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CICLO CELULAR Y CITOGENTICA

Autor: Br. scar Nez


Ciclo celular: secuencia de acontecimientos autorregulada que controla el
crecimiento y la divisin de las clulas. Objetivo: producir dos clulas
hijas con cromosomas idnticos a los de la clula progenitora.
La divisin celular puede ser somtica o germinal.
Consta de dos fases: interfase y mitosis.
Interfase
Crecimiento continuo de la clula o stdium de no divisin. Se divide en 4
perodos de estado proliferante:
Perodos
interfsicos
G1 (gap1 espacio)

Proceso

a) Ms largo y variable. Comienza luego de la fase M.


b) Duracin: 9-12 h.
c) Sntesis de RNA y protenas + componentes celulares
La clula crece
d) Clula capta sustancias nutritivas.
S (sntesis)
a) Duracin: 7,5-10 h.
b)Se inicia en sitios llamados replicones.
Se
estudia c) Sntesis de DNA (replicacin de cromtides)
mediante
d) El ncleo contiene el doble de protenas nucleares.
radioautografa
con
timidina
radiactiva.
G2 (gap2)
a) Duracin: tan corto como 1 h. En promedio 3,5-4,5
Clula sufre
h.
crecimiento
b) Clula examina DNA duplicado.
ulterior/seguridad c) Reorganizacin de orgnulos citoplasmticos.
de DNA.
d) Contina sntesis de RNA y protenas.
G0: estado de clulas quiescentes, pueden reingresar al ciclo celular
despus de un estmulo especfico. No entran en mitosis.,
Si sufre diferenciacin terminal

GTD: clulas que nunca se dividirn. Ej., adipocitos


maduros, osteocitos, neuronas.

PUNTOS DE REGULACIN DEL CICLO CELULAR

G1

S
G2

a)Pto. de control del dao del DNA: verifica la integridad del DNA de
duplicacin reciente.
DNA con dao irreparable--- se aumenta concentracin de protena
supresora de tumores p53 y no permite paso a fase S. Ocurre apoptosis.
b)Pto. de restriccin (o de no retorno): MS IMPORTANTE. Clula
autoevala su propio potencial replicativo. Es sensible al volumen
celular, al estado fisiolgico y a las interacciones con la
matriz
celular. Est mediado por interacciones de protena de susceptibilidad
al retinoblastoma (pRb) + factores de transcripcin esenciales (E2F)
con sus promotores diana = desactivacin de genes y bloqueo de ciclo
celular.
Pto. de control del dao del DNA en S: verifica DNA en el proceso de
duplicacin.
a) Pto de control del dao del DNA en G2
b) Pto de control del DNA no duplicado: impide la progresin celular
hacia la fase M antes de que se complete la sntesis de DNA.

REGULACIN DEL CICLO CELULAR


Oscilacin bioqumica regulada por complejos citoplasmticos proteicos.
Es dada por las ciclinas y las cinasas o proteinquinasas dependientes de
ciclinas (Cdk)
1970- Factor promotor de la maduracin (MPF): protena que controla el
inicio de la Fase M compuesta por otras dos protenas: CdK1 y Ciclina B.
Complejo ciclina-Cdk: controla el ciclo celular. Aumento de actividad:
ciclinas // Inhibicin actividad: protenas Ink (inhibidoras de cinasas);
Cip (protenas inhibidoras de cinasas)y las Kip (protenas inhibidoras de
cinasas).
CICLINAS: son protenas constitutivas que son degradadas por la ubicuitina
presente en los proteosomas. Controlan la actividad de las CDK para formar
el complejo ciclina-CDK. En mamferos son 6 (A-F)
CDK: son enzimas que mediante fosforilacin de protenas desencadenan el
ciclo celular. Transfiere grupos fosfatos desde ATP a un sustrato
especfico o diana. La diana puede activarse o inactivarse mediante la
fosforilacin. En mamferos son 5 (CDK1-CDK5). Son sealadores celulares.
Tienen dos lbulos entre
los cuales se inserta el ATP (donador de
fosfatos)
GENES DE CONTROL
PRIMARIO
cdc: codifican
ciclinas
cdc2:codifican CDK

Activacin de CDK en el complejo ciclina-CDK viene dada por 3 enzimas, dos


proteinquinasas y una fosfatasa. Se fosforila el CDK y se bloquea la
actividad por la proteinquinasa Wee1. La segunda fosforilacin por la
proteinquinasa Mik1. Se activa finalmente con la eliminacin de fosfato por
parte de la proteinfosfatasa Cdc25.
ACTIVACIN COMPLEJO CICLINA-CDK: equilibrio entre Wee1, Mik1, Cdc25.

G1: incremento de ciclinas G1. En punto de control: se activa complejo


ciclina E-CDK2 (quinasa de inicio).
S: incremento de ciclinas mitticas. Se activa complejo ciclina B-CDK2
(factor promotor de mitosis FPM)
La mayora de las clulas del organismo adulto se encuentran en G0
Factores de crecimiento:
Factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF).
Factor de crecimiento epidrmico (EGF).
Factor de crecimiento nervioso (NGF).
Genes oncognicos y supresores de tumores:
Pueden ser proliferantes o antiproliferantes.

- Sufren autofosforilacin.
- Activan protena G ligada a
membrana llamada Ras
- Ras activo induce actividad
proteinquinasas activadas por
mitogno (MAPquinasas) que
actan como proliferantes
celulares.

a) Se conocen ms de 20 proliferantes y se llaman protooncogenes, y cuando


mutan se llaman oncogenes o genes oncognicos. Se nominan por nombres de
tres letras. Mutaciones son dominantes en fenotipo. Regulan positivamente.
b) Se conocen ms de 10 antiproliferantes y se llaman antoncogenes o genes
supresores tumorales. Mutaciones son recesivas en fenotipo. Regulan
negativamente el ciclo celular.
Las ciclinas y CDK regulan el ciclo celular positivamente y fosforilan
serinas y treoninas de protenas diana.

RB1: gen supresor tumoral que codifica protena pRB. Inhibe la


proliferacin de cdigos estimulantes. Mutacin ulterior en el gen =
retinoblastoma (CA de retina). El gen produce la prdida de capacidad de
supresin de genes de respuesta temprana como los protooncogenes myc, fos
y jun. stos inducen la activacin de los genes de respuesta retardada que
producen productos como ciclinas y CDK. La unin de los productos de fos y
jun (Fos y Jun con letra capital en mayscula que son protenas) mediante
una leucina forman el factor de transcripcin AP1 que se activa en el
ciclo celular cuando existe un estmulo extracelular.
CNCER: proliferacin celular excesiva originada por
oncogenes que se expresan de manera intensa y excesiva.

mutaciones

en

p53: supresor tumoral que activa genes que detienen el ciclo celular en la
fase G1 en caso de haber dao en DNA e induce la apoptosis de la clula.
Tambin favorece la reparacin del DNA. A su vez, controla la expresin
del gen p21 que inhibe la transcripcin de CDK mediante la protena CDKN1A
y regula el ciclo celular en la fase G1. Si su accin falla, estimula la
apoptosis celular.
Apoptosis celular: es una forma de muerte celular que est desencadenada
por seales celulares controladas genticamente. Forma dos cuerpos
apoptticos: uno de heterocromatina y uno citoplasmtico.

FE DE ERRATAS: en la parte brillante dice "Fosfatasa cdc25 // Protenas


asociadas a la cromatina, histona H1, lminas nucleares"

Los CDK poseen en su entrada al canal del centro cataltico, una treonina que debe estar fosforilada para que la
quinasa acte.
En el caso de inhibicin, en el propio centro cataltico hay 2 treoninas que se fosforilan.
El sitio de unin con las ciclinas se llama PSTAIRE. En la regin alejada del centro se une la protena CKS que regula la
actividad quinasa de la CDK.

Transiciones en el ciclo celular: son 4.


G0 a G1
G1 a S
S a G2

Proliferacin
Replicacin
Mitosis
Metafase a anafase

La divisin celular se clasifica en cariocinesis (divisin nuclear) y


citocinesis (divisin citoplasmtica).
Mitosis
Punto de control de ADN no replicado de fase M: inhibicin de cdc25 que
activa ciclina A/B Cdk1
Proceso rgidamente ordenado por el cual se reparten 2 juegos
idnticos de molculas de DNA (originados mediante el proceso de
replicacin) en dos ncleos recin formados. Por citocinesis posterior, se
crean dos clulas. Es un proceso ecuacional.
Proceso de segregacin cromosmica y de divisin nuclear, seguido por
divisin citoplasmtica, que produce dos clulas hijas con la misma
cantidad de cromosomas y contenido de DNA que la clula progenitora.
Presenta duplicacin de centrolos, ensamblaje del aparato mittico segn
carga de filamentos y organizacin cromosmica.
Cromosoma:
DNA
+
protenas
especficas
(histonas
y
no
histnicas).
Clulas somticas: 23 pares homlogos, 22 pares de autosomas y 1
par sexual. 2 cromtides + centrosoma = 1 cromosoma.
Sigue a la fase S del ciclo celular y consta de cuatro fases:
Transicin de interfase a profase: se duplica el centrosoma= 2 centrosomas
(orgnulo celular que no est rodeado por una membrana; consiste en dos
centriolos apareados, embebidos en un conjunto de agregados proteicos que
los rodean y que se denomina material pericentriolar). Es el COMT
(Centro Organizador de Microtbulos). Adems, comienza a condensarse la
cromatina (conjunto de ADN, histonas y protenas no histnicas).

PROFASE

a) Desaparicin de nuclolos.
b) Cromosomas duplicados se condensan mediante la histona H1
y se hacen uniformemente visibles al microscopio como hebras,
se distinguen las cromtides hermanas unidas mediante
cohesinas en un centrmero no teido en una constriccin
primaria formado por heterocromatina de secuencias CEN, de

DNA repetido.
c)
Centrolos

migran

los

polos

d) Se forma el huso mittico mediante la


tubulina soluble desde los dos centrosomas
de los nuevos microtbulos se fijan a los
la carga de los primeros (35 por cinetocoro

de

la

clula.

polimerizacin de
polares y algunos
cinetocoros segn
en mamferos).

a) Degradacin de la envoltura nuclear (nucleolema) en


vesculas de transporte a travs de la fosforilacin de sus
lminas ocasionando su despolimerizacin.
PROMETAFASE b) Aparicin de cinetocoros formados por DNA satlite (DNA
especfico repetido) frente al centrmero en cada cromtide.
(Profase
Los cinetocoros son complejos proteicos discoides que atrapan
tarda)
los microtbulos del huso mittico.
c) Microtbulos invaden el rea nuclear.
d) Comienza el movimiento de los cromosomas a travs del
huso.
e) Se forman los microtbulos astrales que son cortos e
irradian en todas las direcciones desde cada uno de los
centrosomas, tomando una forma de estrella llamada ster que
no tienen relacin con el huso mittico. Se nuclean a partir
de los anillos de tubulina .
a) El huso mittico formado por 3 tipos de microtbulos
(polar, cinetocricos y astral) se organiza alrededor de los
METAFASE
MTOC.
El
cinetocoro
interacta
con
los
microtbulos
(Fase
ms cinetocricos.
larga, dura b) Movimiento de los cromosomas hacia el plano ecuatorial,
20 min)
perpendicular al huso mittico. Es debido a dos fuerzas:
b.1)Traccin: ejercida por microtbulos del cinetocoro.
b.2)Rechazo: ejercida por el ster que aleja los
cromosomas.
Ocurre el punto de control de ensamblaje del huso: activa
portena Mad2 que impide la degradacin de la segurina. Esto
hace que no se segreguen las cromtidas hermanas hasta que
todas se hayan unido al huso.
a) Divisin de centrmeros
b) Separacin de cromtidas hermanas debido a degradacin de
cohesinas y se acortan los microtbulos cinetocricos debido
a la despolimerizacin de tubulina. ANAFASE TEMPRANA o A
ANAFASE
c) Cromtidas se dirigen a los polos por motores moleculares
llamados dinenas (protenas) que se deslizan por los
microtbulos cinetocricos hacia el MTOC.
d) Se alargan los microtbulos no cinetocricos (separacin
de los MTOC --- elongacin del huso mittico) debido a la
polimerizacin de la tubulina por el ATP. ANAFASE TARDA o B.
e) Superposicin de cromtidas.
a) Reconstitucin de envoltura nuclear (nucleolema) por
disminucin de la fosforilacin alrededor de los cromosomas
en cada polo por la degradacin de ciclinas y la inactividad
de las CDK.
TELOFASE
b)Desenrrollamiento de cromosomas.
c) Reaparicin de nuclolos.
d) Duplicacin de organelas citoplasmticas.
d) Termina la cariocinesis.
e) Comienza citocinesis con un surco o hendidura de escisin
dado por un anillo contrctil formado por actina y miosina

formando el cuerpo medio y la citocalasina que impide


polimerizacin de los filamentos de actina y finalmente
hace desaparecer cuando la hendidura se interrumpe
completo alrededor de microtbulos polares formando
clulas hijas 2n.

la
los
por
dos

Los microtbulos pueden ser cinetocricos (si se fijan a las


cromtides hermanas, polares (si no se fijan a las cromtides) o astrales
(que parten de cada centrosoma y no forman parte del huso mittico)
Heterocromatina: regiones de la cromatina ms compactas, condensadas, empaquetadas
que se tien fuertemente con coloraciones para ADN. Puede ser constitutiva (idntica para las
clulas del organismo) o facultativa (diferente en grupos celulares). Casi nunca est activa.
Eucromatina: forma de la cromatina ligeramente con una gran concentracin de genes, y a
menudo (no siempre) se encuentra en transcripcin activa.
CROMOSOMA HOMLOGO: tiene mismo tamao, forma, DNA y genes. Del par, un
cromosoma viene del padre y otro de la madre.
Cromtidas hermanas: son los brazos de los cromosomas unidos entre s por un centrmero.

MEIOSIS
Es un proceso, una forma de divisin celular, mediante el cual se
desarrollan las clulas sexuales o gonadales o germinales. Comprende dos
divisiones nucleares secuenciales seuidas por divisiones citoplasmticas
que producen gametos con la mitad del contenido de DNA con respecto a las
clulas somticas. Se reduce de diploide a haploide, permite la variacin
gentica y es reduccional.
PRIMERA DIVISIN MEITICA
PROFASE I: consta de varios estados.
Leptoteno
RM: largo

Cromosomas se vuelven visibles como largos filamentos


delgados.
a) Cromosomas se acortan.
b) Unin de cromosomas homlogos.
c) Sinapsis entre zonas equivalentes
d) Se forma hendidura de 100 nm en donde se fija el complejo
Cigoteno
sinaptonmico que es una estructura proteica tripartita cuyo
aspecto es similar a un riel de tren que consta de dos
RM: sinapsis- estructuras paralelas llamadas elemento lateral y elemento
unin
central a lo largo de cada cromosoma homlogo. El complejo
sinaptonmico se une a la cromatina por las regiones de
asociacin especfica (SARs).
e) Ocurre la sinapsis (apareamiento fsico) entre CROMOSOMAS
HOMLOGOS (uno paterno y otro materno) Y CROMTIDAS NO
HERMANAS
a) Aparecen los segmentos de apareamiento. stos en el caso
del XY son dissmiles y limitados.

a) Cromosomas se hacen cortos y gruesos.


Paquiteno
b) Se completa la sinapsis (los cromosomas se vuelven
(ms largo,
bivalentes: par de cromosomas).
puede durar
c) Ocurre el crossing over o recombinacin gnica mediante
das)
ndulos de recombinacin (lugar multienzimtico donde ocurre
el entrecruzamiento) dando la transposicin de segmentos de
RM:
DNA entre dos cromosomas homlogos y cromtidas no hermanas.
gruesod) El complejo sinaptonmico toma forma de cremallera o
recombinacin escalera.
a) Cromosomas se separan parcialmente y se condensan an
ms.
Diploteno
b) Se forman ttradas ya que cada cromosoma bivalente est
o dictioteno formado por 4 cromtides.
en mujeres
c) Se disuelve el complejo sinaptonmico.
(ms de 50
d) Se forman quiasmas (sitios o secciones donde se realiz
aos)
intercambio de DNA.
e)Sntesis de ARNm.
RM: quiasmas
a) Cromosomas se condensan y acortan alcanzando su espesor
Diacinesis
mximo.
b) Quiasmas se dirigen hacia los telmeros o extremos de los
RM: final
cromosomas (terminalizacin)
c) Desaparecen los nuclolos y el nucleolema
RM: Regla Mnemotcnica

Metafase I

Anafase I

Telofase I

a) Igual que en mitosis, slo que son cromosomas bivalentes


que an estn unidos por quiasmas.
b)Al final se separan e interactan con los microtbulos
polares a travs del cinetocoro (estructura trilaminar) que
por estar en la ttrada, son 4 y los de las cromtides
hermanas se unen formando un cinetocoro compuesto comn para
las dos mencionadas.
c) Alineacin de cromosomas en el plano ecuatorial.
a) No hay divisin de centrmeros
b) Ocurre una separacin casual o distribucin aleatoria de
los cromosomas, en donde puede variar el nmero de cromosomas
maternos y paternos, representando la base de la segunda ley
de Mendel.
c) Cada polo recibe 23 cromosomas (n) (cada uno formado por 2
cromtidas hermanas).
Se regeneran los nucleolemas y cada uno tiene 23 cromosomas
compuestos cada uno por dos cromtides hermanas.

El resultado de la primera divisin meitica, que es reduccional, son los


espermatocitos secundarios o los oocitos secundarios.
NOTA DE PROFASE I: la membrana nuclear desaparece. Un cinetocoro se forma
por cada cromosoma, no uno por cada cromtida (clave de reduccin), y los
cromosomas adosados a fibras del huso comienzan a moverse. Algunas veces
las ttradas son visibles al microscopio. Las cromtidas hermanas
continan estrechamente alineadas en toda su longitud, pero los cromosomas
homlogos ya no lo estn y sus centrmeros y cinetocoros se encuentran
separados.
Interfase: corta y no pasa por fase S, es decir, no se sintetiza DNA.

SEGUNDA DIVISIN MEITICA: es ecuacional.


a) Se parece a la mitosis slo que se lleva a cabo con 1n.
b) Una proteinasa (separasa) rompe los complejos de cohesin entre las
cromtides hermanas en Anafase II y hace que las cromtidas hermanas se
separen hacia los polos.
c) Finalmente se dividen como cuatro clulas haploides.
El resultado de la segunda divisin meitica son los oocitos maduros y las
espermtidas
CITOGENTICA: ciencia de los cromosomas. Comienza en dcada 50's. Estudia
cromosomas normales y alteraciones patolgicas y no patolgicas.
Cada par de cromosomas: 2 cromosomas homlogos, uno materno y uno paterno.
Partes del cromosoma: telmeros, brazo corto (p), centrmero, brazo largo
(q).
Tipos de cromosomas
Metacntrico: centrmero en medio
p=q
Submetacntrico: brazos desiguales
p menor que q
Acrocntrico: constriccin secundaria en un
p mucho menor que q
cromosoma + dos satlites en dos de los extremos
del cromosoma en los que se forman los
nuclolos.
CLASIFICACIN: 7
Pares
Tipo de cromosomas
grupos.
1: mayor metacntrico
A
2: mayor submetacntrico
3: 2do mayor metacntrico
B
4 y 5 (2do y tercer submetacntrico)
C
6-12 + X (del par sexual): submetacntricos
D
13-14-15: mayores acrocntricos
E
16-17-18: submetacntricos
F
19-20: metacntricos pequeos
G
21-22-Y (del par sexual): acrocntricos pequeos
Metacntricos: 4 pares
Submetacntricos: 13 pares + X
Acrocntricos: 5 pares + Y
1.- OBTENCIN DE MUESTRA
a) Esterilizacin de tejido del dedo anular de mano izquierda con alcohol
al 90 y ter etlico.
b) Punzar dedo, succionar sangre perifrica y verter 5-6 gotas en medio de
cultivo.
2.- MEDIO DE CULTIVO:
ROMI 1650 (medio Roswell Park Memorial Institute) medio celular usado
para cultivos celulares. Contiene una gran cantidad de fosfatos y est
diseado para ser utilizado en una atmsfera al 5% de dixido de
carbono. Se formul con la idea de mantener fibroblastos en suspensin,
si bien hoy en da se utiliza para el mantenimiento de numerosas lneas
celulares e hibridomas.
Tampn Hermes: (cido 4 - (2-hidroxietil)-1-piperazinetanosulfnico) es
un in zwitterinico.
Suero fetal de ternera inactivado al 10% (alimenta a los leucocitos).
L-Glutamina al 1,5%.
Antibiticos: penicilina + estreptomicina 1% + antimicticos.

3.- CULTIVO Y COLCHINADO


a)
Se
aaden
5
gotas
de
fitohemaglutinina
PHA-M
(glicoprotena
proliferante de linfocitos).
b) Sangre se incuba en CO2 72 h a 37C y se agita cada 12h.
c) Se aplican 4 gotas de colchicina al 0,01% (frmaco antimittico que
detiene o inhibe la divisin celular en metafase o en anafase debido a que
evita la polimerizacin de la tubulina de los microtbulos).
4.- RECOGIDA DE CULTIVO
a) Se centrifuga a 1000 rpm por 10 min.
b) Eliminacin de sobrenadante con pipeta Pasteur.
c) Se aade solucin hipotnica de KCL al 0,075 M, primero 1 ml, luego 5
ml, dejando actuar por 15 min a 37C.
d) Se repite el paso a.
e) Se repite paso b y se aade lentamente 4 ml de fijador Carnoy (metanol
y cido actico en proporcin 3:1).
f) Se resuspende y se deja actuar 20 min a 25C.
g) Se repite el paso a.
h) Se repite el paso e.
i) Se repite el paso a.
j) Se repite el paso b y se aade 1 ml de fijador, dejando suspender.
k) Aadir 3 gotas de cultivo sobre un porta objetos.
l) Se deja secar.
m) Se aade tripsina (enzima peptidasa para inducir digestin celular
rompiendo los enlaces peptdicos).
m) Se tie.
n) Se fotografan cromosomas, se amplan, se recortan en un computador y
se forma un cariotipo.
5.- TINCIN
a) Tincin Giemsa (tincin hematolgica purpura - rojizo) al 4% en tampn
fosfato pH 6,8 por 10-15 min.
b) Se lava la preparacin con agua destilada.
c) En ocasiones se aaden 2-3 gotas de DPX (medio de montaje permanente).
TINCIONES DE BANDAS:
a) Modificacin de Tincin Giemsa: bandas G. Permite visualizar
delecciones de hasta 4000 kb.
b) Tincin de bandas en prometafase o mtodo de tincin de bandas de alta
resolucin. Permite ver delecciones muy pequeas.
c) Quinacrina: permite visualizar bandas Q transversales mediante
microscopa de fluorescencia.
Para romper la clula y obtener los cromosomas se puede dejar caer la
muestra a una altura de 30 cm una vez que la clula se encuentra hinchada
tras haber estado en el medio hipotnico o se puede calentar hasta que sde
induce la lisis.
Cariotipo: patrn cromosmico de una especie expresado a travs de un cdigo,
establecido por convenio, que describe las caractersticas de sus cromosomas.
Idiograma: esquema cromosmico no ordenado.

Tipos de sondas
a) Painting o coating
b) Sondas repetitivas de DNA alfa satlite
c) Sondas de ADN de secuencia nica.

Citogentica convencional: 1960. Se basaba en bandeo para analizar nmero


y estructura de cromosomas: Banda G (de rutina)/Banda R/ Banda C/ Banda T
HIBRIDACIN IN SITU POR FLUORESCENCIA (FISH)
Hibridacin de cromosomas en metafase o interfase con sondas que
emiten fluorescencia y permiten la visualizacin, distincin y estudio de
los cromosomas as como de las anomalas que puedan presentar. Esta
tcnica permite la rpida determinacin de aneuploidas, microdeleciones,
duplicaciones, inversiones, as como la adjudicacin de un marcador
gentico a un cromosoma (cartografa gentica).
OJO: Un fragmento marcado de DNA especifico de un cromosoma (sonda) se
expone a cromosomas desnaturalizados en metafase, profase o interfase.
a) Permite obtener en 24 h un diagnstico prenatal a partir de ncleos
interfsicos procedentes del lquido amnitico o vellosidad corial
(diagnstico gentico preimplantatorio DGP).
b) Utiliza sondas de copia de cromosomas 13, 21, alfa satlites de 18, X y
Y con el fin de descartar sndromes asociados con tales cromosomas y
aneuploidas sexuales.
c) Se emplea contraste de yoduro de propidio (DAPI) a travs de un
microscopio de epifluorescencia.
PERMITE VISUALIZAR HASTA 1 milln de pares de bases.
PREPARACIN PREVIA DE LA MUESTRA
- PREPARACIN DE LAS PLACAS
- PREPARACIN DE LAS SONDAS
- HIBRIDACIN
- LAVADOS POST-HIBRIDACIN
- DETECCIN
- TINCIN DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)
- VISUALIZACIN (microscopio de epifluorescencia)
-

ES MENOS LABORIOSO Y MS RPIDO QUE LOS BANDEOS DE ALTA RESOLUCIN,


ES UNA TCNICA FACTIBLE Y PODEROSA EN RESOLUCIN.
GEN SRY: es un gen de determinacin sexual en los mamferos marsupiales y
placentarios; est presente en el brazo corto del cromosoma Y, es uno de los
responsables para determinar que las aproximadamente 4000 clulas germinales de los
rganos genitales del embrin empiecen a formar los testculos. Su ausencia, una
mutacin que afecte el marco de lectura del gen o una translocacin al cromosoma X,
generan individuos XY femeninos e individuos XX masculinos.

HIBRIDACIN GENMICA COMPARADA (CGH)


Es una tcnica citogentica mediante la cual es posible identificar y
analizar alteraciones genticas en un segmento cromosmico del tipo
duplicaciones o deleciones. No detecta mutaciones puntuales, es una
comparacin cuantitativa

TODOS LOS CROMOSOMAS SON DISTINTOS

Pruebas citogenticas
Anlisis
de
rutina
cuando
el
paciente
no
ha
recibido
transfusiones.
Cultivo de linfocitos perifricos
a) Permite diagnosticar el sndrome
del cromosoma X frgil.
b) Se estudia en prometafase.
Cultivo de fibroblastos
Anlisis
luego
de
transfusin
sangunea o anlisis post mortem.
Cultivo de amniocitos
Diagnstico prenatal.
a) Anlisis para aneuploida
Biopsia de mdula sea
b) Anlisis de estado maligno de
leucemia.
Anlisis de tumor
Anlisis de estado maligno.
Prueba de estrs mitgeno
Sospecha de anemia Fanconi.
a)
Sospecha
de
anomala
de
Intercambio de cromtides hermanas
reparacin de DNA como sndrome de
Bloom
o
ataxia-telangiectasia.
(Sndrome de Louis-Barr).
INDICACIONES PARA ESTUDIO CITOGENTICO

La amniocentesis es
una prueba prenatal
comn en la cual se
extrae una pequea
muestra del lquido
amnitico que rodea
al feto para analizarla.

VNTR: repeticin en
tndem que permite
estudiar el polimorfismo
gentico y la variacin del
nmero de microsatlites.

ALTERACIONES CROMOSMICAS o MUTACIONES (variaciones permanentes del DNA)


1.- Numricas: monosomas, trisomas, poliploidas. Ocurren en la meiosis
I o II. Las ltimas ocurren principalmente por la no disyuncin o falta de
separacin de las cromtides.
2.- Estructurales o mutaciones longitudinales:
a) Deleccin: falta de un segmento de cromosoma. Oligospermia o azospermia
se desarrolla por deleccin de cromosoma Y. Sndrome de Lejune.
b) Translocacin recproca: intercambio de segmentos entre cromosomas no
homlogos. Ej. En leucemia mieloide crnica.
c) Translocacin simple: transferencia de un segmento de un cromosoma a
otro cromosoma.
d) Translocacin robertsoniana: dos cromosomas no homlogos pierden sus
brazos cortos mientras que los largos se unen por el centrmero de uno de
los cromosomas, formndose un cromosoma nico. Una parte de un cromosoma
acrocntrico se intercala en otro. Ej. Sndrome de Down en un 4% de los
casos. Afecta a los cromosomas acrocntricos con el brazo p muy pequeo.
d) Duplicacin: duplicacin de una regin cromosmica concreta, por lo que
su portador tendr material gentico extra.
e) Inversiones: segmento del cromosoma cambia su orientacin dentro de
este. Existen dos tipos de inversiones: Pericntrica, cuando el centrmero
forma parte del segmento invertido, o Paracntrica en el caso contrario.
Tienen una frecuencia muy baja y no suelen causar grandes trastornos. Ej.
infertilidad parecida al S. de Klinefelter. Malformaciones menores.

f) Insercin: consiste en la insercin de un segmento de ADN en un lugar


diferente, lo que puede dar como resultado la alteracin de la estructura
y funcin normales de un gen.
g) Isocromosoma: cromosoma que ha perdido un brazo y el otro se ha
duplicado, de modo que existe una monosoma parcial debido al brazo
perdido, y a una trisoma parcial, debido al brazo duplicado. Ocurre en
Turner y ocasionalmente en Edwards. Resultado: 2 cromosomas iguales.
h) Cromosoma en anillo: se presenta cuando ambos brazos de un cromosoma se
fusionan formando un anillo. Ocurre por la ruptura de ambos lados del
centrmero. Aunque son poco frecuentes, tambin estn implicados en
enfermedades. Por ejemplo, una de las causas del sndrome de Turner es la
formacin de un anillo en el cromosoma X, leucemias, sarcomas, carcinomas
y Sndrome del cromosoma 15 en anillo. Est asociado con retraso mental y
tumores de mdula sea.
Tambin existen mutaciones puntuales que son variaciones limitadas de una
sola base, con reemplazo de un nucletido por otro y mudas cuando no
tienen importancia funcional.
REPARACIONES DE MUTACIONES
Por escisin: enzimas identifican bases anormales y las eliminan.
De desajuste: similar al de escisin pero es catalizado por
reparadores.

otros

Otra clasificacin de mutaciones:


Mutaciones somticas: no se transmiten por herencia. Ej. cncer.
Mutaciones gamticas: hereditarias. Pueden ser monognicas o polignicas.
Se conocen ms de 5000. Las enfermedades genticas hereditarias tambin
pueden provenir d mutaciones de DNA mitocondrial, hereditario slo por la
madre.
Se han mapeado ms de 16000 genes humanos.

Cromatina sexual:
basfilos.

presente

en

el

cromosoma

en

los

cuerpos

de

El cromosoma Filadelfia, tambin llamado translocacin Filadelfia, es una anormalidad gentica


asociada a la leucemia mieloide crnica (LMC). Ocurre por una translocacin recproca. Se
determina a travs de FISH
Mosaicismo: alteracin gentica en la que, en un mismo individuo,
coexisten dos o ms poblaciones de clulas con distinto genotipo
(dos o ms lneas celulares), supuestamente originadas a partir de
un mismo cigoto.
Mutaciones estructurales pueden ser:
Equilibradas: no se gana ni pierde DNA. Son la translocacin recproca y la inversin.
No equilibradas: se gana o pierde DNA. Son insercin, translocacin robertsoniana, duplicacin,
deleccin, cromosoma en anillo, isocromosoma.

Barr

DUPLICACIN. Patologas asociadas: muy raras.


Sndrome de la duplicacin 10q
Sndrome de la duplicacin 6q, parcial
Sndrome de la duplicacin 10q, Distal
Sndrome de la duplicacin 15q, Distal
Sndrome de la duplicacin 6q, Distal
Sndrome de la duplicacin 15q, Parcial

Sndrome o
enfermedad

Alteracin

Down

Trisoma 21

Patau

Trisoma 13

Edwards

Klinefelter

Trisoma 18

Al menos un
cromosoma X
adicional

Caractersticas o sntomas
a) Retraso mental leve o moderado, IQ de 50. Frecuencia 1/700.
b) Cabeza grande, o pequea o deformada.
c) Manos cortas, anchas, dedos cortos con una sola articulacin interfalngica con lnea simiana en palma de mano.
d) Problemas cardacos.
e) Ocurre en 92% por no disyuncin, 5% por translocacin en acrocntricos y 3% por mosaicismo.
f) Rasgos faciales caractersticos.
g) Las mujeres con pueden concebir: 47, XX, + 21
h) Los varones son infrtiles: 47, XY, + 21
i) Riesgo de recurrencia: no disyuncin: 1-2 % / Translocacin: 5-12% / Mosaicismo: 1%.
j) En 4% casos ocurre por translocacin robertsoniana.
a) Bajo peso al nacer
b) Microcefalia
d) Polidactilia de manos y pies e) Malformaciones cardacas (80%) g) Retraso psicomotor
b) Microftalmia o anoftalmia c) Labio y paladar hendido e) Criptorquidia
f) Holoprosencefalia
h) Muerte precoz
o ciclopa
-20% y 30% de los nacidos mueren en el primer mes de vida.
-90% muere al ao.
-5% y 10% de los nacidos sobreviven al primer ao de vida.
-Es Muy raro
-Ocurre I en 15,000 nacidos vivos, la mayora mueren in tero.
-Letal.
-La mitad muere dentro del mes siguiente.
-La medio de sobrevivencia es de 6 meses.
-La frecuencia se incrementa con la edad de los padres.
-20% y 30% de los nacidos mueren en el primer mes de vida.
-90% muere al ao.
-5% y 10% de los nacidos sobreviven al primer ao de vida.
a) Muy raro.
b) I en 10,000 nacidos vivos, la mayora mueren in tero.
c) La mayora muere dentro de los 6 meses siguientes .
d) Caractersticas fsicas inusuales.
e) El primer y quinto dedos unidos superponiendo al tercero y cuarto dedo.
f) Ha sido atribuido a una no-disyuncin en la meiosis II del Oocito.
g) Pies equinos, rin en herradura, divertculo de Meckel, ducto CIV, micrognatia, pabellones displsicos bajos, hipertelorismo, rea umbilical nica,
contracturas articulares, dolicocefalia, microcefalia, occipucio prominente.
h) Puede ser ocasionada por isocromosomas.
i) Pelvis estrecha.
j) Criptorquidia o hhipertrofia de cltoris.
k) Malformaciones cardacas en un 95%, renales y hepticas.
l) Retraso psicomotor.
a) Se presenta slo en varones.
b) Esterilidad, pene pequeo, testculos pequeos y firmes (hipogonadismo), disfuncin sexual, tejido mamario hipertrfico (ginecomastia),
desproporcin corporal, dificultad con aprendizaje.
c) Afecta 1/500 hombres, ocurre por no disyuncin en meiosis.
d) Factor de riesgo: edad materna avanzada.
e) Vello pbico, axilar y facial disminuido.
f) Estatura alta, miembros inferiores largos, tronco corto).

Frmula

47, XX, + 21

47, XX, +13

47, XX, +18

47, XXY (75%)


20%: mosaicos con
variantes: 48, XXXY:
48, XXYY y en un
5% 49, XXXXY

Turner

Monosoma X

Lejune

Deleccin del
brazo corto de
cromosoma 5

Doble Y o
superhombres

Y adicional

Polisemia X o
superhembras

Trisoma X

Retinoblastoma
Prader-Willi

Tumor de Wills
Fibrosis
qustica

Leucemia
mieloide
crnica

Hemofilia A

Albinismo
Tay-Sachs

Sndrome de X
frgil

Deleccin del
cromosoma 13
Deleccin del
brazo q en
cromosoma 15
paterno
Deleccin
cromosoma 11
Defecto de gen en
brazo largo de
cromosoma 7
Deleccin dle
brazo largo del
cromosoma 22
(cromosoma
Filadelfia)
Insuficiencia de
factor de
coagulacin VIII
Deficiencia
metabolismo
melanina
Ausencia de
hexosaminidasa A
Constriccin
secundaria cerca
del extremo del
brazo largo de X

a) Se presenta en las nias.


b) Es la nica monosoma compatible con la vida.
c)El Dr. Henry Turner describi el sndrome en 1938, en 1959 se identific la causa.
d) No se asocia con edad materna.
e) Cromosoma ausente: error meitico paterno (80%) o materno (20%).
f) Puede ser ocasionada por isocromosomas. y cromosoma X en anillo.
g) Baja estatura.
h) Cuello palmeado (ptedridium colli).
i) Pezones muy separados entre s, ausencia de vello pbico, desarrollo insuficiente de genitales y mamas, amenorrea, infertilidad por ausencia de
ovarios, posible retraso mental.
a) Cianosis, dificultades para deglucin, maullido de gato por debilidad de epiglotis, microcefalia, hipertelorismo y micrognatia.
b) Ocurre 1/50.000.
c) Tambin es llamado Cri du Chat.
a) Estatura alta, miembros largos, en algunos casos acn severo.
b) 1/1000 hombres, ms del 50% presenta dificultad para aprendizaje y retardo en el desarrollo del lenguaje.
c) Ocurre por no disyuncin meitica.
a) Es un mosaicismo.
b) Ocurre 1/1500 mujeres.
c) Son frtiles, poseen problemas de aprendizaje, bajo coeficiente intelectual, problemas de coordinacin, problemas mentales.
Retinoblastoma, anomalas oculares

45, XO

46, XX, 5p-

47, XYY

47, XXX
13q14

Hipotona neonatal, obesidad, hipogonadismo, hiperfagia. Si ocurre en cromosoma materno, se llama Sndrome de Agelman y presenta otras
caractersticas.

15q11

Aniridia, tumor de Wills, retardo mental, dismorfia facial.

11p13

Mucosidad espesa en pulmones, infecciones crnicas.

Aumento en la sntesis de leucoctios.


46, XX, 22q-

Deficiencia de coagulacin de sangre

Despigmentacin piel y cabello

Acumulacin de sustancia grasa en las neuronas.


Retraso mental

Alcaptonuria

Defecto
metabolismo de
tirosina

Orina oscura y artritis,

Algunas patologas ocasionadas por mutaciones moleculares del DNA:


Herencia
Herencia
Herencia
Herencia
Herencia

autosmica dominante
autosmica recesiva
recesiva ligada al cromosoma X
dominante ligada al cromosoma Y
multifactorial

Distrofia miotnica
Fibrosis qustica, enfermedad de Tay-Sachs
Hemofilia A
Incontinencia pigmentaria
Defectos del tubo neural como espina bfida abierta y
anencefalia.

En los cnceres, generalmente se presentan triploidias y poliploidas como 69, XXX.


Frecuencia de alteraciones cromosmicas

1% en nacidos vivos.
Anomalas numricas:estructurales---- 1%:1%.
Cromosomas sexuales alterados: 0,25%.
Aberraciones autosmicas: 0,4-0,6%.
Trisomas ms comunes: Down y Klinefelter.
Rearreglo estructural ms comn: fusin cntrica de par 13-14.
20 a 50% de abortos espontneos del primer trimestre son de cromosomopata.
Turner y triploidas: 20 a 25% de casos.
Edad materna avanzada: vulo envejecido presenta mayor riesgo de errores
Contribuye en la incidencia de Down, Edwards y Klinefelter.

O.N.

de

anafase

meitica.

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