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MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa Ambiental II

Manacorda A. M., lvarez A. S., Pezzullo S. D. & Cuadros D. P.

Ao 2013

Captulo 8
MICROORGANISMOS DE LA CORROSIN
Objetivo
Interpretar las tcnicas de anlisis bacteriolgico utilizadas para determinar la
presencia y recuento de bacterias causantes de corrosin de caeras.
Introduccin
La corrosin es un fenmeno de destruccin de los materiales de construccin, principalmente
de los metales, causado por un proceso de xido-reduccin.
Existen muchas causas de corrosin, una de ellas es la corrosin microbiolgica la cual ocurre
como resultado directo o indirecto de la actividad de los organismos vivos. Los organismos
productores de corrosin pueden ser hongos, algas y bacterias.
El grupo de microorganismos llamados colectivamente bacterias del hierro y del azufre puede
caracterizarse por su capacidad para transformar y depositar cantidades significativas de hierro
o azufre, en formas de cieno. Tanto las bacterias precipitantes del hierro como las reductoras
de sulfato presentan aspectos morfolgicos y fisiolgicos caractersticos que permiten la
diferenciacin entre ellas.
La importancia del estudio de las bacterias precipitantes del hierro se debe al potencial de
provocar suciedad y cegamiento de los pozos de agua y sistemas de distribucin. En el caso
de las bacterias reductoras de sulfato su inters de estudio se debe a la produccin de aguas
herrumbrosas, tuberculizacin de los ductos, adems de malos olores y sabores, espumas,
coloraciones y aumentos en la turbidez de las aguas.
La corrosin microbiolgica puede ser representada por los siguientes tipos de fenmeno:
1. Produccin de metabolitos cidos. Los microorganismos pueden excretar cidos
orgnicos y/o inorgnicos.
2. Corrosin debida a la produccin de celdas de aireacin diferencial. Estas celdas se
presentan cuando el metal recibe ms oxgeno en unas zonas que en otras causando
la oxidacin de las zonas menos aireadas.
3. Destruccin de cubiertas protectoras sobre el metal, que son metabolizadas por los
microorganismos.
4. Consumo de las sustancias inhibidoras de la corrosin y facilitando de esa forma la
accin de iones agresivos presentes en el medio o producidos por el metabolismo
bacteriano.
El agua siempre contiene bacterias, an cuando su suministro se haga a travs de modernas
redes de distribucin. Existen ciertas bacterias que pueden soportar dosis muy fuertes de cloro,
como es el caso de las sulfatorreductoras, que no sufren alteraciones al estar en contacto con
concentraciones de 20 ppm de dicho elemento.
El agua destinada al uso domstico contiene menor cantidad de estos microorganismos que las
aguas de extraccin industrial, sin embargo no es extrao encontrar bacterias de corrosin en
agua potable, las cuales pueden provenir de sitios de bombeo o de las tuberas mismas en el
momento de las instalaciones de stas.
Las bacterias sulfatorreductoras (BRS) pertenecen a la Familia Spirillaceae, cuyo representante
es Desulfovibrio desulfuricans. Se encuentran bajo las capas de herrumbre que se hallan en
contacto con el metal debido a que son anaerobias obligadas. Estas bacterias transforman los
sulfatos en cido sulfhdrico, el cual se combinar con las sales ferrosas para dar un sulfuro
negro.

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Las bacterias precipitantes del hierro son capaces de metabolizar el hierro reducido existente
en el hbitat acutico y depositarlo en forma de xido frrico sobre secreciones mucilaginosas.
Estos microorganismos que obtienen su energa de la oxidacin del hierro son: Gallionella,
Thiobacillus ferrooxidans y Ferrobacillus ferrooxidans.
Materiales
Para esta tcnica se utilizan los caldos marca MAG

Referencias de los nombre de medio de cultivos:


BAT: bacterias aerobias totales
BRS: bacterias reductoras de sulfato
BRS-10: medio para recuento de bacterias reductoras de sulfato
BRS-10-B: medio, con clavo, para recuento de bacterias reductoras de sulfato
BRS-20: medio para deteccin de presencia o ausencia de bacterias reductoras de sulfato
CHA: Citrato hierro amoniacal
CHA-10: medio para recuento de bacterias precipitantes del hierro
CHA-20: medio para deteccin de presencia o ausencia de bacterias precipitantes del hierro
BAnT: bacterias anaerobias totales
1. Para anlisis de agua de pozo
6 tubos con caldo BAT : caldo rojo de fenol glucosa modificado diluido 1:2.
1 tubo con caldo BRS-20 : caldo de Postgate modificado.
1 tubo con caldo CHA-20: caldo citrato de hierro amoniacal, de aspecto amarillo-verdoso
2. Para anlisis de agua de inyeccin
7 tubos con caldo BAT
7 tubos con caldo BRS-10-B
3. Para anlisis de torre de enfriamiento
7 tubos con caldo BAT
1 tubo con caldo BRS-20
1 tubo con caldo CHA-20
Procedimiento
Recuento de bacterias hetertrofas aerobias totales (BAT)
a) Se utiliza la tcnica de dilucin por extensin (Fig. 1) que consiste en inocular una serie de
frascos que contienen 9 ml de medio de cultivo.
b) Se obtiene 1 ml de la muestra utilizando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de
capacidad. Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y
se retira 1 ml que se inocula en el 2 frasco.
c) Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco 2 previamente agitado y se inocula el
frasco 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.
d) Si no existe informacin previa de la cantidad de bacterias por ml de la muestra suelen
sembrarse 6 frascos.
e) La manifestacin del crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo
que se compara por transparencia con un frasco sin inocular.
f) Las muestras son incubadas a 35 C durante 7 das.
g) Los resultados se expresan como bacterias/ml
Por ejemplo: si los frascos inoculados presentan turbidez hasta el frasco 4, inclusive, el
3
4
resultado se expresa como: 10 - 10 bact/ml.
Recuento de bacterias anaerobias totales (BAnT)

Miguel ngel Gariboglio


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Se utiliza la misma tcnica descripta en el punto anterior. La positividad se manifiesta por


turbidez y la expresin de los resultados es igual.
Recuento de bacterias reductoras de sulfatos (BRS)
Las muestras son inoculadas en caldos BRS-10
Se utiliza la misma tcnica descripta para BAT, como as tambin la expresin de resultados.
Excepto la incubacin, los frascos sembrados en BRS son incubados a 35 C durante 21 das.
La positividad se manifiesta por ennegrecimiento del caldo del frasco (ver Fig. 2).
Los problemas ms comunes en la interpretacin del crecimiento bacteriano cuando se utiliza
la tcnica de dilucin por extensin son los siguientes:
Todos los frascos muestran crecimiento: Si esto sucede no es posible estimar la
6.
poblacin, si se trata de una serie de 6 tubos inoculados se debe informar >/=10 bact/ml.
Para el prximo anlisis de esta muestra habra que considerar el empleo de ms
diluciones.
Un frasco no denota crecimiento y el resto s: algunas veces uno de los frascos
permanece sin cambios mientras que los ubicados anterior y posteriormente en la serie
inoculada muestran positividad. Es decir hay un salto en los tubos positivos. Ese salto
debe ser anotado y se informar la concentracin bacteriana correspondiente al frasco de
mayor numeracin que result positivo.
Frascos que se manifiestan positivos inmediatamente: si el primer frasco con un
medio de cultivo para BRS se ennegrece dentro de las dos horas de haber sido inoculado
con 1 ml de agua muestra, este ennegrecimiento no es producto del crecimiento bacteriano
dentro del frasco; el color negro es debido al SFe proveniente de altos niveles de SH 2 en la
muestra de agua que reaccion con el Fe disuelto en el caldo de cultivo: en este caso se
puede seguir de dos formas:
1. Proceder con las diluciones seriadas. Los frascos de 2 a 6 permanecern generalmente
sin cambios.
2. Colectar por lo menos 50 ml de agua en un frasco estril y agregarle una tableta de AlkaSeltzer que puede despojar la mayora del SH2 de la muestra. Cuando la tableta cesa de
burbujear, retirar 1 ml de agua con la jeringa estril y llevar a cabo el procedimiento
habitual de las diluciones seriadas.

Fig.1: Tcnica de recuento de bacterias por el mtodo de dilucin por extensin.

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Fig 2: Recuento de bacterias reductoras de sulfatos (medio BRS-10-B) de agua de inyeccin,


Los frascos de las diluciones 1, 2 y 3 presentan crecimiento, suyo resultado del anlisis sera:
2
3
10 -10 bacterias BRS/ml.
Prueba de presencia / ausencia (P/A) para las BRS
Se utiliza el caldo de Postgate modificado (BRS-20)
a) La siembra una vez rotulado el frasco, consiste en inyectar con una jeringa descartable
estril 10 ml de la muestra (ver Fig. 3).
b) Luego se incuba a 35 C durante 21 das, efectuando lecturas diarias.
c) La positividad se manifiesta con un franco ennegrecimiento del lquido que puede
observarse como un precipitado negro (SFe) o como un espejado negro en las paredes del
frasco.
d) El resultado se expresa como P = presencia o A = ausencia.
Prueba de presencia / ausencia (P/A) para las bacterias precipitantes del hierro
Se utiliza el caldo Citrato hierro amoniacal.
La siembra inoculacin y lectura son iguales a lo expresado para BRS.
La positividad en este caso se manifiesta como un precipitado color ocre en el fondo del frasco
con un lquido sobrenadante incoloro, tambin por la formacin de una pelcula color ocre en la
superficie del caldo o por un color rojizo en la totalidad del caldo, que, originalmente es de color
amarillo verdoso. Puede suceder, si existe en la muestra BRS en cantidades suficientes, que
el caldo CHA-20 se ennegrezca totalmente dando un aspecto de un caldo BRS-20 positivo.

Fig. 3: Prueba presencia / ausencia para detectar BRS y bacterias precipitantes del hierro

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CARACTERSTICAS DE LOS CALDOS DE CULTIVO


Denominacin
Tcnica

BAT

Caldo MAG
(MFT-10)

BRS-20

CHA-20

BRS-10-B
(con clavo)

CHA-10

Aplicacin
Recuento de
bacterias
aerobias totales
(BAT)
Recuento de
bacterias
anaerobias
totales (BAnT)
Deteccin de
bacterias
reductoras de
sulfatos (BRS)
Deteccin de
bacterias
precipitantes no
oxidantes del
hierro
Recuento de
bacterias
reductoras de
sulfatos (BRS)
Deteccin de
bacterias
precipitantes
del hierro

Cambios por accin


bacteriana

Temperatura
de incubacin

Tiempo de
incubacin

Turbidez

35 C

24-72 hs.

Turbidez

35 C

24-72 hs.

Ennegrecimiento

35 C

21 das

Precipitado de hidrxido
frrico.
Pelcula sobrenadante
pardo-rojiza. Caldo
enrojecido.

35 C

21 das

Ennegrecimiento

35 C

21 das

Precipitado de hidrxido
frrico.
Pelcula sobrenadante
pardo-rojiza. Caldo
enrojecido

35 C

21 das

Bibliografa
American Public Health Association (APHA), American Water Works Association & Water
Pollution Control Federation. 1989. Standard Methods for the examination of Water and
Wastewater. 17th ed. APHA, Washington, D.C.USA. Part 9000.
Gariboglio M. A., Smith S.A.,1993. Corrosin e incrustacin microbiolgica en sistemas de
captacin y conduccin de agua, aspectos tericos y aplicados. Editores CFI. Buenos Aires.
Argentina.
Manual
de
Laboratorio,
Microbiologa
http://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia

Aplicada.

UAM.

Web-site: