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EXTRACCIN Y SEPARACIN DE MEZCLAS INSOLUBLES

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA: SEPARACIN DE COMPONENTES


Gabriela Reyes1. 4-763-2203
Universidad Autnoma de Chiriqu-Facultad de Ciencias Naturales y Exactas
Escuela de Qumica-Qumica de Productos Naturales
Septiembre 2015
1)denisse12-92@hotmail.com

Resumen
En esta experiencia se separaron
mezclas insolubles en agua a partir de
los extractos de agua y etanol de hoja de
Teca (Tectona Grandis); extrados por
maceracin anteriormente, los mismos
se colocaron en la centrifugadora a 5000
rpm durante 5 minutos. Luego se
procedi a realizar las extracciones cada
una con cantidades de solvente
(diclorometano) proporcional a la
cantidad de extracto que se tena.
Adems se adiciono NaHCO3, y se
procedi a realizar las separaciones.
Para cada extraccin se obtuvieron
distintas coloraciones. En la muestra
preparada con etanol los colores
obtenidos fueron: residuo B, rojo; residuo
C, amarillo-verde; residuo D, violeta
claro; residuo E (neutro), incoloro.
La mezcla que con agua se obtuvieron
los siguientes resultados: residuo B,
morado; residuo C, amarillo claro;
residuo D, violeta claro; residuo E
(neutro), incoloro.
Se realiz la determinacin de la
presencia de metabolitos presentes por
cromatografa de capa fina donde se
obtuvieron valores de rf para los
extractos de la mezcla con etanol de 0.90
para el patrn; 0.94 para el residuo B y
0.83 para la fase acuosa 3.
Los extractos de la mezcla de agua
tuvieron rf de 0.98 para el patrn y 0.85
para el residuo C.

Palabras clave: extraccin, fase acuosa,


fase orgnica, cromatografa de capa
fina, solvente.

Objetivos
Realizar extraccin con solvente para
separar mezclas insolubles en agua.
Determinar la cantidad necesaria de
solvente orgnico para que suceda la
separacin de fases.
Identificar a que se deben las
distintas coloraciones en base a su
pH.
Determinar por cromatografa de
capa fina la presencia de taninos.
Marco terico
La extraccin con solventes es una
operacin de transferencia de masas en
un sistema de dos fases lquidas. Se
basa en el principio por el cual un soluto
puedes distribuirse en cierta proporcin
entre dos disolventes inmiscibles.
(Moyano, 2008)
La cromatografa en capa fina consiste
en la separacin de los componentes de
una mezcla a travs de la migracin
diferencial sobre una capa fina de
absorbente,
retenida
sobre
una
superficie plana. (Bello, 2000).

Materiales y reactivos
Material
Embudo de
Separacin
Vasos qumicos
Frascos de vidrio
Probeta
Soporte Universal
Goteros
Capilares
Vela
Esptula
Policial
Plancha
Tubos de
centrfuga
Centrifugadora
Papel indicador

Reactivo

CH2Cl2

NaHCO3

Capacidad
125mL,
250mL
50mL
10mL,
100mL
-

Cantidad
2

pH 1-14

1
+10

2
18
2

Na2SO4

1
2
9
1
1
1
1
6

Propiedades Fsicas y
qumicas.
Toxicidad.
Estado fsico: Liquido voltil
Color: Incoloro.
Punto de ebullicin: 39,8
40C. Punto de fusin: -97C.
Densidad relativa: 1,326 g/ml.
Olor: Penetrante.
La sustancia irrita los ojos, la
piel y el tracto respiratorio. La
ingestin del lquido puede
originar aspiracin dentro de
los pulmones.
Punto de Ebullicin: No hierve,
se descompone.
Densidad Relativa: 2,159.
Solubilidad en Agua (8,7g/100
g solucin; 9,6 g/100 g agua a
20C). Solubilidad en otros
Lquidos: Ligeramente soluble
en etanol
En general, las exposiciones a
altas concentraciones por largo
tiempo, pueden causar flujo
nasal, ligero dolor de cabeza,
nuseas.

NaOH

HCl

Estado Fsico: slido cristalino


Color: blanco
Olor: inoloro
Punto De Fusin: 884 C
Solubilidad En agua: 16.3%A
20c 29.8% A 100c
Puede irritar la nariz la
garganta y los pulmones.
Ingestin: el sulfato de sodio no
se considera toxico pero no
debe ingerirse.
Puede irritar la boca, esfago y
estmago.
Contacto con los Ojos y piel:
Puede causar irritacin.
Punto de ebullicin: 1388C
Punto de fusin: 318.4C
Presin de vapor: 1mm (739C)
Densidad: 2.13 g/ml (25C)
Solubilidad: Soluble en agua,
alcoholes y glicerol, insoluble
en acetona y ter.
Inhalacin: causa irritacin y
dao del tracto respiratorio.
Contacto
con
ojos:
es
extremadamente corrosivo.
Ingestin: Causa quemaduras
severas en la boca.
Presin de vapor (17.8C): 4
atm
Densidad del vapor: 1.27
Puntos de ebullicin de
disoluciones acuosas: 48.72C
Inhalacin: el gas causa
dificultad para respirar, tos e
inflamacin y ulceracin.
Contacto con ojos: es un
irritante;
puede
causar
quemaduras, reducir la visin o
la prdida total de sta.
Contacto con la piel: causa
quemaduras serias, dermatitis
y fotosensibilizacin.
Ingestin: Produce corrosin
de las membranas mucosas de
la boca, esfago y estmago.
Olor: Caracterstico.
Punto inicial de ebullicin e
intervalo de ebullicin: 118 C
Punto de inflamacin: 36 C

n-Butanol

n-Propanol

Presin de vapor: 6,7 hPa


(20 C)
Densidad de vapor:
Densidad relativa: (20/20) 0,81
Solubilidad: 77 g/l agua 20 C
Contacto
con
la
piel:
irritaciones
Por
contacto
ocular: trastornos de visin.
Por
ingestin:
nuseas,
vmitos.
Estado fsico: lquido.
Color: incoloro.
Olor: alcohlico.
Punto de inflamacin 26C
Presin de vapor: 27.998 hPa
Densidad 0.805 g/cm3
Contacto con la piel: puede
irritar la piel.
Irritacin ocular ligera.
Nocivo por inhalacin.

Obtencin de la fase acuosa (3) y la


fase orgnica (3)

A la fase acuosa 2 aadimos HCl 10%


(pH=2) y diclorometano.
Obtuvimos la fase acuosa 3 y la fase
orgnica 3'.

Obtencin del residuo B (cidos)

Se lav la fase orgnica 3' con


agua.
Adicionamos Sulfato de Sodio
anhidro.

Fase experimental
A. Separacin
de
insolubles en agua.

mezclas

Obtencin de la fase acuosa (2) y la


fase orgnica (2)

Adicionamos 10mL de la mezcla a


los tubos de centrifuga.

Centrifugamos a 5000 rpm


durante 5 minutos.

Aadimos 10mL de diclorometano


Adicionamos una pizca de NaHCO3

Colocamos la mezcla en el
embudo de separcin y agitamos.

Separamos la fase acuosa (2) y la


fase orgnica (2)

Evaporamos el solvente y
guardamos el residuo.

Obtencin de la fase acuosa (4) y la


fase orgnica (4)

A la fase orgnica 2' aadimos


NaOH 10% (pH=12)

Agitamos el embudo de
separacin.

Separamos la fase acuosa (4) y la


fase orgnica (4')

Obtencin de la fase acuosa (5) y la


fase orgnica (5)

A la fase acuosa 4 aadimos HCl 10%


(pH=5).

Adicionamos diclorometano
agitamos el embudo de esparacin.

Separamos la fase acuosa 5 y la fas


orgnica 5'

Nota: A la fase orgnica 5 se le aplico el


mismo procedimiento para la fase
orgnica 3, obtenindose el residuo C
(fenoles).

Obtencin de la fase acuosa (6) y la


fase orgnica (6)

Obtencin de la fase acuosa (7) y la


fase orgnica (7)

A la fase acuosa 6 aadimos NaOH


10% (pH=12) y diclorometano.

Agitamos el embudo de separacin.

Separamos la fase acuosa (7) y la


fase orgnica (7')

Nota: A la fase orgnica 7 se le aplico el


mismo procedimiento para la fase
orgnica 3, obtenindose el residuo D
(bsicos).
Obtencin de la fase acuosa (8) y la
fase orgnica (8)

A la fase orgnica 4' aadimos


HCl 10%

A la fase orgnica 6' aadimos


NaOH 10% (pH=12).

Agitamos el embudo de
separacin.

Agitamos el embudo de
separacin.

Separamos la fase acuosa (6) y la


fase orgnica (6')

Separamos la fase acuosa (8) y la


fase orgnica (8')

Nota: A la fase orgnica 8 se le aplico el


mismo procedimiento para la fase
orgnica 3, obtenindose el residuo E
(neutros).

B. Separacin
de
los
componentes de la mezcla por
cromatografa en capa fina.

1
2
3

Se inyectaron los extractos


guardaos en la placa para
cromatografia.
Se prepar una mezcla de
butanol:propanol:agua (4:1:5)
Se colocaron las placas en un
envase y se dejo recorrer la
muestra hasta observar las banda

Cuadro 1. Residuos de la mezcla con


agua.
Extracto
B

Residuo

Para una mejor apreciacion se


leyeron los recorridos en la
camara de UV visible
E

Resultados
Preparacin de reactivos

NaOH al 10%
Extracciones de la mezcla con etanol.

10g de NaOH en 90 mL de agua

Cuadro 2. Residuos de la mezcla con


etanol.

HCl al 10%

10 mL de HCl en 90 mL de agua

Extracto
B

Se prepar una mezcla de disolvente


Butanol-Propanol-Agua(2:0.5:2.5) mL

A.
Separacin
insolubles en agua.

de

mezclas
C

Extracciones de la mezcla con agua.

Residuo

Discusin
En esta experiencia se realizaron
diferentes extracciones utilizando los
extractos anteriormente obtenidos por
maceracin; con agua y etanol, de las
hojas de la planta de Teca (Tectona
Grandis), las extracciones se realizaron
con la mezcla preparada y diclorometano
como solvente, se adiciono adems
NaHCO3 para extraer la fase orgnica.
Para realizar una extraccin de
compuestos orgnicos los volmenes de
disolventes tanto acuoso como orgnico
dependen de la cantidad de sustancia a
separar. (Lamarque, 2008).
Por los que las cantidades de solvente
para la extraccin no sobrepasaban la
cantidad de muestra que se tena.
Al momento de realizar las extracciones
las fases acuosas se juntan y se lavan
con un solvente orgnico fresco para
remover la pequea cantidad de la fase
orgnica original que pudo arrastrarse
con el extracto acuoso. La solucin
orgnica original de la cual se extrajeron
los componentes bsicos, se extrae con
porciones sucesivas de NaOH acuoso.
Los componentes cidos son extrados
de esta forma de la solucin original
permaneciendo en la fase acuosa.
(Lamarque, 2008).

En la planta de Teca se encuentran


presentes metabolitos secundarios como
los taninos y polifenoles, los cuales
inhiben la accin enzimtica. Los
metabolitos secundarios sern los que
permitan interacciones ecolgicas de la
planta con su entorno. (Rohene, 2011).
Gracias a cada uno de estos metabolitos
presentes en la planta se logr observar
los
diferentes
cambios
en
las
coloraciones de las extracciones
realizadas. Tambin las antocianinas se
consideran metabolitos secundarios.
Las
antocianinas
son
pigmentos
hidrosolubles que otorgan el color rojo,
prpura o azul a las plantas. Pertenecen
al grupo de los flavonoides. Su
estabilidad est determinada por el grado
de oxidacin, temperatura, fuerza inica,
la acidez y molculas complejas.
molculas en las que se produce el
efecto batocrmico, que consiste en que
al cambiar la acidez, es decir el pH, se
pasa del rojo anaranjado en condiciones
cidas, al rojo intenso-violeta en
condiciones neutras, y al rojo prpuraazul en condiciones alcalinas. El pH tiene
efecto en la estructura y la estabilidad de
las antocianinas. La acidez tiene un
efecto protector sobre la molcula. En
soluciones acuosas a valores de pH
inferiores a 2, bsicamente la totalidad
del pigmento se encuentra en su forma
ms estable de ion oxonio o catin flavilio
de color rojo intenso. A valores de pH
ms altos ocurre una prdida del protn
y adicin de agua en la posicin 2, dando
lugar a un equilibrio entre la pseudobase
carbinol o hemicetal y la forma chalcona,
o de cadena abierta. Tanto el hemicetal
como la chalcona, son formas incoloras y
bastante inestables. A valores de pH
superiores a 7 se presentan las formas
quinoidales de color prpura que se

degradan rpidamente por oxidacin con


el aire. (Muoz, 2007).
El cambio en los pH en cada extraccin
es el factor determinante de la diferencia
en las coloraciones apreciadas en el
cuadro 1 y cuadro 2 de los residuos
obtenidos ya que dependiendo a su pH
cido o bsico los mismos fueron
variando.
Finalmente se lleva a cabo la extraccin
del residuo E (neutro) donde se utiliza
Sulfato de Sodio Anhidro para eliminar
las molculas de agua y se evapora el
solvente para obtener el residuo final que
consiste en un extracto ms puro y con
un pH neutro.
B.
Separacin de los componentes
de la mezcla por cromatografa en
capa fina.
Tabla 1. Recorrido de los extractos en
capa fina. Mezcla con agua.

Rf (Residuo C)= 5.6cm/6.6cm=0.85


Tabla 2. Recorrido de los extractos en
capa fina. Mezcla con etanol.
Muestra

Color

Morado
Rojo
Amarillo
Violeta

R. del
disolven
te (cm)
7.2
7.2
7.2
7.2

R. de la
muestra
(cm)
6.5
6.8
-----

Patrn
Residuo B
Residuo C
Residuo D
Residuo
E
Fase
acuosa 3
Fase
acuosa 5
Fase
acuosa 7
Fase
acuosa 8

Incoloro

7.2

---

Rojo claro

7.2

6.0

incoloro

7.2

---

No va, no
tiene color
Ligerament
e violeta

7.2

---

7.2

---

Clculos
Rf (patrn)= 6.5cm/7.2cm=0.90
Rf (Residuo B)= 6.8cm/7.2cm=0.94

Muestra

Color

Patrn
Residuo B

morado
No va, no
tiene color
Amarillo
claro
Violeta
claro
Incoloro

Residuo C
Residuo D
Residuo
E
Fase
acuosa 3
Fase
acuosa 5
Fase
acuosa 7
Fase
acuosa 8

R. del
disolven
te (cm)
6.6
6.6

R. de la
muestra
(cm)
6.5
---

6.6

5.6

6.6

---

6.6

---

Rojo tenue

6.6

---

incoloro

6.6

---

No va, no
tiene color
Morado
tenue

6.6

---

6.6

---

Clculos
Rf (patrn)= 6.5cm/6.6cm=0.98

Rf (F.3 acuosa)= 6.0cm/7.2cm=0.83


Figura 1. Vista del recorrido de las
bandas en el ultravioleta.

Discusin
Los taninos son metabolitos secundarios
cuyo papel primordial en la planta es
como
medio
de
defensa,
son

compuestos polifenlicos de alto peso


molecular. (Valle, 2013).

(Tectona Grandis) contiene taninos en


su estructura. (Vsquez, 2013)

El recorrido del disolvente fue de 6.6 para


la muestra con agua y 7.2 para la
muestra con etanol.
Los recorridos obtenidos se pueden
observar en la tabla 1 y la tabla 2. Los
valores de rf para los extractos de la
mezcla con etanol de 0.90 para el patrn;
0.94 para el residuo B y 0.83 para la fase
acuosa 3. Los extractos de la mezcla de
agua tuvieron rf de 0.98 para el patrn y
0.85 para el residuo C.

Conclusiones

La retencin se puede explicar en base a


la competencia que se establece entre el
soluto a separar y la fase mvil por
adsorberse a los centros activos polares
de la fase estacionaria.
Uno de los factores importantes de esta
cromatografa es la naturaleza del
disolvente. El solvente preparado tiene la
caracterstica de ser polar prtico. Por lo
que para un mismo compuesto, un
aumento en la polaridad del disolvente
facilita su desplazamiento en la placa.
(Daz, 2006).
La mezcla de disolventes ButanolPropanol-Agua (2:0.5:2.5) mL, es un
sistema disolvente especfico para
reconocer la presencia de taninos.
El revelado de las placas es el paso final
de ya que el mismo se realiza en una
cmara de luz UV donde se logr
apreciar con mejor precisin las bandas
obtenidas, figura 1.
La mayor parte de las placas de
cromatografa llevan un indicador
fluorescente que permite la visualizacin
de los compuestos activos a la luz
ultravioleta (254 nm). El indicador
absorbe la luz UV y emite luz visible.
De acuerdo a los resultados obtenidos se
determin que la planta de Teca

La
extraccin
con
solventes
orgnicos es una tcnica empleada
para separar mezclas insolubles ya
que con ella se logra obtener
extractos ms puros; purifica los
componentes presentes en la fase
acuosa y orgnica.
La cantidad utilizada para una
extraccin debe ser mnima adems
debe ir en proporcin a la cantidad de
solucin que se tiene para extraer.
La coloracin presente en los
extractos se debe a los metabolitos
secundarios presentes en la planta,
como es el caso de la antocianina la
cual cambia de coloracin de acuerdo
al pH del medio.
Por medio de la cromatografa de
capa fina se logr identificar otro
metabolito secundario presente en la
Tectona Grandis en este caso los
taninos, que fueron reconocidos por
el empleo de una mezcla de
solventes especficos para su
identificacin.
El UV visible permiti ver con mayor
claridad las bandas en la placa
determinndose as el recorrido
correcto de los metabolitos.
Referencias bibliogrficas
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capa
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en:
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Recuperado de:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/tecnof
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