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Manual de Prcticas de Laboratorio

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia


Subdireccin Acadmica
rea de Docencia en Produccin Animal

MANUAL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO DE
ACUACULTURA

ELABORADO POR
Dr. en C. Cesar Ortega Santana
M. en C. Luis Fernando Vega Castillo
REVISADO POR
Dr. Ivan Gallegos Alarcn

Aprobado por los H.H. Consejos Julio 2013

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CONTENIDO
Pgina
I. PRESENTACIN

II. PRCTICAS
1. Anatoma comparada de peces

2. Toma de muestras para diagnstico en peces

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III. BIBLIOGRAFA

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IV. ANEXOS

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V. ACTUALIZACIN

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Presentacin

El enfoque del plan de estudios basado en competencias considera que los conocimientos
por s mismos no son lo ms importante, sino el uso que se hace de ellos en situaciones
especficas de la vida personal, social y profesional que el alumno afrontar. De este
modo, las competencias requieren una base slida de conocimientos y ciertas habilidades,
los cuales se integran para un mismo propsito en un determinado contexto de la medicina
veterinaria y zootecnia; por ello, durante el desarrollo y construccin del conocimiento en
el alumno y la actividad del docente en el ordenamiento de los conocimientos adquiridos
es importante contar con un instrumento que oriente el proceso y ejecucin durante la
enseanza-aprendizaje, es por ello la elaboracin de este manual de prcticas de la
Unidad de Aprendizaje Acuacultura.
Esta unidad de aprendizaje se ubica en el rea de produccin animal, dentro del ncleo de
unidades de aprendizaje optativas, que considera clases tericas y prcticas. El manual de
prcticas pretende dar pauta en la planeacin de las actividades durante el periodo
acadmico, as como de los recursos didcticos que se utilizaran durante las Unidades de
competencia que requieren prcticas en el laboratorio.
Los peces son animales que presentan diferencias anatmicas y fisiolgicas importantes
con respecto a los animales terrestres, las cuales son caractersticas que necesariamente
debe conocer el mdico veterinario zootecnista para que pueda identificar aquellas
anormalidades fsicas o de conducta que le indiquen la presencia de alguna enfermedad o
condicin que afecte la salud de este tipo de animales. Asimismo, las caractersticas
fsicas, qumicas y biolgicas del agua en que habitan los peces son factores directamente
relacionados con su bienestar y que inciden tambin en la produccin. El Mdico
Veterinario debe conocer los parmetros normales recomendados para las principales
especies de peces, y debe ser capaz de interpretar o predecir el efecto que posibles
variaciones pueden causar tanto a los peces como al ambiente, y de cmo algunos
parmetros a su vez pueden influir sobre otros.
Las prcticas propuestas en esta Unidad de aprendizaje tienen el objeto de que el
discente pueda integrar los temas vistos y comentados en las aulas, mediante el
acercamiento de los alumnos a la realidad, donde podrn entrar en contacto estrecho con
peces y visualizar las caractersticas morfo fisiolgicas de las distintas especies, pudiendo
evidenciar alteraciones o presencia de anormalidades que les ayuden a identificar la

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presencia de enfermedades e inclusive la causa. Las prcticas de campo permitirn a los


alumnos conocer los distintos modos de produccin y reproduccin, tcnicas de
alimentacin, medidas de bioseguridad y la aplicacin de las buenas prcticas de
produccin acucola. Por otra parte, se capacitarn en el proceso de necropsia y toma de
muestras para realizar diagnsticos in situ, que le permitan abordar oportunamente
situaciones que requieran de acciones inmediatas, y tambin en la forma en que debe
colectar y enviar muestras a un laboratorio para solicitar diagnsticos confirmatorios

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PRCTICA No. 1: Anatoma comparada de peces


Los peces son considerados como ancestros de los modernos vertebrados terrestres, y
como los seres ms primitivos en trminos de evolucin. La vida en el medio acutico
presenta una serie de problemas especficos distintos de los experimentados por los
animales terrestres, por lo que el grado de evolucin hace la diferencia de la mayora de
los sistemas orgnicos entre los peces y los mamferos terrestre.
Una diferencia marcada de los peces con respecto a los animales terrestres, es que son
poiquilotermos, es decir su temperatura corporal varia pasivamente en funcin a la
temperatura del agua. Tambin hay diferencia en el sistema respiratorio en donde la
branquia es el rgano respiratorio en los peces, adems es la encargada de realizar el
intercambio gaseoso, el conocimiento de su morfologa y su fisiologa es de gran
importancia porque al describir sus caractersticas estructurales normales, aporta nociones
valiosas para determinar lesiones y enfermedades causadas por diversos agentes, ya que
estos rganos junto con los riones, el hgado y la piel, son considerados como rganos
primarios u rganos blancos, tiles para evaluar el efecto de la polucin, por lo tanto, son
importantes para ser utilizados en la aplicacin como biomarcadores histopatolgicos
Objetivo: El discente identificar las diferentes estructuras anatmicas de peces y
establecer diferencias entre especies y en relacin con animales terrestres.
Material:
Biolgico:
Peces de diferentes especies
Trucha arcoris
Bagre
Tilapia
Carpa comn
Carpa herbvora
Peces de ornato
De laboratorio
Bata
Cmara fotogrfica
Charola de diseccin
Estuche de diseccin

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Guantes
Microscopio estereoscpico
Microscopio ptico
Cubreobjetos
Portaobjetos
Lpiz
Hoja de reporte
Anestsico
Metodologa:
En equipos de trabajo, se conseguirn peces vivos de distintas especies para observar
sus caractersticas externas generales, conducta de nado y respiracin. Se describirn las
caractersticas externas de cada especie y se registraran.
Los peces debern manejarse proporcionando condiciones de bienestar animal y trato
humanitario.

Secuencia de trabajo:
Antes del sacrificio, se describirn las caractersticas externas y conducta de los peces.
Posteriormente, se sacrificaran mediante sobredosis de anestesia. El pez dejara de
realizar movimientos del oprculo y flotara, el alumno deber observar la consistencia del
mucus, as como la condicin y aspecto de las aletas, oprculo, boca, ojos, piel.
Metodologa de necropsia
El pez se coloca en la charola con la cabeza hacia la mano izquierda del alumno y con el
vientre del pez de frente. En el primer corte, se debe retirar el oprculo para exponer las
branquias. Seguidamente se har una incisin en la lnea media en direccin caudocraneal, iniciando desde el orificio anal dirigido hacia la comisura inferior del oprculo. El
tercer corte se inicia desde el orifico anal y se dirige dorso-craneal pasando por la lnea
lateral hacia la comisura superior del oprculo permitir exponer los rganos internos. Se
identificarn los rganos y se anotarn sus caractersticas, estableciendo posibles
diferencias entre las especies de los dems equipos; as como comentar diferencias con
respecto a animales terrestres. Se podr hacer uso de microscopio estereoscpico para
observar detalles de los diferentes rganos.

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Se deber colectar fragmentos de branquias y rganos internos para procesamiento


histolgico y posterior interpretacin.
Cada equipo har y entregar un reporte detallado de lo observado durante la prctica.

Evidencia de evaluacin
Al finalizar la prctica, cada equipo entregar reporte del proceso de manejo, diseccin y
observaciones realizadas, indicando la o las especies analizadas, descripcin general de
sus estructuras anatmicas y diferencias entre las especies observadas, y en relacin con
animales terrestres.

Instrucciones. En el siguiente dibujo marca el recorrido de los cortes que realizaste


durante el proceso de la necropsia

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Despus de la necropsia realiza un dibujo o pega la foto de las siguientes estructuras:

Proceso de necropsia

Branquias

Rin

Hgado

Bazo

Tracto digestivo

Colocar un trozo de cada rgano en un portaobjetos y con un cubre objetos hacer presin
cuidando de no romper el cubre objetos observar al microscopio (identificacin de centros
melanomacrfagos)

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Observacin de rin

Observacin de intestino

Observacin de bazo

Observacin de hgado

Reporte de actividades:
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Dificultades durante el desarrollo de la prctica:


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Sugerencias:
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Preguntas
1.- Describir la ubicacin de las branquias?

2.- Indicar qu funcin tiene la lnea lateral?

3.- Indicar cules son las aletas impares?

4.- Explicar cual es la funcin de las aletas en los peces?

5.- Indicar qu especie de pez no presenta escamas?

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PRCTICA No. 2. Toma de muestras para diagnstico en peces


A ltimos aos, la acuicultura mundial ha presentado gran desarrollo, caracterizada por la
expansin e intensificacin del cultivo de especies tradicionales, as como la
diversificacin e introduccin de nuevas especies, aprovechando innovaciones
tecnolgicas en distintos mbitos de la produccin. Aunado a lo anterior, los productos
obtenidos por acuicultura se consideran ms limpios y seguros para el consumidor; en
contraste, la pesca o captura ha mostrado una drstica disminucin y estos productos
representan mayor riesgo sanitario por su consumo.
El auge de la acuicultura ha favorecido el surgimiento, diseminacin o exacerbacin de
enfermedades infecciosas que amenazan la actividad, por lo que su control representa
uno de los principales desafos a la industria (Murray, 2006). En acuicultura, las
enfermedades pueden ser de distinta etiologa, teniendo fuerte relacin con el ambiente;
su deteccin oportuna y diagnstico certero permiten realizar estrategias de tratamiento o
correccin, que dependiendo de diversos factores el resultado suele ser variable. En este
sentido, pese al actual nivel de conocimiento, las enfermedades de etiologa viral son
difciles de controlar, y debido a que no existe un tratamiento establecido, son los
padecimientos de mayor impacto econmico para la acuicultura mundial, amenazando su
supervivencia, ya sea por el impacto directo a la poblacin afectada, como el caso de
infecciones virales de camarn, o bien por polticas sanitarias de los pases, donde las
mayores prdidas se deben al valor econmico de peces sacrificados aun sin padecer la
enfermedad clnica. Por su importancia, la mejor manera de controlar una enfermedad viral
es la prevencin (OIE, 2005), para lo cual es fundamental realizar un diagnstico correcto
y oportuno.

Objetivo: El discente conocer y realizar en forma eficiente el proceso de necropsia y la


toma muestras para diagnstico en peces.
El discente dominar la forma de obtencin y conservacin de distintas muestras de peces
para el diagnstico de enfermedades o situaciones de improductividad.
El discente formular anlisis de diagnstico in situ durante el desarrollo de la necropsia.

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Material: Estar dividi en material biolgico y de laboratorio.


Biolgico:
Peces de diferentes especies (Trucha arcoris, Bagre, Tilapia, Carpas, Peces de ornato),
idealmente animales con signos y lesiones, y animales sanos para establecer diferencias.
De laboratorio
Bata u overol
Botas
Cmara fotogrfica
Charola de diseccin
Estuche de diseccin
Guantes de latex o de cirujano
Cubreobjetos
Portaobjetos
Lpiz
Hoja de reporte
Mesas de trabajo.
Microscopio de luz y estereoscpico.
Mecheros.
Medios de cultivo bacteriolgico y MEM para virus.
Frascos con formalina.
Libreta de notas.
Kit de Tincin Gram.
Balanza.
Anestsico (benzocaina).
Contenedores de residuos

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METODOLOGA
Los estudiantes se organizarn en equipo para llevar peces al laboratorio. Los animales
sern sacrificados por sobredosis de anestesia y una vez muertos, se proceder a realizar
la necropsia.
Previo al sacrificio, se anotar la conducta y forma de nado, la coloracin de los animales,
forma y frecuencia de respiracin.
Una vez muerto el animal, evaluar consistencia de mucus, integridad de piel, aletas y
escamas, la coloracin de branquias, orificios naturales, aspecto de los ojos.
Realizar un raspado de piel para observacin en fresco en microscopio. Para esto con un
cubreobjetos limpio se recorre la superficie externa del pez en sentido antero-posterior. Lo
mismo se realizar con las aletas. La muestra se analizar en el miscroscpio. En caso de
observar lesiones sugestivas de infeccin bacteriana en piel y aletas, se realizaran
improntas del rea afectada y se debe intentar el aislamiento bacteriolgico, utilizando el
medio de cultivo que corresponda.
Para el caso del anlisis en fresco de las branquias. Con tijeras, se retirar el oprculo
para exponer las branquias, anotando coloracin y aspecto; un trozo de uno de los arcos
branquiales es cortado y puesto entre porta y cubreobjetos para evaluar en fresco, bajo el
microscopio la presencia de bacterias, parsitos o cualquier anormalidad. En caso de
observar lesiones sugestivas de infeccin bacteriana, intenta el aislamiento bacteriolgico
utilizando el medio de cultivo que corresponda.
Observacin y toma de muestra de rganos internos.
Para evidenciar la cavidad abdominal se debe tener precaucin de no provocar
contaminacin durante el desarrollo de la necropsia. Inicialmente, con tijeras estriles se
realiza un corte postero-anterior sobre la lnea media del pez, partiendo inmediatamente
anterior al orificio anal y hasta la regin branquial, un segundo corte correr desde anterior
al orificio anal y hasta la comisura superior del oprculo; el costado muscular obtenido es
cortado y retirado, quedando al descubierto los rganos internos. Despus de dejar al
descubierto la cavidad abdominal se observan los rganos internos con fin de determinar
su estructura y coloracin, buscando zonas hemorrgicas, focos necrticos, abscesos,
parsitos, inflamaciones, reas plidas, ndulos y la presencia de exudados, y si existe
presencia o ausencia de alimento y/o lquido en el tracto digestivo. Tambin se revisar la

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musculatura latero-dorsal de los peces con una navaja de bistur, con el fin de observar la
presencia de hemorragias, ndulos u otros cambios.
Ante la presencia de daos o lesiones se retiran pequeos trozos que se depositan en
formalina al 10% para enviar a histologa. En caso de observar lesiones sugestivas de
infeccin bacteriana, se realizaran improntas del rea u rgano afectado y se intentar el
aislamiento bacteriolgico, utilizando el medio de cultivo que corresponda.
En el caso de sospecha de infeccin viral, se obtendrn muestras para su diagnstico. Si
la idea es realizar el aislamiento e identificacin viral, se recoge aproximadamente un ml
de tejido conformado por rin, bazo e hgado que se depositar en un tubo con 9 ml de
medio de cultivo celular. Esta muestra posteriormente se macerar en mortero con arena
estril para su posterior inoculacin en cultivo de clulas.
Si la idea es realizar un diagnstico mediante prueba molecular (PCR o RT-PCR), a partir
de la muestra colectada se proceder a extraer el cido nucleico correspondiente.
Al final del proceso de recoleccin, se harn las anotaciones pertinentes de lo observado
para la integracin de informe de diagnstico presuntivo y final segn las evidencias
encontradas en los animales analizados.

La evaluacin se realizar de acuerdo a:


a) La calidad del informe de la actividad realizada.
b) La observacin visual de la forma de trabajo en equipo e individual durante el
desarrollo de la prctica.
c) La actitud y forma de participacin y colaboracin en el desarrollo de la prctica.
Al finalizar la prctica, cada equipo entregar reporte del proceso realizado en las
especies de peces analizadas, partiendo desde el adecuado manejo de la muestra, el
proceso de diseccin, los hallazgos encontrados e indicar las acciones que realizaron
para obtener el diagnstico, as como su diagnstico presuntivo debidamente justificado.
Cada equipo entregar:
a) El resumen del proceso de toma de muestra realizado.
b) Descripcin de las caractersticas y condicin general de las muestras analizadas.
c) La interpretacin de la causa de las lesiones encontradas in situ y de rganos
internos en los animales analizados.

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c) Cuando el proceso se realizo en peces clnicamente enfermos, relacionar el cuadro


clnico con las observaciones durante la necropsia, as como fundamentar las muestras
remitidas para anlisis.
Instrucciones. Utiliza la siguiente imagen para indicar la forma en que realizas la
obtencin de muestras para evidenciar parsitos externos, as como las zonas de
obtencin.

Reporte de actividades de la prctica de toma de muestras:


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Indica las posibles dificultades que encontraste durante el desarrollo de la prctica:


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Sugerencias:
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CUESTIONARIO
1. Indicar que procedimientos se realizan previo al desarrollo de la necropsia y por qu
es importante realizarlo?.

2. Explicar la forma correcta en que se descubre la cavidad del pez para poder
observar los rganos internos, Qu precauciones se deben tener?.

3. Indicar en qu consiste el proceso de observacin en fresco o in situ durante la


toma de muestras.

4. Explicar lo que indica un cambio de coloracin en los peces.

5. Explicar qu condiciones o caractersticas estaran presentes en peces que


padezcan una enfermedad septicmica.

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III. BIBLIOGRAFIA

Brown, L., (1993), Aquaculture for veterinarians: Fish husbandry and medicine, Pergamon
Press, Inglaterra.

Ferguson, H. 1989. Systemic pathology of fish a text and atlas of comparative tissue
responses. University Pres. USA. 263 pp.

Inglis, V.; Roberts, J.; Bromage, N. 1993: Bacterial diseases of fish. B. Sci. Publicat.
Inglaterra. 312 Pgs.
Office International des pizooties. (2003). Diagnostic manual for Aquatic Animal
Diseases.3rd. Ed. Paris, France.

Roberts, R. J. (1981), Patologa de los peces, Mundi prensa, Madrid, Espaa.

Shaperclaus, W. 1991. Fish diseases. 1. 2 Vol. A. A. Balkema/Ro. Inglaterra. 1398.


Wolf, K., (1988), Fish viruses and fish viral diseases, C. Univer. Press. U.S.A.

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IV. ANEXOS

V. ACTUALIZACIN
Manual de Prcticas de Laboratorio de Acuacultura. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
de la Universidad Autnoma del Estado de Mxico. Toluca, estado de Mxico; 27 de mayo de
2013.

Primera Edicin

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

Director:
Dr. en C. Jos Mauro Victoria Mora

Elabor:
M en C. Luis Fernando Vega Castillo
Dr. Csar Ortega Santana

Revis:

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