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MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa Ambiental II

Manacorda A. M., lvarez A. S., Pezzullo S. D. & Cuadros D. P.

Captulo 9

Ao 2014

DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO)

Objetivo

Verificar la DBO de una muestra por el mtodo de electrodo de membrana.

Introduccin
La DBO es una inferencia de la cantidad de materia orgnica presente en un efluente, medida por
medio del consumo de oxgeno por parte de la flora microbiana de la muestra durante el proceso
de degradacin.
La determinacin de la DBO es una prueba emprica que se realiza para determinar los
requerimientos relativos de oxgeno de las aguas residuales, efluentes y contaminadas.
La prueba mide el oxgeno utilizado, durante un perodo de incubacin especifico, para la
degradacin bioqumica de la materia orgnica (requerimiento de carbono), y el oxgeno utilizado
para oxidar materia orgnica, como los sulfuros e in ferroso. Puede medir tambin el oxgeno
utilizado para oxidar las formas reducidas del nitrgeno (requerimiento de nitrgeno) a menos que
se impida la oxidacin por medio de un inhibidor.

Tcnica para el anlisis


Existen muchas variaciones de la determinacin de la demanda de oxgeno basadas en los
perodos de incubacin, entre las cuales se encuentra la DBO5 (de 5 das) que ser la que
describiremos en el presente trabajo prctico.
El mtodo consiste en llenar un frasco, con cierre hermtico y tamao especificado, con la
muestra hasta rebosar. Incubarlo a 20 C durante 5 das, asegurndose de que la muestra tenga
bacterias, nutrientes y oxgeno suficiente. El oxgeno disuelto (OD) se mide antes y despus de la
incubacin y la DBO se calcula por medio de la diferencia de la medicin inicial y final.

Procedimiento
Muestra
Es conveniente realizar el anlisis inmediatamente despus de tomada la muestra. De ser
imposible (tiempo mayor a 2 horas) se enfriar hasta temperatura prxima a la congelacin (4
C), durante el menor tiempo posible. Antes de analizar la muestra calentarla hasta los 20 C.
Instrumental
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Frascos de DBO, capacidad 250-300 cm .(ver Fig. 1)


Electrodo de membrana (oxmetro).
Estufa a 20 C sin luz (para evitar la produccin de O2 por fotosntesis).
Reactivos
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Solucin de tampn fosfato.


Solucin de sulfato de magnesio.
Solucin de cloruro de calcio.
Solucin de cloruro frrico.
Solucin para neutralizacin (cido sulfrico/hidrxido sdico).
Solucin de sulfito sdico.

Sinonimia: Requerimiento de oxgeno bioqumico (ROB)

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Ao 2014

7. Inhibidor de la nitrificacin, 2-cloro-6-(tricloro metil) piridina (TCMP).


8. Solucin de glucosa-cido glutmico.
9. Solucin de cloruro de amonio.
Preparacin del agua de dilucin (AD)
Se toma 1 ml de tampn fosfato, sulfato de magnesio, cloruro frrico y cloruro de calcio y se diluye
en 1 lt. de agua destilada. Antes de preparar el AD debe ponerse a temperatura de 20 C.
Satrese con OD agitando en la botella parcialmente llena o aireando con aire filtrado libre de
materia orgnica. Alternativamente, almacnese en frascos taponados con algodn durante el
tiempo suficiente para que el agua se sature de OD. Debe protegerse la calidad del agua
utilizando material de vidrio, tubos o frascos limpios.
Muestras control
1. Control del AD: se realiza para comprobar su calidad. La captacin de OD en 5 das a 20
C no debe ser mayor de 0,1- 0,2 mg/l.
2. Control de glucosa-cido glutmico: debido a que la prueba de la DBO es un bioensayo
sus resultados pueden verse influidos en gran medida por la presencia de sustancias
txicas o por el uso de un material de siembre de baja calidad.
Siembra
Es necesario tener presente una poblacin de microorganismos capaces de oxidar materia
orgnica biodegradable de la muestra. Algunas muestras no contienen una poblacin microbiana
suficiente, en cuyos casos habr que sembrar microorganismos en el agua de dilucin.
Determinar la DBO del material de siembra como para cualquier otra muestra, simiente control. A
partir de este valor y de uno conocido de la dilucin del material de siembra (en el agua de
dilucin) se determina la captacin de OD de la simiente.
Pretratamiento de la muestra
1. Las muestras con alcalinidad custica o acidez debern neutralizarse a un pH entre 6,5 y
7,5. La cantidad de reactivo aadido no debe diluir la muestra ms del 0,5 por 100.
2. Si es posible se deben evitar las muestras que contengan cloro residual. En caso de que
haya debe eliminarse. En algunas muestras le cloro desaparecer en el plazo de 1 a 2
horas despus de su exposicin a la luz. Esto suele ocurrir durante el transporte o
manipulacin de la muestra. Para las muestras en que el cloro no se disipa en un corto
plazo se deber aadir solucin de de sulfito sdico.
3. En las muestras supersaturadas de OD (contienen mas de 9 mg de OD/ lt. a 20 C) debe
reducirse el OD hasta la saturacin a 20 C calentando la muestra aproximadamente a
esa temperatura en frascos parcialmente llenos mientras se agitan con fuerza o se airean
con aire limpio.
4. la temperatura debe ajustarse a 20 C +/- 1 C antes de hacer las diluciones,
5. Si se desea inhibir la nitrificacin debern aadirse 3 mg a cada frasco de 300 ml antes
de taparlos. Entre las muestras que requieren inhibicin de la nitrificacin se incluyen los
efluentes tratados biolgicamente, las muestras sembradas con efluentes tratados
biolgicamente y las aguas fluviales.
Tcnica de dilucin
Se deben hacer varias diluciones de la muestra preparada para obtener captacin de OD en un
intervalo de 1 a 2 mg/l despus de 5 das. Aadir la cantidad deseada de muestra en el frasco de
DBO, luego llenar los frascos con agua de dilucin, sembrada si es necesario, de forma que la
insercin del tapn desplace todo el aire sin dejar burbujas. Mezclarla bien evitando la entrada de
aire.
Determinacin de OD inicial (ODi)
Determinar el OD inmediatamente despus de realizar las diluciones con el electrodo, en todas
las diluciones de las muestras, los blancos de dilucin y, cuando sea apropiado, los controles.
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Blancos de agua de dilucin


Utilizar un blanco de agua de dilucin como un control aproximado de la calidad del agua de
dilucin no sembrada y de la limpieza de los frascos de incubacin. Incubar junta a los dems
frascos. Determnese el OD inicial y final. La captacin de OD no deber ser mayor de 0,1-0,2
mg/l.
Incubacin
Incubar los frascos sellados a 20 C +/- 1 C durante 5 das.
Determinacin de OD final (ODf)
Pasados los 5 das, determinar el OD nuevamente con el electrodo en todas las las muestras
incubadas.
Clculos:
Cuando el AD no est sembrada:

DBO5 mg/l = D1 D2/ P

Cuando el AD est sembrada:

DBO5 mg/l = (D1 D2 ) - (B1 B2 ) f / P

Cuando:
D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente despus de su preparacin, mg/l.
D2 = OD de la muestra diluida despus de 5 das de incubacin a 20 C, mg/l.
P = fraccin volumtrica decimal de la muestra utilizada.
B1= OD del control de simiente antes de la incubacin, mg/l.
B2 =OD del control de simiente despus de la incubacin, mg/l.
f =proporcin de la simiente de la muestra diluida con respecto a la del control de simiente = (%
de simiente en la muestra diluida) / (% de simiente en el control de simiente).
Si se inhibe la nitrificacin expresar los resultados como DBOC 5

Fig. 1: Frasco de DBO de 300 ml.

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Bibliografa
American Public Health Association (APHA), American Water Works Association & Water Pollution
th
Control Federation. 1989. Standard Methods for the examination of Water and Wastewater. 17
ed. APHA, Washington, D.C.USA. Part 9000.