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INTRUDUCCIN:
El DNA en general es un biopolmero enorme
que existe en su forma superenrrollada al estar
in vivo. Un plsmido es generalmente una
pequea molcula de DNA circular cuyo nmero
de copias se controla de manera independiente
de los mecanismos reguladores que afectan la
replicacin de DNA cromosmico. Hablar de
DNA circular indica que no tiene extremos libres
para enlazar; los crculos pueden ser grandes o
pequeos y pueden estar formados por una sola
cadena o por 2 cadenas entrelazadas en una
doble hlice.
Una importante aplicacin del DNA plasmdico
es la formacin de DNA recombinante que se
usa en las reas de ingeniera gentica, para la
introduccin de genes ajenos a una especie en
el DNA de la misma. El plsmido se combina
con el DNA que se quiere agregar y se introduce
en la clula hospedadora, y se realiza un
proceso de seleccin mediante un antibitico al
cual la pieza de DNA es resistente; de este
modo las clulas con nueva pieza gnica se
replicarn preferentemente.
Uno de los mtodos de separacin ms usados
y efectivos que existen es la electroforesis, cuyo
fundamento es el uso de un campo elctrico
generado a travs de corriente directa. Un
campo elctrico es una magnitud vectorial
medible definida como la fuerza que puede
ejercer una carga a una distancia determinada.
En una electroforesis se produce una
separacin de sustancias por su distinta afinidad
con un soporte y la polarizabilidad de la
molcula que adquiere carga. Esto indica
tambin que una sustancia se separar de
acuerdo a su tamao (polarizabilidad).
OBJETIVO:
Aislar el DNA plasmdico pUC18 (mini-prep) y
utilizar una electroforesis en gel de agarosa del
plsmido obtenido y observar la forma obtenida.
RESULTADOS:
Nuestra muestra corresponde al nmero 7 de
izquierda a derecha:
Interpretacin:
El pozo #7 muestra una clara mancha a una
distancia considerable del pozo, y tambin se
puede observar una lnea muy fina cerca del
punto de aplicacin. En el pozo se puede ver
adems otra lnea muy fina; el carril de
corrimiento se ve negro, sin un color blanco
difuminado sobre este, como puede apreciarse
Adems una lnea y una mancha en el punto
de aplicacin con un brillo intenso. Se observa
tambin una lnea casi mancha gruesa cerca del
punto de aplicacin.
Seccin: 3
Electroforesis:
Algunos aspectos importantes:
Estructura de bromuro de etidio y
representacin de accin intercalante:
Agar:
En su estado natural, el agar-agar se presenta
como un carbohidrato estructural de la pared
celular de las algas agarofitas, donde existe en
la forma de sales de calcio o de una mixtura de
sales de calcio y magnesio. Es una mixtura
compleja de polisacridos compuesta por dos
fracciones principales: la agarosa, un polmero
neutro, y la agaropectina, un polmero con carga
sulfatado. La agarosa, fraccin gelificante, es
una molcula lineal neutra, esencialmente libre
Anlisis de la Tcnica:
Obtenido el crecimiento bacteriano
agregamos 100 de la solucion 1 (Tris EDTArNasa A) que es un regulador de pH (Tris) y
secuetra los cationes divalentes (EDTA)
resuspendiendo en vortex, en este momendto
se encuentran las bacterias aun vivas agregar
200 de la solucion 2 (SDS 1% NaOH .2N) que
nos ayuda a solubilizar las membranas
manteniendo la identidad de estas mientras que
neutraliza las cargas mezclandolo con cuidado
para no romper el DNA tambien logramos hacer
que las macromoleculas puedan precipitar
excepto el DNA,( las bacterias ya no
encontraran vivas despues de este paso), ahora
agregamos 150 de la solucion 3 (acetate de
potasio) que nos ayuda a que mediante su alta
fuerza ionica precipite macromoleculas
(proteinas,polisacaridos) depues cetrifugamos 5
minutos a 13000 rpm para poder hacer que el
precipitado contenga alas macromoleculas no
deseadas, ahora separamos el sobrenadante
que contiene el DNA a otro tubo eppendorf y
agregamos 500 de la solucion 4 (isopropanol)
y mezclamos suavemente, mediante la
BIBLIOGRAFA: