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Programa para el Mejoramiento de la Evaluacin de Forrajes y Alimentos


Centro de Investigacin y Servicios en Nutricin Animal (CISNA)
Facultad de Agronoma - Universidad de Buenos Aires

Programa para el mejoramiento de la


evaluacin de forrajes y alimentos
- PROMEFA -

Gua de procedimientos analticos


Ao 2009

G. Jaurena
M. Wawrzkiewicz

Centro de Investigacin y Servicios en Nutricin Animal (CISNA)


Departamento de Produccin Animal
Facultad de Agronoma Universidad de Buenos Aires
Tel: 4524-8005; cisna1@ agro.uba.ar

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Tabla de contenidos

TABLA DE CONTENIDOS ....................................................................................................... 2


PROTOCOLOS ANALTICOS ............................................................................................ 4
FIBRA DETERGENTE NEUTRO (AFDN) V1 .......................................................................... 4
CENIZAS 600C 2 H V1.................................................................................................. 7
CENIZAS 550C 4 H V1.................................................................................................. 9
CENIZAS 450C 12 H V1.............................................................................................. 11
FIBRA DETERGENTE CIDO (FDA) V1.............................................................................. 13
RECUPERACIN DE N (AOAC, 1996 4.2.09) V5............................................................ 16
LIGNINA EN DETERGENTE CIDO CON CIDO SULFURICO (LDAAS) V2 ................................ 20
MATERIA SECA PARCIAL V2............................................................................................. 23
MATERIA SECA TOTAL V2 ............................................................................................... 25
NITRGENO TOTAL (KJELDAHL) V1.................................................................................. 27
PROTOCOLOS MISCELNEOS ...................................................................................... 32
CORRECCIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS POR MATERIA SECA TOTAL V2................... 32
MODELOS PROPUESTOS PARA PREDECIR LA CONCENTRACIN ENERGTICA DE LOS ALIMENTOS
PARA RUMIANTES V1 ...................................................................................................... 34

PROCESAMIENTO ESTADSTICO DE LOS RESULTADOS ANALTICOS V2.................................. 38

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Protocolos Analticos
Fibra Detergente Neutro (aFDN) v1
Por equipo ANKOM (Ankom, 2005)

Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos.
Principios
El residuo fibroso (aFDN, fundamentalmente celulosa, hemicelulosa y lignina) se
obtiene luego de disolver con detergente neutro los compuestos presentes en el contenido
celular junto con sustancias de la pared celular de fcil digestin (e.g. pectinas).
Precauciones

La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionando


evitar la inhalacin y el contacto con la piel.

El Lauril sulfato de sodio puede irritar las mucosas. Usar mscara y guantes cuando est
manipulando este reactivo y trabajar bajo campana.

Asegurarse que el tamao de partcula de la muestra sea de 1 mm.

Equipamiento

Balanza analtica.

Estufa de secado regulada a 105C.

Aparato de digestin- ANKON 200/220 FIBER ANALYZER

Bolsitas filtrantes- ANKON Technology F57 filter bags

Desecador.

Sellador por calor.

Reactivos
a) Solucin de detergente neutro (SDN): por cada litro de solucin

30,0 g de lauril sulfato de sodio (SDS),

18.61 g de EDTA-sodio dihidratado;

6,81 g de tetraborato de sodio decahidratado;

4,56 g de fosfato dibsico de sodio anhidro;

10 ml de trietilengilcol,

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Agitar y calentar la solucin hasta ebullicin para garantizar la estabilidad de la misma.


Ajustar el rango de pH entre 6,9 y 7,1.

b) Alfa-amilasa-- alfa amilasa bacteriana termoestable, actividad = 340,000 modificado


Wohlgemuth Units / ml
c) Sulfito de sodio- Na2SO3 anhidro.
d) Acetona- Use un grado que est libre de colores y que no tenga niveles elevados de
evaporacin.
Procedimiento
1. Preparacin de la muestra (pueden procesarse un mximo de 24 bolsas por digestin).
a. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2
para los blancos).
b. Pesar las bolsas de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.
c. Pesar aproximadamente 0,5 g (+/- 0,05 g) de la muestra molida y secada a
65C (MH1) (para alimentos con bajo contenido de agua solo es necesario
molerlos) directamente en la bolsa de filtro.
d. Pesar dos bolsitas de filtro para determinar el blanco (Tbco1).
e. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.a. 4 mm) cuidando que el lado
interno de las mismas estn bien limpios para garantizar el sellado.
f.

Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.

g. Exceptuando las muestras de forraje, las restantes debern ser sometidas a un


lavado por inmersin con acetona durante 3 min y luego las muestras se deben
secar completamente antes de ser sometidas a la digestin.
2. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml de solucin de Detergente Neutro
(SDN) dentro del vaso de digestin. Si se procesan menos de 20 bolsas se agregan
100 ml/bolsa de la SDN. El volumen mnimo de solucin es de 1500 ml.
3.

Agregar 4 ml de la alfa amilasa termoestable durante la digestin. En caso de no


realizar el procedimiento secuencial para la determinacin de fibra en detergente cido
(FDA) adicionar tambin 20 g (0,5g/50ml de NDS) de sulfito de sodio en la solucin en
el vaso de digestin. Si se realizar el procedimiento secuencial de determinacin de
FDA se debe omitir el agregado de sulfito de sodio.

4. Calentar hasta 90-100C la SDN dentro del vaso digestor antes de colocar las
muestras.
5. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez que la solucin est
caliente, colocar en el vaso digestor. Cerrar y sellar el vaso de digestin. Digestar
durante 60 minutos.
6. Interrumpir la agitacin y el calentamiento, abrir la vlvula y dejar salir la solucin
(precaucin: la solucin dentro del vaso est bajo presin). La vlvula se abre primero

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para liberar la presin, para luego abrir la tapa del vaso. Una vez liberada la solucin
se debe volver a cerrar la vlvula.
7. Despus de que la solucin ha salido toda del vaso se abre la tapa del mismo. Se
agrega c.a. 2000 ml de agua destilada a 70-90C con 4 ml de alfa amilasa. Se cierra el
vaso y se prende el agitador por 3 5 min. Luego se libera el agua y se repite el
procedimiento cuatro veces en total, siendo solo en los dos primeros que se agrega la
amilasa.
8. Sacar las bolsas del digestor y sacar el exceso de agua de las mismas presionndolas.
Lavar las bolsitas con acetona por inmersin durante tres minutos. Remover el exceso
de acetona por presin.
9. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. Luego completar el secado a 105C
durante 4 horas. Enfriar en desecador y pesar las muestras (T+aFDN) y los blancos
(Tbco2).
Clculos
aFDN (%bs) = 100 x {(T+aFDN) - [T1 x (Tbco2/Tbco1)]} / (MH1 x MS105)}
Donde,
%bs:

Porcentaje sobre base seca.

MH1 (g):

peso de la muestra.

MS105 (g/g):

coeficiente de materia seca a 105C.

T+aFDN (g):

peso final de la bolsa con la fibra.

T1 (g):

Peso de la bolsa vaca.

Tbco1 (g):

Promedio de pesos de bolsas para blanco inicial


(previo a la digestin con el detergente).

Tbco2 (g):

Promedio de pesos de bolsas para blanco final (luego


de la digestin con el detergente)

Referencias
Ankom. 2005. Subject: Neutral Degerteng Fiber in Feeds. Filter bags technique (ANKOM200).
Accessed 9/5/2007, 2007.
Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analisys. Agric. Handbook No 379.
ARS, USDA.
Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.
I. Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New England
Publ. Unit., Armidale, Australia.
Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,
OR.

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Cenizas 600C 2 h v1

Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos (segn la referencia para alimentos y plantas).
Principios
La materia orgnica de la muestra es combustionada, eliminndose como CO2, por lo
que el residuo recuperado rene las sustancias minerales (independientemente de su origen
funcional en el material de origen).
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Equipamiento

Balanza de precisin.
Cpsulas de porcelana
Desecador
Mufla

Reactivos
No hay.
Procedimiento
10. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65C.
11. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.
12. Las

cpsulas

de

porcelana

utilizadas

en

este

procedimiento

deben

estar

completamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105C por lo menos
desde la tarde anterior.
13. Se retiran las cpsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. 15-30 min.)
14. Registrar el peso de la cpsula (T) en una balanza analtica. Para ello se debe retirar
con pinza la cpsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza con
cuidado.
15. Colocar en la cpsula una alcuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente
2 g) (MH)
16. Regular la mufla a 600C y encenderla una vez que las cpsulas estn en su interior.
17. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 2 horas.
18. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200C.
19. Retirar las cpsulas en desecador, dejar enfriar y pesar (T+Cen).
20. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un da para otro, regular la temperatura

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en 110C, de esta manera las cenizas se mantendrn secas.
21. Se puede continuar con la determinacin de cenizas a partir de las cpsulas
preparadas con que se determin materia seca a 105C. Una vez pesadas las
cpsulas y finalizada la determinacin de MS 105C se procede desde el punto 7 del
presente protocolo.
Clculos
Cen (%) = {[(T+Cen.) T] / MH} 100
Cen (%bs) = [(T+Cen.) T] / (MH MS105 / 100) 100
Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100)
Donde,
%bs
Cen:
MH (g):
MS105 (%):
T (g):

% en base seca
Cenizas
Materia hmeda o tal cual
% MS secada a 105C
Tara

Referencias
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 942.05.

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Cenizas 550C 4 h v1

Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos.
Principios
La materia orgnica de la muestra es combustionada, eliminndose como CO2, por lo
que el residuo recuperado rene las sustancias minerales (independientemente de su origen
funcional en el material de origen).
Equipamiento

Balanza de precisin.
Cpsulas de porcelana
Desecador
Mufla

Reactivos
No hay.
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Procedimiento
22. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65C.
23. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.
24. Las

cpsulas

de

porcelana

utilizadas

en

este

procedimiento

deben

estar

completamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105C por lo menos
desde la tarde anterior.
25. Se retiran las cpsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. 15-30 min.)
26. Registrar el peso de la cpsula (T) en una balanza analtica. Para ello se debe retirar
con pinza la cpsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza con
cuidado.
27. Colocar en la cpsula una alcuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente
2 g) (MH)
28. Regular la mufla a 550C y encenderla una vez que las cpsulas estn en su interior.
29. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 4 horas.
30. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200C.
31. Retirar las cpsulas en desecador, dejar enfriar y pesar (T+Cen).

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32. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un da para otro, regular la temperatura
en 110C, de esta manera las cenizas se mantendrn secas.
33. Se puede continuar con la determinacin de cenizas a partir de las cpsulas
preparadas con que se determin materia seca a 105C. Una vez pesadas las
cpsulas y finalizada la determinacin de MS 105C se procede desde el punto 7 del
presente protocolo.
Clculos
Cen. (%) = [((T+Cen) T) / MH] 100
Cen (%bs) = [((T+Cen) T) / (MH MS105 / 100)] 100
Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100)
Donde,
%bs
Cen:
MH (g):
MS105 (%):
T (g):

% en base seca
Cenizas
Materia hmeda o tal cual
% MS secada a 105C
Tara

Referencias
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 942.05.

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Cenizas 450C 12 h v1
Recopilacin: M. Wawrzkiewicz y G. Jaurena
Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos.
Principios
La materia orgnica de la muestra es combustionada, eliminndose como CO2, por lo
que el residuo recuperado rene las sustancias minerales (independientemente de su origen
funcional en el material de origen).

Equipamiento

Balanza de precisin.
Cpsulas de porcelana
Desecador
Mufla

Reactivos
No hay.
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Procedimiento
34. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65C.
35. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.
36. Las

cpsulas

de

porcelana

utilizadas

en

este

procedimiento

deben

estar

completamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105C por lo menos
desde la tarde anterior.
37. Se retiran las cpsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. 15-30 min.)
38. Registrar el peso de la cpsula (T) en una balanza analtica. Para ello se debe retirar
con pinza la cpsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza con
cuidado.
39. Colocar en la cpsula una alcuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente
2 g; MH)
40. Regular la mufla a 450C y encenderla una vez que las cpsulas estn en su interior.
41. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 12 horas.

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42. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200C.
43. Retirar las cpsulas en desecador, dejar enfriar y pesar (T+Cen).
44. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un da para otro, regular la temperatura
en 110C, de esta manera las cenizas se mantendrn secas.
45. Se puede continuar con la determinacin de cenizas a partir de las cpsulas
preparadas con que se determin materia seca a 105C. Una vez pesadas las
cpsulas y finalizada la determinacin de MS 105C se procede desde el punto 7 del
presente protocolo.
Clculos
Cen. (%) = [((T+Cen.) T) / MH] * 100
Cen (%bs) = [((T+Cen.) T) / (MH * MS105 / 100)] * 100
Cen (%bs) = Cen (%) * (MS105 / 100)
Donde,
%bs
Cen:
MH (g):
MS105 (%):
T (g):

% en base seca
Cenizas
Materia hmeda o tal cual
% MS secada a 105C
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Fibra Detergente cido (FDA) v1


Por equipo ANKOM
Recopilacin: M. Wawrzkiewicz y G. Jaurena
Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos.
Principios
Se denomina fibra insoluble en detergente cido (FDA) al residuo fibroso que queda
luego de disolver el contenido celular y las hemicelulosas de la FDN (fibra insoluble en
detergente neutro) empleando detergente cido, el cul est constituido fundamentalmente
por celulosa y lignina .
Precauciones

La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionando


evitar la inhalacin y el contacto con la piel.

Usar guantes y la campana cuando manipule el cido sulfrico. Sea muy cuidadoso
cuando agregue el cido sulfrico al agua. Al sulfrico no le gusta que lo mojen.

El CTAB puede

irritar las

mucosas. Usar

mscara y guantes

cuando

est

manipulando este reactivo siempre bajo campana.

Asegurarse que el tamao de partcula de la muestra sea de 1 mm.

Equipamiento

Aparato de digestin- ANKON 200/220 FIBER ANALYZER


Balanza de precisin.
Bolsitas filtrantes - ANKON Technology F57 filter bags
Desecador.
Sellador por calor.

Reactivos
a. Solucin de Detergente cido (SDA): por cada litro de solucin

20 g bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB o Cetrimida)

27.7 ml cido sulfrico (H2SO4) concentrado.

b. Acetona. Use un grado que est libre de colores y que no tenga niveles elevados de
evaporacin.

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Procedimiento
1. Preparacin de la muestra
a. En caso de utilizar el procedimiento secuencial para la determinacin seguir el
protocolo desde el punto siguiente "g")
b. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2
para los blancos).
c. Pesar la bolsa de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.
d. Pesar 0,5g (+/- 0,05 g) de la muestra molida y secada a 65C (MH1), Pesar
una bolsa de filtro y digerirla para determinar el blanco (Tbco1).
e. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.a. 4 mm) cuidando que el lado
interno de las mismas estn bien limpios para garantizar el sellado.
f.

Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.

g. Pueden procesarse un mximo de 24 bolsas por vez.


2. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml de solucin de Detergente cido
dentro del vaso de digestin. Si se procesan menos de 20 bolsas se agrega la solucin
SDA a razn de 100 ml/bolsa. El volumen mnimo de solucin es de 1500 ml.
3. Calentar hasta 90-100C la solucin de detergente dentro del vaso digestor antes de
colocar las muestras.
4. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez caliente la solucin, colocar
en el vaso digestor. Cerrar y sellar el vaso de digestin.
5. Despus de 60 minutos interrumpir la agitacin y el calentamiento, abrir la vlvula y
dejar salir la solucin. Precaucin: la solucin dentro del vaso est bajo presin. La
vlvula se abre primero para liberar la presin, para luego abrir la tapa del vaso. Una
vez liberada la solucin se debe volver a cerrar la vlvula.
6. Despus que la solucin ha salido del vaso se abre la tapa del mismo. Se agrega
aproximadamente 2000 ml de agua destilada a 70-90C. Se cierra el vaso y se prende
el agitador por 5 minutos. Luego se libera el agua y se repite el procedimiento dos
veces ms o hasta obtener pH neutro en el agua de lavado descartada.
7. Sacar las bolsas del digestor y sacar el exceso de agua de las mismas presionando
con los dedos. Lavar las bolsitas con acetona por inmersin durante tres minutos.
Remover el exceso de acetona por presin.
8. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. Completar el secado a 105C durante
4 horas. Enfriar en desecador y pesar las muestras (T1+FDA) y los blancos (Tbco2)

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Clculos
FDA (%bs) = 100 x {(T1+FDA) - [T1 x (Tbco2/Tbco1)] / (MH1 x MS105)}
Donde,
%bs:

Porcentaje sobre base seca.

MH1 (g):

peso de la muestra

MS105 (g/g) :

coeficiente de materia seca a 105C.

T1 (g):

peso de tara de la bolsa

T1+FDA (g):

peso final de la bolsa con la fibra.

Tbco1 (g):

Promedio de pesos de bolsas para blanco inicial


(previo a la digestin con el detergente).

Tbco2 (g):

Promedio de pesos de bolsas para blanco final (luego


de la digestin con el detergente)

Referencias
Ankon, 2005. Acid detergent fiber in feeds. Filter bag technique (ANKOM200). Ankon
Technoligy.
Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,
OR.
Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analices. Agric. Handbook No 379.
ARS, USDA.
Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.
I Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New England
Publ. Unit., Armidale, Australia.
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 973.18. Pag. 82.

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Recuperacin de N (AOAC, 1996 4.2.09) v5


Recopilacin: G. Jaurena y M. Wawrzkiewicz
Alimentos de aplicacin
Slo aplicable sobre los estndares apropiados.
Principios
Se emplean lisina, sulfato de amonio o fosfato dicido de amonio para chequear el
proceso completo de digestin y destilacin. Dado que la cantidad de N puesta a digestar es
conocida se espera recuperar el 100%.
Se asume que la tcnica es satisfactoria si se recupera ms del 98% del N.
Precauciones
Hay que ser especialmente cuidadoso en la manipulacin de los digestores y el cido
sulfrico concentrado, utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor.
Se trata de materiales higroscpicos, por lo que es necesario manipularlos con los
recaudos correspondientes.
Equipamiento

Balanza analtica
Tubos de digestin
Erlenmeyers
Equipo digestor y destilador para Kjeldahl
Bureta

Reactivos
Usar NH4H2PO4 certificado (12.15% N) o Lisina clorhidrato de alta pureza (e.g. L-lisina
Sigma Nr. Catalogo L-5626: C6H14N2O2.HCl, PM = 182.6; 15.33% N; pureza mnima 98%).
Para chequear el mtodo completo estndar de referencia consultar NIST N194 (National
Institut of Standards and Technology).
El resto de los reactivos son los mismos de la determinacin de N por Kjedahl (Prtcl NT
01).
Caractersticas de los patrones provistos por el Promefa:
Sulfato de amonio (Art. 961506, Biopack, Argentina), H8N2O4S, PM: 132.14, 21.2%N;
pureza: 99.9%.

Lisina (Art. 971106, Biopack, Argentina), L-Lisina monoclorhidrato (C6H14N2O2HCl, PM:


182.65; 15.3%N; pureza: 99.9%.

Procedimiento
Pesar una alcuota de la muestra y registrar el peso (MH1; c.a. 0.1 g de NH4H2PO4 o
lisina).
Proceder de acuerdo a las determinacines de N por Kjedahl (Prtcl NT 01) o por
mtodo de Dumas (Prtcl NT 02).

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Programa para el Mejoramiento de la Evaluacin de Forrajes y Alimentos


Centro de Investigacin y Servicios en Nutricin Animal (CISNA)
Facultad de Agronoma - Universidad de Buenos Aires
Clculos
(T1 Tbco.) x 1.4 x N(SO4H2)
NT (%, bs) = -----------------------------------------------MH1 x MS105

% Recuperacin de N = NT (%, bs) / NTE (%, bs) 100


Donde,
NTE (H8N2O4S, %, bs) = 21.2 x MS105 0.999
NTE (Lisina, C6H14N2O2HCl, %, bs) = 15.3 MS105 0.999
T1 (ml):
Tbco. (ml):
N(SO4H2)(N):
NTE (%, bs):
NT (%, bs):
MH1 (g):
MS105 (g/g):

Titulacin con SO4H2 de la muestra


Titulacin con SO4H2 del blanco
Normalidad del SO4H2 de titulacin
N total esperado para los reactivos provistos
N total medido en la alcuota ensayada
Peso de la muestra
Coeficiente de materia seca a 105C

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Determinacin del porcentaje de materia seca de los patrones


Se realizar la determinacin del porcentaje de materia seca de los patrones (sulfato
de amonio y lisina) para luego realizar las correcciones necesarias.
Alimentos de aplicacin
Slo aplicable sobre los estndares apropiados.
Principios
El agua se evapora por encima de los 100C, consecuentemente el residuo remanente
permite estimar gravimtricamente el contenido de materia seca (MS105) del material puesto
a secar inicialmente.
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Prestar atencin al manejo de las estufas para evitar el ingreso de muestras hmedas
nuevas en momentos cercanos a la finalizacin del secado, dado que pueden afectar la
determinacin.
Equipamiento

Balanza de precisin.
Estufa termorregulada a 105C.
Desecador.
Cpsulas de porcelana, aluminio o acero inoxidable.

Reactivos
No hay.
Procedimiento
9. Se debe realizar una determinacin en duplicado para cada uno de los patrones.
10. Las

cpsulas

de

porcelana

utilizadas

en

este

procedimiento

deben

estar

completamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105C por lo menos
desde la tarde anterior.
11. Retirar las cpsulas de la estufa en desecador y dejar enfriar (aprox. 15-30 min.).
12. Registrar el peso de la cpsula en una balanza analtica. Para ello se debe retirar la
cpsula del desecador con pinza y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado
(T1)
13. Colocar en la cpsula una alcuota del patrn de peso conocido (aproximadamente 500
miligramos; MH1)
14. Poner las cpsulas con muestra en una estufa regulada a 105C y dejar durante 4

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horas o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche, no ms).
15. Retirar de la estufa en desecador, dejar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar
(T1+MS1).
Clculos
MS105 (%) = [((T1+MS1) T1) / MH1] 100
MST (%)

= MS105 (%)

MH1 (g):
MS105 (%):
MS1 (g):
MST (%)
T1 (g):

Material tal cual.


MS secada a 105C.
MS obtenida luego de secar a 105C.
Materia seca total (%)
Peso del recipiente empleado para el secado a 105C.

Referencias
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1995.
Bradstreet, R. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. New York, NY: Academic Press
Incorporated, 1965.
Jones, J. Benton. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Athens, GA: Micro-Macro
Publishing, 1991.

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Lignina en detergente cido con cido sulfurico (LDAAS) v2


Por equipo ANKOM

Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos.
Principios
El residuo de la fibra cido detergente consiste principalmente de lignocelulosa, la
solucin de cido sulfrico (72%) disuelve la celulosa, quedando la lignina y la ceniza
insoluble en cido en el residuo final recuperado. La cutina tambin es retenida y
consecuentemente se toma como si fuera parte de la lignina.
Precauciones

La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionando


evitar la inhalacin y el contacto con la piel.

Usar guantes y la campana cuando manipule el cido sulfrico. Sea muy cuidadoso
cuando agregue el cido sulfrico al agua. Al sulfrico no le gusta que lo mojen.

Equipamiento

Balanza de precisin.

Estufa de secado regulada a 105C.

Bolsitas filtrantesANKON F57 Filter bags

Desecador

Vasos de precipitado

Reactivos
16. cido sulfrico (72% peso en peso)
a. Mezclar manualmente para estandarizar el reactivo. El grado del cido sulfrico
es de 1,634 g/l (a 20C) o 24,00 N. Agregar 1200 g de cido sulfrico a 440 ml
de agua destilada.
17. Acetona
a. Use un grado que est libre de colores y que no tenga niveles elevados de
evaporacin

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Procedimiento
18. Preparacin de la muestra
a. En caso de utilizar el procedimiento secuencial seguir el protocolo desde el
punto "b)" del procedimiento para determinar FDA (Prtcl FDA 01).
b. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2
para los blancos).
c. Pesar la bolsa de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.
d. Pesar 0,5g (+/- 0,05 g) de la muestra molida y secada a temperatura ambiente
(MH1). Pesar una bolsa de filtro vaca para usar como blanco e incorporarla en
el procedimiento junto con las muestras.
e. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.a. 4 mm) cuidando que el lado
interno de las mismas estn bien limpios para garantizar el sellado.
f.

Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.

g. Pueden procesarse un mximo de 24 bolsas por vez.


h. Determinar FDA con el ANKON Fiber analyzer (Prtcl FDA 01 desde el punto
2 al 7).
19. Poner las 24 bolsas con muestra digerida en solucin DA y las bolsas blanco dentro
de un vaso de precipitados de 1 litro y agregar suficiente cantidad (aprox. 250 ml) de
H2SO4 al 72 % p/v. Importante: las bolsas deben estar completamente secas y a
temperatura ambiente antes de agregar el cido.
20. Poner un vaso de 500 ml dentro del vaso de 1 l para que las muestras queden
sumergidas en el cido sulfrico. Agitar 30 veces cada 30 min presionando con el vaso
de precipitado de 500 ml.
21. Despus de tres horas sacar el cido sulfrico y enjuagar con agua destilada (90100C1) para remover los restos del cido. Repita este procedimiento hasta que el pH
est neutro.
22. Enjuagar con acetona durante 3 min para luego secar las bolsas a temperatura
ambiente.
23. Complete el secado a 105 C durante 4 horas. Enfriar en desecador y pesar la bolsa
(T1+LDAyCen). Luego poner la bolsa en una cpsula previamente pesada (T2) y llevar
a 525C en la mufla durante 3 horas, luego pesar (T2+Cen). Pesar los crisoles para los
blancos (T3) y llevar a la mufla junto con las muestras, luego registrar el peso
(T3+Cen).

En el protocolo sugerido por ANKOM Technology (2005) indica emplear agua de grifo sin indicacin de
temperatura. Considerando la variabilidad en calidad de agua disponible entre los laboratorios participantes
pareci mas conveniente utilizar el procedimiento anterior.

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Clculos
LDA (%bs) = 100 x {T1+LDAyCen [T1 x (Tbco2/Tbco1) A] / (MH1 x MS105)}
A = (T2+Cen T2) [T1 x (T3+Cen T3) / Tbco.1)]
Donde,
A (g):

cenizas insolubles de la muestra

MH1 (g):

peso de la muestra

MS105 (g/g):

coeficiente de materia seca a 105C

T1 (g):

tara del sobre para muestras

T1+LDAyCen (g):

peso final de la bolsa con la lignina y las cenizas

T2 (g):

tara del crisol para muestras

T2+Cen (g)

peso final del crisol mas las cenizas de la muestra

T3 (g):

tara del crisol para blancos

T3+Cen (g)

peso final del crisol mas las cenizas del blanco

Tbco1 (g):

tara del sobre en blanco inicial

Tbco2 (g):

tara del sobre en blanco final.

Referencias
Ankom, 2005. Method for determining acid detergent lignin in beakers. ANKOM Technology.
Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,
OR.
Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analices. Agric. Handbook No 379.
ARS, USDA.
Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.
I Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New England
Publ. Unit., Armidale, Australia.
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 973.18. Pag. 82.

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Materia seca parcial v2

Alimentos de aplicacin
Forrajes y alimentos con ms de un 20% de humedad.
En alimentos con alto contenido de sustancias voltiles (e.g. silajes), el secado en
estufa eliminar los compuestos voltiles junto con el agua y consecuentemente la
determinacin de humedad por esta va estar sobrestimada.
Principios
Este procedimiento se utiliza para preparar las muestras con alto contenidos de
humedad (>20%) y dado que en general tiene un mnimo efecto sobre la composicin qumica
permite almacenar las muestras y efectuar posteriormente los anlisis necesarios.
Dado que el agua se evapora a 100C, sta tcnica no elimina toda el agua contenida
en la muestra y consecuentemente se trata de una MS parcial que elimina aproximadamente
el 95% de la humedad (Harris, 1970).
El contenido de materia seca parcial (MSp) de la muestra se obtiene luego de haber
eliminado por evaporacin parcialmente el agua y equilibrado dicha muestra con la humedad
ambiente.
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Equipamiento

Balanza de precisin.
Estufa con termorregulacin a 65C.
Bandejas de aluminio.

Reactivos
No hay.
Procedimiento
24. Registrar el peso del recipiente en el cual se colocar la muestra a secar (T1)
25. Colocar una alcuota de la muestra en el recipiente previamente pesado y registrar el
peso de la misma habiendo llevado a cero la balanza con el recipiente (MH1). La
muestra debe quedar uniformemente esparcida sobre el recipiente para permitir una
rpida evaporacin del agua.
26. Llevar a estufa a una temperatura de 65C durante 48 h o hasta peso constante.
27. Retirar las muestras de la estufa, dejarlas enfriar sobre una mesada hasta que se
equilibren con el ambiente y pesarlas (T1+MS1).
28. La muestra as secada debe ser molida y preservada en un envase de vidrio o plstico

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con un cierre que no permita la entrada de aire.
Clculos
MS65 (%) = [((T1+MS1) T1) / MH1] 100
Donde,
T1 (g):
MH1 (g):
MS1 (g)
MS65 (%):

Peso del recipiente vaco.


Material hmedo o tal cual (g).
MS obtenida luego de secar a 65C por 48 h (g)
Estimacin del contenido de MS parcial luego de eliminar el agua
en estufa a 65C.

Referencias
Harris, L. E. 1970. Compilacin de datos analticos y biolgicos en la preparacin de cuadros
de composicin de alimentos para uso en los trpicos de America Latina. University of
Florida, Gainesville, Fl (USA).

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Materia Seca Total v2

Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos con bajo contenido de humedad (<20%) y aquellos
previamente acondicionados por secado parcial (Prtcl MS Parcial 01).
El material una vez sometido al secado en estufa a 105C no es apropiado para
efectuar determinaciones analticas adicionales, a excepcin de cenizas.
Principios
El agua contenida en los alimentos se evapora por encima de los 100C,
consecuentemente el residuo remanente permite estimar gravimtricamente el contenido de
materia seca (MS105) del material puesto a secar inicialmente.
sta determinacin permite estimar el contenido de agua del alimento, siendo
complementaria a la de 65C efectuada sobre las muestras hmedas.
Para el caso de muestras secas (humedad <20%) es la nica determinacin que se
requiere para estimar el contenido de materia seca total (MST). En forma similar se procesan
las muestras de forraje fresco o conservado hmedo que se muelan con hielo seco y que
ingresen a la secuencia de anlisis como material fresco (e.g. almidn, N soluble).
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Prestar atencin al manejo de las estufas para evitar el ingreso de muestras hmedas
nuevas en momentos cercanos a la finalizacin del secado, dado que pueden afectar la
determinacin.
Equipamiento

Balanza de precisin.
Estufa termorregulada a 105C.
Desecador.
Cpsulas de porcelana, aluminio o acero inoxidable.

Reactivos
No hay.
Procedimiento
29. Se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.
30. Las

cpsulas

de

porcelana

utilizadas

en

este

procedimiento

deben

estar

completamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105C por lo menos
desde la tarde anterior.
31. Retirar las cpsulas de la estufa en desecador y dejar enfriar (aprox. 15-30 min.).
32. Registrar el peso de la cpsula en una balanza analtica. Para ello se debe retirar la

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cpsula del desecador con pinza y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado
(T2)
33. Colocar en la cpsula una alcuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente
2 g; MH2)
34. Poner las cpsulas con muestra en una estufa regulada a 105C y dejar durante 4
horas o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche, no ms).
35. Retirar de la estufa en desecador, dejar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar
(T2+MS2).
Clculos
MS105 (%) = [((T2+MS2) T2) / MH2] 100
MST (%)

= MS65 (%) MS105 (%) / 100

Donde,
MS65 (%) = {(T1+MS1) T1] / MH1} 100
MH1 (g):
MH2 (g):
MS1 (g):
MS105 (%):
MS2 (g):
MS65 (%):
MST (%)
T1 (g):
T2 (g):

Materia hmeda o tal cual


Material tal cual o muestra de material hmedo previamente secado
a 65C.
MS obtenida luego de secar a 65C por 48 h
MS secada a 105C
MS obtenida luego de secar a 105C
Estimacin del contenido de MS luego de eliminar el agua en estufa
a 65C.
materia seca total (%)
Peso del recipiente empleado para el secado a 65C.
Peso del recipiente empleado para el secado a 105C.

Referencias
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 130.15.
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 167.03. 15th Edition.
Correcciones
2007 Mayo.
Shirley Furtado y Gabriela Arias
Bollati, G.

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Nitrgeno Total (Kjeldahl) v1

Alimentos de aplicacin
Todo tipo de forrajes y alimentos.
Principios
En este paso se oxida la materia orgnica a CO2 y H2O, mientras se reduce el N a
amonio. Una vez finalizada la digestin, se tiene en solucin:
MO
CO2 + H2O
N
(NH4)2SO4
El xito de la tcnica de determinacin de nitrgeno puede controlarse mediante el uso
de sustancias patrn de concentracin conocida de nitrgeno. Una sal de amonio puede ser
usada para testar el proceso de destilacin de la tcnica, mientras que la lisina y el cido
nicotnico son usados para chequear el proceso de digestin. La recuperacin porcentual del
nitrgeno agregado en el patrn indica la eficiencia de la tcnica (se esperan valores de
recuperacin mayores al 98%). Este procedimiento debe ser incorporado como rutina a modo
de control del funcionamiento de la tcnica.
Se debern realizar blancos para determinar posibles aportes de nitrgeno por los
reactivos y materiales empleados. El procedimiento para la determinacin de los blancos es
igual a la de las muestras pero sin la colocacin de la misma y debe ser reconfirmada
frecuentemente.
Precauciones
Bsicas relacionadas con el manejo de equipos elctricos y con actividades de
laboratorio.
Hay que ser especialmente cuidadoso en la manipulacin de los digestores y el cido
sulfrico concentrado, utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor.
Equipamiento

Balanza analtica
Tubos de digestin
Erlenmeyers
Equipo digestor y destilador para Kjeldahl
Bureta

Reactivos
cido Brico al 2%:
a) Hervir 20 g de cido brico en 500 ml de agua destilada para solubilizarlo
b) Agregar 250 ml de agua fra
c) Cuando llega a temperatura ambiente agregar:
i) 10 ml de Verde de Bromocresol (100 mg / 100 ml etanol)
ii) 7 ml de Rojo de Metilo (100 mg / 100 ml etanol)
d) Llevar a 1 litro en matraz con agua destilada

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Hidrxido de Sodio:
a) 40 g NaOH (grado reactivo) / 100 ml agua :::: 800 g / 2000 ml ::: 1600 g / 4000 ml
Acido sulfrico 0.1 N
Se emplean 6 ml SO4H2 (96-98% grado reactivo)/ 2000 ml agua destilada
Valoracin con Biftalato de potasio
i) Preparar 3 erlenmeyers con:
(1) 200 mg de Biftalato de potasio (registrar el peso exacto PBif)
(2) agregar 30 ml agua destilada
(3) agregar 3 gotas de fenolftaleina
(4) titular con NaOH 0.1 N valorado o comprado (T1)
ii) Preparar 3 erlenmeyers con:
(1) 10 ml SO4H2 a valorar
(2) agregar 30 ml agua destilada
(3) agregar 3 gotas de fenolftaleina
(4) titular con NaOH 0.1 N valorado o comprado (T2)
iii) Clculo de la valoracin:
ml (T2) x mg (PBif)
N (SO4H2) = ----------------------------------------ml (T1) x 204,23 x 10
Valoracin con patrn primario (Trometamina, tris PM: 121.14)
Usar verde de bromocresol como indicador (azul en medio bsico, amarillo en medio
cido).
a) Disolver el patrn primario en agua y agregar 2 o 3 gotas del indicador.
b) Titular el cido a valorar.
mg Trometamina (mg)
N (SO4H2) = ------------------------------------121.14 SO4H2 (ml)

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Procedimiento
Digestin
1) Pesar un alcuota de la muestra y registrar el peso (MH1) (0.5 g MS 65C forrajes y
0.1 g MS 65C carne)2
2) Colocar la muestra en tubos de digestin
3) Agregar 15 g de Sulfato de potasio (SO4K2)
4) Agregar 1 ml de Sulfato de cobre 10% (SO4Cu 10%)
5) Agregar 25 ml de cido Sulfrico concentrado (SO4H2 concentrado)
6) Encender el digestor a 400C
7) Activar el mecanismo necesario para evitar el escape de vapores al ambiente.
8) La digestin de las muestras se llevar a cabo hasta que la solucin dentro de los
tubos quede de color verde translcido (dependiendo de las muestras y equipo,
puede tomar entre 30 min a 4 h).
9) Retirar los tubos con la gradilla del block digestor y dejar enfriar sin retirar la tapa
recolectora de vapores. Al enfriarse la solucin se torna incolora y translcida
10) Agregar 20 ml de agua destilada en cada tubo y dejar enfriar agitar 2 3 veces
cada 5 minutos para evitar que se formen cristales grandes de Sulfato de potasio.
11) Dejar enfriar para comenzar la destilacin
Destilacin
1) Preparar tantos erlenmeyer como tubos para destilar haya preparados con 25 ml de
cido Brico 2%
2) Colocar un erlenmeyer con cido brico 2% en la salida del refrigerante del equipo
con el final del tubo de vidrio sumergido en la solucin (as quedar hasta
inmediatamente antes de apagar la bomba generadora de vapor para concluir el
destilado)
3) Colocar el tubo con la muestra digestada en el destilador asegurndose que el
cierre superior con la goma sea completo (se recomienda presionar en sentido
ascendente desde el tubo)
4) Dosificar el Hidrxido de Sodio 40% hasta neutralizar la solucin del tubo (el color
del la solucin del tubo pasa de incoloro-blanco a marrn o celeste en caso de
exceso de NaOH)
2

En caso de ser muestras lquidas o de elevado contenido de agua (>30% de humedad, se debe elevar la
temperatura del digestor a razn de 100C cada 30 minutos hasta los 400C y a partir de entonces contar las 2
horas de digestin.

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5) Destilar hasta recoger c.a. 150 ml en el erlenmeyer.
6) Apagar la bomba generadora de vapor.
7) Retirar el tubo del equipo cuidando los goteos de solucin desde la goma y el
erlenmeyer
8) Una vez destilados todos los tubos se debe lavar el frente del equipo de las
salpicaduras de NaOH y vaciar y enjuagar la bomba generadora de vapor desde el
robinete superior y descargando la suciedad hacia la canaleta trasera de la
mesada.
Titulacin

Con cido Sulfrico 0,1 N hasta cambio de color verde a rosa intenso (mantener
siempre el mismo criterio de color final en la titulacin de todas las muestras). (T1)

Clculos
(T1 Tbco.) x 1.4 x N SO4H2
Nt (%bs) = -----------------------------------------------MH1 x MS105

PB (%bs) = Nt (%bs) x 6,25*


Donde,
T1 (ml):
Tbco. (ml):
N SO4H2 (N):
MH1 (g):
MS105
(g/g):
*

6.25

Titulacin con SO4H2 de la muestra


Titulacin con SO4H2 del blanco
Normalidad del SO4H2 de titulacin
Peso de la muestra
Coeficiente de materia seca a 105C
El valor asume que todo el nitrgeno del alimento se encuentra en
forma de protena y que est presente en ella en un 16%

Referencias
AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methods
of Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1995.
Bradstreet, R. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. New York, NY: Academic Press
Incorporated, 1965.
Jones, J. Benton. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Athens, GA: Micro-Macro
Publishing, 1991.

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Protocolos miscelneos
Correccin de los resultados analticos por Materia Seca Total v2
Alimentos de aplicacin
Todas las muestras de las pruebas interlaboratorios del Promefa (previamente secadas
a 65C).
Principios
Las muestras de alimento, establecen un equilibrio con la humedad ambiente, por lo
que el contenido de agua puede variar entre laboratorios y an para un mismo laboratorio a lo
largo del tiempo.
Los resultados analticos se deben reportar sobre base seca total para evitar las
variaciones debidas a la humedad residual contenidas en las muestras.
Procedimiento
A partir de los procedimientos explicados en el Prtcl MS Total 01 se puede estimar la
materia seca obtenida por secado a 105C (MS105) de cada muestra con la cual se
proceder a corregir los valores analticos obtenidos sobre las muestras parcialmente secas
(MS 65 y equilibradas con la humedad ambiente del laboratorio).
Los anlisis (e.g. aFDN, PB) se llevan a cabo sobre las muestras parcialmente secas
(base parcialmente seca [bps]; i.e. 65C o en el caso de las muestras del Promefa tal como
llegan al laboratorio).
Una alcuota de la muestra recibida se usar para estimar la MS105 (secando a 105C)
Una vez obtenidos los resultados analticos y la MS105 se proceder a efectuar la
correccin, aplicando la siguiente frmula (ejemplificado para aFDN):
aFDN (g/kg MS bs) = aFDN (g/kg MS bps) / MS105 (g/kg MH2) / 1000
donde:
aFDN (g/kg MS bs): contenido de aFDN expresado en base seca (bs)
aFDN (g/kg MS bps): contenido de aFDN expresado sobre base parcialmente
seca (bps)
MS105 (%): materia seca obtenida luego de secar la muestra a 105C de
acuerdo al Prtcl MS Total 01

Ejemplo

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PROMEFA

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Centro de Investigacin y Servicios en Nutricin Animal (CISNA)
Facultad de Agronoma - Universidad de Buenos Aires
1. Se toma una alcuota de la muestra a analizar y se procede de acuerdo al Prtcl MS Total
01
Repeticin
r1
r2

T2 (g)
8.002
7.988

MH2 (g)
2.014
2.034

MS2 + T2 (g)
9.918
9.941

MS2 (g)
1.916
1.953

MS105 (g/g)
0.9513
0.9602

T2: tara
MH2: peso de la muestra parcialmente seca
MS2: peso de la muestra luego de haber sido secada a 105C.

2. Clculo de la materia seca a 105C promedio, i.e. 0.9558 g/g MH2 (parcialmente seca).
3. Simultneamente con lo hecho en el punto 1, se inicia una corrida analtica para
determinar el contenido de aFDN. Consecuentemente se pesan aproximadamente 500 mg
de la muestra parcialmente seca (base parcialmente seca, bps) y el resultado es 450 g de
aFDN por kg de muestra parcialmente seca (bps).
4. Se corrige el resultado analtico (bps) por el contenido de MS105 para obtener el valor en
base seca total (bst), del siguiente modo:
450 (g aFDN/kg MS bps) / 0.9558 (g/g bps) = 470.8 (g aFDN /kg MS bst)
5. Resultados:
MST = MS65 MS105
Si MS65 fuese 870 g/kg MH
MST = 870 0.9558 = 831 g/kg MH
Entonces:
aFDN (g/kg MS bst) = 470.8
aFDN (g/kg MS bps) = 450.0
aFDN (g/kg MH)
= 391.2

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Modelos propuestos para predecir la concentracin energtica de los


alimentos para rumiantes v1

Introduccin
Un objetivo primordial de los sistemas de evaluacin de alimentos para animales es
predecir con razonable exactitud la produccin animal a partir del suministro de los alimentos
analizados. Es aceptado que la productividad animal lograda como consecuencia del
suministro de un dado alimento constituye el criterio ltimo para valorar un alimento, pero esta
situacin de valoracin ideal est estrictamente circunscripta al trabajo de investigacin
desarrollado en instituciones especializadas.
La valoracin comercial de los alimentos para animales requiere de mtodos objetivos,
repetibles y econmicos que permitan efectuar predicciones sobre la capacidad de los
alimentos para suministrar los nutrientes y la energa necesarios para cubrir los distintos
procesos vitales de los animales y preservar su estado de salud y la calidad de los productos
obtenidos a partir de ellos.
El valor nutritivo (VN, entendido como la combinacin de consumo, digestibilidad y
eficiencia en el uso de los nutrientes) se relaciona estrechamente con la produccin animal y
es sobre este principio (y sobre las asociaciones empricas descritas entre los componentes
del VN y las determinaciones efectuadas en el laboratorio) que se basa el funcionamiento de
los sistemas de alimentacin animal (congruencia entre la valoracin de alimentos y la
prediccin de los requerimientos animales).
Por las razones antes expuestas, es que la prediccin de la concentracin energtica
de los alimentos es un paso crtico del sistema de valoracin de alimentos.
Existen dos alternativas para predecir el aporte energtico de los alimentos a partir de
muestras en el laboratorio: sistemas de valoracin in vitro y anlisis qumicos. Los primeros
en sus distintas variantes presentan buenas asociaciones con los valores obtenidos a partir
de ensayos in vivo. Las determinaciones qumicas del laboratorio son empleadas para
predecir la digestibilidad de los alimentos en base a relaciones empricas descritas por
ecuaciones que suelen basarse en las asociaciones negativas de la digestibilidad con el
contenido de la fibra de los alimentos. Las ecuaciones son especficas para cada tipo de
alimento y su exactitud es funcin de la de los anlisis de los laboratorios y de los
experimentos in vivo sobre los cuales fueron ajustadas.
La aplicacin de estas ecuaciones presenta varias limitaciones que deben ser tenidas
en cuenta:
An cuando se trate de alimentos similares, su aplicacin no deja de ser una
extrapolacin respecto a los datos originales sobre los cuales se ajustaron.
En las mayora de los casos no hay evidencia de valoraciones independientes
de las mismas.

En su gran mayora se trata de ecuaciones obtenidas por instituciones


extranjeras en condiciones no necesariamente comparables.

No siempre est especficamente establecido en que forma se obtuvieron los


datos analticos para su calibracin (e.g. FDN o FDNMO) o bajo que condiciones
de manejo se efectuaron los experimentos de calibracin in vivo.
No es sencillo realizar constataciones respecto a valores de referencia
publicados (e.g. Tablas del NRC) dado que stos tampoco est claramente
explicado como fueron obtenidos.

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No obstante lo anterior la falta de normalizacin respecto al uso de stas formulas ha
llevado a que distintos laboratorios suelan emplear frmulas diferentes para predecir el valor
energtico de alimentos similares llevando en consecuencia a introducir una fuente de error
adicional y espuria.
Con el objeto de evitar esta fuente de error es que en este documento se proponen
una serie de ecuaciones que fueron seleccionadas en base al consenso de los participantes
del PROMEFA. Es deseable que en el futuro cercano se cuenten con validaciones
experimentales de las mismas o desarrollo de ecuaciones especficas para nuestras
condiciones.
Ecuaciones de prediccin para las distintas clases de alimentos
Los alimentos se clasifican en base a su composicin (fundamentalmente por su
contenido de fibra y protena) y uso en la formulacin de dietas (Jaurena and Daneln, 2001).
Como en cualquier clasificacin, las clases pueden resultar arbitrarias y en ciertos casos un
alimento es asignado a una clase de acuerdo a su uso en la prctica corriente.
En las secciones que siguen se presentan las definiciones de las categoras de
alimentos que aportan energa junto con las ecuaciones propuestas para estimar el contenido
de EM (Mcal/kg MS) de los alimentos.
Para las conversiones de las unidades de energa se emplearon los siguientes
supuestos:
DMS = TND
ED = DMS 4.4 Mcal/kg MSD
EM = ED 0.82
EM = 3.6 TND o DMS

Donde
%FDA:
%FDN:
%LDA:
%TND:
DMS:
ED:
EM:
MS:
MSD:

fibra insoluble en detergente cido expresada en g/100 g MS


fibra insoluble en detergente neutro expresada en g/100 g MS
lignina detergente cido expresada en g/100 g MS
total de nutrientes digestibles expresada en g/100 g TND
Digestibilidad de la materia seca (kg/kg MS)
Energa digestible (Mcal/kg MS)
Energa metabolizable (Mcal/kg MS)
Materia seca
Materia seca digestible.

Clase I - Forrajes secos y alimentos groseros


Todos los forrajes y materiales groseros cortados y secados, as como otros productos
con ms de 18% de fibra cruda o ms de 35% de pared celular (FDN, sobre base seca). En
general, son alimentos con baja concentracin energtica. Ejemplo de forrajes secos: heno,
paja, rastrojos. Ejemplo de alimentos groseros: cscaras, vainas.

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De uso general
Ecuacin Ia (Sumativa de Van Soest, (Goering and Van Soest, 1970)
EM (Mcal/kg MS) = 3.6 / 100 {(100 - %FDN) 0.98 + %FDN
(1.473 0.789 Log10 [LDA/FDA100]) 12.9}
Gramneas y leguminosas
Ecuacin Ib (Rohweder, et al.))
EM (Mcal/kg MS) = 3.20 0.028 x %FDA
Leguminosas
Ecuacin Ic (McLeod and Minson, 1976)
EM (Mcal/kg MS) = 3.6 [92.3 0.91 %FDA]
Clase II - Pasturas y forrajes frescos
Agrupa a todos los alimentos forrajeros consumidos en forma directa (pasturas y
verdeos) o cortados y suministrados en fresco.
Se sugieren las mismas ecuaciones que las presentadas para la Clase I.
Clase III - Silajes
Esta clase agrupa a los forrajes ensilados: maz, sorgo, alfalfa, praderas, etc.,
excluyendo a los silajes de pescado, vsceras, granos o races.
Silaje de planta entera de maz
Ecuacin IIIa (Schmidt, et al., 1976)
EM (Mcal/kg MS) = 3.16 (0.025 %FDA
Clase IV - Alimentos energticos
Alimentos con menos de 20% de protena bruta (PB) y 18% de fibra cruda (FC) o 35%
de FDN (sobre MS); por ejemplo granos, subproductos de molienda, frutas y tubrculos, an
cuando estos productos se encuentren ensilados.
Grano de maz entero
Ecuacin IVa (Pennsylvania State)
EM (Mcal/kg MS) = 3.32 0.055 %FDA
Concentrados
Ecuacin IVb (Menke and Steingass, 1988)
EM (Mcal/Kg MS) = 3,50 - 0,035 %FDA

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Mezcla de granos
Ecuacin IVc (New York State Pred. Eq.; Hach, 1987))
EM (Mcal/Kg MS) = 3.6 [81.41 0.48 %FDA]
Referencias
Goering, H. K. and P. J. Van Soest. 1970. Forage Fiber Analysis. 379. USDA, ARS.
Hach. 1987. Feed analysis manual. Hach Co.,
Ames, Iowa., Ames, Iowa (USA).
Jaurena, G. and J. L. Daneln. 2001. Tabla de composicion de alimentos para rumiantes de la
region pampeana Argentina. Hemisferio Sur, Buenos Aires.
McLeod, M. N. and D. J. Minson. 1976. The analystical and biological accuracyof estimating
the dry mater digestibility of different legume species. Animal Feed Sci. and Technol.
1:61-72.
Menke, K. H. and H. Steingass. 1988. Estimation of the energetic feed value obtained from
chemical analysis and in vitro gas production using rumen fluid. Anim. es. Dev.
28:209-221.
Rohweder, Barnes, and H. Jorgensen. Journal of Anim. Sci. 68:403-.
Schmidt, A. R., R. D. Goodrich, R. M. Jordon, G. C. Marten, and J. C. M. . 1976. Relationships
among agronomic characteristics of corn and sorghum cultivars and silage quality.
Agronomy Journal. 68:403-406.

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Procesamiento estadstico de los resultados analticos v2


Principios
Los resultados analticos no debern sufrir seleccin alguna y se reportarn sobre base
seca total (Prtcl MS 105 01). Sin embargo cabe considerar algunas situaciones excepcionales
por las cuales puede ser necesario reemplazar un resultado:
Medicin perdida (resultado extraviado), se deber repetir la determinacin
inmediatamente para reemplazar el resultado
Razn a priori debidamente fundamentada (e.g. prdida de material durante el
procedimiento, falla fehaciente del equipo)
En el caso de resultados sospechosos de outliers se aplicar el test de Dixon
(Q test; = 0.01).

mbito de apicacin del Test de Dixon


El test de Dixon (Dixon, 1951) permite aplicar un criterio de discriminacin de datos
outliers a nivel del operador del laboratorio, previo al envo de los resultados al coordinador
del programa interlaboratorio.
Este test se deber aplicar una sola vez por conjunto de repeticiones para una misma
determinacin (e.g. aFDN) y slo se permite reemplazar un dato (outlier confirmado) por
conjunto de repeticiones. En el caso de rechazar el resultado, la muestra ser analizada
nuevamente por la misma caracterstica y se reportarn ambos valores (el outlier en el lugar
consignado en la planilla para tal fin).
Procedimiento
1. Calcular el parmetro q, i.e. (para n < 7):
q = (D N)/R
Donde
D: valor sospechoso,
N: valor mas cercano al valor sospechoso,
R: rango total
2. Comparar el valor q contra el Q tabulado ( = 0.01; Tabla 1)

Tabla 1. Valores para aplicar el test de Dixon (Q) para outliers


Nr. de repeticiones
Valor Q para = 0.01
3
0.994
4
0.926
5
0.821

3. Regla de decisin, el valor sospechoso ser descartado si supera el Q tabulado ( =


0.01 para el nmero de repeticiones especificado).

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4. Inmediatamente luego de tomada la decisin de descartar un dato, se deber proceder
a reemplazar el dato por uno nuevo.

Ejemplo
6. Resultados analticos
Repeticiones analticas
r1
r2
r3
r4

Resultado (g/kg MS)


560
580
570
610

Valor mnimo
Valor mximo

7. Clculo de q
El resultado sospechoso es r4, por lo tanto
D = 610
N = 580
R = 610 560 = 50
q = (610 580)/ 50 = 30/50 = 0.60
q < Qn=4; 1% no se rechaza el valor bajo sospecha (D)
Tngase en cuenta que para fallar ste test el valor D debera ser superior a 626.3.
Referencias
Dixon, W. J. 1951. Ratios involving extreme values. J. Ann. Math. Stat. 22(1):68-78.