SERIES DE IDENTIFICACIN BIOQUIMICA

UREA-CITRATO-LISINA-SIM-TSI

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O-P.PD-20
Versin 1

SERIES DE IDENTIFICACIN BIOQUMICA

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C
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R
A
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L
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S
I
N
A

S
I
M

T
S
I

Composicin del medio en g/L:

Peptona de carne
1.0
Dextrosa
1.0
Cloruro de Sodio
5.0
Fosfato potsico
2.0
Rojo Fenol
0,012
Agar-agar
12.0
PROCEDIMIENTO: Tomar una colonia del medio e
inocularla en la superficie del agar urea inclinado. Incubar
a 37 C. Cuando hay hidrlisis de la urea se forma
amonaco y el medio cambia a un color rojo prpura
(reaccin positiva).
AGAR CITRATO DE SIMONS:

SOPORTE
PLASTICO

PLASTICO

VIDRIO

AGAR BASE UREA:

Esta base es usada en la preparacin de medios para la
diferenciacin de microorganismos, especialmente las
Enterobacterias con base a la produccin de ureasa.
El agar base urea se recomienda para la preparacin del
medio de Christensen para la deteccin rpida de la
actividad uresica del Proteus. El medio se puede utilizar
para la deteccin de la hidrlisis de la urea por otras
enterobacterias menos fuertes formadores de ureasa
como por ejemplo Klebsiella, Enterobacter, ciertos
micrococos entre otros, aunque el periodo de incubacin
debera ser mas larga (24 horas).
Tambin es adecuado para la diferenciacin de Yersinia
pseudotuberculosa (ureasa positiva) frente a Yersinia
Pstis (urea-negativa).
Forma de Actuacin: La urea es hidrolizada por la
enzima ureasa, formando dixido de carbono y amonaco.
Este ltimo proporciona reaccin alcalina al medio, que
puede comprobarse por el viraje del amarillo al rojo
prpura del indicador de pH rojo fenol contenido en el
medio.

El agar citrato de Simons es usado para la diferenciacin

de Enterobacterias y otras bacterias gram negativas sobre
la base de la utilizacin del citrato como fuente de
carbono.
Forma de Actuacin: Microorganismos capaces de
utilizar fosfato de amonio y citrato de sodio como nica
fuente de nitrgeno y carbono respectivamente crecen en
este medio produciendo una reaccin alcalina y
evidenciando un cambio de color por la presencia de un
indicador azul de bromotimol cambiando el medio de
verde a azul.
Composicin del medio en g/L:
Sulfato de Magnesio 0.2
Fosfato de Amonio
0.2
Fosfato amnico de Sodio 0,8
Citrato de Sodio, tribsico 2.0
Cloruro de Sodio
5.0
Azul de Bromotimol
0.08
Agar-agar
15.0
pH final
7.0 +- 0.2
PROCEDIMIENTO:
Inocule el medio inclinado
ligeramente haciendo una estra en la superficie, incube a
37 grados centgrados por 24 horas.
Una reaccin positiva (o sea utilizacin de citrato) produce
una reaccin alcalina y el medio cambia de un color verde
al azul; mientras que en una reaccin negativa el medio
permanece del color verde inicial.
Escherichia coli, incluidas las productoras de enteritis
infantiles, as como especies de Shiguella, Yersinia y
Edwarsiellla, no crecen en el medio, mientras que
Enterobacter,
Citrobacter,
Klebsiella,
Proteus
y
Providencia, excepto Morganella morgani y Klebsiella
rhinoescleromatis, utilizan el citrato y producen el
caracterstico color azul.

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AGAR LISINA HIERRO

Agar
para
la
demostracin
simultanea
de
lisinadecarboxilasa (LD) y de la formacin de cido
sulfrico (H2S) para la identificacin de Enterobacterias,
sobre todo de Salmonellas, incluidas aquellas
fermentadoras de lactosa, S Arizona.
Forma de Actuacin: La lisina puede ser decarboxilada
por microorganismos LD-positivos, que la transforman en
la amina cadaverina. Esto produce un viraje al violeta del
indicador de pH prpura de Bromocresol. Puesto que la
decarboxilacin solo tiene lugar en medio cido, (pH
inferior a 6), es necesario que se produzca previamente la
acidificacin del medio de cultivo, por fermentacin de la
glucosa. Por este motivo, este medio de cultivo solo
puede usarse para la diferenciacin de cultivos
fermentadores de la glucosa.
Los microorganismos LD-negativos, pero fermentadores
de la glucosa, producen un viraje al amarillo de la
totalidad del medio de cultivo. La incubacin prolongada
puede ocasionar una alcalinizacin de la zona de la
superficie del medio de cultivo y en consecuencia, se
produce un viraje al violeta.
La formacin de H2S produce una coloracin negra
debida al sulfuro de hierro producido.

El Proteus y Providencia, desaminan la lisina,

produciendo una pendiente roja sobre un fondo cido.
MEDIO DE SIM:
Este es un medio usado para la diferenciacin de bacilos
entricos con base a la produccin de cido sulfhdrico,
indol y la movilidad.
Los ingredientes del medio de SIM permiten la
identificacin de tres actividades por las cuales las
bacterias entricas pueden ser diferenciadas.
Forma de Actuacin: Las bacterias reductoras de sulfato
producen sulfhdrico el cual reacciona con el amonio
ferroso y se produce un sulfato ferroso (H2S) que se
forma como un precipitado oscuro a lo largo de la lnea de
inoculacin. El medio contiene caseina rica en triptona la
cual es usada por ciertos microorganismos quienes
finalmente producen indol, el cual es revelado por
reactivos como el de Kovac. La movilidad es visible ya
que es un medio semislido y siendo positivo el
crecimiento se ve por fuera de la lnea de siembra, en
forma de turbidez alrededor del canal de siembra. La no
mobilidad
se
caracteriza
por
el
crecimiento
exclusivamente a lo largo de dicho canal.
La
demostracin de indol se efecta mediante el reactivo
segn Kovacs. La formacin de indol da lugar a una
coloracin rojo-prpura de la capa de reactivo.

Composicin del medio en g/L:

Peptona de carne
5.0
Extracto de levadura
3.0
Glucosa
1.0
L-lisina
10.0
Citrato Frrico amnico
0.5
Prpura de Bromocresol 0.02
Agar-agar
12.5
pH final 6.7 +- 0.2
PROCEDIMIENTO: El medio se inocula con una aguja
recta pinchando hasta la base del fondo y sembrando en
estra la superficie de la pendiente o bisel. Los tapones
de los tubos se deben dejar en forma floja para que
prevalezcan las condiciones aerbicas sobre la pendiente.
Se incuba a 37 C durante 18-24 horas.
Los cultivos que producen rpidamente una lisina
decarboxilasa originan una reaccin alcalina (color
prpura) en todo el medio. Los organismos que no
decarboxilan la lisina producen una pendiente alcalina y
un fondo cido (color amarillo).
Los cultivos que producen sulfhdrico originan un
ennegrecimiento intenso en el medio.

Composicin del medio en g/L:

Triptona
20.0
Peptona
6.1
Sulfato amnico ferroso
0.2
Tiosulfato sdico
0.2
Agar-agar
3.5
pH final: 7.3 +- 0.2
PROCEDIMIENTO: Tomar una colonia a inocular e
introducir el asa recta en el tubo hasta aproximadamente
1/3 de la profundidad del medio. El medio se incuba a 37
C 18-24 horas y se observa para ver la movilidad, la
produccin de sulfhdrico y finalmente la produccin de
indol a partir del triptofano.
-

Prueba para produccin de indol: se adicionan

3 o 4 gotas (200 uL) de reactivo de Kovac al tubo
y se observa la produccin de un anillo de color
rojo (positivo).

AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO (TSI):

Este agar es usado para la diferenciacin de bacilos gram
negativos entricos basado en la fermentacin de

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carbohidratos (sacarosa, lactosa y dextrosa) y la

produccin de cido sulfhdrico.
En microorganismos como el Proteus y Citrobacter que
son fermentadores de la sacarosa, se puede enmascarar
el indicador de sulfhdrico en el medio.
Forma de Actuacin: El agar TSI contiene tres azcares:
dextrosa, lactosa y sacarosa; rojo de fenol para detectar la
fermentacin de estos carbohidratos, y sulfato ferroso
para detectar la produccin de cido sulfhdrico.
La degradacin o fermentacin del azcar con formacin
de cido se manifiesta por un cambio de color del
indicador Rojo de fenol que vira de anaranjado-rojizo a
amarillo, o por un viraje a rojo intenso en caso de
alcalinizacin.
El tiosulfato es reducido por algunos grmenes a cido
sulfhdrico, el cual reacciona con la sal frrica produciendo
sulfuro de hierro de color negro.
Composicin del medio en g/L:
Caseina Pancreatica:
10.0
Peptido de tejido animal
10.0
Cloruro de Sodio
5.0
Lactosa
10.0
Sucruso
10.0
Dextrosa
1.0
Sulfato de amonio ferroso
0.2
Thiosulfato de sodio
0.2
Rojo fenol
0.025
Agar-agar
13.0
pH final: 7.3 +- 0.2
PROCEDIMIENTO: Tomar una colonia de la superficie
del medio y se inocula en el tubo de TSI as: se extiende
sobre la pendiente del medio y se pica en el fondo del
tubo, se incuba a 37 C y se lee despus de 18-24 horas:
Amarillo: Acido
Sin cambio de color: Alcalino
Rojo: alcalino
Formacin de burbujas: Produccin de gas
Ennegrecimiento de la superficie del medio:
Produccin de cido Sulfhdrico.
Conservar a 2- 8 C.
Atemperar antes del uso.