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Instituto Profesional Santo Toms

2016
Ingeniera en Qumica Industrial
Laboratorio de Bioqumica

Determinacin Espectrofotomtrica de las Protenas.


Francisco Barraza Gavia
barraza.gavia@gmail.com
Resumen: En el laboratorio preparamos soluciones en tubos de
ensayos enumerados a los cuales se le adicion reactivo Biuret, que
se dejaron reposar para luego medir la absorbancia a travs de un
espectrofotmetro.
Palabras Claves: Espectrofotmetro, celdas de espectrofotometra,
reactivo Biuret, absorbancia.

Introduccin
La mayora de los problemas
analticos reales comienzan con una
compleja mezcla a partir de la cual
es necesario aislar, identificar y
cuantificar uno o ms componentes
de la misma. Un mtodo es la
espectrofotometra,
y
el
espectrofotmetro es el instrumento
capaz de medir la sustancia qumica
capaz
de
absorber
luz
monocromtica
a
travs
del
espectro
electromagntico
en
funcin a la longitud de onda de la
radiacin, esta sustancia depender
de la estructura qumica que tenga.

- Reactivo de Biuret
- Solucin estndar de BSA al 4,8%
Procedimiento
Mtodo Biuret
1. Prepare una batera de tubos
enumerados.
2. Agregue el volumen indicado
de la solucin de BSA o
muestra problema con una
pipeta graduada de 1 mL.
3. Agregue el volumen indicado
de agua con una pipeta
graduada de 1 mL.
4. Agregue 4,0 mL del reactivo
Biuret
con
una
pipeta
graduada de 5 mL.
5. Agite y espere 20 minutos a
temperatura ambiente para la
formacin
del
complejo
coloreado.
6. Mida la absorbancia de los
tubos
en
un
espectrofotmetro a 540 nm,
previa calibracin del equipo
con el blanco.

Materiales y Reactivos
- Espectrofotmetro (visible)
- Celdas para el Espectrofotmetro
- Agua Destilada
- 1 piseta
- 9 tubos de ensayo
- 1 gradilla
- 2 pipetas graduadas de 5 mL
- 2 pipetas graduadas de 1 mL
- 1 vaso precipitado 250 mL
- 1 vaso precipitado 100 mL

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De acuerdo a los datos.
1. Calcule la concentracin de
BSA 4,8% en los tubos (2S6S).
2. Complete la tabla con los
valores de absorbancia y
concentracin.
3. Obtenga la ecuacin de la
recta y el coeficiente de
regresin por regresin lineal.
4. Construya
una
grfica
absorbancia
versus
concentracin, trace la recta
obtenida por regresin.
5. Calcule las concentraciones
de las muestras problemas en
las cubetas mediante la
ecuacin 1.5.
6. Calcule las concentraciones
de las muestras problemas en
las
soluciones
originales
considerando las diluciones
realizadas en el ensayo
(ecuacin 1.6). Recuerde que
Cx (ecuacin 1,5) corresponde
a Cf. (ecuacin 1,6.).

CONCENTRACIN
MP1
Y = mx + b
0,026 = 0,0458X + 5 x
10-3
CONCENTRACIN
MP2
Y = mx + b
0,024 = 0,0458X + 5 x
10-3
Conclusin
El trabajo prctico en el laboratorio
sirvi
para
que
entendamos
experimentalmente la importancia
de la espectrofotometra a travs
del mtodo Biuret, donde conocimos
el uso del espectrofotmetro, y el
cuidado tanto de l como de las
celdas
que
cumplen
un
rol
importante dentro de esta medicin.
El tiempo en el que reposan las
celdas es imprescindible, debido a
que al mantenerse por mucho
tiempo
corren
el
riesgo
a
sedimentar y alterar la solucin que
queramos
medir.
En
nuestra
experiencia al ser el ltimo grupo
nuestras soluciones dentro de las
celdas estuvieron por ms de una
hora aproximada, por lo que cambi
de color y se observ presencia de
espuma, y la medida de absorcin
no iba ser la misma, netamente por
el factor de tiempo.

Resultados
Absorban
cia

Concentraci
n
%

Absorbancia
Real

0,012

0,063

0,96

0,051

0,054

0,768

0,042

0,038

0,576

0,026

0,038

0,384

0,026

0,027

0,192

0,015

0,038

0,4585

0,026

0,036

0,4148

0,024

Anexo
1) Mencione las causas
del deterioro de las
cubetas.
-Limpieza con abrasivos.

m=0,0458
r=0,9706
b=5 x 10-3
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-Tocar directamente las
cubetas,
debido
al
material graso presente.
-Manipulacin con pinzas o
tenazas.
-Contacto de la pipeta con
las paredes.
2) Cmo se deben limpiar
las cubetas?
Se
debe
utilizar
una
solucin alcalina diluida
como NaOH 0,1 M y un
cido diluido como HCl 0,1
M o en efecto con agua
destilada.
3) Mencione el material
de fabricacin de las
celdas
de
Espectroscopia UV
VIS.
-Para las de UV (quarzo).
-Para las de VIS plstico o
vidrio.
4) Cules son las partes
del espectrofotmetro?
En su interior contiene un
haz
de
luz,
un
monocromador,
el
colimador
(lente),
el
compartimiento
de
muestra, un detector, un
registrador
y
un
fotodetector.

Bibliografa y/o Referencia


. Anlisis Qumico Cuantitativo,
Daniel C. Harris, Tercera Edicin.

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