Está en la página 1de 42

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

PRLOGO

AGRADECIMIENTOS

La Biotecnologa ha sido reconocida como un rea esencial de


desarrollo industrial en los prximos aos. Los ingenieros, como
interpretes y ejecutores de los avances cientficos, debemos
procurar un acercamiento a la investigacin cientfica no solo
para dotarnos de mejores instrumentos tecnolgicos sino para
ser capaces de prever evoluciones futuras de los procesos en la
ingeniera y promover activamente un desarrollo sostenido. Este
trabajo es precisamente un acercamiento a la aplicacin de los
procesos biolgicos en operaciones tecnolgicas relacionadas con
la ingeniera civil. Se intenta abogar por tanto, por una relacin
mas estrecha entre ingenieros (receptores) e investigadores
(productores) para que este proceso sea ms frtil.
Me parece relevante poner de manifiesto el enriquecimiento
personal que ha supuesto el desarrollo del trabajo, tanto en el
mbito personal como en el profesional. He sido testigo de los
distintos enfoques con que se afrontan los problemas por
personas con una formacin distinta a la de un ingeniero. Sirva
como ancdota el primer da en el que entr en un laboratorio
de microbiologa; aparec en la sala
sumido en un delirio
aprehensivo, pensando que iba a ser contagiado por alguna
cepa virulenta, y, lo primero que me dijeron fue que tuviera
cuidado porque poda contaminar algo, vamos que all el
contaminante era yo!.
Por otro lado he llegado a darme cuenta de que el hecho de
buscar, de desarrollar una idea propia, nos da libertad
independientemente del resultado de esa bsqueda, y eso es un
autentico lujo.
Reflexionando acerca de este carcter humanista de la
investigacin he llegado tambin a la conclusin de que la
verdadera dificultad de la investigacin radica en el control de la
incertidumbre, en mantenimiento de la fe; en definitiva en
aguantar el farol. Las dificultades tcnicas son secundarias
aunque ciertamente sean limitantes en la mayora de las
ocasiones, pero, donde hay un ingeniero tiene que haber una
solucin.

La realizacin de este trabajo ha sido nicamente posible gracias


a la ayuda, consejos, colaboracin y apoyo de un gran nmero
de personas; Maria, Pepe, Rafa, Benito, Carlos, ngel, Susana,
Alejandro, Raimundo, Jos Antonio, Ulises, Enrique, Pedro
No tengo palabras suficientes para expresar mi agradecimiento a
todas las personas que me han ofrecido su apoyo en este
proyecto.
Preocupante indicio es, por otro lado, que a un investigador le
reciban a veces como a un zagal en un seminario, ya que denota
una falta de vocaciones alarmante en esta sociedad del atajo.
No puedo olvidar, finalmente, el apoyo que me han ofrecido
durante este tiempo mi novia, familia y amigos.

Fdo:
ARGONAUTA

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

INDICE
1-INTRODUCCIN Y OBJETIVOS3
2-DESCRIPCIN MICROBIOLGICA4
2.1-Precipitacin de carbonato clcico..4
2.2-Desarrollo del proyecto.6
3- APLICACIONES.19
3.1-Aplicaciones de los medios de cultivo
en la industria.19
3.2-Produccin de medios de cultivo para la
industria a partir de aguas residuales..21
3.3-Procesos crticos; evaporacin,
destilacin, y esterilizacin25
3.4-Aplicaciones del biocemento..28
3.5-Produccin de biocemento28
3.6-Reciclaje de hormign.28
3.7 ejemplo: planta integral de produccin
biocemento, medios de cultivo y reciclado
de hormign a partir de aguas residuales..31
5-BIBLIOGRAFA Y REFERENCIAS..42

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

1-INTRODUCCIN Y OBJETIVOS
El presente proyecto se ha realizado con el objeto de encontrar y
producir un medio de origen bacteriano capaz de precipitar algn
mineral de dureza suficiente como para aumentar la resistencia
de suelos, de cambiar las caractersticas de diversos materiales
o de encontrar otras aplicaciones en el campo de la ingeniera
civil.
Debido a la escasez de trabajos previos en esta materia, los
objetivos iniciales han ido evolucionando en funcin de los
condicionantes encontrados y de los imprevistos a los que nos
hemos enfrentado.
Las
referencias
encontradas
desarrollan
principalmente
proyectos de restauracin de monumentos a partir de bacterias
de cultivo en laboratorio. Nosotros hemos buscado bacterias en
el medio natural que sean capaces de aplicarse en procesos de
ingeniera civil o industriales.
Evidentemente, el tiempo transcurrido desde el comienzo ha
influido notablemente en este sentido, no solo por la madurez de
algunos conceptos y la introduccin de nuevas ideas sino
principalmente por las consultas realizadas acerca de los temas
aqu tratados. De hecho, en el transcurso del proyecto se ha se
han abierto nuevas vas, al comprobar la posibilidad de utilizar el
agua residual de una depuradora urbana como medio de cultivo
para determinados organismos, o al contemplar la posibilidad de
reciclar hormign.
El trabajo comienza con una breve introduccin microbiolgica
donde se presentan las bases tericas en las que se fundamenta
el proyecto para, posteriormente, resumir los trabajos previos y
referencias en lo referido a precipitacin biolgica de carbonato
clcico.
En la siguiente seccin de ese mismo captulo se describe el
desarrollo del proyecto. En l aparecen reflejadas las distintas
fases que se han seguido; toma de muestras en el campo para
buscar bacterias de origen natural, anlisis y cultivo de las
mismas en el laboratorio, pruebas de precipitacin en distintos
medios y valoracin de los resultados.
Como resultado del estudio se ha llegado principalmente a las
siguientes conclusiones:

En primer lugar que las bacterias analizadas intervienen en la


precipitacin de carbonato clcico, formando un precipitado ms
rpido y homogneo.
En segundo lugar que las aguas residuales urbanas pueden
constituir un medio ptimo para el crecimiento de algunas
bacterias con aplicaciones industriales.
En tercer lugar que las bacterias pueden obtener los elementos
necesarios para la precipitacin de fragmentos de cemento.
En el tercer captulo se desarrollan aplicaciones basadas en los
experimentos realizados. Son aplicaciones enfocadas hacia la
mejora de procesos industriales, como son las relacionadas con
al creacin de medios de cultivo, y hacia consecucin de un
desarrollo sostenible y respeto medioambiental como son la
utilizacin de aguas residuales y el reciclado de hormign, con
las implicaciones que generaran el sector de la construccin. Se
analizan tambin los posibles sistemas de produccin y sus
lneas de investigacin y desarrollo.
En el ltimo captulo se expone un ejemplo extrapolando las
condiciones de experimentacin en el laboratorio, evitando en la
medida de lo posible las suposiciones no experimentadas. Se
trata de una planta integral de produccin de medios de cultivo,
produccin de biocemento y reciclaje de hormign a partir de
aguas residuales, predimensionando la misma y describiendo los
sistemas utilizados.
Debo resear en este punto, que biocemento es una solucin de
bacterias y otros elementos fuente de nutrientes capaces de
precipitar carbonato clcico y que este nombre puede resultar
engaoso en algunas aplicaciones y tras los resultados de la
investigacin, como puede ser el caso de la descomposicin de
hormign en la que sera ms apropiado otro nombre.
Para finalizar resumo los principales conceptos analizados en el
proyecto:
-Precipitacin biolgica de carbonato clcico
-Nuevo uso para las aguas residuales
-Reciclaje de hormign y lodos de lavado
-Creacin de medios de cultivo para la industria

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

2-DESCRIPCIN MICROBIOLGICA
2.1- PRECIPITACIN DE CARBONATO CLCICO
La precipitacin de calcita es un proceso qumico mediante el
cual los cationes de calcio se unen a iones carbonato para
formar carbonato clcico. En la actualidad se est investigando
la influencia que tienen ciertos microorganismos en este
proceso, hablndose incluso de precipitacin biolgica de
carbonatos.

Ca +2 + CO32 CaCO3
Esta reaccin se produce en medio bsico. Es el proceso
contrario a la degradacin de carbonatos, que est arruinando
numerosos monumentos en nuestras ciudades debido a la
contaminacin atmosfrica, y el descenso de ph que provoca.
El calcio en el agua puede encontrarse en forma de bicarbonato
(HCO3-), soluble, o de carbonato (CO32-), ms insoluble. El
equilibrio entre ambos est influenciado por el CO2, que al
disolverse en el agua forma cido carbnico (H2CO3). El pH y los
factores que lo modifican, tienen gran influencia, por ejemplo las
bacterias. Efectivamente, existen bacterias capaces de aumentar
localmente el pH a su alrededor, favoreciendo la precipitacin de
carbonato clcico.
La fotosntesis en medios acuticos debe ser el principal proceso
que contribuye a la precipitacin del carbonato. El Ca se
encuentra disuelto en forma de bicarbonato, que se equilibra con
el CO2 disuelto:
Ca (HCO3)2 Ca CO3 + H2O + CO2
La fotosntesis, al asimilar el CO2, hace que el equilibrio se
desplace hacia la formacin de carbonato1.
Entre los agentes biolgicos en los que se ha comprobado la
formacin de carbonato, nos encontramos los siguientes:

Atlas RM y R Bartha, 2002. Ecologa Microbiana y Microbiologa


Ambiental. 4 Ed. Addison Wesley, pp 442-443

- Rodrguez-Navarro et al. (2003)2, proponen el uso de una


mixobacteria, Myxococcus xanthus, capaz de depositar calcita,
para el recubrimiento de la piedra porosa ornamental.
La actividad metablica de esta myxobacteria
induce la
produccin de NH3 que incrementa el ph de la solucin.
El Co2 producido por la bacteria es disuelto y transformado en
HCO-3 o CO3-2 .
Los carbonatos formados se adhieren a los granos de calcita
original formando un cemento.
La ventaja de M. xanthus es que no completa su ciclo vital en el
cultivo; aunque la bacteria esta viva en el cultivo, en la piedra
acaba muriendo.
La ganancia de peso induce a pensar que la mayor parte de la
precipitacin ocurre en 5-10 das.

Figura 1: Fotografias con microscopio electronico a) control


b)bacteria calcificada cbc c) calcita formada cc d) Biofilm (EPS)

2
Rodrguez-Navarro C, Rodrguez-Gallego M, Ben Chekroun K, and
MTGonzlez-Muoz, 2003. Conservation of ornamental stone by
Myxococcus xanthus-induced carbonate biomineralization. Appl Environ
Microbiol. 69(4):2182-93.

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

- Bachmeier et al. (2002)3, empleando Bacillus pasteurii,


relacionan la produccin de calcita con la enzima ureasa,
responsable de la alcalinizacin del medio por la produccin de
amoniaco.
-Cianobacterias (Fotosintticas). La calcificacin fotosinttica
est asociada a las cianobacterias. Est basada en la utilizacin
de CO2 disuelto que existe en equilibrio qumico con HCO y CO.
-Piero Tiano4, ha intentado inducir la precipitacin de carbonato
clcico a partir de Organic Matrix Macromolecules, extradas de
Mytilus hyspanicus.(molusco).

-Brunella Perito et al5. y Giorgio Mastromei del Departmento de


Biologa animal y gentica Leo Pardi, University of Florencia,
Italia.
Estudian la formacin de cristales de calcita en la Bacillus subtilis
para identificar los genes y estructuras celulares que influyen en
la biomineralizacin. Este trabajo es parte de Bioreinforce
EC project dirijido hacia la bsqueda de mtodos de
biomineralizacin para la restauracin y conservacin de
monumentos.
-Un equipo de la Universidad Pierre y Marie Curie de Pars
consigui, gracias a un producto activador, que las bacterias
fabricasen carbonato de calcio en laboratorio. Slo faltaba dejar
las probetas y dedicarse a las obras de arte, cosa que hicieron el
LRMH (Laboratorio de Investigacin de los Monumentos
Histricos ) y la Universidad de Nantes en colaboracin con la
sociedad Calcite Bioconcept, duea de la patente francesa
depositada en 1989 por la Universidad Curie, despus de
seleccionar, con la ayuda del Instituto Pasteur, la especie
idnea: Bacillus Cereus6.

Figura 2: Mecanismo de la precipitacin de calcita bio-inducida (Piero


Tiano)

Brunella Perito & Giorgio Mastromei. Conservation of monumental


stones by bacterial biomineralization.Microbiology Today vol30/aug03
3

Bachmeier KL, Williams AE, Warmington JR, and SS Bang, 2002.


Urease activity in microbiologically-induced calcite precipitation. J
Biotechnol. 93(2):171-81.
4
Tiano, P., Biagiotti, L. & Mastromei.1999. Bacterial biomediated calcite
precipitation for monumental stones conservation: methods of
evaluation. J Microbiol Methods 36, 139145., G. ().

Castanier, S., G. Le Mtayer-Levrel, G. Orial, J. F. Loubire, and J. P.


Perthuisot. 2000. Bacterial carbonatogenesis and applications to
preservation and restoration of historic property, p. 201-216. In O.
Ciferri, P. Tiano, and G. Mastromei (ed.), Of microbes and art: the role of
microbial communities in the degradation and protection of cultural
heritage. Plenum, New York, N.Y.

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

2.2-DESARROLLO DEL PROYECTO


FASE 1: Toma de muestras
El objetivo del proyecto es la bsqueda de una bacteria o
asociacin de ellas que induzca la precipitacin de carbonato
clcico u otros minerales capaces de aumentar la resistencia de
una muestra de terreno o de modificar las propiedades de otros
materiales.
No se deben olvidar por tanto los condicionantes que suponen
estos objetivos, debiendo siempre estar presentes en cada fase
del proyecto.
Los principales, a efectos de este estudio, son el impacto
medioambiental y el control de las muestras liberadas.
Desafortunadamente, el hecho de producir una muestra
controlada incide negativamente en el impacto que esta puede
producir debido a que el control de la muestra en el
medioambiente ser tanto mejor cuanto ms sinttico sea el
medio de inoculacin. De esta manera, el crecimiento de las
bacterias no puede depender totalmente de los nutrientes que se
encuentren en la naturaleza sino de los que nosotros
introduzcamos. Por otro lado la introduccin de elementos
ajenos al medio natural tendra repercusiones negativas sobre el
mismo y podra condicionar la viabilidad del proyecto. Esto
dejara de constituir un problema si se consiguiera que las
bacterias murieran antes de ser introducidas, si estas murieran
tras realizar su misin o si se encuentran otros medios de
control.
As pues, hay que encontrar un equilibrio entre ambos
condicionantes a lo largo del proyecto partiendo por ello de una
premisa fundamental: buscar medios naturales.
Para la bsqueda de bacterias candidatas se ha procurado
atender al factor medioambiental y se ha buscado en el medio
natural.
Como la naturaleza si es un medio en equilibrio se decidi
comenzar la bsqueda en lugares donde hay procesos de
formacin de rocas calcreas.

Se realizaron campaas de campo en Octubre de 2003 en los


lugares indicados en los mapas, tomando muestras donde se
consider que haba posibilidades de encontrar un ecosistema
favorable.

Laguna Taray

Lagunas de Ruidera

Nacimiento Ro Mundo
Figura 3: Emplazamiento de las muestras recojidas

Se ha demostrado por diversos autores que existen


microorganismos que juegan un papel importante en la
precipitacin de carbonatos, tanto en lagos7 como en arenas de
origen cretcico y jursico8. Por ello se ha buscado
principalmente en lugares donde existen procesos de formacin
de rocas calcreas.

7
Dr. Maria Dittrich. Calcite precipitation in lakes . Swiss Federal Institute
for Environmental Science and Technology. Switzerland
8
Heiko hillga et al. Microbially induced cementation of carbonate sands:
are micritic meniscus cements good indicators of vadose diagenesis?.
Institut de Geologie et Paleontologie, Universite de Fribourg.

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Como puede observarse en la fotografa 2 el musgo es un


elemento que puede tener influencia en el proceso natural al
actuar como decantador y como elemento fuente de nutrientes.
Tambin se han recogido muestras de heces de ganado (Figura
5.) Las myxobacterias como Myxococcus xanthus son capaces
de formar sobre este tipo de sustratos estructuras que se
conocen como cuerpos fructferos (rellenos de mixosporas) que
se pueden observar en la naturaleza sobre corteza de rbol,
material vegetal en descomposicin y en particular estircol de
animales.

Estas muestras permanecieron por el espacio de un mes en el


laboratorio para que se desarrollara la materia viva presente.
Ya entonces se poda observar en algunas muestras un alto
grado de precipitacin, si bien no se saba con certeza su
naturaleza. En una de ellas se formaron yesos de varios
centmetros mientras que en otras se formaban precipitados de
color claro con alto grado de cohesin.

Figura 5: Heces de ganado ovino

Figura 4: Roca cubierta de musgo

Las muestras fueron recogidas y almacenadas segn su


procedencia. As se obtuvieron las siguientes denominaciones
RUMO, RULE, PH
En las tomas se procur introducir muestras del medio que
rodeaba el lugar donde se intua la precipitacin. Por esta razn
unas muestras llevaban parte de agua mientras que otras
estaban en seco.
Para homogeneizarlas se rellenaron de agua destilada y se
agitaron para poder comenzar su tratamiento posteriormente.

Figura 6: Roca en formacin

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

FASE 2 : Valoracin
Para poder valorar las muestras y predecir as la existencia de
precipitacin biolgica se distribuyeron stas en tubos de ensayo
de 50 ml.
Para ello se agitaron los botes de muestras para
homogeneizarlos y se trasvaso una pequea cantidad su
contenido a los tubos de ensayo.
Se llenaron siete tubos por cada muestra recogida, resultando
un total de 49 tubos.

Figura 8: Hisopo en los tubos de ensayo

Observada dicha afinidad, se procedi a llenar probetas de


500ml con las muestras recogidas e introducir estas en algodn.

Figura 7: Distribucin en tubos de ensayo

Se introdujeron hisopos en estos tubos para que las bacterias


existentes en el medio se adhirieran al algodn de estos, y as
poder observar la querencia de los microorganismos al oxgeno y
al carbono. As los distintos grupos de bacterias existentes se
colocaran en un estrato diferente de los tubos. Pudo observarse
que en la parte inferior de los hisopos, donde hay algodn, se
acumulaban bacterias y pequeos precipitados de color
blanquecino. En otras muestras se observaron pequeos
cristales que parecan ser sales y que produjeron finalmente
piedras de yeso.

Figura 9: Probeta con algodn

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Pasados 15 das comenzaron a observarse los precipitados y la


formacin de comunidades de microorganismos en estas
probetas.
En las muestras de procedencia RUMO se observ un
agrupamiento de partculas slidas con cohesin formando
piedras de unos 2cm. Por la apariencia de las formaciones poda
tratarse de carbonatos o de algn silicato en forma de arcilla,
por lo que se procedi a su identificacin mediante la siguiente
Tcnica instrumental
Una de las tcnicas ms habituales de caracterizacin e
identificacin de slidos inorgnicos es la difraccin de rayos X.
En concreto el aparato que se ha utilizado en el estudio es un
difractmetro de polvo Buker AXS D8 con
radiacin
monocromtica CuK1 equipado con monocromador primario de
grafito y detector de centelleo.
Los rayos X se pueden definir como una radiacin
electromagntica de longitud de onda del orden de 1 A , que
cae en la zona del espectro electromagntico entre los rayos y
el UV.
Estos se producen cuando partculas cargadas con elevada
energa, como son los electrones acelerados con un voltaje de
30.000 V, colisionan con la materia. Los electrones son frenados
en la colisin, y su energa cintica se convierte en radiacin
electromagntica.
Las medidas se han llevado a cabo en modo de contaje por
pasos en un rango angular en 2 entre (10 y 75 en la muestra
Rumoa y 5 y 60 en la de Rumob); el tiempo de contaje se ha
ajustado en cada caso para obtener una intensidad suficiente
para permitir la identificacin sin ambigedad de los materiales
presentes en las muestras, resultando de las mismas carbonato
clcico.

Figura 10: Muestra RUMO a

Figura 11: Muestra RUMO b

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

FASE 3: Cultivo-identificacin
En esta fase se pretende aislar las bacterias involucradas en la
precipitacin de carbonato y posteriormente proceder a su
cultivo.
Tambin se cultivar la bacteria Myxococcus xanthus CECT 422T
procedente de la Coleccin Espaola De Cultivos Tipo para
comprobar su capacidad de influencia en la precipitacin y poder
posteriormente comparar ambas.

Los lugares de donde se realiza la extraccin son:


RUMO
1-Superficie liquida
2-Exterior piedra
3-inferior de probeta
4-Medio de probeta en algodn
5-Interior piedra
PH
1-superf precipitada
2-Algodn
3-Algodn
4-Algodn en superficie
Ti
1-superficie lquida
2-cristal
3-medio de probeta
4-fondo piedra de yeso
-Cultivo de las muestras

Figura 12: Extraccin en una piedra

-Extraccin de microorganismos de las muestras


Se procede a extraer la microbiota de las muestras de la
probeta, tanto de las comunidades adheridas al algodn como de
las zonas en las que se ha observado precipitacin.
Las muestras se extraen con un asa de siembra (Figura 12) que
tambin sirve para extender las bacterias en los medios de
cultivo.

Se realiza un primer cultivo utilizando como base para el medio


de cultivo el agua propia de los lugares de extraccin de las
muestras, aadiendo agar y peptona como fuente de nutrientes.
Esta agua se filtra con papel de filtro para eliminar los slidos en
suspensin. Aadimos las cantidades abajo indicadas de agar y
peptona y autoclavamos el conjunto para esterilizarlo.
Un autoclave est constituido bsicamente por una cmara
rgida y hermtica que incluye una puerta con dispositivos de
seguridad para permitir introducir los objetos a esterilizar. Esta
cmara lleva adosados dispositivos para medida de presin y
temperatura y elementos calefactores para mantenerla caliente.
El calor en la forma de vapor a saturacin y a presin es el
agente ms prctico para esterilizar ya que el vapor a presin
proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por
ebullicin.

10

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Los autoclaves de laboratorio se emplean generalmente a una


presin de vapor de una atmsfera por encima de la presin
atmosfrica lo cual corresponde a una temperatura de 121 C. El
tiempo de exposicin depende del volumen del lquido, de tal
manera que para volmenes pequeos se utilizan 20 minutos a
121 C. La principal desventaja de este mtodo es que produce
la desnaturalizacin de protenas.

RUMO-EDAR
Z=210ml
x=3,15gr agar
x=5,35gr peptona

Una vez que se ha obtenido el medio de cultivo se procede a su


distribucin en placas Petri y se espera a su solidificacin para
introducir las muestras de microorganismos.

El conjunto se esteriliz en autoclave y se distribuy de la misma


manera que el medio anterior.
Transcurridas 48 horas desde el cultivo, pudo observarse que el
crecimiento de las comunidades bacterianas era mucho mayor
que con el medio primigenio.

AGAR

PEPTONA

Zml 100%
x gr 1,5%

25,5gr 1000ml
x Zml

RUMO

PH1

Z=75ml
x=1,12gr agar
x=1.92gr peptona

Z=55ml
x=0,83gr agar
x=1,4gr peptona

-Identificacin

Ti
Z=60ml
x=0,9gr agar
x=1,53gr peptona

Observado el crecimiento de estos cultivos se pens en la


posibilidad de sustituir el agua destilada por agua residual
urbana debido a la riqueza de nutrientes que contiene, por lo
que se procedi a realizar un segundo cultivo con agua EDAR.
Se prepar aun medio con 210ml de agua EDAR filtrada y con
las cantidades de agar y peptona abajo indicadas.

Debido a su reducido tamao los microorganismos no son


observables a simple vista. Para poder examinarlos al
microscopio se llevo a cabo una tincin de Gram. La tincin de
Gram es una tincin diferencial que permite que unas bacterias
se tian de un color u otro segn la composicin de su pared
bacteriana. Esto permite dividir las bacterias en 2 grupos, las
Gram positivas (azul-morado) y las Gram negativas (rojo). Esto
permite deducir propiedades de su estructura.
Con esta tincin adems se puede visualizar la morfologa forma
de las bacterias (cocos o bacilos) y agrupacin.
Metodologa
Se trata de una tincin diferencial que requiere el uso de un
colorante primario (cristal violeta), un mordiente (lugol), un
agente decolorante (etanol 96) y un colorante de contraste
(parafina).
El cristal violeta se usa en primer lugar y tie todas las clulas
de color azul oscuro.
El lugol se utiliza como mordiente, es decir, una sustancia que
forma un complejo insoluble unindose al colorante primario. El
complejo resultante (cristal violeta-yodo),sirve para intensificar
el color, y todas las clulas aparecen en este momento color
violeta o morado.

11

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

El etanol 96 tienes una doble funcin. Sirve como disolvente de


lpidos y como agente deshidratante de protenas. Las clulas
gram positivas tienen una baja concentracin de lpidos en su
pared celular y son disueltos por la accin del alcohol, dando
como resultado pequeos poros que se cierran por la accin
deshidratante del mismo. Como consecuencia, es difcil la
eliminacin de la tincin primaria y estas clulas permanecen
del mismo color (morado). Por el contrario, en las paredes de las
clulas Gram negativas hay una alta concentracin de lpidos
que, al ser disueltos, crean grandes poros que no pueden ser
cerrados por la accin deshidratante del alcohol. Esto facilita la
eliminacin del complejo cristal violeta-yodo, quedando las
clulas sin colorear.
La safraninina tie de rojo aquellas clulas que han sido
previamente decoloradas. Como solo lo han sido las Gram
negativas, estas son las nicas que absorben el colorante de
contraste, permaneciendo las gram positivas con el color morado
de la tincin primaria.
Como consecuencia de todo lo anterior se deduce que el paso
mas importante del proceso es la decoloracin con alcohol, ya
que un exceso llevara a la decoloracin de las clulas gram
positivas que admitiran posteriormente el colorante de contraste
(safranina), y por el contrario, el defecto no eliminara por
completo el complejo cristal violeta-yodo provocando que todos
los microorganismos aparezcan como gram positivos.

Debido a la gran variedad de formas bacterianas encontradas en


cada cultivo, se decidi realizar una amplificacin, es decir, un
nuevo cultivo de las comunidades de cada placa cuyo aspecto las
diferenciaba de las dems.
De esta forma se distribuyeron los cultivos de las 5 placas RUMO
en otras 4 placas por cada una.
De estas 20 placas cultivadas se recogieron muestras y se
hicieron los medios lquidos de bacterias que hemos denominado
de la siguiente manera: a, b, c ( figura 14)

Se midieron las concentraciones de bacterias siguientes:


Concentraciones McFarland
A-Rumo53.2
B----3.9
A+b-4
C-Rumo4-2--4
D-Rumo2-1--5
E-Rumo33.6McF
F-Tirez2
G-Rumo1

En la figura 13 se puede ver un cultivo de bacterias en una placa


petry realizado a partir de la muestra RUMO. Las bacterias
crecieron en colonias, de cada una de las cuales se llev a cabo
una tincin de gram (amplificaciones en la figura)

12

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Figura 13: Cultivo RUMO y observacin al microscopio

13

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Figura 14: Esquema de separacin

14

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

-Cultivo de Myxococcus xanthus


Se ha reconstituido y cultivado la bacteria Myxococcus xanthus
CECT 422T procedente de la Coleccin Espaola De Cultivos
Tipo.
El medio de cultivo recomendado por dicho centro es el
CASITONE AGAR compuesto por:
- Casitone 1 g
- Beef extract 1 g
-Glucose 1 g
-Agar powder 12 g
-Distiled water 1l
Adems de el cultivo recomendado se prepararon varios medios
de distinta naturaleza, donde se cultiv tambin la bacteria.

Figura 16: a)Cultivo M. xanthus Agar nutritivo-EDAR destilado. b)


Myxococcus xanthus a travs del microscopio

En la figura 16b se observan las bacterias teidas con azul de


metileno. Podemos diferenciar su forma de bacilos

Figura 15: a) Medio Agar-sangre. b) Medio Casitone Agar


+liquido EDAR

15

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

FASE 4: Preparacin de medios de precipitacin


Teniendo en cuenta los trabajos previos en la materia y los
posibles mecanismos metablicos por los que las bacterias
inducen la precipitacin de carbonatos, se han diseado dos
medios de precipitacin.
Conviene recordar la diferencia entre medios de cultivo, que son
aquellos que permiten el crecimiento bacteriano y los medios de
precipitacin, que son aquellos que crean unas condiciones
favorables para inducir la precipitacin de carbonato calcico.
A estos medios de precipitacin lquidos se le aaden las
concentraciones de bacterias anteriores y se inoculan en otro
medio, que si bien se puede llamar tambien de precipitacin, se
ha preferido nombrar para mayor claridad, medio de
experimentacin.
Figura 17: Medios de precipitacin en proceso de disolucin

Medios de precipitacin
Medio1
15gr N.B
500ml agua edar
250ml agua destilada
100g urea
20g cacl2 anhidro
10 NaHCO3
50g Nh4Cl

Estos medios se aadieron distintas concentraciones de


bacterias y se introdujeron en arena, arena limosa, geotextil y
fragmentos de cemento endurecido, tal y como se muestra en al
figura 18.

Medio2
250ml agua edar
35g Cacl2

16

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Figura 18: Esquema de inoculacin

17

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

FASE 5: Valoracin
No se observ ninguna precipitacin significativa en las muestras
de suelo, probablemente debido a la falta de calcio.
En las muestras de cemento, por el contrario, apareci una
pelcula de precipitado en un plazo muy corto de tiempo.
Ocurri en el medio que contena agua residual. La precipitacin
de esta biopelcula puede ser debida a una dilucin de los
compuestos de cemento y su posterior transformacin en
carbonato clcico por parte de las bacterias. En los controles
negativos efectuados en ausencia de bacterias se formaron
pequeos precipitados en el fondo de la placa, lo que confirma la
valoracin anteriormente expresada. Existe tambin la
posibilidad de que las bacterias ayuden en el proceso de
descomposicin del hidrxido clcico o de otros compuestos
clcicos del cemento. Este ltimo punto, as como la cantidad de
precipitado, la interfase entre la biopelcula y el cemento o las
concentraciones biolgicas ptimas deben estudiarse en mayor
profundidad.
Tras el anlisis de difraccin de rayos X de esa biopelcula, que
confirma sin lugar a dudas que est compuesta principalmente
por carbonato clcico, se puede concluir que estas bacterias
inducen la precipitacin de carbonato clcico de una forma
rpida y homognea.

Figura 20: Composicin de la biopelcula formada

Figura 19: Biopelcula de CaCO3 formada sobre un fragmento de


hormign.

18

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

3-APLICACIONES
3.1-APLICACIONES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO EN LA
INDUSTRIA
Microbiologa industrial
Es la parte de la microbiologa que estudia los procesos
industriales basados en la utilizacin de microorganismos para
la produccin. Actualmente forma parte de ese compendio de
disciplinas llamado biotecnologa.
Para que un microorganismo sea apropiado para su utilizacin
industrial debe producir una sustancia de inters (normalmente
enzimas), aunque hay otros aspectos a considerar. Una
caracterstica importante es que el organismo industrial crezca
rpidamente y produzca el compuesto deseado en un perodo de
tiempo relativamente corto. El organismo, adems, debe ser
capaz de crecer en un medio de cultivo relativamente barato,
que se pueda obtener en grandes cantidades.
La produccin industrial de esos compuestos debe hacerse de
manera
que existan concentraciones limitantes de algunos
compuestos que pueden interferir en los procesos de produccin.
Por ejemplo, altas concentraciones de anin fosfato suprimen la
sntesis de muchos antibiticos.
reas de aplicacin
Las reas de aplicacin de la microbiologa industrial son muy
variadas. Las principales son: salud, alimentos, produccin
vegetal y animal, industria, minera, servicios e investigacin.
Industria farmacutica
En primer lugar se debe destacar la importancia de la
microbiologa Industrial en el mantenimiento de la salud y
tratamiento de enfermedades, fundamentalmente por su
aplicacin en la produccin de compuestos de actividad
farmacolgica como antibiticos, vacunas, enzimas de uso
mdico, protenas...
Ejemplos
Streptomyces, Bacillus, myxobacterias, Escherichia coli, Bacillus
subtilis, Ashbya gossypii, Pseudomonas, Propionibacterium, ,

Aspergillus Nger, Thermus aquaticus ,Bordetella pertusis,


clostridium tetali, Peniculim chrysogenum, Bacillus sp, Aspergilus
ochraceus
Industria alimenticia
En la industria de alimentos es tambin significativa la aplicacin
de la microbiologa Industrial en la produccin de bebidas,
enzimas( proteinas usadas como catalizadores), saborizantes,
productos lcteos, etc. Por ejemplo se aprovecha la bacteria
Lactobacillus bulgaricus o el Streptococcus thermophilus para la
elaboracin de yoghurt; el vinagre puede ser producido por la
bacteria Gluconobacter suboxidans; algunos saborizantes
provienen de una bacteria conocida como Connebacterium
glutamicum.. La utilizacin de las bacteriocinas producidas por
bacterias lcticas de origen crnico como conservadores de los
alimentos, permitira la sustitucin de aditivos qumicos de
sntesis por otros naturales
Lactobacillus
bulgaricus,
Streptococcus
thermophilus,
Gluconobacter
suboxidans,
Connebacterium
glutamicum,
Lactobacillus,streptococcus,Pediococcus,Enterococcus,
Vagococcus, Lactococcus Thermobacterium Streptobacterium
Acetobacter aceti,Carnobacterium Betabacterium, Zymomonas
Agricultura y ganaderia
La produccin agropecuaria se ve tambin favorecida en sus
aspectos de produccin vegetal y animal por un conjunto variado
de procesos microbiolgicos que se han enriquecido
notablemente en los ltimos aos con la utilizacin de tcnicas
de ingeniera gentica.
Un caso interesante es el de la produccin de insecticidas
biolgicos. stos, los producen dos bacterias, Bacillus
thuringiensis y el Bacillus popilliae, y tienen la ventaja de tener
menos efectos nocivos que los insecticidas sintticos como el
DDT. Pueden, entre otros usos, emplearse en los silos donde se
almacenan granos.
Hay microorganismos (rizobacterias) que establecen relaciones
no patognicas con sus hospedadores que pueden incrementar
su crecimiento y la resistencia a estreses biticos o abiticos,
produciendo ms Kg por hectrea y una mejor calidad.

19

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

La materializacin de la idea de agricultura sostenible conlleva la


disminucin o eliminacin del uso de productos qumicos tanto
en la fertilizacin como en la lucha contra las enfermedades y
plagas de las plantas
Ejemplos
bacillus thuringiensis, B. subtillis , Agrobacterium tumefaciens,
A.tumefaciens, rhizobium sp, Bacillus thuringiensis, verticillium
lecanii
,candida utilis, clastridium, Brucilla abortus,

Investigacin
Docencia e investigacin microbiologia, biologia molecular,
veterinaria, medicina
Otra serie de productos, como la insulina, la hormona de
crecimiento y el interfern, pueden ser obtenidos mediante
tcnicas de ingeniera gentica utilizando la bacteria Escherichia
coli.
Enzimas derivadas de
thermophilic bacterium o
Thermus
aquaticus.

Biominera:
El rea de aplicacin en minera est relacionada con la
biolixiviacin o sea con la aplicacin de microorganismos en la
extraccin de metales de minerales de baja ley. Son tiles para
la identificacin y control de contaminantes. Como ejemplo, La
bacteria Thiobacillus ferrooxidans ha demostrado la capacidad de
concentrar oro en fragmentos de roca.

Biorremediacin:
-degradacin e herbicidas y pesticidas
-degradacin de hidrocarburos y otros compuestos qumicos
orgnicos Pseudomanas Bacillus pasteurii Alcarnivorax
-degradacin de elementos txicos o radioactivos como D.
radiodurans

Industria, ( textil , qumica,...)


Ejemplos de bacterias importantes en la industria son los que se
dan a continuacin
La industria qumica produce acetona y butanol a partir de la
bacteria Clostidium acetobutylicum, algunos polisacridos
(azcares) a partir de la bacteria Xanthomonas , Produccin de
cido sulfurico Sulphate o etanol a partir de saccharomcyes
cervisiae, butanol, acetona con Clastridium acetobutilicum
Produccin de gas metano con methane bacterias o Goma
xantano con xanthomonas campestres
utilizacion de enzimas que aceleran reacciones qumicas
Aspergillus Nger( Acido gluconico, citrico)
Para la Produccin de plsticos se utilizan
Aspergillus oryzae o Alcaligenes eutrophus

Biosensores
Photobacterium phosphorium
As pues, la industria microbiolgica se encuentra, al inicio de
una era importante en donde se sustituirn probablemente
muchos procesos tradicionales por otros novedosos que sern
sin duda ms eficaces y menos costosos.

Bacillus subtilis,

En la Industria petrolera se estn desarrolando Para la limpieza


de tanques y vertidos se utilizan pseudomonas.

20

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

3.2- PRODUCCIN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA LA


INDUSTRIA A PARTIR DE AGUAS RESIDUALES
A-Introduccin
Se ha comprobado, en la fase de cultivo de bacterias en
laboratorio para el biocemento, que algunas colonias crecen con
mayor rapidez y en mayor cantidad si el medio de cultivo est
compuesto por agua esterilizada procedente de una E.D.A.R.
Esta situacin era previsible debido a la gran riqueza de nutrientes
que contiene este agua, si bien se corre el riesgo de que existan
concentraciones de elementos perjudiciales. Por tanto, para
utilizar este agua habra que hacer un estudio especfico de
optimizacin de crecimiento para cada microorganismo y un
control continuo y tratamiento de las necesidades exigidas a este
medio.
Estudiaremos la naturaleza del agua residual tanto para la
produccin de medios de cultivo y medios nutricionales o como
base de otros medios para la industria (farmacutica y
alimenticia principalmente) como para la produccin del
biocemento y procesos de bioremediacin. Cabra tambin la
posibilidad de estudiar la modificacin de este agua para la
creacin de medios de fermentacin para la industria, si bien
este anlisis resultara muy complejo.
As daremos un nuevo uso a las aguas residuales incidiendo en
la poltica medioambiental actual y en el concepto de desarrollo
sostenible de los que poco cabe comentar.
Estos medios de cultivo pueden tener una importante aplicacin
prctica debido a la utilizacin, tanto actual como potencial, de
las bacterias en los procesos industriales alimentarios o
farmacuticos, en laboratorios o en procesos de bioremediacin.
Estas aplicaciones condicionan evidentemente el sistema de
produccin de los medios. Debido a este hecho la investigacin
de la viabilidad del proyecto debe orientarse en primer lugar
hacia el crecimiento en los medios de cultivo de bacterias
utilizadas en la industria y en laboratorios. Para ello,
previamente, sera necesario realizar un estudio de mercado y
seleccionar esas bacterias y la forma en que se pueden distribuir
en el marcado.
El esquema que se seguir en la investigacin previa consistir
en:

1234-

Preparacin de medios y bacterias candidatas


Matriz de valoracin (cultivos de bacterias candidatas)
Seleccin de bacterias y medios con resultado positivo
Diseo y desarrollo del producto (base o medio de
cultivo para una bacteria)
5- Diseo de sistema de produccin
Muestra
EDAR

Bacterias
candidatas

Destilacin
multietapa

Matriz
Creacin de medios

Valoracin de
cultivos y sus
aplicaciones

Producto 1
(semiesteril)

Producto 2
(esteril)

Producto 3
(masivosemiesteril)

Sistema de
produccin
DestilacinAutoclave

Sistema de
produccin 3
Evaporacindesinfeccin

Medio EDAR

Sistema de
produccin
ConcentradorU.V.A

21

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

B-Muestra EDAR
Se han tomado muestras de colectores prximos a la entrada de
algunas depuradoras. En un principio se pens en el anlisis de
lodos primarios dichas estaciones, pero ante la imposibilidad de
conseguirlos se opt por trabajar con agua residual. Estas
muestras fueron filtradas para desechar la mayor parte de los
slidos en suspensin que contenan.
La variabilidad en la composicin de este agua es el mayor
condicionante del estudio.
C-Destilacin
Se define como destilacin a la operacin unitaria empleada con
el fin de separar los componentes de una mezcla lquida
homognea mediante la vaporizacin parcial de dicha mezcla. Se
ha utilizado esta operacin, no para obtener un destilado puro,
sino para concentrar nuestro volumen de agua residual, pese a
que puede suponer una desnaturalizacin de algunos elementos
de dicho agua.

Se destil una muestra de agua residual de 500 cc durante dos


horas para concentrar dicha muestra en 50%.

D-Creacin de medios
La composicin de los medios depender del tipo de bacteria a
cultivar y del uso de las mismas en la industria.
En la primera aproximacin realizada se han creado medios de
cultivo a partir de agua residual con agar, agua residual
destilada con agar y agua residual enriquecida con agar
nutritivo.
De la misma forma se han creado los medios ptimos de las
bacterias cuyo cultivo se ha analizado.

Figura 22: Bases para medios de cultivo con agua destilada, EDAR, y
EDAR esterilizada

Figura 21: Destilador simple

22

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

E-Bacterias candidatas
Sern candidatas aquellas bacterias que tengan aplicaciones
industriales, resumidas en el apartado anteriores especial las
bacteriolticas.
En este estudio hemos analizado las bacterias que aparecen en
la siguiente matriz.
F-Matriz de valoracin de crecimiento

Microbiota
suelo

Myxococcus
Xanthus

Escherichia
coli

..

Medio
ptimo

100 %

100%

100%

..

Medio
control

0%

0%

0%

..

EDARagar

90%

150%

60%

..

EDAR2agar nut.

100%

200%

80%

..

EDAR
destilada

90%

170%

50%

..

Figura 23: Cultivo de Myxococcus en medio EDAR-Agar

G-Valoracin de cultivos y sus aplicaciones


Se ha hecho una valoracin inicial a simple vista, que habr que
completar con algn mtodo cuantitativo.

23

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

H-Ejemplo de productos
Producto 1
Gel o concentrado de agua residual. El producto ser semiesteril
debido a su uso exclusivo en laboratorios. Como all ser
utilizado como base para la creacin de medios y ser
esterilizado en autoclave, no es necesaria una esterilizacin total
en la etapa de produccin.
El envase ha de permitir que el producto permanezca lo mas
aislado posible para que no se contamine tanto si la
presentacin es lquida como si es semislida. En este ltimo
caso, la base ha de ser gelatina o algn tipo de solidificador que
permita su conservacin a temperatura ambiente.
Sistema de produccin
1-Captacin del agua de la E.D.A.R
2-Decantacin fsica
3-Filtracin primaria
4-Microfiltracin
5- Regulacin
6- Concentracin
7-Esterilizacin con UVA
8-Control, tratamiento y envasado de medios de cultivo
9-Tratamiento de fangos
Producto 2
Medio de cultivo con agar, base de extracto de agua residual y
otros componentes variables segn su fin.
Es un producto de aplicacin directa para el cultivo, sin tener
que preparar el medio en laboratorios ni esterilizarlo. Por este
motivo el producto ha de ser totalmente estril y ha de
conservar esta caracterstica a lo largo de toda su vida til. Para
su distribucin y conservacin se ha diseado un tanque de
dimensiones variables que podra ser alquilado por el cliente y
conservado por la empresa productora. Este tanque ha de
cumplir condiciones de esterilidad y mantenimiento de las
propiedades fsico-qumicas del lquido.

Respecto a la esterilidad, se ha pensado en un recipiente con


materiales y sellado apropiados, una vlvula antirretorno para
evitar que la contaminacin pase al interior y un filtro de
autolavado con algn producto esterilizante en el grifo, como
Glutaraldehido, por ser el punto ms crtico.
Para conservar un medio que contenga agar, hay que mantener
una temperatura superior a los 60 C y que el lquido no est en
reposo. Para ello, el tanque llevar un aislante trmico, un
agitador que mantenga el lquido en movimiento, un sistema de
calentamiento con sensor de temperatura y una conexin a la
energa elctrica que proporcione la fuente de calor constante.

Vlvula
antiretorno
Autolavado
con
esterilizador
Aislamiento
trmico
Grifo
de
caudal
regulable

Conexin
electrica

Agitador

Vlvula
recarga

24

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

que actuara al mismo tiempo como un autoclave y aprovechar


de esta manera de una forma mucho ms eficiente la energa
calorfica.

Sistema de produccin
1-Captacin del agua de la E.D.A.R
2-Decantacin fsica
3-Filtracin primaria
4-Microfiltracin
5- Regulacin
6- Evaporacin destilacin
7-Esterilizacin con Autoclaves
8-Control, tratamiento y envasado de medios de cultivo
9-Tratamiento de fangos

Producto 3
(Masivo-desinfectado)
Producto fabricado en grandes cantidades para su uso como
elemento nutriente en procesos de biorremediacin.
Sistema de produccin
1-Captacin del agua de la E.D.A.R
2-Decantacin fsica
3-Filtracin primaria
4-Microfiltracin
5- Regulacin
6-Evaporacin
7-Desinfeccin
8-Control, tratamiento y envasado de medios de cultivo
9-Tratamiento de fangos
3.3-Procesos
esterilizacin.

crticos;

evaporacin,

destilacin,

Se consideran estos procesos como crticos por dos razones


fundamentales; la primera es su relativa complejidad tcnica y
la segunda son las interrelaciones que existen entre ellos. As,
por ejemplo, si mi producto necesitara una destilacin y una
esterilizacin, se podra modificar la torre de destilacin para

Evaporacin
El procedimiento de evaporacin consiste en separar los
componentes ms voltiles exponiendo una gran superficie de la
mezcla.
Los principales problemas que se presenta al utilizar este
mtodo son la gran superficie requerida para evaporar un
volumen de agua como este, el tiempo necesario para que se
produzca y la dependencia de los factores climatolgicos
(temperatura y humedad relativa del aire, velocidad del viento).
Existen sistemas que mejoran el rendimiento potenciando la
evaporacin basados en paneles que aumentan la superficie por
unidad de volumen o en aportes de calor. Otros sistemas se
fundamentan en el aprovechamiento de la energa solar a partir
de colectores solares que crean unas condiciones mejores para
la evaporacin.
Destilacin
La destilacin consiste en separar los componentes de las
mezclas basndose en las diferencias en los puntos de ebullicin
de dichos componentes. Se considera voltil un compuesto
cuando su punto de ebullicin es bajo en relacin con los otros
componentes de puntos de ebullicin mayor. Los compuestos
con una presin de vapor baja tendrn puntos de ebullicin altos
y los que tengan una presin de vapor alta tendrn puntos de
ebullicin bajos.
Los tipos de Destilacin ms comunes son: La Destilacin
Simple, Destilacin Fraccionada y la Destilacin por Arrastre con
Vapor. En la Destilacin Simple, El proceso se lleva a cabo por
medio se una sola etapa, es decir, que se evapora el lquido de
punto de ebullicin ms bajo (mayor presin de vapor) y se
condensa por medio de un refrigerante
En la Destilacin fraccionada el proceso se realiza en multietapas por medio de una columna de destilacin en la cual, se
llevan a cabo continuamente numerosas evaporaciones y
condensaciones. Al ir avanzando a lo largo de la columna, la
composicin del vapor es ms concentrada en el componente

25

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

ms voltil y la concentracin del lquido que condensa es ms


rica en el componente menos voltil. Cabe mencionar que este
tipo de destilacin es mucho ms eficiente que una destilacin
simple y que mientras ms etapas involucre, mejor separacin
se obtiene de los componentes.
En la Destilacin por Arrastre con Vapor se hace pasar una
corriente de vapor a travs de la mezcla de reaccin y los
componentes que son solubles en el vapor son separados. Entre
las sustancias que se pueden separar por esta tcnica se pueden
citar los Aceites Esenciales.
Adems de los tradicionales sistemas de destilacin se estn
estudiando mtodos de destilacin con energa solar, a partir de
hornos solares fundamentalmente, o de sistemas mixtos de
energa y calor.
Esterilizacin
La esterilizacin del agua consiste en la eliminacin de toda
forma de vida de un medio o material, es decir la destruccin de
las bacterias y los virus contenidos en la misma.
Los mtodos ms frecuentemente utilizados son:
a-Radiaciones
-Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los
cidos
nucleicos,
estructuras
proteicas
y
lipdicas,
y
componentes
esenciales
para
la
viabilidad
de
los
microorganismos.
.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar
materiales termosensibles como jeringas descartables, sondas,
etc.
-Ozono
El ozono se produce cuando las molculas de oxgeno (O2) son
disociadas por medio de una fuente de energa produciendo
tomos de oxgeno que posteriormente chocan con una molcula
de oxgeno para formar un gas inestable, el ozono (O3), que se
utiliza para desinfeccin de las aguas residuales. La mayora de
las plantas de tratamiento de aguas residuales generan ozono
mediante la aplicacin de una corriente alterna de alto voltaje (6
a 20 kilovoltios) a travs de una brecha entre placas dielctricas
de descarga en donde se encuentra un gas de alimentacin que

es inestable y se descompone en oxgeno elemental en un


perodo corto de tiempo despus de su generacin. El ozono es
un oxidante y agente germicida de virus muy fuerte.
Cuando el ozono se descompone en agua, los radicales libres del
perxido de hidrgeno (HO2) y del hidrxido (OH) que se
forman tienen gran capacidad de oxidacin y desempean un
papel activo en el proceso de desinfeccin. En general se cree
que las bacterias son destruidas debido a la oxidacin
protoplasmtica, dando como resultado la desintegracin de la
pared de la clula
-Rayos Gamma
:
Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa
atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o
materiales termolbiles y de gran importancia en el campo
industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas, alimentos, etc.
-Rayos UV
Esterilizacin con luz ultravioleta se ha transformado
recientemente en uno de los mtodos ms eficaces y ms
econmicos para el tratamiento de aguas destinadas a usarse en
el comercio, la industria y el hogar. El tratamiento UV se
consigue por medio de la irradiacin con luz ultravioleta en la
cual se utilizan lmparas de arco de mercurio de alta intensidad
y baja presin que producen rayos UV de tipo germicida.
Las molculas de ADN en el ncleo de los organismos virales o
bacteriales adsorben los rayos UV, por lo cual se vuelven
inofensivos si haya habido una cantidad suficiente de radiacin.
El uso de rayos de luz ultravioleta destruye el 99,9% de virus y
bacterias, haciendo no necesario el uso de productos qumicos.
b-Agentes qumicos esterilizantes
Como xido de etileno, formaldehdo, Glutaraldehido, agentes
oxidantes, soluciones antispticas.
c- Microfiltracin, ultrafiltracin
El procedimiento de filtracin consiste en retener partculas por
medio de un separador, el cual puede consistir de mallas, fibras,
material poroso o un relleno slido.
Mediante estos procesos es relativamente sencillo eliminar
bacterias cuyo tamao varia entre 0.5 y 40 micras, pero la

26

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

eliminacin de virus presenta una mayor complejidad por el


menor tamao de estos.
d- Calor
La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos
factores: el tiempo de exposicin y la temperatura.
.
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a
la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de
protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o
procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.
-Esterilizacin discontinua:
La mayor parte de los medios de cultivo se esterilizan en la
actualidad en volmenes discontinuos en el biorreactor a 121C.
Segn Dr. Pedro F. Mateos, una desventaja de este sistema es el
tiempo necesario para alcanzar la temperatura de esterilizacin
(121C) Una vez se ha alcanzado la temperatura correcta se
requieren otros 20 - 60 minutos para el proceso real de muerte,
seguidos de enfriamiento durante una hora.
Otra desventaja de la esterilizacin por calor es que las fases de
calentamiento, esterilizacin y enfriamiento no solamente matan
a los microorganismos, sino que tambin alteran severamente la
solucin de nutrientes. Las vitaminas se destruyen y la calidad
del medio de cultivo se deteriora. La extensin en la que es
afectado el cultivo consiguiente depende del organismo y del
proceso.
En este proceso se basa el funcionamiento del autoclave. Se
pueden encontrar autoclaves industriales para realizar estos
procesos.
-Esterilizacin continua:
Las dos desventajas principales de la esterilizacin discontinua,
pueden ser evitadas en gran parte mediante el uso de este
procedimiento. La esterilizacin continua se lleva a cabo
normalmente en 30-120 segundos a 140 C. El calentamiento
del medio de cultivo para la esterilizacin continua puede ser
llevado a cabo mediante inyeccin de vapor o mediante
intercambiadores de calor. La esterilizacin con inyeccin de
vapor se hace inyectando vapor en la solucin de nutrientes. La
temperatura se eleva rpidamente a 140 C y se mantiene
durante 30-120 segundos. Debido a la formacin de

condensados la solucin nutritiva se diluye; para corregir esto la


solucin caliente se bombea a travs de una vlvula de
expansin a un vaporizador y el condensado se retira mediante
bombas de vaco de forma que la solucin esterilizada de
nutrientes tiene la misma concentracin despus del proceso de
enfriamiento que antes. La desventaja de este proceso es la
sensibilidad que presenta a cambios en la viscosidad del medio y
a variaciones en la presin.
.
En el proceso continuo que utiliza intercambiadores de calor, la
solucin de nutrientes, en el primer intercambiador de calor, se
precalienta a 90-120 C durante 20-30 segundos por la solucin
nutritiva previamente esterilizada que sale. Luego, en el
segundo intercambiador de calor, se calienta indirectamente con
vapor a 140 C. Esta temperatura se mantiene durante 30-120
segundos en una tubera de mantenimiento antes de que sea
colocada en el primer intercambiador mediante enfriamiento
preliminar y posteriormente en un tercer cambiador para
refrigeracin a la temperatura del fermentador. La fase de
enfriamiento
es
slo
de
20-30
segundos.
En el proceso que utiliza intercambiadores de calor el 90% del
aporte de energa se recupera. La desventaja de este mtodo es
que con algunas soluciones de nutrientes se forman sales
insolubles.
-Tindalizacin:
Se utiliza cuando las sustancias qumicas no pueden calentarse
por encima de 100 C sin que resulten daadas. Consiste en el
calentamiento del material de 80 a 100 C hasta 1 hora durante
3 das con sucesivos perodos de incubacin. Las esporas
resistentes germinarn durante los perodos de incubacin y en
la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son
destruidas.

27

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

3.4-APICACIONES DEL BIOCEMENTO

3.5-PRODUCCION DE BIOCEMENTO

-Fisuras en elementos de hormign


-Estabilizacin de Taludes - erosin
-Estabilizacin de explanadas
-Estabilizacin de arcillas
-Mejoras de terreno general
-Pilotes flotantes
-Patologa de estructuras
-Modificacin de propiedades de otros materiales (cemento,
geotextil)
-Restauracin de monumentos
-Reciclado de hormign
-Produccin de carbonato clcico
-Desmineralizacin de aguas

El biocemento es una solucin de bacterias seleccionadas,


nutrientes y otros compuestos necesarios para su utilizacin.
Para el cultivo en grandes cantidades de las bacterias que
constituyen la base del biocemento es necesaria la disposicin
de biorreactores en los que se cultiven las bacterias en un medio
con extracto de agua residual y otros elementos nutritivos que
garanticen una produccin ptima.
El
dimensionamiento
y
caractersticas
del
biorreactor
dependern fundamentalmente de las pruebas que se ensayen
en el laboratorio.
En el caso de que el medio de cultivo ptimo sea slido, se
deber sustituir el biorreactor por otro sistema que permita el
cultivo y recoleccin de las bacterias.
Se procurar que el medio de cultivo utilizado sea el producido
en la fase de preparacin de medios de cultivo.
Las concentraciones de cada elemento ( bacterias, nutrientes)
en el producto final dependern del uso que se d al mismo.

Las aplicaciones relacionadas con el aumento de resistencias,


bien en terrenos o bien en estructuras, quedan descartadas tras
los resultados obtenidos en este anlisis. Adems existen
numerosos productos con una eficiencia mucho mayor que la de
la precipitacin biolgica, con los que sr muy difcil competir.
Esto no significa que se descarte definitivamente la lnea
seguida.
Por lo tanto, las principales reas en las que debemos centrarnos
son las relacionadas con la modificacin de las propiedades de
otros materiales, la restauracin o el reciclaje.

3.6-RECICLAJE DE HORMIGN
Segn datos del Ministerio de Medio Ambiente, la construccin
produce entre 450 y 1.000 Kg./habitante y ao. El enorme
crecimiento de este sector y la necesidad de demolicin de
estructuras obsoletas han provocado que el volumen de residuos
sea alarmante. Prueba de ello es el Plan Nacional de Residuos de
Construccin y Demolicin puesto en marcha por el ministerio, y
las numerosas iniciativas existentes en el mbito internacional.
Cabe tambin destacar que no solo los residuos y vertidos
constituyen un problema, sino que existen otros aspectos como
el energtico o la proliferacin de canteras que han de aadirse
al anterior.
Aparte de las experiencias de reciclaje existente vamos a
proponer otras como resultado de los experimentos realizados
con las bacterias objeto del estudio.
Como pudo observarse, estas bacterias intervienen en una
rpida y homognea precipitacin de carbonato clcico en forma

28

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

de biopelcula sobre la superficie de un fragmento de cemento,


favorecida por la presencia de agua residual que puede
intervenir en su dilucin. El hecho de que en los controles
negativos efectuados no haya sucedido esto puede representar
un indicio de que las bacterias obtienen calcio de los fragmentos
de cemento, probablemente del hidrxido clcico. Esta
descomposicin podra suponer el punto de partida para una
nueva forma de reciclado del hormign como se propone a
continuacin.
En principio, las principales caractersticas del hormign que
interesan para la investigacin son:
Composicin del hormign endurecido: Portlandita ( CaOH2),
tobermorita ( C3S2H3)...
Atacabilidad por cidos, sulfatos, aguas puras, etc.
Resistencia a compresin: Variable, de valor medio 30 N/mm2
Resistencia al fuego: A 600 C los ridos se comienzan a dilatar
produciendo una disgregacin del hormign. A esa temperatura
la resistencia a compresin disminuye un 50%. A 400C parte
del hidrxido clcico se transforma en cal viva.
La complejidad de este material se traduce ineludiblemente en
una proceso de investigacin complejo, donde intervienen e
interaccionan la biologa, la qumica, la tecnologa industrial
El proceso de investigacin a seguir podra ser:

Anlisis del
agua residual

Anlisis del hormign

Concentracin
de bacterias

MezcladoPrueba i

Anlisis del
precipitado

Donde nosotros, en la fase experimental hemos analizado la


concentracin bacteriana y el precipitado producido, sin haber
analizado el agua residual, el hormign y el residuo generado.
Las principales aplicaciones de este mtodo son el reciclaje de
piezas de hormign y el reciclaje de lodos de lavado de obra, sin
olvidar las posibilidades existentes en el reciclado de polvos y
residuos en la industria cementera.
-Reciclaje de piezas de hormign
El mtodo se basa en la disgregacin del hormign y su
posterior descomposicin por accin bacteriana.
Evidentemente, las fases de la planta de tratamiento estarn
supeditadas a los resultados obtenidos en el proceso de
investigacin, pero en una primera aproximacin podra
suponerse el siguiente esquema.
-Transporte de las piezas de hormign a la planta
-Acopio segn sus caractersticas
-Entrada en la lnea de reciclado
-Calentamiento en horno a 700C. A esta temperatura el
hormign se disgrega por la dilatacin de los ridos permitiendo
un mejor triturado posterior.
-Machaqueo de las piezas. Primer triturado en fragmentos
gruesos para facilitar la retirada de redondos de acero.
-Enfriamiento del material con agua residual a presin. El calor
del agua procedente del enfriamiento se reutilizar por medio de
intercambiadores de calor. Se introducen decantadores para la
recogida de lodos y su posterior tratamiento.
-Cuchillo neumtico para recoger el polvo generado
-Separador magntico, donde se recogen
los materiales
metlicos
-Molienda o machaqueo fino del hormign
-Cribado para la separacin de ridos.
-Eras de precipitacin. Tratamiento biolgico del cemento para
su transformacin en carbonato clcico.

Anlisis del residuo

29

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Reciclaje de hormign de lavado.


El hormign residual procedente del lavado de encofrados,
hormigoneras o de vertidos accidentales se tratar en un
separador in situ para su posterior transporte a la planta de
reciclado. La lechada se introducir por un extremo mientras que
por otro saldrn ridos lavados. En su interior existirn depsitos
de lodos y agua biolgica que sern peridicamente retirados.

Lechada

ridos

ridos

criba rotatoria con


agua a presin

Lavado a
presin

Separador
ridos lavados
Agua y
cemento

Separador

Lodos
Agua lavado

decantador primario

agua
El separador dispondr de una criba rotatoria con agua a presin
que diferenciar por un lado los ridos y por otro el agua y el
cemento. Estos pasarn a un decantador de donde saldrn lodos
y agua que se recircular a la criba. Los lodos se introducirn en
un segundo decantador donde se producir una precipitacin
biolgica. Dos depsitos recogern el agua contaminada y los
lodos para su posterior transporte.
Los ridos procedentes del cribado se lavarn con agua a presin
que tambin recircular, en este caso al decantador primario.

agua

lodos primarios

Precipitacin biolgica

lodos biolgicos

Agua
contaminada

30

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

4- EJEMPLO: PLANTA INTEGRAL DE PRODUCCIN


BIOCEMENTO, MEDIOS DE CULTIVO Y RECICLADO
DE HORMIGN A PARTIR DE AGUAS RESIDUALES
Se ha diseado como ejemplo un sistema de produccin anejo a
una estacin depuradora. Este diseo est totalmente
condicionado por las condiciones y procesos ensayados en el
laboratorio, que se han extrapolado para el mismo. Estara
dividido en las siguientes fases:
1-Captacin del agua de la E.D.A.R
2-Decantacin fsica
3-Filtracin primaria
4-Microfiltracin
5-Regulacin-Esterilizacin
6-Control, tratamiento y envasado de medios de cultivo
7-Produccin de biocemento
8-Tratamiento de fangos
9-Reciclaje de hormign

Figura 24: Fases de la planta

31

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Captacin del agua de la E.D.A.R

Decantacin fsica

Filtracin primaria

Microfiltracin

Entrada

50% SS
15% DBO

80% SS
50% DBO

95% SS
70% DBO

Regulacin
Salida

Tratamiento de fangos

Fangos

Produccin de medios de cultivo


Salida
30% volumen

Esterilizacin

Evaporacin

75%
Produccin de biocemento

15%

Salida

Tratamiento efluente (agua)


CaCO3
Salida

Reciclado de hormign

ridos
Residuos

Escombros
Entrada

Salida

Aguas de lavado

Fig.25 :Esquema del proceso

32

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

1- Captacin de agua de la E.D.A.R


El agua residual ser captada despus del pre-tratamiento de la
estacin depuradora, una vez que haya sido desbastada, filtrada
y desengrasada.
Habr de tenerse en cuenta que se dejar de captar agua
cuando exista escorrenta debida a las precipitaciones en caso de
redes unitarias.
La captacin constar de las siguientes partes:
a- Derivacin
b-Conduccin, que puede ser:
b1-Por gravedad
b2-Por impulsin
b21- Pequeo depsito de bombeo
1-Tubo de entrada
2-Cmara tranquilizadora
3-Cmara de bombeo
b22- Grupo de bombeo
b23- Conduccin a la planta de produccin
Existe una amplia gama de bombas para aguas residuales y ms
aun teniendo en cuenta que los caudales del proyecto son
pequeos.
La conduccin hasta los decantadores se realizar a travs
tuberas gemelas de PVC , donde el agua circular a una
velocidad de 0.5 m/s.
El caudal requerido ser de 10 l/s = 36 m3/h = 576 m3/da
(contando con 16 h de funcionamiento), por lo que la seccin del
canal resulta:

Q = vS
S=

Q 10 103
=
= 20cm 2
0.5
v

Hemos elegido los siguientes elementos:


Bombas centrfugas de pequeo y mediano tamao series 3000
de ITT Flygt que se usan en una amplia variedad de aplicaciones
y cubren una extensa gama de rendimientos. Estn diseadas en
torno a un sistema modular cuyas unidades motor son las
mismas, pero cuyas hidrulicas difieren, dependiendo de la
aplicacin.
La principal rea de aplicacin de estas bombas es el bombeo de
aguas residuales en estaciones de bombeo y plantas de
tratamiento.
Las bombas de esta serie tienen capacidades de bombeo desde
0 a 500 litros por segundo.
Se utilizarn con un impulsor de tipo N: Impulsor semiabierto,
de dos labes, con canal de desahogo en el caracol. Es un diseo
moderno para bombear aguas residuales. Impulsor que combina
una alta eficacia con larga duracin y excelentes propiedades
anti-atasco.

Figura 26: bombas centrfugas ATT FYGT

Figura 26b: Impulsor tipo N

Tubos Coextrusionados de Pequea Evacuacin de la marca


Uralita de dimetro 120mm

Por lo tanto el dimetro de cada tubera ser como mnimo de


80mm, debiendo sobredimensionarse debido a la variacin diaria
de agua residual y la necesidad de mantener una produccin
constante.

33

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

2- Diseo de los decantadores


Para eliminar parte de los slidos en suspensin y mejorar los
rendimientos y vida til de los filtradores se utilizarn dos
decantadores circulares.
El tiempo de retencin considerado ser de 2.5 horas teniendo
en cuenta que no se aplicar ningn tratamiento qumico.
Para la velocidad ascensional para un decantador circular sin
tratamiento qumica se adopta 1 m/h.

Vasc =

Q
Sup

Sup = 36m 2 =

D 2 Q0.5
=
4 Vasc

D = 5m
Como hay dos decantadores para un caudal de 36 m3/h obtengo
un dimetro aproximado de D= 5 m
Para calcular la altura del decantador:

Tret =

Vol
Q

Vol = Q Tret = 90m3


Vol 90
=
= 2.5m
h=
Sup 36

Con un

5m
2.5m

1 / =0.15 y h1/h=0.5 obtengo unas dimensiones:

34

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Filtracin
El objetivo de esta etapa es reducir gran parte de los slidos en
suspensin y secundariamente aumentar el rendimiento del
microfiltrador. Utilizaremos filtros de grava y arena por tener un
mayor rendimiento a largo plazo para este tipo de aguas.
Debido a la elevada carga de materia del agua, la etapa de
lavado de los filtros ser crtica. Se opta por un sistema de
filtracin continuo con diferentes tamaos de granos y con
duplicidad de elementos para permitir un autolavado frecuente.
De esta manera habr dos filtradores de cada tamao de grano
en paralelo por cada una de las dos lneas.
Fig.27:Filtrador vertical Fresno

Decantadores

Grava tamao1

Grava tamao2

El caudal a filtrar despreciando las prdidas es de


aproximadamente 10 l/s con una velocidad de filtracin que
varia entre 8 y 15 m3/m2/h a una presin 8-16 Kg/cm2.
Pese a que los filtros tienen un mecanismo automatizado que
conecta el proceso de retrolavado cuando se alcanza una presin
determinada, y otro que lo conecta por recomendacin cada 24
horas, dadas las caractersticas del agua, se programar para
que el lavado se realice cada 3 horas. La filtracin en ese
momento la realizar su gemelo en paralelo. Aunque la duracin
del lavado no excede de 5 minutos, el ciclo de funcionamiento de
cada filtro ser de 3 horas incluyendo estos 5 min.

Microfiltraccin

Arena tamao 1

Arena tamao 2

Se aade este proceso que mejora el rendimiento de la


esterilizacin posterior (en algunos casos se utiliza incluso para
esterilizar) y que deja libre de partculas slidas el medio
acuoso. Adems evita crecimiento masivo de microorganismos
en el depsito de regulacin.
Existen diversos procedimientos para llevar a cabo la
microfiltracin, como pueden ser membranas, arena, bolsas,
rayos UV, carbn activo, etc..

35

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

En este caso interesa que el agua sea rica en nutrientes pero


estril por lo que se ha decidido emplear microfiltros de
membranas con 10 micras de tamao de paso, tamao
semejante al utilizado en las pruebas de laboratorio. Se opta por
un filtro autolimpiante por cada lnea, de la serie HSC de la
empresa Hecisa con cuerpo acero carbono recubierto de resina
epoxi, brazo de limpieza en Aisi 304 y elementos filtrantes en
Aisi 316 L

zona calculando los caudales de salida de la cuenca en ese punto


y su distribucin temporal. Habrn de tenerse en cuenta los
controles histricos realizados por la estacin depuradora.
Como mnimo, habra que adoptar un volumen de regulacin
para redes no separativas de 3 veces el volumen captado en un
da debido a la influencia de periodos de lluvia y el consiguiente
cambio en la composicin del agua de entrada, por lo que se
desaconseja la implantacin de este sistema con este tipo de
redes.
Para redes separativas se dimensionar el depsito para el
volumen captado en un da es decir 576 m3 ms un 20% para
averas, resultando 690 m3 .
La distribucin de este volumen se har en dos depsitos
circulares de:

D = 8m
D2
= 50.4m 2
4
Vol = 432m3

8m

Sup =

6.8m

h = 6.8m
Figura 28:
Hecisa.

Filtro

autolimpiante

HSC

de

Regulacin
Se introduce un proceso de regulacin en el sistema para
asegurar un caudal continuo que produzca un rendimiento
homogneo y para evitar perdidas en el proceso productivo en
caso de averas o imprevistos.
En el caso de redes no separativas el depsito de regulacin se
dimensionar teniendo en cuenta que no habr captacin si
existe escorrenta debida a las precipitaciones. Esto desaconseja
la implantacin de la planta de produccin en este tipo de redes
en el caso de que se site en una zona con precipitaciones
regulares. Para ello deber hacerse un estudio hidrolgico de la

Caractersticas del depsito


El tipo de depsito a disponer depende del volumen de
regulacin. As para pequeos volmenes sera conveniente un
tanque metlico, mientras que para volmenes mayores, como
normalmente sucedera, el hormign ser el elemento
apropiado.
En cuanto a la disposicin del depsito, tenemos que decidir si
se construye enterrado, semienterrado o elevado. Debido a que
no es necesaria ninguna presin posterior la opcin ms lgica
parece ser la de depsito enterrado, evitando as la colocacin

36

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

de bombas de elevacin a la entrada, aunque se sacrifiquen


aspectos relativos a mantenimiento.
Debido a la agresividad de las aguas es importante realizar un
recubrimiento con resinas epoxi, acrlicas o de poliuretano
Adems de las lgicas condiciones de resistencia, estanqueidad y
accesibilidad, habra que dividir el depsito en dos o mas partes,
de manera que una avera no sea causa de parada del proceso.
Para evitar la sedimentacin seria conveniente colocar un
agitador y crear una corriente ascendente a partir de placas
solares que proporcionen la energa necesaria.
Anexo al depsito se colocar una caseta de control donde
estarn
los
elementos
necesarios
para
el
correcto
funcionamiento del mismo, como equipos elctricos, equipos de
limpieza, etc.
A causa de las especiales caractersticas del agua se debe
disponer de una adecuada circulacin del aire en el interior.

la figura. En la parte inferior se disponen adems unos


calentadores para aumentar dicha temperatura y para
homogeneizar esta durante los periodos de menor radiacin.
Con este sistema se puede llegar a evaporar 10 litros diarios por
metro cuadrado de lmina de 10 cm de espesor. De esta
manera, el rea necesaria para evaporar el 10% del volumen
diario ser de 5700 m2.

Limpieza

Evaporacin

Radiaccin solar
Condensacin

Evaporacin
Para reducir el volumen del producto a destilar, se someter el
agua a un proceso de evaporacin y concentracin en serie
concentrando de esta manera la carga nutriente. Se ha optado
por un sistema mixto de energa elctrica y energa solar.
El volumen a tratar ser de 10 l/s = 36 m3/h = 576 m3/da.
En una primera etapa se reducira un 10 % del volumen con un
sistema de evaporacin solar discontinuo efectuando adems un
precalentamiento del agua, para posteriormente, reducir en
destiladores con hornos solares el resto del volumen hasta llegar
al 30% del volumen inicial.
Evaporacin solar.
Los evaporadores solares tipo batea son aparatos que
bsicamente simulan el proceso de la evaporacin natural.
Constan de unos paneles superiores que dejan pasar la radiacin
y que dificultan su salida. La base inferior funciona como un
cuerpo negro que absorbe la radiacin y calienta el agua. El
agua evaporada se condensa en el panel superior y resbala hacia
los lados donde es recogida por un depsito como se muestra en

Recogida de evaporado

Resistencias termicas

Cuerpo negro

Figura 29: Evaporacin solar de tipo batea

Debido a que el sistema de destilacin ser discontinuo, el


sistema de evaporacin consistir en bandejas de automatizadas
que irn pasando a travs de las bateas al ritmo que marque la
destilacin. El tiempo de permanencia en las mismas ser de 16
horas en bandejas de 4m2.

Figura30:Evaporador experimental de
Cussons Technology Ltd.

37

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Concentracin
Para nuestro sistema utilizaremos un sistema mixto de ocho
evaporadores en paralelo de una capacidad de 4 m3 de
alimentacin por hora.
Si se disponen los destiladores de manera que exista un desfase
de 7.5 segundos entre ellos se podra destilar el volumen
resultante de la evaporacin, alimentando cada uno con 10
bandejas de 4m2.
La energa necesaria para realizar este proceso ser:
Calor sensible: Es el necesario para aumentar la temperatura del
agua hasta los 100 C.

La variacin en esta cifra puede llegar a ser del 20% debido al


rendimiento de los evaporadores y a la composicin del agua
residual, por lo que el clculo anterior representa nicamente
una estimacin aproximada.

Q = m C p T
m = 4000 Kg
Kcal
C p = 1,15
Kg C
T = 60 C
Q = 276.000 Kcal = 1.155.556 KJ
= 320,9 KW
Calor latente: Es el necesario para cambiar de fase el agua
lquida a 100C

C = VH 2 O m
cal
gr
m= 2400 Kg (60%del volumen)
C = 12.936.000 Kcal = 5.416.044 KJ
C = 1504 KW
VH 2 O = 539,5

Figura 31: imagen diseada en simulador de procesos

La energa calorfica necesaria puede provenir de los colectores


solares que, como se ver posteriormente, se utilizarn para el
calentamiento del hormign en su proceso de reciclaje. Los
intercambiadores de calor ( absorben el calor del hormign
calentado), podran utilizar el agua residual y llevarla a los
evaporadores, o bien utilizar otro tipo de lquido formando un
circuito entre los evaporadores y el horno solar.

En total obtenemos 6.571.600 KJ, 1825 KW.

38

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Esterilizacin
El proceso de esterilizacin estar condicionado por las
caractersticas del producto deseado y las necesidades
operativas de los mismos. Normalmente las necesidades de
esterilidad sern altas, salvo cuando se trate de procesos de
ingeniera medioambiental, como puede ser la biorremediacin.
Tanto para la produccin de medios de cultivo como para la de
biocemento se ha optado por un proceso de esterilizacin
discontinua a partir de autoclaves industriales.
El principio de funcionamiento de un autoclave industrial es el
mismo que el explicado anteriormente para el autoclave de
laboratorio, aunque existen modelos que tienen algunas
modificaciones, como los rotativos. La diferencia fundamental
con los de laboratorio, aparte del evidente aumento de
capacidad, es la posibilidad de implementar sistemas
automticos de llenado y vaciado de bandejas.

La capacidad de estos aparatos puede alcanzar unos 4m3.


Teniendo en cuenta que el ciclo de la esterilizacin es de 30
minutos, y para un funcionamiento de la planta de 16 horas
diarias, seran necesarios dos autoclaves para esterilizar los 150
m3 de agua concentrada (30% del volumen inicial descontando
25 m3 del reciclado de hormign)
Dado que un solo autoclave es capaz de esterilizar 130 m3
diarios, en caso de avera de uno de ellos el descenso de la
produccin sera del 15%.
Previa a la esterilizacin se habr de disear un proceso de
envasado, y llenado y vaciado de cestos automtico, para la
produccin de medios de cultivo.
En el caso del agua que ser utilizada para la produccin de
biocemento, no ser necesario el envasado en esta etapa salvo
el necesario para su transporte a la fase de cultivo aneja.

Produccin de biocemento
La produccin de biocemento depende fundamentalmente de las
propiedades que se quieran obtener en el producto final. La
eleccin y dimensionamiento de los biorreactores o de cualquier
otro aparato destinado al cultivo de las bacterias habr de
hacerse tras un estudio minucioso.
Sern importantes las condiciones de esterilidad en ese ala de la
planta por lo que habr que guiarse por la legislacin y
recomendaciones para la construccin de este tipo de
instalaciones de manipulacin biolgica.

Tratamiento y recirculacin de fangos

Figura 32: Batera de autoclaves Surdry.S.A

Los fangos se aprovecharn para ser utilizados como abono


agrcola, proporcionando materia orgnica y nutrientes al cultivo
existiendo recirculacin de los mismos dentro de la planta para
aumentar la carga nutriente del agua. Esta recirculacin
constar de un proceso de mezcla y licuefaccin de los fangos y
otro de centrifugacin para la separacin de la fase lquida o de
deshidratacin por espesadores.

39

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

La poblacin equivalente a este volumen es equivalente a 4300


habitantes para una dotacin media.
La carga de slidos en suspensin y de DBO se puede estimar en
110g/hab./da.
Por lo tanto, para estos datos, la cantidad de fangos aproximada
ser de 480 kg diarios.
Tratamiento del efluente de evaporacin
El efluente procedente de la de la evaporacin estar constituido
principalmente por agua destilada y compuestos de naturaleza
incierta y de mayor volatilidad que esta. Para tratar este
efluente se pueden utilizar
sistemas como la smosis, la
ultrafiltracin, la electrodilisis, las resinas de intercambio inico
y filtros de membranas o de carbn activo, de caractersticas
dependientes de la composicin del mismo.
Puede ser recomendable el uso de filtros de arcillas modificadas
orgnicamente adecuados para la adsorcin de determinados
contaminantes que causan frecuentemente problemas en otros
sistemas. Estos filtros son capaces de eliminar compuestos tales
como hidrocarburos clorados, tensoactivos no inicos, benceno,
etilbenceno y xileno, pentaclorofenol, cido hmico y flvico,
trihalometanos , percloroetileno , metales pesados, pesticidas ,
hidrocarburos aromticos polinucleares, etc.
Una vez tratada convenientemente el agua destilada se puede
proceder a su comercializacin.

Reciclaje de hormign
El sistema se basa en la disgregacin del hormign y su
posterior descomposicin por accin bacteriana.
Las fases de la planta de tratamiento dependern de los
resultados obtenidos en el proceso de investigacin y de los
estudios de rendimiento energtico que se hagan, pudiendo
aproximar el siguiente esquema
-Transporte de las piezas de hormign a la planta
-Acopio segn sus caractersticas

-Entrada en la lnea de reciclado


-Calentamiento en horno a 700C. A esta temperatura el
hormign se disgrega por la dilatacin de los ridos permitiendo
un mejor triturado posterior.
Este aporte de calor se har por medio de hornos solares.
El colector solar es el elemento encargado de captar la energa
contenida en la radiacin solar y transferirla al fluido a calentar
por reflexin de la radiacin solar.
El tipo de colector y la superficie ocupada de los mismos variar
en funcin de la zona de implantacin de la instalacin, el
volumen de agua a evaporar y sus caractersticas. As, por
ejemplo en la Plataforma solar de Almera se ha experimentado
un campo solar compuesto por 40 colectores cilindroparablicos
del modelo ACUREX 3001, con una superficie total de captacin
solar de 2.672 m2 obteniendo un suministro medio diario de
energa trmica es de 6,5 MWt.
Existen numerosos sistemas de destilacin solar, muchos de
ellos aun en fase experimental. Se han conseguido colectores
solares capaces de alimentar hornos a temperaturas que han
llegado a los 4000 C.

Figura 33: colector solar

-Refrigerado e intercambio de calor para alimentar a los


evaporadores en el proceso de concentracin

40

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

-Machaqueo de las piezas. Primer triturado en fragmentos


gruesos para facilitar la retirada de redondos de acero.

Existen numerosos sistemas de cribado. Su diseo y


dimensionamiento, como el de todas las mquinas depender
del tipo de material a tratar, de la cantidad y del rendimiento
previsible.
-Cuchillo neumtico para recoger el polvo generado
En la clasificacin neumtica el material es separado mediante
corriente de aire. El soplador aporta la fuerza de circulacin que
acta contra la gravedad, separando el material segn el peso
especfico de las componentes. Un tambor giratorio apoya la
separacin de materiales ligeros y pesados. Los materiales
ligeros son soplados por la corriente area y llegan al contenedor
siguiendo la direccin de giro del tambor. Los materiales
pesados caen a la cinta transportadora que lleva el material
separado a fuera.

Figura 34: trituradora de piedras Hammel

As, por ejemplo los datos tcnicos de la trituradora de piedras


Hammel SB 650 D son: motor de 220 KW con un volumen de la
tolva de 5 m3y un rendimiento de 80 120 t/h con un grano
final de 120mm.
-Separador magntico, donde se recogen
metlicos ( armaduras )

los materiales

-Molienda o machaqueo fino del hormign


La mquina empleada ser similar a la anterior pero con un
grano mnimo.
-Cribador para la separacin de ridos.

Figura 36: Separador neumtico Avermann

-Eras de precipitacin. Donde se realizar el tratamiento


biolgico del cemento para su transformacin en carbonato
clcico.
Habamos planteado un volumen utilizable de agua residual para
este fin de 25 m3 diarios, con un tiempo de permanencia de
cuatro das en las eras. Si suponemos eras de 5cm de espesor,
la superficie de las mismas ser de 500 m2.
El tratamiento diario de cemento molido puede aproximarse por
tanto a las 60 toneladas diarias. La cantidad de hormign de
entrada en la planta depender de las caractersticas del mismo,
variando entre las 150 y 400 t/da

Figura 35:tambor cribador Avermann

41

Anlisis del biocemento y sus aplicaciones

Referencias y bibliografa
- Rodrguez-Navarro C, Rodrguez-Gallego M, Ben Chekroun K,
and MTGonzlez-Muoz, 2003. Conservation of ornamental
stone
by
Myxococcus
xanthus-induced
carbonate
biomineralization. Appl Environ Microbiol. 69(4):2182-93.
- Atlas RM y R Bartha, 2002. Ecologa Microbiana y Microbiologa
Ambiental. 4 Ed. Addison Wesley, pp 442-443
-Bachmeier KL, Williams AE, Warmington JR, and SS Bang,
2002. Urease activity in microbiologically-induced calcite
precipitation. J Biotechnol. 93(2):171-81.
-Tiano, P., Biagiotti, L. & Mastromei.1999. Bacterial biomediated
calcite precipitation for monumental stones conservation:
methods of evaluation. J Microbiol Methods 36, 139145., G. ().
-Brunella Perito & Giorgio Mastromei. Conservation of
monumental stones by bacterial biomineralization.Microbiology
Today vol30/aug03
-Castanier, S., G. Le Mtayer-Levrel, G. Orial, J. F. Loubire, and
J. P. Perthuisot. 2000. Bacterial carbonatogenesis and
applications to preservation and restoration of historic property,
p. 201-216. In O. Ciferri, P. Tiano, and G. Mastromei (ed.), Of
microbes and art: the role of microbial communities in the
degradation and protection of cultural heritage. Plenum, New
York, N.Y.
-Dr. Maria Dittrich. Calcite precipitation in lakes . Swiss Federal
Institute for Environmental Science and Technology. Switzerland
-Heiko hillga et al. Microbially induced cementation of carbonate
sands: are micritic meniscus cements good indicators of vadose
diagenesis?. Institut de Geologie et Paleontologie, Universite
de Fribourg.
-Barabesi, C.et al. (2003). Microbial calcium carbonate
precipitation for reinforcement of monumental stones. In
Molecular Biology and Cultural Heritage, pp. 209 212.
-Castanier,
S.
(2000).Bacterial
carbonatogenesis
and
applications to preservation and restoration of historic property.
-Microbial calcification in subsurface environments. Sookie
S.Bang
Department of Chemistry and Chemical Engineering. South
Dakota School of Mines and Technology

- Fujita Y, Ferris EG, Lawson RD, Colwell FS & Smith RW (2000)


Calcium carbonate precipitation by ureolytic subsurface bacteria.
Geomicrobiol. J. 17(4): 305318
- Shannon Stocks-Fischer, Johnna k. Galinat, Sookie s. Bang.
Microbiological precipitation of caco3. Soil biology and
biochemistry 31 (1999) 15631571
-Frederik Hammes & Willy Verstraete. Key roles of pH and
calcium metabolism in microbial carbonate precipitation.
Environmental Science & Bio/Technology 1: 37, 2002.
- EC Programme Energy, Environment and Sustainable
Development Bioreinforce Project. Contract EVK4-CT200000037
-Manual de depuracin Uralita. Aurelio Hernndez. Ed. Paraninfo
-CalciteBioconcept.(sociedad
francesa).
www.calcitebioconcept.com
- Plataforma Solar de Almera. Centro Europeo de Ensayos de
Energa Solar. www.psa.es
- Destilador solar asistido con colector solar acumulador.
Carmen. Esteban et al. Universidad Nacional de San Luis.
- Perspectives of solar-assisted seawater distillation. Lourdes
Garca-Rodrguez
et
al.
Dpto.
Fsica
Fundamental
y
Experimental, Universidad de La Laguna,
- Cussons Technology Ltd. www.cussons.co.uk
-ITT Flygt. www fligt.es
-Hecisa. S.A www.hecisa.com
-Uralita. www uralita.es
-Introduce to menbrane separations. K. Scout. Elsevier A.T.
-Manual del ingeniero qumico. R.H Perry. McGraw-Hill
-Manual de reciclaje. H.F Lund. McGraw-Hill
-Hormign. M. Fernndez Cnovas. CICCP
- Coleccin Espaola de Cultivos Tipo (CECT)b www.uv.es/cect
-U.S.A. Environmental protection agency. www. epa.gov
-Ministerio de Medio Ambiente. www.mma.es

42