UNIVERSIDAD

NACIONAL PEDRO
RUIZ GALLO

ALUMNA:

LARREA INOAN, KELLY.

ESCUELA PROFESIONAL:

INGENIERA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS.

CURSO:
BIOQUMICA GENERAL.

TEMA:
PRACTICAS DE LABORATORIO.

DOCENTE:
ANABEL CHVEZ ALARCN.

LAMBAYEQUE, 27 DE JULIO DE 2015

PRCTICA N 1: ESPECTROFOTOMETRIA

Q
I
A

I.

INTRODUCCIN.

La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas

para la deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin,
sensibilidad y su aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomolculas, etc.) y estado de agregacin (slido, lquido,
gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son
relativamente sencillos.
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de
energa interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos
organismos, entre ellos el de la fotosntesis en plantas y bacterias. La Mecnica
Cuntica nos dice que la luz est compuesta de fotones cada uno de los cules
tiene una energa:
Efotn =h . v=h . c / Donde c es la velocidad de la luz, es su frecuencia,

su longitud de onda y

h= 6.6 10-34Js es la constante de Planck.

Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de longitud de onda
, esto significa que las molculas de esa sustancia absorben fotones de
esa longitud de onda.
En esta prctica estudiaremos las propiedades de un cuerpo, en que nos ayuda
la espectrofotometra y conoceremos ms acerca de este tema elaborando una
curva en papel milimetrado.

II.

OBJETIVOS.

Representar grficamente las longitudes de ondaen duncion delas

absorbancias.
Adquirir conocimiento de la absorcin de la luz.
Interactuar con la absorbancia.

III.

MARCO TERICO.

ESPECTROFOTOMETRIA.

Espectro.
En un tomo los electrones se hallan dispuestos alrededor del ncleo en
orbitas de diferente energa; mientras los electrones permanecen en sus
orbitas particulares la energa del tomo permanece constante, pero si un
electrn cambia de rbita, cambia tambin la energa del tomo. La
energa de un tomo cambiara si absorbe o emite radiacin.
El espectro de absorcin se observa cuando se pasa a travs de una
sustancia una radiacin de una gama de frecuencias. Se absorben
aquellas frecuencias que son capaces de producir excitacin electrnica.
ABSORBANCIA.

Absorbancia UV y Visible.
Proporcionar informacin cualitativa y cuantitativa sobre molculas
orgnicas, inorgnicas y bioqumicas. Se puede clasificar en:
Absorcin por los compuestos orgnicos: la absorcin de la radiacin se
debe a dos tipos de electrones: los electrones compartidos por varios
tomos y que participan directamente en los enlaces y los electrones
externos no compartidos, que se localizan principalmente en los tomos
de oxgeno, halogenuros, azufre y nitrgeno. La longitud de onda en que
se absorbe una molcula orgnica va a depender de la fuerza con la que
se sujeten los electrones.
Absorcin por especies inorgnicas: en general absorben bandas amplias
de radiacin visible, por lo menos en uno de sus estados de oxidacin,
por consiguiente son coloreados. La absorcin de la radiacin implica una
serie de transiciones entre los orbitales llenos y vacos del ion metlico,
con energas que dependen de la naturaleza de los enlazados. El mximo
nivel de absorbencia depender de la ubicacin en la tabla peridica del
elemento, y de su estado de oxidacin.
Absorcin por transferencia de carga: es importante en el anlisis
cuantitativo, ya que las absortividades molares son particularmente
grandes y se logra una alta sensibilidad. Se componen de un grupo
donador de electrones enlazados, a otro que los acepta, al absorber la
radiacin se transfiere un electrn del donador a un orbital que est
asociado al aceptor.

 Absorbancia de la radiacin infrarroja.

Es una tcnica tambin usada en la qumica analtica, puede dar
informacin acerca de la naturaleza de los compuestos, de la existencia o
no de grupos funcionales y de la estructura de las molculas. Aunque
tiene menos aplicaciones en el anlisis cuantitativo que la absorcin UV o
visible.
Con excepcin de las molculas diatmicas mononucleares; todas las
molculas orgnicas e inorgnicas absorben la radiacin infrarroja. La
absorcin de la radiacin infrarroja lleva a una serie de transiciones entre
los niveles de energa de vibracin de los estados energticos
electrnicos, con la ms baja excitacin. La forma en que puede vibrar
una molcula est relacionada con el nmero de sus enlaces y por tanto,
con el nmero de tomos que la componen.

TRANSMITANCIA.
La transmitancia es la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en determinada
cantidad de tiempo. Existen diferentes clases de transmitancia, pero nos centraremos
en la transmitancia ptica.
Transmitancia ptica: se refiere a la cantidad de luz que atraviesa un cuerpo, en una
determinada longitud de onda. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo
traslucido, una parte de esa luz es absorbida por el mismo. y otra fraccin de ese haz
de luz atravesara el cuerpo, segn su transmitancia.
LEYES DE ABSORCIN.
Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una cierta prdida de
intensidad, debido a la absorcin por parte de la sustancia.
Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz transmitida:

T =I S / I 0 ; %T =(I S / I 0) x 100.
Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para evitar
este error se hace una primera medida con una solucin de referencia o BLANCO, que
contiene todos los posibles compuestos que intervienen en la lectura menos el que
vamos a medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a
esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se utiliz en la medida del
blanco.
La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la relacin
entre A y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y la de la T es
inversamente proporcional.

La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente:

Si el %T = 100
Si el %T = 0

A = 2-log T = 2-log 100 = 0

A = 2-log 0 =

En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el aparato

lo que mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia.

LEY DE BEER: La absorbancia de una solucin es directamente

proporcional a la concentracin y a la longitud del paso de la luz.
A=e . b . c
Siendo:

A: absorbancia. No tiene unidades.

e: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de
absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen
condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de solventes,
etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).
b: es la longitud de paso de la luz, en cm.
c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L.

La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una

sustancia podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos
formas:
Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema
(P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente relacin matemtica entre
ellas:

As Cs
Ap
=
; Cp=Cs
Ap Cp
As
Siendo:

As = absorbancia de la solucin estndar.

Ap = absorbancia de la solucin problema.
Cs = concentracin de la solucin estndar.
Cp = concentracin de la solucin problema.

A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la representacin

grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la
Concentracin (eje de abscisas). Se ensayan varias soluciones de concentracin
conocida y se determinan sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una
recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por
interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de calibracin.
Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del
cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y
Concentracin.
Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja
de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la
Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin
falsamente baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que
su concentracin entre en los lmites de la linealidad.
Empleo de los Factores de Calibracin: Para reactivos estables y sistemas
fotomtricos estables, este factor se puede mantener constante, siendo slo necesario
ensayar las muestras problema multiplicando la A resultante por el factor F.

LEY DE LAMBERT: La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz

absorbida por un objeto depende de la distancia recorrida por la luz.
Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pensemos que ambos tienen
la misma cantidad de agua y la misma concentracin de azcar; pero el
segundo tiene un dimetro mayor que el otro. Segn la ley de Lambert, si
hiciramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que
saldra del otro lado seria mayor que si repitiramos esto en el segundo, ya que
en este ltimo las ondas electromagnticas chocan contra un mayor nmero de
tomos o/y molculas y son absorbidos por estos, tal como se explic en la ley
de Beer.

IV.

MATERIALES.
Papel milimetrado.
Lpiz.

V.

PROCEDIMIENTO.

Con ayuda de un lapiz

ubicar las longitudes de
honda en una hoja de
papel milimetrado .

VI.

RESULTADOS.

VII.

CONCLUSIONES.
La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos
para absorber la radiacin, pudimos observar cmo,
dependiendo de la concentracin y la longitud, puede alcanzar
un punto mximo de absorcin.
La longitud y absorbancia son proporcionales hasta alcanzar
el punto mximo y de all empieza a descender.

VIII.

BIBLIOGRAFIA
http://es.slideshare.net/joselgallego/informe-de-laboratorio8908350
http://es.slideshare.net/juandavidjaramilloorozco1/laboratoriode-espectrofotometra-1
MANUAL DE ESPECTROFOTOMETRA EN ENOLOGA.
Autores: Mariano Guzmn Alfeo.

PRCTICA N 2: EXAMEN BIOQUMICO DE ORINA PATOLGICA

I.

INTRODUCCION.
Un examen general de orina, tambin llamado anlisis de orina o
uroanlisis, consiste en una serie de exmenes efectuados sobre la
orina, constituyendo uno de los mtodos ms comunes de
diagnstico mdico. Un examen completo consta de varias
determinaciones: un examen macroscpico, un examen fsicoqumico, un examen microscpico y, si fuera necesario, un urocultivo.
El anlisis fsico-qumico se puede efectuar mediante tiras reactivas
cuyos resultados se leen de acuerdo a los cambios de color.
Ya en la antigedad era comn el diagnstico de enfermedades con
base en la observacin de la orina. El mtodo, denominado
uroscopia, basado en la observacin de las propiedades
organolpticas de la orina fue descrito por Galeno y su aplicacin
tuvo lugar por muchos siglos en el contexto de la teora de los cuatro
humores apoyada por Hipcrates.
Aunque la tecnologa de anlisis qumico cualitativo y cuantitativo
permiti desde finales del siglo XIX la superacin del mtodo
uroscpico, las propiedades organolpticas, tpicamente olor y color,
permiten todava un diagnstico inmediato de numerosas
enfermedades.

II.

OBJETIVOS.
Realizar un examen fsico y qumico de orina.
Determinar las caractersticas organolpticas de la orina.
Determinar sustancias qumicas en la orina.

III.

MARCO TEORICO.
ANALISIS DE ORINA

En 1827 Richard Bright introdujo el anlisis de orina como parte del examen mdico de
rutina. El anlisis de orina proporciona informacin valiosa para la deteccin,
diagnstico diferencial y valoracin de alteraciones nefro-urolgicas, y,
ocasionalmente, puede revelar elementos de enfermedades sistmicas que
transcurren silentes o asintomticas. Su interpretacin data desde los albores de la
medicina, y gracias al desarrollo de tcnicas bioqumicas aplicadas a la orina, la
informacin que aporta, as como su exactitud, estn en continuo crecimiento. Las
caractersticas ms tiles del examen de orina son:

Lo fcil y rpidamente disponible de la muestra a analizar.

La posibilidad de obtener informacin sobre muchas funciones
metablicas importantes de nuestra fisiologa.
Ser un mtodo de laboratorio simple y rpido.
Los elementos que constituyen la orina son dinmicos y pueden variar con la dieta,
actividad, consumo de medicamentos y otras variables.
Tcnica de recoleccin de orina
La orina debera ser recolectada con un mnimo de contaminacin, idealmente con una
muestra de segundo chorro, cateterismo o puncin vesical; los dos ltimos
especialmente en nios pequeos o que no colaboran. Una alcuota debe ser

depositada en un frasco limpio y seco, y analizada lo ms rpidamente posible (dentro

de una hora), a menos que se le agreguen preservantes y sea mantenida en
refrigerador. A excepcin de que lo que se est investigando lo contraindique, es
preferible la orina de la primera miccin matinal.
Para el anlisis microscpico, se ha estandarizado la preparacin de la muestra para
poder hacer comparaciones vlidas entre dos o ms muestras: la muestra, de 10 a 12
ml, se debe centrifugar a 2000 r.p.m. por 5 minutos. Luego se bota el sobrenadante,
dejando 0.5 a 1 ml para resuspensin del sedimento. Finalmente, una gota del
resuspendido se coloca sobre un portaobjeto y se cubre con un cubreobjetos para
luego ser observado al microscopio. Para el mejor anlisis de elementos celulares en
la orina, puede utilizarse una gota de azul de toluidina como tincin del sedimento.
Anlisis Fsico.
Sin lugar a dudas, la evaluacin de las caractersticas fsicas de la orina fue el inicio
del laboratorio en medicina, como lo confirman algunos dibujos humanos del perodo
paleoltico. Esta parte del anlisis de orina sigue siendo una de las maneras ms
frecuentes de sospechar alteraciones metablicas o patologa renal oculta.

Apariencia: se refiere a la claridad o grado de turbidez de la orina.

Color: el espectro normal va desde el cristalino al amarillo oscuro,
dependiendo especialmente de su concentracin. Esta coloracin es
dada principalmente por el pigmento urocromo.

Olor: el olor caracterstico es sui generis o aromtico (debido a cidos

orgnicos voltiles), dependiendo en algunas ocasiones, al igual que con
el color, de alimentos o drogas consumidas.

Gravedad especfica: se define como la densidad de una solucin (orina)

comparada con la densidad de un volumen similar de agua destilada a
igual temperatura, y refleja la capacidad del rin de concentrar o diluir
la orina medible a travs de un urinmetro, un refractmetro o una cinta
reactiva. Si bien hay una buena correlacin directa con la osmolalidad
urinaria, esta ltima mide concentracin de solutos en una solucin, por
lo que es menos influenciada que la primera ante la presencia de
partculas de alto peso molecular, como glucosa, protenas y medios de
contraste.

Anlisis Qumico
Con el desarrollo de las cintas reactivas, el anlisis qumico de la orina dej de ser un
procedimiento laborioso y caro, y por lo tanto impracticable en la prctica rutinaria. Las
cintas reactivas son tiras plsticas con cojinetes absorbentes impregnados con
diferentes productos qumicos que, al tomar contacto con orina, producen reacciones
qumicas que generan cambios de color del cojinete. De esta manera, se obtienen

resultados cualitativos y semi-cuantitativos dentro de segundos a minutos mediante

simple pero cuidadosa observacin.

pH: El pH urinario de individuos normales tiene un rango de 4.5 a 8.0,

pero en muestras matinales es levemente cido, con pH de 5.0 a 6.0.
Estos valores deben ser interpretados en relacin a la informacin
clnica obtenida del paciente, pues el pH puede variar segn su estado
cido-bsico sanguneo, la funcin renal, la presencia de infeccin
urinaria, el tipo de dieta o drogas consumidas, y el tiempo de obtenida la
muestra.

Nitritos: Los nitratos presentes en la orina son convertidos a nitritos por

la reduccin enzimtica de bacterias, especialmente Gram (-). Los
nitritos, que normalmente no se encuentran en la orina, son detectados
por la cinta reactiva, sugiriendo as una probable infeccin urinaria

Glucosa: Menos de 0.1% de la glucosa normalmente filtrada por el

glomrulo aparece en la orina. Cuando la glicemia supera el umbral
renal de reabsorcin tubular de glucosa, lo cual ocurre entre los 160 a
180 mg/dl, aparece en elevadas cantidades en la orina, y es detectada
en la cinta reactiva mediante la reaccin de glucosa oxidasa.

Cetonas: Su presencia en orina refleja una alteracin en el uso de

hidratos de carbono como principal fuente energtica, requirindose
para ello de la utilizacin de grasas corporales.

Protenas: Normalmente existen en la orina pequeas cantidades de

protenas, ya sea filtradas o secretadas por el nefrn, no excediendo los
10 mg/ml o 4 mg/m2/hr.

Bilirrubina: La bilirrubina que se detecta en la orina es la conjugada, y

puede ser el primer indicador de una enfermedad heptica no detectada.

Urobilingeno: Es un pigmento biliar producto de la degradacin de la

bilirrubina conjugada en el intestino, y le da la coloracin a las heces en
forma de urobilina. Es normal que se encuentre en bajas cantidades en
la orina (< 1 mg/dl).

Leucocitos: Utiliza la accin de esterasas de los granulocitos presentes

en orina, ya sea ntegros o lisados. Otras clulas presentes en la orina
no contienen esterasas.

Sangre: Detecta hemoglobina a travs de su actividad

pseudoperoxidsica. El test no distingue entre hemoglobinuria,
hematuria y mioglobinuria, por lo que antecedentes clnicos, anlisis

microscpico de orina y test especficos ayudan a clarificar el

diagnstico.
Anlisis Microscpico
La ltima parte del anlisis rutinario de orina es el examen microscpico de sta,
segn tcnica descrita previamente. El propsito es identificar elementos formados o
insolubles en la orina, y que pueden provenir de la sangre, el rin, las vas urinarias
ms bajas y de la contaminacin externa. Debido a que algunos de los componentes
son de ninguna importancia clnica, en cambio otros son considerados normales a
menos que se encuentren en cantidades aumentadas, el examen del sedimento
urinario debe incluir la identificacin y la cuantificacin de los elementos presentes.

Eritrocitos: Aparecen como discos bicncavos incoloros de alrededor de

7 micrones de dimetro, y estn normalmente presentes en la orina en
cantidades bajas (aprox. 5 por CMA).
Leucocitos: Son ms grandes que los eritrocitos (aprox. 12 micrones) y
presentan ncleos lobulados y grnulos citoplasmticos. La
degeneracin propia de estas clulas las transforma en piocitos.
Clulas epiteliales: Usualmente presentes en bajas cantidades en orina,
pueden clasificarse en tres tipos de acuerdo al origen dentro del sistema
genitourinario: Clulas escamosas, Clulas transicionales, Clulas
tubulares renales.
Bacterias, hongos: No estn normalmente presentes en la orina, siendo
frecuente su presencia en muestras contaminadas (especialmente s
fueron tomadas con recolector), y en infecciones urinarias.
Mucus: Es un material proteico producido por glndulas y clulas
epiteliales del tracto genitourinario. Su presencia no tendra importancia
clnica, encontrndose en algunas ocasiones de contaminacin vaginal
Cristales: Estn formados por precipitacin de sales en orina, a
consecuencia de cambios de pH, temperatura y concentracin que
afectan su solubilidad. Pueden adoptar la forma de cristales verdaderos
o presentarse como material amorfo. Su presencia rara vez tiene
significado clnico de importancia, pero su correcta identificacin es til
para detectar los pocos tipos de cristales que confieren per se una
situacin patolgica como: enfermedades hepticas, errores congnitos
del metabolismo o dao renal causado por cristalizacin tubular de
drogas o sus metabolitos
IV.

MATERIALES DE LABORATORIO.

Envase para examen de orina.

Guantes.
Tiras reactivas
Tubos de ensayo.
Pinzas para tubo de ensayo
Gradilla.
Mechero de Bunsen

V.
Muestra de orina.
Lugol.
Benedict.

VI.

PROCEDIMIENTO.

SUSTANCIAS.

-Para el examen fsico de la orina, tenemos que observarla

y detallar como se encuentra, segn su color y aspecto.

-Para el examen qumico colocamos la muestra de orina en un

vaso plstico, luego insertamos la tira reactiva hasta que la
cubra toda, dejamos reposar por 1 minuto y por ultimo la
retiramos, escurrimos en papel higienico el sobrante y
prodedemos a examinar los valores comparanado los colores
con la base de la profesora.

-Para la prueba de glucosa vertimos una muestra de

orina en un tubo de ensayo, le agregamos dos gotas de

lugol + 4 ml de Benedict y pasamos a calentarlo en el
mechero de Bunsen, observamos los resultados.

-Para la prueba de sales biliares se le agrega azufre

ala muestra de orina

VII.
VIII.

RESULTADOS.

Para el examen fsico de la orina.

Color: amarrilo
claro (turbia)

Olor:
cido
(amoniacal
suave)

Para el examen qumico.

Aspecto: Se
observo
burbujas

 Para la prueba de glucosa.

En la muestra de orina que se le

coloco 2 gotas de lugol + 4 ml de
Benedict, y posteriormente se puso al
fuego no cambio de color esto
significa que la glucosa en el
organismos es la normal.

NOTA: En caso el color cambiara a

marrn es que el paciente es en una
situacin crtica.

Para la prueba de sales biliares

En la muestra de orina se le
agrego azufre en polvo el cual
permanecio a flote en la
muestra, el cual nos dice que el
resultado fue negativo en sales
biliares presentes en la muestra
de orina .

NOTA: En caso el azufre se asentar

en el fondo del tubo de ensayo el
resultado sera positivo en sales
biliares

IX.

DISCUSIN.

En la muestra de orina observamos un color amarillo claro y el espectro

normal va desde el cristalino al amarillo oscuro, dependiendo
especialmente de su concentracin. En este caso el color nos indic
orina concentrada. Pudo observarse turbia debido a precipitacin de
cristales (uratos y fosfatos amorfos, oxalato de calcio o cido rico), la
presencia de clulas (bacterias, eritrocitos, leucocitos, cls. epiteliales,
etc.)
El olor de la muestra fue amoniacal esto se debe a que la orina
permaneci por tiempo prolongado expuesto al medio ambiente. La
presencia de espuma residual orienta hacia proteinuria importante
(presencia en la orina de protenas en una cantidad superior a la normal)
La densidad de la orina refleja la capacidad del rin de concentrar o
diluir la orina medible a travs de un urinmetro, un refractmetro o una
cinta reactiva. La gravedad especfica de la orina isostenrica (igual al
plasma) es de 1.010, dividiendo la orina entre concentrada y diluida. Si
bien el espectro puede ir de 1.001 a 1.035, la gravedad especfica de
muestras aisladas suele ir entre 1.010 a 1.025.
El pH en la muestra fue de 8.5 las razones posibles para este resultado
es que el pH puede variar segn su estado cido-bsico sanguneo, la
funcin renal, la presencia de infeccin urinaria, el tipo de dieta o drogas
consumidas, y el tiempo de obtenida la muestra.
El mtodo de Benedict se basa en la reduccin de algunos iones
metlicos por la glucosa. La reduccin de los iones metlicos como el
Cu++ no se especifica de la glucosa, la reaccin puede ser originada por
cualquier sustancia reductora presente en orina (creatinina, cido rico,
cido ascrbico y otros azucares reductores).

X.

CONCLUSIONES.
Realizamos adecuadamente un examen fsico y qumico de
orina.
Pudimos determinar a travs de los colores de los indicadores
de la tira reactiva cada una de las sustancias que forman la
orina.
No todas las orinas son iguales ya que existen orines de
diferentes colores, concentracin y turbacin.

XI.

BIBLIOGRAFA.
Curso 2012-13. Ciclo Superior de Laboratorio de Diagnstico Clnico.
Fundamentos y tcnicas de anlisis bioqumico. Tema 17. Anlisis
bioqumico de la orina
http://es.slideshare.net/jessykreynaloveblue/informe-3de-bioquimicaexamen-de-orina
http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/manualped/AnalOrina.ht
ml
ANALISIS DE ORINA-Dr. Felipe Cavagnaro S.M.
http://es.slideshare.net/SHOSHITAP/practica-3-examen-fisico-y-quimicode-orina

PRCTICA N 3: AISLAMIENTO DELA CASENA

I.

INTRODUCCIN.

La preparacin pura de una protena es esencial antes de determinar sus propiedades,

estructura y composicin, por lo que es necesario aislarlas y purificarlas. Los mtodos
de separacin de protenas aprovechan propiedades tales como la carga, tamao y
solubilidad, que vara entre una protena y otra (Nelson y Cox, 2000).
La casena es una protena conjugada del tipo fosfoprotena que es su fase soluble se
encuentra asociada al calcio (fosfato de calcio) en un complejo que se denomina
caseingeno. Por lo cual es necesario llevar a cabo toda una serie de pasos para
aislarla de la leche, y eliminar las grasas e hidratos de carbono que esta contiene. La
casena se separa de la leche la cual tiene un pH aproximadamente de 7 por
acidificacin llevando a la casena a su punto isoelctrico (de 4.6) donde se precipita
(Segal y Ortega, 2005).
LA CASEINA est presente en la leche en forma de partculas coloidales o micelas y
son fcilmente separadas por precipitacin isoelctrica. El cuajo y acidificacin son
unas prcticas de la tecnologa de lcteos para la preparacin de productos de leche
agria y algunos quesos suaves. La acidificacin natural se lleva a cabo por inoculacin
de la leche con iniciadores por ejemplo, cultivos de bacterias acido lctica. Las
protenas son sustancias orgnicas muy complejas presente en toda materia viva.
Todas las protenas contienen adems de carbono, hidrgenos, tambin nitrgeno y a
menudo azufre y fosforo.
Todas las protenas se ven afectadas por modificaciones en pH, la absorcin de
protenas mediante intercambio inico depende del pH, es decir de valores de pH por
debajo del punto isoelctrico la carga neta de las protenas es positiva y la molcula se
ve absorbida con mayor fuerza en intercambiadores catinicos como la de carboximetil
celulosa sdica

II.

OBJETIVOS.
Poner en prctica mtodos bioqumicos para la purificacin
parcial de protenas, basados en sus propiedades de
solubilidad.
Aislar casena de la leche.
Determinar el pH, densidad y acidez de la leche.

III.

MARCO TERICO.
La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavinas,
cido pantotico y vitaminas A, D, K), minerales (calcio, potasio,
sodio, fosforo y metales en pequeas cantidades), protenas
(incluyendo todos los aminocidos esenciales), carbohidratos
(lactosa) y lpidos. Los nicos elementos importantes delo que carece
la leche son el hierro y vitamina C.
Las protenas se puedes clasificar de manera general en protenas
globulares y fibrosas. Las protenas globulares son a aquellas que
tienden a agregarse en forma esferoidales y no establecen
interacciones intermoleculares como son los puentes de hidrgenos
(caractersticas de las protenas fibrosas) siendo solubilizadas en
suspensiones coloidales.
En la leche hay tres clases de protenas: casena, lacto albminas y
lactolobulinas (todas las globulares).
La casena es una protena conjugada de la leche del tipo
fosfoprotenas que separa de la leche por acidificacin y forma una
ms blanca. Las fosfoprotenas son un grupo de protenas que estn
qumicamente unidas a una sustancia que contienen cidos
fosfricos.
En la casena la mayora de los grupos fosfatos estn unidos por los
grupos hidroxilos de los aminocidos serina y treonina. La casena
representa cerca del 77% al 82 % de las protenas presente en la
leche y el 2,7 % en composicin de leche lquida.
La casena est formada por alpha (s1), alpha (s2), casena Bcasena, y kappa caseina formando una misceta o unidad soluble. Ni
la alfa ni la beta casena a las dos anteriores o a cada una de ellas
por separado se forma complejo de casena que es solubilizado en
forma de micela. Esta micela est estabilizada por la kappa casena.

PRECIPITACION DE CASENA.
Es ampliamente conocido que la caseina puede ser coagulada y
precipitada para dar producto como queso, yogurt, kefi, cuajada, nata
o leche agria y otros derivados. La caseina se precipita por dos
procedimientos:

Acidificacin del pontn a los grupos fosfatos (y otros) que

solubilizan la casena k.
Accin de una enzima llamada cuajo animal que descompone
un pequeo trozo de la casena k precipitando la micela
completa.

PRECIPITACION CIDA.
En alimentos como el yogurt se produce precipitacin parcial de la caseina
porque los grupos cidos se protonan y dejan de repelerse las micelas
debido a una bajada de pH causada por el cido lctico.
El proceso tiene lugar con cualquier acido. La precipitacin con clorhdrico
puede representarse as:
Dependiendo de la cantidad y fortaleza del cido agregado, la precipitacin
es ms o menos drstica y completa, dando productos de consistencia
pastosa, como la leche acida, o en forma de gel, como en el caso de
yogurt hasta una precipitacin completa con separacin del suero si se
emplea clorhdrico en caliente

PRECIPITACIN POR CUAJO ANIMAL.

En este caso se produce hidrlisis enzimtica de las casenas. El proceso,
entre otras diferencia, es ms lento ya que la enzima tardas varios minutos
u horas en hacer efecto. En el cuajo se usan enzimas como la quimosina
que se pueden obtener del estmago de rumiantes jvenes. Esta
quimosina es especfica de la caseina k.
En este proceso la casena k se rompe en sus dos partes:

La hidrfila.
La hidrfoba: para -k- casena.
La quimosina rompe el enlace que une esas dos partes liberndose un
pptido al suero y quedndosela para k- casena en la miscela. Como el
pptido era la parte hidrfila donde estaban los grupos cidos, ahora se
pierden y ya no se repelen las micelas, precipitando las casenas. La parte
hidrfoba que queda interacciona una miscelas con otras y tambin

aumenta el enlace fosfato formndose el cogulo y precipitando el

caseinato.
El cuajo obtenido es la cuajada. Si se corta y se le deja soltar suero, se
obtiene el queso fresco. Los quesos comerciales son este mismo producto
con diferentes tipos de salado y maduracin.
La diferencias entre queso responden a la forma de tratar la pasta cuajada
(en caliente, prensado y cociendo) y la maduracin.
El caseinato calcio (caseinato) es un producto industrial de primer orden y
tienen gran importancia comercial para la fabricacin de quesos sin
denominacin de origen y los llamados quesos fundidos

IV.

MATERIALES DE LABORATORIO.

V.

Probeta.
Densmetro.
Matraz de Erlenmeyer.
Vaso de precipitacin.
Cocina elctrica.
Soporte universal.
Papel filtro.
Leche de vaca fresca.
Agitador.
Pipeta.

REACTIVOS.
Fenolftalena.
Cuajo.

 Cultivo.
NaOH.
Formol neutro.

VI.

PROCEDIMIENTO.

Se vierte la muestra de leche en una probeta para poder calcular su

densidad con el densmetro.

Para encontrar el pH de la leche colocamos 20 ml de leche en un

vaso de precipitacion y le adicionamos 3 gotas de fenolftaleina y en
la bureta colocaremos NaOH y procedemos a la titulacion.

Para encontrar el total de proteinas en la leche colocamos 20 ml de

leche en un vaso de precipitacion y le adicionamos 4 ml de formol
neutro y en la bureta colocaremos NaOH y procedemos a la
titulacion.

Para el yogurt se le agrega a una muestra de leche el cultivo mezclar

bien y observar los resultados en una semana.

Para el cuajo hemos tomado dos muestras de leche en una le

colocamos cuajo en polvo y en la otra cuajo en pastillas a una
temperatura de 40 C en la cocina electrica.

VII.

RESULTADOS.

ACIDEZ:
pH=

3,2 0,1 0,090

100=0.14 4
20

VALORES NORMALES= 0.14 -0.18

DENSIDAD: 1,026

VALORES NORMALES= 1,029- 1,033

PROTENAS:
P=2,2 0,1909 5=2,099 9

VALORES NORMALES = 0.28 -0.38

YOGURT:

Estuvo durante una semana en

reposo y no se logr formar la
consistencia del yogurt debido a
que mezclaos dos tipos de leche,
posiblemente una de las muestras
de leche mezcladas tenida ms
agua.
Debemos tener en cuenta que las bacterias
que se usan para hacer yogurt termofilicas
pero no resisten ms de 45 c ,mueren

VIII.

DISCUSIN.

 El yogurt puede variar en su consistencia desde el lquido

(bebible) hasta el bien espeso tipo postre. La variacin en
consistencia se debe al tipo de leche con que se haga. A
mayor tenor graso de la leche mayor ser la consistencia.
La protena de caseina es una fosfoprotena que se encuentra
en la leche y en algunos de sus productos derivados
fermentados, tanto como el queso. La protena de caseina es
un conjunto compuesto por diversas protenas por lo que es
difcil fijar una definicin. No obstante, gran parte de las
protenas que encontramos en lo que se denomina casena
posee un atributo comn: acidifica la leche a pH 4,6.
Debido a esto a la casena tambin se le suelen calificar
como protena insoluble de la leche. A disimilitud de gran
cantidad de protenas, hasta de la leche, la protena de
casena no precipita por accin del calor. En cambio lo hace
por accin de una enzima proteasa que se encuentra situada
en el estmago de los mamferos denominada renina e integra
un precipitado llamado casena.

IX.

CUESTIONARIO.

Cules son los componentes del suero de la leche?

La protena de suero de leche es uno de los suplementos de protenas
ms comnmente utilizados, junto con la soja, la casena y las protenas
del huevo. El suero de leche es un subproducto obtenido durante el
proceso de fabricacin del queso de leche de vaca. El suero de leche
contiene protenas de alto valor biolgico, es decir, que gran parte de
estas protenas son asimiladas por el organismo.
El suero de leche adems posee un alto valor nutritivo, es rico en sales
minerales, vitaminas y aporta todos los aminocidos necesarios para el
organismo, adems de aminocidos ramificados, lo que favorece la
sntesis proteica, la ganancia de masa muscular y evita el catabolismo de
los tejidos (prdida de tejido muscular).

Beta-lactoglobulina: La Beta-lactoglobulina es la protena de suero ms

abundante que componen aproximadamente el 50 a 55% de las protenas
del suero.
Alfa-lactoalbmina: La Alfa-lactoalbmina es la segunda protena ms
abundante encontrada en el suero de la leche, constituyendo
aproximadamente 20 a 25% de la protena de suero.
Glicomacropptido (GMP): El Glicomacropptido es un derivado del
proceso de fabricacin del queso, y constituye un 0 a 15% de la protena
de suero, dependiendo del proceso de concentracin / aislado de la
protena de suero.
Inmunoglobulinas: Las inmunoglobulinas son protenas producidas por
el sistema inmunolgico para luchar contra ciertos antgenos. Las
inmunoglobulinas constituyen aproximadamente el 10 a 15% de la
protena de suero.
Albmina de suero bovino (ASB): La Albmina del suero es una
protena de gran tamao con un buen perfil de aminocidos esenciales.
La ASB representa aproximadamente 5 10% de la protena de suero.
Lactoferrina: La Lactoferrina es una glicoprotena y constituye
aproximadamente 1 a 2% de los componentes de protena de suero. La
Lactoferrina inhibe el crecimiento de bacterias y hongos, debido a su
capacidad para unirse hierro.
Lactoperoxidasa: La Lactoperoxidasa es una glicoprotena y constituye
aproximadamente el 0,5% de la protena de suero.
Glutatin: El glutatin es el antioxidante ms importante del cuerpo, ya
que est dentro de cada clula en el cuerpo humano
Minerales: El suero de leche tiene un gran perfil de minerales donde
podemos encontrar grandes cantidades de potasio, en una proporcin de
3 a 1 respecto al sodio, lo que ayuda a desechar lquidos y toxinas. Posee
adems una cantidad importante de calcio (en una proporcin de un 50%
ms que en la leche), Tambin contiene fsforo, magnesio, zinc, hierro y
cobre, formando todos ellos sales de gran biodisponibilidad para el buen
funcionamiento del organismo.
Vitaminas: El suero de leche contiene adems cantidades pequeas pero
bastante apreciables de las vitaminas A, C, D, E y del complejo B, as
como cido ortico, que es imprescindible para la absorcin de minerales
como el calcio, fsforo, etc., y cido lctico que puede mejorar el proceso
de respiracin celular
X.

CONCLUSIONES.

 No todas las leches cuajan igual.

El pH de nuestra muestra de leche fue 0,144 y se encuentra
dentro del rango normal. La densidad fue 1,026 y tambin se
encuentra dentro del rango normal.
En la prctica llegamos a comprobar todo lo que aprendimos
en teora y pudimos poner en prctica que se pueden obtener
una amplia variedad de subproductos de la leche

XI.

BIBLIOGRAFA.
https://espanol.answers.yahoo.com/question/index?
qid=20110806094211AALdDr8
Composicin qumica de productos Ing. Castro Zavaleta Vctor.
http://es.docsity.com/es-docs/Aislamiento_de_la_case%C3%ADna__Trabajo_Practico_-_Laboratorio_de_Qu%C3%ADmica

RCTICA N 4: DETERMINACION DELA GLUCOSA EN SANGRE

I.

INTRODUCCIN.
Cmo determinar la concentracin de glucosa en la sangre?
Pregunta que se nos plante al comenzar nuestro informe, la
extraccin venosa de sangre es un proceso muy acequiado en el
anlisis biolgico dado que es posible detectar diversas
enfermedades o condiciones de un organismo, en base a la
composicin celular y qumica de la misma.
En la sangre venosa se pueden hacer diversos y diferentes estudios
analticos, ya sean desde el punto de vista bioqumico, hematolgico
y/o microbiolgico.
El sitio de puncin en el paciente peditrico vara dependiendo de la
edad y tamao del nio, as como de la accesibilidad de la vena. En
nios mayores puede utilizarse cualquier vena accesible, de forma
similar al paciente adulto, mientras que en recin nacidos y lactantes
las venas superficiales del cuero cabelludo y de las extremidades
distales pueden servir para la extraccin de sangre.
En la rutina diaria se suele extraer la sangre a travs de la puncin
de una de las venas situadas en la fosa cubital del brazo. Estas
venas tienen generalmente un tamao aceptable y la piel en esta
regin es suave y no demasiado sensible.
Si por alguna razn no se puede pinchar en la fosa cubital se
recomienda la puncin de una de las venas del dorso de la mano o
en la mueca; pero necesitamos saber que aqu duele un poco ms.
Otra opcin es la extraccin de sangre en el pie (tobillo o dorso del
pie), aunque no se hace con tanta frecuencia.

II.

OBJETIVOS.
Proporcionar los conocimientos necesarios para obtener
muestras de sangre.
Orientar al alumno para que conozca, maneje y determine el
valor de la glucosa en sangre.
Aprender a tomar la muestra por puncin venosa.

III.

MARCO TERICO.

El anlisis de glucosa en sangre mide la cantidad de glucosa (el tipo

de azcar ms importante en el cuerpo) en una muestra de sangre.
La glucosa es la principal fuente de energa del organismo. Nuestros
cuerpos descomponen los alimentos en glucosa y otros nutrientes,
que posteriormente son absorbidos por el torrente sanguneo en el
tracto gastrointestinal. Los niveles de glucosa en sangre aumentan
despus de haber ingerido alimentos y desencadenan la produccin
de una hormona denominada "insulina" en el pncreas, la cual se
libera en el torrente sanguneo.
La insulina acta como una llave que abre las puertas de las clulas
y permite la entrada de la glucosa. Sin insulina, la glucosa no puede
penetrar en las clulas y permanece en el flujo sanguneo. Como
consecuencia, los niveles de azcar en sangre son mayores de lo
normal.
Un alto nivel de azcar en sangre (hiperglucemia) es un motivo de
preocupacin ya que, de no tratarse, puede causar problemas de
salud tanto a corto plazo (sed insaciable, necesidad frecuente de
orinar y cansancio) como a largo plazo (daos de los rganos
internos y nerviosos). Un nivel de azcar en sangre muy bajo es
tambin preocupante ya que suele causar sntomas como
transpiracin, temblores y mareos.
La diabetes es la causa ms comn del aumento anormal del azcar
en la sangre. La gente que sufre de diabetes no puede generar o
responder a la insulina correctamente. Esto significa que deben
controlar muy de cerca los niveles de glucosa y seguir el plan que le
indica el mdico para controlar su enfermedad, el cual incluye dieta,
medicamentos (como inyecciones de insulina) y ejercicio fsico para
mantener el azcar en sangre dentro de un nivel normal.
Forma en que se realiza el examen
Se necesita una muestra de sangre.
Preparacin para el examen
El examen se puede hacer de dos maneras:

Despus de no haber comido nada (en ayunas) durante al

menos 8 horas.
En cualquier momento del da (aleatorio).

Lo que se siente durante el examen

Cuando se introduce la aguja para extraer la sangre, algunas
personas sienten un dolor moderado; otras slo sienten un pinchazo
o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de

sensacin pulstil o un hematoma leve, los cuales pronto

desaparecen.
Razones por las que se realiza el examen
El mdico puede solicitar este examen si usted tiene signos de
diabetes. Lo ms probable es que el mdico ordene una prueba de
glucemia en ayunas.
El examen de glucemia tambin se utiliza para monitorear a
pacientes que padecen diabetes. Tambin se puede hacer si usted
presenta:

Un aumento en la frecuencia de la necesidad de orinar

Visin borrosa
Confusin o un cambio en la forma como usted normalmente
habla o se comporta
Episodios de desmayo
Convulsiones (por primera vez)

Resultados normales
Si le hicieron un examen de glucemia en ayunas, un nivel entre 70 y
100 miligramos por decilitro (mg/dL) se considera normal.
Si le hicieron un examen de glucemia aleatorio, un resultado normal
depende de cundo fue la ltima vez que comi. La mayora de las
veces, el nivel de glucemia estar por debajo de 125 mg/dL.
Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los
resultados de estas pruebas. Los rangos de los valores normales
pueden variar ligeramente entre laboratorios. Algunos laboratorios
usan diferentes medidas o pueden analizar distintas muestras. Hable
con el mdico acerca del significado de los resultados especficos de
su examen.
Significado de los resultados anormales
Si le hicieron un examen de glucemia en ayunas:

Un nivel de 100 a 125 mg/dL significa que usted tiene una

alteracin de la glucosa en ayunas, un tipo de prediabetes.
Esto incrementa el riesgo de desarrollar diabetes tipo 2 con el
tiempo.
Un nivel de 126 mg/dL o mayor casi siempre significa que
usted tiene diabetes.

Si a usted le realizaron un examen de glucemia aleatorio:

IV.

MATERIALES DE LABORATORIO.

V.

Un nivel igual o superior a 200 mg/dL a menudo significa que

tiene diabetes.
El mdico ordenar un examen de glucemia en ayunas, un
examen de HbA1c o un prueba de tolerancia a la glucosa
segn el resultado del examen de glucemia aleatorio.
En alguien que tiene diabetes, un resultado anormal en el
examen de glucemia aleatorio puede significar que la diabetes
no est bien controlada.

Lancetas.
Aguja # 21 o 22.
Alcohol.
Algodn.
Guantes.
Tubos de ensayo.
Ligadura.
Lanceta.
Hemoglucotest.
Tiras para hemoglucotest.

PROCEDIMIENTO.

Desinfectar, secar y puncionar

con lanceta estril desechable en
el dedo del alumno.

Colocar la cinta reactiva en el

hemoclucotest.

Esperar a que el hemoglucotest

reconozca y de su resultado.

Presionar el sitio de puncin con

algodn seco, hasta parar el
sangramiento.

EXTRACCION SANGRUINEA

Debemos de tener todos los materiales a

utilizar en la mesa.

Echamos un vistazo a los brazos para decidir un

sitio para la puncin. El brazo debe ser
extendido y lo relajado posible.
Es importante verificar que en el sitio a
puncionar la piel se encuentra indemne y lejos
de focos de infeccin, ni hayan otros problemas
que puedan interferir..

Palpamos la vena
Nos colocamos guantes y desinfectamos el
sitio de la puncin, siempre limpiaremos de
adentro hacia afuera.
Colocamos la liga.

Procedemos a la
extraccin de sangre.
Retiramos la ligadura.

VI.

RESULTADOS.

De la alumna en ayunas: rango normal de glucosa

(70/110)
Jhoana Altamirano Olano: nivel de glucosa en
sangre 81
De los alumnos sin haber ayunado:
Josu Tafur Ramrez: nivel de glucosa en
sangre 105.
VII.

DISCUSIONES.

El resultado de los niveles de glucosa de nuestros compaeros se

encontraron dentro de lo normal.
En una persona que no se encuentra en ayuno, el resultado pudo ser un
poco elevado ya que posiblemente se encontraba nervioso.
La adrenalina eleva la azcar.
VIII.

CUESTIONARIO.

Para qu sirve el Hemoglucotest?

El anlisis de glucosa en sangre se solicita para medir la
cantidad de azcar presente en la sangre. Se puede llevar a
cabo como parte de un examen fsico de rutina, para detectar
la diabetes tipo 1 y tipo 2, identificar la existencia de diabetes

gestacional durante el embarazo (los niveles altos de glucosa

pueden afectar la salud de la madre y del beb).
Los anlisis de glucosa (tanto los de autocontrol en el hogar
como los que se hacen en el consultorio del mdico) en una
persona con diabetes son una parte importante de un buen
plan de control de la enfermedad.

IX.

CONCLUSIONES.
Logramos adquirir los conocimientos necesarios para obtener
muestras de sangre.
Aprendimos a tomar la muestra por puncin venosa
Logramos hacer uso del hemoglucotest.

X.

BIBLIOGRAFA.
www.medicinapreventive.com.ve/laboratorio/glicemia.htm
www.biologia.edu.ar/macromoleculas/azucar.htm