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CAPTURA HBRIDA

La prueba del PVH por Captura Hbrida es una prueba de laboratorio que se
utiliza para detectar la presencia ausencia del Papiloma Virus Humano
mediante la deteccin del ADN del virus en las clulas cervicales de la mujer
(parte baja del tero) alcanzando niveles notables de deteccin. Es una prueba
considerada 'Gold Standard' para la identificacin de PVH en los pases
desarrollados.

Cuando el material gentico del PVH es detectado en estas clulas, puede


indicar la presencia de enfermedad la propensin a desarrollarla. La muestra
de clulas cervicales de cuello uterino se obtiene usualmente durante la
visita ginecolgica mediante la prueba de rutina del Papanicolaou en la cual se
recolectan las clulas de la superficie del cuello uterino por medio de un
delicado raspado de la zona.

El uso de la prueba de PVH por Captura Hbrida junto con el Papanicolaou


pueden disminuir el riesgo a desarrollar cncer de cuello uterino. El cncer de
cuello uterino es uno de los pocos que realmente puede prevenirse. Su
desarrollo se asocia a ciertos tipo de PVH llamados virus de Alto Riesgo, que se
encuentran en el 99.8% de los casos de cncer de cuello uterino. Existen ms
de 100 tipos del Virus Papiloma Humano y slo algunos de ellos tienen relacin
con el desarrollo de esta enfermedad, otros se vinculan a la aparicin de
verrugas genitales y otros desaparecen de manera espontnea en el tiempo.

La prueba de Captura Hbrida permite identificar la presencia del virus en las


clulas y determinar
La deteccin de la infeccin por HPV puede realizarse mediante distintos
mtodos. Podemos clasificar bsicamente estos mtodos en dos grupos:
Diagnstico morfolgico (Papanicolau Biopsias)
Deteccin de secuencias genmicas del HPV (tcnicas de biologa molecular)
1) DIAGNSTICO MORFOLGICO:
Consiste en la identificacin morfolgica de las alteraciones producidas por
dichos virus en las clulas escamosas, las cuales pueden observarse tanto en
el examen citolgico (Papanicolau) como en el estudio histolgico (Biopsias).
Clsicamente se ha considerado la coilocitosis o atipia coiloctica como el signo
morfolgico caracterstico de la infeccin por HPV. Los cambios coilocticos

pueden detectarse en las lesiones premalignas del cuello uterino pero son
mucho ms frecuentes en las lesiones de bajo grado que en las de alto grado.
Sin embargo, aunque la presencia inequvoca de coilocitos indica infeccin
vrica productiva con una gran especificidad, es un mtodo muy poco sensible
puesto que la mayora de las lesiones escamosas de alto grado y los
carcinomas invasores no contienen habitualmente coilocitos, mientras que
tcnicas mas sofisticadas de biologa molecular demuestran la infeccin en
prcticamente el 100% de los casos.
2) DETECCIN DE SECUENCIAS GENMICAS DEL HPV (TCNICAS DE BIOLOGA
MOLECULAR).
Estas tcnicas se basan en la deteccin especfica de secuencias de DNA del
HPV en el material procedente del rea a estudiar. Bsicamente, todas ellas
consisten en enfrentar el DNA de la muestra con una sonda cuya secuencia es
complementaria de la secuencia de DNA que intentamos detectar.
Las tcnicas de biologa molecular ms empleadas en el estudio del HPV son:
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y Captura Hbrida.
2.1) Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
Su fundamento consiste en aplicar un proceso que multiplica el nmero de
copias de un segmento de DNA viral, si est presente en la muestra. Este
proceso, que se conoce como amplificacin, hace que sea una tcnica muy
sensible capaz de detectar la presencia de muy pocas copias de DNA del virus,
aunque estn presentes en una sola clula entre varios miles.
Sin embargo, esta gran sensibilidad que es su gran virtud es tambin su
principal debilidad, puesto que detectan un nmero elevado de pacientes con
infecciones no progresivas y mujeres con infeccin latente sin alteraciones
citolgicas, cuya evolucin desconocemos, pero que probablemente se
resuelvan en gran parte de forma espontnea. Las tcnicas basadas en la PCR
tampoco permiten cuantificar adecuadamente el DNA viral presente en la
muestra. Por otro lado, debe contarse con sondas complementarias para cada
uno de los tipos de HPV que se desee identificar. Otro de sus problemas es la
elevada probabilidad de contaminaciones y falsos positivos.
2.2) Captura de hbridos
En esta tcnica se utilizan sondas de RNA capaces de detectar varios tipos de
HPV. Cuando la muestra presenta infeccin vrica se produce un hbrido RNADNA que es capturado por un anticuerpo especfico contra hbridos y detectado
mediante una reaccin tipo ELISA por quimioluminiscencia y que proporciona
incluso informacin sobre la cantidad de DNA viral presente en la muestra, que
parece tener relacin con la presencia de lesiones de alto grado. La tcnica

dispone de dos sondas, una para virus de bajo riesgo y otra para virus de alto
riesgo.
El test Captura Hbrida II en microplaca ( realizado actualmente en nuestro
laboratorio) permite detectar 5 virus de bajo riesgo (6,11,42,43,44) y 13 tipos
de riesgo alto o intermedio (16,18,31,33,35,39,45, 51,52,56,58,59,68),
involucrados estos ltimos en el 90% de casos de cncer de cuello.
La deteccin de HPV mediante Captura Hibrida II es de mucha utilidad en la
evaluacin de pacientes referidas por lesiones citolgicas, puesto que esta
tcnica tiene un alto valor predictivo negativo, por lo tanto su negatividad
permite excluir con un elevado grado de certeza la existencia de una lesin
premaligna de alto grado y remitir de nuevo estas mujeres a los controles de
rutina.
Otra ventaja es la orientacin clnica de las pacientes con citologa de ASCUS.
En nuestra experiencia, la negatividad del estudio prcticamente descarta la
existencia de lesin cervical causada por HPV.

Por ltimo, la Captura Hibrida proporciona una cuantificacin de HPV. En lineas


generales existe un incremento progresivo de carga viral evaluada en unidades
lumnicas relativas (RLU), paralelo a la gravedad de la lesin. La presencia de
niveles superiores a 100 RLU se asocian a lesin cervical en ms del 90% de los
casos y esta asociacin fue prcticamente constante para niveles superiores a
1000 RLU. Por el contrario, un elevado porcentaje de casos con
determinaciones inferiores a las 10 RLU, no presentan lesin cervical.
Valores de las relaciones RLU menores de 5, indican pequeo nmero de copias
virales por clula, pudiendo significar infeccin viral latente o en fase de
remisin espontnea, en estos casos, a criterio clnico se sugiere antes de
cualquier tratamiento confirmar la presencia de infeccin activa con nueva
muestra luego de un intervalo de 3 meses. Para evaluar la eficacia de los
tratamientos, est indicado realizar nueva muestra despus de 3 meses del
trmino del mismo. El hallazgo de elevadas tasas de relaciones RLU luego de
tratamientos y ante ausencia de manifestaciones cito/colposcpicas, indican
alta probabilidad de recidiva.
El potencial clnico de la deteccin del DNA HPV por Captura Hbrida
contribuye:

1.

Una mejor evaluacin diagnstica morfolgica cito colpo histolgica

2.
Deteccin de HPV en pacientes con PAPs anormales o indeterminados
(ASCUS) y/o imgenes colposcpicas no concluyentes.
3.

Falta de correlacin colpo-cito-histolgica.

4.
Lesiones de bajo y alto grado diagnosticadas por citologa y/o histologa
en los que es necesario descartar la presencia de tipos vrales oncognicos
5.

Control post tratamiento de las lesiones intraepiteliales.

La deteccin de DNA HPV por Captura Hbrida puede utilizarse como mtodo
de screening complementando al PAP.

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