Enzimas3los catalzadores

de la vida
T'r
.n el Captulo5 hicimosreferenciaa AG', la variacin
de energalibre,y vimos su importanciacomo indicador
de la espontaneidad
termodinmica.Concretamente,
el
signode AG' nos dicesi una reaccinesposibleen la direccinindicada,yla magnitudde A,G'indicala cantidad
de energaquepuedeserliberada(o quedebesersuministrada),mientrasque la reaccintienelugar en esadirecparalascualessecalculAG'. Al
cin,bajolascondiciones
mismo tiempo,pusimoscuidadoen sealarque el parmetro termodinmicoAG' no puede proporcionarnos
ningunapista.encuantoa si una reaccinfactibletendr
y a quvelocidad.En otraspalabras,
lugarrealmente,
AG'
nos dice si una reaccinpuedetener lugar pero no dice
nadaen absolutosobresi realmentetendrlugar.Paraesta
distincin,necesitamos
conocer,no slo la direcciny la
energlade la reaccin,sino tambinalgoacercadel mecanismoy la velocidad.
Esto nos lleva al tema de la catlisisenzimtica, porqueprcticamente
todaslasreacciones
o procesos
celulares
son mediadospor protenas(o, en ciertoscasos,
ARN) catalizadorasllamadasenzimas.Las nicas reaccionesque
ocurrena unavelocidadapreciable
en una clulasonaquellasparalascualeslasenzimasapropiadasestnpresentes
y
activas.As,las enzimascasisiempresignificanla diferencia entre<puedetenerlugar>y <tendrlugao en lasreaccionescelulares.Slo cuandoexploramosla naturalezade
las enzimasy suspropiedades
catalizadoras,
comenzamos
quesonfactiblesenerga entenderpor qulasreacciones
ticamente,tienen lugar realmenteen las clulasy cmo se
controlala velocidadde talesreacciones.
En estecaptulo,consideraremosprimero por qu las
reaccionestermodinmicamente
espontneas
no tienen
lugar normalmentea velocidadesapreciables
sin un catali-

zador,y despusveremos el papel delas enzimascomo catalizadoresbiolgicos especficos.Thmbin veremos cmo

Ia velocidad de una reaccin catalizadaenzimticamente se
ve afectada por la concentracin del sustrato disponible
para la reaccin. Asimismo, se analizarn algunas de las
formas de regulacin de la tasade reaccionesencaminadas
a satisfacerlas necesidadesde la clula.

Energa de activacin y el estado

metaestable
Si se detienea pensarlo,ustedya estfamiliarizadocon
muchasreaccionesque son termodinmicamente
factibles,aunqueno ocurranmuy a menudo.Un ejemploevidente,consideradoen eI Captulo5, esla oxidacinde la
glucosa(vaseReaccn
5.9).Estareaccin(realmente,
serie de reacciones)
es altamenteexergnica(AG'= -686
kcal/mol) sin embargo,no ocurrepor s misma.De hecho,la glucosaen forma cristalinao en solucin,sepuede
exponeral oxgenodel aire indefinidamente,y la oxidacin sermnima o inclusoinexistente.
La celulosadel papel sobre el cual estnimpresasestaspalabras,es otro
ejemplo,como lo es ustedmismo, que estformado por
un conjuntocomplejode molculastermodinmicamente inestables.
No tan cercanas,pero igualmenteimportantespara la
qumica celular,son muchasreaccionestermodinmicamentefactibles,pero que no tienenlugarpor s mismasa
una velocidadapreciable.Como ejemplo,consideremosa
la molculade alta energaadenosinatrifosfato(AIP),la
cual tiene una AG' altamentefavorable(-7,3 kcal/mol)
para la hidrlisis de su grupo fosfatoterminal, durante la
y el estadometaestable
Energa
deactivacin

r39

formacin del correspondientedifosfato (ADP) y fosfato

inorgnico(P'):

molculasdeATPI HzO alcancenel estadode transicin.

AG" mide la diferenciaen la energalibre entrelos reactivosy los productos(-7,3 kcal/molpara estareaccin
AIP + HrO:
(6.1)
ADP + Pi
en particular),mientrasEo indica el mnimo de energa
Estareaccinesmuy exergnica
bajo condicionesesrequeridapara que los reactivosalcancenel estadode
tndare inclusolo esms en las condicionesque prevale- transiciny, por tanto, seancapacesde dar lugar a los
cenen lasclulas.Sin embargo,a pesarde quela variacin productos.
de energalibre esmuy alta,estareaccintienelugarpor s
La velocidadreal de una reaccines siemprepropormismaslolentamente,
de maneraqueel ATP permanece cional a la fraccin de molculasque tienen una energa
establedurante varios das cuando se disuelveen agua igualo mayorqueEo.Cuandoen una solucina temperapura. Estapropiedadpareceser compartidapor muchas tura ambiente,lasmolculasde ATP y aguasemuevenlimolculasy reacciones
biolgicas.
bremente,cadauna poseeuna ciertacantidadde energa
en un momentodado.Como semuestraen la Figura6.ib,
la
distribucinde energaentrelasmolculastieneforma
La barrerade aetivacinenergticadebeser superada
de
campana;algunasmolculastendrnpocaenerga,alantesde quese puedaverificarunareaccinquimica
gunaspodrn tenermucha,y la mayoraestarcercadel
Lasmolculasque deberanreaccionarentres,a menudo promedio.El hechoa destacares que slo las molculas
no lo hacenporquecarecen
de energasuficiente.
Paratoda
capacesde reaccionaren un instantedado,son las que tiereaccin,hay una energade activacin especfica(.Eo), nensuficienteenergaparasuperarla barrerade energade
definidacomo la cantidadmnima de energaque los reacactivacin(Figura6.1b,lneadiscontinua).
tivos debentener antesde que la colisinentre ellostenga
xito,dandoorigena los productos.Ms especficamente,
Elestado
metaestable
eseilesultado
dela barera
los reactivosnecesitana).canzar
un estadocumico interde
activacin
medio llamado estadode transicir, .tryi energalibre
es mayor que la de los reactivosiniciales.La Figura6.la
La energade activacin es,para la mayora de las reacciomuestrala energade activacinrequeridapara que las
nes biolgicas a temperaturas celularesnormales, lo sufi-

Estado
de transicin

(
@

f
O
'q)

t\
c)
_o

(
o)
c)

c
LU

1T:
t

A flo'

ADP+l

o
E
o
o
o
c)

E
z
.l

Fnornia

(a) Secuenciade reaccin

intina

/v1

de as molculas
N2

(b) Activacintermal

t\

5
o
.c)

c
c)
-c)
q)
LL

E
c)
c
o
c)
E
.l

z
(c) Secuenciade reaccincon catalizador

Fnarne

nintia

,A' /1

de las molculas\-.J
N;
(d) Activacincataltica

-.--\40

Gaptulo
6 Enzimas:
loscatalzadores
delavida

Figura6.1 Efectode la catlisisen la

ener$a de activaciny en el nmerode
molculascapacesde reaccionar.
(a) La energade activacin E, esIa
cantidad mnima de energacintica que
deben poseerlos reactivos(aqu, ATP y
HrO) para permitir ias colisionesque
conducen a la formacin del producto.
Cuando los reactivosrebasanla barrera
de energiade activaciny reaccionan,
los productos tienen una energalibre
reducidaen una cantidadAG". (b) El
nmero de molculasN1,que son lo
suficientementeenergticaspara
sobrepasarla barrerade energade
activaciny chocarsatisfactoriamente,
sepuede incrementar a N2, elevandola
temperatura de T, a Tr. (c) La energade
activacin tambin puede disminuirse
por un catalizador,(d) incrementndose
as el nmero de molculasde \ a Nr',
sin que cambie la temperatura.

cientemente alta para que la proporcin de molculas que

posean mucha energa en un instante dado, sea extremadamente pequea. Por consiguiente, la velocidad de las
reacciones no catalizadasen las clulas es my baja, y la
mayora de las molculas parecen ser estables,pese a ser
reactivos potenciales en reaccionesfavorecidas termodinmicamente. Son, en otras palabras, termodinmicamente
inestables,pero no tienen la energa suficiente para sobrepasar la barrera de la energa de activacin.
Talesmolculas, aparentemente estables,se dice que eslas clgljtslos- biolgitn en un estado metaestable._P*arp

Si los reactivospueden
agruparsesobrealgntipo de superficieque facilitequelas
porcionespotencialmentereactivasde lasmolculasadyacentesse yuxtaponganapropiadamente,la interaccinse
verfavorecidaenormementey la energade activacinreducida de maneraeficaz.
Latareadeproveerde tal superficiereactivaesla propia
de un catalizador,agenteque aumentalavelocidadde una
reaccin,disminuyendola energade activacin (Figura
6.lc) y asegurandoque una proporcin mayor de molculas
seansuficientementeenergticaspara experimentarla
Ia
enere
de
acti-vggig3lta
el..estado
cos celulares,
gg
-'-y_
-{PGf'?YfFffireaccin
sin suministrode calor (Figura6.1d).Una caracloi'b6fi
cel
ulare
s,
so
n
c
ru
c
iale
s,
cler
' - . - . . . . stabT-e
rn-etae
ftluEt6
.-:+,:,...-_"^,-..:,,'
r, i-e
_-_porque Ia ?ida, pdr sb'plopia naturaleza,es un sistema tersticaprimordialde un catalizadoresoueno semodifilejosdel equilibrio. capermanente_nqeIte.nisg__g9nslrng.nienjrailalga$tqr-r
mantenidoen un estadoestacionario
rnle j-d-etodaslasreacciones t iene lugatSim plenete,plo poLsr! na_u amb_i
Si no fuerapor el estadometaestable,
cuado paa Q_c-i!!1adq
tenderanrpidamenteal equilibrio y la vida seraimposi949qi_q,
del perxido
Podemosconsiderarla descomposicin
La vida,por lo tanto,depende
ble tal comola conocemos.
de hidrgenoen aguay oxgeno,como un ejemplode cade quelasenergasde activacinseanaltas,evitandoque la
mayorade las reaccionescelularesocurran a velocidades tlisis:
apreciables
en ausenciade un catalizadorapropiado.
(6.2)
2 H2O + 02
2 H 2 O 2- Loscatalizadores
superanla banerade la energla
de activacin
La energade activacinno es slo importante para el,
sino que es taml
mantenimientodel estadometaestable,
bin una barreraquesedebesuperar,paraquelasreaccioadecuadas.
Dado
nesdeseables
tenganIugara velocidades
que el contenidoenergticode una molculadadadebe
superarEoantesde que la molculaseacapazde reaccionar, la nica manerade que puedaverificarseuna reaccin basadaen reactivosmetaestables,
a una velocidad
proporcin
de molculassufiadecuada,
es aumentarla
energticas.
Estosepuedeconseguir,
bien aucientemente
mentandoel contenidomedio de energade todaslasmolculas,o bien reduciendoel requerimientode energade
activacin.
Una manerade incrementarel contenidode energadel
sistemaes suministrandocalor.Como muestraIa Figura
incrementandola temperaturadel sis6.lb, simplernente
tema desdeT, a T, seaumentarla energiacinticade las
por tanto, que hayaun mayor nmolculas,asegurando,
merode molculasreactivas(N, lugarde {). As,lahi"r
calentandola soludrlisis de AIP podra ser facilitada
cin, esdecir,confiriendo a cadamolculade ATP y agtJa
msenerga.EI problemade usaruna temperaturaelevada
es que es incornpatiblecon la vida, porque los sistemas
biolgicosrequierenuna temperaturarelativamenteconstante. Las clulasson esencialmentesistemasisotrmicos
(temperaturaconstante)y requierenmtodosisotrmicos
para resolverel problemade la activacin.
La alternativaa un incrementode la temperaturaesreducir el requerilqlelQ_dcll-ilqlg1a_d9_aclivaqaa.Dc,ese
r-nodo,nos aseguramosde que una proporcin mayor de

staesuna reaccintermodinmicamentefavorecida,pese
a que el perxido de hidrgeno existaen un estadometaestabledebido a la alta energade activacinde la reaccin.Sinembargo,si aadimosun nmeropequeodeiones de hierro (Fe") a una solucin de perxido de
hidrgeno,la reaccinde descomposicin
tienelugarunas
30.000vecesms pida quesin los ionesde hierro.Claramente,el ion Fe'- esel catalizadoren estareaccin,reduciendola energade activacin(comosemuestraen la Figura 6.1c)y, por tanto, asegurandoque una proporcin
significativamentemayor de molculasde perxido de hidrgeno(30.000vecesms) poseanIa energaadecuada
paradescomponerse
a la temperaturadada,sin necesidad
adicional.
de aporteenergtico
En las clulas,la solucinpara la descomposicin
del
perxidode hidrgenono esla adicinde ionesfrricos,
sino la enzimacatalasa,una protenaque contienehierro.
En presenciade Ia catalasaIa reaccines 100.000.000
de
vecesmsrpidaque en ausenciade catalizador.La catalaqusacontienetomosde hierro retenidosen estructuras
micasllamadasporfirinas.As,la ventajade la catlisisinorgnicaseincorporadentro del contextode una molcula
proteica.Estacombinacinda lugar a un catalizadormucho ms eficazparaladescomposicindel perxido de hidrgenoque los ionesde hierro aislados.El incrementode
la velocidadde, aproximadamente,108vecespanla catalasa,no es un valor atpico en absoluto;los aumentosde
velocidad de las reaccionescatalizadasenzimticamente
en colpaestnen el rangocomprendidoentre107y 1014,
Estosvaloressuracin con las reaccionesno catalizadas.
brayanla importanciaextraordinariade lasenzimascomo
catalizadoresy nos llevan hastael tema principal de este
captulo.
y el estadometaestable 1 4 t
Ener$adeactivacin

Enzimas como catalizadores

biolgicos
Independientemente de su naturaleza qumica, todos los
catalizadorescomparten tres propiedades bsicas:
1. Un catalizador incrementa la velocidad de una reaccin disminuyendo el requerimiento de la energade
activacin y permitiendo que una reaccin termodinmicamente factible, tenga lugar a una velocidad
razonable, sin necesidadde activacin trmica.
2. Un catalizador funciona formando complejos transitorios con las molculas de sustrato, ligndolas de
manera que se facilite su interaccin.

mamosenzimasfue eldefermentos.Sinembargo,hubo que

esperarhasta\926 para obtenerla primera enzimacristalizada,laureasa(apartir delasalubias,por famesB. Sumner),
demostrndoseque era una protena. Incluso, entonces,
pasun tiempo hastaque los bioqumicosy enzimlogos
apreciaranque los <fermentos>que estabanestudiando
eran,de hecho,protenascatalticas,
y queparasu completa
comprensinse requeraentendersu estructuray funcin
(Enlosprimerosaosde 1980,losbilogos
comoprotenas,
descubrieronque,ademsdelasprotenas,ciertasmolculas
deARN, llamadasr.ubp:wras,tienen
tambinactividadcataltica.Lasribozimasserndiscutidasen una seccinprxima. Aqu, consideraremos
las enzimascomo protenas,las
cualesson,realmente,la mayora.)

3. Uncutiliffiad
a l a q u es e
consigueeI equilibrio; no tiene efectosobrela posicindelequilibrio.Esdecir,un catalizador
puedeincrementarIa velocidadde las reacciones
exergnicas,perono puede,de ningunamanera,servircomo
motor energticode una reaccinendergnica.
En
otraspalabras,los catalizadores
no son geniostermodinmicos.

El sitio activo. Uno de los conceptosms importantes

paraentenderlasenzimascomoprotenas,
esel de sitio activo. Cadaenzima,indepe
cataliceo de su estructuraparticular,contienedentro de
algunapartede su estructuraterciariaun grupocaractersqueformanel sitio activo,dondeocutico de aminocidos
rre el eventocatalticodel cual esaenzimaesresponsablg.
Normalmente,
el sitio activoesun surcoo bolsillo real con
Estaspropiedades
son comunesa todoslos catalizadopropiedades
qumicas
y estructurales
quepermitenla acores,seanorgnicoso inorgnicos.
Refirindonos
a nuestro
modacin
adecua9_tyespeclfica.
del
sustrato.
La Figura6.2
ejemplo,estoseaplicaigualmentea los ionesde hierroy a
muestra
los
modelos
obtenidos
por
ordenador
de lasenzilasmolculasde catalasa.
Sin embargo,los sistemas
biolmas
lisozima
y
carboxipeptidasa
que
A,
ilustran
bien el
gicosraramenteusancatalizadores
inorgnicos.En vezde
preciso
ajuste
de
la
molcula
de
sustrato
en
los
bolsillos
eso,fundamentalmente
todaslas catlisisen las clulasse
producidospor el plieguecaracterstico
de las cadenasde
llevana cabopor molculasorgnicas(pr.otelnas
en la mapolipptidos.
La
lisozima
es
una enzimaque rompe las
yorla de los ce.s_o!)-llamadgs-ezimas.
Debido a que las enqniones
glicosdicas
peptidoglicanos
en los
de las paredes
zimassonmolculasorgnicas,
sonmuchomsespecficas
(ruptura)
bacterianas.
conduciendoa la lisis
y muertede
quelos catalizadores
inorgnicos,
y susactividades
sepuelas bacterias.La carboxipeptidasa
A es una enzima que
den regularcon muchomscuidado.
modificalos polipptidoseliminandoun aminocidocada
vezdesdeel extremoC-terminal del polipptido.
La mayorade las enzimasson protenas
El sitio activode una enzimatpica comprendeun nLa capacidadde los extractoscelularespara catalizarreac- mero determinadode aminocidos,
que normalmenteno
cionesqumicasseha conocidodesdelos estudiosde la fersoncontiguos,a io largodela secuencia
primariadela promentacinde Eduardy HansBuchneren 1897.De hecho, tena.En todo caso,se mantienenjuntos,en una conforuno de los primerosnombresaplicadosa lo que ahorallamacincorrecta,graciasal plegamiento
tridimensionalcaSustrato
u n i d oa l
centroactivo

Figura6,2 Estructurasmoleculares
de la lisozimay la caoxipeptidasa
A.
Modelo tridimensional compacto
generadopor ordenador de las enzimas
(a) Iisozima y (b) carboxipeptidasaA,
con las respectivasmolculasde sustrato
unidas a sus sitios activos,un segmento
corto de un peptidoglicano bacteriano,
en el casode la lisozima y un pptido
artificial, en el casode la
carboxipeptidasaA.

Sustrato
u n i d oa l
centroactivo

tr

(a) Lisozima

142

Capitulo6

Enzimas:
loscatalizadores
de la vida

(b) Carboxipeptidasa
A

Porejemplo,lamodela cadenapolipeptdica.
racterstico
A, que se muestraen la Figura
lcula carboxipeptidasa
6.2b, consisteen un nico polipptido de 307 residuos
en el sidelos quesloseisestnpresentes
amoinoaclicos,
posiciones
69 y
las
en
histidina
de
los
residuos
tio activo:
270,
el
de
argiposicionesT2y
las
en
glutamato
196,losde
nina en la posicin145,y el de tirosinaen la posicin248.
Estarelacinde aminocidossituadosa lo largo de Ia cadena,subrayala importanciade la estructuraterciariatotal
de la molcula enzmtica.Slocuandola molculaalcanza su conformacintridimensionalestablese renenlos
para constituir el sitio activo.
aminocidosespecficos
En realidadslounospocosde los 20 aminocidosdiferentesque forman las protenas,estnpresentesen el sitio
activode la mayorade las protenasque han sido estudiadas.Casisiempreaparecenlos aminocidoscistena,histidina, serina,aspartato,glutamatoy lisina.Ib4gs etlospugden
parficiparen la nin del sustratoal sitio activoduranteel
procesocataltico,v Ia histidina,el aspartato.y el glutamato'
de protones.
sirventambincomodonanteso aceptores
Algunasenzimas,ademsde estarformadaspor una o
polipeptdicas,
mscadenas
Puedenportar tambincomponentesno proteicos.! stoscomponente
pg!_plgstticg! normalmente son molculasorgnicas
olonesmetlicos'talescomoel hierro dela enzif'equeas
funcjqn4njolqo-gcqplqres
ma catalasa.Frecue_nteme!8,
s
porquenlnguo delosaminocido
delectrones,
grupos
Los
buen3qgplal-d-9-el9Ell9nes'
de Ia.cadenaesun
selocalizan
prostticos,
en los casosen queestnpresentes,
capara
la
actividad
en el sitio activoy son indispensables
un
ejemplo
A
es
taltica de la enzima.La carboxipeptidasa
de una enzirhacon un grupoprosttico;tieneun tomode
unido a dos residuosde histidina y a
zinc estrechamente
uno de los glutamatos'en su sitio activo.

Esta reaccin se puede llevar a cabo en el laboratorio

usando un catalizador de platino (Pt) o de nquel (Ni),
como se indica. Estos catalizadoresinorgnicos son muy
poco especficos,pudiendo catalizarIa hidrogenacin de
una amplia variedad de componentes insaturados.De hecho, el nquel o el platino se usan comercialmente para hidrogenar aceitesvegetalespoliinsaturados, en la fabricacin de manteca para guisar o de manteca vegetal. Se
pueden hidrogenar eficazmenteen presenciade nquel o
platino, con independencia de cul sea la estructura del
componente insaturado.
Comparmoslo con el ejemplo biolgico de la hidrogenacin que tiene lugar en la conversin de fumarato en
succinato,reaccinque consideraremosde nuevo en el Captulo 10:

HO

-O-C

lll

H-C-C-O
^l

\,/

+2H*+2e-:

it l

,/\
H
C-O_

UI

il |
-o-c-c-H
I

(6.4)

lt ll

Succinato

Fumarato

en lasclulaspor Ia enzima
Estareaccinescatalizada
(llamadaasporquenormalmendeshidrogenasa
succinato
te funcionaen el metabolismoenergticoen la direccin
como muchasenzimas'es
opuesta).Estadeshidrogenasa,
No puedeaadiro quitarhidrgenos
altamenteespecfica.
desdeningn compuesto,exceptolos que semuestranen
que
6.4.Dehecho,estaenzimaestan especfica
la Reaccin
inclusono puedereconoceral maleato,una isoformadel
fumarato(Figura6.3).
algunasrecoNo todaslasenzimassontan especficas;
dela estructuenzimtica.Una consecuencia
Especificidad
y otrasresubstratos,
de
muy
concreto
nmero
nocenun
ra del sitio activo es que las enzimasmanifiestanun alto
que
siempre
sustancias'
de
amplia
categora
conocenuna
grado de especificidadpor el sustrato, puesto de maniEsta
especicomunes.
estructurales
fiesto por su habilidad para discriminar entre molculas poseancaractersticas
esuna de las propiedades ficidad por grupos esms frecuenteen enzimasimplicamuy similares.La especificidad
lasendasen la sntesisy degradacinde polmeros.El objetivo
delosseresvivos,y precisamente
mscaractersticas
polipeptA esdegradarlos enlaces
de la carboxipeptidasa
de eszirnasson unos de los ejemplosmsespectaculares
la
funcin
de
as,
terminal;
dicosdesdeel grupo carboxilo
pecificidadbiolgica.
Podemosmostrar estaespecificidadcomparandolas
enzimascon los catalizadoresinorgnicos.La mayotiade
o
o
y
inorgnicosson muy pocosespecficos
los catalizadores
o
c
-o-c
H
H
por ello puedenactuarsobreuna variedadde componen\^./
\^/
U
qumicageneral.
tes que compartenalgunacaracterstica
tl
(incorpotaConsidere,por ejemplo,la hidrogenacin
a
n
"\
,,,"\
,/
cin de hidrgenoa un enlaceinsaturadoC:C):
n
\J-\,
N
U-U
! r

tl

R-C:C-R'

HH

HH

tl

+ Hz ---------) R-Q-q-R
PtoNi

I
I
HH

(6.3)

(a) Fumarato

(b) Maleato

(a) fumaratoy (b) maleato'

Figura6.3 Losestereoismeros
biolgicos t43
comocatalizadores
Enzimas

estaenzimaesaceptaruna gran variedadde polipptidos

como sustratos,ya que la utilizacin de enzimasdistintas
paratodoslos enlacespptidicosdiferentesque tienen que
serhidrolizadosen la degradacinpolipeptdica,representarla un gastoinnecesariopara la clula.
Sin embargo,las enzimasson generalmentede alta especificidadcon relacin al sustrato,tanto que una clula
puedeposeercasitantasenzimasdiferentes,como reaccionestiene qtoecatalizar.Parauna clulatpica, son necesarias miles de enzimasdiferentespara cumplir con todo su
programametablico.En principio, pareceun gastosuperfluo tener que sintetizartantasprotenas,almacenartanta
informacin genticay tener siemprea mano tantasenzimas en la clula.Peroestoimplica enormesposibilidades
de regulacin,como veremosms adelante.

ratura no esproblemticaparalasenzimasde lasclulasde

mamferoso aves,porque estosorganismosson homeoterde regularla temperaturacorporal indepenmos,capaces
dientementedel medioambiente.Sinembargo,losanimales
inferiores,lasplantas,los protistasy lasbacterias,funcionan
a la temperaturade su medio ambiente,la cualpuedevariar
mucho.Paraestosorganismos,la dependenciade la actividadenzimticade la temperaturaesmuy significativa.
La velocidad de una reaccin cata[zada enzimticamente aumentacon la temperatura,dentro de unos lmites,porque el incrementoen la energacinticade las molculasde la enzimay del sustrato,conducea una mayor
frecuenciaen lascolisiones,facilitandola unin correctaal
sustrato.Sin embargo.seIlegaa un punto en el que el aumento de la temperaturaes contraproducente,porque la
molcula enzimtica comienza a desnaturalizarse.Los
hidrpuentesde hidrgenoserompen,las interacciones
fobascambian.v la integridadestructuraldel sitio activose
interrumpe,causandola prdidade la actividad.
El rangode la temperaturapor encimadel cual una enzima sedesnaturalizavariamucho de una enzimaa otra y
deun organismoa otro.En la Figura6.4asecomparala dependenciade la temperatura de una enzima tpica del
cuerpo humano, con una enzimatpica de una bacteria
termfiIa.La velocidadde reaccinde una enzimahumana esmximaalrededorde los 37 oC,que esla temperatubruscoen
ra corporalnormal.A partir de ah el descenso
su actividad reflejala progresivadesnaturalizacinde las
molculasenzimticas.La mavorla de las enzimasde los
sereshomeotermosse inactivan por la temperatura,por
nzimas,la inactivacin
de laboratorio.Sin embar@meno
go, algunasenzimasson extraordinariamentesensiblesal
calor y se desnaturalizane inactivan a temperaturasms
corporales
bajas,en algunoscasos,inclusoa temperaturas
en personascon fiebrealta.
En el otro extremodel espectro,algunasenzimasconaltas.
servanla actividada temperaturasexcepcionalmente
La curvaverdeen la Figura6.4arepresentala dependencia
de la temperaturade una enzimapropia de lasarqueastermfilas,ya mencionadasen el Captulo 4. Estosorganis,
mos crecenen manantialescalientescidosa temperaturas
cadauna de lasmiles
tan altascomo 80 oC!Evidentemente,
de enzimasque estosorganismosnecesitanpara la actividad celularnormal, debensercapacesde funcionar a temperaturasa las que sedesnaturalizanlamayorlade las enzimasen las clulasde otros organismos,incluido usted.

y nomenclatura,No essorprendente
Divetsidad
enzimtca
que hayansido identificadasmiles de enzimas,dadasu especificidady el amplio nmero de reaccionesque ocurren
dentro de una clula.Estaenormediversidadde enzimasy
funcionesenzimticasha dado lugar a una gran variedad
de combinacionespara nombrarlas,a medida que eran
y descritas.Algunassedenominaronsegnel
descubiertas
proteasayamilasustrato,comopor ejemploribonucleasa,
sa.Otras,cbmo la succinatodeshidrogenasayla
fosfoglucoinombraronsegnsusfunciones.Sinembargo,
someresa,se
otrasenzimastienennombresqueno estnen absolutorelacionadoscon sussustratoso sus funciones.La tripsina,
catalasa,y lisozimason enzimasde estaltima categoria.
La proliferacinde nombrescomunesparalas enzimas
y la confusinresultante,hizo que la Unin Internacional
de Bioqumicadesignarauna ComisinEnzimtica(EC),
encargadade idear un sistemaracional para nombiar las
en la Tabla6.1.
enzimas.El sistemaEC estrepresentado
Lasenzimassedividen dentro de seisclasesprincipalesbacon subgruposparadefisadasen susfuncionesgenerales,
Lasseisclasesprincipales
nir susfuncionesms precisas.
hidrolasas,liasas,isomeson oxidoreduct*sts,transferasas,
rasasy ligasas.La Tabla 6.1 proporciona un ejemplo de
cadaclase,usandoenzimasque catalizanreaccionessetratarn mstarde en el texto.
El sistemaCE designatodaslasenzimasconocidascon
un nmero separadoen cuatro partes.Por ejemplo,EC
A. Losprime3.4.17.I,esel cdigode la carboxipeptidasa
y sub-subclase,
ros tresnmerosdefinenla clase,subclase
y el nmero final esel nmero de serieasignadoala enziA,
ma cuandofue aadidaa la lista.As,la carboxipeptidasa
de la cuarta
esla primera entradaenla 17.usub-subclase
al
al pH. Las enzimastambinson sensibles
Sensibilidad
La listade enzimasque
subclase
de la clase3 (hidrolasas).
han sido clasificadasde estaforma, crececontinuamente pH. Muchasslo son activasdentro de un rango de pH de
del pH se debe,normal3-4 unidades.Estadependencia
y caracterizadas.
con las quevan siendodescubiertas
mente,a la presenciade uno o ms aminocidoscargados
Sensibilidad
a la temperatura.Ademsde por su especifici- en el sitio activo o en el propio sustrato.La actividaddependede cmo estnestosgrupos,cargadoso sin carga.
y
tambinpor su
lasenzimassecaracterzan
dad diverSidad,
Por ejemplo, en el sitio activo de la carboxipeptidasaA,
de
la
tempela
temperatura.
Esta
dependencia
sensibilidada
r44

loscatalizadores
delavida
Captulo
6 Enzimas:

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biol$cos
Enzimas

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ptimapara
unaenzimahumana
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Temperatura
C

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c

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q)

(b)

pH

Figura6.4 Efectode la temperatulay el pH en la velocidadde las

reaccionescqtalizadasenzimticamente. (a) Efecto de la
temperatura eh la velocidad de una reaccin catalizadapor
una
-bacteria
enzimahumana tpica (en negro) y una enzima de una
termfila (en verde). La tasa de reaccin esmixima a la
temperatura ptima, unos 37 oC en el casohumano (la
temperatura de cuerpo) y unos 75 "C en la bacteria (la temperatura
de un manantial termal). El incremento inicial de la actividad con
la temperatura, es debido al aumento de la energacintica en las
molculas de enzima y sustrato.Sin embargo,un aumento excesivo
de la temperatura inactiva la reaccin,pues la protena de la enzima
se desnaturaliza.(b) Efecto del pH en la velocidad de una reaccin
catalizadapor Ia enzima gstricapepsina (en negro) y Ia enzima
intestinal tripsina (en rojo). La tasa de reaccin es mixima al pH
ptimo, aproximadamerLte2,0 para la pepsinay 8,0 para la tripsina.
EI pH ptimo para una enzima se correspondecon la
concentracin de protones a la cual los grupos ionizables,tanto de
la enzima,como del sustrato,estnen la configuracinms
favorablepara reaccionar.Los valoresde pH lejos del ptimo
producen, en general,modificaciones en Ios grupos cargadosde la
enzima, el sustrato o ambos. El grado ptimo pH de una enzima
sueleser el mismo que el del compartimiento celular,o el medio
externo, en el que la enzima esactiva.

aparecenlos gruposcarboxilosde dos residuosglutamato.

Estosgrupos carboxilosdebenestarpresentesen la forma
cargada(ionizados),de forma que la enzimaseinactivasi
el pH disminuyehastael valor en el cual los gruposcarboxilo del glutamatoen la mayorade las molculasenzimticas,estnprotonados por tanto,sin carga.
Como sepodraesperar,
la dependencia
de pH de una
enzimanormalmentereflejael medio ambienteen el cual
la enzimaestactiva.La Figura6.4bmuestrala dependencia de pH de dosenzimasque degradanprotenas,encontradasen el tracto digestivohumano.La pepsina(lneanet46

Capitulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

gra) estpresenteen el estmago,donde el pH normalmentetiene valoresen torno a 2, mientrasque la tripsina

(lnearoja) essecretada
en el intestinodelgado,el cualtiene un pH en torno a 8. Ambas enzimasson activasen un
rangode casi4 unidadesde pH, pero difierenmucho en su
pH ptimo, consecuentecon las condicionespropias de
susrespectivas
localizacionesdentro del cuerpo.
Sensibilidad
a otrosfactores. Otra de lascaractersticas
de
las enzimasessu sensibilidada otros factores,ademsde a
la temperaturay pH, como lassustancias
inhibidoraso activadorasde la enzima,un aspectoal cual volveremosms
tarde en el captulo.En el casode enzimascon especificidadpor determinados
grupos,laactividadtambinsepuede ver afectadapor la presenciade sustratosalternativos.
La mayorade las enzimasson sensiblesal medio ambiente inico, el cual esprobablementeel que afectaa la conformacin total de la enzima,debido a que los puentesde
hidrgenodependende 1.El medio ambienteinico puede afectartambin a las uniones del sustratoporque las
interaccionesinicasestna menudo involucradasen las
unionesentreel sustratoy el sitio activo.
La unindelsustrato,la activaciny la reaccinse
producen
en elsitio actvo
Las enzimasson catalizadoresmuy eficaces,graciasa que
los sustratosencajande forma precisacon el sitio activode
las enzimas.Estaeficaciase puedeobservaren toda su
extensin,si comparamosla catlisisenzimticacon la
catlisisinorgnica.Como apuntamosanteriormente,
las
reaccionescatalizadasenzimticamenteprogresana una
velocidadde 107a 10ravecesmsrpidoquelasreacciones
no catalizadas,
mientrasque las que utilizan catalizadores
inorgnicos,
sonde 103a l0aveces
msrpido.Comousted
puedeadivinar,la mayor parte del interspor las enzimas,
secentraen el sitio activo,dondeocurrenla unin, activacin y transformacinqulmicadel sustrato.
Launindelsustrato. El contactoinicial entreel sitio activo deuna enzimayunamolculade sustratopotencial,dependede colisionesaleatorias.Srnembargo.una vez e
hendidura o bolsillo del sitio activo,las molculasde sustrato seunen temporalmentea la superficiede la enzima.
con la orientacinapropiadapara interaccionarentre s y
de la enzima,lo cual facicon.gruposcatalticosqspecficos
lita la reaccin.La unin delffi
vsde aminocidoscargados,por medio de puentesde hidrgenoo enlaces
inicos(o ambos).Estiion'esson,en
general,dbiles,pero la sumade variasde ellasessuficiente para mantenera la molcula en su lugar. La fuerzade
unin entre una enzimay una molculade sustrato,suele
encontrarse
en el rangode 3-I2 kcal/mol,menosde un dcimo dela fuerzade un enlacecovalente(taseFigra2.2).
Por tanto,la unin al sustratoesfcilmentereversible.

Durante muchos aos,los enzimlogosconsideraronel

sitio activo como una estructura rigida. Comparaban el
ajuste de un sustrato dentro del sitio activo a una llave dentro de una cerradura,analogasugeridaen 1894por el bioqumico alemn Emil Fischer.Esle modelo de cerraduray
llaye, mostrado en la Figura 6.5a, explic la especificidad
enzimticapero hizo poco para acrecentarnuestro conocimiento del evento cataltico. Un punto de vista ms til
acercade la interaccin enzima-sustrato es el provisto por
el modelo de ajuste inducido, propuesto en 1985 por Daniel Koshland.Como ilustra la Figura 6.5b,estemodelo supone que la unin inicial de la(s) molcula(s) de sustratoal
sitio activo deforma la enzima y el sustrato,estabilizandoa
las molculas de sustrato en su estadode transicin y permitiendo que los enlacescrticos sean ms susceptiblesa
ataquescatalticos.
La distorsin de ia enzima implica un cambio conformacional en la misma por tanto, en la configuracin del
sitio activo. Este cambio posiciona de forma ptima a los
grupos reactivosapropiados de la enzima, para la reaccin
catalticaen la cual intervienen, aumentando asla probabilidad de que la reaccin se produzca. EI cambio conformacional acecaal sitio activo a las cadenaslateralesde los
aminocidos que son crticos para el proceso cataltico,
pero {.ue no estnen las proximidades del sitio activo en la
conformacin no inducida. En muchos casos'estascade-

nas lateralesson grupos cidos o bsicos,que promueven

la catlisis.En el casode la carboxipeptidasaA, la unin del
sustrato atrae a tres residuos aminoaclicos crticos al sitio
activo (una arginina, un glutamato y una tirosina).
Los estudiosde difraccin de rayosx de protenas cristalizadashan confirmado que realmentese producen estos
cambios, durante Ia unin del sustrato. La cristalografa
con rayos X se usa para determinar la forma de una molcula enzimtica con o sin sustrato unido al sitio activo. La
Figura 6.6 ilustra los cambios conformacionalesque tienen
lugar tras la unin del sustrato ala lisozima,la enzima ya
mostrada en la Figura 6.2a,y parala hexoquinasa,una enzima que podremos encontrar de nuevo ms adelante en
estecaptulo. En ambos casosse produce un cambio notorio en la conformacin de la molcula proteica, como respuesta a la unin del sustrato.En el casode la hexoquina,u, po. ejemplo, la unin del sustrato (una molcula de
D-glucosa) provoca que dos de los dominios de la enzima
se doblen el uno hacia el otro, cerrando el pliegue del sitio
de unin alrededor del sustrato (Figura 6.6b).
El cambio conformacional al producirse la unin del
sustrato, puede resultar en un desplazamientoextensode
grupos de aminocidos dentro de la molcula proteica.
En el casode la carboxipeptidasaA, por ejemplo, la unin
del sustrato hace que el residuo de tirosina de la posicin
248 se mueva a I,2 nm, una distancia aproximadamente
igual a una cuarta parte del dimetro de la molcula enzimtica!

q'Yc*e*(.8

Activacindel sustrato. El papel del sitio activo no es slo

reconocer y unir el sustrato apropiado sino tambin acflvarlo, sumergindoloen el medio qumico necesariopara
la catlisis.Una determinada reaccin cafalizadaenzimticamente,puede involucrar a uno o ms recursosde activacin del sustrato. Los tres mecanismosms comunes son
Ios siguientes:

(a) Modelode cerraduray llave

Enlace(s)
desestabilizado(s)
Sitio

- F)-[,(:)/
.Y*\U/-

aCtlVO

/a\

@
v,,\

(b) Modelode ajustelnducldo

Figura6.5 Dosmodelosde interaccinenzima-susttato'
(a) El modelo de cerraduray llave.En estemodelo clsico,la
molcula enzimrica(E) era consideradauna estructura rgida, con
un sitio activo, donde encajabael sustrato (S), anlogamentea
como 1ohace una llave en una cerradura. La reaccin en el sitio
activo, convierte a las molculasde sustrato en molculasde
producto (Pr y Pz).(b) El modelo de ajusteinducido. Segneste
modelo, la unin de una molcula de sustrato al sitio activo de una
enzima,induce un cambio conformacional en sta,que sita en el
sitio activo a los grupos reactivosadecuados,de manera ptima
para la reaccin catalizada.Adems,el aiuste estrechoentre la
nzimay el sustrato desestabilizauno o ms de los enlacesdel
sustrato,haciendo que seanms susceptiblesa un ataquecataltico.

1. El cambio en la conformacin enzimtica inducida

por Ia unin del inicial sustrato al sitio activo, no
slo causauna mejor complementariedady un ajuste ms estrechoenzima-sustrato,sino que tambin
deforma uno o ms de sus enlaces,debilitando as
dichos enlaces,hacindolos ms susceptibleal ataque cataltico.
2. La enzimatambin puede aceptaro donar protones
incrementando, por tanto, la reactividad qumica
del sustrato.Esto da cuenta de la importancia de los
aminocidos cargadosen la qumica del sitio activo,
lo cual, a su vez, explica por qu la actividad de la
enzimasueleser tan dependientedel pH.
3. Como forma adicional para la activacin del sustrato, las enzimas tambin pueden aceptar o donar
electrones,formando de esemodo enlacescovalentes temporales entre la enzima y su sustrato.El mecanismo necesitaque el sustrato tenga una regin
biolgicos t47
Enzimas
comocatalizadores

Sustrato
(peptidoglicano)

Figura6.6 Cambioconformacionalen la estluctura

de la enzima,inducidopu la unindel sustrato,
Aqu semuestran los modelos compactosde las
enzimas:(a) lisozimay (b) hexoquinasay sus
sustratos(un peptidoglicano artificial y una
molcula de o-glucosa,respectivamente).En
ambos casos,la unin del sustrato induce un
cambio conformacional en la enzima, detectable
por anlisisde difraccin con rayos-X.

\r.

(a) Lisozima

(b) Hexoquinasa

que seaelectropositiva
(deficienteen electrones;o
(ricaen electrones)
electronegativa
y queel sitio activo de la enzimatengauno o msgruposde polaridad opuesta.
El acontecimiento
catalitico. La secuenciade acontecimientos que tienen lugar en el sitio activo,seilustra en la
Figura6.7,tomandocomo ejemploala enzimasacarasa.
La sacarasa
hidrolizael disacridosacarosa
en glucosay
fructosa.Hastael momento,hemosvisto que la colisin
inicialaleatoriade una molculade sustrato-sacarosa,en
ssfs 6s6- con el sitio activo, tiene como resultado su
unin a residuosaminoaclicos
que estnposicionados
estratgicamente
all (Paso1). La unin del sustratoinduce
un cambioen la conformacinenzimticaque intensifica
el ajusteentre la molculasustratoy el sitio activo,facilitando de esemodo la conversindel sustratoen los productos,en estecasoglucosay fructosa(paso2). Despus,
estosproductosse liberan desdeel sitio activo (paso3),
permitiendo que la molculaenzimticaregresea su conformacin original, quedandoel sitio activo ahora disponible para admitir otra molculade sustrato(paso4). La
148

Captulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

secuencia
completade acontecimientos
tienelugar en un
tiempolo suficientemente
cortoparapermitir queen el sitio activo de una solamolcula enzimticaocurran cientos,o inclusomiles,de talesreacciones
por segundo!

Cintica enzimtica
Hasta el momento, nuestra exposicin acercade las enzimas ha sido bsicamentedescriptiva. Hemos hablado del
requerimiento de energa de activacin que evita que las
reaccionestermodinmicamente factibles ocurran, y de los
catalizadores como medio de reducir la energa de activacin y de esemodo facilitar dichasreacciones.Thmbin hemos consideradoa las enzimascomo catalizadoresbiolgicos y hemos examinado su estructura y funcin .ot -,
detalle.Adems,nos hemos dado cuenta de que las nicas
reacciones que probablemente ocurren en las clulas a velocidades razonables, son aquellas para las cuales las enzimas especficasestn al alcance de la mano, de manera que
la capacidad metablica de una clula, est especificda
por las enzimas que estnpresentes.

Q E I s u s t r a t oc o l i s i o ncao n e l
s r t i oa c t i v o d, o n d ee s m a n t e n i d o
p o ' e n l a c e ds e b r i e cs o r ^i o sg , u p o sR
d e o s a r i r o cr c o so e s i t i oa c t i v o .
L a u n i o nd e l s u s t r a t op r o v o c au n c a m b i o
contorrao
c n a e n l a e n z i m a r, e s p o n s a b l e
d e q u e e l s u s t r a t os e au n i d om s
( a l u s t ei n d u c r d o t
firmemente

Complejo
enzimasustrato

:t+ HrO
@ Elsitioacrivo
o<1 dicn^nrh

paraotra
moiecula
de sustrato.

@ Sustrato
e5 colrverti0L)
e pfocjuctos

O L o sp r c c l L r c t o s
5 0 ni o e f a t o s

t
Fructosa

Figuta6.7 Cfclocatalticode unaenzima, En esteejemplo,la enzimasacarasa

catalizalahidrlisis
de sacarosa
en glucosay fructosa.

Inclusocuandofaltanlas enzimasDodemosservirnos
de su ausenciaparacalcular,por comaracin,la velocidad real a la cual tiene lugar una reaccincatalizadaenzimticamentey culesel efectoejercidopor determinados
factoresen la velocidadde reaccin.La simplepresencia
de la enzimaapropiadaen Ia clulano aseguraque una
determinadareaccinpuedaocurrir a una velocidadadecuada,a menosque tambin podamosestarsegurosde
quelascondicionescelularessonfavorables
parala actividad enzimtica.Yahemosvisto que hay factoresque pueden influir en la actividadenzimtica.talescomo la temperaturao el pH. Ahora estamospreparadosparavalorar
cmo la actividad enzimticatambindependede la concentracinde los sustratos,
de los produciosy de los inhibidorespresentes
en la clula.Adems,veremoscmo,al
menos algunos de estos efectos,pueden ser definidos
cuantitativamente.
Cuando dirigimos nuestra atencin a estosaspectos
cuantitativosde la catlisisenzimtica,nos encontraremos
en el campbde la cintica enzimtica.I,a palabracintica
es de origen griego (Klnetlkos,siqnifica<movimiento>).
Aplicadaa lasreacciones
qumicas.la cinticaconciernea

lasvelocidades
de reacciny la maneraen que esasvelocidadesestninfluidaspor varios factores,pero especialmentepor la concentracin
delsustrato.delosproductosy
de los inhibidores,Aqu nos centraremos,mayoritariamente,en los efectosde la concentracin
del sustratoen la
cintica de las reaccionescatalizadasenzimticamente.
Nuestroestudioestarlimitado alasvelocidades
inicialesde
reaccin,
medidasalrededorde un periodode tiempoen el
cual la concentracinde sustratotodavano ha disminuido lo suficientepara afectara la velocidad,y la acumulacin de producto es todavapequeapara provocaruna
reaccinapreciable,en sentido contrario.Aunque esto es
una simplificacinde lo queocurrerealmente,
nospermitir entenderalgunosprincipiosimportantesdela cintica
enzimtica.
La cinticaenzimticapuedeparecerbastantecompleja al principio. Paraardarle a entenderlos conceptosbsicos,en el Anexo6A seplanteaun smil, en el cual,lasepzimas que actan sobre las molculas de sustrato, se
comparancon una habitacinllena de monos pelando
cacahuetes.
Puederesultarletil recurrira la analogaahora y regresardespus
a estaseccin.
Cintica
enzimtica 149

Anexo
MoNos Y CACAHUETES
Si le parecide utilidad el ejemplode los frijoles saltarines
mejicanos,para entenderel conceptode energalibre del
Capltulo 5, qra apreciela aproximacina la cintica
enzimticabasadaen la analogacon una habitacinrepletade
y una cantidadvariablede cacahuetes
monos (<enzimas>)
pelados(<sustratos>).
Tiate de entendercadapaso,primero en
y luegocomo una
trminos de monos pelandocacahuetes,
'
autnticareaccin,catalizadaenzimticamente.

LaGaleradelCacahuete

Paranuestromodelo,necesitamosuna tropa de diez monos,

todos igualmenteexpertosen encontrary pelar cacahuetes,
Suponemostambin que los monos son incapacesde come
que pelan,pero pesea
siquiera,uno solo de los cacahuetes
todo, sufrenuna necesidadcompulsivade seguirpelando.
(Parahacerel modelo algo ms riguroso,podemosinsistir
que los cacahuetes
son una nuevavariedadhbrida, que se
puederecomponerfcilmente,y que los monos,lo mismo
que
estncolocandolos cacahuetes
dentro de suscscaras,
pelndolos.Peroestasconsideraciones
no nos preocupan
aqul; slo estamosinteresadosen las condicionesiniciales
en las cualestodos los cacahuetes
estndentro de sus
cscaras.)
Necesitaremos
tambinla Galerade Cacahuetes,
una
se
habitacinde superficieconociday en la cual los cacahuetes
distribuyenhomogneamente
en el suelo.EI nmero de
pero en todo
cacahuetes
variara medidaque avancemos,
que
momento,en Ia habitacinhabrmuchosmscacahuetes
monos.Adems,dado que conocemosel nmero de cacahuetes
y la superficiedel suelo,podremoscalcular<laconcentracin>
(parasermsexactos,Ia densidad)de cacahuetes
en la
habitacin.En cadacaso,los monos comienzanen una salade
esperacontigua.Paraempezarel ensayo,simplementeabrimos

La mayofa de las enzimassguenla cintica

de Michaelis-Menten
Desdehacemucho tiempo sesabeque la velocidadde una
reaccincatahtafi;Mffi'fifonti.aumentacon la concentracinde sustrato,pero de tal forma, que cadaincremento adicional de sustrato,da como resultadoun aumento menor de la velocidadde reaccin.De manerams
precisa,sepuedeobservarexperimentalmenteque la relacin entre la velocidad inicial de reaccin yy la concentracin de sustrato[S] es una hiprbole,.oo ,. ilustra
en la Figura6.8.Una propiedadimportantede estarelacinhiperblicaesquea medidaque [S]tiendehaciael infinito, y tiende hacia un valor miximo, que dependedel
nmero de molculasenzimticas por tanto, slo puede
incrementarseaadiendomsenzima.
La incapacidadpara aumentarla velocidadde reaccin ms all de un valor finito mximo a concentracio150

Gapitulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

la puertay permitimos que los ansiososmonos pasena la

Galerade Cacahuetes.

Comienza
el peladode cacahuetes
Yaestamoslistospara nuestroprimer anlisis.Comenzamos
con una concentracininicial de un cacahuetepor metro
cuadrado,y asumimosque,con estaconcentracin,un mono
yI
tarda como media9 segundosen encontrarun cacahuete
segundoen pelarlo.Estosignificaque cadamono necesita10
y por tanto puedepelarlosa una
segundospor cacahuete
por segundo.Como hay l0 monos
velocidadde 0,1 cacahuetes
para el total
en la galera,la velocidadv de peladode cacahuetes
de los monos esde 1 cacahuetepor segundo,con esta
(la cual llamanos[S] para recordar
concentracinde cacahuetes
que los cacahuetes
son el sustratode la accinde pelar).Todo
estosepuedetabular como sigue:
[S] : concentracinde cacahuetes
(cacahuetes/m2)

Tiempo requeridopor cacahuete:

Paraencontrarlo(segundo/cacahuete)

Parapelarlo (segundo/cacahuete)

Total (segundo/cacahuete)

10

Velocidadde pelado:
Por mono (cacahuete/segundo)
Total (r)

0,10
1,0

Aumenta
el nmerode cacahuetes
Paranuestrosegundoensayo,llevamosa todoslos monos de
y
vueltaa la salade espera,barremoslos desperdicios,
por
empezamosahoracon una concentracinde 3 cacahuetes

nes de sustrato cadavez ms altas,se llama saturacin.

fundamentalde las reacciones
Estaes una caracterstica
catalizadasenzimticamente.
Las reaccionescatalizadas
altas de
siemprellegan a saturacina concentraciones
no
sustrato,mientrasqueestono ocurreen lasreacciones
catalizadas.
Gran parte de nuestracomprensinde la relacinhiperblicaentre [S] y l sedebea los trabajospionerosde
dos enzimlogosalemanes,Leonor Michaelisy Maud
Menten.En 1913,postularonuna teorlageneralde la accin enzimtica,que ha resultadoserla basepara el anlisiscuantitativode casitodoslos aspectosde la cinticaenzimtica.Paraentendersu enfoque,considereuna de las
posiblesreaccionescatalizadas
enzimticamentems simples,en la cual un nico sustratoS seconvierteen un nico producto P.
S ---------+ P
Enzlma

\El

(6.s)

metro cuadrado.Como la cantidadde cacahuetes

seha
triplicado,cadamono podr encontrarun cacahuetetresveces
msrpidamenteque antes,esdecir,que el tiempo que emplean
en encontrarel cacahuete,
ahoraesde slo 3 segundos.Dado
que sesigueempleandoI segundoen pelar cadacacahuete,
el
tiempo total por cacahueteesahorade 4 segundosy la
velocidadde peladoes0,25cacahuetes
por segundoy mono, es
decr,2,5cacahuetes
por segundopara el total de los de monos.
Estogeneraotra columnade entradaspara nuestratabla de
datos:
lSl = concentracinde cacahuetes
(cacahuetes/m2)

Tiempo requeridopor cacahuete:

Paraencontrarlo(segundo/cacahuete)
Parapelarlo (segundo/cacahuete)
Total (segundo/cacahuete)

l0

Velocidadde pelado:
Por mono (cacahuete/segundo)
Total (/)

0,10
1,0

Quocuresi v y [S]contnan
aumentando?
Paradescubrirqu ocurre finalmentecon la velocidadde
peladosi Ia concentracin
de cacahuetes
en la galeraescada
vez mayor,lo nico que hay que haceresampliar la tabla de
datos,suponiendoun incrementode los valoresde [S] V
calculandola correspondientey. Por ejemplo,una
(de 3 a 9
concentracin
triplicadade cacahuetes
cacahuetes/m2)
conducea una reduccindel tiempo-necesario
por cacahuete,
que ahoraserde 2 segundos( 1 segundopara
encontrarloy otro segundoparapelarlo),con una velocidadde

Segnla hiptesisde Michaelis-Menten,la enzima E

qloecatalizaestareaccinreaccionaprimero con el sustrato
S, formando un complejoenzima-sustrato
transitorio,ES,
que sufreluegola reaccincatalticareal,paraformar la enzima libre y el productoR como semuestraen la secuencia

Er+s *

tt {ie,+r

(6.6)

donde E es la forma libre de lu .rrri-u, S es el sustrato,ES

es el complejo enzima-sustrato,P es el produ cto,y k1,k2,k3
y knson las constantesde velocidad para las reaccionesindicadas.
Comenzando con este modelo y suponiendo varias
simplificaciones, Michaelis y Menten llegaron a la siguiente relacin entre la velocidad de una reaccin catalizada
enzimticamentey la concentracin de sustrato:

y^""Is]

v:

-=------.^:
K- + LSl

(6.7)

peladode 0,5 cacahuetes

por segundoy mono, o 5 cacahuetes
por segundoen total.
Ya seempiezaa ver una tendencia.El primer triplicado
de la concentracinde cacahuetes
aumentla velocidad
2,5veces,pero el siguientetriplicadoslola dobla.Esdecir,
que Ia progresinno eslineal.Puedever estoclaramentesi
eligeuna concentracinalgo mayor de cacahuetes
y representa
v en el eje/ (escalasugerida:0- 10 cacahuetes/segundo)
y [S]
en el ejer (escalasugerida:0-100cacahuetes/m2..
Como ver,
los datosgeneranuna curvahiperblicamuy parecidaa la de
Ia Figura6.8,y si observacuidadosamente
susdatos,verpor
qula curvacontinandoblndose,a medidaque [S]
incrementa(esdecir,porquela velocidadincrementa
progresivamentemenosconforme aumentael nmero de
cacahuetes):
el tiempo de peladoesfijo y por tanto llegaa ser
un componentecadavezms importante del total del tiempo
empleadopor cacahuete
mientrasque el tiempo para
encontrarlo,escadavezmenor.Esprecisamente
estetiempo
fijo de peladoel que establece
el lmite superioren la velocidad
de procesamiento
del cacahuete,
porqueinclusosi [S] fuera
infinita (o sea,en un mundo repletode cacahuetes),
todavase
precisaraun tiempo finito de I segundoparaprocesarcada
cacahuete.
Por ltimo, ustedpuededarsecuentade que hay algo
especialen la concentracinde cacahuetes
a la cual,el tiempo
para encontrarlos,esexactamenteigual al tiempo de pelado
(staresultaserde 9 cacahuetes/m').
Esteesel punto de Ia curva
en el cual la velocidadde procesamientodel cacahuetees
exactamentela mitad de Ia velocidadmxima.De hecho,esuna
referenciatan importante en la escalade concentracin,que
ustedpodra estartentadode darleun nombre especial,sobre
todo si sellamaraMichaelisy estuvierahaciendoel mono con
enzimasen vezde con cacahuetes!

Aqu, IS] esla concentracininicial de sustrato,y esla velocidad inicial de reaccina esaconcentracinde sustrato,y
V-o y K- sonparmetroscinticosimportantesque consideraremos
enla prximaseccin.
staesla ecuacinMichaelis-Menten, la principal de la cinticaenzimtica.(El Problema6.11al finaldelcaptulole darunaoportunidadpara
deducirpor s mismo la ecuacinde Michaelis-Menten.)
de V^,y K^?
Cules ef significado
Paravalorarlasconsecuencias
de la relacinentrevy [S] y
examinarel significadodelos parmetrosV-u*y K-, podemos considerartres casosespeciales
de concentracinde
sustrato:concentracinde sustratomuy baja, concentracin de sustratomuy altay el casoespecialde [S] : K-.
Caso1: concentracin
de sustratomuybaa([S]< K,). A
concentracinde sustratomuy baja, [S] es despreciable
Cintica
enzimtica 1 5 1

s
E
.O
-c

7\/
2'max

a)

Concentracin
de sustratoLSI
K

Figura6.8 Relacinentre la velocidadde leacciny la

concentlacinde susttato, Parauna eaccin catalizada
que siguela cinticade Michaelis-Menten,la
enzimticamente,
velocidad inicial tiende hacia un lmite superior de velocidad V*u*
a medida que la concentracinde sustrato[S] tiende hacia
el infinito. La constantede Michaelis-MentenK- corresponde
a la concentracinde sustratopara la cual la reaccintiene lugar a
la mitad de la velocidadmxima.

comparada con Ia constante K. del denominador de Ia

ecuacin de Michaelis-Menten, por lo que podemos escribir

v."*[S].- v."*[s]
,,_
'
K-+lsl
K-

(6.8)

Por tanto, a concentracin de sustratomuy baja, la velocidad inicial de reaccin es ms o menos proporcional a
la concentracin de sustrato.staes,por tanto, la reginde
primer orden de la grfrcade Michaelis-Menten. Mientras
la concentracin del sustrato sea mucho ms baja que el
valor de K-, la velocidad de una reaccin catalzada enzimticamente, aumenta casi linealmente con la concentracin de sustrato.

Esto nos proporciona una definicin de V-*, uno de

los dos parmetros cinticos de la ecuacin de MichaelisMenten. V-u" es la velocidad mxima, o el valor lmite superior, al cual tiende la velocidad de reaccin inicial v
cuando la concentracindel sustrato [S] seacercaal infinito. En otras palabras,V-",es la velocidad a concentracin
saturante de sustrato.En estascondiciones,toda molcula
enzmtica est ocupada, casi todo el tiempo, en el proceso
real de la catlisis,puesto que Ia concentracin de sustrato
es tan alta que, casi alavez que se libera una molcula de
producto, llega otra molcula de sustrato al sitio activo.
Por tanto, el lmite superior de V-u, se determina por
1) el tiempo necesariopara la reaccincatalticareal ms la
liberacin subsiguientedel producto desdela superficiede
cadamolcula de enzima,y2) eInmero de molculaspresentes.Debido a que la velocidad real de la reaccin es limitada, la nica manera de que la V-", pueda aumentar es
incrementando la concentracin de la enzima. De hecho,
V-u* es linealmente proporcional a la cantidad de enzima
presente,como se muestra en la Figura 6.9.
Caso3: ([S] = l(r). Hasta el momento, hemos visto Ia razn para Ia cintica de las reaccionesde primer orden a
concentracionesde sustratobajasy para cinticasde orden
cero a concentracionesaltas.Tambin hemos formulado la
definicin para V-u*, pero todava tenemos que descubrir
el significado del segundo parmetro cintico, K-. Fjese
que con independenciade su significado, K- parecetener
algo que ver con la determinacin de cunto de baja debe
ser la concentracin de sustrato,para asegurarla cintica
de primer orden, o bien, cunto de alta debe ser,para asegurar la cintica de orden cero.De estamanera, K- parece
ser un punto de referencia en la escalade concentracin
que determina cunto de alto es alto y cunto de bajo es
bajo. Para explorar su significado de manera ms precisa,
considere el caso especial en el que [S] es exactamente

Gaso 2: Concentracin
de sustrato muy alta ([S] > ,(,). A
concentracionesde sustrato muy altas,K- se vuelve insignificante comparada con [S] en el denominador de Ia
ecuacin de Michaelis-Menten,y podremos escribir:

,' , -

V.o*[Sl K- + LSI

V.r*[Sl -r,
LSI

'max'

(6.e)

Estarelacin significa que, a concentracionesde sustrato muy altas, la velocidad de una reaccin catalizada enzimticamente, es esencialmenteindependiente de Lavariacin de la IS], volvindosecasiconstante.staconstituyela
regin de orden cero de la representacin de MichaelisMenten. Mientras la concentracin de sustrato seamucho
mayor que el valor de K*, la velocidad no seve afectadapor
los cambios en la concentracinde sustrato,permaneciendo casi constante,con valoresprximos a V^u,.

r52

Capitulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

Concentracin
de la enzima[E]
enzimtica.
Figura6.9 Relacinlinealentre V,"" y la concentracin
EI incremento iineal en la velocidad de reaccin en funcin de la
concentracin dela enztma,proporciona la basepara determinar,
experimentalmente,las concentracionesde enzima.

iguala K^. Bajoestascondiciones,

la ecuacinde Michaelis-Mentensepuedeescribircomo

Y:

y-*[s]
: v_u"[s]: v-*
K*+tsl
,rsl
2

(6.r0)

Estaecuacinnos proporciona la definicin que hemos

estadobuscando: K- es la concentracin de sustrato para
la cual la reaccin tiene lugar a la mitad de su velocidad
mxima. Esta concentracin es un valor fijo para cada enzima que cataliza una reaccin determinada bajo unas
condiciones especficasy se denomina constante de Michaelis (de ah su abreviaturaK-) en honor al enzimlogo
que dilucid su significado.La Figura 6.8 ilustra el significado de V-u,y de K-.

Porquson importantesVr.* y Kmpaalos Bilogos

celulares?
Ahora que entendemos
lo que significaDV-* y K-, debemos preguntarnos
por qu estosparmetroscinticosson
importantesparalos bilogoscelulares.
El valor de K. es
til, porquenos permitecalcularen quparteen la representacinde Michaelis-Menten
de Ia Figura6.9, estfuncionandouna enzima(suponiendo,por supuesto,que la
concentracin
de sustratoen la clulaesconocida).Podemos entonces
calculara quefraccinde Ia velocidadmxima esprobableque Ia reaccincatalizadaenzimticamente tengalugaren la clula.Adems,K- sepuedeconsiderar
como un clculoaproximadode la <calidad>
esuna enzima, en el sentidode que,cuantomsbajo esel valor K-,
ms bajo es el rango de concentracinde sustratoen el
cual la enzimaeseficaz*.Losvaloresde K- paravariasenzimasaparecen
en la Tabla6.2.
La V-"* de una reaccinparticularnos proporciona
una medidadela tasade reaccin.Realmente
sonpocaslas
enzimasque se encuentran,in vivo, con concentraciones
saturantesde sustrato,de maneraque las enzimasraramentevan a funcionarlejosde susvelocidades
miximas,
en condicionescelulares.
Sin embargo,conociendolos valores de V-",, K-, y la concentracinde sustratoen vivo,
podremosal menosestimarla velocidadprobablede la
reaccin,en dichascondiciones
celulares.

V-* tambin puede usarse para determinar otro parmetro til llamado nmero de recambio (K."J, que expresa la velocidad a la cual las molculas de sustrato se convierten en producto por una nica molcula de enzima,
cuando sta est funcionando a su mxima velocidad. La
constante (u, se expresa en unidades de tiempo inverso
(s-', por ejemplo) y se calcula como el cocienteentre V-*
y [E,], la concentracin de la enzima en moles/litro:
r
'-cat

t' /m u

(6.u)

fl !Ff l I

El nmero de recambio vara mucho entre enzimas,

como se apreciaen los ejemplos dados enlaTabla 6.2.

La glicadoblerecproca
es unaformatil
de representar
losdatoscinticos
La grfi,ca
clsicade Michaelis-Menten
de y frentea [S],tal
y como semuestraen Ia Figura6.8,esuna representacin
fiel de cmo Ia velocidaddependede la concentracin
de
sustrato,pero no es una herramientaespecialmente
til
paraladeterminacincuantitativade los parmetroscinticosclavesK^y V^u*.Suforma hiperblicahacedifcil extrapolarconprecisinel parmetrocrtico V^^*,a concentracin infinita de sustrato,y si V.u* no es conocidacon
precisin,K- no se puededeterminar.Esteproblemase
apreciaen la Figura6.9,en la que seradifcil calcularV-u*
si no estuvieraya dibujada,y sin V-u*,K- tampocopuede
sercalculadafcilmente.
Parasolucionaresteproblemay proporcionarun enfoque grfico ms til, Hans Lineweavery Dean Burk convirtieronla relacinhiperblicade la ecuacinde Michaelis-Mentenen una funcin linealinvirtiendoamboslados
de la Ecuacin6.7y simplificandola expresinresultante
con la forma de una ecuacinparauna lnearecta:
1_
v

K.+[S]
V-o[S]

K*

_,

Y-*[S]

[S]
Y.".[S]

'l
- K^ lf
* I
v^* \lsl / v_*

(6.r2)

Tabla6.2 Valores
del(, y k r, paraalgunas
enzimas
Sustrato

Nombre
de la enzima

,(' (M)

k n(s-")
1 , 4 9x 1 0 4

Acetilcolinesterasa

Acetilcolina

g x 10-s

Anidrasacarbnica

Cot

1 X 10-2

Fumarasa

Fumarato

5 X 10-

1
g

Triosafosfatoisomerasa

Gliceraldehdo3-fosfato

5 X 10-4

4,3 x 103

B-lactamasa

Bencilpenicilina

2 X 10-s

X106
xl02
Xl03

* K- se considera a menudo como una medida de la afinidad de una enzima por sus sustratos,es decir, como la constantede disociacin para ES.
Sin embargo,
es una relacin de las constantesde velocidades:K^ : (k, + k) I h, Para conocer las consecuenciasde estarelacin, vaseelPrcblema 6.I I a1final del captulo.

Cintica
enzimtica 1 5 3

La Ecuacin6.12 esla ecuacinde Lineweaver-Burk.

Cuandostaserepresentacomo Ilv frentea l/[S], como
en la Figura 6.10,la grfrcadoble recprocaresultante es
lineal,con una interseccinde IIV^^ con el ejey, otra de
-llK^,con el ejex,yunapendienteK^lV^o. (Puedeconvencersea s mismo de estosvaloresde interseccinestableciendoprimero 1/[S],igualandollv a ceroen la Ecuacin 6.12y resolviendoluegoel otro valor.) Por tanto, una
vez que seha dibujado la representacindoble recproca,
V-* se puede determinar directamentea partir del recproco de la interseccincon el ejey,y K- a partir del recproconegativode la interseccincon el ejex. Adems,la
pendientesepuedeusar para comprobarambosvalores.
De estamanera,la representacinde Lineweaver-Burk
estil porqueconfirma mediantesu linealidadquela reaccin en cuestinestsiguiendola cinticaMichaelis-Menten, y permite determinarlos parmetrosV-o y K- sin la
complicacin de una curva hiperblica. Thmbin sirve
comoun diagnsticotil en el anlisisde la inhibicinenseve afectazimtica,porquela forma de la representacin
por varias tipos diferentesde
da de forma caracterstica,
inhibidoresreversibles.
Sin embargo,la ecuacinde Lineweaver-Burktiene algunaslimitaciones.El principalproblemaesque,a menudo, seprecisauna extrapolacinelevadapara determinar
K-, por lo queel resultadopuedeserpocofiable.Adems,
los datosmscrucialesen Ia determinacinde la pendiente de la curvasuelenserlos msalejadosdel eje stosse
corresponden
conlasconcentraciones
msbajasde sustrato y los nivelesbajosde la actividad enzimtica,y por tanto, con los valoresmsinciertos.
Parasortearestasdesventajas,
sehan propuestovarias
a
la
ecuacin
de
Lineweaver-Burk.
alternativas
Una de ellas
Eadie-Hofstee,
que
es la ecuacinde
se representacomo
una grficade v/[S] frentea v. Como seilustraen la Figura 6.1I, V-o sedeterminapor la interseccin
con el ejexy
K- a partir de la pendiente.(Paraexplorarla representa-

,*,(tJ.t'*

Interseccin
.j
C O ne l e J ex = - v
Km

Interseccin
1
con el eJeY =;v^^*
1/[S]

Figura 6.10 Representacindoble reciprocade Lineweaver-Burk.

El recproco de la velocidad inicial Uv, serepresentacomo una
funcin del recproco de la concentracin de sustrato, 1/[S]. Kpuede calcularsepor la interseccincon el eje xy V-o, coneleje y.

154

Gaptulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

Interseccin
con el eje y = V^
*l K^
vV^uv
=
ra1
,K
.m

Lvl

'.m

v/[S]

La relacinv/lSl se
Figura
6.11 Representacin
de EadieHofstee.
comounafuncinde r;.K- puededeterminarse
representa
desdela
pendientey V-o por la interseccin
con el ejex.

cin de Eadie-Hofsteey otra alternativams a la representacin Lineweaver-Burk,vea el Problema 6.12. al final de

estecaptulo.)

de K^y V^u*
Unejemplode determinacin
Considereun ejemplo especficopara determinar V** y
K-, a partir de la representacin
doblerecproca,que implique a la enzimahexoquinasa,como seilustra en las Figuras6.12y 6.13.La hexoquinasa
esuna enzimaesencial
en el metabolismoenergticocelular,porque cataliza\a
primerareaccindela glucolisis,
la cualsediscutiren detalle en el Captulo 9. La hexoquinasacatalizala fosforilacin de la glucosaen el tomo de carbono6, usandoATP
comofuente,tantode fosfato,comodela energanecesaria
parala reaccin:
Glucosa+ AIP -----------)
Glucosa-6-fosfatof ADP (6.13)
Hexoquinasa

Para analizar cinticamente esta reaccin, debemos

determinar la velocidad inicial en cada una de las diversas
concentraciones de sustrato. Cuando una enzima tiene
dos sustratos,el enfoque habitual es variar la concentracin de un sustrato en un momento dado. mientras se
mantiene la del otro constante, a un nivel suficientemente
alto (cercade la saturacin), para asegurarque no llegue a
ser un factor limitante de la velocidad. Debemos tambin
tener cuidado de asegurarnosde que la determinacin de
la velocidad se haga antes de que el producto se acumule
hasta los valores que hagan que la reaccin contraria pueda tener lugar.
En el enfoque experimental que se muestra en la Figura 6.I2,la glucosa es el sustrato variable, con el AIP presente a una concentracin saturante en cada tubo. De las
nueve reaccionesde mezcla programadaspara esteexperimento, una se toma como blanco (B), porque no contiene
glucosa.Los otros ocho tubos tienen concentracionesgraduales de glucosaque van desde0,05 a0,40 mM.Unavez

que la alejende la cinticade

naspropiedades
especiales
Michaelis-Menten.
La curvahiperblicade Ia Figura6.12ilustrala necesidad de recurrir a un anlisislineal, porque no se pueden
obtener,ni V-*, ni K-, a partir de los valoresde la representacinhiperblica,aunquese dispongade los datos
para construir la curva.Sin embargo,la representacinlinealdoblerecprocade la Figura6.13,s lo permite.Para
obtenerlos datosmostradosaqu,se calcularonlos recprocosde cadavalorde [S]y v dela Figura6.12.Asi,losvamM, generanrecprocos
de20-2,5
loresde [S] de0,05-0,40
mlullt, y los valoresde v de 2,5-7,3.rmol/min,arrojanrecprocosde 0,4-0,14min/rmol.Dadoquesonvaloresrecprocos>el dato del tubo I es el ms alejadodel origen,
mientras que cadatubo sucesivo,alcanzarun valor ms
prximo al origen.
Cuandoestosdatossevan uniendo por medio de una
lnearecta,la interseccincon el eje7 coincidgcon el valor
'.
0,1min/mmol, y la del ejex" con -6,7 mluf Desdeestas
intersecciones
con los ejes,podemoscalcularque V-o :
:
1/0,1 10 prmol/miny K- : -(ll-6,7) : 0,15mM. Si
ahora volvemosa la representacinde Michaelis-Menten
de la Figura6.12,podremosver queambosvaloressonrazonablesporquepodemosimaginarfcilmenteque la representacinest creciendohiperblicamentehasta un
miximo de l0 nmollmin. Ms an, Ia grfrcaalcanzala
de sustratode 0,15
mitad de su valor a una concentracin

pwwwffiwry

I-'t

Nmerode tubo:

|--t

|-1

t-1

t-1

t-T

t-T

lBll 1ll2ll3ll4ll5ll6ll

|-1

t-1

rllsl

(mM):
[S]= lglucosal

v (pmol/min):

Bliiii

f
a

OE

-tr
'6*

,, - /t"" [S]
K* + [S]

-oOcA)

o
- 0:

0,10

0,20

0,30

0,40

(mM)
de glucosa
[S]= Concentracin
Figwa 6.L2 Estudioexpeilmentalde la cintica de la reaccinde la
hexoquinasa. Seincub una seriede tubos de ensayocon
concentracionescrecientesde glucosay una concentracin saturada
de ATR aadiendo una cantidad estndarde hexoquinasa.La
velocidad inicial de la aparicin del producto, v, se representcomo
una funcin de la concentracin del sustrato [S]. La curva es
hiperblica, acercndosea V-*, a medida que la concentracin de
sustrato escadavez mayor. Parala representacindoble recproca
derivadade estosdatos,vaselaFigura 6.13.

preparados
los tubosy mantenidosa una temperaturafa(generalmente,
25 oC),se inicia la reaccin,mevorable
diantela adicinde una cantidadfija de hexoquinasa.
La velocidadde formacindel productosepuededeterminar,bien mediantemonitorizacinespectofotomtrica continuade Ia reaccinde mezcla(suponiendoque
uno de los reactivoso productosabsorbenluz de una determinadalongitud de onda),bien permitiendoque cada
reaccinde mezclaprogreseduranteun periodode tiempo
corto y fijo, seguidode un ensayoqumico de la desaparicin del sustratoo de la acumulacindel producto.En el
casode la reaccincon hexoquinasa,seusael ltimo procedimiento,porque no hay manerade medir fotomtricamenteni los productosni los reactivos.
Como se indica en la Figura6.12,la velocidadinicial
paralos tubos 1-8 oscildesde2,5 a 7,3 .rmolde glucosa
consumidapor minuto, sin reaccinen el blanco.(Si la
glucosaconsumidahubierasidodetectada
en el blanco,los
valoresdel resto de los tubos tendran que normarlizarse
con relacina estareaccinno enzimtica.)Cuandolasvelocidadesde reaccinserepresentancomo una funcin de
la concentracinde glucosa,los ocho puntos generanla
curvahiperblicaque semuestraen Ia Figura6.12.Aunque los datosde la Figura6.12sehan corregidoparailustrar mejor el ejemplo,lo cierto esque la mayorade los datos cinticosobtenidospor estemtodo encajanbien en
una curva hiperblica,a menosque la enzimatengaalgu-

detubo:
Nmero
Itll ;l I;l Itl |;l

I,I

rlr.r$ffi|
|B
uu|8|ffiu

1/v(min/pmol)

4 0 , 1 50 , 1 80 , 2 00 , 2 5

-o

.c

0 ,2
0,

1 l(ml1l
1
=
n v* [ts]l-v*

1/[S]= 1/[glucosa](ml1z|1)
Figura6.13 Representacindoble recprocade los datos de la
hexoquinasa
de la Figura6.12. Los valoresde l/vy 1/[S] de cada
tubo de ensayose calcularon a partir de los datos de la Figura 6.12.
Despusserepresentl/v como funcin de 1/ [S]. La interseccin
con el eje7 en el punto 0,1,correspondea llV^*, por lo que V-o es
10 zmollmin. La interseccin con el eje x en elvalor '6,7 ,
correspondea -llK^,y as,{, es0,15 mM. (Note que,por falta de
espacio,no semuestran aqu algunos de los tubos representadosen
la Figura 6.12.)

Cintica
enzimtica 1 5 5

mM que esel datodel tubo 3. staes,por supuesto,

la Kde la hexoquinasapara la glucosa,generalmenteescrita
como K-,r1u.oru.
Adems, la enzima tiene una K- para el otro sustrato,
Km,Arp,quesepodra calcularvariando la concentracinde
ATP mientras se mantiene la concentracin de glucosa a
un valor alto y fijo. Curiosamente, la hexoquinasa fosforila, no slo a la glucosa,sino tambin a otras hexosas,teniendo un valor distinto para cadauna. La K^para fructosa,por ejemplo, es 1,5mM 1ocual significa que necesita10
vecesms de fructosa que de glucosa, para mantener la
reaccin a la mitad de su velocidad mixima.
Aunque ligeramente simplificada e idealizada,esta es la
manera en que los enzimlogos abordan el estudio de las
reacciones catalizadasenzimticamente. Sus anlisis son a
menudo ms complicadosy casisiempreprecisande un ordenador para calculary trazar los datos doblesrecprocosy
determinar los valores de K- y de,V-o, pero el enfoque bsico es el mismo que el ilustrado en las Figuras6.12y 6.13.

Losinhibidores
enzmticos
actanirreversible
o
fevefsiblemente
Hastaaqu,hemosasumidoquelasnicassustancias
enlas
clulasque afectana las actividadesde lasenzimasson sus
sustratos.Sin embarso,las enzimastambinestninflui'
sustratosanlodaspor productos,sustratosalternativos,
gos,drogas,toxinasy una claseimportantede reguladores
I^ ^aot 4rrtofgt-olgltrir^. Muchas de estassustancias
-tienen un efectoinhibidor en la actividad enzimtca,reduciendo(o incluso anulando)la velocidadde reaccin
con el sustratodeseado.
Ebtainliiliiii:n d la actividadde la enzimaesimportantepor variasrazones.La primeray principal,esque Ia
inhibicinenzimticadesempea
un papelvital comomcanismode controlen lasclulas.Comodiscutiremos
en el
prximo apartado,muchasenzimasse sometena regulacin por molculaspequeasespecficas
distintasde sus
sustratos.La inhibicin enzimticatambinesimportante
en la accinde drogasy toxinas,IascualesejercenfrecuenLosintementesusefectosinhibiendoenzimasespecficas.
hibidorestambinson tilespara los enzimlogoscomo
herramientaspara el estudiode los mecanismosde reaccin. Son especialmente
importantesen esteltimo caso,
los anlogosde sustratos,compuestosque se asemejanal
sustratorealpero que son qumicamenteincapaces
de IIevar a cabola reaccin.
Losinhibidorespuedensereversibles
o irreyersbles.Un
inhibidor irreversibleseune a la enzimaconvalentemente,
causandouna prdidairrevocablede la actividadcataltica.
No sorprendeque los inhibidoresirreversibles
seannormalmentetxicosparalasclulas.Losionesde metalgspesadosson,a menudo,inhibidoresirreversibles,
al igual que
suelenserlolos agentesalquilantesy los gasestxicosnerviosos.staes,de hecho,laraznde quemuchosinsectici156

Capitulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

dasy gasesnerviososseantan txicos.Estassustanciasse

a la acetiLcolinesterasa,
unen irreversiblemente
una enzima
queesfundamentalparala transmisindel impuso nervioso (vaseCaptulo 13).La inhibicin de la actividadacetilllevaa una parlisisrpidadelasfuncionesvicolinesterasa
tales por tanto, a la muerte.Uno de talesgasesnerviosos
esel di-isopropilo
el cualseune covalentemenfluorofosfafo,
te al grupo hidroxilo de una serinacrticadel sitio activode
la enzima,a la cualinactivapermanentemente.
Muchastoxinasnaturalessontambininhibidoresenzimticosirreversibles.
Por ejemplo,el alcaloidefsostigmidel habade Calabar(Nigeria),estxina,un componente
co paralos animalesporqueinhibe irreversiblemente
a la
acetilcolinesterasa.
El antibiticoDenicilinqesun inhibidor
irreversibled. tut
de la paredcelularbacteriana.
La penicilina,por tanto,es
porque
eficazen el tratamientode infecciones
bacterianas,
impide la formacinde las paredescelularesde bacterias.
Por contra,un inhibidor reversibleseune a una enzima de forma disociable,
no covalente,
de maneraqni lut
formas libres y unidas del inhibidor existenen equilibrio
las unascon las otras.Podemosreplesentartalesuniones
E + Ii-EI

(6.14)

siendoE la enzimalibrey activa,Iel inhibidor,y EI el complejo inactivo enzima-inhibidor.Evidentemente,

la fraccin de la enzimaqueestdisponibleen la clulaen forma
activa,dependede la concentracindel inhibidor y de la
estabilidad
del complejoenzima-inhibidor.
Lasdosformasmscomunesde inhibidoresreversibles
seclasificancomo inhibidorescompetitivos
e inhibidoresno
competitivos.
vo de la ertzimay por lo tanto compite directamentecon
las molculasde sustratopor el mismo sitio de la enzima
(Figura6.14a),reduciendosu actividad,-hasta
el punto de
quelossitiosactivosdelasmolculasde enzimapuedentener unidas,en culquiermomento,molculasdel inhibidor,en lugarde molculasdel sustrato.
Un inhibidor no competitivo po-r-g1lglgdq,se
une a la

aell sl4ry stlffi{iii

sgegsr"
por
ai ro.

dlsitio

"Ti;Aie
tali,n6lo?frea
fa;inelsusti
6iiin

embargoinhibe la actividadde la enzimaporque la unin

del inhibidor con su sitio especfico,reduceenormemente
o incluso suprime la actividad cataliticaen el sitio activo
(Figura6.14b)

Regulacin enzimtica
Para entender el papel de las enzimas en la funcin celular,
debemos saber que es muy infrecuente, que la mejor opcin para una clula,seapermitir funcionar a stasa velocidades indiscriminadamente altas. En su lugar, las velocidades de las reacciones catalizadas enzimticamente y las

Sustrato

..

.i.l':3l),H"
t

&\,

Productos

Productos

trb
/^\

,s,

{-t

[/

1lrra,nn,o,oo,,

-lb

r
\

Fr
E J

\=/

Ausenca
oe rormaoon
deproductos

(a) lnnibicincompetitiva.Tantoei inhibidor,como el sustrato,

se unenal sitioactivode la enzima,La uninde un inhibidor
por tanto,la
impldeque el sustratose una,inhibiendo,
actlvidadenzimtica.

(b) Inhibicinno competitiva.El inhibidory el sustratose unen

La uninde un inhibidordeformala
a sitiosdiferentes.
la probabilidadde la unindel
enzima,disminuyendo
SUSTTAIO.

(a),comolosno
competitivos
y nocompetitivos.Tantolosinhibidores
competitivos
Fgura
6.14 Modosdeaccindelosinhibidores
difieren
(E)
Los
dos
tipos
deinhibidores
actividad.
por
tanto,
su
(b)
(en
inhibiendo,
reversiblemente
a
la
enzima
rojo)
se
unen
competitivos
oor el sitiodeia enzimaal queseunen.

rutas bioqumicas de las que forman parte, deben ajustarse

continuamente, para mantenerlas sintonizadas,de forma
precisa,con las necesidadesde la clula.Un aspectoimportante de ese ajuste reside en la capacidad de la clula de
controlar las actividadesde la enzima con especificidady
precisin.
Ya hemos visto una variedad de mecanismosreguladores,incluyendo cambios en las concentracionesde sustrato
(y de producto), alteracionesen el pH, y la presenciade inhibidores. ta cgulacin que depende directamente de las
interaccionesentre lg! t@
zima, se llama regla_c_iQn
pqr el sustrato..Tal y como se
desprendede la ecuacin de Michaelis-Menten, los incrementos en la concentracin de sustrato tienen como
resultado un aumento en la velocidad de reaccin (vase
Figura 6.8). Por el contrario, los incrementos en la concentracin de producto reducen la velocidad a la cual el susla
lrato se convie
concentracin de producto es porque vtiene que ser identificado como la velocidad de reaccin inicial en Ia ecuacin de Michaelis-Menten, tal y como viene dado por la
Ecuacin 6.7. Si una cantidad significativa de producto
esfya presente,o se acumula durante el curso de Ia reaccin, la ecuacinsemelve ms compleja que ia forma simple en que la hemos considerado.)
La regulacin por el sustrato es un importante mecanismo de control en las clulas,pero no es suficiente para
la regulacin de]a mayora de las reacciones o secuencias
de reacciones.En la mayoria de las rutas, Ias enzimas se regulan tambin mediante otros mecanismos. Dos de los
ms importantes sonla regulacin alostricav la modirtca'
Estosmecanismospermiten a las clulascocin,covalente.

nectar o desconectara las enzimas o aiustar susvelocidades

de reaccin, modulando apropiadamente las actividades
de las enzimas.
Casi invariablemente,una enzima que se regula por tal
mecanismo, catalizael primer paso de una ruta de mltiples etapas. La secuencia completa se controla, incrementando o reduciendo Ia velocidad a la cual funciona la
primera etapa. Entre las rutas que se regulan as, se encuentran las de ruptura de molculas grandes (como azcares,grasaso aminocidos) y las que conducen a la sntesis de sustancias necesarias para la clula (como
aminocidosy nucletidos).Ahora discutiremosla regulacin alostricayla modificacin covalentede una manera
introductoria. con Ia intencin de volver a estosmecanismos a medida que encontremos ejemplos especficosen
captulosposteriores.

pormolculas
se regulan
alostricas
Lasenzimas
y losproductos
delosreactivos
diferentes
La regulacinolostricaes el nico mecanismo importante
de control, por el cual Ia tasa de las reaccionescatalizadas
enzimticamente,se aiustaa las necesidadescelulares.Para
entender este-modo ieguiaciOn,considerela va por la
cual una clula convierte un precursor A en un producto
final R mediante una serie de intermediarios B, C y D, en
una secuenciade reaccionescatalizadasrespectivamente,
por las enzimasE1,E2,E3y Ea:
A --;-t l

B --;-F t

C --;-L ,

D --;-+
P
rc

(6.1s)

El productoP podraser,por ejemplo,un aminocido

quela clulanecesitaparala sntesisde protenas,y A poRegulacin
enzimtica t57

l-

dra ser algn componente celular comn que sirve como

punto de partida parala secuenciade reaccin especfica
que conduce a P.
Rettoinhibicin, Si se permite progresar constantementea
la ruta 6-15, con una tasano limitada, se convertirn grandes cantidadesde A en R con los posiblesefectosadversos
de la reduccin de A o una excesivaacumulacin de P (o
ambos). Estclaro que los interesescelularesquedan mejor
satisfechoscuando la ruta no estfuncionando a su mixima velocidad o incluso a una velocidad constante,sino a
una velocidad,cuidadosamentedeterminadapor la necesidad de P. De alguna manera, las enzimas de estava deben
ser sensiblesal nivel celular del producto P,al igual que una
calderanecesitaser sensiblea la temperatura de Iashabitacionesque pretendecalentar.En el ltimo caso,un termostato proporciona el vnculo regulador necesario entre la
calderay su <producto>,el calor. En nuestro ejemplo de la
enzima,la regulacin deseadaesposible porque el producto P es un inhibidor especficode E,,la enzima que catalizalaprimera reaccin de la secuencia.
Este fenmeno es llamado retroinhibicin (o inhibicin por el producto final) y se representapor la flecha de
lneasdiscontinuas que conectael producto P con la enzima E1,en la siguienteva:

A -;-

l-

C -E- D

I'P

(6.16)

Retroinhibicinde El medianteP

De manera ms general, una retroinhibicin sucede

cadavez que un producto metablico inhibe a una de las
enzimasimplicada en la va por la cual eseproducto sesintetiza. La retroinhibicin es uno de los mecanismos ms
comnmente usadospor las clulaspara asegurarque las
actividades de las secuenciasde reaccin se aiustan a las
necesidadescelulares.
La Figura 6. l5 proporciona un ejemplo especficode tal
secuencia-la ruta de cinco pasosen la que el aminocido
isoleucinase sintetiza a partir del aminocido treonina-.
En estecaso,la primera enzima en la va, la treonina desaminasa,seregulamediante la concentracinde isoleucina
en la clula. Si se estconsumiendo isoleucina (por ejemplo, en la sntesisde protenas),su concentracinserbaja.
En estascondiciones,la treonina desaminasaest activa y
la va funcionapara producir ms isoleucina, de manera
que se satisfacela necesidadreal de esteaminocido. Si los
requerimientos de isoleucina decrecen, sta empezar a
acumularse en la clula y el incremento de su concentracin conducir a una reduccin de la actividad de la treonina desaminasay, por ende,de Ia velocidad de sntesisdel
aminocido.
Reglacin
alostdca. Cmo puede la primera enzima en
una va (por ejemplo, la enzima E, en Ia secuenciade Reac-

158

Captulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

o
^v - ^v -

I
H.+N-C-H

"l

H-C-OH

.-v;;;;:.
-'1
I
cH.

i-

lntermeoa
-l
I
Enzima2
I

-o
)Qr
.o.E

c
E

c)

1)

;vE Y
v
..

fxx
oo
-q)

' c@
o uc
lri

Intermediario
B
E n z i m a3

Intermediarlo
C

II

Enzima 4

V
lntermediarlo
D

II

E n z i m a5

o
c-oI

H -?l+ N - C - H

Producto
final
(isoleucina)

H-C-CH"

t"

CH,

t-

CH^

Figura
6.15 Regulacin
alostrica
dela actividad
enzimtica.La
rutadesntesis
delaminocido
isoleucina
a partirdetreonlna,es
un buenejemplode retroinhibicin.
Laprimeraenzimadela
secuencia,
la treorrina
deaminasa,
esinhibidaalostricamente
por la
isoleucina,
Ia cualseunea la enzimaen un sitio diferente
d,elsito
actlvo.
cin 6.16) ser sensiblea la concentracin de una sustancia
P que no es ni su sustrato ni su producto inmediato? O,
volviendo a la Figura 6.15, cmo puede la actividad de la
treonina desaminasaser sensiblea la concentracinde isoleucina, cuando su estructura difiere tanto de la de la treonina, que es improbable que seareconocida por el centro
activo de la treonina deaminasa?
Esta pregunta fue respondida por primera vez en 1963
por |acquesMonod, Jean-PierreChangeux y Frangois Ja-

cob. Aunque basadainicialmente en datos incompletos, su

modelo fue rpidamente tenido en consideraciny se desarroll hastallegar a ser la basede nuestro entendimiento
de Ia regulacin alostrica. El trmino alostricoderiva del
griego <otra forma (o estado)>,indicando, por lo tanto,
que todas las enzimascon capacidadde regulacin alostrica, pueden existir en dos estadosdiferentes. En una de las
dos formas, la enzima tiene una afinidad alta por su(s) sustrato(s), mientras que en la otra, tiene poca o ninguna afinidad. Las enzimas con estapropiedad se llaman enzimas
alostricas. Las dos fognas dife:e-ntes-deuna en-ima alq,strica qqq fcilmp-q1elntelgalyqrtlblEyst!-descha.qn
equilibrio una con otra. Obviamente, la velocidad de reaccin es alta cuando la enzima est en la forma de alta afinidadybaja,o incluso nula, cuando Ia enzima esten su forma de baja afinidad.
El que se favorezcala forma activa o inactiva de una enzima alostrica depende de la concentracin celular de la
sustanciareguladora apropiada, llamada efector alostrico.
En el casode la sntesisde isoleucina,la enzima alostricaes
la treonina desaminasay el efector alostricoes la isoleucina. De manera ms general,un efectoralostricoes una pequea molculaorgnica que regula Ia actividad de una enzim6 para Ia cual no esni el sustrato,ni eIproductoinmediato.
Un efector alostrico influye n la actividad de la enzima
unindose a una de las dos formas interconvertibles de sta,
estabilizndolaen eseestado.En otras palabras,una enzima

Sitio

",":i:?."

activo
ffsustrato

-
L \

,.--.t'oxto'

\
r't1x
al*'h
-_(jr.-?
\--,\-:/

Formade altaafinidad
de la enzima

il.--lnnroroor

arostrico

fflI

lt

alostrica puede existir en una forma compleja o simple,

dependiendo de si tiene una molcula efectora unida a ella
o no. El efector se une a la enzima debido a la presencia en
la superficie de sta de un sitio alostrico (o regulador),
que es distinto del sitio activo en el cual tiene lugar el evento cataltico. As, una caracterstica distintiva de todas las
enzimas alostricas(y otras protenas alostricas) es la presenciaen la enzima dew sitio activo al que se une el sustrato y un sitio alostricoal que se une el efector. De hecho,
algunas enzimas alostricastienen multiples sitios alostricos, cada uno capaz de reconocer un efector diferente.
Un efector puede ser, o bien un inhibidor alostrico o
bien un activador alostrico, dependiendo del efecto que
ejerza cuando se una al sitio alostrico de la enzima, es
decir, dependiendo de si la forma compleja es el estadode
baja afinidad o alta afinidad de la enzima (Figura 6,16).La
unin de un inhibidor alostricocambia el equilibrio entre
las dos formas de la enzima para favorecerel estadode baja
afinidad (Figura 6.16a).La unin de una activador alostrico, por otra parte, cambia el equilibrio a favor del estado
de alta afinidad (Figura 6.16b). En cada caso,la unin del
efector al sitio alostricoestabilizala enzima en una de sus
dos formas, incrementando o disminuyendo de esemodo
la probabilidad de unin al sustrato.
La mayora de las enzimas alostricas son protenas
grandes,multimricas y con un sitio activo o un sitio alostrico en cada subunidad. De hecho, los sitios activosy los

Sitlo
Sitio
activo
alostrico
Escasao nula
formacin
de producto
Formade bajaafinidad
de laenzima

n lk c-mg:l;;
"\l

Escasa
o nula
formacin
de producto

Formade bajaafinidad
de la enzima
(a) tnnibicinalostrica.Una enzimasusceptiblede
inhibiclnalostricaes actvaen la formalibre,la cual
tieneuna altaafinidadpor sus sustratos(S).La uninde
un inhibidoralostrico(en rojo)estabilizala enzimaen su
formade baja afinidad,resultando
en poca o nula
actividad.

productos

pl^fl"b.-.4

\-/\-:/

[\1/

Formade altaafinidad
de la enzima
(b) Activacn alostrica. Una enzimasusceptiblede
activacinalostricaes inactlvaen su formalibre,la cual
tieneuna afinidadbaja por su sustrato.La uninde un
activadoralostrico(en verde)estabilizala enzimaen su
formade baja afinidad,activandoa la enzima.

de inhibicino activacinalostticas, Una enzimaalostricaestconstituidapor una o ms subunidades

Figura6.16 Mecanismos
catalticas(C) y una o ms subunidadesreguladoras(R), cada una de las cualescon un sitio activo y un sitio alostrico,respectivamente.La
enzimaexisteen dos formas, una con alta afinidad por el sustrato ( por tanto, con una probabilidad alta de formacin de producto) y otra
con una baja afinidad (y la correspondienteprobabilidad baja de formacin de producto). La forma que adquiere una enzima es
dependientede la concentracindel efector(es)alostrico(s)para esaenzima.

Resulacin
enzimtica

L59

sitiosalostricosestnnormalmenteen diferentessubunidadesde la protena,a lasque denominamossubunidades

catalticas y subunidades reguladoras, respectivamente
(fijeseen lassubunidadesC y R de lasmolculasde la enzima que semuestranen la Figura6.16).Estosignifica,consecuentemente,
quela unin delasmolculasefectorasa los
sitiosalostricos,
no slo afectaa la forma de lassubunidadesreguladoras,
sino tambina lassubunidadescatalticas.
Lasenzimasalostricasmanfestan
interacciones
cooperativas
entresubundades
Muchasenzimasalostricasposeenuna propiedadconocida'comocooperatividad.Estosignificaque,a medidaque
los mltiples sitios catalticosunen molculasde sustrato,
la enzimasufrecambiosconformacionales,
queafectana la
afinidad de los restantessitiosde unin del sustrato.Algunasenzimasmuestrancooperatfuidad
positiva,en la cual la
unin de una molculasustratoa una subunidadcataltica
incrementala afinidadde otrassubunidadescatalticaspor
el sustrato.Otrasenzimasmuestrancooperativad
negativa,
en la cual el sustratounido a una subunidadcatalticareduce la afinidad de otros sitios catalticospor el sustrato.
El efectocooperativopermite a las clulasproducir enzimasque son ms o menossensiblesa los cambiosen la
concentracinde sustrato,lo que por otra parte,serapredeciblepor la cinticade Michaelis-Menten.La cooperatividad positivahaceque la actividad cataliticade la enzima
se incrementems rpido de lo normal a medida que la
concentracindel sustratoaumenta,mientrasque la cooperatividadnegativasignificaque la actividad enzimtica
aumentamslentamentede lo esperado.
Lasenzimastambinse puedenregularpor la adicln
o eliminacinde gruposqumcos
Muchasenzimas,adernsde la regulacinalostrica,estn
sometidasa control mediantemodificacionescovalentes.
En estamanerade regulacin,la actividadde una enzima
seve afectadapor la adicin o eliminacinde gruposqumicosespecficos.
Lasmodificacionescomunesincluyenla
adicin de gruposfosfato,gruposmetilo, gruposacetilo,o
derivadosde nucletidos.Algunasde estasmodificaciones
pueden ser reversibles,mientras que otras no. En cada
caso,el efectode la modificacinesla activacino la inactivacin de la enzima,o por lo menosla modulacin,hacia
arriba o haciaabajo,de su actividad.
Fosfodlacin/defosforilacin.
La adicin reversiblede grupos fosfatoesuna de las modificacionesms frecuentesy
mejor entendidas.La adicin de gruposfosfato,esdecir,la
fosforilacin suele producirse por transferenciade un
grupo fosfatodesdeel ATP al grupo hidroxilo de un residuo de serina,treonina o tirosina de la protena enzimtica.Lasenzimasque catalizanla fosforilacinde otrasenzimas (o de otrasprotenas)sellaman proten-quinasas.El
160

Captulo
6

Enzimas:
loscatalizadores
de lavida

procesoinverso,la defosforilacin,estcatalizadopor enzimas llamadasproten-fosfatasase implica la eliminacin de un grupo fosfatodesdela protenafosforilada.

Estaforma de regulacinesla de la glucgeno
fosforilasa,rrna enzimaque seencuentraen las clulasmusculares
(Figura6.I7).La enzimahidrolizael glucgeesquelticas
no por eliminacionessucesivas
de unidadesde glucosa,en
(Figura6.I7a). La regulacin
forma de glucosa-1-fosfato
de esta enzimadimrica se consigueen parte por la presenciaen lasclulasmuscularesde dosformasinterconvertiblesde la enzima,una forma activallamadafosforilasaay
otra inactiva,llamadafosforilasab (Figura6.17b).Cuando
senecesitahidrolizar glucgenoen las clulasmusculares,
la forma inactiva b de la enzimapasaa la forma activaa,
por adicin de un grupo fosfatoen una serinaespecfica,
en cadauna de las dos subunidadesde la fosforilasa.Esta
reaccinsecatalizapor la fosforilasaquinasayel resultado
esun cambioconformacionalen la fosforilasa.Cuandono
senecesitahidrolizar ms glucgeno,los gruposfosfatola
fosforilasaa son liminadospor la enzimafosforilasafosfatasa.(La glucgenosintasa,la enzima que aadenueyas
unidadesde glucosaa la cadenade glucgeno,respondede
forma opuesta;esinactivaen la forma fosforiladay seactiva por defosforilacin.
)
Ademsde la regulacinpor los mecanismosde fosforilacin/defosforilacin
dela Figura6.l7,la glucgenofosforilasa es tambin una enzima alostrica,que se inhibe
por glucosay ATR y seactivapor AMP. Si una sealhormonal provocala fosforilacin por tanto,activacinde la
fosforilasaen una clulamuscular,que an poseesuficiente de glucosa,sta inhibir alostricamentea la enzima,
hastaque searealmentenecesaria.
Por otra parte,las clulasmuscularesquetengannivelesbajosde glucosa,podrn
beneficiarseinmediatamentedela conversindela fosforilasaa la forma activa.
La existenciade dosnivelesde regulacinparala glucgenofosforilasa,ilustraun aspectoimportantede la regulacin enzimtica.Muchasenzimasse controlan por dos o
msmecanismosreguladores,
y de esemodo,permitena la
clularesponderadecuadamente
frentea variassituaciones.
Ruptutaprcteoltica. Un tipo diferentede activacincovalente de enzimasconsisteen la eliminacinirreversiblede
un fragmento de la cadenapolipeptdica,mediante una
enzima proteoltica (que degrada protenas) adecuada.
Estetipo de modificacin,llamado ruptura proteolltica,
esel que tiene lugar en las enzimasproteolticasdel pncreas,tripsina, quimiotripsina y carboxipeptidasa.Estas
enzimas,sintetizadasen el pncreas,son secretadas
al duodeno,en respuestaa una sealhormonal. Estasproteasas,
junto con la pepsinadel estmagoy otras enzimasproteolticassecretadaspor las clulasdel intestino, pueden
digerir casi todas las protenasingeridas,rindiendo aminocidoslibres,que sepuedenabsorberpor lasclulasepitelialesdel intestino.

cH2oH

cH2oH

CH2OH

,.#t"#'"-,{}'"OH
OH
Cadenade glucgeno

OH
Restode glucosa
del extremode la
cadenade glucgeno

t99

loo
,sii"T::::

cH,oH

cH,oH

-""rt

o-eo.+ *
OH
Glucosa-1-fosfato

Figura6.17 Regulacin
de la glucgeno
fosfodlasapu fosforilacin, (a) La
glucgeno fosforilasa esuna enzima
dimrica en las clulasmusculares,que
libera unidades de glucosaa partir del
glucgeno,en forma de glucosa-l fosfato,
utilizable por Ia clula muscular, como
fuente de energa.(b) La glucgeno
fosforilasaestregulada,en parte, por un
mecanismo de fosforilacin/defosforilacin.
La forma inactiva de la enzima, la fosforilasa
, puede ser convertida a la forma activa,
fosforilasa a,porla transferenciade grupos
fosfato desdeel AIP a una serina
determinada,en cada una de las dos
subunidadesde la enzima, La reaccin de
fosforilacin escatalizadapor la enzima
fosforilasa quinasa.La eliminacin de los
grupos fosfato por la fosforilasa fosfatasa,
devuelvea la fosforilasa a la forma b inactiva.

o -..

OH
Cadenade glucgeno
con
restode glucosa
menos

OH

(a) Reaccincatalizadapor la glucgenofosforilasa

--slN4.''xl
'ry:R
'@
OH

OH

w
Glucgeno
fosforilasab
(inactiva)

-'

qutnasa
FOSrOllasa
Fosforilasafosfatasa

H2 @

,@

Glucgeno
fosforilasaa
(activa)

(b) Regulacin
de la glucgenofosforilasa

Lasproteasas
pancreticas
no sonsintetizadas
en su forma activa;probablementeesopodra causarproblemasen
las clulasdel pncreas,la cualesdebenprotegersede sus
propiasenzimasproteolticas.En cambio,cadauna de estas
enzimasse sintetizacomo una molculaligeramentems
grandey catalticamente
inactivallamadazimgeno.
Loszimgenosdebenautodigerirseproteolticamentepara producir lasenzimasactivas.Variosde estosacontecimientos
se
muestranen la Figura6.18.Por ejemplo,la tripsinasesintetizainicialmentecomo un zimgenollamadotripsingeno. Cuando el tripsingenoalcanzael duodeno,se activa
por la eliminacinde un hexapptido(una cadenade seis
aminocidos)desdesu extremoN-terminal, por la accin
dela enteroquinasa,
una proteasade membrana,producida
por las clulasdel duodeno.La tripsina activaluego a los
otros zimgenos,medianteproteolisisespecficas.

Ribozimas: molculas de RNA

con actividad enzimtica
Antesde los primerosaosde Ladcadade 1980,sepensaba quetodaslasenzimaseranprotenas.De hecho,esaafirmacin seconsidercomo una de lasverdadesfundamentales de la biologa celular y se encontrabaen todos los
libros de texto.Los bilogoscelularesllegarona estarconvencidosde que todaslas enzimaseran protenas,porque
todaslasenzimasaisladasen los 55 aosque siguierona la
purificacin de la ureasapor Sumneren 1926,resultaron
ser protenas.Pero Ia biologa est llena de sorpresas,y
ahora sabemosque la afirmacin necesitaser revisada,
para incluir a los catalizadores
constituidospor ARN y denominadosribozimas.
Ribozimas:
molculas
de RNAconactividad
enzimtica 1 6 1

Procarboxioeotidasa
/ i ^^o^u+ui ,v, a^ ,\ ,
\il

-->

Carboxioeotidasa
(activa)

para que
del nucletidoguanosina- erannecesarias
tuvieralugar la reaccin.Paranuestrasorpresa,
no era
necesario
el extractonuclearquecontenalasenzimas.
Nosvimosobligadosa concluirque,o Ia actividad
enzimticaproyenade unaprotenaunida tan
estrechamente
al RNAqueramosincapaces
de
separarlade 1,o queel RNAestabacatalizandosu
propioayuste.Dado lo arraigadaqueestabala ideade
quetodosloscatalizadores
biolgicos
eranprotenas,Ia
hiptesisde Ia catlisispor RNAno erafcil de aceptar.

Pesea todo, Ios experimentosadicionalesapuntaron

haciala conclusininicial:la eliminacinde un intrn de
4 13-nucletidosdel pre-rRNA de Tetrahymenaestcatalizadaporla propiamolculade pre-rRNA,siendo,por tanto, un ejemplode autocatalisis.
La Figura6.19muestrael procesode escisin,el cual
Clulas
implica
O el plegamientode la molculade pre-RNArno
epiteliales
arstadaparaformar un bucle,@ el ataquepor un grupo
hidroxilo de una de guanosinaque acta como cofactor,
Figura6.18 Activacinde los zimgenospancreticospor
ptoteolisis. Lasproteasaspancreticas
@ cortey ayustede la molculade rRNA con la liberacin
son sintetizadas
y
secretadasen el intestino deigado,como precursoresinactivos
del intrn, y @ rotura adicionalautocataltica
del intrn
llamadoszimgenos.La procarboxipeptidasa,
el tripsingenoy el
paralaeliminacinde 19nucletidosms.El intrn comquimiotripsingenoson zimgenos.La activacindel tripsingeno
pletamenteprocesado
esuna ribozima,capazde acortaro
a tripsina requiere la eliminacin de un segmentohexapeptdico
gar
gonucletidos
pequeos.
alar
oli
por la enteroquinasa,
una enzimaduodenalde membrana.La
Sepodra argumentarque la molculade rRNA de la
tripsina activaluego a otros zimgenos,por ruptura proteoltica.La
procarboxipeptidasa
esactivadaen una proteolisisnica, mientras
Figura6.19 no satisface
la definicinde catalizador,
que
que la activacinde quimiotripsingenoesun procesoalgo ms
suponeque el propio cafalizadorno sedebealterardurancomplicado,en dos etapas,cuyosdetallesno semuestranaqu.
te el procesode reaccin.Sin embargo,dosaosmstarde
sedescubriotro catalizador
constituidopor RNA en el lade
Sydney
Altman
en
Ia UniversidaddeYale,que
boratorio
La primera evidencialleg en 1981,cuandoThomas
La
supera
esta
restriccin.
enzima,
llamadaribonucleasa
P,
Cechy suscolegasde la Universidadde Coloradodescu(pre-tRNAs)
rompe
precursores
de
RNA
de
transferencia
brieron una excepcinaparentea la regla(todaslasenzipara producir molculasde RNA funcionales.(En este
mas son protenas)).
Estabanestudiandoel arster de un
segmentointerno de un precursorde un RNA especfico caso,se eliminaun segmentoterminal de la molculade
(pre-rRNA) in Tetrahymena
thermophila,un organismo RNA, en lugar de un intrn, como ocurraen el procesamientodel pre-rRNA.)
eucariotaunicelular.(Como veremosen el Captulo21,
Sesabadesdehacatiempo que la ribonucleasaP tena
muchosde los RNAsde eucariotas
requierenque seelimiproteicoy otro de RNA,y sesuponaqueel
un
componente
nen uno o mssegmentos
internosllamadosintrones,ansitio
activo
estaba
en el componenteproteico.Sin embargo,
tesde quelleguena serfuncionalesen Ia clula.El proceso
y
Altman
sus
colaboradores
demostraroninequvocamente,
de corteimplicala escisindel intrn y la unin de lasdos
mediante
el
aislamiento
de
los componentesy su estudio
partesde la molculaoriginalen el sitio de escisin.)
En el
que eI componenteproteicoaisladoeracompor separado,
cursode su trabajo,los investigadores
hicieronla observapletamenteinactivo,mientrasque el componenteribonucin notable de que el procesoiaparentementeavanzaba
cleotdicosi eracapazde catalizarlarupturaespecfica
delos
sin la presenciade protenas!Describiendosu intento de
precursoresdel IRNR y, adems,no se alterabadurante el
estudiarla escisinde intronesin vitro. Ceahescribi:
proceso.Adems,la reaccincatalizadamedianteRNA seguala cinticade Michaelis-Menten,
una evidenciamsde
pequeas
Resultquealgunasdelasmolculas
que erael RNA quien estabaactuandocomo una autntica
-principalmente ionesde magnesio
y variasformas
enzima.(El componenteproteicoaumentaIa actividadpero
no esnecesarioparala unin del sustratoo su ruptura.)
t
N. del Z: siguiendo la recomendacin de Bilogos Moleculares hispanohaLa trascendencia
de estoshallazgos
sereconocicon el
blantes,traduciremos como ayusteeI trmino ingls splicing que hace refePremioNobel que Cechy Altman compartieronen 1989
rencia al procesamientode1RNA, consistenteen el corte y empalme de cierpor susdescubrimientos
de lasribozimas.A partir de estos
tos sectoresdel mismo. Segrin el DRAI, a)'uste es un trmino nutico que
refiere a la (costura o unin de dos caboso.
iniciales,sehan descritomsejemplosde
descubrimientos
t

Quimiotripsinoeno-P
(inactiva
t

r62

Quimiotripsina
(acriva)

Captulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

5' r

UpCpUpApApApPre-rRNA

s,-

r
GPUPAPAP

upcpupoooooo\

GpupApAp- 3,

,.)fo
S'oGon0A0n01
g'rUpCpUor

3'

3'

Figura6.19 La autocatlisisy el ayuste del intn del Pre-rRNAde

Tetrahymena. La molcula precursora del RNA ribosomal (pre-rRNA)
de Tetrahymenacontiene un intrn que es capazde catalizarsu propia
escisin.La escisiny el a)'usteocurren en cuatro etapas.O Formacin
de un bucle en la regin intrnica de la molcula de pre-rRNA. @ El
bucle del intrn es atacadopor un grupo hidroxilo de un nucletido de
guanina libre, pG, que funciona como cofactor.@ La molcula de prerRNA esrota en el extremo 5'terminal del segmentodel intrn, con Ia
adicin de G al intrn. La uridina en el extremo 3' de otro fragmento de
rRNA atacaluego al extremo 3'del intrn, liberndolo y empalmando
las dos piezasde rRNA para formar el rRNA procesado.@ El intrn
sufre una subsiguienteruPtura autocataltica,eliminando otros 19
nucletidos en dos etapas,primero libera un segmentode 15
nucletidos y luego otro de 4.

\6PUPAPAP-3'

5'PGPAPAPAP-Go"
eliminado
lntrn

3'

lo
t
l\

nucletidos
N,u
t\
\
o nucletidos
I
procesado
Intrn

esel ejemplode un paso

ribozimas.De especialrelevancia
en los ribosomas.stos
protenas
de
la
snlesis
en
esencial
como enzimasmuy grandes,que
puedenserconsiderados
peptldicos,aadiendo
iatalizanla formacindelos enlaces
ctecente(vase
polipeptdica
cadena
a
una
aminocidos
ribosomal
subunidad
especficamente,la
4.8).
Ms
Figura
que
peptidil
transferasa,
Ia
actividad
de
el
lugar
grandees
peptdico.
del
enlace
formacin
catalizala
Durantemucho tiempo seha supuestoque el sitio activo de la peptidil transferasaestabalocalizadoen una de las
molculasproteicasde la subunidadgrande.Sin embargo,
de la Universidadde SanHarry Noller y suscolaboradores
su
atencinen una de las
centraron
ta Cruz en California,
a la demostracin,
llev
les
trabajo
molculasderRNA. Este
de por
la
eliminacin
pesar
de
que
a
publicadaen 1992,de
ribosomal
la
subunidad
protena
de
io -.not el 95o/ode la
de
grandede una bacteria,el rRNA mantenaintactael 800/o
Adems,la
la
subunidad.
de
la actividadpeptidil transferasa
por el tratamientocon ribonucleasa'
actividaddesapareca
una enzimaque degradaRNA,pero no seafectabapor proteinasaK, una enzima que degradaprotenas(de hecho,
stafue uno de los agentesusadospara eliminar lasprotenas de la subunidad).As pues,qued demostradoque la

de un pasocruresponsable
actividadpeptidil transferasa,
ribozima.
cial en la sntesisde protenas,esuna
Aunque muchos bilogos se quedaron inicialmente
asombradospor el descubrimientode las ribozomas'no
hay razn para pensarque las molculasde RNA no puedan ser capacesde funcionar como enzimas.Al igual que
las protenas,las molculasde RNA puedenadoptar una
estructuraterciariacompleja,que es la condicinprevia
paralafuncin catalizadoraen amboscasos.
El descubrimientode las ribozomasha cambiadoconla manerade pensarsobreel orilen de la
siderablemente
vida en la tierra. Durante muchosaos,los cientficoshaban pensadoque las primeras macromolculascatalizadorasdebanhabersido polmerosde aminocidos,semejantesa las protenas.Sin embargo,estasuposicinchoca
con la dificultad de que no hay una forma sencillade explicar cmo una protelnaprimitiva puedeportar informacin o replicarsepor s misma,que son dos atributosvitales bsicos.Sin embargo,si el primer catalizadorfuera
RNA en vez de molculasproteicas,es conceptualmente
ms fcil de asumir un sistemade molculasde RNA que
actesirviendo,tanto a la catlisis,como a la replicacin,
pudiendo transferir la informacin a otras generaciones.
enzimtica 163
de RNAconactividad
molculas
Ribozimas:

Cerrando el crculo, volvemos al tema

planteadoen la introduccin de estecaptulo -a saber,que la termodinmica
nos permite valorarla factibilidadde una
reaccin,pero no dice nada sobrela probabilidadde que esareaccinocurra realmente en Ia clula,a una velocidadapreciable-. Serequiereun catalizador,
que
siempre es una enzima en los sistemas
biolgicos,para asegurarque secumplen
los requerimientosde energa de activacny que sealcanzael estadode transicin. Todaslas enzimasproteicasson
polmerosde aminocidoscon una secuencia programada genticamente,y
son sensiblesa la temperaturay el pH.
Thmbin son exquisitamenteespecficas,
paraun nicosustratoo paraun conjunto de compuestosestrechamente
relacionados.El procesocatalticotiene lugar en
el sitio activo, un grupo crtico de aminocidosresponsables
de la unin y la activacin del sustratoy de la autnticareaccinqumica.La unin de un sustrato
apropiadoen el sitio de activo,induce un
acoplamientoms.eficazentre la enzima
y el sustrato,facilitando de esemodo Ia
activacindel sustrato.
Las reaccionescatalizadasenzimtcamentetienenlugar a travsde un intermediario enzima-sustrato.Muchas
enzimassiguenIa cinticade MichaelisMenten, caracterizadapor una relacin
hiperblicaentre la velocidadde reaccin inicial v y la concentracindel

sustratoIS].El lmite superiorde la velocidad se denominaV^*, y Ia concentracin de sustratonecesariapara alcanzar

la mitad de la velocidadmxima,se expresa como la constantede Michaelis,
(. La relacinhiperblicaenrrey y [S]
se puede convertir en lineal, mediante
una ecuacindoble recproca,en la que
V-* I K- sepuedendeterminar grficamente o analizaren un ordenador.
La actividad enzimtcaestinfluida,
no slopor la disponibilidaddel sustrato,
sinotambinpor los productos,suStratos
alternativos,sustratosanlogos,drogasy
toxinas,muchasde las cualestienen un
efectoinhibidor. La inhibicin puedeser
reversible
o irreversible,
implicandoestas
ltimas la formacin de unionescovalentesdel inhibidor a la superficiede la enzima. Por otra parte, un inhibidor reversible seune a la enzimade forma reversible.
ya seaen el sitio activo (inhibicin competitiva) o en otro lugar de la superficie
de la enzima(inhibicinno competitiva).
Las enzimasse pueden regular para
ajustarsusnivelesde actividada lasnecesidadesde la clula.La regulacinpor el
sustratosebasaen los efectosque tienen
Ias concentraciones
del sustratoy de los
productos,en la velocidadde reaccin.
Los mecanismosde control adicionales
incluyenla regulacinalostricay lasmodificacionescovalentes.
La mayorade las
enzimasreguladasalostricamente
catalizan el primer pasoen una secuencia
de

reaccionesy son protenasmultimricas

con variassubunidadescatalticasy varias
subunidadesreguladoras.Cadauna de Ia
subunidadescatalticastieneun sitio activo que reconocea los sustratosy a los
productos,mientras que cadasubunidad
reguladoratiene uno o ms sitios alostricos,que reconocena lasmolculasefectoras especficas.
Un determinadoefector
puedeinhibir o activarla enzima,dependiendode culde lasformasde la enzima
estfavorecidapor la unin del efector.
Las modificacionescovalentesms comunessonla fosforilaciny la desfosforilacin,como ocurre,por ejemploen la
glucgenofosforilasa,y la ruptura proteoltica,como ocurre en la activacinde
los zimgenosde las enzimasproteolticassecretadas
por el pncreas.
Aunque durante mucho tiempo se
pensque todaslasenzimaseranprotenas,ahorareconocemos
las propiedades
catalizadorasde ciertas molculas de
RNA llamadasribozimas.stasincluyen
algunasmolculasde rRNA, que son capacesde catalizarIa eliminacin de sus
propiosintrones,de eliminarlos componentesRNA de enzimasribonucleoproteicasy quizsinclusopartedel nN de
ribosomasya ensamblados.
El descubrimiento de las ribozomasha cambiadoel
pensamientosobreel origen de la vida en
la tierra porque las molculasde RNA, a
diferenciade lasprotenas,son capaces
de
replicarse
a s mismas.

Problemas
Losproblemas
demayor
dificultad
estn
marcados
conun ..
6,1 La necesidadde las enzimas.Nos encontramosahoraen
disposicinde apreciarla diferenciaentrela factibilidad
termodinmicade una reacciny la probabilidadde que
realmentevayaa tenerlugar.
(a) Muchasreaccionesque son posiblestermodinmicamente
no ocurrena una velocidadapreciable,debido a las
necesidades
energticas
de los reactivospara superarel
estadode transicin.Qusignificaestoen trminos
moleculares?
(b) Una forma de cumplir esterequerimientoesmediante
aportacinde calor,que en algunoscasos,slo esprecisoal
inicio. D un ejemplo,y expliquelo que significaen
trminos moleculares.

r64

Captulo
6 Enzrmas:
loscatalizadores
delavjda

(c)

Una solucin alternativa es reducir Ia energa de activacin.

Qu significa en trminos moleculares decir que un
cataLzador disminuye la energa de activacin de una
reaccin?

(d) Los qumicos orgnicos usan a menudo en sus reacciones,

catalizadores inorgnicos tales como el nquel, el platino, o
ciertos cationes,mientras que las clulasusan protenas
denominadas enzimas.Culesson las ventalasdel uso de
las enzimas?Ylas desventajas?
6,2 Energa de activacin. Como se muestra en la Reaccin
6.2, el perxido de hidrgeno,H2O2, se descomponeen HrO y
Or. La energa de activacin, E, para la reaccin no cataljzadaa
20'C es de 18 kcal/mol. La reaccin se puede catalizarpor iones
de hierro (E : i3 kcal/mol) o por Ia enzima catalasa
(4:
7 kcal/mol).

(a) Dibuje un diagramade energade activacinpara esta

reaccinbajo condicionesde catalizaciny no catalizacin,
y expliquelo que significaque la energade activacinbaje
de 18a 13kcal/mol,cuandoseusanionesde hierroy de 18
a7 kcallmol en presenciade Ia catalasa.
(b) Sugieradospropiedadesde la catalasaque hagande ella un
catalizadorintracelularms apropiadoque los ionesde
hierro.
(c) Sugierauna forma msde acelerarla tasade la
descomposicindel perxido de hidrgeno.Essteun
medio apropiadode incrementarlasvelocidadesde
reaccindentro de lasclulas?Porqu o por qu no?
(d) Recuerdedel Captulo4 que Ia catalasapresenteen las
clulaseucariotasselocalizadentro de los peroxisomas,
junto con cualquierade lasdiversasenzimasgeneradoras
de HrOr. Debido a la toxicidaddel perxido de hidrgeno,
expliqueen trminosde cinticaenzimticapor qu es
de HrO, y Ia
ventajosotenera lasenzimasgeneradoras
catalasajuntas dentro de un mismo orgnulo.
La
6.3 Incremento de la velocidadmediantela catsis.
descomposicin
de HrO, en HrO y O, mostradaen la Reaccin
por un catalizador
inorgnico(iones
6.2sepuedecatalizar,bien
por
Esta
reaccin
tienelugar
bien
la
enzima
catalasa.
de hierro),
de ionesde hierro,
unas30.000vecesmsrpidaen presencia
veces
perohasta100.000.000
quecuandono haycatalizador,
de la catalasa,
una enzimaquecontiene
msrpidaen presencia
hierro. Contestea lassiguientespreguntas,asumiendoque I .rg
descompone
una cantidaddadade HrO, en 1
de catalasa
sellevana caboen
minuto a 25 'C y quetodaslasreacciones
condiciones
estriles.
(a) Cuntotiemposenecesitara
paradescomponer
la misma
de una cantidadde ionesde
cantidadde HrO, en presencia
hierro equivalenteal contenidoen hierro de I rg de
catalasa?
(b) Cuntotardariaen descomponerse
la misma cantidadde
de un catalizador?
HrO, en ausencia
(c) Expliquecmo stosilustranclculosla necesidad
de los
y la superioridadde lasenzimassobrelos
catalizadores
inorgnicos.
catalizadores
6.4 Efectosde la temperaturay el pH. La Figura6.4 muestra
las actividadesde las enzimasen funcin de la temperaturay el
pH. En general,la actividadde una enzimaespecficaesmsalta
del ambienteen
a la temperaturay el pH que son caractersticos
el cual funciona normalmente.
(a) Expliquelasformasde lascurvasde la Figura6.4 en basea
los factoresqumicoso ffsicosmsdeterminantesen la
actividadde la enzima.
(b) Paracadaenzimade la Figura6.4,sugieraIa ventaja
adaptativade tenerel perfil de actividadenzimtica
mostradoen la figura.
(c) Algunasenzimastienenun perfil de pH plano,esdecir,
Ia misma actividadsobreun rango
tienen esencialmente
ampliode pH. Cmopodraexplicarestaobservacin?
6,5 Cintica de Michaelis-Menten.La Figura6.20representa
Ia grcade Michaelis-Mentende una enzimatpica,con una
velocidadinicial de reaccinexpresadacomo una funcin de la
concentracinde sustrato.En la curva seidentificantres

E
.o
.g
c

(s

'
!

a)

Concentracin
de sustratofSl

6.20 Anlisis
de la representacin
de Michaelis-Menten.
Figura
6.5.
Vese
el Problema
regiones,mediantelasletrasA, B y C. Paracadauna de las
afirmacionesque siguen,indique con una nica letra cul de las
3 regionesde la curvaseajustamejor a la afirmacin.
(a) El sitio activode una molculade enzimaestocupadopor
el sustratoIa mayorparte del tiempo.
(b) El sitio activode una molculade enzimaestlibre la
mayorpartedel tiempo.
(c) El rangode concentracindel sustratoen el cual la mayora
de lasenzimasfuncionan en lasclulasnormales.
(d) Incluya el punto (K^, V^u*12).
(e) La velocidadde la reaccinestlimitada,principalmente,
por el nmerode molculasde enzimapresentes.
(0 La velocidadde la reaccinestlimitada,principalmente,
por el nmerode molculasde sustratopresentes.
cafalizala
6.6 Cintica enzimtica.La enzimaB-galactosidasa
hidrlisisdel disacridolactosaen suscomDonentes
monosacridos:
#
Lactosa+ H2O
-

Glucosaf Galactosa

(6.L7)

d-salactosidasa

parala lactosa,
ParadeterminarV^*y K- de Ia B-galactosidasa
seincubla mismacantidadde enzima(1 lg por tubo) con una
de lactosa,en condiciones
en lasque
seriede concentraciones
de productoerandespreciables.
La
lasconcentraciones
velocidadde la reaccininicial sedetermin para cada
concentracinde lactosa,valorandola cantidadde este
disacridoque permaneceal final del ensayo.Seobtuvieronlos
datos:
siguientes
Concentracin
de lactosa
(mM)

Velocidad
del consumo
de lactosa
(rmollmin)

10,0

16,7

25,0

33,3

i6

40,0

)z

44,4

(a) Por qu es necesario especificar que las concentraciones de

producto eran insignificantes durante el curso de la
reaccin?
(b) Represente v (velocidad del consumo de lactosa) frente a
[S] (concentracin de lactosa).Porqu cuando se doblala

Problemas 165

concentracinde lactosa,el incrementode la velocidades

siempremenor que el doble?
(c) CalculeIlvy ll[S] para cadaentradaen la tabla de datosy
tracellv frentel/[S].
(d) DetermineK- y V-* a partir de Ia representacin
doble recproca.
(e) En la misma grficade la parte b, representelos resultados
que esperarasi cadatubo contuvieraslo 0,5 .rgde
enzima.Expliqueel grfico.
6.7 Ms cinticaenzimtica.La galactosaformada en la
Reaccin6.17sepuedefosforilar mediantela transferenciade
un grupo fosfatodesdeel AIfl reaccinque escatalizadapor la
enzimagalactoquinasa:
Galactosa* AIP ----------------+
Galactosa-l-fosfato* ADP (6.1S)
galacquinasa

Supongaque ha aisladola enzimagalactoquinasa

y ha
determinadosusparmetroscinticos,variandola
concentracinde galactosaen presenciade una concentracin
de AIP constantey alta (esdecir,en saturacin).La
representacin
doble recproca(Lineweaver-Burk)de los datos
semuestraen la Figura6.21.

Estareaccines,como descubriremosen el Captulo 8, bsica

en el transportedel dixido de carbonoen los glbulosrojos,
desdelos tejidosdel cuerpoa los pulmones.La anhidrasa
carbnicatiene un pesomolecularde 30.000y un nmero de
recambio(valorft.",)de I X 106sec-r.SupongaqueseIe da
1 mL de una solucinque contiene2,0 pgde anhidrasa
carbnicapura.
(a) Aqu velocidad(milimoles de CO, consumidospor
segundo)tendrlugar estareaccinen condiciones
ptimas?
(b) Suponiendonormalesla temperaturay la presin,cules
el consumode CO, en mL por segundo?
6.9 Inhibidores devarias clases.Conteste,razonandoen cada
caso,culesde lassiguientesafirmacionesson verdaderas(V) o
falsas(F).
(a) El di-isopropil fluorofosfatoseune covalentemente
al
grupo hidroxilo del residuode un aminocidoespecfico
de Ia enzimaproblema,siendo,por tanto, casicon toda
certeza,un efectoralostrico.
(b) La enzimahexoquinasaseinhibe por su propio producto,
la glucosa-6-fostato
y, por tanto,esun ejemplode
retroinhibicin.

(a) Culesla K. de la galactosidasa,

para la galactosa,
en estas
condicionesde experimentacin?
Qunos dice la Kacercade la enzima?

(c) La glucgenosintasa,como la glucgenofosforilasa,es

activaen la forma fosforiladae inactivaen la forma
defosforilada.

(b) Culesla V-o de la enzimaen estascondicionesde

experimentacin?
Qunos dicela V-o acercade la
enzima?

(d) Esmuy probableque una enzimaque estsujetaa la

activacinalostrica,catalicela primera reaccinde una
va biosinttica.

(c) Supongaque repite el experimento,pero variandoIa

concentracinde ATP y manteniendoa la galactosaen
nivelesaltosy constantes.
Asumiendoque lasdems
condiciones
semantienencomoantes,esperara
obtenerla
misma V-o que en el apartadob? Porqu o por qu no?

(e) Si los investigadores

sostienenque una enzimaesactivada
alostricamente
por el compuestoA e inhibida
alostricamente
por el compuestoB, una de estas
afirmacionesdebeestarequivocada.

(d) En el experimentodescritoen el apartadoc, el valor de K*

esmuy diferenteal del apartadob. Puedeexplicarpor qu?
6.8 El nmero de recambio.La anhidrasacarbnicacatalza
Ia hidratacinreversibledel dixido de carbonopara formar
ion bicarbonato:
CO2+ H2O;-

HCO; + H-

-'"

E
r1>

o2

10 20 30 40
(mM-1)
1/lgalactosa]
Figura6.21 Representacin
doblereciproca
de la enzima
galactoquinasa.Vese
el Problema6.7.

t66

La tioredoxinaesuna proteina reguladoracon dos grupos

sulfhidrilo (-SH) que sepuedenoxidar de manera
reversible,formando un enlacedisulfuro (-S-S-).
Probablementeafectea la actividadde una enzima
a la que seuna,reduciendolos puentesdisulfurode la
enzimaa grupossulfhidrilo,haciendoque la enzima
experimenteun cambio conformacionalque conduzcaa
su activacin.
.6.10 Relevanciabiolgica. Expliquela relevanciabiolgica
de cadauna de lassiguientesobservaciones
relativaa la
regulacinde enzimas.
(a) Cuandoustednecesitaun aportede energa,lashormonas
adrenalinay glucagnsesecretanhaciasu torrente
sanguneoy sedirigen a susclulasmusculares,donde
inician una cascadade reaccionesque conducena la
fosforilacinde la forma inactiva (b) delaglucosa
fosforilasa,que pasaa Ia forma activa(a).

A
o
C

(6.1e)

(0

Capitulo
6 Enzimas:
loscatalizadores
delavida

(b) Incluso en la forma a, la glucosafosforilasade lasclulas

musculares,seinhibe alostricamente
por glucosao AIP,
en concentraciones
elevadas.
(c) Su pncreassintetizay secretaIa enzimaproteoltica
carboxipeptidasa
en forma de precursorinactivo,llamado
procarboxipeptidasa,
que seactivacomo resultadode la
proteolisis,mediantetripsina,en el duodeno.

.6.11 Consecuencias
de la ecuacinde Michaelis-Menten.
ParaIa reaccincatalizadaporla enzimaen la cual el sustratoS
6.5),la velocidad
seconvierteen un producto P (vaseReaccin
sepuededefinir como la desaparicindel sustratoo la aparicin
del producto por unidad de tiempo:

dtst

dlPl

y:----:---:-:+--elt
rlt

(6.20)

Partiendode estadefiniciny restringindonosa Ia etapainicial

de reaccin,cuando [P] esprcticamentecero,derivela
(vaselaEcuacin6.7).Los
ecuacinde Michaelis-Menten
siguientesapartadospuedenayudarleen su derivacin:
(a) ComienceexpresandoIa ecuacinde la velocidadpara
dlS)ldt, dlp)ldt,y dlBS)ldter trminos de concentraciones
y velocidadesconstantes.
(b) Supongaun estadoestacionarioen el cual el complejo
a la misma
de la Reaccin6.6desaparece
enzima-sustrato
velocidada la que seforma, de forma que Ia tasanetadel
cambio,d[ES]ldt, escero.
(c) Desecuentade que la cantidadtotal de la enzimapresente,
E, esla sumade la enzimalibre Emsla queesten el
complejoenzimaES:E : Er + ES.

(d) En su debido momento, se dar cuenta de que la V-* y la

K- se pueden definir como sigue:

v-*:

kr[E]

*^:

h* ot
k1

(6.2t)

.6.1l La ecuacinde Michaelis-Mentenen forma lineal.

de Lineweaver-Burk(Figura6.10)'
Ademsde la representacin
a vecesseempleanotrasdos formaslinealesde la ecuacinde
Michaelis-Menten.La representacinde Eadie-Hofsteeesuna
grficade v/ [ S] frentea v (vaseFigura6.I I ), y la representacin
de Hanes-Woolfenfrentaa [S]/vya [S].
(a) Demuestre,en amboscasos,que la ecuacinque se
representagrficamentesepuedeobtenera partir Ia
ecuacinde Michaelis-Menten,con una simple
manipulacinaritmtica.
(b) En amboscasos,indique cmo sepuedendeterminarK- y
V-o desdeel grficoresultante.
de Hanes-Woolf,sealandolos
(c) Hagauna representacin
puntos de intersecciny la pendientecomo en las
de Lineweaver-Burky de Eadie-Hofstee
representaciones
(vanseFiguras
sugerirpor qula
6.10y 6.11).Puede
Hanes-Woolfesla mssatisfactoria,desde
representacin
de lastres?
el punto de vista estadstico,

Bibliografa recomendada
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