedad periodontal.
2. Describa los mecanismos de formacin de las placas supragingival y
subgingival.
3. Describa los determinantes bioqumicos de la virulencia de los
microorganismos potencialmente periodontopatgenos.
SEMINARIO: DESINFECCION Y ESTERILIZACION EN EL CONSULTORIO ODONTOLOGICO
PRCTICA N13
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE LAS ENFERMEDADES PULPARES
OBJETIVOS
INTRODUCCION
En la actualidad, gran parte de los tratamientos que se realizan en la clnica son debidos a
condiciones patolgicas que afectan la pulpa y al peripice del diente. Aunque la pulpa dental
comparte muchas propiedades con otros tejidos conectivos del organismo, su peculiar localizacin
la dota de importantes caractersticas especiales.
La pulpa reacciona ante mecanismos directos e inmunitarios.
relacionan los microorganismos que llegan al tejido pulpar, ya sea por caries, traumatismos o
factores irritantes (productos bacterianos, bacterias, endotoxinas, etctera), que al penetrar a
travs de los tbulos dentinarios, destruyen los odontoblastos y las clulas subyacentes, y los
inmunolgicos responden factores del complemento e inmuno-globulinas. Ambos mecanismos
desencadenan el proceso inflamatorio conocido como pulpitis.
Ante las injurias de cualquier etiologa, el paquete vsculo nervioso inicia su defensa, inflamndose.
Esta reaccin inicialmente es local y circunscrita, si no se elimina el estmulo, el mecanismo
inflamatorio contina destruyendo en forma lenta e incesante la pulpa. En estas condiciones, las
pulpitis as constituidas, sern reversibles o no, independientemente de su vitalidad. Despus las
bacterias y sus bioproductos bacterianos y otros irritantes del tejido necrtico se diseminaran por
el conducto radicular a los tejidos periapicales, y provocan el desarrollo de lesiones inflamatorias
periapicales.
MATERIALES
01 Incubadora
06 Microscopios pticos
01 Jarra Gaspak
c/u
esterilizadas para la toma de muestra en paciente (tem 4.1). Por mesa de trabajo.
08 Conos de papel estriles, para tems 4.1 y 4.3. Por mesa de trabajo
06 goteros
PROCEDIMIENTO
A. TOMA DE MUESTRA DE ENFERMEDADES PULPARES EN PACIENTE
Cada cono de papel con la muestra, siempre dentro del rea de seguridad del
mechero, ser colocado en un frasco estril conteniendo caldo de tioglicolato, que
sern recogidos 24 horas antes de la toma de muestra en el Laboratorio Central.
Cada una de las muestras se siembran por la tcnica de estra por agotamiento
sobre 02 placa petri con agar sangre
Una placa con agar sangre ser colocada en la estufa (incubadora) a 37C por 48
horas. Pasada las 48 horas se realizar la observacin macroscpica y microscpica
de las colonias crecidas en el medio de cultivo.
La segunda placa con agar sangre, ser colocada en la Jarra Gaspak, para lograr
anaerobiosis, y llevada a la estufa a 37C por 48 horas. Pasada las 48 horas se
realizar la observacin macroscpica y microscpica de las colonias crecidas en el
medio de cultivo.
De cada una de las muestras, se har extendido y fijacin al calor en una lmina
portaobjeto, y se realizar Tincin Gram, para luego realizar la observacin
microscpica a 1000x con el objetivo de inmersin.
NOTA IMPORTANTE: Debido al caso especial que conlleva sustraer una muestra de
enfermedad pulpar es necesario tomar las precauciones debidas para encontrar
pacientes que reciban los tratamientos de biopulpectomia y necropulpectomia.
CUESTIONARIO
1. Mencione los principales microorganismos asociados con las diferentes formas
clnicas de enfermedad pulpar.
2. Describa los mecanismos bioqumicos que determine la virulencia de los
microorganismos productores de enfermedades pulpares.
SEMINARIO: DESINFECCION Y ESTERILIZACION EN CIRUGIA BUCAL
PRCTICA N14
SEGUNDA PRCTICA CALIFICADA
PRCTICA N15
SEMINARIO: ANTIBIOTICOS. CONCEPTO Y CLASIFICACION. ESTUDIO DE SENSIBILIDAD IN
VITRO
PRCTICA N16
SEMINARIO: ANTIBIOTICOS. MECANISMOS DE ACCION Y RESISTENCIA
PRCTICA N17
EXAMEN FINAL